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Yep Rodríguez, Alejandra. "Relaciones entre estructura y función en la glucógeno sintetasa de Escherichia coli" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Vildosola, Verónica L.. "Propiedades electrónicas en compuestos intermetálicos de Ce: del cálculo de bandas a las interacciones de muchos cuerpos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se estudian las propiedades electrónicas de compuestos de Cerio que se caracterizan por la presencia de electrones 4ƒ. En una primera parte, se llevan a cabo cálculos de primeros principios mediante el método FP-LAPW para analizar el efecto del entorno químico y cristalino en el grado de localización espacial del estado 4ƒ y su relación con el valor del momento magnético de espín del Cerio en un grupo de compuestos de Cerio. Posteriormente, dentro del mismo marco teórico nos abocamos al estudio de los compuestos tetragonales CeM2Si2 con M=Ru, Rh y Pd. Analizamos la influencia de la hibridización del estado 4ƒ con la banda de conducción sobre las propiedades estructurales del equilibrio y bajo la aplicación de presión hidrostática, así como también la evolución del momento magnético de espín. Se calcula la función hibridización, Γ(ε), cuyos resultados son consistentes con los que surgen del estudio de las propiedades estructurales y magnéticas, es decir que la hibridización disminuye a medida que aumenta el llenado de la banda 4d del metal de transición. Por otro lado, se observa que la evolución del parametro c/a es cualitativamente distinta en cada sistema. Se interpreta dicha evolución en base al análisis de la variación de las distintas distancias interatómicas en función de la presión y su relación con la ocupación 4d. En la segunda parte de esta tesis aplicamos a compuestos del tipo CeM2Si2 dos técnicas mixtas que pretenden corregir las falencias de los cálculos de primeros principios, LDA+U y LDA+NCA. La técnica LDA+U incluye un término ad-hoc en el hamiltoniano de primeros principios, que da cuenta de las correlaciones fuertes del estado 4ƒ y que permite corregir su energía con respecto al resultado LDA. Se comparan los resultados obtenidos para los tres sistemas en términos de la hibridización 4ƒ-4d. La segunda técnica mixta empleada consiste en resolver el hamiltoniano de la impureza de Anderson en la aproximación NCA usando como dato de entrada a la función Γ(ε). Se calculan los desdoblamientos del nivel 4ƒ por efecto del campo cristalino y se determinan las simetrías del estado fundamental y de los primeros estados excitados. Estos resultados tienen valor predictivo y contribuyen a esclarecer contradicciones existentes entre los datos experimentales. Además, se estudian las propiedades espectrales, obteniendo buen acuerdo con los espectros de fotoemisión de la literatura. Las características de la función espectral a bajas energías reflejan correctamente la secuencia experimental de las temperaturas de Kondo de estos sistemas, resultado que sólo fue posible gracias a que la función Γ(ε) contiene información detallada sobre el entorno cristalino. LDA+NCA demuestra ser una herramienta de cálculo valiosa para estudiar compuestos de Cerio fuertemente correlacionados.

Abstract:
We study the electronic properties of Cerium compounds which are characterized by the presence of 4ƒ electrons. In the first part of this work, we perform ab-initio calculations using the FP_LAPW method and analize the effect of chemical and crystalline enviroment on the degree of localization of the 4ƒ state and of its relationship with Cerium spin magnetic moment within a group of Cerium compounds. Then, we concentrate on the tetragonal series CeM2Si2 with M=Ru, Rh and Pd within the same band theory frame. We study the influence of 4ƒ-conduction band hybridization on the structural properties at equilibrium and under applied hydrostatic pressure, together with the evolution of the Cerium spin magnetic moment. We also calculate the hybridization function, Γ(ε), which consistently with the previous results indicates that the strengh of hybridization increases with decreasing transition metal 4d band filling. On the other hand, we observe that the evolution of c/a ratio is qualitatively different within the three systems. We interpret this evolution in terms of the variation of the interatomic M-M distances as a function of pressure and its relationship with the 4d occupation number of the M atom. In the second part of this thesis, we apply two mixed techniques, LDA+U and LDA+NCA, which consider the interactions that are absent in the band theory. LDA+U method introduces a term ad-hoc that accounts for the strong correlations of the 4ƒ states and gives 4ƒ energies which are more reallistic that the previous ones (LDA). We compare the obtained results in terms of 4ƒ-4d hybridization. The second mixed technique solves the Anderson impurity model within the NCA using as input the hybridization function Γ(ε). We calculate the crystal field splittings of the 4ƒ level and determine the symmetries of the ground and excited states. These results have predictive value and help to shed light on the existing contradictions in the available experimental data. We also study the spectral properties and obtain good agreement with photoemission spectra taken from the literature. The calculated low energy spectral function reflects the experimental sequence of Kondo temperatures within these tetragonal systems, result that could be obtained just because the Γ(ε) function contains the detailed information of the crystal] enviroment. LDA+NCA proves to be a valuable tool to study highly correlated Cerium compounds.

Vila, Daniel Alejandro. "Sistemas convectivos precipitantes de mesoescala sobre sudamérica: ciclos de vida y circulación en gran escala asociada" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es desarrollar y aplicar un algoritmo automático para el seguimiento de las características físicas de los Sistemas Convectivos de Mesoescala (SCM) a través de todo su ciclo de vida, usando inforrnación de los canales térmicos (10.8 pm) de los satélites geoestacionarios. Los aspectos principales de este sistema son los siguientes: (1) un método de detección de nubes convectivas basado en un umbral de temperatura (235 K); (2) cálculo de parámetros morfológicos y radiactivos de cada SCM detectado en el paso anterior; (3) un algoritmo de seguimiento basado en la superposición de áreas entre imágenes sucesivas; (4) construcción del ciclo de vida de cada SCM y (5) la generación de imágenes virtuales sobre la base de la evolución de los SCM en pasos de tiempo anteriores. Esta metodología ha sido aplicada a un conjunto de imágenes de satélite sobre el sudeste de Sudamérica que corresponden a los meses de diciembre, enero y febrero de los años 2000- 2001, 2001-2002 y 2002-2003. Los resultados de los diferentes análisis muestran una diferencia significativa entre aquellos SCM que desarrollaron topes fríos (valores de temperatura mínima por debajo de los 210 K) a lo largo de su ciclo de vida y aquellos que no lo hicieron. Mientras que los que no desarrollan topes fríos estarían asociados, en términos medios, a SCM pequeños y de corta duración (efectos termo-orográficos), aquellos que llegan a desarrollar topes suficientemente fríos, estarían relacionados con fenómenos termodinámicos de una escala mayor. No obstante, en promedio, se observa una característica común en todos los SCM estudiados, independientemente de la temperatura mínima que estos pudieron alcanzar a lo largo de su ciclo de vida: la influencia de ciclo solar sobre la convección. El mínimo de actividad convectiva (definida como la cantidad media de pixeles definidos por la isoterrna de 235 K) se produce sobre el final de la tarde acompañado por un decrecimiento de la temperatura de los topes nubosos. Además, es durante el horario de la mayor insolaci6n que se obsewan 10s mayores valores de la tasa de expansión de los SCM a lo largo del dia. Para el periodo diciembre 2002 - febrero 2003, se seleccionaron aquellos SCM asociados con precipitaciones intensas y extendidas sobre dos regiones seleccionadas en la cuenca del Plata. Los resultados obtenidos a través de este análisis muestran que: (1) las precipitaciones intensas y extendidas están relacionadas con mínimos de temperatura de brillo observadas por satélite; (2) de acuerdo con la distribución de frecuencias, los SCM asociados con precipitaciones intensas y extendidas alcanzan los mayores tamaños y (3) los máxlmos valores observados en la intensidad de los procesos de expansión y enfriamiento que experimentan los SCM durante la primeras etapas de su ciclo de vida están relacionados con estos eventos. A partir del análisis del entorno de gran escala asociado a los SCM que produjeron precipitaciones intensas y/o extendidas identificados anteriormente en el momento de su máxima extensión (maduración), se observa la presencia de una zona frontal al sudoeste de ambas regiones de estudio, el giro de viento en sentido anticiclónico con la altura (advección cálida) y la presencia de una fuerte advección de humedad en capas bajas. Dentro de estas características comunes, también se puede observar un movimiento de ascenso en niveles medios de la atmósfera (expresado como valores negativos de la velocidad vertical ω en 500 hPa) y una fuerte divergencia en el nivel de 200 hPa. El estudio de dos eventos particulares muestra un cierto grado de consistencia con los resultados expresados anteriorrnente: el crecimiento de los SCM hasta la maduración (máxima extensión) ocurre durante las horas de la tarde para luego comenzar un proceso de disipación en fragmentos. En ambos casos, se observa que a partir de alguno de estos sistemas en disipación se produce un regeneramiento durante la madrugada siguiente. Por otro lado, existe una buena correlación entre la temperatura de brillo observada y los fenómenos de tiempo significativo observado en algunas estaciones meteorológicas, sin embargo la relación entre precipitación acumulada y temperatura de brillo no es unívoca.

Abstract:
The goal of this thesis is to develop and apply an algorithm for tracking the physical characteristic of mesoscale convective systems (hereafter MCS's) through its whole life cyde using the thermal channel (1 0.8 pm) of geostationary satellites. The main features of this software are the following: (1) the cloud cluster detection method is based on a threshold temperature (235 K); (2) the evaluation of morphological and radiative parameters of each MCS's detected in the previous step; (3) the tracking technique based on overlapping ateas between successive images; (4) the construction of the lie cycle of each MCS and (5) the virtual image generation based on the evolution of the MCS in previous steps. This methodology was applied to satellite images dataset covering the southeastern South America for December, January and February of 2000-2001, 2001-2002 and 2002-2003. The results show a significant difference between the group of MCS's that can develop cold tops (brightness temperature below 210 K) and those who can't. While the MCS's with no cold tops are associated, in general, with little and short lasting MCS's (thermo - orographics effects), those with cold tops would be related with larger scale effects. Nevertheless, in average, there is a common feature for all MCS independently of their minimum temperature during their life cycle: the influence of solar cycle on convection. The greatest convective activity (defined as the mean number of pixels below 235 K of whole dataset) is during the afternoon, accompanied by a cooling process of cold tops. During the maximum insolation time, is observed the maximum expansion rate of MCS's along the diurnal cycle. Considering the period December 2002 - February 2003 only those MCS's associated with heavy and wide extended precipitation over two regions of Del Plata basin were selected. The results of this analysis show that: (1) heavy and widely extended rainfall is related to minimum brightness temperature; (2) according to frequency distribution, those MCS's associated with rainfall reach larger extension than the other MCS's; (3) the greatest magnitude of expansion and cooling rate is related with those patiilar events. The analysis of large scale environment associated with those MCS's previously identified for both regions during the maximum extent period (mature) show the exktence of a frontal zone over the southwestern of each region, an ankyclonic veering with height (warm advection) and moist air advection in the lower levels of the atmosphere. Among these common features, an upward motion in the 500 hPa level and a strong divergence in upper levels of the troposphere (200 hPa) can be detected. The study of two particular events shows some degree of consistency with previous results: the growth of MCS's during the afternoon followed for the dissipation into fragments. In both cases, a regeneration process can be observed in some of the existing MCS during the following dawn. In addition, it was found a good correlation between brightness temperature and significant weather over meteorological stations. Nevertheless, the relationship between accumulated rainfall and brightness temperature is not univoque.

Vanney, Claudia Estela. "Ondas evanescentes y ondas propagntes asociadas a la reflexión inhibida en interfaces cristal uniaxial - medio isótropo" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se analiza la estructura que presentan las ondas propagantes y evanescentes ordinaria y extraordinaria en presencia de reflexión inhibida en interfaces formadas por un cristal uniaxial y un medio isótropo. Se muestra que la normal al frente de onda asociado a la onda reflejada evanescente extraordinaria no se encuentra contenida en la interfaz, y que el promedio temporal del vector de Poynting no está contenido en el plano de incidencia y vanría su dirección con el ángulo de incidencia, incluso cuando la onda evanescente es ordinaria. Asimismo se demuestra que tanto la onda reflejada propagante como la onda refractada sufren un salto de fase, y que esta última resulta elípticamente polarizada en estas condiciones. . Se propone, además, un método analítico para el estudio tanto de la propagación de haces finitos bi y tridimensionales en medios anisótropos, como de la reflexión y transmisión de haces limitados en interfaces que involucren este tipo de medios. Su aplicación a la determinación de los corrimientos laterales de los haces reflejados y refractados (efecto no geométrico de primer orden) en condiciones de reflexión inhibida, muestra que los conrrimientos no se encuentran contenidos en el plano de incidencia, y permite hallar las expresiones de sus componentes longitudinales y transversales.

Abstract:
We analyse the structure that propagating and ordinary and extraordinary evanescent waves present in inhibited reflection when a uniaxial crystal-isotropic medium interface is considered. We show that the normal to the wavefront associated to the extraordinary evanescent reflected wave is not on the interface, and that the time-average Poynting vector is not contained in the incidence plane and that changes its direction with the incidence angle, even though the evanescent wave is ordinary. Moreover we demonstrate that both propagating reflected and refracted waves suffer a phase shift, and that the latter is elliptically polarised under these conditions. We also propose an analytical method for studying not only propagation of bi and three-dimensional beams in anisotropic media but also reflection and transmission in interfaces where this kind of media is present. Its application to the determination of the lateral displacements of the reflected and refracted beams (first order non-geometric effect) in inhibited reflection conditions, shows that these shifts are not included in the plane of incidence and allows to find expressions of their longitudinal and transverse components.

Tetzlaff, Guillermo Tomás. "Procesos de ramificación con tipos no acotados y simulación de redes con pérdida" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta tesis extiende la teoría de procesos estocásticos de ramificación al caso de tipos no acotados. Éstos surgen de no asumir que el número esperado de hijos es una función acotada del tipo del padre. Tampoco se supone que existe un entero m tal que se tiene una cota inferior positiva, uniforme sobre el tipo del ancestro, para la probabilidad de que una población esté extinguida en la m-ésima generación. Demostramos que una condición más débil que la existencia de tal m lleva a la extinción con probabilidad ! si la sucesión de las esperanzas de los tamaños de las generaciones no tiende a infinito. También se obtienen criterios que aseguran una probabilidad positiva de que no haya extinción. Se proveen ejemplos extendiendo a nuestro contexto de tipos no acotados dos aplicaciones bien conocidas: la dinámica poblacional de Leslie y los procesos de ramificación asociados a percolación continua. Ésta última se desarrolla hasta obtener resultados sobre percolación continua orientada, que dan condiciones suficientes de factibilidad para la simulación exacta de redes con pérdida con objetos no uniformemente acotados. Luego de resolver el problema de la generación de clusters de percolación con este tipo de objetos, se proponen algoritmos de simulación de percolación y de una red con pérdida que se implementa en lenguaje C.

Abstract:
This thesis extends the theory of stochastic branching processes to the case of unbounded types. These arise from not assuming that the expected number of children is a bounded function of the parent's type. It is neither supposed that there exists an integer m such that there is a lower positive bound, uniform over the ancestor's type, for the probability that a population is extinct at the m-th generation. We prove that a weaker condition than the existence of such an m leads to extinction almost surely if the sequence of expected generation sizes does not tend to infinity. Some criteria for a positive probability of nonextinction are also obtained. Examples are provided by extending to our unbounded-types setting two well known applications, namely Leslie population dynamics and processes associated to continuum percolation. The latter application is developed until results are obtained about oriented continuum percolation, which give conditions of feasibility for the exact simulation of loss networks with not uniformly bounded objects. After solving the problem of generating percolation clusters with this kind of objects, algorithms are proposed for the simulation of percolation and of a loss network, which is implemented in C language.

Suárez, Cecilia Ana. "Mecanismos involucrados en la regulación de la hipófisis normal e hiperplásica : angiotensina II y esteroides" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El eje hipotalámico-hipofisiario es una estructura fundamental en el control neuroendócrino del organismo y es en la eminencia media donde se establece la principal conecxión entre ambos componentes a travéz de la liberación de factores hipofisotropos controladores de la secreción hormonal hipofisiaria. De este modo la liberación de PRL está sujeta principalmente a un control tónico de tipo inhibitorio ejercido por la DA, mientras que la sereción de la GH está controlada por la liberación cíclica de GHRH y STT. A nivel periférico, los estrógenos son los principales estimuladores de la síntesis y secreción de PRL y un tratamiento estrogénico crónico produce en la rata el desarrollo de nuestro modelo experimental: un prolactinoma o adenoma de lactotropos. La Angiotensina II (AII), además de ser una hormona involucrada en la regulación de la presión arterial sistémica, es uno de los factores que inducen endócrina y parácrinamente la secreción de PRL. Este octapéptido resulta interesante porque tiene además en diferentes tejidos efectos de tipo proliferativo y angiogénico y, en muchos casos, las acciones estimulatorias ejercidad a través del receptor AT1 son parcialmente compensadas y reguladas por efectos opuestos producidos vía AT2. El sistema renina-angiotensina (SRA) hipofisiario local se encuentra ampliamente influenciado por la acción estrogénica , y nosotros ya habíamos descripto en trabajos previos una alteración de la respuesta a AII en la hipófisis hiperplásica. Especificamente, se encontró alterado el patrón de movilización interna del ciclo y la secreción de PRL. Por los tanto la primera parte de la tesis decidimos analizar con el mayor detalle algunas de las alteraciones de la respuesta a AII en los tumores hipofisiarios, especificamente en relación con la participación de los subtipos de sus receptores. De este modo detectamos por Western-blot y por RT-PCR que el tratamiento estrogénico induce una sobreexpresión de AT2 y una subexpresión de AT1 en hipófisis. Por otro lado, describimos por primera vez la activación de ERK1/2 en la respuesta hipofisiaria a AII y definimos la vía de transducción involucrada en la glándula normal. Este proceso involucra la activación de una proteina Gq, un aumento intracelular del calcio y la transactivación del receptor EGF vía una tirosin kinasa no receptora de la familia Scr. Encontramos además que, en el caso del prolactinoma, la activación de ERK1/2 incluida por AII está en parte mediada por AT2, siendo ésta la primera evidencia de la participación funcional de este receptor en la hipófisis. La terapia farmacológica actual de los prolactinomas en muchos casos no resulta ser suficiente ni definitiva, ya que muchas veces es necesario recurrir a una combinación de cirugía y fármacos, e incluso así, el tumor suele reincidir una vez suspendida la aplicación de la droga. Por lo tanto se continúa en la busqueda de nuevas y más eficientes alternativas para completar la farmacoterapia tradicional. Se ha descripto que la progesterona (P4) es capaz de antagonizar efectos estrogénicos y que la dehidroepiandrosterona (DHEA) tiene un amplio espectro de acciones antitumorales y rejuvenecedoras. Entre otras cosas, DHEA inhibiría la génesis y progresión de distintos tipos de tumores de piel, pulmón, hígado, cólon, mama y próstata. Por otro lado se le ha adjudicado a este esteroide efectos benéficos sobre otras patologías asociadas al envejecimiento y el estrés, como enfermedades cardiovasculares, diabetes, enfermedades autoinmunes, obesidad y decaimiento cognitivo o anímico. Sin embargo, también se han descripto en algunos casos efectos deletéreos asociados a un tratamiento prolongado con dosis farmacológicas de DHEA. Entre ellos, una acción estrogénica sobre algunos tumores estrógeno-dependientes, hipertrofismo uterino y hepático, y desarrollo de ovarios poliquísticos. Por lo tanto decidimos estudiar el efecto de la P4 y la DHEA en nuestro modelo de hiperplasia hipofisiaria. Un tratamiento in vivo con P4 no evidenció efectos de tipo terapéutico, ya que no redujo el aumento del peso hipofisiario ni la hiperprolactinemia inducida por el tratamiento crónico con estrógenos. Sin embargo, pudimos determinar que la P4, sinergizando con los estrógenos, induce la participación de AT2 en la secreción de PRL astimulada por AII, lo que constituye la segunda evidencia de la participación funcional de este receptor en la hipófisis. En cuanto al tratamiento con DHEA, demostramos por primera vez su efecto benéfico sobre el tumor hipofisiario inducido por estrógenos, ya que fue capaz de revertir parcialmente los parámetros tumorales mencionados. Sin embargo, el esteroide mostró también per se una cierta acción hiperplásica, prolactinoliberadora y, bajo ciertas condiciones, estimuladora de la secreción de GH. En células adenohipofisiarias normales en cultivo evidenciamos una acción directa de DHEA a nivel hipofisiario. Si bien no se modificó la secreción basal de PRL y GH, si se vió alterada la respuesta a reguladores hiportalámicos. Así, demostramos que DHEA en hipófisis potencia la liberación de PRL y GH en respuesta a AII y a GHRH respectivamente y reduce la inhibición ejercida por la DA y la STT. Determinamos asimismo que la influencia de DHEA sobre la acción dopaminérgica estaría mediada por la movilización de calcio intracelular, mientras que la influencia sobre la cción de la GHRH estaría mediada por el AMPc. Creemos que los resultados presentados en esta tesis contribuyen a una mayor comprensión de los mecanismos que relacionan la acción estrogénica con la actividad de componentes del SRA, lo que es importante a la hora de entender en mayor profundidad procesos tumorigénicos que implican tanto la hiperplásia como la angiogénesis. Por otro lado, aportan a la explicación de las actuales controversias existentes en relación con la acción de DHEA sobre algunos tipos de tumores, especialmente estrogéno-dependientes, y de los efectos secundarios que muchas veces presenta un tratamiento crónico con este esteroide.

Abstract:
The hypothalamic-pituitary axis is a fundamental structure in the neuroendocrine control of the body. The median eminence is where the main connection between both components is achieved through hypophysotrophic factors that control the pituitary hormonal release. By this means PRL secretion is mainly regulated by an inhibitory tonic control exerted by DA and GH release is controlled by the cyclic liberation of GHRH and STT. At the peripheral level, estrogens are the main stimulators of PRL synthesis and secretion. A chronic estrogenic treatment induces in the rat the development of our experimental model: a prolactinoma or lactotrope adenoma. Angiotensin II (AII), in addition of being involved in the systemic arterial pressure regulation, is one of the endocrine and paracrine inductors of PRL secretion. This octapeptide is interesting because ir also has proliferative and angiogenic effects in different tissues. Besides, it has been described in many cases that the stimulatory actions showed by AII acting at the AT1 receptor subtype are partially counterbalanced and regulated by opposite effects induced via the AT2 receptor subtype. The local pituitary renin-angiotensin system (RAS) is widely influenced by the astrogenic action. Among these influences, we have previously described an alteration in the hyperplastic pituitary response to AII. Specifically, there is an altered pattern of internal calcium mobilization and secretion of PRL. In the first part of this thesis we analyze the altered response to AII present in pituitary tumor, with special relation to AII receptor participation. We detected by Western-blot and RT-PCR that the estrogenic treatment induces an upregulation of AT2 and a downregulation of AT1 pituitary receptors. On the other hand, we described by the first time an ERK1/2 activation in the pituitary response to AII and defined the signal transduction pathway present in the normal gland. This pathway involves the action of a Gq protein, an intracelular calcium increment through PLC and IPE, the fosforilation of a non-receptor tyrosine kinase of the Src family and the EGF´s receptor transactivation. We also found that in the pituitary hyperplasia ERK1/2 activation in response to AII is partially mediated by AT2, being this the first evidence of a functional participation of the receptor in the gland. The present pharmacological therapy of prolactinomas is in many cases incomplete and not definitive. It is often necessary to apply a combination of surgery and pharmacology, and even so the tumor may reappear once the therapeutic drug is removed. So it is still necessary to look for new and more efficient alternatives to complement the traditional pharmacotherapy. It has been described that progesterone (P4) is able to antagonize estrogenic effects and that dehidroepiandrosterone (DHEA) has a wide range of antitumoral and youth-promoting actions. It is proposed that DHEA inhibits the genesis ad promotion of different kinds of tumors of skin, lung, liver, colon, breast and prostate. On the other side it has been ascribed to this steroid beneficial effects in the prevention and treatment of other pathologies associated to aging and stress, like cardiovascular diseases, diabetes, self-immune diseases, obesity, and cognitive impairment. Nevertheless, in some cases some deleterious effects associated to a prolonged and pharmacological treatment with DHEA have also been described. For example, an estrogenic action of DHEA observed in some estrogen-dependent tumors, uterine and hepatic hypertrophism, and development of policystic ovaries. In this context we decided to study the effects of (p4) and DHEA in our hyperplasic pituitary model. An in vivo chronic treatment with P4 did not evidence therapeutic effects, as it did not reduce the pituitary weight increment for the hyperprolactinemia induced by the estrogens. Nevertheless, we could determine that P4, in a synergism with the synthetic estrogens DES, induces the participation of AT2 in the AII-stimulated PRL secretion. This constitutes the second evidence of the functional participation of this receptor in the pituitary. On the other hand, a chronic DHEA treatment was able to partially revert the tumoral parametes previously mentioned though it also showed per se a mild hyperplasic, hyperprolactinemic and, under certain conditions, GH secretory action. In normal adenohypophysial cells in culture, we observed a direct DHEA action at the pituitary level. Although basal PRL and GH secretion were not modified by this steorid, releasing responses to hypotalamic regulators were. We proved that DHEA increases PRL and GH pituitary release in response to AII and GHRH, respectively, and reduces the inhibition induced by DA and STT. We also determined that the influence of DHEA on the dopaminergic action was mediated by and effect on the intracellular calcium mobilization, while the influence on GHRH action was mediated by the cAMP production. We believe that the present results contribute to a better understanding of the mechanisms involved in the relationship between the RAS components and the estrogen effects, which is important to achieve a more accurate description of tumorigenic processes that include hyperplasia and angiogenesis. On the other hand, they may help to explain the present controversies in relation to the action of DHEA in some kinds of tumors, specially the estrogen-dependent ones, and to the side effects which in many cases are produced by a chronic treatment with this steroid.

Schwartzman, Ariel. "Medición de la vida media del mesón B± e identificación de quarks top a partir de la reconstrucción de decaimientos de quarks b" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta Tesis presenta una medición preliminar de la vida media de un mesón B± a través de la reconstrucción de su cadena de decaimiento, y de la producción de quarks top en el canal de electrón mas jets, usando el método de vértices desplazados para la identificación de jets-b. Su principal contribución es el desarrollo, implementación y optimización del algoritmo de filtros de Kalman para la reconstrucción de vértices, y del método de vértices desplazados para identificar jets provenientes de la fragmentación de quarks b. Estos dos algoritmos forman ahora parte del paquete estandar de reconstrucción del experimento DØ, y explotan al máximo la tecnología de punta de los nuevos detectores de trazas recientemente instalados. El análisis está basado en datos tomados hasta abril de 2003 en el Colisionador hadrónico pp de Fermilab, correspondiente a una luminosidad integrada de 60pb^-1. La medición de τ=1.57±0.18 ps para el bosón B está de acuerdo con el valor aceptado de su vida media, y permite esperar un nivel de presición altamente competitivo para la toma de datos.

Abstract:
This dissertation presents a preliminary measurement of the B± lifetime through the full reconstruction of its decay chain, and the identification of top quark production in the electron plus jets channel using the displaced vertex b-tagging method. Its main contribution is the development, implementation and optimization of the Kalman filter algorithm for vertex reconstruction, and of the displaced vertex technique for tagging jets arising from b quark fragmentation, both of which have now become part of the standard DØ reconstruction package. These two algorithms fully exploit the new state-of-the-art tracking detectors, recently installed as part of the Run 2DØ upgrade project. The analisys is based on data collected during Run 2a at the Fermilab Tevatron pp Hadron Collider up to April 2003, corresponding to an integrated luminosity of 60 pb^-1. The measured B meson lifetime of τ=1.57±0.18 ps is in agreement with the current world average, with a competitive level of precision expected when the full data sample becomes available.

Santos, Javier. "Estudio del plegado proteico: la ß-lactamasa" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las propiedades biológicas de las proteínas dependen de su estructura tridimensonal (3D). Hoy sabemos que el plegado proteico permite la conversión de la información existente en la secuencia de aminoácidos en información 3D, pero no sabemos cómo se lleva adelante este proceso. Tampoco se conoce la lógica con que se distribuye la información 3D en la secuencia y no existe una opinion unificada sobre el grado de estructura presente en los estados parcialmente plegados ni sobre el papel de estos últimos en el plegado proteico. Sí existen algunas pruebas de que la información conformacional no estaria distribuida homogéneamente en la secuencia proteica. En una misma cadena polipeptídica existen fragmentos o bloques que pueden ser eliminados sin producir alteraciones en el plegado final, por lo que no formarían parte del conjunto de residuos determinantes de la estructura 3D nativa. Por el contrario, otros fragmentos aparentemente no pueden ser removidos sin abortar el proceso de plegado. En este trabajo de tesis se utilizó a la β-lactamasa de Bacillus Licheniformis. ES-βL como modelo experimental para estudiar el proceso de conversión de información 1D → 3D e investigar la existencia de módulos de información para el plegado. Se eligió a ES-βL como modelo principalmente porque a) la existencia de proteína correctamente plegada (nativa) es fácilmente detectable por actividad enzimática. aún en trazas; b) se conoce su estructura cristalográfica con gran resolución; c) no posee puentes disulfuro que compliquen adicionalmente el plegado; y d) ES-βL no es un modelo excesivamente reduccionista: posee dos dominios y una topología medianamente intrincada. Para caracterizar el modelo experimental se estudiaron aspectos generales de la estructura, el plegado, y estados intermediarios de ES-βL, tanto desde un punto de vista cinético como en el equilibrio. La estructura de formas parcialmente plegadas también se estudió a partir de experimentos de modificación química de cisteínas introducidas a tal fin en la cadena polipeptídica como sondas conformacionales. El desplegado de ES-βL inducido por urea presentó más complejidad que el desplegado por GdmCl. En el primer caso, se detectaron por lo menos cuatro estados parcialmente plegados. Inesperadamente, el reemplazo de Ser265 → Cys265 tuvo consecuencias importantes para el plegado. El efecto desestabilizador de la mutación sobre los estados parcialmente plegados indicó que el residuo formaría parte de un módulo estructurado en dichos estados. La observación de estados parcialmente plegados, curvas de desnaturalización no coincidentes, transiciones multifásicas, cores resistentes e intermediarios cinéticos es compatible con un mecanismo de ensamblado modular o plegado por partes de la β-lactamasa. Por otra parte, en este trabajo se manipuló la secuencia de la proteína para estudiar la interdependencia de los niveles jerárquicos de estructura en el proceso de plegado. Se evaluó el contenido de información para el plegado de ES-βL codificado por la hélice α C-terminal. Para estudiar el papel de esta hélice se prepararon y caracterizaron tres variantes de ES-βL acertadas, en nueve, catorce y diecinueve residuos desde el C-terminal. ES-βLͨΔ9, ES-βLͨΔ14 y ES-βLͨΔ19, respectivamente. Los lisados de bacterias expresando ES-βLͨΔ19 no presentaron actividad β-lactamasa. Por el contrario, dicha actividad sí fue detectada en lisados conteniendo tanto ES-βLͨΔ9 como ES-βLͨΔ14, demostrando de manera preliminar que una fracción de estas moléculas, puede adquirir estructura nativa. La caracterización rigurosa de ES-βLͨΔ9 permitió demostrar que la secuencia de residuos eliminada tiene un rol en el mecanismo de plegado pero que su ausencia no impide la formación de estructura 3D nativa. También se caracterizó en detalle Ip ES-βLͨΔ9, un estado parcialmente plegado, que está conectado con la forma nativa de ES-βLͨΔ9. Ip ES-βLͨΔ9 sólo posee estructura secundaria residual, pero es muy compacto. Posee las características de un glóbulo fundido y puede esmbilizarse formando un dímero. La eliminación de los residuos 287-295 afecta dramáticamente la velocidad de replegado de la β-lactamasa: ES-βLͨΔ9 se pliega 10 4 veces más lentamente que ES-βL. A partir del estudio tennodinámico y cinético de ES-βLͨΔ9 se concluyó que los residuos eliminados proveen información para formar estructura secundaria, evitar trampas cinéticas y asociación errónea de unidades de plegado, acelerar el pasaje a través del estado de transición y estabilizar al estado nativo. Los resultados obtenidos con la β-lactamasa se compararon con otros datos de literatura referidos a proteínas que a pesar de carecer de partes de su secuencia alcanzan un plegado nativo. El conjunto de las evidencias experimentales parece sugerir que la cadena polipeptídica tiende a plegarse guiada principalmente por información local en la secuencia. Las interacciones entre residuos alejados secuencialmente jugarían un papel secundario en el proceso de plegado y aparecerían posteriormente, luego de que la cadena polipeptídica adopte el recorrido espacial apropiado.

Abstract:
The biological properties of proteins rest upon their specific native three-dimensional structure. and it is known that protein native structure is the result of a folding process by which sequential information is spontaneously converted into three-dimensional information. However, it is unknown how the three-dimensional information is encoded by the sequence. Moreover, although the native, biologically active, conformation can be characterized in atomic detail, a clear understanding of the structure of unfolded and partially folded states is also lacking. There are evidences suggesting that the information content is not homogenously distributed in the protein sequence: there exist particular fragments or blocks of sequence that can be eliminated without producing major alterations in the native structure, whereas other fragments, or even single residues, cannot be removed without impeding the folding process. In this work, β-lactamase of Bacillus licheniformis (ES-βL) was used as an experimental model to study the conversion of sequential information into three-dimensional information, and to investigate the existence of information modules embedded in the polypeptide chain. ES-βL was chosen as a protein folding model because: a) even traces of its native state can be detected by measuring enzymatic activity; b) its crystal structure is known with high resolution; c) it does not have disulfide bridges that would additionally complicate the folding reaction; d) it is representative of medium-size proteins with two domains and a moderately intricate topology. In the first part of the work, to characterize the experimental model, native and intermediary states of ES-βL, were studied by kinetics, equilibrium unfolding experiments, and chemical modification of Ser → Cys mutants. At least four partially folded states with different spectroscopic properties or thiol accessibility were detected in ES-βL equilibrium unfolding. Unexpectedly, it was found that a Ser265 → Cys265 replacement destabilized selectively ES-βL partially folded intermediates indicating Ser265 is establishing fixed interactions in these states. In addition the results showed the presence of partially folded states, no coincident curves when unfolding was monitored by different probes, multiphase transitions, protease resistant cores, and kinetic intermediaries. All these features suggest a modular assembling mechanism for β-lactamase. In the second part of the work, the sequence of β-lactamase was manipulated to study the interdependence of the hierarchic levels of structure (modules, independent units, topomer, native structure, etc.) in the folding process. Sequential information was eliminated with the expectation of stopping folding at different levels of structural complexity. In particular, the information content encoded by the C-terminal helix of ES-βL was evaluated. Three variants shortened by nine, fourteen and nineteen residues from the C-terminal were prepared and characterized (ES-βLͨΔ9, ES-βLͨΔ14 and ES-βLͨΔ19, respectively). For ES-βLͨΔ9, ES-βLͨΔ14, most of the protein was was found forming inclusion bodies (insoluble aggregates) in transformed E. coli cells. Neither lysates of untransformed E. coli cells nor cells expressing ES-βLͨΔ19 had detectable lactamase activity. Contrastingly, lysates containing ES-βLͨΔ9 or ES-βLͨΔ14 exhibited enxymatic activity, which demonstrated that a fraction of these proteins acquired a properly folded structure in vivo. A thorough characterization of ES-βLCͨΔ19(hydrodynamics, spectroscopic and thermodynamic properties, enzymatic activity and resistance to proteolysis) allowed demonstrating that the eliminated sequence does have a role in the folding mechanism, but its absence does not prevent the acquisition of native structure. Also Ip ES-βLͨΔ9, a partially folded state, was discovered and characterized. Ip ES-βLͨΔ9 lacks tertiary structure, but it is compact and possesses residual secondary structure. These features are typical of molten globules, but this one is unusual because it forms a dímer in a concentration dependent process. ES-βLͨΔ9 folds 10 4 times more slowly than ES-βL. From a thorough thermodynamic and kinetic study of ES-βLͨΔ9, it is concluded that the eliminated residues (287-295) participate in folding at different levels: (a) encoding secondary structure; (b) encoding tertiary structure indirectly, avoiding kinetic traps and erroneous association of folding units; (c) participating in the folding transition state; (d) stabilizing the native state. Finally, in this thesis work it is discussed available experimental information on native proteins lacking parts of their sequences, and the relevance of these results to protein folding.

Rutitzky, Laura I.. "Mecanismos de inmunorregulación en la esquistosomiasis murina" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Abstract:
Schistosomiasis continues to be one of the most prevalent parasitie infections in the world. In schistosomiasis mansoni, helminth parasite eggs preeipitate an intrahepatic granulomatous and fibrosing inflammatory process, which is mediated by, and dependent on, MHC class lI-restricted CD4+T helper lymphoeytes specific for schistosome egg antigens (SEA). In the mouse model of the disease, CBA mice develop high pathology characterized by large granulomas and strong eggantigen- speeifie T cell responses whereas C57BL/6 (BL/6) mice develop low pathology with significantly smaller granulomas and a more attenuated T cell response to the SEA. While in the acute phase of the disease both strains develop a Thl type cytokine response, during the chronic phase CBA mice exhibit a Thl/Th2 type response whereas BL/6 mice bias their cytokine response to a Th2 phenotype. The following experiments were undertaken to further investigate how the prevailing cytokine environment, CD4+ T cell apoptosis and T cell costimulatory pathways influence the development of the egg-induced immunopathology in the experimental murine schistosome infection and the outcome of the disease: l. An artificial model of high pathology by immunization of BL/6 mice with SEA in complete Freund’s adjuvant (CFA) was used to study the role of Thl vs. Th2 cytokine responses in the development of egg-induced immunopathology. The results showed that the immunization with SEA/CFA induced a Thl shift in the cytokine production by a numerically stable population of SEA-specifie CD4+ T cells that correlated with a severe exacerbation of the immunopathology and death of these otherwise low pathology mice. 2. The role of CD4+T cell apoptosis in the egg-induced immunopathology, and the possible underlying mechanisms that account for this type of cell death, were studied by comparing several immune parameters related to CD4+ T cells between the two polar strains of mice, CBA and BL/6. The results demonstrated that CD4+ T cell apoptosis of granuloma and mesenteric lymph node cells was higher in the low pathology BL/6 strain than in the high pathology CBA strain as a result of IL-2 deprivation. The in vivo treatment of BL/6 mice with recombinant IL-2 resulted in increased hepatic pathology and decreased CD4+ T cell apoptosis. 3. Finally, the role of the ICOS-B7RP-l (inducible costimulatory molecule-B7-related protein-l) costimulatory pathway on the development of egg-induced immunopathology was examined by treating infected BL/6 mice with a blocking mAb against ICOS. The results showed that the ICOS-B7RP-l costimulatory pathway serves primarily to control IFN-γ production by SEA-specific T lymphocytes, thereby promoting a Th2 cytokine environment conducive to limited hepatic damage in the low pathology BL/6 strain. These findings contribute to our knowledge on the mechanisms that regulate the immune response in murine schistosomiasis. They provide new insights on how CD4+ T lymphoeytes regulate immunopathology; confirm that the establishment of a Th2 cytokine environment correlates with host protection in this helminth infection and demonstrate that apoptosis represents a significant means of controlling the CD4+ T cells that mediate the immunopathology. The results presented in this thesis may serve to devise and implement strategies for amelioration of the immunopathology in this disease.

Ruiz, Jimena Alicia. "Rol de los polihidroxialcanoatos en la resuesta al estrés desarrollada por P. putida GPo1" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La supervivencia de los microorganismos en la naturaleza depende de su habilidad para adaptarse rápidamente a los cambios en las condiciones ambientales. Por este motivo, las bacterias han desarrollado estrategias de supervivencia, mecanismos de control activos que les permiten hacer frente a las condiciones adversas y que facilitan el reajuste de la célula a nuevas situaciones. Uno de estos mecanismos es la Respuesta general a estrés que se induce en bacterias Gram-negativas ante distintas condiciones de estrés ambiental, tales como escasez en nutrientes, estrés osmótico, estrés oxidativo y cambios bruscos de temperatura. Los genes involucrados en la resistencia al estrés se encuentran bajo el control de una subunidad sigma alternativa de la RNA polimerasa denominada σˢ, codificada por el gen rpoS. El nivel intracelular de σˢ se regula a nivel transcripcional, traduccional y de estabilidad de la proteína. Otra respuesta desencadenada ante condiciones de estrés es la Respuesta Estricta, que se caracteriza por un aumento en el nivel intracelular de la alarmona (p)ppGpp. Dicha molécula modula la expresión de varios genes, entre ellos el rpoS. Tanto en E. coli como en Pseudomonas se demostró que el ppGpp tiene un efecto positivo sobre la transcripción de rpoS. Los polihidroxialcanoatos (PHAs) son polímeros de reserva bacterianos cuya acumulación y degradación favorece la supervivencia de los microorganismos en el ambiente. Resultados obtenidos previamente en el laboratorio, demostraron que la degradación del PHA acumulado incrementaba la supervivencia y la resistencia al estrés de la bacteria Pseudomonas putida en microcosmos de agua de río. Teniendo en cuenta estos aspectos, el objetivo general de la presente tesis doctoral fue estudiar el papel de los polihidroxialcanoatos en los mecanismos de repuesta al estrés en P. putida. Para esto se utilizó una cepa salvaje y una cepa con una mutación en la enzima PhaZ, encargada de degradar PHA, y se analizó el contenido intracelular de ppGpp en condiciones de depolimerización de PHA, así como también la resistencia a estrés térmico y oxidativo, y el contenido intracelular de os durante ayuno en carbono. Los resultados obtenidos mostraron que existe un aumento transitorio en el nivel intracelular de ppGpp, aproximadamente 5 hs después del comienzo de la degradación de PHA. No se observó incremento en el contenido de ppGpp en la cepa mutante incapaz de degradar el polímero. La complementación de la mutación phaZ restauró el fenotipo salvaje. Asimismo, se observó que la capacidad de degradación de PHA incrementaba el nivel intracelular de σˢ y la resistencia a estrés térmico y oxidativo durante ayuno en carbono. La introducción del gen que codifica para la depolimerasa de PHA en la cepa mutante phaZ incrementó el contenido de RpoS y la tolerancia al estrés. Estos resultados sugieren que existe una relación entre la depolimerización de PHA y la Respuesta general a estrés controlada por RpoS, que tal vez se encuentre mediada por ppGpp.

Abstract:
Survival of microorganisms in nature depends on their ability to adapt to changes in environmental conditions. For this reason, bacteria have developed survival strategies, active control mechanisms that allow them to cope with adverse conditions and facilitate the cell readjustment to new situations. One of these mechanisms is the General stress response induced in Gram-negative bacteria in response to several environmental stresses, such as nutrient starvation, osmotic stress, oxidative stress and abrupt temperature changes. The genes involved in stress resistance are under the control of an alternative sigma subunit of the RNA polymerase, σˢ, encoded by the rpoS gene. The intracellular level of σˢ is regulated at several levels, including transcription, translation and protein stability. Another mechanism triggered by stress conditions is the Stringent response. This response is characterized by an increase in the intracellular level of the alarmone (p)ppGpp. This molecule modulates the expression of several genes, including rpoS. The involvement of ppGpp as a positive signal for rpoS expression has been reported in E. coli and Pseudomonas. Polyhydroxyalkanoates (PHAs) are bacteria] reserve polymers that enhance survival and competition abilities of microorganisms in the environment. Previous results of our laboratory, demonstrated that PHA degradation increased survival and stress resistance of Pseudomonas putida in river water microcosms. Considering all these aspects, the general purpose of this PhD. thesis was to study the role of PHAs in the stress response mechanisms in P. putida. For this purpose we used a P. putida wild type strain and a mutant in the PhaZ enzyme, which is involved in PHA degradation, to analyze the ppGpp intracellular levels in PHA depolymerization conditions; as well as the resistance to thermal and oxidative stress, and the intracellular σˢ content during carbon starvation. The results showed that PHA degradation is followed by an increase in ppGpp intracellular levels. This increase was not observed in the mutant strain unable to degrade the polymer. The complementation of the phaZ mutant restored the wild type phenotype. Moreover, it was observed that the capacity of PHA degradation increased the intracellular σˢ level and the resistance to heat shock and oxidative stress during carbon starvation. The introduction of the gene that codes for the PhaZ depolymerase in the mutant strain, increased RpoS content and tolerance to stress agents. These results suggest a relation between PHA depolymerization and the General stress response controlled by RpoS, that could be mediated by ppGpp.

Rosignoli, Florencia. "Caracterización de la sialoadenitis en los ratones NOD: participación del óxido nítrico en la disfunción secretoria" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La autoinmunidad es una causa importante de enfermedad en los seres humanos. El síndrome de Sjögren es una enfermedad inflamatoria crónica que se caracteriza por una pérdida progresiva de la secreción salival y lagrimal. La cepa de ratones diabéticos no obesos (NOD) es el modelo murino más ampliamente utilizado para el estudio de esta enfermedad debido a que el desarrollo de la sialoadenitis está acompañado por una disminución de la respuesta secretoria. Estudios en las glándulas salivales sugieren que el óxido nítrico podría tener un papel en la regulación de la secreción salival. Por tal motivo nuestro objetivo es investigar si la disfunción secretoria de los ratones NOD está asociada a alteraciones en la actividad de la óxido nítrico sintasa y su relación con la aparición de infiltrados linfocitarios en las glándulas o la expresión de citoquinas en las mismas. Los resultados expuestos indican que las glándulas salivales de ratones NOD presentan una menor actividad de NOS a partir de las 12 semanas comparada con la de BALB/c de la misma edad y ratones NOD de 8 semanas. La disminución es total en el caso de las glándulas submaxilares. El efecto sobre la NOS coincide con una reducción del flujo salival estimulado por pilocarpina sola o pilocarpina y VIP. Ambos efectos preceden al aumento de los niveles de citoquinas proinflamatorias en las glándulas y en el suero y a la aparición de infiltrados linfomononucleares en las glándulas. Además los resultados apoyan la hipótesis de una regulación negativa de la NOS por CaM KII, como el mecanismo responsable de la disminución de la actividad observada.

Abstract:
Autoimmunity is an important cause of disease in human beings. Sjögren´s syndrome is a chronic autoimmune disorder characterized by histological and functional alterations of exocrine glands that result in a severe dryness of the mouth and the eyes. The non obese diabetic (NOD) mouse model of Sjögren´s syndrome is the widest model used due to the fact that the development of sialoadenitis is associated to a decrease of salivary secretion. Studies in salivary glands suggest that nitric oxide could play a role in the regulation of the salivary secretion. Our objetive is to determine if the secretory dysfunction of NOD mice is associated to alterations in the activity of nitric oxide synthase and if this is previous to the appearance of lymphocytic infiltrates or cytokine expression in the glands. Our results show that the salivary glands of NOD mice present a diminished activity of NOS compared with BALB/c of same age and NOD mice of 8 weeks old. The loss of activity is complete in submandibular glands. The effect of NOS is associated with a reduction of the salivary flow stimulated by pilocarpine or pilocarpine and VIP. Both effects precede the increase of the levels of proinflammatory cytokines in glands and serum and the appearance of infiltrates in the glands. In addition the results support the hypothesis of a negative regulation of NOS by CaMKII, as the responsible mechanism for the decrease of the activity observed.

Roncaroli, Federico. "Estructura electrónica y reactividad de nitrosilos en complejos de metales de transición" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Rodríguez, María Alejandra. "Hongos del suelo antagonistas de Sclerotinia Sclerotiorum : selección y estudio de potenciales agentes de biocontrol" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los objetivos fundamentales de este trabajo fueron analizar las comunidades fúngicas de suelos supresivos y no supresivos frente a S. Sclerotiorum, seleccionar cepas antagonistas de dicho patógeno, estudiar y caracterizar los mecanismos involucrados y establecer el potencial de las dichas cepas como agentes de biocontrol. Se efectuó el estudio de la comunidad de hongos filamentosos provenientes de la rizósfera de soja y de lechuga. Se realizó el análisis de las comunidades fúngicas de suelos supresivos y no supresivos en función de las especies fúngicas presentes, determinóndose por un lado la composición fúngica de las mismas y por otro el comportamiento de las cepas integrantes de dicha comunidad,frente al patógeno, es decir caracterizando los suelos de acuerdo a la actividad y dominancia de las especies presentes. Se establecieron por un lado diferencias entre hospedantes dadas por el efecto rizosférico y por otro diferencias entre suelos supresivos y no supresivos. En particular, en suelos de soja, se determinó que la fungistasis del suelo respondió a una mayor proporción de antagonistas entre las especies dominantes por un lado y por otro los mecanismos involucrados en el antagonismo. Partiendo de las diferencias entre suelos supresivos y no supresivos de soja, se seleccionaron aquellas cepas dominantes y que fueron determinantes en la caracterización de la propiedad supresiva de los suelos. Estas cepas se emplearon en ensayos posteriores. Se estudió la relación del patógeno con hongos formadores de micorrizas arbusculares en estadios presimbióticos mediante ensayos in vitro, así como el efecto de la micorrización en la protección frente a S. sclerotiorum en plantas de soja en ensayos de invernáculo. Debido a la ausencia de biocontrol estas cepas no fueron consideradas en ensayos posteriores. Las cepas hongos saprótrofos seleccionadas fueron evaluadas mediante diversos ensayos in vitro y en invernáculo. Se determinó el potencial biocontrolador frente a S. sclerotiorum así como los principales mecanismos involucrados en el antagonismo. Se caracterizó e identificó los metabolitos responsables de la actividad antifúngica.

Abstract:
The fundamental objectives of this work were to analyze the fungal communities of suppressive and non-suppressive soils for S. sclerotiorum, to select antagonistic fungal strains of this pathogen, to study and characterizes the mechanisms involved and to establish the potential of these fungal strains as agents for biocontrol. Studies on the community of filamentous fungus coming from the rhizosfere of soybean and lettuce were carried out. Analysis of fungal communities from suppressive and non-suppressive soils of the fungal species present was also done, imiting on one hand their fungal composition and in the other hand the role of the integrating strains of this communities in the presence of the pathogen, thereby, characterizing soils taking into account the activity and dominance of the present species. Differences were established on one hand between hosts given by the effect of the rhizosfere and on the other between suppressive soil and non-suppressive soil. In particular in the soybean soil, it was established that the fungistasis of the soil responded to a mayor proportion of the antagonists because of the dominant species and the mechanisms involved in the antagonism. The dominant and responsible strains for the suppressive characteristics of soils were selected taking into account the differences between suppressive and non-suppressive soybean soils. These selected strains were used in later assays. The relationship between the fungal pathogen and the AM fungi was studied. In vitro assays were used to understand the effect of the pathogen on the different steps of the presimbiotic development. The effect of the micorrization in the protection against S. scsclerotiorum in soybean plants was developed in greenhouse. The selected saprophytic fungal strains were evaluated by different in vitro and greenhouse assays, determining the biocontrol potential against S. scclerotiorum and the principal mechanism involved in the antagonism. The metabolites responsible of the antifungal activity were characterized and identified.

Rodríguez Gil, Diego Javier. "Alteraciones producto de una hipoxia aguda en el complejo receptor Gabaa : caracterizaciones bioquímicas, farmacológicas y moleculares" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se ha demostrado que la hipoxia produce diversas alteraciones en la neurotransmisión GABAérgica, principalmente en el período perinatal. El complejo receptor GABAa está asociado a un canal de cloruro, el cual en presencia de GABA aumenta la conductancia al ion Cl- hacia el interior de la neurona produciendo su hiperpolarización. Los objetivos de la presente Tesis fueron diseñar una cámara hipóxica para embriones de aves, y caracterizar las alteraciones que se producen en el complejo receptor GABAa luego del trauma hipóxico. Los resultados obtenidos demuestran que los estadios embrionarios más tempranos son más sensibles a la injuria, exhibiendo una reducción del máximo número de sitios de unión de baja afinidad, y un aumento de la estimulación máxima producida por un barbitúrico (pentobarbital sódico) y un neuroesteroide (alopregnanolona). Asimismo, se observó un aumento de la captación de Cl̄ inducida por GABA de los receptores remanentes luego del tratamiento hipóxico. Dado que los embriones detectan en todos los estadios embrionarios la injuria producida, evidenciándose como un aumento en los niveles de lactato, es probable que existan cambios durante el desarrollo en la composición de las subunidades del receptor que lo hagan más resistente a la hipoxia, la cual además, ocurre fisiológicamente en los últimos días de desarrollo. La expresión de algunas subunidades del receptor GABAa durante la embriogénesis, mostró cambios en los niveles de expresión de α1, β2 y ɣ2 en embriones control luego del tratamiento hipóxico, los cuales correlacionaron con lo observado luego de producida la hípoxia fisiológica. Estos datos sugieren que, podrían existir conformaciones del receptor más resistentes a la hipoxia, y que los niveles de oxígeno podrían regular la expresión de algunas subunidades de alguna manera aún desconocida.

Abstract:
It has been demonstrated that hypoxic treatment produces functional disorders and changes in the GABAergic neurotransmission, specially during perinatal period. GABAa receptor complex is associated to a chloride channel, and GABA binding increases Clˉ influx, resulting in neuron hyperpolarization. The aims of this Thesis were (a) to design a hypoxic chamber for avian embryos and (b) to characterize alterations on the GABAa receptor complex after hypoxic injury. The results obtained demonstrated that the earlier embryonic stages are more sensitive to injury, exhibiting a reduction in maximal number of low affinity binding sites, and an increase in the maximal stimulation produced by a barbiturate (sodium pentobarbital) and a neurosteroid (alopregnanolone). Moreover, an increase in chloride influx of the remaining receptors was observed after hypoxia. Taking into account that the embryos sense hypoxic treatment at all embryonic days studied, which was proved by the increase in lactate levels, it is probable that during development receptor subunit composition is altered making this receptor subtype more resistant to hypoxia. This occurs physiologically at latest embryonic days. The expression pattern of some GABAa receptor subunits during ontogeny showed changes in α1, β2 and ɣ2 levels in control embryos, and also after hypoxic treatment. A correlation could be observed between hypoxic treatment and physiological hypoxia. These data suggest the existence of some receptor isotypes which are more resistant to hypoxia, and that oxygen levels may regulate subunit expression in some unknown way.

Rocco, Vanina E.. "Efectos de la radiación ultravioleta sobre las interacciones entre zooplancton e ictioplancton en lagos patagónicos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta tesis investiga los efectos de la radiación ultravioleta sobre organismos acuáticos. En particular se estudiaron los efectos sobre el zooplancton, sobre sus principales depredadores, las larvas de peces, y sobre la interacción entre presa y depredador. Este trabajo se realizó en distintos ambientes y diferentes escalas. Los ambientes incluyeron varios lagos del Noroeste Patagónico y la Península Antártica. Las ecalas variaron desde experimento de laboratorio hasta muestreos de campo. Los resultados indican que la radiación ultravioleta tiene efectos negativos, tanto sobre el zooplancton, como sobre sus depredadores. Dichos efectos son claramente dependientes de la dosis a la que los organismos son expuestos, y por lo tanto, varían con la profundidad y la transparencia de cada ambiente en particular. Se anaizó también las distintas estrategias utilizadas por los organismos para contrarrestar los efectos negativos de la RUV. Los resultados sugieren fuertemente que dichas estrategia están condicionadas por el ambiente físico y el entorno ecológico. Por ejemplo, en ambientes profundos, como los grandes lagos pedemontanos Patagónicos,el zooplancton puede encontrar refugio en profundidad durante el verano. Por el contrario en ambientes menos profundos, muchos organismos recurren a otro tipo de estrategias, tales como la fotorrespiración mediante la acumulación de ompuestos capaces de bloquear la radiación, o la foto-reparación, a través de mecanismos enzimáticos. La posibilidad de foto-reparación parece estar muy limitada en ambientes fríos, presumiblemente debido a la baja eficiencia de la enzima fotoliasa a baja temperatura. Por otra parte, el empleo de compuestos fotoprotectores parece estar condicionado, al menos en parte, por la presencia de depredadores visuales, como los estadios juveniles de peces. Se investigó también la posibilidad de que los peces pudieran utilizar las longitudes de onda dentro del espectro ultravioleta para localizar a sus presas. Estos estudios se llevaron a cabo con juveniles de trucha arco iris, los cuales se sabe que cuentan con receptores de UV en sus retinas. Sin embargo, nuestros experimentos produjeron resultados negativos. La falta de utilización de longitudes de onda dentro del UV para la localización de presas no resulta llamativa, dado que en ambientes transparentes, tanto los peces, como sus presas evitan las aguas superficiales, refugiandose en aguas relativamente profundas donde no penetra la RUV.

Abstract:
In this work, we investigated the effects of ultraviolet radiation on aquatic organisms. Particulary, we studied the effects on zooplankton and their main predators, namely larval fish, as well as on the interactions between preys and predators. This work was performed on various environments and at different scales. The study sites included a number of lakes located in North-western Patagonia and the Antartic Peninsula. The scales ranged from laboratory experiments to whole-lake field samplings. The results show that ultraviolet radiation has negative effects on both zooplankton and their predators. Such effects are remarkably dependant on the doses to which the organisms are exposed, and consequently vary with lake depth and water transparency. The study also considered the different counteracting strategies used by the organisms to cope with high ultraviolet radiation levels. The results suggest that such strategies are strongly constrained by the physical environment and the ecological assembly. For example, in the large lakes typical of low elevation valleys of Patagonia the zooplankton appears to seek a deep refuge during summertime. In contrast, in more shallow lakes, many organisms use other strategies, such as photoprotection through the accumulation of sun blocking compounds, or photorecovery through photoenzymatic repair. In Turn, the extent of photorecovery appears to be very limited in cold habitats, presumably because of the low efficiency of the photolyase enzyme at low temperatures. On the other hand, the use of photoprotective compounds appears to be constrained by the presence of visual predators, such as the early life stages of fish. Qe also explored the possibility that fish predators could take advantage for ultraviolet radiation wavelength to locate their preys. These experiments were conducted using rainbow trout juveniles, which are known to posses retinal UV detectors. However, our investigation produced negative results. The lack of reliance on UV wavelength to locate preys is not comletely unexpected, given that in transparent habitats both fish and their preys avoid the surface waters and refuge at depth were UV radiation has already been depleted by the absorption of the water.

Reinoso, María Elba. "Depósito y caracterización de películas de carbono amorfo con incorporación de silicio" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las múltiples aplicaciones tecnológicas de las películas de Carbono amorfo (a-C) lo convirtieron , desde su descubrimiento, en un interesante tema de estudio. Se trata de un material de alta dureza, buen aislante eléctrico que presenta una excelente adherencia sobre una amplia variedad de materiales y es altamente resistente al desgaste. Sin embargo, muchas de sus propiedades no son estables térmicamente: al ser sometido a temperaturas mayores que 450 °C el material se convierte paulatinamente en grafito microcristalino y pierde gran parte de sus propiedades tecnológicamente interesantes. A causa de esto se ha intentado encontrar otros materiales que superen estas dificultades. En este trabajo nos ocuparemos de películas amorfas de Carbono-Silicio. Algunas investigaciones que involucraron el análisis de la región de la interfase C-Si en peliculas de a-C depositadas sobre Si cristalino, sugirieron que la incorporación de Silicio podría aportar estabilidad térmica a las películas de a-C. En este trabajo se presentan los resultados del depósito de películas amorfas de C-Si (a-SixC1-x con 0 ≤ x ≤ 0,5) utilizando un método novedoso que permite obtener un filme de espesor del orden del micrómetro, homogéneo, con la composición C-Si que se desee, sobre diferentes sustratos. Se ha utilizado un haz de iones de alta energía (30 keV) generado a partir de una mezcla de gases metano y silano. Los materiales obtenidos han sido caracterizados en función de la composición del depósito mediante las técnicas de XPS, espectroscopia Raman, espectroscopia por aniquilación de positrones y EELS, a fin de caracterizar su microestructura. Se han realizado mediciones de dureza, adherencia y resistencia al desgaste para conocer las propiedades mecánicas del material y se ha estudiado la evolución de la estructura y las propiedades al ser sometido a altas temperaturas (hasta 900 °C) en vacío. Se han realizado simulaciones numéricas por Dinámica Molecular del depósito de átomos de C sobre Si y diamante a bajas energías (hasta 100 eV), para analizar la formación de la interfase C-Si y la evolución de la estructura con la temperatura. Se ha concluido que el material depositado presenta una mayor estabilidad térmica conforme se incrementa la cantidad de Silicio incorporada. Sin embargo, esto resulta en desmedro de la dureza de las películas depositadas. De esto se desprende que el compromiso estabilidad-térmica/dureza debe ser analizado en témiinos de la aplicación prevista para el material.

Abstract:
Amorphous carbon has attracted much attention since its discovery because of its great number of useful properties which make it suitable for many technological applications. This is a hard material, which shows excellent adherence on several substrates. It is electrically insulating and it presents high wear resistance. However, it graphitizes when it is thermally annealed at temperatures higher than 450 °C when some of the most interesting properties are lost. In order to solve this problem other materials have been studied. Different analyses of the C-Si interface have pointed out that a material containing Silicon and Carbon could be more thermally stable. In this work we present our research on Carbon-Silicon amorphous films (a-SixC1-x con 0 ≤ x ≤ 0,5) introducing a new method to obtain amorphous Si-C films (thickness c.a. 1 μm) with different composition on several substrates, by using a high-energy ion beam (30 keV) produced by Methane and Silane. The microstructure of the obtained materials has been characterized by XPS, Raman spectroscopy, positron annihilation spectroscopy and EELS. So as to characterize its mechanical properties, indentation hardness measurements and adherence and wear resistance tests have been performed. Microstructure and mechanical properties have been evaluated after thermal annealing (up to 900 °C), in order to test the thermal stability of the films. Molecular Dynamics simulations were used to investigate the low-energy (100 eV) deposition of C atoms on Silicon and diamond. The interface region and structure behavior during therrnal annealing were analyzed. We concluded that the thermal stability increases with Silicon content in a-SixC1-x films while hardness and wear resistance decrease. However, it has been proved that they are more thermally stable than a-C. As a result, the more convenient composition has to be chosen regarding the use of the coating.

Raffa, Diego L.. "Llaves moleculares como herramienta analítica" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los polímeros conductores son ampliamente utilizados para diversas aplicaciones. Entre ellas se destaca la fabricación de sensores químicos. Se han desarrollado diversos sensores a base de polianilina para la detección de varias moléculas como NADH, H202, glucosa y ácido ascórbico. Estos sensores tiene grandes ventajas como que permiten detectar bajas concentraciones de analito midiendo corrientes relativamente altas. Son estables y permiten el reuso. Por otro lado también poseen algunas limitaciones como la dificultad de derivatizar polianilina para lograr sistemas integrados en los que todos los reactivos necesarios estén unidos covalentemente a la superficie del electrodo. Otra limitación importantísima es el hecho de que la polianilina necesita pH ácido para experimentar sus transiciones de estado de oxidación con los consiguientes cambios de conductividad. Esto limita el uso de sensores a base de polianilina a pHs menores que 5. En esta tesis se presentan enfoques que apuntan a resolver estos problemas inherentes a la quimica de la polianilina y de esta manera desarrollar sensores que puedan sobreponerse a estas limitaciones. Se presenta un método de síntesis de un copolímero de anilina y o-aminobencilamina (ABA) que posee un comportamiento rédox y de conductividad muy similar al de la polianilina, pero cuenta con grupos amino disponibles para practicar reacciones químicas que permitan derivatizar el polímero. Se demuestra que la derivatizacíón del copolímero con ferroceno aldehído no cambia demasiado su conductividad. Asimismo se presenta una caracterización fisico química de los diversos copolímeros obtenidos a partir de distintas proporciones de ABA y anilina en una solución por FTIR, XPS y voltametría cíclica. En cuanto al problema del pH, se presenta un método sencillo y rápido que consiste en una reacción en fase heterogénea entre la polianilina y propano sultona pura que da como resultado un derivado de polianilina que posee alrededor del 30 % de los átomos de N sustituidos con un grupo propilsulfonato (PSPANI). Este polímero posee una conductividad 3 órdenes de magnitud mayor que la polianilina a pH neutro. Finalmente, se desarrolló un sensor a base de PSPANI que permitió detectar concetraciones de H202 tan bajas como 10 μM. Por último, se analizan los alcances de este nuevo copolímero para la determinación de otros analitos.

Abstract:
Conductive polymers are wider used for different applications. Among them, manufacture of chemical sensors stands out. Many sensors using polyaniline have been developed for the detection of several molecules like NADH, H202, glucose and ascorbic acid. These sensors have great advantages like allowing the detection of low concentrations of analyte measuring relativer high currents. They are stable and they allow reuse. On the other hand also they have some limitations like the difficulty of derivatizing polyaniline to obtain integrated systems in which all the necessary reagents are covalently bound to the surface of the electrode. Another important limitation is the fact that polyaniline needs acid pH to yield its transitions of oxidation state with the consequent changes of conductivity. This limits the use of sensors based on polyaniline to pHs lower than 5. In this thesis approaches that aim to solve these problems, which are inherent to the chemistry of the polyaniline, are presented. Ways to develop sensors that can overtake these limitations are reported. A method for the synthesis of a copolymer of aniline and o-aminobenzylamine (ABA) is reported. This copolymer, named poly(ABAaniline) has a redox behavior and a conductivity which are very similar those of polyaniline, but contains amino groups available for chemical reactions of derivatization of the polymer. It is demonstrated that derivatization of the copolymer with ferrocene aldehyde does not change much its conductivity. Also a physicochemical characterization of diverse copolymers obtained from different proportions of ABA and aniline in a solution by FTIR, XPS and cyclical voltametry is presented. Concerning the problem of pH, a simple and fast method for substituting around a 30 % of N atoms with a propylsulfonate group is reported. It consists of a reaction in heterogenous phase between the polyaniline and neat propane sultone that yields the polyaniline derivative (PSPANI). This polymer has a conductivity which is 3 orders of magnitude greater than the polyaniline at neutral pH. Finally, a sensor with PSPANI was developed that allowed the detection of concetrations of H202 as low as 10 μM. Finally, the potential of this new copolymer for the determination of other analytes is analyzed.

Quirán, Estela Maris. "Revisión sistemática del género Brachymyrmex Mayr (insecta, hymenoptera, formicidae) en la República Argentina" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo es una revisión de las especies argentinas del género Brachymyrmex Mayr 1868. Este género es endémico de la región Neotropical, donde viven unas 30 especies, de las cuales 26 han sido citadas de la Argentina; muestra una ligera penetración en el sur de la Neártica. Fue establecido por Mayr con la única especie B. patagonicus. Santschi (1923) publicó la única revisión sistemática existente hasta la fecha, pero esta contiene muchas ambigüedades en la identificación de las especies. Las sociedades de hormigas de las especies de Brachymyrmex son poco numerosas, con obreras dimórficas (la de pequeño tamaño, llamada 'obrera normal', y la de tamaño mayor, con el gaster distendido, llamada 'obrera fisogástrica’). Construyen sus nidos en el suelo, sin una estructura ni cámaras definidas, debajo de piedras, troncos caídos, entre raíces, ladrillos, y otros objetos. También se incluyen datos sobre bionomía, mapas de distribución, y claves basadas sobre las obreras, sobre las reinas y sobre los machos, esta última basada sobre genitalia, para todas las especies de la Argentina. Para esas claves se adoptaron tres índices: el cefálico-antenal (ICA) que relaciona la longitud cefálica con la del escapo antenal; el cefálico-ocular (ICO), que relaciona la longitud del ojo con el largo cefálico, y el pronotal (IP) que relaciona el ancho con la longitud pronotal. De cada especie se redescriben las castas de las que se dispuso de material (obrera 'normal y/o fisogástrica, reina y macho). Se reconocen dieciocho especies y una subespecie: B. admotus Mayr, B. aphidicola Forel, B. australis Forel, B. brevicornis Emery, B. bruchi Forel, B. coactus Mayr, B. constrictus Santschi, B. cordemoyi Forel, B. fiebrigi Forel, B. gaucho Santschi, B. heeri Forel, B. laevis Emery, B. longicornis Forel, B. brevicornoeides Forel, B. oculatus Santschi, B. patagonicus Mayr, B. physogaster Kusnezov, B. pictus Mayr, y B. giardi cordobensis Santschi. B. heeri var. aphidicola Forel y B. heeri var. fallax Santschi son aquí considerados sinónimos; no presentan los caracteres específicos de B. heeri Forel, y la especie es aquí llamada B. aphidicola Forel status nov. Los siguientes pares de taxiones no presentan caracteres diferenciales relevantes, siendo distinguidos principalmente por el color, carácter no relevante en hormigas; por lo tanto sus nombres son aquí sinonimizados: B. australis Forel y B. australis var. curta Santschi; B. bruchi Forel y B. bruchi var. rufipes Forel; B. cordemoyi Forel y B. cordemoyi var. distincta Santschi; B. contrictus Santschi y B. constríctus var. bonariensis Santschi; B. fiebrigi Forel y B. fiebrigi var. fumida Santschi; B. heeri Forel y B. heeri var. termitophilus Forel; B. longicornis Forel y B. longicornis var. pullus Santschi; B. patagonicus Mayr y B.patagonicus var. atratula Santschi. B. giardi var. cordobensis Santschi se mantiene como una subespecie, pues ni las descripciones originales de la especie y de la variedad, ni los materiales disponibles, permiten definir su situación taxionómica. Se aclara la distribución geográfica de B. laevis Emery, y se cita por primera vez de la Argentina a B. pictus Mayr.

Abstract:
This work is a systematic revision of the species of the genus Brachymyrmex Mayr 1868 (Hymenoptera: Formicidae: Formicinae) from Argentina. The genus is restricted to the Neotropical Region, where live some 30 species, 26 of which have been recorded from Argentina; a few species reach the southern part of the Nearctic Region. The genus was established by Mayr (1868) with the sole species B. patagonicus. Santschi (1923) published the so far only existing systematic revision of the genus, which is very ambiguous as to species identification, and little useful. The societies of the species of Brachymyrmex are small, with dimorphic workers: small ones, called 'normal', and bigger ones, with swollen gaster, called 'physogastric'. They built their nests in the ground, without a defined structure, with little defined Chambers, under stones, fallen trunks, among roots, bricks and other objects. Bionomic data, distributional maps, and identification keys for workers, queens and males, are included for all the species known to occur in Argentina. For the keys three indexes were adopted: a cephalic-antennal index (CAI), relating the cephalic and the antennal scape lengths, a cephalic-ocular index (COI), relating the length of an eye and the head length, and a pronotal index, relating the width and the length of the pronotum. Workers, both normal and/or physogastric, queens and males are redescribed as far as material was available. As a result, eightteen species and one subspecies are recognized in Argentina: B. admotus Mayr, B. aphiadicola Forel, B. australis Forel, B. brevicornis Emery, B. bruchi Forel, B. coactus Mayr, B. constrictus Santschi, B. cordemoyi Forel, B. fiebrigi Forel, B. gaucho Santschi, B. heeri Forel, B. laevis Emery, B. longicornis Forel, B. brevicornoeides Forel, B. oculatus Santschi, B. patagonicus Mayr, B. physogaster Kusnezov, B. pictus Mayr, and B. giardi cordobensis Santschi. B. heeri var. aphidicola Forel and B. heeri var. fallax Santschi are here considered synonyms; they do not show the specific characters of B. heeri Forel, and are here named B. aphidicola Forel new status. The following pairs of taxa show no relevant differential characters, as they were distinguished chiefly by color, a not relevant fate in ants; their names are therefore here synonymized: B. australis Forel and B. australis var. curta Santschi; B. bruchi Forel and B. bruchi var. rufipes Forel; B. cordemoyi Forel and B. cordemoyi var. distincta Santschi; B. contrictus Santschi and B. constrictus var. bonariensis Santschi; B.fiebrigi Forel and B. fiebrigi var. fumida Santschi; B. heeri Forel and B. heeri var. termitophilus Forel; B. longicornis Forel and B. longicornis var. pullus Santschi, and B. patagonicus Mayr and B. patagonicus var. atratula Santschi. B. giardi var. cordobensis Santschi is maintained as a subspecies, since the original descriptions of the species and the variety, and the available materials do not allow to define its taxonomic situation. The geographic distribution of B. laevis Emery is cleared, and B. pictus Mayr, is recorded for the first time from Argentina.

Pérez, Martín Mariano. "Catecolamina - beta alanil ligasa (cbal), enzima clave en el metabolismo de neurotransmisores en los insectos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la presente Tesis se ha estudiado la enzima NBAD-sintetasa, responsable de la síntesis de NBAD, el principal precursor de esclerotización de las cutículas marrones de los insectos. Se la caracterizó en detalle y se estudió su expresión en el ciclo de vida de C. capitata. El aporte principal ha sido, justamente, el estudio en detalle de esta enzima. Anteriormente a esta Tesis, ésta era una enzima prácticamente desconocida. Si bien se había postulado que el NBAD era el principal precursor de esclerotización de las cutículas marrones de los insectos, excepto nuestro laboratorio, nadie había publicado nada sobre la enzima que lo sintetiza. Se determinó la expresión de la NBAD-sintetasa en la metamorfosis. Se la caracterizó y se demostró que la misma posee una amplia especificidad de sustratos. Se demostró por primera vez la actividad de esta enzima en sistema nervioso y respuesta inmune. Se clonó y secuenció por primera vez un mutante melánico de D. melanogaster, carente de esta actividad enzimática. Por su amplía especificidad de sustratos hemos denominado a esta enzima como Catecolamina-B-alanil ligasa (CBAL). Los principales resultados obtenidos son: -Se determinó el patrón de expresión de la enzima en el tejido epidérmico durante el ciclo de vida de C. capítata. La actividad de esta enzima se detectó en momentos muy acotados del ciclo de vida, coincidiendo con los momentos en que los individuos necesitan esclerotizar sus cutículas. Esta actividad es dependiente de la hormona de la muda 20-OH-ecdisona. La actividad está ausente en el tegumento de las larvas, pues las mismas son de cutícula blanda y no sufren el proceso de esclerotización. El primer momento durante el ciclo de vida en que se detectó la actividad fue en las prepupas cuando se forma el pupario. Luego de varias horas la actividad fue indetectable hasta el estadío de adulto farado donde se volvió a registrar la actividad extendiéndose ésta hasta la emergencia del adulto. -Se descubrió y se dosó por primera vez in vitro la actividad NBAD-sintetasa en tejido nervioso. Se estudió el patrón de expresión y se determinó que la actividad en este tejido es constante a lo largo del ciclo de vida. Incluso se detectó actividad en el “cerebro” de las larvas, hecho significativo puesto que en este estadío nunca se detectó esta actividad en la epidermis. En adultos se demostró que la actividad en el sistema nervioso permanece constante durante todo el estadío, mientras que en la epidermis, luego de las primeras 48 horas, cuando ya ha finalizado el proceso de la esclerotización, no se detecta más la actividad. - Por primera vez se observó que la NBAD-sintetasa participa en la respuesta inmune innata de los insectos. Esta actividad se manifiesta solamente cuando los individuos son invadidos por un patógeno o cuando se produce una injuria en la cutícula. También se determinó la función antibacteriana del NBAD. - Se caracterizaron las diferentes actividades enzimáticas y se concluyó que todas corresponderían a una misma enzima. La misma mostró una amplia especificidad de sustrato, siendo capaz de conjugar β-alanina con catecolaminas, indolaminas e imidoaminas. Por primera vez se logró sintetizar in vitro: NBANE, NBAOA; NBATA, NBASHT, NBAHA (carcinina) y NBATyr (sarcofagina). Debido a la amplia especificidad de sustrato que mostró, hemos denominado a esta enzima como “Catecolamina-β-alanil ligasa” (CBAL). - Se estudiaron los mutantes melánicos niger de C. capitata y ebony de D. melanogaster. Se determinó que ambos mutantes son homólogos; los dos carecen de la actividad NBAD-sintetasa en epidermis (esclerotización y respuesta inmune) y en sistema nervioso. Ambos mutantes muestran deficiencias en el comportamiento. El estudio de los mutantes demostró que las proteínas responsables de las actividades enzimáticas corresponden a un único gen. - Se clonó y secuenció el gen ebony de D. melanogaster en la cepa salvaje y el mutante e4. Se demostró, mediante Northern blots, que el ARNm del mutante es de menor tamaño que el de la cepa salvaje. Luego se secuenció y se comprobó que el gen del mutante posee una deleción de 447 pb en el primer exón. Además se observó que en el sitio de la deleción se insertaron 15 nucleótidos pertenecientes a una secuencia extraña, la cual fue analizada y arrojó homología con una secuencia perteneciente a un gen de baculovirus. Se analizó, además, la región promotora y se encontraron secuencias de reconocimiento para genes que responden a 20-OH-ecdisona, factores de transcripción que actúan en tejido epidérmico, tejido nervioso o en la respuesta inmune. - Se comenzó a estudiar preliminarmente la enzima NBAD-hidrolasa. La misma mostró un patrón de expresión diferente a la sintetasa. La expresión de esta enzima se registró durante todo el ciclo de vida. También se observó que se expresa en tejido nervioso. Esta enzima también mostró una amplia especificidad de sustrato, siendo capaz de hidrolizar los diferentes productos que sintetiza la NBAD-sintetasa. Los resultados obtenidos han permitido poner en evidencia la actividad de la enzima CBAL durante el ciclo de vida de C. capitata y los procesos fisiológicos en los que interviene, claves en la evolución de los insectos. También se abrió un nuevo panorama en el estudio del metabolismo de aminas biogénicas y se aportó información para conocer el metabolismo de β-alanina en insectos.

Abstract:
In the present Thesis it has been studied the enzyme NBAD-synthase, responsible for the syntesis of NBAD the main precursor for tanning and sclerotization the insect brown cuticles. This enzyme has been characterized and was studied its expression profile in the C. capitata life cycle. The principal contribution has been the detailed study of this enzyme. Before this Thesis, it was an almost unknown enzyme. It has been postulated that the NBAD is the main precursor for the sclerotization of insect brown cuticles, but except our laboratory, nobody has published anything about the synthesizing enzyme. It has been determined the expression profile of the enzyme during C. capitata metamorphosis. It has been observed that this enzyme showed a wide substrate specificity. For the fisrt time it has been demonstrated the activity of this enzyme in nervous tissue and in innate immune response. It has been cloned and sequenced for the first time a Drosophila melanogaster melanic mutant, lacking the NBAD-synthase activity. Due to its wide substrate specificity we proposed identify it as Catecholamine B-alanyl-ligase (CBAL). The main obtained result are: - It has been determined the expression profile of the enzyme in the epidermal tissue during the life cycle of C. capitata. The activity of this enzyme has been detected in narrow developmental windows in differents stages during the life cycle. All those developmental windows where the enzyme was expressed were in coincidence with the momment when the fly must sclerotize its cuticle. This activity is absent in the larval integument, this is because they are maggots with soft cuticle and it never suffer the sclerotization process. The first time when this activity has been observed was in the prepupa, during puparium formation. After several hours the activity disappeared until the pharate adult stage when it was evident again and remained until the imago emergence. - It has been discovered and determined for the first time the activity of this enzyme in the nervous system of insects and we showed that this activity is expressed constitutively during the whole life cycle. Indeed the activity was measured in the larval brain, this is striking because the activity is absent from the epidermal tissue. It has been shown that in the adult stage while the epidermal activity drops to undetectable levels, after the first 48 hours, when the sclerotization process had finished, in nervous tissue it kept on constant. - It was observed for the first time that NBAD-synthase is activated during the immune response in insects. The NBAD-synthase is activated only when the insect is infected by a microorganism. It has been also demonstrated the antibacterial activity of NBAD. - It has been characterized the different enzymatic activities and it was observed that all of them belong to the same enzyme. This enzyme showed a wide substrate specificity, being capable of synthesize different β-alanyl derivatives of catecholamines, phenolamines, indolamines and imidoamines. It has been synthesized, for the first time in vitro: NBANE, NBAOA, NBATA, NBASHT, NBAHA (carcinine) and NBATyr (sarcophagine). Due to its broad substrate specificity we proposed identify it as Catecholamine β-alanyl ligase (CBAL). - It has been studied the melanic mutants niger of C. capitata and ebony of D. melanogaster. It has been shown that both mutant are homologous, this two mutants lack the NBAD-synthase activity in the integument (sclerotization and immune response) and in the nervous tissue. These both mutants also have behavioural anomalies. The studies carried out on these mutants demonstrated that the responsible enzymatic activities are codified by an unique gene. - It has been cloning and sequenced the ebony gene from D. melanogaster wild type and ebony4 (e4) strains. By Northern blot assays has been observed that the mutant mRNA is smaller than the wild type one. Thereafter by sequencing it has been demonstrated that the mutant gene has a 447 bp deletion in its first exon. Moreover it has been observed in the deletion site 15 exogenous nucleotides inserted, and it sequence showed great similarity with a baculovirus gene. It has been studied the expression pattern in the D. melanogaster life cycle. Using a computational program it has been analized the promoter region of this gene and it has been observed the presence of sequences for different transcription factor recognition sites, such as those that respond to 20-OH ecdysone, transcription factor that are expressed in epidermal or nervous tissue and those that modulate the immune response. - Preliminary it has begun to be studied the enzyme NBAD-hydrolase. This enzyme showed an expression pattern different for that of NBAD-synthase. The expression of the former has been detected during the whole life cycle of C. capitata. As it occurs with the NBAD-synthase, the NBAD-hydrolase is also expressed in nervous system and is capable to hydrolisate the alternative products synthesized by the NBAD-synthase. All these results has allowed to show the activity of CBAL during the whole life cycle of C. capitata and the physiological process where it participates, very important during the evolution of insects. A new subjet in the study of metabolism of biogenic amines has been opened and it has been given a new information on the metabolism of β-alanine in insects.

Possia, Norma E.. "Estudio de los ciclones explosivos sobre la región sur de Sudamérica" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En base a los análisis del European Centre for Medium Range Weather Forecast, en esta tesis se encara el estudio de la formación y desarrollo de los sistemas ciclónicos explosivos a través de dos situaciones particulares. Una de ellas es un ciclón marítimo, debido a que estos son los más frecuentes y la segunda situación es un ciclón terrestre ya que son los que provocan mayores perjuicios económicos. En la misma se analizan los procesos responsables de la génesis y la estructura de estos sistemas a través de la evaluación de las ecuaciones del sistema hidrodinámico que rige el movimiento atmosférico. En el caso continental se incluye además, un análisis de las componentes ageostróficas. Finalmente, como no hay una climatología de este fenómeno en la región, se identifican los casos ocurridos en el período 1979 - 1993 y se analiza su ubicación espacial y temporal. La definición elegida para este estudio es la propuesta por Sanders y Gyakum. En 1980 estos autores definieron los ciclones explosivos o bombas como aquellos sistemas donde la caída de presión a nivel del mar es de un bergeron (24 hPa en 24 horas). Como el descenso de presión no tiene el mismo impacto en cualquier latitud, estos autores modularon a este valor multiplicándolo por un factor que combina la latitud media donde se desarrolla explosivamente el ciclón y los 60º. Aunque los ciclones que sufren un período de rápido desarrollo parecen tener características comunes, no hay acuerdo si existe un único factor detonante de tal desarrollo y cual es ese factor. lncluso hay trabajos que señalan que en distintas regiones geográficas difieren las causa dinámicas que las producen. Por otro lado, el estudio de casos particulares muestra que hay distintos procesos que las pueden producir. A pesar de que este tipo de evento ha sido ampliamente estudiado en el hemisferio norte, en la región sudamericana la situación no es la misma. Debido a la escasez de trabajos que estudian las ciclogénesis explosivas en el hemisferio sur, surge el poco conocimiento que se tiene de los distintos mecanismos que puedan favorecer la generación y el desarrollo de este fenómeno en la región sur de Sudamérica. Como señalan Gan y Rao (1996), es necesario realizar investigaciones sobre casos particulares para delinear los procesos intervinientes. Las dos situaciones estudiadas tienen características comunes. Ambos sistemas comienzan como un ciclón baroclínico, con advección de vorticidad ciclónica y divergencia en altura actuando sobre una zona baroclínica en capas bajas. Los ciclones explosivos estudiados presentan fuerte divergencia en niveles altos combinada con una masa de aire cálido y húmedo capas bajas. Esta masa de aire asociada con las velocidades verticales ascendentes muy intensas producen gran liberación de calor por condensación. Esto trae como consecuencia que ambos ciclones tengan un centro caliente. En las situaciones estudiadas este calor liberado aparece como el principal responsable del desarrollo explosivo. Las componentes ageostróficas presentan valores del mismo orden de magnitud que el viento mismo. Esto indica que en estos casos actuaron procesos de escala subsinóptica. En el caso continental cuando se divide a las componentes ageostróficas según sus efectos físicos se encuentra que en la divergencia en niveles altos actúan todas las fuentes de ageostrofismo. En cambio, niveles bajos la convergencia se debe principalmente a las variaciones temporales del viento. La componente de advección vertical del viento interviene en la verticalización del sistema y colabora en su desplazamiento. En la serie de los 15 años de reanálisis de Centro Europeo se encontraron 200 ciclones explosivos al sudeste de Sudamérica, de los cuales solo el 3 % se desarrolló sobre el continente. Son más frecuentes en invierno y su posición migra con las estaciones durante el año.

Abstract:
Based on the analyses of the European Centre for Medium Range Weather Forecast, this thesis studies the formation and development of explosive cyclonic systems in two specific cases. One is a sea cyclone, being the most frequent type and the other is a land cyclone, since these cause the greatest economic losses. The processes responsible for the genesis and structure of these systems are studied analyzing the hydrodynamic system equations that govern atmospheric movement. The ageostrophic components of the land case are also analyzed. Finally, there being no climatology of this phenomenon in the region, the events occurred which occurred between 1979 and 1993 are identified and their temporal and spatial location is analyzed. The methodology selected in this study is the one proposed by Sanders and Gyakum, who in 1980 defined explosive cyclones or bombs as one bergeron (24 hPa/ 24 hours) sea level pressure drops. As the impact of pressure drops depends on latitude, these authors modulated this value by multiplying it by a factor that combines the mean latitude where the cyclone develops explosively and 60º. Although rapidly developing cyclones seem to have common characteristics, there is no agreement on whether there is only one triggering factor and what such factor is. Some studies state that the dynamic causes differ depending on the geographic regions. Studies on specific cases show that different processes can generate such cyclones. This kind of events has been widely studied in the Northern Hemisphere, not so in South America. Because explosive cyclogenesis studies in the southern hemisphere are scarce, the different mechanisms that can favor the formation and development of this phenomenon in southern South America are barely known. According to Gan and Rao (1996), specific case studies are necessary in order to determine the processes involved. The cases analyzed have common features. Both systems start with a baroclinic cyclone with cyclonic vorticity advection and divergence at upper levels, which act over a lower level baroclinic zone. The explosive cyclones studied present strong upper level divergence combined with a warm, moist air mass at low levels. This air mass associated to very rapid ascending vertical velocities produces great heat release due to condensation. Consequently, both cyclones have warm center. In the situations studied, released heat appears to be the major cause of explosive development. Values of ageostrophic components have the same order of magnitude as the wind. This indicates that subsynoptic-scale processes took part in these events. When breaking the land case into ageostrophic components according to their physical effects, all ageostrophy sources are found to be acting in the upper level divergence. At low levels, convergence is mainly due to temporal wind variations. The vertical advection component of wind takes part in the vertical positioning of the system and contributes to its displacement. In the 15-year reanalysis series of the European Center, 200 explosive cyclones were found, only 3 % of which took place over the continent. They are more frequent in winter and their location changes with the seasons along the year.

Piccinali, Romina V.. "El papel de la selección natural y la demografía histórica sobre la variabilidad nucleotídica de los genes Xdh (Xantín deshidrogenasa) y alfaEst-5 (alfa esterasa 5) en Drosophila buzzatii y D. koepferae" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis, estudiamos los patrones de variabilidad nucleotídica de los genes Xdh (Xantín deshidrogenasa) y α-Est-5 (Alfa esterasa 5) en Drosophila buzzatii y D. koepferae, e investigamos si los mismos son compatibles con modelos de evolución neutra o adaptativa. Para ello analizamos mediante diversas pruebas estadísticas un fragmento de cada gen en muestras poblacionales de D. buzzatii y D. koepferae de Argentina, pertenecientes al área de origen de estas especies, y en muestras de D. buzzatii de Australia, un área de colonización reciente. Nuestros resultados muestran que: l) las diferencias en los niveles de polimorfismo entre genes y entre especies serían el resultado de diferencias en el ambiente recombinacional, probablemente debido al ligamiento diferencial de ambos loci con los polimorfismos de inversión del cromosoma 2; 2) las inversiones de D. buzzatii exhiben ciena diferenciación a nivel de la secuencia de nucleótidos de αEst-5; 3) existen polimorfismos compartidos entre especies en el gen Xdh los cuales podrian ser el resultado de eventos de introgresión más o menos recientes; 4) los alelos electroforéticos de Xdh detectados en estudios previos son clases heterogéneas resultantes de fenómenos de convergencia de carga, mientras que en los alelos electroforéticos de αEs1-5 tendrían un origen histórico común; 5) en D. koepferae ambos genes muestran patrones de estructuración poblacional concordantes con las Regiones Fitogeográficas de Argentina, que contrastan con la ausencia de estructura en D. buzzatii. Estas diferencias podrían estar relacionadas con las características ecológicas y la distribución histórica de los cactus a los que cada especie se encuentra asociada en la naturaleza; 6) ha existido un efecto fundador moderado en D. buzzatii asociado a la colonización de Australia; 7) existen excesos de mutaciones únicas en D. buzzatii, respecto de lo esperado bajo neutralidad selectiva en ambos genes, que sugieren que esta especie habría experimentado una expansión reciente en su área de origen; 8) existe un exceso de polimorfismos no sinónimos en el gen α-EsI-5 de D. buzzatii tanto en las muestras de la Argentina como de Australia, el cual probablemente se deba a la acción de selección natural episódica; 9) por el contrario. D. koepferae es una especie cuyas poblaciones están en aparente equilibrio deriva-mutación.

Abstract:
In this thesis we analyze patterns of nucleotide variatíon in the Xdh (Xanthine dehydrogenase) and α-Est-5 (alpha esterase 5) genes of the cactophilic Drosophila buzzatii and D. koepferae, and investigate whether these patterns are in agreement with expectations of models of neutral or adaptative evolution. We applied several statistical tests to natural population samples of D. buzzalii y D. koepferae from the native area and to samples of Australian populations of D. buzzarii, a recently colonized area. Our results show that: l) the disparities in the levels of nucleotide polymorphism between genes and species could be explained by differences in the recombinational environment to which each gene is exposed, and this environment is probably influenced by the differential distribution of polymorphic inversions along the second chromosome of both species; 2) paracentric polymorphic inversions in D. buzzatii exhibit certain degree of differentiation for the αEst-5 gene region; 3) the presence of shared polymorphisms between species in the Xdh locus can be the result of introgression events; 4) the electrophoretic alleles of Xdh are heterogeneous classes that share a similar electrophoretic mobility due to charge convergence, whereas some alleles of αEst-5 alleles appear as monophyletic; 5) patterns of population in D. koepferae are coincident with Argentinían Phytogeographical Regions for both genes and contrast with the absence of population structure in its sibling D. buzzatii. DifTerences in population structure can be due to ecological and historical differences in the distribution of cactus hosts to which each species is mainly associated; 6) there are evidences of a moderate founder effect in D. buzzatii during the colonization of Australia; 7) there is an excess of singletons in D. buzzatii, that suggests a recent population expansion of this species in its original area; 8) there is an excess of non synonymous polymorphisms in the αEst-5 gene of D. buzzatii that can be accounted for by episodic selection; 9) D. koepferae populations seem to be in equilibrium genetic drift-mutation.

Perotti, Christian Pablo. "Terapia fotodinámica a partir de ALA: acerca de estrategias para aumentar su eficacia y selectividad" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Pazos, Adriana Alejandra. "Caracterización de un sustituto de piel humana a base de dermis porcina" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las lesiones cutáneas que abarcan una gran superficie de la piel, requieren el recubrimiento inmediato de la zona afectada para reducir riesgos se sepsis y facilitar la regenración tisular. Entre los múltiples procedimientos terapéuticos aplicados en el tratamiento de estas lesiones, los injertos de piel proveen un medio adecuado y seguro para la regeneración tisular. En esta tesis se estudió un sustituto de piel humana a base de dermis porcina utilizado para ese fin terapéutico, el cual essometidopara su comercialización a un tratamiento industrial que incluye liofilizacipon. El objetivo de la tesis, consistió en la caracterización de este producto comercial, su comparación con la dermis fresca original, y la descripción de ciertos aspectos de su actividad biológica. El análisis consistió en desarrollar la metodología adecuada para el aislamiento y cuantificación de los componentes de importancia biológica. Estos fueron los colágenos del tipo I y III, las proteínas fibronectina y laminina, y los proteoglicanos de ácido hialurónico, keratán sulfato, dermatán sulfato y condroitín sulfatos A y C. Los resultados se esta etapa sugieren que el tratamiento industrial aplicado para su comercialización, no los modificó de manera importante, ya que no hubo alteraciones cuali-cuantitativas relevantes. Además, el análisis de su actividad biológica en un " modelo de cultivo in vitro" de fibroblastos humanos, mostró que la dermis induce un aumento de la proliferación celular. Por lo tanto, este sustituto dérmico puede considerarse una excelente herramienta para el tratamiento de pacientes con heridas cutáneas extensas.

Abstract:
Extended skin damage requires immediate covering of the wounded area in order to avoid sepsis and to facilitate tissue regeneration. There are multiple approaches to treat these injuries, however skin graft is one of the most suitable and safe measures to accomplish this issue. In the present thesis, it was examined a human skin substitute based on porcine dermis used for this kind of treatments, which was previously submitted to an industrial treatment that includes dried-freeze. The objective of this was, characterization of the product, later comparison to the original fresh tissue, and description of certain aspects of this biological activity. The analysis was focused on the development of an appropriate methodology to isolate and quantify those components considered of biological interest. These compounds were collagen types I and III, fibronectin, laminin, and hyaluronic acid, keratan sulphate, dermatan sulphate, and chondroitin sulphates A and C-containing proteoglycans. The results of this step suggest that the industrial treatment applied to the dermis for marketing purposes did not modify greatly the product, since there were no relevant qualitative and quantitative alterations. Besides, the biological activity analysis performed in an "in vitro culture model" of human fibroblasts showed that the dermis induces an increment of cellular proliferation and DNA synthesis, and a consequent shorten of cell cycle. Therefore, the studied dermal substitute could be considered as an excellent tool for the treatment of patients with extended skin injuries.

Patriarca, Andrea. "Factores que influyen en la coproducción de aflatoxinas y ácido ciclopiazónico en maní por aspergillus sección flavi" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió la distribución de cepas de Aspergillus sección Flavi en 57 muestras de maní provenientes de la zona núcleo manisera de la provincia de Córdoba, Argentina. Se encontraron cepas de A. flavus y/o A. parasiticus en el 74% de las muestras analizadas. A. nomius, una especie relativamente poco frecuente en la naturaleza, no fue aislada de ninguna muestra. En base a estos resultados, se puede afirmar que las cepas de A.flavus y A. parasiticus están ampliamente distribuidas en la zona manisera de la provincia de Córdoba. Se evaluó la capacidad toxicogénica de las cepas aisladas de maní y se encontró que el 89% de las cepas de A. parasiticus eran aflatoxigénicas, y que el 76% de las cepas de A. flavus producían aflatoxinas y el 90% eran productoras de ácido ciclopiazónico (CPA), mientras que el 69% de las mismas eran productoras simultáneamente de ambas micotoxínas. Además se hallaron cinco cepas de A. flavus con características atípicas, productoras de aflatoxinas del grupo B y G en conjunción con CPA. Estudios a nivel molecular están siendo llevados a cabo por otros autores a fin de determinar si se trata de una nueva especie. Este trabajo es el primer informe de la presencia de estas cepas en cultivos de nuestro país. Se desarrolló un método analítico para la determinación de CPA en maní con adecuados atributos de desempeño analítico (recuperación 95%; RSDr variable entre 5,1% y 9,8% según el nivel de contaminación en el rango de 100 a 500 μg/kg; límite de detección 45 μg/kg). Se investigó la co-ocurrencia natural de aflatoxinas y CPA en maní en 50 muestras provenientes de la provincia de Córdoba. La co-ocurrencia de ambas micotoxinas fue hallada en 2 de las muestras. Si bien la proporción de muestras contaminadas fue relativamente baja, los niveles de contaminación fueron elevados (hasta 1250 μg/kg de aflatoxinas totales y 4300 μg/kg de CPA). Este es el primer informe de co-ocurrencia de aflatoxinas y ácido ciclopiazónico en maní cultivado en nuestro pais. Se estudió la influencia de la actividad de agua (aw), la temperatura y el tiempo sobre la co-producción de dos micotoxinas importantes en relación a la contaminación potencial del maní: las aflatoxinas y el ácido ciclopiazónico (CPA), ambas producidas por A.flavus. Se observó que la cantidad producida de ambas toxinas fue determinada por la compleja interacción de aw, temperatura y tiempo de incubación. El mayor nivel de CPA se produjo a aw0,94 y 25°C luego de 28 días de incubación, en tanto que aw0,86 puede ser considerada limitante para la producción de esta toxina en maní. La producción de ambas toxinas mostró una respuesta diferente a las condiciones estudiadas. Las condiciones de máxima acumulación de ambas micotoxinas es opuesta, es decir, en las condiciones óptimas para la producción de CPA, la acumulación de AFB1 es poco significativa y viceversa. La capacidad de responder de manera diferente a factores ambientales en relación a la biosíntesis de metabolitos secundarios tóxicos puede ayudar a la supervivencia del hongo en un nicho ecológico particular, permitiéndole colonizar el sustrato más eficientemente que otros competidores.

Abstract:
The distribution of Aspergillus section Flavi strains in 57 peanut samples from the peanut-growing area in the province of Córdoba, Argentina, was studied. Strains of A. flavus and/or A. parasiticus have been isolated in 74% of analyzed samples. A. nomius, a species relatively infrequent in nature, was not isolated. According to these results, it can be stated that A.flavus and A. parasiticus are widely distributed in the peanut-growing area of Córdoba. Mycotoxin potential of the strains was evaluated and it was found that 89% of A. parasiticus strains were aflatoxigenic, and that 76% of A. flavus strains produced aflatoxins and 90% were cyclopiazonic acid (CPA) producers, while 90% simultaneously produced both toxins. Additionally, five A.flavus strains with atypical characteristics, producing group B and G aflatoxins in conjunction with CPA, were found. Molecular studies are being carried out by other authors to establish if these strains belong to a new species. This is the first report of the presence of these strains in crops in our country. An analytical method was developed for determination of CPA in peanut, with adequate analytical performance (recovery 95%; RSDr variable from 5,1% and 9,8% according to contamination level in the range of 100-500 µg/kg; detection limit 45 µs/kg) The natural co-occurrence of aflatoxins and CPA in peanut was investigated in 50 samples from the province of Córdoba. The co-occurrence of both mycotoxins was found in 2 samples. Although the proportion of contaminated simples was relatively low, contamination levels were high (until 1250 µg/kg of total aflatoxins and 4300 µg/kg of CPA). This is the first report of co-occurrence of aflatoxins and cyclopiazonic acid in peanut cultivated in our country. The influence of water activity (aw),temperature and time on the co-production of two important mycotoxins related to potential peanut contamination was studied: aflatoxins and cyclopiazonic acid (CPA), both produced by A.flavus. It was observed that the quantity of both toxins produced was determined by the complex interaction between aw, temperature and incubation time. The highest level of CPA was produced at aw 0.94 and 25°C alter 28 days of incubation, while aw 0.86 can be considered limitant for the production of this toxin on peanut. The production of both toxins showed a different response to the studied conditions. Maximum accumulation conditions for both mycotoxins are opposite. At optimal conditions for CPA production, AFBl accumulation is less than significant and vice versa. The ability to respond in a different way to environmental factors in relation to the biosynthesis of toxic secondary metabolites may aid survival of the fungus in a particular ecologica] niche allowing it to colonize the substrate more efficiently than other competitors.

Palermo, Ana María. "Estudio del efecto genotóxico de alcoholes alifáticos de amplio uso aplicando el modelo de Drosophila melanogaster" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio del efecto genotóxico de agentes xenobióticos se ha centrado tradicionalmente en la detección de daños que involucran al DNA y a los cromosomas entre los posibles blancos de ataque. En la actualidad la evaluación de un compuesto en cuanto a su acción deletérea sobre el genoma, debería incluir un análisis del efecto sobre la segregación cromosómica, ya que los blancos de acción pueden ser diferentes del ADN. El interes se debe al gran impacto de las aneuploidías en patología humana y a la creciente exposición a compuestos con capacidad potencial para actuar como aneugenos. La exposición a un agente que no afecta al ADN, no puede considerarse segura desde el punto de vista genético hasta tanto no sea evaluado su efecto aneugénico. En humanos, las aneuploidías en la línea germinal son frecuentes y tienen graves consecuencias, se considera que son causa del 5 al 7% de las muertes en niños y del 35% de los abortos espontáneos. Los individuos que sobreviven con números cromosómicos normales presentan severas discapacidades físicas y/o mentales. En las células somáticas las aneuploidías también juegan un papel importante, ya que existem evidencias crrecientes de que pueden ser determinantes en las etapas tempranas y/o tardías de los procesos de transformación celular y carcinogénesis, debido a la pérdida de heterocigosis. En esta misma línea están las pruebas de mutación y recombinación somatica (SMART, Somatic Mutation and Recombination Tests), un conjunto de ensayos capaces de identificar agentes mutagénicos o recombinagénicos potencialmente inductores de pérdida de heterocigosis. En este trabajo de Tesis se caracterisó el posible efecto mutagénico, recombinagénico y aneugénico en línea somática y germinal de Drosophila melanogaster producido por exposición a alcoholes alifáticos de cadena corta: etanol (EtOH), isopropanol (IPA) y metanol(MetOH). El conocimiento de los efectos genéticos de estos alcoholes es escaso o contradictorio y su metabolismo es muy semejante en humanos y en drosophila, siendo este organismo una excelente modelo de estudio para la evaluación de la toxicidad, genotoxicidad y teratogénicidad in vivo de alcoholes alifáticos de amplio uso. Con este objetivo se realizaron tratamientos agudos por vía inhalatoria, con los alcoholes (EtOH, IPA, MetOH) y sus primarios (acetaldehido=AAld, acetona=AcetO, formaldehído=FAld). Cuando se quiso evaluar el efecto de tratamientos crónicos las larvas fueron criadas en medio con el compuesto. Los resultados obtenidos indican que los tres alcoholes, EtOH, IPA y MetOH exhiben toxicidad y genotoxicidad diferencial en drosophila en las condiciones experimentales aplicadas. El grado de toxicidad demostrado en orden decreciente es: MetOH, EtOH e IPA. Los tres alcoholes presentan toxicidad reproductiva, disminuyendo la fertilidad de las hembras tratadas. El EtOH demostró afectar el desarrollo de larvas de Drosophila e inducir malformaciones congénitas. La genotoxicidad de los alcoholes alifáticos de cadena corta se manifiesta por su capacidad de inducción de no disyunción (ND) cromosómica. El grado de inducción de ND en orden decreciente es: IPA,EtOH y MetOH, guardando una relación inversa con la toxicidad. El MetOH actuaría como aneugeno indirecto, ya que su metabolismo, el FAld, es más genotóxico que el alcohol mismo. El EtOH y el IPA son aneugenos directos y sus respectivos metabolitos, el AAld y la AcetO, no afectan de manera significativa la disyunción cromosómica o muestran un efecto comparativamente menor que el de sus alcoholes de origen. En la línea germinal, los oocitos que están en las etapas más tardías de la diferenciación son los más afectados por los tratamientos con estos alcoholes. En la línea somática el efecto no es concluyente. Drosophila melanogaster es el modelo biológico de la elección para monitorear el daño inducido por alcoholes, permitiendo la extrapolación a otros organismos superiores en general y al hombre en particular.

Abstract:
The study of genotoxic effects of xenobiotics has been traditionally focused on DNA and chromosome damage. Nowadays, any evaluation of deleterious consequences exerted by any agent on the genome should necessary include the analysis of chromosome segregation, since the target of xenobiotics may be different from DNA itself. The study of aneuploidy is of interest due to its great impact on human health and the abundance of environmental agents with the capacity of acting as potential aneugenes. Exposition to a certain compound that has proved harmless regarding segregation has been discarded. In humans aneuploidy is quite common and has serious consequences. It may be the cause of around 5-7% infant deaths and it has been detected in 35% of all spontaneous abortions. Moreover, surviving individuals with abnormal chromosome sets are physically and/or mentally hadicape. The occurrence of aneuploidy in somatic cells is also of great interest since it may play a critical role in cell transformation and carcinogenesis, due to the loss of heterocigosity that may be induced. Somatic Mutation and Recombination Test (SMART) are also very useful to identify mutagenic and/or recombinagenic agents that result in the expression of recessive genes, wich may be involved in early and/or late steps in cancer development. The aim of the present Thesis was to characterize the potential mutagenic, recombinagenic and/or aneugenic effect of three short chain aliphatic alcohols, ethanol (EtOH), isopropanol (IPA) and methanol (MetOH), on somatic and germinal cells line in Drosophila melanogaster. The Knowledge about genetic consequences of the exposition to these alcohols in scarce or contradictory. Alcohol metabolism is similar in humans and Drosophila, thus this eukaryote has become a useful model in the in vivo evaluation of toxicicity, genotoxicicity and teratogenicity of the above mentioned aliphatic alcohols. Acute inhalation treatments with EtOH, IPA and MetOH, and with the corresponding primary metabolites, acetaldehyde (AAld), acetone (AcetO) and formaldehyde (FAld) were performed. To evaluate the consequence of chronic treatments, the compounds were added to the larva growth media. The results obtained show that all three alcohols, EtOH, IPA and MetOH exhibit differential toxicicity and genotoxicicity in Drosophila. The toxicicity of the alcohols in decrescent order is: MetOH, EtOH e IPA. All three alcohols show reproductive toxicicity, because fertitlity in treated females is lower than controls. Besides, EtOH exhibited developmental toxicicity in Drosophila larvae and induction of congenital malformations. Short chain aliphatic alcohols genotoxicity is expressed as a significant increase in chromosomal non-disjunction (ND) rates. The degree of induction of ND is inverse relative to the toxicity, thus IPA treated series show the highest level of ND in the progeny, being EtOH and MetOH less aneugemic. The MetOH is probably an indirect aneugenic agent, since the FAld is more active as genotoxic than the alcohol itself. The other two alcohols, EtOH and IPA act as direct mutagens in the induction of aneuploidy, and their metabolites, AAld and AcetO, do not effect chromosomal disjunction or show a comparatively lower effect than the alcohol from which they derive. In germ cells, mature oocytes are sensible to the drug treatments while less mature stages are not. The effects exerted by alcohols in somatic cells are inconclusive. Drosophila melanogaster has proven to be a useful biological model to monitor genetic damage induced by short chain aliphatic alcohols, because the results can be extrapolated to other organism including man.

Pacheco Tobín, Juan Manuel. "Virus emergentes : Especificidad de especie de los topotipos Catay y panasiático del virus de la fiebre aftosa. Rol de las proteínas no estructurales 3A y 3B." (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus de la fiebre aftosa pertenece a la familia Picornaviridae y es el agente causal de una enfermedad altamente contagiosa y de gran importancia económica, que afecta a los animales de pezuña hendida. Algunos de los aislamientos pertenecientes al serotipo O originarios de Asia fueron clasidicados en tres topotípos, el topotipo Catay ( con una deleción en los aminoácidos 93-102 de la proteína 3A) y el topotipo Sudeste Asiático (con deleción en los aminoácidos 133-143 de la proteína 3A) y el topotipo Panasiático (sin deleción). Con algunos de estos aislamientos se contruyeron virus quimeras con las diferentes formas de 3A descriptas e inclusive virus con una deleción aún mayor, entre los aminoácidos 63-144. Se construyeron tambipen virus quimeras con una sola proteína 3B. Tanto los aislamientos naturales como los virus quimeras fueron evaluados in vitro, en células derivadas de bovino y porcino, e in vivo, en porcinos. Estudios de efectividad en células y en porcinos, así como estudios en virulencia, patogenia y transmisibilidad en porcino nos permiten concluir que los virus pertenecientes al topotico Catay, aunque atenuados para el bovino, son altamente virulentos para el procino y prodijeron una enfermedad aguda y sincrónica, de transmición rápida y efectiva. Mientras que los virus pertenecintes al topotipo Panasiático mostraron similar replicación en ambos tipos celulares, su comportamiento in vivo fue más heterogéneo, no fueron tan virulentos y produjeron una enfermedad más atenuada. Los virus con una sola proteína 3B mostraron una inefectividad reducida en células de porcino y nula en células de bovino, mientras que prodijeron una enfermedad suave en porcino.

Abstract:
Foot-and-mouth disease virus is a number of the Picornaviridae family, is the casual agent of a highly contagious and economically important disease of cloven-hoofed animals. Some of the isolates obtained from Asia that belong to a serotype 0 were classified in three topotypes: Cathay (with a deletion in protein 3A in aminoacids 93-102), Southeast Asia (with a deletion in protein 3A in aminoacids 133-143) and PanAsia (non-deleted). With some of this isolates, genetically engineered viruses were constructed with the different forms of 3A and with an even larger deletion, in between aminoacids 93-144 of 3A. Viruses with only one single 3B protein were also recovered. All the isolates as well as genetically engineered viruses were evaluated in vitro, in bovine and porcine derived cells, and in vivo, in swine. Studies of inefectivity in cells and in swine, together with studies of virulence, pathogenicity and transmissibility in swine, let us conclude, that although when the were attenuated for bovine, viruses of the Cathay topotype are highly virulent and produce an acute and synchronic disease, of fast and effective transmission in porcine. Whereas viruses of the PanAsia topotype showed similar replication in both cell types, bovine or porcine, showed to be more heterogeneous in vivo, not so virulent, and they produced a milder disease. Viruses harboring one single 3B showed a decreased infectivity in porcine cells, and null infectivity in bovine cells, and they produced a mild disease in swine.

O’Connor, Silvia E.. "Efectos biológicos de material particulado de origen antropogénico proveniente de la combustión del carbón y de derivados del petróleo" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Numerosos estudios epidemiológicos han descrito asociación entre aumentos de mortalidad y morbilidad humana con la existencia de niveles elevados de material particulado (MP) EN EL AIRE. El tamaño y las características físico-químicas del MP se encuentran intimamente relacionados con su origen y con los procesos que lo generaron. El MP proveniente de combustiones antropogénicas, como la generación de energía y la actividad industrial y urbana, presenta una gran proporción de partículas fine (dae < 2.5 μm) y ultrafine (dae 1 μm), mientras que el MP de origen natural presenta una mayor proporción de partículas coarse (dae <10μm). Si bien existen dispositivos de control para reducir las emiciones de MP, éstos son ineficientes para retener partículas mas pequeñas y no se encuentran disponibles en muchas partes de nuestro país. Los resultados obtenidos en este trabajo indican que los factores pulmonares agudos del CFA (proveniente de la combustión del carbón para la generación de energía eléctrica, con bajo contenido de carbono), se encuentran inversamente relacionados con el tamaño de las partículas y están asociados a un incremento en el contenido de azufre, de cuarzo y de trazas de elementos. Por otra parte, MP obtenidoc luego de un episodio de emisión accidental industrial (coque, proveniente de la combustión de derivados del petróleo, con alto contenido de carbono) generó efectos pulmonares agudos considerables y disminución en las funciones de defensa de macrófagos alveolares. Los efectos del coque crudo son mas pronunciados que los del coque calcinado, indicando una posible participación de los compustos orgánicos adsorbidos en la matriz carbonosa en el primero. La muestra urbana (Ciudad de Buenos Aires) produjo efectos menores que las muestras de coque. Dado que las vías aéreas constituyen la ruta de entrada de los contaminantes del aire al organismo, el conocimiento de los posibles efectos nocivos de los mismos es muy importante para incrementar las medidas de control en ciertas áreas relacionadas con las actividades humanas

Abstract:
Many epidemiologic studies have identified an association between human mortality and morbidity with high air particulate matter (MP) levels. Biologic PM responses are closely related to its physicochemical characteristics and its size. Anthropogenic PM from combustion sources, such as electric power generation and industrial and urban activities, are rich in fine particles (dae <2.5 μm) and ultrafine particles (dae 1 μm), while PM from natural sources have got a great proportion of coarse particles (dae <10μm). Control devices for reducing PM emissions are ineffective in trapping small particles. Besides, they are not available in many parts of our country. Our results indicate that acute pulmonary effects following intratracheal instillation of Coal Fly Ash (CFA-coal combustion product emitted by electric power plants, with low carbon content) are inversely related to particles size and associated with the increase in sulfur, quartz and trace metal content. On the other hand, PM obtained as a result of an occidental emission by an industrial facility (coke with high carbon content) generated in vivo significant acute pulmonary effects and impairment of alveolar macrophages host defenses. As the effects of raw coke were more pronounced than those of calcined coke, the organic fraction adsorbed to the carbonaceous core of raw coke might play a role in these inflammatory effects. The urban PM sample (from Buenos Aires city) exerted inflammatory effects to a lasser degree than coke particles. Because PM raches the human body through the airways but can spread throughout, it is omportant to study its biological and health effects, with a view to controlling its emission in certain areas of human activity

Nogués, Guadalupe. "Influencia de la elongación transcripcional sobre el splicing alternativo" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El splicing alternativo de los pre-mRNAs es un mecanismo fundamental de las células eucariotas, que permite generar una gran diversidad proteica a partir de un número relativamente pequeño de genes. Desde hace unos años se sabe que las reacciones de procesamiento de los pre-mRNAs tales como la adición de una caperuza o cap en el extremo 5', el splicing de intrones, y el corte y poliadenilación en el extremo 3', no sólo ocurren cotranscripcionalmente, sino que todos estos procesos estin acoplados funcionalmente entre si. Esto llevó a proponer una posible influencia de la transcripción sobre todos ellos. En particular, nuestro grupo demostró en 1997 que si se cambian los promotores que dirigen la transcripción de un minigén de fibronectina humana, se modifica el patrón de splicing del exón alternativo EDI. En esta tesis continuamos con esta línea de investigación, y nos preguntamos si la modulación de la capacidad de la RNA polimerasa II (Pol II) de elongar a través de pausas del molde, también llamada procesividad, puede modificar el splicing alternativo de EDI. Para responder esto, estudiamos el efecto, sobre el splicing alternativo, de distintos activadores transcripcionales capaces de estimular la iniciación y/o la elongación transcriptional. Además, investigamos indirectamente la influencia del factor de elongación P-TEFb, que posee una actividad kinasa capaz de convertir la Pol II a su isoforma procesiva. Por último, examinamos la influencia de la procesividad de la Pol II en el control del splicing alternativo en relación a la fuerza de los sitios de splicing. Las evidencias obtenidas apoyan un modelo cinético de control del splicing alternativo, según el cual la transcripción mediada por una Pol II altamente procesiva favorecería la exclusión de un exón alternativo, debido probablemente a un menor reconocimiento del sitio subóptimo de splicing.

Abstract:
In eukaryotic cells, pre-mRNA alternative splicing is an essential mechanism that generates a large protein diversity fiom a small number of genes. For the last few years, it has been known that pre-mRNAs processing reactions such as capping, splicing, and 3'-end processing not only occur cotranscriptionally, but they are functionally coupled to each other. This suggested the possibility of transcription affecting all these processes. In particular, our group demonstrated in 1997 that swapping of the promoters that drive transcription of a human fibronectin minigene alters splicing of the ED1 alternative exon. In this thesis we continued with this subject, and we asked ourselves if changes in RNA polymerase I1 (Pol 11) ability to elongate trough pauses in the template, quality also known as processivity, can modify ED1 alternative splicing. To answer this, we studied the effect on alternative splicing of different transcriptional activators that stimulate transcriptional initiation andlor elongation. Besides, we examined indirectly the influence of the elongation factor P-TEFb, that exhibits a kinase activity that makes Pol I1 to become more processive. We also investigated the importance of Pol I1 processivity on the control of alternative splicing in relation to splice sites strength. The evidences obtained support an alternative splicing kinetic model in which transcription driven by a processive Pol I1 would favor alternative exon skipping, probably because of a poor recognition of the suboptimal splice site.

Nieto, Andrea Bibiana. "Efectos estructurales en el transporte de materia durante el secado de frutas" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El secado comercial de frutas involucra usualmente tratamientos de presecado (escalcado y deshidratación osmótica utilizando azúcares) dirigidos ya sea a mejorar la calidad del producto final o a mejorar la cinética de secado. La literatura sobre el efecto de estos tratamientos en la velocidad de transporte de humedad durante el secado convencional es aparentemente contradictoria. Ello puede atribuirse a la complejidad del proceso simultáneo de transferencia de calor y de masa durante el secado; a la gran variación en las propiedades físicas y estructurales entre frutas y vegetales y a la heterogeneidad estructural de los materiales biológicos. Los tejidos celulares son sistemas multifase y el agua puede migrar hacia fuera de las células por tres caminos posibles: por transporte transmembrana, por transporte simplástico y/o por transporte apoplástico, siendo este último la vía preferida por especies pequeñas como el agua. La impregnación con azúcares y el tratamiento térmico afectan, en mayor o menor grado de acuerdo a la severidad del proceso, la estructura del tejido vegetal, variando las características de la matriz y alterándose en consecuencia sus propiedades de transporte. El objetivo general de esta tesis fue analizar el efecto de las características estructurales en el transporte de agua durante la deshidratación en corriente de aire de frutas, aportando al conocimiento de los fenómenos de transporte en tejidos biológicos . Específicamente, se estudió el efecto del escalado y/o la impregnación con glucosa a presión atmosférica o bajo vacío en la cinética de secado de manzana. La evolución de los valores de densidad aparente, y en consecuencia, de la porosidad, fue correlacionada con las alteraciones micro y ultraestructurales sufridas por el tejido durante el tratamiento osmótico observadas en MO y ESEM. Los pretratamientos de escalcado y/o de deshidratación con glucosa (a presión atmosférica o bajo vacío) decrecieron significativamente la velocidad de secado en corriente de aire a 60°C durante el primer período de velocidad de secado decreciente de placas de manzana. El análisis de los cambios histológicos y ultraestructurales por microscopía óptica y microscopía electrónica de transmisión indicó que los distintos tratamientos no parecieron alterar las paredes celulares en forma severa (excepto en el escaldado). Pero hubo diferencias según el pretratamiento en la cantidad de glucosa incorporada, el encogimiento volumétrico, la ganancia de sólidos, la pérdida de agua y la pérdida de peso y la disrupción de las membranas celulares. La conducta durante el secado de las manzanas frescas, escaldadas, osmotizadas y escaldadas-osmotizadas fue comparada y explicada en base a los fenómenos citados, los que modificarían en mayor o menor grado la resistencia del tejido al flujo de agua, ya sea aumentándola o disminuyéndola.

Abstract:
Industrial drying of fruits usually involves predrying treatments (blanching, osmotic dehydration) to improve quality of final product and/or drying kinetics. The effects of these treatments on conventional drying rate reported in the literature are apparently not in agreement. This fact could be attributed to the high complexity of the simultaneous mass and heat transfer drying process, the wide variation in physical and structure properties among fruits and vegetables and the structural heterogeneity of biological materials. Cellular tissues are multiphase systems and water can flow out of cells by three ways: the transmembrane transport; the symplastic transport or the apoplastic transport, this last being the preferred way for small species like water. Sugar impregnation and thermal treatment change tissue structure, modifying matrix characteristics and consequently transport properties. General objetive of this thesis was to analyse the effect of structural characteristics on water transport during air drying of fruits, contributing to the knowledge of mass transport phenomena in biological tissues. The effect of blanching and/or glucose impregnation at atmospheric pressure or under vacuum on apple drying kinetis was specifically studied. During osmotic treatment, evolution of apparent density and porosity were correlated with the micro and ultrastructure modifications of the tissue as observed in LM and ESEM. Blanching and glucose osmotic dehydration significantly decreased air drying rate of apple plates at 60°c during the first falling rate period. LM and MET observations indicated that treatments (excepting blanching) did not alter in a severe way the cell walls. But, according to treatment, there were differences in glucose uptake, shrinkage, solids gain, water loss, weight loss and membranes disruption. Drying behaviours of fresh, blanched, osmotic dehydrated and blanched-osmotic dehydrated apples were compared and explained taking into account these phenomena, which would modify in different degree the tissue resistance to water flow, increasing or decreasing it.

Naab, Ofelia Ana. "Estudio aeropalinológico del Parque Nacional Lihué Calel" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Fue llevado a cabo el estudio palinológico de las especies nativas y la interpretación aeropalinológica de la dinámica poblacional vegetal, del Parque Nacional Lihué Calel (provincia de La Pampa, Argentina). El parque está localizado al SO de la provincia y comprende las formaciones montañosas de las sierras de Lihué Calel. Está incluido en la provincia fitogeográfica del Monte. Las diferencias topográficas, de altura, exposición a los vientos y suelos, determinan localmente un mosaico de hábitats que soportan un alto grado de diversidad biológica en comparación con las áreas circundantes.Esa diversidad incluye comunidades vegetales distintivas, con arbustos micrófilos xerófilos, algunas especies endémicas, bosquecillos de Prosopis, gramíneas y helechos. El estudio palinológico comprende la descripción morfológica del polen de 278 especies correspondientes a 60 familias, obtenidas sobre la base de las observaciones microscópicas realizadas con el microscopio óptico y el microscopio electrónico de barrido. Son presentadas 47 láminas ilustrando el polen de las especies estudiadas. Teniendo en cuenta los caracteres polínicos fue realizada una clave taxonómica. El estudio aeropalinológico fue llevado a cabo por medio de análisis anuales y estacionales de los espectros polínicos obtenidos, con sus taxones representativos y las variables de su producción polínica, relacionadas con los factores climáticos/meteorológicos. Las muestras estudiadas fueron obtenidas de trampas Tauber, de suelo superficial y de "fluxage". Estos diferentes métodos fueron aplicados con el propósito de obtener una interpretación integrada de los espectros polínicos del Parque. Para caracterizar al Parque mediante los espectros polínicos, éstos fueron analizados a escala temporal (interanual y estacional) y espacial (local y regional). A escala temporal, los análisis identificaron fluctuaciones interanuales en la intensidad de la lluvia polínica (a pesar de la estabilidad de la riqueza) y las variaciones estacionales, en la riqueza taxonómica y en la abundancia del polen, marcadas por las especies con floración en primavera y verano. Por medio de los espectros polínicos fue posible identificar a la provincia fitogeográfica del Monte a través del polen de los taxones con alta representatividad pertenecientes a las especies de arbustales micrófilos xerófilos. También pudo identificarse la influencia de la vegetación halófila, proveniente de salitrales y lagunas próximas. El índice PA/PNA, con predominancia de vegetación de monte, especialmente arbustiva, demostró ser un indicador polínico de la vegetación. A escala espacial, los análisis permitieron reconocer las comunidades locales como las de pastizales con helechos, cortaderal y pastizal con caldén, mientras que otras comunidades fueron enmascaradas por el aporte del polen regional, representativo de la vegetación del Monte. La relación polen - vegetación - factores meteorológicos, corroboró que la producción polínica anual diferencial aparece vinculada con las variables pluviométricas, mientras que la temperatura no tendría incidencia en los cambios registrados. La vegetación arbustiva respondió positivamente a condiciones de aridez acaecidas en el ciclo anual precedente y la vegetación herbácea respondió positivamente frente a precipitaciones pluviales superiores a la media. La dinámica poblacional estaría regida por las variaciones pluviométricas, siendo más arbustiva en los ciclos secos y más herbácea en los ciclos altamente lluviosos.

Abstract:
Pollen of native species of Lihué Calel National Park (La Pampa Province, Argentina) was studied along with the aeropalynological interpretation of the vegetation dynamics. The Park is located in the South-West of the province and comprises the Lihué Calel mountain formations and is included within the "Monte" Phytogeographical Province. Differences in topographic position, height, wind exposure, insolation and soil properties determine a local mosaic of habitats, which support a higher degree of biological diversity compared to the neighboring areas. This diversity includes distinctive vegetal communities with small-leafed and xerophytic shrubs, some endemic species, Prosopis caldenia woodland, grass and ferns. The palynological study comprises the morphological pollen description of 268 species belonging to 60 plant families. The observations were made using optical and scanning electron microscopes. Forty-seven plates, with several illustrated pollen species, are presented. A taxonomic key was obtained on the base of pollen characters. The aeropalynological study was carried out through annual and seasonal analysis of the pollen rain spectra. Its representative taxa and its pollen production variables were related to climatic/meteorological factors. Pollen samples were obtained with Tauber traps, surface soil, and "fluxage". These three different methods were applied with the aim of obtaining an integrated interpretation of the Park pollen spectra. In order to characterize the Lihué Calel National Park through pollen spectra, they were analyzed at temporal (inter-annual and seasonal) and spatial (local and regional) levels. The temporal level analysis has identified inter-annual fluctuations in pollen rain intensity (despite the richness stability) and seasonal variations in the taxonomic richness and the pollen abundance, marked by the species with spring and summer blossom. The pollen spectra allowed the identification of "Monte" Phytogeographical Province with those taxa with highest representation, which belongs to small-leafed and xerophytic shrubs species. The influences of halophytic vegetation that comes from neighboring salty flats areas and nearby lagoons were also identified. The PA/PNA relation was interpreted as a good pollen index, marking the predominance of "Monte" vegetation, especially shrub-like plants. From spatial level analysis pollen of the local vegetal communities such as grassland/ferns, "pampas" grass, and grassland/"caldenes" were recognized. Other communities were masked by the regional pollen supply that represents the "Monte" vegetation. The relationship pollen/vegetation/meteorological factors in Lihué Calel showed that the different annual pollen production is related to rainfall variables, and the temperature would not have incidence in this variation. The shrub-like vegetation had a positive response to dryness conditions of the previous cycle, and the herbaceous vegetation had a positive response when the rainfall was above average. Population dynamics of the Park vegetation is ruled for pluvial annual fluctuation, being shrubbier in dried cycles and more herbaceous in rainy cycles.

Mougabure Cueto, Gastón Adolfo. "Caracterización de la resistencia a insecticidas piretroides en pediculus humanus capitis De Geer 1778 : estudio comparativo entre estados embrionarios y postembionarios" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los objetivos de este trabajo de tesis están relacionados a la evaluación de la resistencia a insecticidas piretroides en los estados embrionarios t postembrionarios de poblaciones de Pediculus humanus capitis de Buenos Aires resistentes a permetrina. Durante el desarrollo de la tesis fueron planteados objetivos a posteriori necesarios para el desarrollo de los objetivos originales. Los objetivos fueron: Observar la posible expresión de resistencia a insecticidas en embriones en poblaciones de P. humanus capitis con resistencia detectada en estadios postembrionarios. Estudiar los mecanismos de resistencia a insecticidas expresados en embriones y estados postembrionarios. Estudiar los mecanismos de resistencia a insecticidas expresados en embriones y estados postembrionarios de P. humanus capitis. Los objetivos a posteriores fueron: Caracterizar morfológicamente el desarrollo embrionario de P. humanus capitis y P. humanus humanus a fin de trabajar con homogéneo en cuanto al tiempo de desarrollo. Determinar las condiciones ambientales óptimas (T°C y HR%) para el desarrollo de P. humanus capitis en laboratorio. Puesta a punto de los métodos de medición de actividad enzimática en los embriones. De acuerdo a estos objetivos se obtuvieron los siguientes resultados y conclusiones: Se caraterizó el desarrollo embrionario según caracteres morfológicos vistos a través de la transparencia del corion. Los caracteres morfológicos fueron: apéndices y manchas oculares. La ombinación de los distintos estados de desarrollo de estos caracteres permitieron determinar rtes etapas en la embriogénesis:etapa temprana, etapa media, y etapa tardía (manchas oculares negras). Se determinaron las condiciones ambientales optimas (temperatura y humedad relativa) en laboratorio para la embriogénesis de P. humanus capitis: 27-31°C de temperatura y 45-75% humedad relativa. Se observó que en poblaciones con resistencia a piretroides y DDT expresada en los estados postembrionarios los embriones también expresan resistencia a los mismos insecticidas. En estados postembrionarios, no se observó resistencia a carbaril ni a spinosad. En embriones no se observ+o resistencia a spinosad pero se determinó una incipiente resistencia a carbaril. Se midió actividad esterasa en embriones por la stres metodologías utilizadas (Gomori, Ellman y Fluorométrico), por el contrario no fue posible determinar actividad del complejo P450 por el método fluorométrico utilizado. Según los resultados de inhibición enzimática in vivo y la determinación de las actividades enzimáticas una mayor actividad esterasa no parece estar involucrada en la resistencia observada en adultos y en embriones. Según el análisis global de los resultados, la resistencia en las poblaciones de P. humanus capitis utilizadas en este trabajo se debería: 1) modificación de sitio de acción de piretroides y DDT (tipo-kdr) (estados embrionarios y postembrionarios), 2) aumento metabolismo oxidativo (estados postembrionarios). Se plantea al insecticida spinosad como posible activo en formulaciones pediculicidas.

Abstract:
The aim of this thesis are related to the evolution of the pyrethroids insecticide resistance in embryonic and postembryonic stages of Pediculus humanus capitis populations from Buenos Aires resistant to permethrin. During the development of the thesis a posteriori objetives were settled necessary for the development of the original aims. The original aims were: To observe the possible expression of insecticide resistance in embryos in P. humanus capitis population with detected resistance in postembryonic stages. To study the insecticide resistance mechanism expressed in P. humanus capitis embryos and postembryonic stages. The a posteriori aims were: To characterize morphologically the embryonic development of P. humanus capitis and P. humanus in order to work with homogeneous material as regards development time. To determinate the optimal environmental conditions (T°C and HR%) for the P. humanus capitis in laboratory. To determinate the measure methods of enzimatic activity in embryos. According to these aims the following results and conclusions were drawn: The embryonic development according to morophological characters seen through the corion transparence were characterized. The morphological characters were: appendages and oculars spots. The combinations of different development stages of these characters allowed to determinate three periods of time in the embryogenesis: early period, middle period and late period. Optimal environmental conditions were determinated (T°C and HR%) in the laboratory for P. humanus capitis: 27-31°C temperature and 45-75 relative humidity. It was observed that in populations with resistance to pyrethoids and DDT expressed in postembryonic stages, the embryos also express resistance to the same insecticides. In postembryonic stages, carbaryl and spinosad resistance was not observed. Resistance to spinosad was not observed in embyos but an incipient carabryl resistance was determined. Esterase activity embryos was measured by the three used methods (Gomori, Ellman and Fluorometric) on the contrary it was not possible to determine P450 complex activity by the fluorometric method. According to in vivo enzimatic inhibition results and the enzimatic activities determination, an increased in esterase activity is not involved in the resistance observed in adults and embryos. According to the global analysis of results, the resistance in P. humanus capitis population used in this research would be due to: 1)pyrethroids and DDT site of action modification (kdr-like) (embryonic and postembryonic stages), 2) oxidative metabolism increase (postembryonic stage). Spinosad insecticide as a possible active in pediculicide formulations is questioned.

Molinero, Luciana Lorena. "Inmunobiología de MICA en linfocitos T: estímulos fisiológicos, rutas de señalización y consecuencias funcionales de su expresión" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
INTRODUCCIÓN: La interacción de MICA con el receptor activador de citotoxicidad NKG2D (expresado en células NK y linfocitos T Ɣδ y αβ CD8+), desencadena una respuesta citotóxica contra células que expresan MICA. MICA se induce por estímulos de estrés, infecciones, neotransformación o linfocitos T activados con fitohemaglutinina. OBJETIVOS: a) estudiar la expresión de MICA en linfocitos T activados con estímulos fisiológicos; b) investigar los mecanismos moleculares involucrados y; c) investigar las consecuencias funcionales de dicha expresión. RESULTADOS: Por Western Blot, RT-PCR y citometría de flujo se observó que MICA se induce en linfocitos T presentes en células mononucleares de sangre periférica (CMSPs) por estimulación con células alogeneicas, por microagregación del complejo TCR/CD3 o por coestimulación con la molécula CD28 y PMA. Los niveles de expresión de MICA alcanzaron una meseta a los 4-7 días post-estímulo. Empleando inhibidores farmacológicos, observamos que la expresión de MICA inducida por la microagregación del complejo TCR/CD3, o la coestimulación a través de CD28 y PMA involucran a Lck/Fyn, ERK1/2, calcineurina, p38 MAPK, p70 56 y Jak. Asimismo, la inhibición farmacológica de NF-kB bloqueó la expresión de MICA en linfocitos T activados de la misma manera. Detectamos un sitio de unión KB localizado en el primer intrón del gen de MICA, y por ensayos de supershift observamos que esta secuencia une a los dímeros p65(RelA)/p50 y p50/p50 presentes en extractos nucleares de linfocitos T activados. Asimismo, la sobreexpresión de RelA en células HeLa por transfección transitoria incrementó los niveles de MICA, confirmando que la expresión de dicho gen es regulada por NF-kB. Además, por Western Blot observamos que CMSPs estimuladas con las citoquinas mitogénicas IL-2 e IL-4, lo mismo que linfocitos T polarizados hacia un perfil Th1 o Th2 inducen la expresión de MICA. Linfocitos T CD4+ purificados y activados con PMA e Ionomicina, pero no linfocitos T CD4+ presentes en CMSPs, expresan MICA en su superficie. Por ensayos de transwell, observamos que este fenómeno se debe a un factor soluble liberado por CMSPs activadas. Además, linfocitos T CD4+ activados con PMA e Ionomicina son blancos de citotoxicidad por células NK autólogas activadas con IL-2 (LAK). El bloqueo de la interacción MICA-NKG2D con AcMo anti-MICA mostró que MICA juega un rol menor en dicha respuesta. CONCLUSIONES: MICA se induce en linfocitos T activados por estímulos fisiológicos e involucra a la señalización de Lck/Fyn, ERK1/2, calcineurina, p38 MAPK, p70 56k, Jak y al factor de transcripción NF-kB. La expresión de MICA en superficie de linfocitos T tiene un rol menor en la lisis por células NK activadas. En esta tesis se describen por primera vez algunas de las vías de transducción de señales y un factor de transcripción involucrados en la expresión de MICA. Los resultados presentados sugieren además que la interacción MICA-NKG2D podría constituir un nuevo mecanismo de regulación de la respuesta inmune adaptativa.

Abstract:
INTRODUCTION: The interaction between MICA and the cytotoxicity activating receptor NKG2D (expressed in NK cells and CD8+ αβ and Ɣδ T cells) triggers a cytotoxic response against MICA expressing cells. MICA is induced by stress stimuli, infections, neotransformation or phytohemagglutinin in T cells. OBJECTIVES: a) to study MICA expression in T cells activated with physiological stimuli, b) to investigate the molecular mechanisms involved, and c) to explore the functional consequences of that expression. RESULTS: We activated T cells present in peripheral blood monononuclear cells (PBMCs)by allogeneic stimulation, microaggregation of TCR/ CD3 complex or the costimulatory molecule CD28 with anti-CD3 mAb or anti-CD28 mAb in the presence of PMA. All of these stimuli induced MICA expression, as assessed by Western blot, RT-PCR and flow cytometry, reaching a maximum at 4 to 7 days after stimulation, depending on the stimulus. Using pharmacological inhibitors we next investigated the signal transduction pathways involved in MICA induction triggered by TCR/CD3 crosslinking or costimulation through CD28 in the presence of PMA. We found that several signaling pathways like Lck/ Fyn, ERK1/2, p38 MAPK, calcineurin, Jak and p70 56 are involved in MICA induction: By pharmacological inhibition of NF-kB, we found that MICA expression was dependent on NF-kB, most probably through a kB binding sequence located in the first intron of the MICA gene. By EMSA and supershift assays we found that this sequence bound RelA/p50 and p50/p50 NF-kB dimers present in nuclear extracts of activated T cells. Pharmacological blockade of NF-kB also inhibited MICA expression in HeLa cells and overexpression of RelA in these cells increased MICA expression, suggesting that NF-kB regulates MICA expression. Mitogenic cytokines, like IL-2 and IL-4, were able to induce MICA expression in T cells. This molecule was also induced in Th1 or Th2 polarized cells. We observed that PMA/ lonomycin stimulation induced surface MICA expression on purified CD4+ T cells, but not on CD4+ T cells present in PBMCs, more likely due to a soluble factor secreted by activated PBMCs. PMA/lonomycin activated CD4+ T cells became targets of cytotoxicity by syngeneic IL-2 activated NK cells (LAK), but not of resting NK cells. Blocking MICA-NKG2D interaction with an anti-MICA mAb, developed in our laboratory, showed that MICA plays a marginal role in this cell death. CONCLUSIONS: MICA is induced in T cells by physiological stimuli through the activation of Lck/Fyn, ERK1/2, p38 MAPK, calcineurin, Jak and p70 56 signal transduction pathways, as well as the transcription factor NF-kB. MICA expression on the surface of CD4+ T cells play a marginal role as target of cytotoxicity by activated NK cells. In this Thesis some of the signal transduction pathways and a transcription factor involved in MICA expression are described for the first time. Also, the results suggest that MICA NKG2D interaction may be a novel mechanism of regulation of the adaptive immune response.

Méndez, Jorge Manuel. "Generalización de resonancia estocástica" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis se estudian algunos aspectos de la codificación de información en sistemas excitables en entornos ruidosos. Es interesante entender la interacción entre la estructura determinista y la acción del ruido. En particular, se estudia un sistema excitable que bajo la acción del ruido tiene dos tiempos característicos. Se analiza la acción cooperativa entre estas escalas de tiempo inducidas por ruido y la escala de tiempo introducido exteriormente a través de un forzado periódico de una de sus variables. Esto lleva a una generalización del concepto habitual de resonancia estocástica. Además, se estudia la existencia de excitabilidad en dos sistemas láser, focalizando especialmente en el láser de semiconductores realimentado ópticamente. Este sistema presenta caídas en la intensidad que son identificadas como los eventos del sistema excitable (pulsos). Al medir un observable típico de los sistemas excitables, el histograma de tiempos entre eventos, se identificó que el mismo era bimodal. Estos dos tiempos característicos de respuesta pueden ser comprendidos en términos de un modelo dinámico en el entorno de una bifurcación de codimensión dos y puede ser utilizado como sistema experimental para el análisis de las interacciones entre las escalas de tiempo intrínsecas inducidas por ruido y las introducidas externamente.

Abstract:
In this thesis, some aspects of the codification of information of excitable systems in noise environment have been studied. It is interesting to understand the interaction between the deterministic structure and the noise-induced time scales and other externally introduced by a periodic forcing of one of its variables has been analyzed. This has driven to a generalization of the usual concept of the stochastic resonance. Furthermore, the existence of excitability in two laser systems has been explored, with focus on the semiconductor laser with optical feedback. This system has drops in the laser output intensity that can be identified as the events of the excitable system (pulses). Besides, two characteristic times have been identified in the inter-event time histogram, which is typical observable of the excitable systems. These two response times can be understood by means of a dynamical model in the vicinity of a codimension two bifurcation point and it can be used as an experimental system for studdind the interaction between two noise induced characteristic times and other externally introduced.

Minoli, Sebastián A.. "Caracterización de hábitats naturales de triatominos (Heteroptera: Reduviidae): influencia de la temperatura,la humedad relativa y la luz en su distribución espacial" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presente tesis Doctoral analiza cómo variables ambientales, tales como la temperatura (T°), la humedad relativa (HR) y la iluminación pueden afectar la selección de hábitats por parte de los insectos triatominos. El análisis se llevó a cabo integrando estudios de laboratorio y de campo, a fin de realizar una evaluación global de la problemática. En el laboratorio, en 4 especies de triatominos y en individuos de diverso estado nutricional (i.e. ayunados o alimentados), se realizaron experimentos de preferencia térmica e hígrica en gradientes artificiales de T° y de HR,respectivamente. Las diferentes especies prefirieron permanecer en zonas con temperaturas entre 21°C y 32°C. En todos los casos se pudo constatar una preferencia por parte de las vinchucas por ammbientes de baja humedad relativa. La comparación entre especies reveló que Triatoma sordida y T. guasayana presentaron una marcada preferencia por temperaturas relativamente más elevadas (Ayunos: 31,5°C y31,76°C; Alimentados: 31,79°C y 31,87°C, respectivamente) y una preferencia por ambientes relativamente más secos (Ay: 11,52% y 13,80%, Al: 7,21% y 8,16%, respectivamente). Por otro lado, Rhodnius prolixus prefirió ambientes con los menores valores de T° (Ay: 25,35°C, Al:21,41°C) y humedades relativas no tan bajas (Ay: 18,48%, Al: 13,17%). T. infestans prefirió T° intermedias (Ay: 26,28°C, Al: 29.38°C), presentando una marcada diferencia entre insectos ayunados y alimentados en cuanto a su higropreferencia (Ay: 21,30%, Al: 10,74%). Los estudios de campo realizados en distintas regiones de la Antártida y Brasil con alta incidencia de triatominos, permitieron el análisis de la dinámica diaria de temperatura y de humedad relativa en el interior de refugios naturales de vinchucas (microclima) y compararla con la dinámica ambiental local (macroclima). En el interior de la gran mayoría de los refugios analizados, se registraron variaciones microambientales de menor amplitud diaria respecto de la T° y la HR macroambiental, evidenciando un efecto de amortiguación de la variación de dichas variables por parte de los refugios. En algunos casos, tal amortiguación fue claramente asimétrica, generando en el interior de los refugios valores medio de T° y HR diferentes de la media macroambiental. Este resultado revela que las vinchucas pueden experimentar en el interior de los refugios un microclima considerablemente diferente al clima regional. El efecto de la luz en la distribución espacial de las vinchucas se analizó a través del estudio de su atracción hacia fuentes de la luz artificial. En el laboratorio se estudió la orientación de T. infestans y R. prolixus en vuelo frente a fuentes de luz artificial de distinta calidad espectral. T. infestans mostró una tendencia significativa a volar en dirección a una fuente de luz blanca, pero no mostró la misma respuesta frente a una fuente de luz UV. R. prolixus, por su parte, se orientó marcadamente hacia la fuente de luz blanca, y presentó un comportamiento bimodal de atracción/repulsión con respecto a la fuente de luz UV. En los estudios de campo se instalaron trampas de luz endémicas de triatominos. Se probaron fuentes de luz portálites de distinto tipo y calidad espectral en cuanto a su capacidad para atraer a las vinchucas. Las trampas se colocaron en diversas zonas de la Argentina y Brasil, pero sólo se capturaron T. brasiliensis y T. pseudomaculata en la localidad de Curaçá (Brasil). A partir de los resultados obtenidos, se discute la relación entre el microclima en el interior de los refugios de las vinchucas y el clima local, así como la influencia de ambos en la distribución actual y potencial de las vinchucas. Se discute, además, la importancia de la presencia de luces artificiales, como factor que favorecería el ingreso de las vinchucas a las viviendas humanas.

Abstract:
The present Doctoral Thesis analyses how environmental variables, such as the temperature (T°), the relative humidity (HR) and the illumination can affect the selection of habitats by triatomine insects. The analysis was carried out integrating laboratory and field studies, as a global evaluation of the query. ln the laboratory, ¡n 4 triatomine species and in individuals with different nutritional states (i.e., starued or fed), we carried out thermo- and hygropreference experiments using artificially generated gradients of T° and HR, respectively. The different species preferred ambients with temperatures between 21°C and 32°C. ln all cases we could corroborate the preference of these bugs for ambients with low relative humidity. The comparison between species, revealed that Triatoma sordida and T. guasayana exhibited a marked preference for relatively higher temperatures (Starved: 31.5°C and 31.76°C; Fed: 31.79°C and 31.87°C, respectively), and for relatively drier ambients (St: 11.52% and 13.80%; Fed: 7.21% and 8.16%, respectively). On the other hand, Rhodnius prolixus preferred ambients with the lower values of T° (St: 25.35°C; Fed: 21.49°C) and not so low relative humidities (St: 18.48%; Fed: 13.17%). T. infestans preferred interrnediate T° (St: 26.28°C; Fed: 29.38°C), expressing a marked difference between starued and fed insects in their hygropreference (St: 21.30%; Fed: 10.74%). Field studies carried out in different regions of Argentina and Brasil with high incidence of triatomines. allowed the analysis of the daily dynamic of temperature and relative humidity inside natural refuges of these bugs (microclimate), and to compare it with the local ambient dynamic (macroclimate). ln the interior of most analysed shelters, microambiental daily variations of less amplitude than the macroambiental T° and HR were registered, evincing a damping effect of the variation of such variables caused by the refuges. ln some cases the damping was clearly asymmetric, generating averaged values of T° and HR inside the shelters different from the macroambiental ones. This result reveals that triatomines can be experiencing a microclimate considerany different from the regional weather. The effect of the light in the spatial distribution of triatomines was analysed studying their orientation towards artificial lights. In the laboratory, the orientation of flying T. infestans and R. prolixus confronted to different spectral quality lights was studied. T. infestans showed a significant tendency to fly towards a white light, but did not show the same response when confronted to an UV light. R. prolixus, stroneg preferred to fly towards the white light, and exhibited a bimodal attraction/repellency behaviour in respect to the UV light. ln field studies, we mounted light-traps in endemic triatomine areas. We tested the efficiency of different illuminating devices as attractants. The traps were located in diverse regions of Argentine and Brasil, but triatomines were captured only in the locality of Curagá (Brasil). The results here obtained are analysed in order to discuss the relation between the microclimate in the interior of the refuges occupied by triatomines and the local climate, as well as the influence of both of them in the actual and potential distribution of these insects. Moreover, we discuss the importance of the presence of artificial lights as a feature that could favour the incoming of triatomines to human dwellings.

Medesani, Daniel Alberto. "Efectos de metales pesados sobre la síntesis y secreción hormonal en el cangrejo de estuario Chasmagnathus granulatus, DANA 1851 (Decapoda, Varunidae)" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se evaluó en el cangrejo de estuario Chasmagnathus granulatus el posible efecto de los metales pesados cadmio y cobre, a concentraciones subletales, sobre el control hormonal de la glucemia y de la reproducción. La exposición crónica de cangrejos intactos a ambos metales, provocó un severo y significativo descenso de la glucemia. Se observó una tipica relación dosis-respuesta al exponer estos animales a diferentes concentraciones de cadmio y cobre, con una mayor sensibilidad a este último metal. El bajo nivel de glucosa detectado en los animales intactos expuestos, fue similar al registrado en animales ablacionados de sus pedúnculos oculares, lo cuál está indicando un posible efecto inhibitorio de ambos metales sobre la secreción y/o sintesis de la hormona hiperglucemiante, CHH, que se produce y secreta en tales pedúnculos. La ausencia de diferencias entre los animales ablacionados controles (sin metal) y ablacionados expuestos a cada metal, está indicando por otra parte que no existe un efecto directo de los tóxicos sobre el nivel basal de glucosa (no regulado por CHH peduncular). Cuando el extracto de pedúnculo ocular de cangrejos previamente expuestos a cadmio o cobre se inyectó en animales intactos, provocó un incremento significativo de la glucemia similar al que provocó la inyección de extractos de animales controles, indicando que no existe un efecto de los tóxicos sobre el contenido de CHH en los pedúnculos oculares, lo que sugiere a su vez que la síntesis hormonal no se veria afectada. Por otra parte, la inyección de CHH purificada de Cancer pagurus, sobre animales intactos expuestos crónicamente a los tóxicos, provocó la reversión del efecto hipoglucémico causado por los metales. Los animales expuestos a cadmio alcanzaron un nivel de glucemia elevado y similar al registrado en cangrejos inyectados con CHH pero no expuestos, demostrando que éste metal no interfiere con la interacción hormona-receptor y/o la transducción de la señal hormonal en los tejidos blanco. Los animales expuestos a cobre incrementaron también la glucemia pero alcanzando un nivel similar al medido en cangrejos no expuestos inyectados con solución salina, lo cuál indica que el cobre afectaría en alguna medida la interacción hormona-receptor, y/o algún paso en la transducción de la señal hormonal máxima. En consecuencia, los resultados obtenidos en esta primera parte de la Tesis apoyan la Hipótesis de que la hipoglucemia observada en animales intactos por exposición a los metales estudiados, se debe a una inhibición que esos metales ejercen sobre la secreción de CHH por parte del centro neuroendocrino ubicado en los pedúnculos oculares, sumado, para el caso de cobre en particular, a una interferencia con los efectos hormonales a nivel de órganos blanco. Con respecto a los ensayos sobre el control de la reproducción, se realizaron ensayos in vivo (14 días) e in vitro (24 horas), con hembras adultas de C. granulatus. En los ensayos in vivo, no se observaron cambios significativos en el indice gonadosomático (IG) de hembras intactas de sus pedúnculos oculares expuestas a cadmio o cobre, mientras que ambos metales provocaron un descenso significativo en el IG de los cangrejos ablacionados. En función de estos resultados, pusimos a prueba la Hipótesis de que esos metales estén interfiriendo con la via estimuladora extrapeduncular del crecimiento gonadal. Para esto, se realizaron ensayos in vitro coincubando ovario con ganglio torácico, fuente de la hormona estimuladora gonadal; como resultado, no se detectaron diferencias entre los grupos control y expuestos a los metales pesados. Sin embargo, cuando el ovario fue incubado con metil farnesoato o l7-hidroxiprogesterona, ambas hormonas estimuladoras del crecimiento gonadal, la incorporación de leucina tritiada fue significativamente menor en los grupos expuestos, corroborando la Hipótesis planteada en términos de una interferencia de cadmio y cobre con los mecanismos de transducción de tales hormonas estimulatorias a nivel gonadal. Por otro lado, ovarios coincubados con tejido peduncular y expuestos a ambos metales pesados, mostraron una incorporación de leucina tritiada significativamente mayor que en los controles (ovario y pedúnculos, pero sin metales en el medio de incubación), sugiriendo un efecto inhibitorio de los tóxicos ensayados sobre la secreción de la hormona inhibidora gonadal (GIH) desde los pedúnculos oculares. La interferencia de cadmio y cobre con los mecanismos de transducción de GIH a nivel ovárico fue descartada como hipótesis alternativa, ya que el agregado de extracto de pedúnculo ocular al medio de incubación fue capaz de revertir por completo el efecto causado por cada tóxico. Por último, el conjunto de resultados obtenidos in vitro con ambos metales, i.e., interferencia con el efecto de hormonas estimulantes (metil famesoato y l7-hidroxiprogesterona) e inhibición de la secreción de la hormona inhibibora GIH, permiten explicar el similar crecimiento gonadal observado en animales intactos, entre controles y expuestos a los metales.

Abstract:
The present study was aimed at studying the effect of chronic exposure to cadmium and cooper on hormonal control of CHH-mediated glycemia and of reproduction in the estuarine crab Chasmagnathus granulatus. For both heavy metals assayed, the exposed male intact crabs showed a significant (p<0.05) decrease of glycemia, as compared to the intact crabs in clean water. The clear hypoglycemia produced by both cadmium and copper was in fact verified in intact crabs exposed to a wider concentration range. A typical dose-response relationship was observed for both heavy metals; crabs showed a higher sensitivity to copper than to cadmium, according to the concentrations that produced a significant drop of glycemia, with respect to the control. This response was consistent with the lower acute LC50 value for copper than for cadmium, although the difference in the chronic toxicity on glycemia between both heavy metals (a factor of ╧ 2) was not as high as the difference in lethal acute toxicity (a factor of 5). A slow glucose level in exposed intact crabs is similar to that of the control and heavy metals-exposed eyestalkless crabs. Since no differences (p>0.05) were detected in any case between control and heavy metals-exposed eyestalkless crabs, no direct effect of the assayed pollutants on basal glycemia levels (not regulated by CHH) seems to have occurred. The very significant differences (p<0.01) detected between the group injected with saline solution and the group injected with eyestalk extract from crabs in clean water, clearly show the high hyperglycemic effects of the CHH normally present in the sinus glands of the control animals. The group injected with eyestalk extract from crabs previously exposed to cadmium or copper showed the same level of glycemia as that of the respective groups, indicating that no apparent effect of either cadmium or copper in the content of CHH in the eyestalks seems to have occurred. Although, the hypoglycemia produced by both metals was probably due to inhibition of CHH secretion, any consequent accumulation of this hormone in the sinus gland was not apparent, perhaps there was a compensatory decreased rate of CHH synthesis in the exposed crabs. The regulatory mechanisms of CHH turnover in the neurons that synthesize CHH could also be maintaining a steady state of CHH availability, i.e., reducing synthesis when secretion of the hormone decreases; however, the possibility of some interaction of cadmium or copper with CHH receptors in several tissues should not be discarded for explaining the hypoglycemic responses. We analyzed the effect of different inyected dosis of purified CHH of Cancer pagurus, onto heavy metals-exposed intact crabs. The inyection produce a reversion in the hypoglycemic effect generated when it was previously exposed to the heavy metals. This effect was dosis independent. In the cadmium-exposed crabs, a similar glucose level to that of the control crabs also injected with CHH was attained, demonstrating that this heavy metal is not interfering with hormonal reception and/or transduction in the target tissues. ln the case of the copper-exposed crabs, the increase of glycemia after CHH injection was less than in the control crabs injected with CHH, suggesting that some interference with hormonal transduction or with the enzymes involved in glucose mobilization could have occurred to some extent. The effects of cadmium and copper on the hormonal control of ovarian growth were evaluated on the same specie, by means of both in vivo (14 days exposure) and in vitro (24 h) assays. No significant (p>0.05) change of the gonadosomatic index was observed in the in vivo assays with intact females exposed to HM, while eyestalk-ablated exposed females showed significantly (p<0.05) lower GSI values than their respective controls. This latter result led us to consider the possibility that the HM interfered with extra-eyestalk hormones. ln this sense, no differences were noted between control and HM exposed groups after coincubating ovary with thoracic ganglion (the source of the gonad stimulating hormone). However, when ovary was incubated with methyl famesoate or l7-hydroxyprogesterone, ³H-leucine incorporation was significantly lower in the HM-exposed groups than in the controls, indicating a possible interference of cadmium and copper with the transduction pathway of those hormones. On the other hand, ovaries coincubated in vitro with eyestalk tissue (ET) and exposed to either HM, showed significantly higher ³H-leucine incorporation than did the controls, suggesting an inhibitory effect of the HM on the secretion of the gonad inhibiting hormone (GIH) from the ET. Interference by copper and cadmium with the transduction mechanisms of GIH at the ovarian level does not appear to be a viable hypothesis, because the addition of eyestalk extracts to the incubation medium reversed the effect caused by each HM.

Manrique, Mariana Lorena. "Rol de la proteína matriz (MA) del virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV) en el ensamblado viral : relación funcional entre la MA de FIV y la de los lentivirus de primates" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV) es un lentivirus que causa en gatos domésticos un síndrome de inmunodeficiencia similar al SIDA de humanos. Por ello, el sistema FIV-gato doméstico es considerado un modelo adecuado para el estudio de las infecciones producidas por el virus de inmunodeficiencia de humanos (HIV). El gen gag de FIV, al igual que el del resto de los lentivirus, codifica para el precursor poliproteico Gag el cual se ensambla en partículas virales en la membrana plasmática de la célula infectada. Gag es procesado por la proteasa viral en las proteínas maduras de la cápside: matriz (MA), cápside y nucleocápside. Sin embargo, se desconocía hasta el momento la contribución de cada uno de los dominios de Gag de FIV al ensamblado viral. Con el objeto de estudiar el proceso de ensamblado de FIV, utilizamos el sistema del virus vaccinia para producir la formación de partículas a través de la expresión del gen gag. Los estudios bioquímicos y de microscopía electrónica realizados con células infectadas con este virus vaccinia recombinante demostraron que la poliproteína Gag de FIV se autoensambla en partículas con morfología lentiviral que son liberadas al medio extracelular. Para estudiar el rol de la proteína MA de FIV en la morfogénesis viral, se construyeron virus vaccinia recombinantes lleando mutaciones en este dominio del gen gag de FIV. La caracterización del fenotipo de estas proteínas Gag mutadas llevó a la identificación de dominios en la MA de FIV necesaios para el transporte de Gag a la membrana plasmática y para el ensamblado de partículas virales. Por otra parte, se decidió estudiar la relación estructural y funcional que existe entre la proteína MA de FIV y la del virus de inmunodeficiencia de simios (SIV), caracterizando el fenotipo de ensamblado de virus quiméricos derivados de SIV o FIV, en los que se reemplazó total o parcialmente el dominio MA de un virus por el del otro. El reemplazo total de la MA de SIV por su equivalente de FIV (quimera SIV) interfiere con el ensamblado de Gag en viriones. La poliproteína quimérica Gag SIV(MA FIV1-130) no se asocia eficientemente a membranas a pesar de miristilarse en igual nivel que el precursor Gag de SIV. El defecto en el ensamblado de la proteína Gag SIV(MA FIV1-130) es revertido por mutaciones que incrementan el carácter básico de la MA de FIV (mutación G31K/G33K) o por la coexpresión con el precursor Gag salvaje de SIV. Esto último indica que la proteína Gag quimérica mantiene la capacidad de establecer interacciones Gag-Gag. Por otro lado, las proteínas Gag quiméricas SIV(MA FIV1-36) y SIV(MA FIV37-130) en las que se sustituyó parcialmente el dominio MA de SIV por la región equivalente de FIV, se ensamblan en viriones con la misma eficiencia que el precursor Gag salvaje de SIV. Sin embargo, estos viriones son incapaces de incorporar la glicoproteína viral de envoltura y resultan significativamente menos infecciosos que el virus SIV salvaje. Finalmente, se construyó el virus quimérico FIV(MA SIV1-130) que contiene la MA de SIV en reemplazo de la de FIV. Este virus quimérico no sólo se ensambla eficientemente en viriones, sino que además es capaz de replicarse en una línea celular linfoidea felina. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis contribuyen así a comprender la homología funcional que existe entre las proteínas MA de lentivirus evolutivamente distantes.

Abstract:
Feline immunodeficiency virus (FIV) is a lentivirus that induces in cats an immunodeficiency syndrome similar to AIDS caused by human immunodeficiency viruses (HIVs) in humans. These similarities make the feline-FIV system a useful model for the study o HIV-1 infections. The FIV gag gene, like that of other lentiviruses, codes for the polyprotein precursor Gag that assembles into particles at the plasma membrane of infected cells. Gag is processed by the viral protease into the matrix (MA), capsid and nucleocapsid proteins which from the mature virions. However, the contribution of each of the FIV Gag domains to virus assembly had not as yet been addressed. To study the assembly process of FIV, we made use of the vaccinia virus system to reproduce particle formation by expressing the FIV gag gene. The biochemical and electron microscopy studies performed with cells infected with this recombinant vaccinia virus demonstrated that the FIV Gag polyprotein self-assembles into typical lentiviral particles that are released into the extracellular medium. To study the role of the FIV MA protein in virus morphogenesis, we generated a series of recombinant vaccinia viruses carrying mutations within the MA domain of the FIV gag gene. Phenotypic characterization of these FIV Gag mutants led to the identification of MA domains that are necessary for Gag transport to the plasma membrane and for particle production. Moreover, we investigated the structural and functional relationship between the FIV MA protein and that of the primate lentivirus simian immunodeficiency virus (SIV) by analyzing the assembly phenotype of SIV- and FIV-derived chimeric viruses in which the MA-coding region was partially or fully swapped. The replacement of the SIV MA domain with that of FIV (chimera SIV) severely impairs Gag assembly into virions. The chimeric Gag SIV (MA FIV1-130) polyprotein exhibits low membrane-binding capacity despite being myristylated in a wild-type manner. The assembly defect of the chimeric Gag SIV(MA FIV1-130) is reversed either by mutations that increase the basic character of the FIV MA (mutation G31K/G33K) or by coexpression with the wild-type Gag precursor; which indicates that the chimeric Gag protein retains the ability to participate in Gag-Gag interactions. Furthermore, the chimeric Gag polyproteins SIV(MA FIV1-36) and SIV(MA FIV37-130), in which SIV MA regions were replaced by their equivalent counterpart of the FIV MA, assemble into virions as efficiently as wild-type SIV Gag. However, these chimeric viruses do not incorporate the viral envelope glycoprotein and are significantly less infectious than wild-type SIV virions. Finally, we constructed the chimeric FIV(MV SIV1-130) virus containing the SIV MA-coding region in the context of the FIV genome. This chimeric virus not only assembles into virions with an efficiency similar to that of FIV, but is able to replicate in a feline lymphoid cell line as well. The results presented in this thesis thus provide further insight into the functional homology between MA proteins from distantly related lentiviruses.

Manfreda, Vilma Teresa. "Absorción y eficiencia de uso de P en diferentes genotipos de trigo" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de la presente tesis fue el estudio de la regulación de los flujos de P y el consumo de lujo en plantas de trigo cultivadas en suministros de P no limitantes para el crecimiento. Este aspecto de la nutrición mineral ha sido objeto de poca atención por los investigadores a nivel mundial a pesar de su implicancia en los aspectos económicos relacionados con la fertilización del cultivo y la sustentabilidad de los sistemas. El acercamiento a los objetivos propuestos se realizó mediante la comparación de genotipos de trigo contrastantes en su eficiencia nutricional de P cultivados bajo condiciones controladas (cámara climática e hidroponia). Se emplearon soluciones de cultivo ya que, además del control estricto del nivel de suministro, permite la valoración de los flujos unidireccionales de P de las raíces (influjo y eflujo de P). Los pasos seguidos fueron: 1) seleccionar desde un conjunto de seis genotipos de trigo dos que fueran contrastantes en su economía del P y, 2) estudiar en ellos, con más detalle, el crecimiento, la tasa de absorción neta (SARP), flujos bidireccionales (influjo y eflujo de P) y la relación biomasa seca/contenido de P (cociente de utilización de P, CUP), como posibles indicadores de la eficiencia nutricional. Se presentan los resultados obtenidos en 0.05 y 5 mol.mˉ³ de P, suministros que mostraron no ser limitantes para el crecimiento. Los genotipos seleccionados fueron Buck candisur y Chaqueño INTA. El primero presentó un crecimiento, una SARP y un CUP mayor que Chaqueño INTA. Estos dos últimos parámetros fueron afectados por el suministro de P en forma diferente para cada genotipo. No se presentaron diferencias significativas entre genotipos ni en el influjo ni en el eflujo de P. Posteriormente se realizaron dos ensayos con estos dos genotipos de trigo, uno en cámara climática y otro en invernáculo, cultivados en un suelo deficiente de P fertilizado con altas dosis de PO4H2, con el fin de comprobar si las diferencias observadas en la SARP y CUP en hidroponia se mantienen en el cultivo con suelo. Los resultados mostraron las mismas diferencias genotípicas en la SARP y CUP que las encontradas en hidroponia. Se realizaron dos experiencias en hidroponia a fin de constatar qué flujos de P se relacionan con la concentración de P en las plantas. La obtención de plantas con distintas concentraciones internas de P se realizó mediante dos métodos: cambios de suministro de P (entre concentraciones no limitantes para el crecimiento) y privación total de P. Como resultado se observó que la SARP, la tasa de acumulación de P en las raíces (TAPr)y la tasa de transporte de P al vástago (TTPv) fueron los flujos que variaron junto con la concentración interna de P en las plantas, mientras que el eflujo e influjo de P presentaron escasas diferencias entre las plantas transferidas y las plantas control. Estos resultados apoyan la hipótesis de que la absorción de P en suministros no limitantes para el crecimiento está más vinculada con los flujos internos de P (TAPr y TTPv), que con los flujos unidireccionales de entrada (influjo)y salida (eflujo) de este nutriente hacia y desde las raíces. Es de destacar las limitaciones metodológicas en la determinación de los flujos de P (en especial las relacionadas con diferentes tiempos de medición) y la alta variabilidad en los parámetros medidos (relacionados con diferencias entre unidades experimentales, ciclos de luz-oscuridad, etc.) que dificultan su utilización para comparar genotipos. Otro factor que podría haber comprometido las estimaciones de los flujos de P es su expresión por unidad de biomasa seca de raíces en vez de expresarla por unidad de área. Las posibles diferencias entre genotipos y/o entre suministros de P en la relación superficie:biomasa seca de raíces podrían enmascarar o aun arrojar diferencias espúreas en los flujos de P. Afortunadamente estas diferencias no fueron encontradas ni entre genotipos ni entre suministros, por lo que las estimaciones de los flujos realizadas con los pesos secos de raíces pueden asimilarse a las calculadas con la superficie de las mismas. Finalmente se analizó el conjunto de ensayos bajo otra perspectiva en los que se incluyó, además, datos de otro genotipo de trigo (Las Rosas INTA). Este enfoque se basa en el uso de las correlaciones entre las biomasas y el contenido de P que posibilitan identificar los cambios pasajeros en la aclimatación de las plántulas a los suministros de P, y eventualmente descartarlos en el análisis, permitiendo comparar el comportamiento general de los genotipos a más largo plazo. La pendiente de la relación entre el contenido de P y la biomasa seca por planta permitió establecer el valor de la concentración interna de P alcanzada a largo plazo (“concentración de tendencia”), como así también, la capacidad de cada genotipo de conservarla en diferentes suministros de P (0.05; 0.1 y 5 mol.mˉ³ de P). La diferencia de la concentración de P de tendencia entre los suministros indica el consumo de lujo de P entre suministros. Esta diferencia, entre 0.05 y 5 mol P.mˉ³, mostró que Chaqueño INTA presentó un menor consumo de lujo de P, Buck candisur el mayor, siendo el de Las Rosas INTA intermedio. La tasa de absorción neta (SARP) se redefinió mediante la regresión de la biomasa seca de plantas en el tiempo y con las correlaciones biomasa seca de plantas-biomasa seca de raíces y biomasa seca de planta-contenido de P de planta. El límite de la función obtenida para la SARP se interpretó como la “SARP de tendencia", quedando definida por dos componentes: 1) la concentración de P de tendencia y 2) producción-distribución de la biomasa. Ambos factores caracterizan a cada genotipo pero, mientras que el primero puede variar entre suministros de P, el último es constante para cada genotipo. Las diferencias entre genotipos muestran que Chaqueño INTA y Buck candisur difieren sólo en el primer componente, mientras que Las Rosas INTA difiere de estos dos genotipos por su menor producción-distribución de biomasa. Este análisis muestra que Las Rosas INTA posee la menor SARP, Chaqueño INTA intermedia y Buck candisur la mayor. La diferencia en el ordenamiento de genotipos según concentración interna de P o SARP pone en duda el valor de este último parámetro como estimador de la eficiencia de uso de P cuando su suministro es no limitante para el crecimiento. Otro elemento para dudar de la SARP (cuando se la estima en períodos cortos de tiempo, ej: horas) como estimador de la eficiencia nutricional es su variabilidad durante el ciclo de luz-oscuridad en estos suministros. Por último el influjode P (flujo que es sólo posible medirlo en lapsos de 20') es el parámetro de mayor variabilidad. Varía notoriamente entre unidades experimentales, durante el ciclo de luz-oscuridad, con la edad de las plantas y es además afectado por el suministro de P. En este conjunto de factores la variabilidad genotípica, aportada por los seis genotipos estudiados, fue prácticamente nula. No se encontraron correlaciones entre el influjo de P ni con la SARP ni con la concentración interna de P, sin embargo se pudo observar que disminuye en 5 y 0.1 mol P.mˉ³ y que aumenta en 0.05 mol.mˉ³ de P con el aumento de la biomasa. Los resultados muestran como poco adecuado el empleo de mediciones en tiempos cortos de los flujos de P como estimadores de su eficiencia nutricional cuando la disponibilidad de este elemento es alta.

Abstract:
The aim of the current thesis was to study P-fluxes and P-luxury consumption regulation in wheat plants grown in P-supplies which do not limit growth. This area of plant nutrition has been scarcely explored by workers in spite of its importance to the economy of crop fertilization and the sustainability of agronomical systems. The approach to the proposed objectives was to compare wheat genotypes of contrasting nutritional P efficiency, cultivated under controlled conditions (climatic chamber and hydroponics). Hydroponics was utilized because, besides the control of the supply, it allows the measurement of the unidirectional P fluxes in roots (P influx and efflux). The steps followed were: 1) to select, from a group of six wheat genotypes, two with contrasting P economy; and 2) to study in further detail their growth, specific absorption rate of P (SARP), bidirectional fluxes (P-influx and P-efflux) and the relationship dry biomass/P content (Phosphorus utilization quotient, PUQ), as possible indicators of nutritional efficiency. Results were obtained in P supplies of 0.05 and 5 mol P.mˉ³, concentrations that were shown not to be restrictive for growth. Selected genotypes were Buck Candisur and Chaqueño INTA. The first presented a higher growth, SARP and luxury consumption than Chaqueño INTA. The last two parameters were affected by P supply in a different way for each genotype. Significant differences were not observed among genotypes, neither in P influx or P efflux. Later on, experiments were carried out using both genotypes grown in a P deficient soil, one in a climatic camera and another in a glasshouse. High doses of PO4H2 were used with the purpose of checking if the differences observed in the SARP and PUQ between genotypes were maintained, a fact that was confirmed under these conditions. Two other experiments were carried out in hydroponics, with the aim of to verify which of those P-fluxes were related with plant P-concentration. Plants with different internal P concentrations were obtained by two methods: changing P supply (between non-growth limiting concentrations) and deficiency induced by total P deprivation. As a result, it was observed that SARP, P accumulation rate in roots (PARr) and P transport rate in shoots (PTRs) were the fluxes that varied with internal P concentration, while P efflux and influx showed scarce differences between transferred and control plants. These results support the hypothesis that P-uptake in high P supplies is more associated with internal P fluxes (PARr and PTRs) than with the input (influx) and output (efflux) of this nutrient towards and from roots. It should be emphasised that there are methodological limitations in the determination of P-flux (especially those related to different measurement times) and that there is high variability in the measured parameters (related to differences between experimental units, cycles of light-darkness, etc.) that hinder their use for comparing genotypes. Another factor that could have compromised the accuracy of the estimations of the P-fluxes is that they were expressed per unit of root dry matter instead of per unit of root area. Possible differences in the relationship between surface and root dry biomass among genotypes and/or among P supplies would mask or even create spurious differences in P-fluxes amongst them. Fortunately, these differences were neither found between genotypes nor between P-supplies. Therefore, the estimates of these fluxes carried out per unit root dry weight can be assimilated to those calculated using root surface. Finally, was analysed the group of experiments under another perspective, in which we included data of another wheat variety: Las Rosas INTA. The analysis was centred around the use of correlations between the biomasses and P content, which facilitate the identification of changes related to plant acclimatization to P supplies and eventually leads to their elimination from the analysis, allowing the comparison of the general behaviour of genotypes over the long term. The slope of the relationship between plant P-content and dry biomass per plant allowed the estimation of the value of internal P concentration reached over the long term (“trend P-concentration"), as well as the capacity of each genotype to conserve this concentration in different P supplies (0.05; 0.1 and 5 mol P.mˉ³). The difference of the trend P-concentration between non-limiting P-supplies indicates luxury consumption of P. This difference, calculated between 5 and 0.05 mol P.mˉ³, showed that Chaqueño INTA presented the lowest P luxury consumption, Buck Candisur the highest, and Las Rosas INTA an intermediate value. The net specific absorption rate of P (SARP) was redefined by means of the regression of plant dry biomass over time, and by two further correlations: a) plant dry biomass: root dry biomass; and b) plant dry biomass: Plant P content. The limit of SARP function (when time trends to infinite) was interpreted as a “SARP trend”. This value is defined by two components: the trend concentration of P, and the production distribution of biomass. Both factors are characteristics of each genotype, but, while the first can vary between P supplies, the second is constant for each genotype. Differences among genotypes showed that Chaqueño INTA and Buck Candisur only differ in the first component, while Las Rosas INTA differs in its smaller production-distribution of biomass. This analysis showed that Las Rosas INTA had the smallest, Chaqueño INTA intermediate and Buck Candisur the largest SARP. The different rank order obtained for the genotypes according to their internal P concentration or SARP brings into question the adequacy of this last parameter as an estimator of P use efficiency in high P supplies. Another reason for doubting the use of SARP as an estimator of the nutritional efficiency (when it is estimated during short times scale, i.e. hours) is its variability during the light-darkness cycle. Finally, P influx (flux that is only possible to measure in lapses of 20') is the more variable parameter. Besides, it is affected by P supply and shows great variation between experimental units, being affected by light-darkness cycles and plant age. In this group of factors the genotypic variability, contributed by the six genotypes studied, was practically null. They were no correlations found between P influx with the SARP or with the internal P concentration; however, it could be observed that it decreases in 5 and 0.1 and increases in 0.05 mol .mˉ³ of P with biomass increase. The results demonstrate the inadequacy of the employment of short time estimation of P fluxes as efficiency estimators in conditions of high availability of this nutrient.

Magdaleno, Anahí. "Evaluación de la calidad de las aguas del río Matanza-Riachuelo (Buenos Aires, Argentina), mediante estudios limnológicos y bioensayos algales." (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Durante el período septiembre 1996 a noviembre 1997, se investigó la evolución de algunos parámetros bióticos y abióticos del río Matanza-Riachuelo (Pcia. de Buenos Aires). Este río atraviesa zonas con diversos usos del suelo, entre ellas, áreas urbanas muy contaminadas. Los muestreos se llevaron a cabo mensualmente en cinco estaciones diferentes. Se estudió la estructura y dinámica del fitoplancton además de las propiedades físicas y químicas del agua. El fitoplancton estuvo dominado por grupos Cyanophyceae, Chlorophyceae (en su mayoría Chlorococcales) y Bacillariophyceae (principalmente diatomeas céntricas), encontrándose las mayores densidades químicas más relevantes fueron los niveles extremadamente bajos de oxígeno disuelto y las elevadas cantidades de nutrientes, materia orgánica y cloruro presentes en el agua. Los metales pesados superaron los niveles guía para la protección de la vida acuática según estándares internacionales y la Ley Nacional de Residuos Peligrosos. Se realizaron bioensayos de inhibición del crecimiento algal con la especie estándar Selenastrum capricornutum Printz (Clase Chlorophyceae, Order Chlorococcales) con el fin de monitorear la calidad del agua y detectar toxicidad por metales pesados con el agregado de un quelante fuerte como el EDTA. En varias muestras, donde las concentraciones de metales fueron muy bajas, se obtuvo inhibición del crecimiento algal, mientras que en otras muestras donde las concentraciones de metales fueron muy altas, no se observó inhibición. Estos resultados indican la presencia de factores mitigantes en el agua tales como sustancias complejantes y la posibilidad de procesos de sinergismo y antagonismo entre los contaminantes presentes en las muesrtas. El único metal que mostró una correlación positiva con los porcentajes de inhibición obtenidos fue el níquel. En una segunda etapa se realizaron bioensayos con cuatro cepas de algas nativas aisladas de este río y pertenecientes a la Clase Chlorophyceae, Orden Chlorococcales. La finalidad de estos estudios fue establecer la resistencia a los metales cobre, cadmio y zinc. La especie más sensible fue Ankistrodesmus fusiformis, mientras que las más resistentes fueron Chlorella ellipsoidea, Scenedesmus acuminatus y Monoraphidium contortum.

Abstract:
The evolution of several biotic and abiotic parameters of the Matanza-Riachuelo River (Buenos Aires) were studied from September 1996 to November 1997. This river runs through areas with diverse land uses, some of them urban and very polluted. Sampling took place monthly in five diferent sites along the main course of the river. The structure and dynamics of the total phytoplankton population and the physical and chemical porperties of the water were determined. Rhe phytoplankton was dominated by Cyanophyceae, Chlorophyceae (more representated by Chlorococcales) and Bacillariophyceae (more representated by centric diatoms) being the two first the highest in the most pulled areas of the river basin. Low levels of dissolved oxygen, and high concentrations of nutrients, organic matter and chloride were the most outstanding physico-chemical characteristics in the water. Heavy metals concentration levels exceeded the concentration limits stablished by international parameters and the Argentine Hazardous Waste Law Safe to protect aquatic life. Growth inhibition test using the standard alga Selenastrum capricornatum Printz (Chlorophyceae, Chlorococcales) were made to monitor the water quality and to detect toxicity by heavy metals utilizing a strong chelant agent such as EDTA. Several samples with low heavy metals concentration showed algal inhibition growth, while other samples with higher levels of metals showed no inhibition. These results indicated the presence of mitigating factors like complex substance and the possibility of synergistic and antagonistics processes among the contaminants present in the water. The only metal the showed a positive correlation with the percentages of inhibition was nickel. In a second stages, bioassays with four strains of native algae isolated from this river and belonging to the Class Chlorophyceae, Order Chlorococcale were made made to establish resistance to cooper, cadmium and zinc. The most sensitive strain was Ankistrodesmus fusiformis, while the most resistance were Chlorella ellipsoidea, Scenedesmus ocuminatus y Monoraphidium cantortum.

López, Ana Graciela. "Predicción de la biodisponibilidad y bioacumulación de cadmio asociado a partículas de sedimentos" (2004). Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Litvak, Vanesa D.. "Evolución del volcanismo terciario en el Valle del Cura sobre el segmento de subducción horizontal pampeano, Provincia de San Juan" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La integración de los rasgos geológicos, petrológicos y geoquímicos, sumada al análisis de la información aeromagnética, permitió delinear la génesis y evolución del volcanismo terciario del Valle del Cura. Su historia magmática está representada por seis eventos eruptivos acontecidos desde el Paleoceno al Mioceno superior. Durante el Paleoceno, el volcanismo está representado por los Basaltos Río Frío; son manifestaciones volcánicas afíricas y alcalinas, con signaturas de intraplaca en un ámbito extensional y sin influencia del arco volcánico, que se encontraba a unos 200 km al oeste. Estas lavas son resultado del rápido ascenso, a través de una corteza adelgazada, de fundidos primarios generados a profundidad como consecuencia de bajos porcentajes de fusión de porciones enriquecidas del manto litosférico. Para el Eoceno, se generó en la región una cuenca de retroarco dentro de un régimen extensional, donde se depositó una secuencia volcanosedimentaria sin-orogénica. Bajo estas condiciones de corteza atenuada y anomalías térmicas, subplacados basálticos favorecieron la fusión de material cortical y en consecuencia la génesis de un volcanismo de composición dacítico a riolítico: la Formación Valle del Cura. Estas rocas presentan signaturas químicas de retroarco, alto contenido en elementos litófllos y un marcado enriquecimiento isotópico, en relación con el resto de la secuencia volcánica terciaria. Este magmatismo ácido presenta dos tipos litológicos: los primeros fundidos generados son de alta temperatura y alta viscosidad, que resultó en una eruptividad flsural y formación de ignimbritas de alto grado; los segundos son fundidos de mayor permanencia en la corteza y resultaron en un volcanismo explosivo, con depósitos de flujo piroclástico y la formación de una caldera en la cordillera de la Brea. El Oligoceno superior marcó el inicio de un magmatismo de arco en el Valle del Cura, representado por el Grupo Doña Ana: comenzó con facies ignimbríticas ácidas y lavas mesosilíceas — Formación Tillito- que luego evolucionaron a un volcanismo basandesítico a andesítico —Formación Escabroso—.Ambos grupos de rocas se caracterizan por sus rasgos químicos y petrográflcos típicos de volcanitas calcoalcalinas, derivadas de fundidos originados por fusión en la cuña astenosférica en el marco de una corteza de espesor normal (30-35 km); con un centro eruptivo reconocido en la cordillera del Zancarrón. La cuenca de depositación oligocena evolucionó dentro de un contexto extensional que favoreció la generación de un volcanismo máfico de retroarco representado por los Basaltos Las Máquinas. Sus rasgos geoquímicos muestran una afinidad alcalina y de intraplaca, pero con una importante influencia del coetáneo arco volcánico. Como respuesta a la subhorizontalización de la placa de Nazca, se produce la migración del arco volcánico y para el Mioceno medio a superior se ubicó en la actual posición del Valle del Cura. La Formación Cerro de las Tórtolas representa el pico de magmatismo andesítico y dacítico que caracterizó, local y regionalmente, a este sector de los Andes. Esta eruptividad resultó en la formación de domos y estratovolcanes como los volcanes Cerro de las Tórtolas, Vacas Heladas y el nuevo centro de emisión identificado en la cordillera del Zancarrón. En esta unidad se reconocen dos etapas: la sección inferior (16-14 Ma) representa fundidos que se equilibraron a una profundidad con fases residuales indicativas de una corteza de espersor normal (30-35 km) y la sección superior (13-10 Ma) cuyas relaciones de tierras raras indican una fase residual granatífera, lo que evidencia una mayor profundidad de generación, en una corteza engrosada de 50 km. El enriquecimiento isotópico de las lavas, desde la sección inferior hacia la superior, también registra el incremento de los aportes corticales en la génesis de los fundidos. Estas volcanitas permanecieron en cámaras magmáticas intermedias de similar profundidad, estimada en 14 a 15 km para la sección inferior, y en 15 a 17 km para la superior. En estas condiciones, los minerales se equilibraron en un rango de temperatura y presión entre 720° y 820°C, y 4,5 y 5,5 kb, respectivamente. Como parte del volcanismo mioceno medio, se incluyen a las ignimbritas dacíticas de la Formación Tambo, ya que conjuntamente con las lavas de la sección superior de la Formación Cerro de las Tórtolas, marcan el quiebre en el comportamiento químico e isotópico del volcanismo terciario del Valle del Cura. En conjunto representan el volcanismo desarrollado bajo las condiciones de máxima compresión. Las últimas manifestaciones volcánicas corresponden a las Ignimbritas Vacas Heladas, de composición dacítica; poseen signatura de arco, pero fundamentalmente evidencian una importante participación de material cortical: presentan el mayor enriquecimiento isotópico de toda la secuencia volcánica del arco terciario. Luego de estas manifestaciones volcánicas y como respuesta a la subhorizontalización de la losa subducida, cesó la actividad volcánica en el Valle del Cura.

Abstract:
Evolution of tertiary volcanism in the Valle del Cura over the Pampean flat-slab, San Juan Province. The genesis and evolution of tertiary volcanism in the Valle del Cura was established by the integration of its geological, geochemical and petrological features, plus the aeromagnetic data analysis. The magmatic history is represented by six eruptive events that occurred from the Paleocene to the upper Miocene. The Basaltos Río Frío represents the volcanic activity during the Paleocene; they are alkaline and aphiric volcanites with extensional and intraplate chemical signatures, without influence of the volcanic arc located 200 km to the west. These lavas resulted from primary deep magmas that were fastly erupted through a thin crust and generated by low melting degrees of enriched portions of lithospheric mantle. During the Eocene an extensional retroarc basin was developed and filled with a synorogenic volcanosedimentary sequence. Therefore, the thin crust and thennal anomalies environment was favorable for basaltic underplating and melting of the crust; hence the genesis of a dacitic and ryholitic volcanism: the Valle del Cura Formation. These rocks present retroarc chemical signatures, high contents of lithophiles elements, and an isotopic enrichment in comparison with the remaining tertiary volcanic sequence. This acid magmatism has two different líthologies: the first melts had high temperature and viscosity and derived in high grade ignimbrites associated to fisural eruptivity; the second melts resulted in explosive volcanism, piroclastic flows and the caldera structure in the cordillera dela Brea. An arc magmatism started at the Oligocene, which is represented by the Doña Ana Group. It began with acid ignimbrites facies and mesosiliceous lavas —theTillito Formation- that evolved to a basandesitic and andesitic volcanism —the Escabroso Forrnatíon—. Both units have petrographical and geochemical calcoalkaline features, and are the result of melting in the asthenospheric wegde beneath the main arc in a thin crust (35 km); they are related to a eruptive center recognized in the cordillera del Zancarrón. This extensional oligocene basin was favorable for retroarc mafic volcanism represented by the Basaltos Las Máquinas. Its geochemistry signature shows an alkaline and intraplate afinity, but with a strong influence of the contemporary volcanic arc. As a result of the shallowing of the downgoing slab of the Nazca plate, the volcanic front migrated, and by the middle Miocene it was located over the Valle del Cura area. The Cerro de las Tórtolas Formation represents the main event of andesitic and dacitic volcanism that characterized, locally and regionally, this area of the Andes. This volcanic activity was responsable for the formation of domes and stratovolcanoes, as the Cerro de las Tórtolas and Vacas Heladas, and the new eruptive center identified in the cordillera del Zancarrón. Two stages are recognized in this unit: the lower section (1614 Ma) represents melts that were equilibrated at depth with residual phases associated with a crust of normal thickness (30-35 km); while the upper section (13-10 Ma) has rare earths relationships indicating a granatiferous residual phase, and therefore a deeper site of magma generation in a thick crust of 50 km. The increase in the isotopic enrichment of the lavas, from the lower section to the upper section, also shows the increase of crustal contributions during the genesis of the magmas. These volcanítes were storaged in intennediate magmatic chambers of similar depth, estimated in 14 to 15 km for the lower section, and 15 to 17 km for the upper one. Under these conditions, the mineral assambleges were equilibrated in a temperature and pressure range of 720°—820°C and 4,5-5,5 kb, respectively. The dacitic ignimbrites of the Tambo Formation are also included in the middle Miocene volcanism because together with the upper section of the Cerro de las Tórtolas Formation indicate the break in the chemical and isotopic behaviour of tertiary volcanism in the Valle del Cura. Both units represent the volcanism developed under the highest compressional conditions. The Ignimbritas Vacas Heladas represent the last volcanic activity. These dacitic ignimbrites have arc-like signatures, but mainly show high crustal contributions: they are the most isotopicaly enriched lavas of all the tertiary volcanic-arc sequence. After these dacitic and ryholitic volcanism, and as a response of the flattening of the subducting slab, the volcanic activity ended in the Valle del Cura.

Lia, Verónica V.. "Diversidad genética y estructura poblacional en razas nativas de maíz (Zea mays ssp. mays) del Noroeste Argentino: presente y pasado del germoplasma autóctono" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El maíz, Zea mays ssp. mays, es uno de los cultivos más importantes de América y ha estado vinculado con la actividad humana desde los inicios de la agricultura. Su distribución abarca todo el continente, encontrándose en una amplia gama de ambientes tanto en sus formas comerciales como nativas. En la República Argentina, las razas nativas exhiben una gran variedad ecológica y morfológica; sin embargo, la caracterización genética del germoplasma autóctono es casi inexistente. Estudios previos realizados en razas nativas del Noroeste Argentino (NOA) revelaron la existencia de una correlación positiva entre cromosomas B y altitud, sugiriendo un significado adaptativo para ests elementos supernumerarios. Con el Objeto de describir la diversidad genética de razas nativas y estudiar la dinámica poblacional sobre el gradiente altitudinal descripto, se examinaron los patrones de variación de 18 loci microsatélites. Tres de estos loci fueron analizados en ejemplares arqueológicos del NOA a fin de establecer su relación con las razas actuales. Los resultados del presente estudio permiten concluir que: 1) las razas nativas del NOA representan una fuente importante de diversidad para ampliar la base genética de los programas de mejoramiento; 2) los ejemplares arqueológicos son más afines a las razas pertenecientes al complejo Andino, que a otras razas actuales de la región; 3) procesos selectivos determinan el mantenimiento del gradiente altitudinal de cromosomas supernumerarios.

Abstract:
Maize, Zea mays ssp. mays, is the principal domesticated crop of the New World. Its many cultivars and landraces are currently adapted to a broad range of environments from Canada to Argentina. In spite of the morphological and ecological diversity of argentinian landraces, no attempts have been made to date to determine the extent of genetic variation within local germplasm. Previous studies have shown a positive correlation between altitude and B chromosome frequencies in several landraces from NW Argentina, wich suggests that supernumerary elements may be subject to selective pressures. The patterns of variation of 18 microsatellite loci were examined in order to assess the genetic diversity and population dynamics along the above mentioned cline. Three microsatellite loci were also used to determine the affiliations of archeological specimens to extant landraces. Three main conclusions can be drawn from the present study: 1) the landraces of NW Argentina are a valuable source of diversity to enlarge the genetic basis of breeding programs; 2) the archeological specimens are more closely related to the races og the Andean Complex, than to any of any of the other races examined; 3) selection plays a role in the maintenance of the altitudinal cline of B chromosomes.

Lazo, Darío Gustavo. "Análisis de concentraciones fósiles del cretácico inferior de Cuenca Neuquina" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El análisis tafonómico y paleoecológico del contenido fosilífero de la Formación Agrio del Cretácico Inferior es un tema potencialmente relevante para el conocimiento del mesozoico mundial que nunca había sido abordado. Dicha unidad se caracteriza por presentar concentraciones fósiles dominadas en abundancia por organismos bentónicos dentro de los que se destacan corales, serpúlidos, bivalvos y gastrópodos. Dichos organismos coocurren con amonites lo cual permite ubicarlos estratigráficamente en forma muy precisa. En este trabajo se analizaron con sumo detalle tres perfiles clásicos del Miembro Inferior o Pilmatué de la Formación Agrio ubicados en la unidad oriental de los Andes neuquinos o faja plegada y corrida del Agrio, entre Chos Malal y Zapala. Los perfiles se encuentran sobre una transecta norte-sur que abarca 44,2 km de distancia. El estudio de más de 3800 especímenes en campo y laboratorio ha permitido avanzar en el conocimiento de la sistemática y paleoecología de dichos organismos. Se han identificado dos especies de corales coloniales, dos especies de serpúlidos, 33 taxones de bivalvos y tres especies de gastrópodos. La estructura trófica del bentos está ampliamente dominada por organismos suspensívoros mientras que el hábito de vida más común es el de los bivalvos cavadores someros. Estos datos junto a un análisis de litofacies y tafofacies ha permitido la reconstrucción de biofacies con significado paleoambiental. El análisis litofacial reveló que el Miembro Pilmatué en la zona de estudio fue depositado en un ambiente de shoreface-plataforma influido por tormentas sin quiebres de pendiente hacia el offshore. El análisis tafofacial demostró que la mayoría de las tafofacies son autóctonas o ligeramente parautóctonas y que el grado de transporte lateral fue nulo o bajo. La mezcla temporal de las concentraciones fósiles es variable ya que se han registrado asociaciones de censo con mínima mezcla temporal (días-años) y asociaciones promediadas dentro del hábitat y condensadas ambientalmente con un promedio temporal menor a 0,5 Ma. Se distinguieron siete biofacies o palecomunidades incluyendo bioconstrucciones de ostras y serpúlidos gregarios. Dos de ellas son exclusivas del shoreface arenoso aunque pueden aparecer retransportadas hacia la zona de transición por tormentas. Otras dos son únicas de fangos de la zona de transición mientras que el resto pueden aparecer tanto en la zona de transición como en la plataforma media-externa aunque con una menor representación en ésta última. La zona de transición alojó a la mayor parte de las biofacies lo cual probablemente refleja que tenía una mayor heterogeneidad ambiental con respecto al shoreface o a la plataforma media-externa. La distribución vertical de las biofacies no es aleatoria y se demostró que depende de los cambios relativos del nivel del mar. Por lo tanto las biofacies pueden ser utilizadas en la identificación de cortejos sedimentarios dentro de secuencias deposicionales.

Abstract:
Although potentially relevant to world mesozoic taphonomic and paleoecologic analysis of the fossil content of the Lower Cretaceous Agrio Formation had never been done. This unit is characterised by abundant fossil concentrations dominated by macrobenthic invertebrates such as corals, serpulids, bivalves and gastropods. Stratigraphic occurence of benthic elements was accurately dated by a refined ammonite zonation in the Agrio Formation. Systematic and paleoautoecologic data has been combined with detailed taphonomic and sedimentological logging to reconstruct macrofossil biofacies or paleocommunities. Three sections of the Lower or Pilmatué Member of the Agrio Formation were studied in central north Neuquén province between Chos Malal and Zapala. Studied sections are situated on a north-south line of 44.2 km. Analysis of more than 3,800 specimens in the field and laboratory allowed to identify two species of colonial corals, three species of serpulids, 33 bivalve taxa and three species of gastropods. The trophic nuclei is clearly dominated by suspension feeders while asiphonate shallow burrowing is the most common life habit. The depositonal system is interpreted as a storm influenced homoclinal shoreface to shelf environment. Taphonomic analysis showed that most fossil associations are autochthonous or slightly parautochthonous with no significant lateral transport. Census, within-habitat time-averaged and environmentally condensed assemblages were identified. Time scales of fossil accumulation span from days-years up to 0,5 My. Seven paleocommunities were recognised including serpulid and oyster bioherms. Two of them are high diverse and typical from the sandy shoreface though they can be offshore transported by storms. Two others are typical from the muddy inner platform while the rest occur in muds both in the inner and middle-outer platform. The inner platform accommodated most of the paleocommmunities due probably to diverse environmental conditions contrasting to an environmentally homogeneous shoreface. Macrofossil associations have proved to be useful for resolving depositional sequences of the Pilmatué Member because of a good correlation between particular faunal associations and systems tract character. Vertical paleocommunities succession closely follows changes in relative sea-level within depositional sequences and they can be a useful tool in sequence stratigraphy.

Lavista Llanos, Sofía. "Control de la respuesta transcripcional a hipoxia en Drosophila melanogaster, por las proteínas de la familia bHLH-PAS: Similar y Tango" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En mamíferos, se ha demostrado que el factor de transcripción hetero-dimérico bHLH-PAS - Hypoxia Inducible Factor (HIF) - es un regulador clave de la respuesta a hipoxia induciendo la expresión de genes regulada por oxígeno. En esta tesis demostramos la existencia de un sistema homólogo en Drosophila, y caracterizams su actividad in vivo durante el desarrollo. Usando reporteros transcripcionales en moscas transgénicas mostramos que la actividad trancripcional inducible por hipoxia aumenta a lo largo del desarrollo resultando máxima hacia el final de la embriogénesis. Mostramos que los diferentes tipos celulares tienen distintos niveles de sensibilidad a hipoxia y que las células traqueales son más sensibles respondiendo a hipoxia suaves. Mostramos que las proteínas bHLH-PAS Similiar (Sima) y Tango funcionan como los homólogos de HIF-α y β respectivamente, y demostramos un modo conservado de regulación por oxígeno para Sima. La proteína Sima se indujo en hipoxia, mientras el nivel de su ARN mensajero no varió con la concentración de oxígeno. En experimentos de un pulso de expresión ectópica de Sima seguidos de una curva de tiempo vimos que Sima se estabiliza en hipoxia y que su degradación depende de oxígeno. La expresión ectópica continua de Sima superó su tasa de degradación permitiéndonos estudiar el control de su localización subcelular. Sima es mayormente citoplasmática en normoxia y la proteína transloca al núcleo únicamente en hipoxia, revelando una segunda etapa de activación regulada por oxígeno. Describimos que la localización subcelular de Sima se encuentra modulada por parámetros del desarrollo. Caracterizamos el mecanismo que gobierna la localización subcelular dependiente de oxígeno de Sima. Mostramos que Sima entra y sale continuamente del núcleo al citoplasma y caracterizamos la exportación nuclear de Sima, cuyo mecanismo involucra al receptor de exportación nuclear CRM-1/Embargoed y es dependiente de oxígeno. Mostramos que el factor supresor de tumores deVon Hippel Lindau (VHL) modula la exportación nuclear de Sima, la cual requiere la hidroxilación de un residuo de prolina específico (Pro850). Proponemos que la localización núcleo-citoplasmática de HIFα/Sima resulta de un quilibrio dinámico entre la importación y la exportación nuclear, siendo este último un proceso modulado por oxígeno.

Abstract:
In mammalian systems, the heterodimeric bHLH-PAS transcription factor - Hypoxia Inducible Factor (HIF) - has emerged as the key regulator of responses to hipoxia. In this thesis we defined a homologous system in Drosophila, and characterise its activity in vivo during development flies we show that hypoxia inducible activity rises to peak levels in late embryogenesis, and is most pronounced in tracheal cells. We show that the bHLH-PAS protein Similar (Sima) and Tango function as HIF-α and β homologues respectively, and demonstrate a conserved mode of regulation for Sima by oxygen. Sima protein, but not its mRNA, was upregulated in hypoxia. Time course experiments following pulsed ectopic expression demonstrated that Sima is degraded in normoxia. Continuous ectopic expression over-rode Sima degradation which remained cytoplasmic in normoxia, and translocated to the nucleus only in hypoxia, revealing a second oxygen regulated activation step. We also show that Sima shuttles continuously between the nucleus and the cytoplasm. We characterized nuclear export of Sima which occurs through a mechanism that involves the nuclear export receptor CRM1/Embargoed and is oxygen-dependent. The Von Hippel Lindau (VHL) tumor suppressor factor modulates nuclear export of Sima, which requires hydroxylation of a specific prolyl residue (Pro850). We propose that HIFα/Sima nucleo-cytoplasmic localization is the result of a dynamic equilibrium between nuclear import and nuclear export, being the latter process modulated by oxygen tension.

Laporta, Cecilia. "Biología floral, de polinización y reproductiva del género Cassia (sensu lato; Caesalpiniaceae) en Argentina" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo de tesis se estudió la fenología, morfología general, producción polínica, sistema reproductivo, factores que afectan la polinización y comportamiento de visitantes florales en 14 especies del género Cassia s.l. (Caesalpiniaceae) en Argentina (pertenecientes actualmente a los géneros Senna K. Bahuin y Chamaecrista Moench). Los trabajos de campo y laboratorio permitieron cumplir con los siguientes objetivos: 1) Establecer los factores abióticos y bióticos implicados en la polinización efectiva de las especies, el sistema reproductivo y de compatibilidad que presentan y las asociaciones especie-polinizador; 2) Investigar la respuesta de los polinizadores a la heterandria, enantiostilia y mimetismo de anteras, asociadas a la polinización vibrátil en este grupo; 3) Determinar el alcance de la biología floral, de polinización y reproductiva para evaluar cambios taxonómicos efectuados en la Ser. Pachycarpae de Cassia s.l. Las principales conclusiones indican: a- Todas las especies son estrictamente dependientes de los insectos para la polinización. No hay producción de frutos si se excluyen los polinizadores. b- Los índices teóricos Polen/Ovulo indican xenogamia como sistema reproductivo para todas las especies. Pero los resultados de los tratamientos de polinización manuales y el comportamiento de los insectos demuestran que la autogamia y geitonogamia también son posibles en condiciones naturales. c- Distintas combinaciones de tamaño y abundancia de polinizadores, distancia entre plantas, número de visitas y tipo de enantiostilia determinan tendencias hacia la xenogamia, geitonogamia o autogamia. d- La enantiostilia y la heterandria actúan conjuntamente en disminuir la utilización del polen destinado a cruzamientos xenógamos en cruzamientos geitonógamos. e- Las especies de Chamaecrista presentan un mecanismo de polinización más eficiente que el de las de Senna, reforzado por fuertes sistemas de incompatibilidad. f- El parasitismo por individuos de Bruchidae es un factor importante que contribuye a la pérdida post-fertilización de semillas. Esto, sumado a la gran proporción de óvulos que no se fecundan, arroja porcentajes bajos de semillas que darán lugar a la nueva generación, crítico en las especies autocompatibles de Senna Sección Peiranisia, que presenta endemismos.

Abstract:
I studied the flowering phenology, general morphology, pollen production, reproductive system, factors affecting pollination and behaviour of the visitors for 14 selected species of the genus Cassia s.l. (Caesalpiniaceae) in Argentina, which nowadays belong to the genus Senna K. Bahuin and Chamaecrista Moench). Field and laboratory studies allowed to achieve the following goals: 1) To establish the biotic and abiotic factors that affect the effective pollination of the species, their reproductive and compatibility system and the pollinator-species associations; 2) To investigate the answer of pollinators to enantiostily, hetheranthery and mimetic anthers, associated with the buzz pollination syndrome of the group; 3) To determine the power of the floral, reproductive and pollinating biology as a taxonomic tool on evaluating the last taxonomical changes performed in Ser. Pachycarpae of Cassia s.l. The main conclusions are: a. All species are strictly dependent on insects for pollination. They set no seeds if pollinators are excluded. b. Pollen/ovule ratios indicate xenogamy as the main reproductive system for all the species treated; but artificial pollinating treatments as well as the behaviour of the insects show that geitonogamy and autogamy are also possible in natural conditions. c. Different arrangements of distance between plants, size of pollinators, amount of visits and the kind of enantiostily determine a tendency towards xenogamy, geitonogamy or autogamy. d. Hetheranthery and enantiostily contribute together limiting pollen discounting, that is, limiting the amount of pollen used in geitonogamous matings that should participate in outcrossing opportunities. e. Chamaecrista spp. show a more efficient pollinating mechanism than those of Senna spp., supported by strong genetic incompatibility systems. f. Parasitism from larvae of Bruchidae imply a high loss of post-fertilized seeds. Aditionally, as the number of fertilized ovules is low, the amount of seeds that will contribute to the next generation is critical, especially in the self-compatible species of Senna Sect. Peiranisa, that shows endemisms.

Kovalsky, Marcelo G.. "Dinámica de un láser de Ti: Zafiro de femtosegundos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El láser de Ti:Zafiro es la fuente más difundida de pulsos ultracortos en la actualidad. No obstante, y pese a su amplia difusión en vastos campos de aplicaciones, numerosos aspectos de su comportamiento permanecían poco explorados. El presente trabajo está dirigido a un estudio exhaustivo de la dinámica del láser de Ti:Zafiro con mode locking por efecto Kerr. Por un lado se desarrolla un modelo teórico basado en mapas iterativos. Los modos de operación conocidos del láser son naturalmente obtenidos con el mapa que tiene como variables el tamaño del haz, curvatura, duración de pulso, chirp y energía. Se obtienen las regiones de estabilidad de cada modo y se determinan sus comportamientos característicos. Por otro lado se determinan experimentalmente las propiedades estructuralmente estables predichas por el modelo, encontrando pleno acuerdo entre la experiencia y el modelo de mapas. Se muestra experimentalmente que las inestabilidades pulso a pulso en la salida del láser son usuales y pueden afectar alguna de las variables dejando inalteradas las otras. Se describe una forma simple de detectarlas y eliminarlas. A partir de la obtención experimental de series temporales de mode locking de los dos modos pulsados del láser se confirma que el comportamiento del láser responde al caos deterrninístico de baja dimensión y se determina, para cada modo, su ruta al caos. De las series temporales generadas por el mapa se obtienen los mismos atractores que los hallados experimentalmente. Como aplicación de los conocimientos generados se propone un algoritmo de control del caos que permite optimizar las prestaciones del láser, reduciendo la duración de pulso a valores cercanos a los lOfs.

Abstract:
The Ti:Sapphire laser is the most widely used source of femtosecond pulses. However, and in spite of its applications in many fields of science, several of its dynamical properties remain poorly known. In this work an exhaustive study of the dynamics of the Kerr - lens mode locked Ti:Sapphire laser is presented. On the one hand, a theoretical model based on iterative maps is developed. The observed modes of operation are naturally obtained from a description based on an iterative map of five pulse variables, beam size, curvature, pulse duration, chirp and energy. The stability regions for each mode are obtained as well as its characteristic behaviors. On the other hand, the structurally stable properties of the system are experimentally found, observing a good agreement between the experiment and the model. It is experimentally shown that pulse to pulse instabilities in the output of the laser are usual and they can affect some of the pulse variables and not others. A simple way to detect and eliminate the instabilities is described. Experimental time series of the two pulsed model are obtained. From this series the chaotic low dimensional deterministic behavior is confirmed and the route to chaos in each case is established. The same attractors are obtained from the simulated series. As an application of the model, an algorithm of control of chaos that allows reach shorter pulse duration, close to lO fs, is presented.

König, Guido Alberto. "Desarrollo de un sistema de vigilancia epidemiológica molecular para el virus de la fiebre aftosa" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La fiebre aftosa es una enfermedad que provoca importantes trabas en el comercio internacional y en el desplazamiento de animales en las zonas afectadas. El agente etiológico de la enfermedad es el virus de la fiebre aftosa (VFA). El avance de la Epidemiología Molecular en los últimos años ha facilitado la caracterización de las cepas que circulan en un brote y permite la determinación del probable origen y evolución del mismo. Con el objeto de estudiar los brotes surgidos en Sudamérica y especialmente en la Argentina en los últimos 15 años, se amplificó por trascripción reversa asociada a la reacción en cadena de 1a polimerasa (RT-PCR) y se secuenció la región nucleotidica que codifica para la proteína VP1 de 94 muestras del VFA. En el período 2000-2002 se identificaron y caracterizaron las dos cepas virales responsables de los brotes de serotipo A (A Argentina 2000 y A Argentina 2001) y las dos variantes del virus responsable de los brotes de serotipo O (O Argentina 2000). Asimismo se determinó la cocirculación viral de distintas cepas del VFA para los serotipos A, O y C en el período 1990-1994. Además se establecieron las relaciones filogenéticas dentro del topotipo Europeo-Sudamericano de cada uno de los serotipos y se elaboró una clasificación interna de los topotipos. Finalmente se creó un banco de secuencias nucleotïdicas de la proteína VP1 de los aislamientos sudamericanos y se optimizó la metodología molecular a utilizar en la caracterización del VFA, en casos de emergencias sanitarias en el país.

Abstract:
Foot and Mouth disease causes significant loses in international trade and animal movements in affected areas. The etiologic agent of the disease is the Foot and Mouth Disease Virus (FMDV). The progress of Molecular Epidemiology on past years allowed the characterization of an outbreak and the discrimination of his origin and evolution. The nucleotide VP1 coding region of 94 samples of FMDV were amplified by reverse transcription and polimerase chain reaction (RT-PCR)and sequenced. These isolates belong to South America, but most of them were obtained from Argentina in the last 15 years. In 2000-2002 period, two strains responsible for serotype A outbreaks, have been identified (A Argentina 2001 and A Argentina 2000). Also, two variants of the virus liable to serotype O outbreaks were recognized (O Argentina 2000). Viral co circulation of different serotypes A, Oand C stains has been detected on 1990-1994 years. Moreover, phylogenetic relationships have been established inside the Europe-South American topotype of each serotype and an internal classification has been established. Finally, in case of a new outbreak of the disease, a VP1 nucleotide sequence database of South-American isolates has been built up. Also, the molecular methodology has been optimised in order to characterize the FMDV strain.

Kleiman, Florencia. "Fasciola hepática (Trematoda: Digenea) en ganado bovino de los valles cordilleranos patagónicos: factores involucrados en su transmisión." (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La fasciolosis, causada por Fasciola hepatica, es una de las enfermedades parasitarias de mayor importancia para la actividad ganadera por que produce considerables pérdidas económicas a escala mundial. Con el objetivo de caracterizar la transmisión en un área de alta endemicidad como son los valles cordilleranos patagónicos, se realizaron estudios en un establecimiento ganadero de la localidad de Cholila, Chubut, entre diciembre de 1998 y febrero de 2002. Se identificó al caracol que actúa como hospedador intermediario de F. hepática, se caracterizaron los ambientes donde se desarrolla y se estudió su dinámica temporal en relación con las condiciones climáticas de la zona. Se estimaron las prevalencias en el hospedador intermediario y en el hospedador definitivo por observación directa del parásito y por métodos coprológicos, respectivamente. Se recopiló información sobre el tiempo de permanencia del ganado en cada ambiente. Lymnaea viatrix resultó ser la única especie de la familia Lymnaeidae presente en el área de estudio. El hallazgo de esta especie a latitudes superiores a los 41° S amplía su rango de distribución austral mundial. Se comprobó que L. viatrix puede desarrollarse en cualquier cuerpo de agua (Temporal o permanente) que presente parches poro disturbados, con el suelo de barro cubierto por una delgada película de agua y escasa vegetación. Los caracoles hibernaron durante el invierno, entraron en actividad durante la primavera, ovipusieron a comienzos del verano y luego los individuos de mayor tamaño murieron a comienzos del otoño. Esta dinámica se vió fuertemente afectada por la disponibilidad de agua en el suelo. Se registró infección por F. hepática durante todo el estudio únicamente en caracoles adultos y las prevalencias fluctuaron entre 1 y 14%. Los caracoles parasitados sólo se detectaron en verano y otoño. La inflacipon en caracoles no estuvo relacionado con su abundancia en cada ambiente ni con su estructura de tamaños, pero se relacionó con el tiempo que el ganado estuvo pastando en cada ambiente. En el ganado, la prevalencia al comienzo del estudio resultó mayor en los animales jóvenes que en los adultos, y a pesar de que esta tendencia desapareció luego de tres años de tratamientos antihelmínticos, los niveles de infección general fueron cercanos al 50% en todo momento. La utilización de drogas no tuvo efecto sobre la prevalencia en el ganado ni redujo la cantidad de huevos eliminados al ambiente. Los resultados sigieren que el manejo sanitario basado en la aplicación de antihelmínticos no contribuyó a disminuir la proliferación del parásito en el ambiente, ya sea por una alta oferta de metacercaria todo el año o por una baja eficacia de las drogas. En el área de estudio, los noveles bajos de infección en caracoles mantienen altas prevalencias en el ganado, aún con la continua aplicación de antiparasitários. Debido a que la mejor estrategia de control es la que combina manejo ambiental con quimioterapia estratégicamente adecuada a las características de la transmición en cada región, la información microepidemiológica generada en este estudio puede ser útil para implementar una estrategia adecuada.

Abstract:
Fasciolosis in cattle, caused by Fasciola hepática, is a worldwide disease of major economical importance. The object of this thesis was to investigate the factors involved in the parasite transmission in a highly endemic area such as the Andean Valleys in Argentine Patagonia. Research was conducted in a livestock farm located in the Locality of Cholila, Chubut, between December 1998 and February 2002. Studies comprised the identification of the intermediate snail host, habitat characterization, and the relationship between temporal dynamics on the snail population and local climatic conditions. Parasite prevalences were estimated in snails and cattle grazing in each environment was registered. Lymneae viatrix was the only lymnaeid species in the study area and its finding south of parallel 41°S extends its distribution range. This snail occurred in temporary and permanent waterbodies with scarcely distribution patches of mud covered by a thin water layer and bare vegetation. Snails hibernated during winter, resumed activity in spring, oviposited at the beginning of summer and large-sized individuals died at the beginning of autumn. Population dynamics was strongly influenced by water availability in the soil. F. hepatica was only detected in adult snails during summer and autumn, and prevalences ranged from 1 to 14%. Snail infection was not related with snail abundance or size structure, and was related to the duration of cattle grazing in each environment. At the beginning of the study prevalence in cattle was higher in young animals than in older ones, and although this tendency disappeared after three years of anthelmintic treatment, values remained high in both groups of animals. Overall infection levels were about 50% throughout the study. Anthelmintic drugs has no effect on cattle prevalence or on the reduction of egg-shedding. Results suggest that sanitary management based on anthelmintics did not diminish parasite build-up in the environment, either by a high offer of metacercariae all year round or lack of chemotherapy efficacy. Low infection prevalences in snails were responsible for high levels of infection in cattle, despite the continuous administration of anthelmintics. On the basis that the best control strategy should combine environmental management with chemotherapy adapted to the particular regional features, micro-epidemiological information provided herein would contribute to limit looses in live-stock.

Kaufman Bernadó, María Marina. "Emisión de rayos gamma en microcuásares" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los microcuásares son sistemas de binarias de rayos x que pueden generar jets relativistas y que fueron descubiertos en nuestra Galaxia en la última década del sigle XX. Su nombre indica que junto con los cuásares son manifestaciones de la misma física pero en una escala muy diferente. Paralelamente a este descubrimiento, el instrumento EGRET a bordo del Observatorio Compton de Rayos Gamma, detectó 271 fuentes puntuales de rayos gamma de las cuales 170 no pudieron ser claramente identificadas con ningún objeto conocido. Esto marcó el comienzo del estudio de poblaciones de rayos gamma en nuestra Galaxia. En esta tesis se presentan modelos para la producción de rayos gamma en microcuáceres, con el objetivo de mostrar que pueden ser responsables de algunos subgrupos de fuentes EGRET no identificadas. Estos modelos son desarrollados para una variedad de escenarios posibles tomando en cuenta distintas combinaciones, i.e. agujeros negros o estrellas de neutrones como el objeto compacto, estrellas compañeras de baja y alta masa, así como también procesos de producción de rayos gamma leptónicos o hadrónicos. Los modelos de emisión de rayos gamma en microcuásares aquí presentados, pueden ser usados para explicar también obsrvaciones en fuentes conocidas detectadas en rangos de energías diferentes que las de EGRET. Se incluye al final, una situación de producción de rayos gamma alternativa en objetos compactos que no involucra a los microcuásares, estudiándose una fuente EGRET no identificada en particular, a la que proponemos como asociada a un pulsar magnetizado con acreción.

Abstract:
Microquasars, X-ray binary systems that can generate relativistic jets, were discovered in our Galaxy in the last decade of the XXth century. Their name indicates that they are manifestations of the same physics as but on a completely different scale. Parallel to this discovery, the EGRET instrument on board of the Compton Gamma Ray Observatory, detected 271 points like gamma-ray sources from which 170 were not clearly identified with known objects. This marked the beginning of gamma-ray source population studies in our Galaxy. We present in this thesis models for gamma-ray production in microquasars with the aim to propose them as possible parent populations for different groups of EGRET unidentified sources. These models are developed for a variety of scenarios taking into account several possible combinations, i.e. black holes or neutron stars as the compact object, low mass or high mass stellar companion, as well as leptonic or hadronic gamma-ray production processes. We also show that the presented models for gamma-rays emitting microquasars can be used to explain observations from well known sources that are detected in energy ranges other than EGRET´s. Finally, we include an alternative gamma-ray producing situation that does not involve microquasars but a specific unidentified EGRET source possibly linked to a magnetized accreting pulsar.

Hochbaum, Daniel. "Una nueva función para un factor intercambiador de GDP/GTP" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Factores intercambiadores de GDP/GTP (GEFs), y sus proteinas G asociadas son piezas fundamentales en la maquinaria que transduce información desde el medio extracelular hacia respuestas específicas intracelulares. Entre ellas, la cascada de MAPKs, representa una via efectora ampliamente representada. De forma análoga a la activación de la vía ERK-1/2 dependiente de Ras, miembros de la familia Rho de proteínas G son capaces de activar la cascada de JNK, al ser cargado GTP, por sus correspondientes GEFs. En la búsqueda de nuevos reguladores de la actividad de JNK, hemos identificado a EPAC como un fuerte activador de JNK-1, EPAC (Exchange Protein Activated by CAMP) es un miembro de la creciente familia de GEFs que intercambian nucleótidos sobre la subfamilia Rap de proteinas G de Ia familia Ras. En la presente tesis, reportamos que mientras EPAC activa a JNK varias veces, una mutante constitutivamente activa de Rap1b (G12V), no es capaz, sugiriendo que Rap-GTP no es suficiente para transducir señales dependientes de EPAC hacia la activación de JNK. Es más, la señalización de EPAC a JNK no es bloqueada por la inactivación de Rap endógena, sugiriendo que la activación de Rap no es necesaria para esta respuesta. Consistentemente con estas observaciones, la utilización de mutantes que tienen delecionados dominios proteicos, muestran que el dominio catalitico GEF no es necesario para la activación de JNK mediada por EPAC. Estos estudios identificaron una región que se superpone con el dominio REM de EPAC, como crítico para la activación de JNK. De hecho, el dominio REM aislado es suficiente para activar JNK. Mediante a utilización de mutantes dominantes negativas de la cascada de JNK, hemos identificado a la familia Rho de pequeñas proteínas G como blanco de EPAC, en la activación de JNK. Incluso, una actividad intercambiadora de nucleótido para Rac y Cdc42, se encuentra presente en inmunoprecipitados de EPAC, sugiriendo la formación de un complejo entre EPAC y un putativo GEF para estas proteinas G. Concluimos que EPAC señaliza a la cascada de JNK a través de un nuevo mecanismo que no involucra su canónica acción catalitica, ej: intercambio de GDP/GTP sobre proteínas Rap. Esto representa no solo una nueva vía de activación de JNK, sino un mecanismo aún no descripto de señalización río abajo de EPAC.

Abstract:
Guanine Nucleotide Exchange Factors (GEFs) and their associated GTP binding proteins (G-proteins) are key regulatory elements in the signal transduction machinery that relays information from the extracellular environment into specific intracellular responses. Among them, the MAPK cascades represent ubiquitous downstream effector pathways. We have previously described that, analogous to the Ras-dependent activation of the Erk-1/2 pathway, members of the Rho family of small G-proteins activate the JNK cascade when GTP is loaded by their corresponding GEFs. Searching for novel regulators of JNK activity we have identified EPAC as a strong activator of JNK-1. EPAC (Exchange Protein Activated by CAMP)is a member of a growing family of GEFs that specifically display exchange activity on the Rap subfamily, of Ras small G-proteins. We report here that while EPAC activates the JNK several fold, a constitutively active (G12V) mutant of Rap1b does not, suggesting that Rap-GTP is not sufficient to transduce EPAC-dependent JNK activation. Moreover, EPAC signaling to the JNKs was not blocked by inactivation of endogenous Rap suggesting that Rap activation is not necessary for this response. Consistent with these observations, domain deletion mutant analysis shows that the catalytic GEF domain is dispensable for EPAC-mediated activation of JNK. These studies identified a region overlapping the REM domain as critical for JNK activation. Consistent with this, an isolated REM domain from EPAC is sufficient to activate JNK. Using dominant negative mutants of the JNK cascade, we identified the Rho family of small G proteins as a target for Epac mediated JNK activation. Indeed, an exchange activity towards Rac and Cdc42, is present in Epac immunoprecipitates, suggesting the formation of a complex between Epac and a putative GEF for these G proteins. We conclude that EPAC signals to the JNK cascade through a new mechanism that does not involve its canonical catalytic action, i.e. Rapspecific GDP/GTP exchange. This represents not only a novel way to activate the JNKs but also a yet undescribed mechanism of downstream signaling by EPAC.

González, Graciela E.. "Afinidades genómicas y mapeo cromosómico en maíz y especies relacionadas, a través de estudios de citogenética clásica y de hibridación in situ" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo de tesis tiene por objeto realizar estudios que permitan comprender la organización y diversificación genómica de las especies y subespecies del género Zea, los cuales brindarán nuevos datos en relación al origen alopoliploide del complejo, a las relaciones evolutivas de sus taxones y al origen del maíz domesticado. Con este fin, se realizaron distintos estudios de citogenética clásica y de Hibridación In Situ Fluorescente (GISH y FISH) en especies, subespecies e híbridos intra-e interseccionales. El análisis meiótico de los híbridos con 2n=20 cromosomas: Zea luxurians x Zea dip/operennís; Zea luxurians x Zea mays ssp. mays; Zea luxurians x Zea mays ssp. parvíglumis y Zea luxurians x Zea mays ssp. mexicana reveló anormalidades meióticas que explican la elevada esterilidad polínica de los mismos. Estas irregularidades pueden ser las determinantes del aislamiento reproductivo postcigótico entre las especies parentales. Por otra parte, en estos mismos híbridos se observó asincronía meiótica de dos grupos de 5 II cada uno durante diplotene-diacinesis, lo que sugiere la existencia de dos genomas ancestrales en las especies con 20 cromosomas. El análisis meiótico de los híbridos con 2n=30: Zea luxurians x Zea perennís y Zea mays ssp. mays x Zea perennís mostró que la configuración más frecuente en metafase I es de 5 trivalentes + 5 bivalentes + 5 univalentes. Este resultado junto con la asincronía observada en los híbridos de 20 cromosomas dan sustento a la hipótesis que sostiene que las especies del género son alopoliploides críptioos. El análisis GISH (Hibridación ln Situ Fluorescente usando sondas de ADN Genómico total) en estos mismos híbridos permitió distinguir el origen genómico de las configuraciones, y reveló que los bivalentes están formados por apareamiento autosindétióo entre genomas homeólogos de Zea perennís (2n=40) mientras que los univalentes provienen del genoma de la especie con 2n=20. Por otro lado, el mapeo FISH de genes ribosomales reveló que los mismos se encuentran localizados en los genomas parentales que presentan mayor homología. El análisis de las afinidades genómicas mediante GISH entre especies de la sección Luxuriantes y maíz reveló que Zea perennis presenta una importante divergencia genómica con respecto a las otras especies. De acuerdo a los patrones de hibridación se puede postular que uno de los genomas de esta especie aloctoploide es muy divergente, ya sea porque uno de sus antecesores era diferente, o bien porque ocurrieron divergencias genómicas a posteriori del proceso de especiación híbrida poliploide. Se realizaron experimentos de GISH hibridando cromosomas de maiz con sondas de ADN genómico total de las subespecies Zea mays ssp. parviglumis, Zea mays ssp. mexicana y Zea mays ssp. huehuetenanguensis. Se observó que Zea mays ssp. mays posee mucha mayor homología con Zea mays ssp. mexicana y Zea mays ssp. parviglumis que con Zea mays ssp. huehuetenanguensis. Sin embargo. mediante el uso de bloqueos genómicos, pudo revelarse que Zea mays ssp. mays y Zea mays ssp. parviglumis presentan importantes divergencias genómicas. Una de las teorías más aceptadas actualmente en relación al origen del maíz domesticado sostiene que el teosinte anual Zea mays ssp. parviglumis sería el antecesor directo del maíz moderno, debido a que éste es el que presenta mayor afinidad genética en marcadores isoenzimáticos y moleculares. Se discute esta teoría en base a los resultados obtenidos en este trabajo, y se propone que el origen de las divergencias con su probable progenitor podría deberse a diferencias en retroelementos o a procesos de especiación híbrida que habrían ocurrido durante la domesticación del maíz.

Abstract:
This work intends to make studies that allow understand the organization and genomic diversification of species and subspecies of the Zea genus, which will probably offer new insights in relation to the allopolyploid origin of the complex, to the evolutionary relationships of these taxa and to the origin of domesticated maize. With this aim, different studies applying classical and molecular cytogenetic techniques (Fluoresence In Situ Hibridization or FISH) in species, subspecies and hybrids were performed. The meiotic analysis of hybrids with 2n=20 chromosomes: Zea luxuríans x Zea diploperennis; Zea luxurians x Zea mays ssp. mays; Zea luxurians x Zea mays ssp. parvíglumis and Zea luxurians x Zea mays ssp. mexicana revealed meiotic abnormalities that explain the high sterility of such hybrids. Postzygotic reproductive isolation between parental species may be promoted by these meiotic irregularities. On the other hand, in these same hybrids, meiotic asyncrony of two groups of 5 bivalents each was observed during diplotene-diacinesis which suggests the existence of two ancestral genomes in the species with 20 chromosomes. The meiotic analysis of the hybrids with 2n=30: Zea luxurians x Zea perennis and Zea mays ssp. mays x Zea perennis showed that the most frequent configuration in metaphase I is of 5 trivalents + 5 bivalents + 5 univalents. This result along with asyncrony observed in the hybrids of 20 chromosomes, gives support to the hypothesis that maintains that species of the genus Zea are cryptic allopolyploids. GISH analysis (Fluoresence In Situ Hybridization using total Genomic DNA as a probe) in these same hybrids allowed to distinguish the genomic origin of meiotic configurations, and revealed that bivalents are formed by autosyndetic pairing between homeologous genomes of Zea perennis (2n=40) whereas the univalents come from the genome of the species with 2n=20. On the other hand, FISH mapping of ribosomal genes revealed that they are located in the parental genomes that display greater homology. The analysis of the genomic affinities by means of GISH between species of the Luxuriantes section and maize revealed that Zea perennis shows an important genomic divergence with respect to the other species. According to the hybridization pattern observed, it was postulated that one of the genomes of this alloctoploid species is very divergent, either because one of its ancestors belonged to a different species, or because genomic divergences occurred after the process of speciation by hybridization. GISH experiments were made hybridizing maize chromosomes with total genomic DNA probe from the three subspecies Zea mays ssp. parviglumis, Zea mays ssp. mexicana and Zea mays ssp. huehuetenanguensis. It was observed that Zea mays ssp. mays has much greater homology with Zea mays ssp. mexicana and Zea mays ssp. parviglumis than with Zea mays ssp. huehuetenanguensis. Nevertheless, by means of the use of blocking procedures, it could be revealed that Zea mays ssp. mays and Zea mays ssp. parviglumis show important genomic divergences. One of the most accepted theories in relation to the origin of domesticated maize maintains that annual teosinte Zea mays ssp. parviglumis would be the direct progenitor of modern maize, because it displays greater genetic affinity. Taking into account the results here obtained we discuss this theory and propose that the divergences observed between maize and its putative ancestor could be either due to differences in retroelements or processes of hybrid speciation that would have happened during the domestication of modern maize.

González Chiozza, Sebastián. "Geología y metalogenia del distrito minero Cerro Aspero, Sierras Pampeanas de Córdoba, Argentina" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La caracterización geológica del Distrito Minero Cerro Aspero (DMCA)y el estudio específico de sus depósitos minerales, constituyeron la base para la elaboración de un modelo metalogenético correspondiente a los yacimientos wolframíferos vinculados espacialmente al Batolito Cerro Aspero (BCA). Depósitos básicamente conformados por greisens, brechas y vetas de cuarzo con mineralización principal de wolframita, se encuentran emplazados en el Plutón Los Cerros (PLC) y su entorno metamórfico. El PLC es el más joven de los cuerpos que integran el BCA, complejo magmático post-orogénico originado en la etapa póstuma del ciclo Famatiniano. La asociación metamórfica que hospeda al BCA está constituida por rocas metasedimentarias (esquistos miloníticos, gneises y migmatitas) y metabásicas (esquistos miloníticos y 3 variedades de ortoanfibolita), que guardan registros de la evolución tectono-metamórfica del distrito desde el ciclo Pampeano hasta el Andico. Las ortoanfibolitas, gneises anatécticos y migmatitas preservan evidencias de deformación dúctil y metamorfismo de alto y mediano grado, correspondientes al episodio pampeano D2-M2, vinculado a la aproximación y colisión de Pampla con el cratón del Río de la Plata. Los esquistos miloníticos se extienden regionalmente constituyendo la Faja de Cizalla de Guacha Corral (FCGC), formada durante el evento D4M4 del ciclo Famatiniano a través del cizallamiento dúctil de las metamorfitas pre-existentes y bajo condiciones de facies de esquistos verdes. Esta faja de cizalla de orientación submeridional representó una zona de debilidad que favoreció la intrusión del BCA. La formación de depósitos wolframíferos vinculados al BCA, se produjo durante la etapa final del ciclo Famatiniano y progresó desde una fase magmática tardía hasta una fase netamente hidrotermal; habiéndose subdividido la evolución en 5 estadios paragenéticos: el estadio 1 (e1) constituyó la transición entre fluidos magmáticos e hidrotermales a través de la formación de cuerpos pegmatiticos y aplíticos estériles y depósitos de greisen; el estadio 2 (e2) marcó el comienzo de la etapa netamente hidrotermal, originando vetas con grandes volúmenes de cuarzo y mineralización muy escasa; el estadio 3 (e3) dio lugar a la formación de brechas, vetas menores y depósitos de reemplazo y relleno a partir de microfracturas, con los mayores contenidos de W y Mo; el estadio 4 (e4) desarrolló sistemas de vetas hidrotermales de cuarzo estéril, cuya ubicación en la secuencia evolutiva es dudosa; el estadio 5 (e5) depositó mena metalífera rica en sulfuros con participación de Bi, Cu, Zn, Pb, Mo, Fe, Mn,W, Sn, Ag, Au, en vetas menores y a partir de fracturas milimétricas sobre materiales de los estadios previos. A los procesos tardío-magmáticos del estadio 1 se asocia el desarrollo de alteraciones potásica y ocasionalmente albítica en granitoides, que precedieron a la formación de endo y exogreisens; en tanto que a los estadios 2 y 3 se vincula el profuso desarrollo de alteraciones silicica, fílica y propilítica sobre las rocas de caja de los depósitos hidrotermales. La aplicación de técnicas analíticas especificas y la realización de cálculos termodinámicos y geoquímicos permitieron caracterizar cuantitativamente las condiciones físico-químicas de formación de los depósitos. Los estudios de inclusiones fluidas revelan sistemas esencialmente compuestos por H20 + NaCl con probable participación de C02 y materia orgánica. Los valores medios de temperatura de homogeneización y salinidad obtenidos son de 384°C y 6,8 %peso NaCleq para el estadio 2 y de 279°C y 5,4 %peso NaCleq para el estadio 3. Los contenidos de isótopos estables de oxígeno, hidrógeno y azufre calculados para los fluidos de estos mismos estadios (e2 y e3) proporcionan los siguientes rangos: δ16O(vsmow) entre 7,1 y 8,7 ‰; δD(vsmow) entre — 89,6 y -68,9 ‰; y δ34S(cdt) entre 3,8 y 3,9 ‰. Diversos cálculos termométricos y barométricos permitieron establecer una temperatura de formación comprendida entre los 338 y 415°C, y una presión entre 0,5 y 1,5 Kb. Otras estimaciones indican valores de pH entre 3,5 y 5,8, log ƒ02 entre -27,6 y —22,2,y log ƒS2 entre —5,4 y —3,5. La edad de la mineralización del e3, fue determinada en 343,8 ╧ 10,8 Ma mediante una datación K/Ar efectuada sobre muscovita, y se restringió la formación de los depósitos a un lapso comprendido entre 4,6 y 25 Ma, luego del emplazamiento del BCA. El modelo metalogenético propuesto se basa en la manifiesta y estrecha vinculación de depósitos wolframíferos del DMCA con fases tardías del emplazamiento del PLC. La anomalía térmica generada por el intrusivo, junto con el desarrollo y reactivación de estructuras, promovieron la circulación convectiva de fluidos hidrotermales que propiciaron la precipitación de minerales ricos en W, Bi, Mo, Fe, Mn, Cu, y con participación minoritaria de Pb, Zn, Sn, Ag y Au. Estos elementos son los componentes principales de la mineralización metalífera del distrito, que incluye wolframita y proporciones accesorias de molibdenita, tetradimita, wittichenita, pavonita, miharaita, estanoidita, bomita, calcopirita, pirita, esfalerita, galena, altaita y oro. La formación de los depósitos fue controlada por estructuras subsidiarias transtensivas, como juegos de fracturas que se ajustan al modelo de Riedel, e intersecciones de planos de debilidad estructural. Los fluidos hidrotermales responsables de la mineralización tuvieron un origen netamente magmático en la etapa inicial (estadios 1, 2 y 3), pero adquirieron un carácter mixto en la etapa final (estadios 4 y 5) al incorporar componentes meteóricos. La fuente magmática aportó W, Mo, Fe y Mn en la etapa inicial (estadios 1, 2 y 3) y adicionó Bi, Cu, Zn y Sn en la etapa final (estadio 5), cuando disminuyó la actividad de flúor en el sistema. En esta última etapa fueron suministrados Cu, Pb, Mn, Ag, Au y azufre a las soluciones, a partir de la lixiviación del basamento. Asimismo se propone como principal mecanismo de depositación para los estadios 2 y 3, la reacción entre las rocas de caja y los fluidos hidrotermales, con las consecuentes modificaciones químicas de estos últimos (aumento del pH y saturación en sílice). También es probable que el descenso de la presión haya contribuido a la precipitación de minerales durante estos estadios; destacándose particularmente, que en los cuerpos de brecha, tuvo gran relevancia la precipitación de minerales debida al enfriamiento abrupto vinculado con la despresurización por brechamiento. En lo que respecta a la depositación de la asociación rica en sulfuros del estadio 5, se presume que estuvo relacionada con procesos de dilución y aumento del potencial de oxidación, derivados de la mezcla de fluidos.

Abstract:
Geological characterization of the Cerro Aspero Mining District (DMCA)located at Córdoba Pampean Ranges, Argentina, and specific study of its mineral deposits, made up the basis to develop a metallogenetic model for the wolframiferous ore deposits that are spatially related to the Cerro Aspero Batolith (BCA). Quartz veins and breccia with main wolframite mineralization, together with greisen type diseminated deposits were emplaced in the Los Cerros Pluton (PLC) and its metamorphic country rocks. The PLC is the younguest of the bodies that comprise the BCA, post-orogenic magmatic complex originated during the late phase of the Famatinian cycle. The metamorphic association that hosts the BCA is constituted by metasedimentary (milonitic schists, gneises and migmatites) and metabasic rocks (milonitic schists and 3 types of ortoamphibolite), that keep registers of the tectono-metamorphic evolution of the district from the Pampean to the Andic cycle. The ortoamphibolites and migmatites preserve evidences of ductile strain and high to medium grade metamorphism, which correspond to the M2-D2 pampean episode, related with the aproximation and colision of Pampia with the Rio de la Plata craton. The milonitic schists extend regionally giving conformation to the Guacha Corral Shear Belt (FCGC), formed during the M4-D4 event of the Famatinian cycle through the ductile shearing of the preexisting metamorphic rocks, and under green-schist facies conditions. This shear belt with submeridional orientation, constituted a weakness zone that favoured the BCA intrusion. The formation of the BCA related wolframiferous ore deposits progressed from a late magmatic phase to an hydrothermal phase and its evolution has been subdivided into 5 paragenetic stages: stage 1 (e1) constituted the transition between magmatic and hydrothermal fluids through the formation of barren pegmatitic and aplitic bodies, and mineralized greisen deposits; stage 2 (e2) marked the beggining of the net hydrothermal phase, giving birth to veins with large volumes of quartz and scarce mineralization; stage 3 (e3) gave place to the formation of breccia, minor veins and replacement deposits in microfractures, with the major contents of of W and Mo; stage 4 (e4) developed hydrothermal vein systems of sterile quartz, with an unclear position in the evolutive secuence; stage 5 (e5) deposited sulphide rich metalliferous ore with Bi, Cu, Zn, Pb, Mo, Fe, Mn, W, Sn, Ag, Au in microfractures within materials generated at previous stages. The late magmatic processes of stage 1 were associated to potasic and, ocassionaly sodic alteration in granitoids. These alterations preceded the formation of endo and exogreisens during stage 1; while stages 2 and 3 were linked to the developement of profuse silicic, philic and propilitic alterations in the country rocks of the hydrothermal deposits. The aplication of specific analytic technics and the realization of thermodynamic calculations were used to quantify the phiyico-chemical conditions of deposit formation. Fluid inclusion studies revealed systems essentially composed by H2O + NaCl and probable participation of C02 and organic matter. The mean values of homogeneization temperature and salinity are of 384°C and 6,8 %wt NaCleq for stage 2 and of 279°C and 5,4 %wt NaCeq for stage 3. Oxigen, hydrogen and sulphur stable isotope contents calculated for the fluids of these same stages (e2 and e3) indicate the following ranges: δ18O(VSMOW) between 7,1 and 8,7 ‰,δD( VSMOW) between —89,6 and —68,9 ‰, and δ34S(CDT) between 3,8 and 6.1 ‰. Several thermometric and barometric calculations permited to establish a formation temperature comprised between 338 and 415°C, with a fluid pressure between 0,5 and 1,5 Kb. Other estimations indicate pH values of 3.5 to 5,8, log ƒ02 between -27,6 y —22.2,and log ƒS2 between —5.4 y -3.5. The age of the e3 mineralization was determined in 343,8 ╧ 10,8 Ma through K/Ar dating in muscovite, and the formation of the deposits was restricted to a lapse of time between 4,6 and 25 Ma, after the BCA emplacement. The metallogenetic model proposed is based in the close relation of wolframiferous deposits of the DMCA with late phases of the PLC emplacement. The thermic anomaly generated by the intrusive body, together with the developement and reactivation of structures, promoted the convective circulation of hydrothermal fluids that caused the precipitation of minerals rich in W, Bi, Mo, Fe, Mn, Cu and with minor participation of Pb, Zn, Sn, Ag, and Au. This elements are the main components of the metalliferous mineralization of the district, which includes wolframite and accesory proportions of molybdenite, tetradymite, wittichenite, pavonite, miharaite, stannoidite, bomite, chalcopyrite, pyrite, sphalerite, galena, altaite and gold. The deposit formation was controlled by subsidiary transtensive structures, like fracture sets that adjust to the Riedel's model, and intersections of planes of structural weakness. Hydrothermal fluids responsible for mineralization had a net magmatic origin at the initial phase (stages 1, 2 and 3), but acquired a mixed character during the final phase (stages 4 and 5) due to incorporation of meteoric components. The magmatic source provided W, Mo, Fe and Mn at the initial phase (stages 1, 2 and 3) and added Bi, Cu, Zn and Sn at the final phase (stage 5), when the fluorine activity of the system diminished. At this last stage, Cu, Pb, Mn, Ag, Au and S were suplied to the solutions through basement leaching. Likewise, the reaction between country rocks and hydrothermal fluids, with the cosequent chemical modifications of the latter (pH increase and silica saturation), is propposed as the main deposition mechanism for stages 2 and 3. It is also probable that pressure descent had contributed to the mineral precipitation during these stages; being particularly outstanding that within breccia bodies, mineral precipitation caused by abrupt cooling related to depressurization due to brecciation, was highly relevant. With respect to the deposition of the sulphide rich association of stage 5, it has been presummably related to dilution and oxidation potential increase of the solutions, both mechanisms related to fluid mixing.

Gentile, Agustina. "Origen, divergencia y filogenia de endofitos Neotyphodium aislados de gramíneas nativas argentinas" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Los endofitos fúngicos proveen a muchas especies de gramíneas de una protección biológica frente a factores bióticos y abióticos, que incrementa su productividad. Los endofitos del tipo Neotyphodium son asexuales, sistémicos y no patogénicos, mientras que sus parientes más cercanos son especies sexuales del género Epichloë (Familia Clavicipitaceae, Orden Hypocreales) que causan una enfermedad conocida como “Choke”. Se cree que los endofitos asexuales han evolucionado directamente a partir de especies sexuales de Epichloë o por medio de hibridizaciones inter-específicas entre distintas especies de Epichloë y/o Epichloë y Neotyphodium. En el presente trabajo, reportamos el origen evolutivo de endofitos Neotyphodium aislados de diversas poblaciones de 10 pastos nativos de Argentina, y los comparamos con especies tanto sexuales como algunas asexuales de hospedantes nativos de otros continentes. Las relaciones entre los endofitos aislados de gramíneas nativas y también con especies de Epichloë fue estimada por análisis filogenéticos basados en secuencias de la porción variable (principalmente intrones) de los genes de β-tubulina (tub2) y el factor de elongación de la traducción 1- α (tef1). Fueron analizados los caracteres morfológicos de los endofitos que mostraron afinidad filogenética. Los análisis filogenéticos revelaron que la mayoría de los endofitos son híbridos interespecíficos para ambos genes, derivados de dos especies de Epichloë E. festucae y E. typhina. Varios aislamientos de distintos hospedantes resultaron cercanamente relacionados con Neotyphodium tembladerae, previamente analizado filogenéticamente a partir de una gramínea nativa, Poa hueca. Es interesante destacar que un endofito de Phleum commutatum fue aparentemente derivado a partir de un evento de doble hibridización que involucra al menos tres genotipos distintos (E. baconli, E. amarillans y E. typhina). Este endofito particular podría ser considerado una nueva entidad taxonómica. Además de los organismos híbridos, se encontraron endofitos en algunas plantas de Bromus setifolius que resultaron ser, aparentemente, no híbridos; es decir, contaron solamente con una copia de cada gen. Nuestros resultados indican que la hibridación inter-específica podría ser un mecanismo importante y común en la generación de variabilidad genética en endofitos Neotyphodium de Argentina.

Abstract:
Seed-borne fungal symbionts (endophytes) provide many cool-season grass species with biological protection from biotic and abiotic stresses together with an increase in productivity. Neotyphodium endophytes are asexual, systemic and nonpathogenic, whereas closely related sexual species of genus Epichloë (family Clavicipitaceae, order Hypocreales) cause grass choke disease. It seems that asexual endophytes have evolved directly from sexual Epichloë species or by inter-specific hybridization between different species of Epichloë and/or Epichloë and Neotyphodium. In the present work, we report on the evolutionary origins of Neotyphodium endophytes from several populations of 10 different native hosts in Argentina, and compare them with the sexual and some asexual species from hosts native to other continents. Relationships among these fungi and with Epichloë species were estimated by phylogenetic analysis based on sequences from variable portions (mainly introns) of genes for β-tubulin (tub2) and translation elongation factor 1-α(tef1). Some morphological characters of the endophytes that showed phylogenetic affinities were analyzed. Phylogenetic analysis revealed that most of the endophytes were inter-specific hybrids from two different species of Epichlo: E. festucae and E. typhina. Several isolates from different hosts were closely related to Neotyphodium tembladerae, previously described from the Argentinian grass, Poa huecu. It worth noting that an endophyte of Phleum commutatum was apparently derived from two hybridization events involving three different genotypes. This particular endophyte could be considered a distinct taxonomic entity. In addition to the apparent hybrids, we found likely non-hybrid endophytes in some plants of the grass Bromus setifolius. Our results indicate that inter-specific hybridization may be a common and important mechanism for genetic variation in Neotyphodium endophytes from Argentina.

García, Cybele Carina. "Actividad inhibitoria de compuestos reactivos contra motivos Zn-fingers sobre la infección con arenavirus" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los virus de la familia Arenaviridae incluyen patógenos humanos causantes de severas fiebres hemorrágicas, como los virus Lassa (LASV)y Junín (JUNV). La proteína Z de los arenavirus, posee un motivo RING finger altamente conservado entre los distintos arenavirus, necesario para la interacción con proteínas celulares y virales, y por lo tanto es un punto de ataque ideal para la quimioterapia antiviral contra las fiebres hemorrágicas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la actividad inhibitoria de compuestos electrofílicos reactivos con motivos Zn fingers. provistos por el National Cancer Institute (USA), comprobar que Z es el blanco de acción de dichos compuestos y demostrar que su rol es esencial en el ciclo de multiplicación viral. Los compuestos, que incluyeron disulfuros alifáticos y aromáticos, derivados azoicos e hidrazidas fueron inicialmente evaluados por su capacidad inhibitoria sobre la infección de células Vero contra los arenavirus JUNV y Tacaribe (TCRV). De un total de 15 compuestos ensayados, 2 presentaron similar eficacia en sus propiedades antivirales y virucidas, 6 presentaron una actividad virucida superior a su efecto antiviral, 3 fueron estrictamente antivirales, 1 ejerció únicamente acción inactivante y 2 fueron inactivos. Los compuestos inactivantes mostraron ser efectivos también contra el virus de la coriomeningitis linfocitaria (LCMV), arenavirus prototipo de la familia. El análisis de los parámetros (tiempo y temperatura) que afectan la inactivación de JUNV y TCRV, demostró que la cinética de inactivación es rápida y que la reacción es dependiente de la temperatura, ya que no hubo inactivación del virus a 4°C. La interacción entre el virus y el compuesto inactivante lleva a un bloqueo del ciclo de multiplicación viral a nivel de la transcripción y replicación, ya que el mismo se adsorbe y penetra en las células con igual eficacia que el virus control, pero no se detecta RNA correspondiente a los genes N, GPC y Z, en los viriones inactivados. Este hecho se verificó por la ausencia total de síntesis de proteínas virales cuando se infectan células con virus inactivado. Sin embargo, los viriones inactivados mantienen la funcionalidad de las proteínas externas, ya que se observaron títulos comparables de anticuerpos neutralizantes en animales inoculados con viriones inactivados con respecto a los inoculados con JUNV y TCRV infecciosos, indicando así la preservación de la capacidad antigénica de las glicoproteínas luego del tratamiento inactivante. La acción diferencial de estos agentes sobre HSV-1 y los arenavirus confirma que la proteína Z de los arenavirus juega no sólo un rol regulatorio durante el ciclo viral, sino que tiene también importancia estructural, ya que los compuestos ejercen su acción tanto en la célula infectada, como directamente sobre el virión.Los resultados del estudio del efecto inhibitorio sobre la proteína Z purificada de LCMV y LASV, indicarían que los compuestos están dirigidos particularmente hacia la proteína Z de los arenavirus, interaccionando con ella y provocando su multimerización, con la consiguiente pérdida de funcionalidad y capacidad infectiva del virión. Por otro lado, se sabe que la infección con LCMV conduce a la recolalización de cuerpos nucleares de la proteína celular con homeodominios ricos en prolina (PRH) al citoplasma de la célula infectada. En células infectadas con LCMV se observó que el tratamiento con NSC20625 inhibe la replicación del RNA viral, sin afectar la transcripción del gen celular prh. Además, el tratamiento con NSC20625, no sólo inhibió la expresión de la proteína viral Z en las células infectadas con LCMV, sino que además revirtió el patrón de distribución de la proteína PRH al patrón de PRH observado en células normales. Por último, el compuesto azoico ANNB mostró un amplio rango de acción contra los arenavirus, ya que fue también inhibidor de la multiplicación de otras cepas de JUNV, asi como de TCRV, Pichinde y LCMV. El estudio del modo de acción antiviral manifestó que el ANNB afecta las etapas tardías del ciclo de multiplicación viral; esto se comprobó al observar que ni las etapas tempranas de adsorción e internalización viral, ni la síntesis y expresión de proteínas virales estaban afectadas. La producción de virus asociado a células está igualmente afectada que el virus extracelular, por lo que el ANNB estaría bloqueando el correcto ensamblado dentro de la célula. Estos resultados demuestran por primera vez que una proteína esencial para los arenavirus es el blanco de acción de compuestos que representan agentes antivirales promisorios contra estos patógenos, mostrando similar eficacia in vitro que la ribavirina, la única droga conocida que ha sido ensayada en los pacientes infectados con arenavirus.

Abstract:
The Arenaviridae family includes several human pathogens like Lassa virus (LASV) and Junín virus (JUNV) causing hemorrhagic fevers. The Z protein of arenavirus presents a highly conserved RING finger motif which turns this protein an attractive target for antiviral therapy. In the present study, we have evaluated fifteen selected Zn fingers reactive compounds, provided by the National Cancer Institute, for their capacity to act as inhibitors of arenavirus infection. From the total of compounds evaluated against JUNV and Tacaribe (TCRV), 2 presented similar effectiveness in their antiviral and virucidal properties, 6 presented a virucidal activity superior to the antiviral effect, 3 were exclusively antivirals, 1 exerted only virucidal action and 2 were totally inactive. The virucidal compounds demonstrated to be effective also against the Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV). The time course of virucidal activity showed that the inactivation started a few minutes after addition of the compound to the virus suspension and proceeded in a time dependent manner. Arenavirus inactivation was also energy-dependent since a temperature higher than 30°C was required to destroy virus infectivity. The mode of inactivation of these compounds rendered non-infectious virus particles but preserving the conformational integrity of the virion glycoproteins. This conclusion was supported by the following results: binding of inactivated virions to cellular receptor was performed with the same efficacy as native virions; internalization via fusion between viral and endosome membranes was not affected in inactivated virions; after inoculation of adult mice with 10 4 PFU of either JUNV and TCRV control or treated virus with NSC20625, comparable levels of antibodies were detected indicating that the inmunogenecity of viral glycoproteins was preserved. In order to further understand the antiviral mechanism we studied the transcription and replication of inactivated JUNV virions on Vero cells by detection of the N, GPC and Z genes. No amplification products were detected, demonstrating a blockade in viral transcription. The differential inhibitory action observed against arenavirus and HSV-1 confirmed that Z is playing structural and regulatory roles during the multiplication cycle. These zinc finger inhibitors were reported to establish disulfides linkages between zinc finger motifs in proteins. The results obtained after investigating the extent of Z multimer formation exhibited significant altered patterns showing high-molecular-weight multimers, suggesting the establishment of inter-and possibly intramolecular disulfide bonds, leading to the formation of Z multimers. It has been reported that LCMV gene expression and replication affect the subcellular localization of PRH in human hepatocytes and that the PRH protein can be physically associated with the arenavirus Z protein. It was observed that the treatment with NSC20625 of LCMV infected-cells inhibited the replication of the viral RNA, without affecting the transcription of the cellular gene prh. The NSC20625 treatment, not only inhibited the expression of Z viral protein in LCMV infected-cells, but in addition, reverted the distribution pattern of PRH protein in these treated cells to the observed pattern of PRH in normal cells. On the other hand, the azoic compound ANNB showed a broad spectrum of action against arenavirus, since it was also inhibitor of the multiplication of several strains of JUNV, as well as of TCRV, Pichinde and LCMV. The mode of action showed that ANNB affects late stages of the viral multiplication cycle; this was verified when observing that neither the early stages of adsorption and internalization, nor the viral protein synthesis and expression were affected. The production of associated virus to cells was affected, so the ANNB would be blocking the correct assembly within the cell. The present work demonstrate for the first time that an arenavirus protein is the target of compounds that represent a promising class of agents against highly pathogenic arenaviruses showing similar effectiveness in vitro to the ribavirin, the only well-known drug that has been used in patients with hemorrhagic fevers caused by arenavirus.

Gabri, Mariano Rolando. "Ensayos pre-clínicos de dos vacunas inmunoterapéuticas con actividad antitumoral desarrolladas a partir de gangliósidos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Para el año 1934 la toxina de Coley era el único tratamiento sistémico para el tratamiento de cáncer. Este preparado fue desarrollado unos años antes por el prestigioso cirujano del Memorial Hospital de New York, William B. Coley, utilizando toxinas bacterianas de los géneros Serratia y Streptococcus. Este producto se convirtió así en la primera vacuna oncológica y en uno de los primeros tratamientos sistémicos del cáncer. A pesar de los experimentos iniciales del siglo pasado, luego de los ensayos de Coley la inmunoterapia oncológica fue dejada de lado por el advenimiento de las drogas quimioterapéuticas y las mejoras en la radioterapia. En las últimas décadas se ha vuelto a observar a la inmunoterapia como una estrategia complementaria válida para el tratamiento de cáncer. Este nuevo interés sobre este tipo de tratamientos, tiene sus bases en el gran avance alcanzado en el entendimiento de los mecanismos inmunológicos y de los procesos que dominan la biología tumoral. En esta tesis se presentan resultados relativos a dos vacunas desarrolladas a partir de gangliósidos, moléculas de membrana anfipáticas que pertenecen a la familia de los glicoesfingolípidos con por lo menos, un residuo de ácido siálico lo cual es una característica distintiva de estos compuestos. Los resultados se centran en la evaluación de los efectos tóxicos, la respuesta antitumoral y la modulación inmunológica desencadenados por la aplicación de vacunas inmunoterapéuticas a base de gangliósidos, consistentes en un anticuerpo anti-idiotipo dirigido a gangliósidos glicolilados (anticuerpo 1E1O) y de una vacuna molecular del gangliósido NacGM3 conjugado a proteínas externas de membrana de N. Meningitidis proteoliposomas de muy pequeño tamaño (NacGM3/VSSP). Con este fin se evaluará también el perfil de los modelos murinos experimentales de cáncer mamario y melanoma a emplearse para cada vacuna, respectivamente. Los resultados demuestran que los modelos animales elegidos presentan características adecuadas para ser utilizados como herramientas de evaluación de los efectos y mecanismos desencadenados por la inmunización con las vacunas. La línea celular de cancer mamario murino F3II crece en el espacio subcutáneo desarrollando un fenotipo tumoral altamente maligno. Su portación produce un cuadro inmunoestimulatorio posiblemente ligado a la secreción de GM-CSF, citoquina ante la cual se modifica su respuesta proliferativa. Además estas células son reactivas al anticuerpo P3, precursor del 1E10, lo que la convierte en un modelo apropiado para la evaluación de la respuesta antitumoral de 1E10. La inmunización de ratones con el preparado 1E10-KLH no produce efectos tóxicos de magnitud en los animales, desarrollando una respuesta tumoral que es capaz de reconocer a las células F3II. Utilizando este proceso de inmunización se puede observar un retardo en el crecimiento tumoral y una disminución significativa en el recuento de metástasis espontáneas en los ratones tratados. Además se evaluó a la línea B16 crecida en animales singénicos como modelo de estudio de los efectos producidos por la vacunación con NacGM3/VSSP. Las células B16 presentan en su membrana al gangliósido NacGM3, reaccionando positivamente ante la presencia del mismo en el medio de cultivo. La vacunación de ratones C57 con NacGM3/VSSP desarrolla una respuesta inmunológica humoral que es capaz de reconocer a los componentes de la vacuna y a las células de melanoma B16. La aplicación de la vacuna no produce efectos tóxicos de importancia. La vacunación con NacGM3/VSSP genera una respuesta antitumoral que se manifiesta en el rechazo del desafío tumoral en el 100% de los animales vacunados. Esta respuesta se mantiene en el tiempo hasta tres meses luego de finalizada la misma. La respuesta antitumoral obtenida es dosis dependiente ya que se pudo observar una actividad antitumoral creciente en lotes de ratones inmunizados con una concentración vacunal de hasta 360 μg/dosis y específica hacia células que expresan el gangliósido NacGM3). La vacunación con NacGM3/VSSP desarrolla una respuesta de anticuerpos con preponderancia del isotipo IgG2b. Estos anticuerpos reconocen cortes de tumor B16 siendo su epítope reactivo el residuo de ácido sialico presente en las células. La investigación básica en vacunas provee un mejor entendimiento de los mecanismos inmunológicos involucrados en el rechazo tumoral inducidos por la vacunación. Los ensayos preclínicos con modelos animales de cáncer son de importancia capital en el estudio de los efectos inmuno modulatorios de estas vacunas y en la evaluación de sus capacidades terapéuticas a nivel clínico.

Abstract:
By 1934 Coley's toxin was the only systemic treatment for cancer. This compound was developed few years before for the famous surgeon from The Memorial Hospital of New York, William B. Coley, using bacterial toxins from Serratia and Streptococcus. This product become the first cancer vaccine and one of the first systemic treatments for cancer. Despite the initial experiments carried out in the last century, after Coley attempts cancer immunotherapy was abandoned due to the appearance of quimiotherapeutic drugs and improvements in radiotherapy. In the last decades, immunotherapy is seeing again as a valid adiuvant therapy for cancer treatment. This new interest in this kind of treatments, is based in the important advance reached in the understanding of immunology and the processes that govern tumor biology. In this thesis, results related with two vaccines based in gangliosides are presented. Gangliosides are amphipatic membrane molecules that belong to the glicoesfingolipid family, having at least one residue of sialic acid, which is a distinctive characteristic of this kind of compounds. The results focus in the evaluation of toxicity, antitumoral response and the immunological modulation due to the application of this two vaccines, one an antiidiotypic antibody against glycolilated gangliosides (1E1o antibody) and other a molecular vaccine composed by the ganglioside NacGM3 conjugated to proteins from the outer membrane of N. Meningitidis in proteoliposomes of very small size (NacGM3/VSSP). With this reasoning in mind, the profile of the experimental murine models of breast cancer and melanoma to be employed with each vaccine, was also evaluated. Results demonstrated that the animal models chosen have the characteristics needed to be used as evaluation tools of the effects and mechanisms developed by the immunization with the vaccines. F3II murine breast cancer cell line grows in the subcutis developing a highly malignant tumor phenotype. Its bearing produce an immunoestimulatory effect probably related to the secretion of GM-CSF, a cytoquine able to modify its proliferative response. Furthermore, this cells are reactive to P3 antibody, a precursor of 1E10, becoming a very adequate model for the evaluation of 1E10 antitumor response. Immunization of mice with the preparation 1E10-KLH did not produce relevant toxic effects in the animals, developing a humoral response able to recognize F3II cells. Using this immunization process it can be observed a delay in tumor growth an a significant decrease in the number of spontaneous metastasis in treated animals. Also, the B16 line, growing in singenic animals, as a study model of the effect produced by vaccination with NacGM3/VSSP, was evaluated. B16 cells have in its membrane NacGM3 ganglioside. Vaccination of C57 mice with NacGM3/VSSP developed a humoral immunologic response able to recognize both, components of the vaccine and B16 melanoma cells. Administration of the vaccine did not produce relevant toxic effects. Vaccination with NacGM3/VSSP generated an antitumoral response that translated in the rejection of the tumor challenge in 100% of the vaccinated animals. This response is sustained in the time up to three months after final inoculation. The antitumoral response obtained is dose-dependent since was observed an increasing antitumoral activity in mice immunized with a vaccine concentration of up to 360 μg/dose, being specific towards cells expressing NacGM3 ganglioside. Vaccination with NacGM3/VSSP developed an antibody response mostly based in the isotype IgG2b. This antibodies recognize B16 tumor slides being its reactive epitope the sialic acid residue which is present in the cells. Basic research in vaccines provide a better understanting of the immunologic mechanisms involved in tumor rejection induced by vaccination. Preclinical experiments with animal models of cancer are of utmost importance in the study of the immunomodulatory effects of this vaccines and the evaluation of its therapeutic capabilities at the clinical level.

Freytes, Héctor. "Objetos inyectivos en estructuras residuadas. Forma algebraica del teorema de Cantor - Bernstein - Schröder" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presente tesis es un estudio de objetos inyectivos en clases de estructuras residuadas asociadas con la lógica y del teorema de Cantor - Bernstein - Schröder. En la primera parte se investigan inyectivos y retractos absolutos en clases de retículos residuados y pocrims. Algunas de las clases consideradas son las MTL-álgebras, IMTL-álgebras, BL-álgebras, NM-álgebras y los hoops acotados. En la segunda parte es desarrollado un marco algebraico para la validez del teorema de Cantor-Bernstein-Schröder aplicable a álgebras con una estructura subyacente de retículo tal que los elementos centrales de este retículo determinan una descomposición directa del álgebra. Se dan condiciones necesarias y suficientes para la validez del teorema de Cantor-Bernstein-Schröder en estas álgebras. Estos resultados son aplicados para obtener versiones del teorema en retículos ortomodulares, álgebras de Stone, BL-álgebras, MV-álgebras, pseudo MV-álgebras, álgebras de Lukasiewicz y álgebras de Post of order n.

Abstract:
The present thesis is a study of injectives in several classes of residuated structures associated with logic and the Cantor - Bernstein - Schröder theorem. In the first part we investigate injectives and absolute retracts in classes of residuated lattices and pocrims. Among the classes considered are MTL-algebras, IMTL-algebras, BL-algebras, NM-algebras and bounded hoops. In the second part is developed an algebraic frame for the validity of Cantor-Bernstein-Schröder theorem, applicable to algebras with an underlying lattice structure and such that the central elements of this lattice determine a direct decomposition of the algebra. Necessary and sufficient conditions for the validity of the Cantor-Bernstein-Schröder theorem for these algebras are given. These results are applied to obtain versions of the Cantor-Bernstein-Schröder theorem for orthomodular lattices, Stone algebras, BL-algebras, MV-algebras, pseudo MV-algebras, Lukasiewicz and Post algebras of order n.

Ferrario, Juan Esteban. "Estudio de la expresión diferencial de genes inducidos por el tratamiento crónico con levodopa en el estriado de ratas con lesiones del sistema nigroestriatal" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La levodopa constituye la terapia principal para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson. En modelos animales de la enfermedad se reportó que el tratamiento crónico con levodopa induce una serie de efectos compensatorios, entre los que se destaca el aumento de terminales axonales de las neuronas dopaminérgicas en el núcleo estriado. Con el objetivo de conocer mejor los mecanismos celulares y moleculares que median los principales cambios compensatorios construimos una biblioteca de expresión diferencial enriquecida en transcriptos del estriado de ratas con lesión del haz nigroestriatal, tratadas con levodopa durante 6 meses. Para identificar los transcriptos presentes en la biblioteca utilizamos un atlas de expresión de genes que representa las principales funciones celulares. Identificamos varios genes que habían sido previamente relacionados con los mecanismos de plasticidad y trofismo. Posteriormente confirmamos la expresión diferencial de tres transcriptos por medio de hibridación in situ y encontramos que el factor trófrco pleiotrofma, la proteína básica de la mielina y la calmodulina están sobreexpresados en el estriado desnervado de las ratas tratadas con levodopa. Además, analizamos el grado de inervación dopaminérgica estriatal mediante la detección inmunoautorradiográfica del transportador de dopamina. En conjunto nuestros resultados obtenidos a partir de aproximaciones moleculares e histológicas, sugieren la participación de determinados genes en la reinervación dopaminérgica estriatal inducida por el tratamiento crónico con levodopa.

Abstract:
Levodopa, the major treatment for patients with Parkinson’s disease, has been shown to induce a variety of compensatory effects, including facilitation of sprouting by dopaminergic neurons in experimental animals with lesions leading to denervation of the striatum. To better understand the cellular and molecular environment where most of these compensatory changes take place, in particular elements that might contribute to the recovery of dopaminergic innervation, we constructed a differential expression library enriched in transcripts from the striata of rats with lesions of the nigrostriatal dopaminergic pathway, orally-treated with levodopa for 6 months. We used this library to screen an expression array of rat genes representing the major cell functions, and have identified several that are involved in neurotrophic mechanisms and plasticity. We confirmed the differential expression of selected transcripts by non-radioactive in situ hybridization, and report that the growth factor pleiotrophin, myelin basic protein and calmodulin are overexpressed in the denervated striatum of levodopa-treated rats. In addition, we analyzed the levodopa-induced dopaminergic reinnervation in the denervated striatum of lesioned rats by immunoautoradiographic detection of the dopamine transporter (DAT). Together, from a combination of molecular and histochemical approaches, our results suggest a possible functional role of several genes in dopaminergic neurons sprouting during levodopa treatment.

Ferrari, María Rosa. "Estudio de la composición genómica de forrajeras mediante técnicas electroforéticas y de citogenética clásica y molecular" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Tricepiro es un cereal sintético de alto valor forrajero, que fue obtenido por el Ing. Covas en 1972. Lo logró cruzando triticale Don Santiago INTA(2n=42) por trigopiro Don Noé INTA(2n=56). Luego de varios años de mejoramiento logró la linea 3-40 que fue inscripta en 1994 como cultivar con el nombre de tricepiro Don René INTA.Esta línea, que presenta resistencia a enfermedades y es tolerante al frío y a la salinidad del suelo, constituye un material apto para ser usado en programas de mejoramiento. Dentro de los objetivos de la presente tesis estuvieron. Establecer y comparar los patrones electroforéticos de gluteninas de alto peso molecular (HMW)de tricepiro Don René INTA y de sus progenitores, así como determinar la existencia de variabilidad para dichas proteínas en lineas hermanas del cultivaren estudio. Determinar la estabilidad meiótica de tricepiro Don René INTA mediante el estudio de la meiosis masculina. Establecer la relación entre la rugosidad de las semillas y el contenido de heterocromatina telomérica de los cromosomas de centeno, en lineas de tricepiro Determinar la composición genómica de tricepiro Don René INTA e individualizar sus cromosomas mediante técnicas de citogenética clásica y molecular. La electroforesis de proteinas seminales (SDS-PAGE) mostró que tricepiro Don René INTA tiene cinco bandas correspondientes a gluteninas (HMW), ninguna de las cuales le es propia. De las cinco bandas, cuatro las comparte con ambos progenitores y la quinta la comparte sólo con trigopiro Don Noé INTA. Esta banda podría provenir de Thinopyrum. Las 9 lineas hermanas de tricepiro Don René INTA que se estudiaron tienen las cinco bandas que presenta el cultivar. Dos de estas líneas, tienen una banda adicional, FA-L2 la comparte con trigopiro Don Noé INTA y FA-L66 tiene una banda propia. Los estudios meióticos de tricepiro Don René INTA mostraron la formación de 21 II en diacinesis. Sin embargo, en Metafase I se observaron asincronías en el comportamiento cromosómico tales como bivalentes que segregaban tempranamente y presencia de univalentes fuera de la placa ecuatorial. El comportamiento meiótico no reveló la presencia de heterocigosis para alteraciones numéricas ni estructurales. El número de micronúcleos presentes en las tetradas osciló entre 0 y 9 y se calculó un Índice Meiótico de 66,47. Se hizo bandeo C y DAPI en cromosomas mitóticos de tricepiro Don René INTA. Se observaron 14 cromosomas con importantes bandas teloméricas atribuibles a cromosomas de centeno y 14 cromosomas con numerosas bandas intersticiales, supuestamente pertenecientes al genoma B de trigo, de acuerdo con patrones usados internacionalmente. Tricepiro Don René INTA posee semillas rugosas, mientras que la línea FA-L2 tiene semillas lisas. Se determinó que el tamaño de las bandas teloméricas del genoma R es similar en ambas lineas. Por lo tanto, las caracteristicas rugosidad de las semillas y tamaño de las bandas teloméricas de los cromosomas de centeno no muestran asociación . Los estudios de hibridación in situ con ADN genómico total de Secale cereale y Thinopyrum bessarabicum como sondas y Triticum aestivun var Chinese Spring como bloqueante (GISH) mostraron que Tricepiro Don René INTA tiene 14 cromosomas de centeno y 28 de trigo. En un par de estos últimos se detectó introgresión de Thinopyrum. La identificación de todos los cromosomas del hibrido se logró haciendo hibridación con las sondas pSc 119.2 y pAs1 (FISH). La composición genómica y la constitución cromosómica de tricepiro Don René INTA es la siguiente: 7 pares de cromosomas de centeno (1R, 2R, 3R, 4R, 5R, 6R, 7R); 7 pares de cromosomas del genoma A de trigo (1A, 2A, 3A, 4A, 5A, 6A, 7A); 7 pares de cromosomas del genoma B de trigo (1B, 2B, 3B, 4B, 5B, 6B, 7B). Introgresión del genoma J de Thinopyrum (posiblemente Th. ponticum 2n=70) en un par cromosómico del genoma A, que por su morfología y su tamaño podría ser el 6A.

Abstract:
Tricepiro is a synthetic cereal of high forage value obtained by G. Covas in 1972 in Argentina by crossing hexaploid triticale (2n=6x=42) and octoploid trigopiro (2n=8x=56). Several years of self pollination resulted in a line, 3-40, that was registered as a cultivar under the name tricepiro Don René INTA. This line possesses high potential as a parent in breeding programmes due to its marked disease resistance and freezing and drought tolerance. Inside the objectives of the present thesis they were: to find homologies between tricepiro Don René INTA and its ancestors through high molecular weight glutenines (HMW) analysis and to compare the variability between advanced lines; to study the meiotic behavior in order to determine the meiotic stability of tricepiro Don René INTA; to correlate kernel shrivelling in tricepiro with the size of terminal heterochromatin blocks on the rye chromosomes; to characterize the genome constitution of tricepiro Don René lNTA and identify its chromosomes using clasical and molecular cytogenetical techniques. Glutenines were fractionated by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS- PAGE) and bands of Triticum aestivum var. Chinese Spring were used for comparison. Tricepiro has five bands, four of them shared with both progenitors and one only with trigopiro Don Noé INTA. With the exception of two lines (FA L2 and FA L66) the advanced lines of tricepiro show very low variability among them. Meiotic studies showed the presence of 21 II in diacinesis but in metaphase I an asincronic chromosome behavior was observed: some bivalents segregated early and univalents were detected. Tetrades have between 0 and 9 micronuclei and the Meiotic Index was 66.47. No heterocigosis for structural rearrayement or numerical alterations were detected. C-bands and DAPI showed 14 chromosomes with large terminal heterochromatic band that are putative rye chromosomes and 14 chromosomes with intersticial bands that are putative 14 wheat chromosomes (genome B). Tricepiro Don René INTA (shrivelling kernel) and FA-L2 (smooth kernel) didn't show statistical differences between the size of their rye telomeric heterocromatin bands. So no relation were detected between shrivelling kernel and rye telomeric heterocromatin bands in these tricepiro lines. The in situ hybridization using total DNA of Seca/e, Triticumand Thinopyrum as a probe (GISH) labelled with biotin and/or digoxigenin showed that tricepiro Don René INTA consists of 14 rye chromosomes and 28 wheat chromosomes. Small introgression zones of Thinopyrum in wheat chromosomes were detected. FISH using the repetitive DNA probes pSc 119.2 and pAs1 labelled with biotin, leads us to state that the genomic composition and the chromosomes identification of tricepiro Don René INTA are the folowing: 7 rye chromosomes pairs (1R, 2R, 3R, 4R, 5R, 6R, 7R). 7 wheat chromosomes pairs belonging to the B genome (1B, 2B, 3B, 4B, 5B, 6B, 7B). 7 wheat chromosomes pairs belonging to the A genome (1A, 2A, 3A, 4A, 5A, 6A, 7A). Introgression of a region from Thinopyrum in a wheat chromosome pair belonging to the A genome (putative chromosome 6A).

Estévez, Alejandra. "Participación de la interleuquina-1ß en el mecanismo de regresión luteal en la rata" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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En los mamíferos, la regresión luteal o luteólisis es un evento determinante para el proceso reproductivo ya que garantiza la finalización de un ciclo no concepcional, permitiendo el inicio de otro ciclo potencialmente fértil. Estudios recientes demostraron la acumulación de leucocitos durante la luteólisis, asociada a la producción de citoquinas pro-inflamatorias y radicales libres. Es por esto que el objetivo del presente trabajo de tesis fue estudiar la participación de la Interleuquina-1 beta (IL-1β) en la luteólisis funcional. Además, dado que inhibidores de la NOS prolongan la vida del CL, se analizó si el óxido nítrico (NO) estaba involucrado en el mecanismo de acción de la IL-lβ. Para ello, se utilizó el modelo de la rata pseudopreñada, en el cual la administración de PMSG induce la formación de CLs con una vida media de aproximadamente lO días. Al comparar el CL en regresión (día 9 de psp) respecto del CL funcional (día 5 de psp) se observó que durante la luteólisis espontánea aumentó la producción endógena de IL-lβ y de PGF2α, mientras que disminuyeron la biosíntesis de P, los niveles del mRNA y de la proteína StAR y el contenido de glutation reducido (molécula antioxidante). La IL-Iβ fue capaz de reducir la biosíntesis de P y de aumentar la producción de PGF2α, incrementando los niveles proteicos de la COX-II pero no los de COX-I, enzimas responsables de la síntesis de PGs. Además, la IL-lβ moduló el estado oxidativo del CL funcional ya que aumentó el índice de lipoperoxidación (TBARs) y redujo el contenido de glutation reducido. Por lo tanto, la incubación de los explantes ováricos (día 5 de psp) en presencia de la IL-lβ reprodujo, en los CLs funcionales, las características observadas en los CLs en regresión sugiriendo que la IL-lβ promueve la luteólisis funcional. Mientras que los niveles del mRNA de la iNOS aumentaron en el CL en regresión, el contenido del mRNA de la eNOS disminuyó en un 50% en el día 9 de psp. A su vez, la producción de NO fue mayor en el CL en regresión, evidenciando la presencia de un sistema generador de NO en los explantes ováricos en las distintas etapas del desarrollo luteal. La IL-lβ estimuló la síntesis de NO y la incubación con el sustrato de la NOS, la L-Arginina, disminuyó la síntesis de P y aumentó la de PGF2α. Por otro lado, la presencia del L-NAME revirtió los efectos inducidos por la IL-lβ, indicando que el NO estaría involucrado en el mecanismo de acción de la citoquina. La activación de la iNOS sería un evento necesario en la acción biológica de la IL-lβ, ya que la citoquina aumentó la expresión del mRNA y de la proteína iNOS, mientras que el 1400W, inhibidor selectivo la iNOS, revirtió completamente su acción sobre la P. La acumulación de GMPc se incrementó por el tratamiento con IL-lβ y, mientras que el 8-Bromo-GMPc, un análogo del GMPc, disminuyó la biosíntesis de P, la presencia del inhibidor de la guanilato ciclasa soluble, el ODQ, anuló la reducción en la esteroidogénesis inducida por la IL-lβ .Estos resultados sugieren que el GMPc participa en el mecanismo de acción de la IL-lβ. Más aún, dado que el ODQ anuló el efecto antiesteroidogénico inducido por la L-Arginina, el GMPc sería un intermediario necesario en el efecto inhibitorio del NO sobre la biosíntesis de P. Los resultados del presente trabajo de tesis sugieren que la IL-Iβ participa en la luteólisis funcional a través de un mecanismo que involucra al NO, la isoforma iNOS y el GMPc.

Abstract:
In mammals, luteal regression or luteolysis is a determinant event for the reproductive process as it guarantees the end of a non-conceptional cycle, enabling the onset of a new potentially fertile cycle. Recent studies demonstrated the accumulation of leukocytes in the regressing CL, associated to pro-inflammatory cytokine production and free radical generation. Thus, the aim of the present work was to study the participation of Interleukin-lbeta (IL-1β) in functional luteolysis. Also, as nitric oxide synthase inhibitors prolong CL lifespan, we evaluated if nitric oxide (NO) was involved in IL-lβ signaling pathway. We used the rat pseudopregnant model, in which the administration of PMSG induces the formation of CLs of approximately lO days of life. Comparative analysis between the regressive (day 9 psp) and functional (day 5 psp) CLs revealed that during spontaneous luteolysis the endogenous IL-1β and PGF2α production increased, whereas progesterone biosynthesis, StAR mRNA and protein expression as well as reduced glutathione diminished. IL-1β was able to reduce P biosynthesis yet augment PGF2α production, enhancing COX-II protein expression but not COX-I expression, rate-limiting enzymes of PGs synthesis. In addition, IL-1β affected the overall mid-luteal redox state, as reactive oxygen species generation (TBARs) was increased in the presence of IL-lβ while intracellular glutathione content was reduced. Therefore, the incubation of ovarian explants with IL-lβ mimicked, in the functional CLS, the features seen in the regressive CLs suggesting that IL-1β promotes functional luteolysis. While iNOS mRNA levels augmented in the regressive CL, eNOS mRNA levels diminished to a 50% on day 9 psp. This was accompanied by a higher production of NO in the regressing CL, unveiling the presence of a NO-generator system in ovarian explants at different stages of CL development. IL-lβ was able to stimulate NO synthesis and the incubation with L-Arginine exerted both a reduction in P production and an increase in PGF2α synthesis. On the other hand, the presence of L-NAME reverted IL-lβ-induced anti-steroidogenic effect, suggesting that NO is involved in lL-lβ signaling pathway. INOS activation might be a necessary event in lL-lβ biological actions, as IL-1β increased iNOS mRNA and protein expression and furthermore, the selective iNOS inhibitor 1400W completely reverted the anti-steroidogenic effect elicited by lL-lβ. IL-1β promoted GMPc accumulation and, whereas the permeable GMPc analogue, 8-Bromo- GMPc mimicked IL-lβ action, reducing P levels, the soluble guanylyl cyclase inhibitor ODQ blocked the IL-lβ-induced anti-steroidogenic effect. These results stroneg suggest that GMPc is involved in IL-Iβ transduction pathway. Moreover, as ODQ prevented L-Arginine-elicited anti-steroidogenic effect, GMPc could be regarded as a necessary intermediary molecule in the NO-induced inhibitory action on P biosynthesis. The results from the present study suggest that IL-lβ participates in functional luteal regression through a mechanism involving NO, the inducible NOS isoform and GMPc.

Dengra, Silvina. "Estudios experimentales y teóricos del transporte iónico en electrodeposición en celdas delgadas" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió el transporte iónico y la morfología de crecimiento en depósitos ramificados en celdas delgadas a través de mediciones experimentales y teóricas, y el modelado computacional. Se usaron en forma simultánea las técnicas de Schlieren y partículas trazadoras para seguir la evolución de los frentes de concentración y los rollos convectivos en regímenes gravitoconvectivos y electroconvectivos dominantes. El modelo teórico macroscópico se basa en primeros principios, la ecuación de Nernst- Planck para el transporte de iones, la ecuación de Poisson para el potencial electrostático y la ecuación de Navier-Stokes para el flujo de fluido. Se presentan simulaciones numéricas para configuraciones de celdas reales usando computación en serie y paralela. En las simulaciones numéricas en paralelo, se hizo uso de técnicas de descomposición por dominios y métodos fuertemente implícitos para su implementación en un cluster tipo Beowulf con MPI bajo Linux. Esto permitió la utilización de mallas muy finas en dorninios distorsionados que se acercan más a la realidad de los experimentos físicos realizados, con el beneficio de un speed up casi lineal para algunos casos. La teoría y las simulaciones numéricas predicen la completa interacción de los frentes, la generación de vértices y una correcta evolución espacio-temporal, en concordancia con los resultados experimentales observados.

Abstract:
Ion transport and growth morphology in ramified deposits in thin-layer cells are studied through experimental measurements and theoretical and computational modeling. Simultaneous Schlieren and particle image velocimetry techniques are used to follow front development of concentration fields and convection rolls in gravitoconvection and electroconvection prevailing flows. The theoretical macroscopic model is based on first principles, using the Nernst-Planck equations for ion transport, the Poisson equation for the electrostatic potencial and the Navier-Stokes equations for the fluid flow. Numerical simulations in realistic cell configurations using serial and parallel computing are presented. In the parallel simulations, use is of domain decomposition techniques with a strongly implicit iterative method and its implementation in a Beowulf cluster under MPI and Linux. This allows the utilization of very fine grids in highly distorted domains with a more realistic physical parametrization and results in a robust algorithm attaining almost linear speed up. Theory and simulations predict full front interaction, vortex generation and merging, and a space-time fronts evolution, in close agreement with the results observed in the experiments.

Della Penna, Angela Beatriz. "Impacto del herbicida paraquat sobre invertebrados acuáticos" (2004). Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El paraquat es un herbicida, ampliamente usado en ambientes terrestres y acuáticos. El objetivo del presente trabajo fue investigar algunos efectos tóxicos del paraquat en dos especies no blanco de invertebrados acuáticos. Especificamente se emplearon ejemplares adultos del oligoqueto Lumbriculus variegatus J. y moluscos gastrópodos pigmentados y no pigmentados de Biomphalaria glabrata S. En primer término se determinaron los valores de CL50, exponiendo ambos organismos en condiciones agudas. El paraquat presente en un producto formulado comercial resultó ser más tóxico para la especie L. variegatus que la solución conteniendo el compuesto puro. Para organismos de L. variegatus la toxicidad del paraquat formulado comercial aumenta con el aumento de temperatura y disminuye por el efecto de material particulado presente en el medio del bioensayo. Los valores de CL50 (96 horas y 25 +/- °C) resultaron similares para L. variegatus y ejemplares pigmentados de B. glabrata resultaron ser considerablemente más sensibles. En segundo lugar, se efectuaron bioensayos subletales a fin de investigar diversas respuestas bioquímicas. En este trabajo se reportan, por primera vez según nuestro conocimiento, valores de los niveles de las poliaminas putrescina, espermidina y espermina, en organismos controles de las dos especies de agua dulce en estudio. Por tratamiento a un nivel de 0,5 mg/L se observó que los niveles de poliaminas resultaron ser modificados por acción del paraquat producto comercial en L. variegatus. En cambio no se observaron diferencias significativas, con respecto a los controles, en organismos pigmentados y no pigmentados de B. glabrata. Los organismos de L. variegatus. al igual que ejemplares pigmentados de B. glabrata, no evidenciaron cambios en los procesos de peroxidación lipídica por acción del paraquat formulado comercial a un nivel de exposición de 0,5 mg paraquat/L. En cambio, tras 48 horas de exposición los organismos no-pigmentados de B. glabrata presentaron un aumento significativo en la peroxidación de lípidos. Los resuñtados que se obtuvieron en el presente trabajo permiten proponer tanto el análisis de niveles de poliaminas como la investigación de procesos de lipoperoxidación como posibles parámetros biomarcadores de contaminación por paraquat

Daroqui, María Cecilia. "Caracterización del sistema TGF-ß/TßRs en carcinomas de mama y pulmón murinos. Rol en la progresión tumoral" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo analizamos el rol de TGF-β en la progresión tumoral, empleando dos modelos de adenocarcinoma murino, de mama y de pulmón. Nuestro modelo de tumor de mama está constituido por los tumores parentales M3 y MM3, poco y altamente metastásicos, respectivamente, y por las lineas celulares derivadas LM3 y LMM3, altamente invasivas y metastásicas. Todas las células de nuestro modelo expresan el sistema completo TGF-β y sus receptores específicos TβRs, y éste es funcional. Además, mediante estudios in vitro determinamos que TGF-β activa la vía de transducción de señales Smads y otras vias, como p38Mapk y MEK/ERK, en las células de carcinoma de mama de nuestro modelo. En cuanto a su acción biológica, TGF-β tiene un efecto antiproliferativo sobre los cultivos primarios de M3 y MM3, mientras que las líneas son resistentes a dicho efecto. Por otra parte, TGF-β induce la actividad de MMP-9 en todas las células de nuestro modelo. Determinamos por primera vez que las vías de señalización p38Mapk y MEK/ERK bloquean la inducción de MMP-9 por TGF-β y que los receptores de señalización TβRI y TβRII son esenciales en esta respuesta. Además, estudiamos el rol de TGF-β sobre la expresión y/o actividad de distintos componentes del sistema de activación del plasminógeno, incluyendo activadores como el uPA y el uPA unido a membrana, e inhibidores como PAI-1. Detectamos que TGF-β inhibe el balance neto de este sistema en las células poco metastásicas, mientras que lo estimula en las células de fenotipo más agresivo. Por otro lado, analizamos la función de TGF-β en la reorganización del citoesqueleto de acfina y determinamos que TGF-β no modula las tropomiosinas ni la proteina HSP27, moléculas relacionadas con actina. Sin embargo, demostramos por primera vez que la actividad del complejo Arp2/3, fundamental en la polimerización de actina, aumenta en respuesta a TGF-β,si bien su consecuencia biológica debe aún esclarecerse mediante otros estudios. Además, TGF-β induce una leve remodelación de la actina cortical en nuestro modelo, sin producir cambios fenotípicos como la formación de fibras de stress y la transición epitelio-mesenquimática como ocurre en sistemas epiteliales no-tumorigénicos. Asimismo, determinamos que la via de señaligación MEK/ERK bloquea la formación de fibras de stress en las células tumorales en estudio y que además está involucrada en la inducción de la migración celular por TGF-β, junto con la vía p38Mapk. Por otra parte, TGF-β estimula la capacidad invasiva in vitro de todas las células de nuestro modelo de tumor de mama. Observamos que la presencia de TβRI y TβRII funcionales, así como las vías de señalización p38Mapk y MEK/ERK, son esenciales en este proceso. Estos datos son muy novedosos, ya que no ha sido descripto previamente un mecanismo de acción de TGF-β en la invasión celular. Mediante estudios in vivo determinamos que TGF-β no modula la capacidad angiogénica en nuestro modelo. Por otro lado, empleando células LM3 transfectadas con formas dominantes negativas de los receptores de señalización de TGF-β, encontramos que la tasa de crecimiento tumoral y la capacidad metastásica de las células de adenocarcinoma mamario en estudio dependen de un sistema funcional TGF-β/TβRs. Por otro lado, estudiamos el sistema TGF-β/TβRs en la línea de adenocarcinoma de pulmón LP07, altamente metastásica. Encontramos que estas células han perdido la capacidad de expresar la proteina TGF-β, respecto del tumor P07 que le dio origen. Además, determinamos que las células LP07 expresan los receptores de señalización TβRI y TβRII. Por medio de estudios in vitro detectamos que si bien las células LP07 no producen TGF-β, la via de Smads y otras vías de transducción de señales pueden ser activadas por TGF-β, por lo que son capaces de responder a la citoquina. Así, TGF-β es un potente inhibidor del crecimiento de LP07. Además, TGF-β inhibe marcadamente la actividad de las proteasas uPA y MMP-2 en las células LPO7 y controla su motilidad in vitro. Y también es capaz de inhibir la angiogénesis in vivo de LP07. De este modo, nuestros resultados indican que TGF-β podría funcionar como un supresor tumoral en nuestro modelo de adenocarcinoma de pulmón, y que la pérdida de funcionalidad del sistema TGF-β/TβRs podria contribuir a la progresión tumoral en estas células.

Abstract:
In the present work we have studied the role of TGF-β in tumor progression, by using a mammary and a lung murine adenocarcinoma experimental models. The mammary tumor model is composed by two closer related tumors, the poorly metastatic M3 and the highly metastatic MM3 ones, as well as the derived highly invasive and metastatic cell lines, LM3 and LMM3. We determined that all these cell types express both TGF-β and its receptors (TβRs), so they present the complete TGF-β/TβRs system. By in vitro studies we found that TGF-β induces the activation of different signaling pathways in our model, including Smads, p38Mapk and MEK/ERK. Besides, TGF-β exerts an antiproliferative action on M3 and MM3 primary cultures while the derived cell lines are resistant to this effect. On the other hand, TGF-β estimulates MMP-9 activity in all the cell types of our tumor model. We show here for the first time that p38Mapk y MEK/ERK pathways block MMP-9 by TGF-β, as well as that the TGF-β signaling receptors, TβRI and TβRII, are key components of this response. We also studied the role of TGF-β on the expression and/or activity of distinct components of the plasminogen activation system, including activators like uPA and membrane-bound uPA and inhibitors like PAI-1. We found that TGF-β inhibits the net balance between activators and inhibitors in the poorly metastatic cells, enhancing it in those cells with the more aggressive phenotype. On the other hand, we studied TGF-β action on actin cytoskeleton reorganization and we determined that TGF-β is not able to modulate the actin-related molecules tropomyosins and HSP27. However, we show here for the first time that TGF-β enhances Arp2/3 complex activity, although its biological significance remains to be fully determined. Besides, we found that TGF-β induces only a slight remodelling on the cortical actin in our tumor model, without affecting the cellular phenotype like the formation of stress fibers and the epithelial-to-mesenchymal transition showed by some normal epithelial cells. We also demonstrate that the MEK/ERK pathway blocks stress fiber formation in the tumor cells studied here, and that this pathway is also implicated in TGF-β-mediated cell migration, together with the p38Mapk pathway. Besides, we found that TGF-β induces the in vitro invasive ability of all the cell types studied here, and that this effect requires TβRI and TβRII activity as well as p38Mapk and MEK/ERK pathways. This is the first time that a signaling pathway is implicated in TGF-β-induced cellular invasion. By in vivo studies we showed that TGF-β is not able to modulate the angiogenic ability of the mammary tumor cells studied here. Finally, by using LM3 cells stably transfected with dominant negative forms of TGF-β signaling receptors, we determined that the tumor growth rate as well as the ability to form metastases depend on a functional TGF-β/TβRs system. On the other hand, we studied the role of the TGF-β/TβRs system in the highly metastatic lung tumor LP07 cell line. We found that LP07 cells do express TβRs but they have lost the ability to express TGF-β at the protein level showed by P07 parental cells. Using in vitro studies we detected that despite LP07 cells do not produce TGF-β, Smads and other signaling pathways can be activated by TGF-β, so these cells are able to respond to the cytokine. Besides, TGF-β markedly inhibits the activity of proteases like uPA and MMP-2 in LP07 cells as well as it reduces the in vivo angiogenic ability of these cells. So, our data suggest that TGF-β could function as a tumor suppressor in our lung tumor model, and that a disruption in the TGF-β/TβRs system regulation may thus contribute to tumor progression.

D’Agostino, Agata Magdalena. "Estudio de los mecanismos moleculares de patogénesis del sarcoma de Kaposi mediados por el Herpesvirus Humano-8/KSHV y su oncogén, el receptor acoplado a proteína G (vGPCR), en modelos animales" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
KSHV es un oncovirus implicado en Sarcoma de Kaposi (KS) y otros cánceres asociados a SIDA. KS es un neoplasma caracterizado por la proliferación de células ahusadas y la intensa angiogénesis. Los mecanismos a través de los cuales KSHV causa la respuesta angioproliferativa de KS se desconocen y la reproducción de todos los aspectos de KS mediante infección experimental por KSHV aún no ha podido ser demostrada. El receptor acoplado a proteína-G (vGPCR) de KSHV puede estimular cascadas de señalización que inducen angiogénesis y transformación celular. Identificar estas cascadas puede tener significancia terapéutica. Ciclooxigenasa-2 (COX-2) es un medidor involucrado en angiogénesis tumoral que puede ser regulada por antinflamatorios (AINEs). En la primera parte de este trabajo demostramos que vGPCR regula la actividad y la expresión de COX-2 vía ERK-1/2. Encontramos que la inhibición de COX-2 impide la angiogénesis inducida por vGPCR y que la administración del AINE Celecoxib retarda el crecimiento tumoral con disminución en la vascularata y producción de VEGF. Así, COX-2 sería uno de los componentes moleculares del cambio angiogénico de vGPCR y un posible blanco terapéutico. En la segunda parte mostramos que la transfección con KSHV clonado en un Cromosoma Artificial Bacteriano (KSHVBac36) en preparaciones de médula ósea murinas enriquecida en precursores de células endoteliales (mEC) es suficiente para inducir tumorigénesis y llevar al cambio fenotípico angiogénico. Las células mEC transfectadas con KSHVBac36 (mECK36) estaban infectadas con KSHV, secretaban VEGF, eran angiogénicas in vivo e indujeron en ratones inmunodeficientes la formación de sarcomas de células ahusadas vascularizados que expresaban LANA y marcadores característicos de KS. La inhibición de la expresión de vGPCR en las mECK36 utilizando siRNA condujo a la inhibición de su angiogenicidad y tumorigenicidad. Estos resultados definen un modelo animal para estudiar la patogénesis de KS mediada por KSHV y señalan a vGPCR como uno de sus principales oncogenes angiogénicos.

Abstract:
KSHV ia a human oncovirus associated with Kaposi´s sarcoma (KS) an AIDS associated cancer. KS is a neoplasm characterized by proliferation of spindle-shaped cells and intense angiogenesis. The mechanisms whereby KSHV causes KS angioproliferative response are not well defined and the reproduction of KS by experimental KSHV infection has not yet been shown. vGPCR is a G protein-coupled receptor encoded by KSHV that subverts host´s signaling pathways to induced cell transformation and angiogenesis. Cyclooxygenase-2 (COX-2) is a mediator involved in tumor angiogenesis that can be inhibited by NSAIDS. We demonstrated that vGPCR upregulates COX-2 activity and expression, and we found that inhibition of COX-2 by the NSAID Celecoxib impairs vGPCR-driven angiogenesis and tumorigenesis. Taken together these results show that COX-2 is a molecular mediator of vGPCR angiogenicity and potential target for KS therapy. On the second part we show that transfection of KSHV cloned in a Bacterial artificial chromosome (Bac36) into mouse Bone marrow preparations enriched in endothelial cells and its progenitors (mEC) is sufficient to induce tumorigenesis and angiogenesis. mEC transfected with KSHVBac36 (mECK36) were infected with KSHV, displayed high levels of VEGF secretion, were angiogenic in vivo and induced spindle-cell sarcomas expressing KSHV LANA and KS phenotypic markers. The inhibition of vGPCR expression mediated by siRNA led to inhibition of mECK36 angiogenesis and of tumor growth. These results define an animal model of KSHV-mediated KS pathogenesis in vivo and point to vGPCR as one of its major angiogenic oncogenes.

Cordo, Sandra M.. "Interacción del virus Junín con el citoesqueleto y la membrana de la célula huésped" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
EI virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, es un miembro de la familia Arenaviridae. Es un virus envuelto de genoma ARN segmentado cuyo ciclo de replicación ha sido caracterizado en varios aspectos. La entrada a las células blanco se realiza vía endocitosis mediada por receptor y posterior fusión dependiente de PH. Una vez que la nucleocápside se encuentra dentro del citoplasma se expresan 5 proteínas estructurales, mediante una estrategia de codificación ambisense. La proteína mayoritaria asociada a la nucleocápside es denominada NP. A partir de un único precursor glicoproteico (GPC), sintetizado en el retículo y exportado a la membrana plasmática de la célula, se obtienen dos glicoproteínas virales denominadas GP1 y GP2. Ambas conforman las estructuras claviformes encontradas en la envoltura viral. Se desconocen hasta el momento los mecanismos detallados y las estructuras celulares involucradas en el transporte de las distintas proteínas virales hacia el sitio de brotación. El ensamblado de las partículas virales se lleva a cabo en la membrana plasmática de las células infectadas. En este trabajo se estudiaron algunos aspectos de la interacción virus-célula huésped, caracterizando la asociación de NP, GPC y GP1 a distintas estructuras celulares. En primer lugar se estudió la interacción del virus con la red de filamentos intermedios (FI) del citoesqueleto. Se utilizó el compuesto acrilamida capaz de desorganizar específicamente los FI. La producción de virus infeccioso disminuyó de manera dosis-dependiente en presencia del mismo. Los resultados, observados en celulas Vero, cultivos de fibroblastos humanos y astrocitos murinos, fueron comparables. Se analizó luego el efecto del compuesto sobre diferentes pasos del ciclo de multiplicación. De esta manera se determinó que la integridad de los FI es crucial al menos durante los pasos previos a la síntesis de proteínas virales y posteriores a la internalización. Mediante extracciones específicas realizadas con detergentes no iónicos se encontró que NP se asocia a la fracción celular correspondiente al citoesqueleto, aunque no se determinó a que componente correspondería esta interacción. Las glicoproteínas no mostraron asociación específica a estas fracciones celulares en iguales condiciones. Por otro lado, modificaciones en el contenido de colesterol de las células infectadas y tratadas con inhibidores de la enzima HMG-CoA reductasa, disminuyeron la infectividad y localización de las glicoproteinas en la membrana de las mismas. Estos resultados llevaron al análisis de la asociación de GPC y GP1 a estructuras de membrana ricas en colesterol denominadas rafts. Los ensayos de fraccionamiento celular específicos para estos microdominios de membrana mostraron la localización de las glicoproteínas en rafts. Esta interacción fue dependiente de la temperatura y de la presencia de colesterol en los cultivos infectados. Además, la asociación de las glicoproteínas a las fracciones rafts fue estabilizada a 37°C por la adición de anticuerpos específicos. Estos resultados sugieren la utilización de esta vía como mecanismo de transporte para GPC y GP1 a la membrana celular de las células infectadas. Asimismo la localización de las glicoproteínas en los microdominios rafts podría representar una estrategia para el reclutamiento de los componentes virales previo al paso de liberación de la progenie en las células infectadas.

Abstract:
Junin virus (JUNV), the etiological agent of argentine hemorrhagic fever, is a member of the Arenaviridae family. The viral cycle multiplication of this RNA virus has been characterized in different aspects. The entrance in the target cells is performed by receptor-mediated endocytosis following pH dependant fusion step. Once the nucleocapsids are within the cytoplasm the ambisense strategy allows expression of five structural proteins. The major nucleocapsid associated protein is named NP. As a result of the glycoprotein precursor synthesis and after its maturation and exocytic transport to plasma membrane of infected cells, two glycoproteins are obtained. Both proteins, named GP1 and GP2, form the claviform structures found in the viral envelope. At this moment, the detailed mechanisms and cellular structures involved in the transport of different viral proteins towards the budding site are not known although the fact that viral assembly is carried out in plasma membrane of infected cells is currently accepted. In this work we have studied some aspects of virus-cell interaction characterizing the association of NP, GPC y GP1 to cellular structures. First, we have studied the interaction between virus and cytoskeletal intermediate filaments (IF). In the presence of acrylamide, compound that selectively disrupt IF, viral yield was diminished. The results were similar in Vero cells, human fibroblast cultures and murine astrocytes. Then, we analyzed the effect of acrylamide on different steps of the multiplication cycle. It was determined that IF integrity is essential at least between the step of internalization and viral protein synthesis. Detergent extractions of infected cultures demonstrated that NP associates to cellular cytoskeletal fraction although it was not possible to identify the specific cytoskeletal framework involved in that association. Glycoproteins did not show specific association to these cytoskeletal fractions under similar conditions assayed. On the other hand, modifications in the cholesterol contents of infected cells induced by HMG-CoA reductase inhibitors, diminished infectivity and glycoproteins membrane localization. This result leded us to analyse the association of GPC and GP1 to membrane cholesterol enriched structures named rafts. Specific cellular fractionation assays showed glycoproteins associated to raft microdomains. This interaction was temperature and cholesterol dependant. Moreover, glycoprotein association to membrane rafts was stabilized at 37°C by specific antibody addition. These results suggest that GPC and GP1 may utilize the exocytic raft pathway to reach the plasma membrane of infected cells. Finally, glycoproteins raft association may represent the strategy to recruit viral proteins before releasing progeny from the cells.

Cichowolski, Marcela. "Nautílidos del cretácico de Argentina (cuencas neuquina y austral) y Antártida (cuenca James Ross)" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se describen Cymatoceras perstriatum (Steuer), del Cretácico Inferior de la cuenca Neuquina (centro-oeste argentino) y C. patagonicum Cichowolski del Turoniano de la cuenca Austral (sur argentino), junto con otras formas de Cymatoceras indeterminadas de esta misma cuenca, cuya preservación es regular y sus edades varían entre el Hauteriviano y el Campaniano. De la cuenca James Ross (Antártida) se describe material asignado a Eutrephoceras subplicatum (Steinmann) (que también se encuentra en la cuenca Austral), Eutrephoceras antarcticum Cichowolski et al. y un ejemplar de Eutrephoceras indeterminado. Todas estas especies tienen una edad cretácica tardía. Se incluyeron estas especies en un análisis filogenético, junto con especies post-triásicas de otros géneros, y mediante el método de pesos implicados se obtuvo un solo árbol con maximo ajuste, en el cual ni Cymatoceras, ni Eutrephoceras, son monofiléticos. Tampoco resulta monofilética la familia Cymatoceratidae en este análisis. El estudio tafonómico de Cymatoceras perstriatum en el Miembro Pilmatué de la Formación Agrio revela que hay básicamente dos rutas tafonómicas seguidas por las conchillas de esta especie, las cuales se ven reflejadas en los modos de preservación, fundamentalmente en los rellenos sedimentarios. En El Salado (Neuquén) se ha encontrado una gran concentración de conchillas de C. perstriatum (más de 200 ejemplares), la que representa uno de los pocos ejemplos conocidos a nivel mundial. Su origen se asociaría a eventos de tormenta en conjunción con algún tipo de comportamiento gregario de esta especie. Las diferencias en el patrón de distribución facial de los nautílidos y amonites en la Formación Agrio, son asignadas a las diferencias morfológicas de las conchillas de ambos grupos. La gran mayoría de los ejemplares de Eutrephoceras subplicatum se encuentra en concreciones calcáreas, y por lo tanto su preservación es muy buena. C. perstriatum y E. subplicatum eran formas de aguas relativamente someras, cuya estrategia reproductiva era similar a la de Nautilus (estrategia tipo k), lo que tiene importantes implicancias paleobiogeográficas. La naturaleza estenotópica de los sitios de reproducción de los nautílidos post-triásicos brinda un significado paleoambiental a los estratos que los hospedan.

Abstract:
Cymatoceras perstriatum (Steuer), from the Lower Cretaceous of the Neuquén Basin (west-central Argentina), and C. patagonicum Cichowolski, from the Turonian of the Austral Basin (southern Argentina) are described, along with some other Cymatoceras unidentified at specific level, from the same basin, whose preservation state is regular and their ages range from Hauterivian to Campanian. Material assigned to Eutrephoceras subplicatum (Steinmann), from the James Ross Basin (Antarctica), together with E. antarcticum Cichowolski et al. and Eutrephoceras sp., are also described. All these species are Late Cretaceous in age. These Cretaceous species were included in a phylogenetic analysis, along with other post-Triassic species belonging to different genera. Applying the implied weights method, only one tree with maximum fit was obtained, in which Cymatoceras, Eutrephoceras, and the family Cymatoceratidae resulted to be not monophyletic. The taphonomic study of Cymatoceras perstriatum in the Pilmatué Member of the Agrio Formation suggests that there are two main taphonomic pathways followed by the shells of this species, which are evidenced in their preservation modes, particularly in the sedimentary fills. A great concentration of shells of C. perstriatum (more than 200 specimens) was found in El Salado (Neuquén Province), which represents one of the few known examples of the world. Storm events, in addition to some kind of gregarious behavior of these animals, would have to be associated to give rise to this unique accumulation. Differences in shell morphology between ammonoids and nautilids of the Agrio Formation are suggested to be responsible for the observed differences in the facial pattern distribution between both groups of cephalopods. Most specimens of Eutrephoceras subplicatum, in James Ross Basin, were found in calcareous concretions, and therefore their preservation state is very good. C. perstriatum and E. subplicatum were relatively shallow-waters forms, whose reproductive strategy was similar to that of Nautilus (k- type), which has paleobiogeographic implications. The stenotopic nature of the post-Triassic nautilid’s reproductive sites, gives a paleoenvironmental importance to their host strata.

Cichón, Liliana Isabel. "Control de poblaciones de Cydia pomonella L.(Lepidoptera : Tortricidae) mediante la técnica de la confusión sexual en el Alto Valle del Río Negro y Neuquén" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo se evalúa la eficacia y sustentabilidad del empleo de la Técnica de la Confusión Sexual (TCS) para el control de la plaga Cydia pomonella (Insecta Lepidoptera: Tortricidae) conocida como gusano de la pera y la manzana o “carpocapsa”, en montes de manzanos del Alto Valle de Río Negro y Neuquén con diferentes niveles de infestación y conducidos bajo diferentes programas de producción, Producción Frutícola Integrada (PFI) y Producción Orgánica (PO). Carpocapsa, es una especie nativa de Eurasia que se ha distribuido ampliamente en todo el mundo acompañando a su principal hospedero, Malus domestica B. Sin embargo, en algunas regiones de la China, Corea y Japón, no se observa su presencia, mientras que en el SO de Australia, a través de campañas de exterminación y un estricto control, se ha impedido su establecimiento. En la Argentina, carpocapsa se ha adaptado exitosamente a las condiciones agro-ecológicas de la región del Alto Valle del Río Negro y Neuquén, pudiendo desarrollar 3-4 generaciones al año, lo que implica un alto riesgo para los cultivos frutícolas y para la economía de la zona. Esto ha llevado a la necesidad de estudiar estrategias de control adecuadas a las características locales, que permitan evitar porcentajes de daño en frutos que comprometan la producción regional. El presente trabajo es una contribución para la búsqueda y evaluación de estas herramientas de control en el Alto Valle de Río Negro y Neuquén, Argentina. Con el objeto de evaluar las diferentes estrategias de control de carpocapsa, fue necesario en primer lugar, medir los niveles de infestación en los montes frutales bajo ensayo. Se estudiaron 2 sistemas de monitoreo de la densidad poblacional de carpocapsa en montes frutales de esta región argentina: el método de captura de adultos en trampa y el de muestreo de frutos caídos. Con el primer método se evaluó la eficacia de captura de los cebos cargados con 1 mg y 10 mg de feromona (codlemone) en montes frutales con baja y con media a alta densidad poblacional de carpocapsa. Los datos obtenidos indican que las trampas con cebos de 10 mg son una herramienta más confiable que las cebadas con cápsulas de 1 mg en montes con densidades de población baja de la plaga. En cambio, no se registraron diferencias en las capturas entre ambos tipos de trampas en montes con densidades poblacionales medias y altas de la plaga. Mediante el segundo método se estudió la posibilidad de reemplazar la evaluación habitual del porcentaje de frutos dañados en planta por el muestreo de frutos dañados en suelo. Los resultados muestran que para un porcentaje de frutos dañados en planta ≤ 1%, el número de frutos caídos dañados por hectárea es ≤ 20 (p< 0,05). Por medio de electro-antenogramas se estudió el desempeño de distintos tipos de emisores de feromonas (Check Mate WS®, Isomate CPlus®) así como la influencia de distintos factores ambientales (viento, temperatura y humedad relativa ambiente) en la distribución y concentración de estas sustancias en relación con las barreras rompeviento en los montes de manzanos. Se observó una menor respuesta de los machos de carpocapsa a los compuestos presentes en la atmósfera de los montes tratados con emisores Check Mate WS® (codlemone puro en membrana) respecto a los tratados con el Isomate CPlus® (codlemone + dodecanol + tetradecanol en tubo de polietileno). Sin embargo, serán necesarios algunos estudios complementarios para determinar si la menor respuesta de los machos se debe a la composición feromonal de los 2 emisores estudiados o a diferencias en la tasa de emisión como consecuencia de los distintos materiales con los que éstos están diseñados. Mediciones por EAG en montes frutales bajo condiciones de viento diferentes, permitieron determinar que la concentración de feromona sigue una evolución inversamente proporcional a la velocidad del viento. A velocidades de viento inferiores a 0,5 m/seg, las concentraciones de feromona resultaron al menos dos veces mayores que las registradas con velocidades mayores, entre 0,5 y 1m/seg. La turbulencia del aire y la temperatura son factores que afectan a la concentración de la feromona en los diferentes puntos de los montes tratados, aunque no afectaron su valor promedio. Por otra parte, se demostró una relación directa entre la humedad relativa ambiente y la concentración de feromona. Se determinó además, que bajo las condiciones del Alto Valle del Río Negro y Neuquén el restablecimiento de la nube de feromona se produce en forma rápida cuando la velocidad del viento decae gradualmente, por debajo de 0,5 m/seg, manteniéndose hasta aproximadamente 1 hora después de que la velocidad del viento alcanza valores por debajo de 0,25 m/seg. La sustentabilidad del uso de la TCS quedó en evidencia al combinar esta técnica con otras herramientas complementarias como insecticidas botánicos y biológicos en un sistema de producción orgánica (PO). El uso combinado de la TCS con el insecticida botánico Ryania speciosa fue la táctica de control de carpocapsa más eficaz, que provocó un cambio sanitario relevante a partir del primer año de su implementación. Se puso además en evidencia la importancia de efectuar un adecuado control de la primera generación de carpocapsa cuando se emplea la TCS como herramienta conjunta con insecticidas de acción larvicida. El empleo de esta táctica de control permitió sanear un monte frutal orgánico que presentaba en la cosecha previa a la implementación del tratamiento, altos porcentajes de frutos dañados por carpocapsa (> 20%). Debido al empleo de tácticas con diferente nivel de selectividad en el control de carpocapsa en los montes orgánicos, se produjo un incremento indeseado de las poblaciones de otro tortrícido, grafolita, que pudo ser controlado eficazmente con la TCS para grafolita. Los resultados obtenidos en áreas donde se implementaron tácticas de control aprobadas para la Producción Frutícola Integrada (PFI) indican que la TCS empleada en grandes áreas (mayores de 30 ha) y en conjunción con insecticidas de síntesis química de probada eficacia (metil azinfos), produjo la reducción de las densidades poblacionales de carpocapsa en un lapso de tiempo acorde con los tratamientos con insecticidas. Se determinó además que, con el solo empleo de insecticidas de síntesis química no es posible reducir el porcentaje de frutos dañados por debajo de 0,5%. La selectividad de la TCS sumada a la reducida eficacia del insecticida sobre algunos insectos enruladores de hojas, determinaron el establecimiento y crecimiento poblacional de Argyrotaenia pomililiana en el monte frutal PF1. Afortunadamente, dicha plaga es de fácil control con RCI y Bacillus thuringiensis var. Kurstaki). La disminución drástica de las densidades de población de carpocapsa por medio del empleo combinado de la TCS con aplicaciones de insecticidas de probada eficacia, determinó en el largo plazo (luego del tercer año), una reducción de 86-90% de los volúmenes de insecticidas por unidad de superficie a emplear, manteniendo los niveles de infestación de frutos por debajo de 0,2%.

Abstract:
The efficacy and sustainability of the Mating Disruption control technique (MDT) for the “codling moth” (CM) were investigated in apple tree orchards. The study was developed in the High Valley of Río Negro and Neuquén, in orchards infested with CM and managed with Integrated Fruit Production and Organic Production programs. The codling moth Cydia pomonella (Lepidoptera, Insecta : Tortricidae), is a species native to Eurasia that has spread worldwide, associated with its main host, Malus domestica B. Nevertheless, the CM is not present in some regions of China, Korea and Japan. Moreover, in Southeastern Australia, by means of eradication actions and strict control measures, the occurrence of this pest has been prevented. In Argentina, codling moth has adapted well to the agro-ecological conditions of the High Valley, developing up to 3-4 generations a year, which entails a serious risk for the crop and for the regional economy. For this reason, in order to avoid damage percentages that may jeopardize regional production, different suitable CM control strategies have been evaluated. This study is a contribution to the CM control technology and to the efficacy assessment of specific insect pest control strategies in the High Valley of Río Negro and Neuquén - Argentina. In order to evaluate properly the different CM control strategies currently in use in the High Valley, it was necessary, at first, to measure accurately the infestation levels in the trial plots. Two population monitoring systems for CM were evaluated: pheromone traps and fruit shedding. The efficacy of pheromone traps in fruit orchards with low, medium, and high CM population densities was assessed. The results show that traps baited with 10 mg codlemone constitute a much more reliable sampling tool than traps baited with 1 mg of codlemone, in orchards with low population densities of the pest. On the other hand, in orchards with medium to high CM population densities, captures in 1 mg and 10 mg traps show no statistical significant differences. An auxiliary CM population density monitoring system, that allows a fast and easy CM infestation judgment, was the counting of shedded-damaged fruit. This method is an alternative to the classic method of calculating the percentage of damaged fruit on the tree. Results of the shedded-damaged fruit counting show that infestation rates ≤1% assessed by counting infested fruits on the tree compares with ≤ 20 damaged-shedded fruits per hectare (p< 0.05). The performance of different types of pheromone dispensers (Check Mate WS®, Isomate C Plus®) and the influence of different environmental and structural factors (wind, temperature, relative humidity and wind-breaks) in the distribution and concentration pheromone in apple tree orchards were analyzed by means of electroantenograms. By the use of this technique, males show a lower response in orchards treated with Check Mate WS® dispensers than those exposed to treated Isomate C Plus® orchards. However, further studies will be necessary to find out if the differences in the response are due to the pheromone composition of the two dispensers analyzed, or to differences in the dispenser emission rate, as a consequence of the different dispenser constituents. EAG gauging in fruit orchards with different wind speeds, show that pheromone concentration performs inversely proportional to wind speed. At a wind speed below 0.5 m/s, pheromone concentrations were at least twice as high than those registered at wind speeds between 0.5 m/s, and 1 m/s. Additionally, when wind speed drops below 0.5 m/s, the reestablishment of the pheromone cloud occurs rapidly and persists for approximately 1 hour after wind speed reaches values below 0.25 m/s. Air turbulence and temperature influences directly the pheromone concentration at the different spots of the treated orchard, although these do not affect the average concentration of pheromone in the field. Also, in fruit orchards, a direct relationship between wind speed, relative humidity and pheromone concentration was established. The successful combination of the MD-Technique with other CM control tools such as biopesticides evidenced sustainability of the MDT in organic production systems. The combination of MDT with the botanic pesticide Ryania speciosa was the most effective CM control strategy, showing a major reduction in fruit damage after one year of having put it into practice. Also, it was proven that an adequate control of the first generation of CM, by using MDT together with pesticides, is essential to sanitize an fruit orchard which had a high percentage damage by CM in the previous season (> 20%). It was shown as well that the total number of diapausing larvae per hectare is key information to define the MDT management. In organic orchards, the use of strategies with different selectivity for CM control causes drawbacks such as the occurrence of another tortricid, Grapholita molesta, which was effectively controlled during the field trials by the use of specific MDT. Besides, the selectivity of the MDT together with the reduced efficacy of some OP's insecticides caused the take over of Argyrotaenia pomililiana in the IFP fruit orchard, which was controlled by IGR's and Bacillus thuringiensis var. Kurstaki during field trials. In the framework of large area Integrated Fruit Production management, it was shown that the MDT in combination with effective insecticides like azinphos-methyl, cutback CM populations during a time span that is linked directly to the number of sprayings. Besides, it was shown that the sole use of synthetic insecticides for CM control is not enough to achieve fruit damage lower than 0.5%. The substantial decrease of CM population densities when using jointly the MDT and insecticides of known efficacy, leads to a long term reduction of 86-90% in the volume of pesticides, keeping the CM infestation levels below 0.2%.

Chimeno Zoth, Silvina Andrea. "Estudio antigénico e inmunogénico de tres proteínas aisladas del virus de la diarrea viral bovina (BVDV): su aplicación al diagnóstico y al desarrollo de vacunas experimentales" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus de la diarrea viral bovina (BVDV)es el agente etiológico de una importante enfermedad que afecta al ganado ocasionando grandes pérdidas económicas a nivel mundial. La infección por BVDV es a menudo subclínica o causa sintomatología clínica leve y poco específica, sin embargo, la infección transplacentaria puede ocasionar desórdenes reproductivos, malformaciones congénitas y nacimiento de animales persistentemente infectados (PI). La vacuna empleada actualmente en Argentina se formula con virus inactivado químicamente. Sin embargo, los datos existentes sobre su efectividad para inducir anticuerpos neutralizantes son contradictorios y la protección frente a la infección no resulta plenamente satisfactoria. En nuestro país, la prevalencia de anticuerpos anti BVDV en el ganado bovino es de 40-90%, según los reportes; aproximadamente el 2% de la población total de animales se encuentra persistentemente infectado. En esta compleja situación epidemiológica, la técnica de referencia utilizada para la detección de anticuerpos anti BVDV es la seroneutralización en cultivo celular. Si bien esta técnica resulta muy especifica y sensible, requiere de un laboratorio de diagnóstico de mediana-alta complejidad y resulta económicamente desventajosa para analizar un número alto de muestras. En el presente trabajo se abordaron ambas problemáticas centrales para el control de la enfermedad. Por un lado, se desarrollaron y evaluaron ensayos de ELISA para detectar anticuerpos anti BVDV en el suero de los bovinos. Los ensayos se diseñaron utilizando cada una de las tres proteínas más inmunogénicas del virus, E0, E2 y NS3, expresadas en el sistema baculovirus / células de insecto. Los ensayos de ELISA demostraron ser altamente sensibles y específicos en la detección de anticuerpos anti BVDV, de manera similar a la neutralización. Más aún, la inclusión de la proteína no estructural NS3 permitió detectar anticuerpos anti BVDV en animales tipificados como negativos en ensayos de seroneutralización. Por otro lado, se ensayó una vacuna experimental basada en la glicoproteína E2. Para ello se llevó a cabo una prueba de vacunación y desafío en la que se evaluó la respuesta inmune humoral y la protección conferida por la vacuna experimental frente a una de las vacunas comerciales usada actualmente. El nivel de anticuerpos neutralizantes presentes en el suero de los animales vacunados con la vacuna recombinante E2 fue significativamente mayor que el inducido por la vacuna inactivada convencional. Al momento del desafío, los animales vacunados con E2 presentaron altos niveles de anticuerpos neutralizantes, mientras que en los animales de los grupos vacunados con vacuna inactivada o con placebo, éstos fueron indectables. Coincidentemente, la sintomatología clínica desarrollada por los bovinos vacunados con la vacuna E2 recombinantes después del desafío viral fue más leve. Los resultados obtenidos demuestran que es posible mejorar las actuales vacunas contra BVDV, así como diseñar nuevos ensayos diagnósticos sencillos, sensibles, específicos y económicos basados en la utilizaciónde las proteínas recombinantes E2 y E2/E0/NS3, respectivamente. Este trabajo puede considerarse como un primer paso hacia la resolución de ambos problemas.

Abstract:
Bovine viral diarrhea virus (BVDV)is the ethiological agent of an important disease that affects cattle producing elevated economic Iosses worlwide. Usually, BVDV infection is subclinical or causes mild disease. However, transplacental infection may result in reproductive desorders, teratogenic effects or persistent infection in the neonatal calf (PI animals). Vaccines used nowadays in Argentina are based on chemically inactivated virus, however, existent data on their effectivity as neutralizing antibodies inducers are contradictory and protection against viral infection is not entirely satisfactory. In our country, prevalence of anti-BVDV antibodies of 40-90% has been reported, and near the 2% of the cattle population is considered persistently infected. In the context of this complex epidemiological situation, the reference technique employed for the detection of anti BVDVantibodies is the seroneutralization assay in cell culture. This technique is very specific and sensible, but it requires a middle-high complex laboratory equipment and results economically unproductive when a high number of samples must be processed. In the present work, both central concerns for the disease control were considered. On one hand, ELISA assays for anti-BVDV antibodies detection in cattle sera were developed and evaluated. Assays were designed using the most immunogenic proteins of BVDV, EO, E2 and NS3 expressed in the baculovirus / insect cells system. ELISA assays showed to be highly sensible and specific for anti-BVDV antibodies detection. Moreover, the inclusion of non structural protein NS3 made possible the detection of specific antibodies in animals classified as negative by seroneutralization assays. On the other hand, a recombinant subunit vaccine based on E2 glycoprotein was tested. Humoral immune response and protection conferred in cattle vaccinated with the experimental vaccine or a commercialy available vaccine were evaluated. The level of neutralizing antibodies in sera of animals vaccinated with the recombinant E2 vaccine was significantly higher than the one induced by the conventional vaccine. At challenge, animals experimentally vaccinated showed high levels of neutrallizing antibodies whereas animals vaccinated with the inactivated vaccine or the negative control group showed undetectable neutrallizing antibody levels. The results obtained showed that it is possible to improve current used BVDV vaccines and to design better diagnostic assays based on the use of recombinants E2 and E2/E0/NS3 proteins respectively. This work may be considered as a first step towards the resolution of both problems.

Caimi, Karina Cynthia. "Genómica comparativa en micobacterias responsables de enfermedades zoonóticas pertenecientes al Complejo Mycobacterium tuberculosis" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Complejo M tuberculosis (CMT) está formado por distintas especies de micobacterias entre las que se encuentra el agente causal de la tuberculosis en humanos, Mycobacterium tuberculosis y micobacterias responsables de enfermedades zoonóticas como M. bovis, M. microti y M. pinnipedii. La genómica comparativa en micobacterias brinda una vasta información acerca de la relación entre los genomas de distintas micobacterias pertenecientes al CMT. En la primera parte de este trabajo se estudió la Región de Repeticiones Directas (DR). Esta región está compuesta por repeticiones directas conservadas de 36pb separadas por secuencias no repetitivas llamadas espaciadores (sps). El polimorfismo observado en esta región entre aislamientos de micobacterias pertenecientes al CMT dio origen a la técnica de tipificación, ampliamente aplicada en tuberculosis denominada Spoligotyping. La secuenciación y comparación de la región DR entre distintos aislamientos argentinos de M. bovis permitió encontrar 5 espaciadores nuevos. Estos espaciadores conjuntamente con una colección de otros descriptos previamente, fueron incluidos en una nueva membrana de spoligotyping obteniéndose un total de 104 espaciadores. La utilización del spoligotyping de lO4-sps. permitió la diferenciación de aislamientos del CMT en 174 spoligotipos, mientras que el uso de la membrana tradicional tipificó estos mismos aislamientos en 160 spoligotipos distintos. Particularmente para M. bovis se obtuvo un incremento de 17 a 26 spoligotipos respectivamente. El análisis comparativo in silico en micobacterias no pertenecientes al CMT como M. smegmatis, M. avium, M. marinum y M. leprae, permitió establecer que los marcos de lectura abiertos (MLAs) flanqueantes a la Región DR de M. tuberculosis, se encuentran adyacentes entre sí en estas otras micobacterias. En cambio en el genoma de M. tuberculosis esta región comprende 24kb. que incluyen 23 MLAs así como la región DR ausentes en las mencionadas micobacterias. Este resultado fue corroborado in vitro mediante amplificación por PCR. Debido a la ausencia del locus DR descripto y los MLAs adyacentes, en M. avium y M. smegmatis y debido a que estas micobacterias fueron descriptas como más antiguas que M. tuberculosis, se postula que esta región podría haber sido adquirida por las especies del CMT o por un ancestro común a ellas a lo largo del proceso evolutivo. La segunda parte de este trabajo implicó el estudio de la variabilidad genética entre distintos aislamientos de M. bovis, M. microti y M. pinnipedii, estas últimas responsables de tuberculosis en ratones de campo denominados “vole” y en mamíferos marinos respectivamente, mediante comparación de genomas completos. Se encontró una nueva deleción en M. microti denominada MiD4. Esta región remueve 5 genes que codifican para antígenos de la familia ESAT-6 y PE-PPE. En M. pinnipedii se encontraron dos nuevas deleciones, PiD1 que removió dos genes, uno de los cuales codifica para una oxidoreductasa (Rv3530c) involucrada en el metabolismo celular. La segunda deleción PiD2, fue denominada como RD2seal debido a estar superpuesta con la región de 10.7kb, RD2, ausente en algunas M. bovis BCG. Esta región abarca los genes Rv1977 y Rv1978. Los experimentos de Southern blot mostraron que MiD4 está también ausente en M pinnipedii, en cambio PiDl es una deleción específica para M. pinnipedii. Por otra parte mediante la comparación del genoma de M. bovis con el genoma de M. tuberculosis in silico, se pudieron identificar nuevos marcadores capaces de diferenciar entre estas dos especies y respecto de otras especies del CMT. Uno de estos nuevos marcadores denominado rpfA presentó polimorfismos en los aislamientos de M. bovis estudiados, lo que podría ser usado en la tipificación y diferenciación.

Abstract:
The Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) is composed by different mycobacteria species, the agent of human tuberculosis and mycobacteria responsible of zoonotic disease as M. bovis, M. microti and M. pinnipedii are among them. Comparative genomics gives broad information about the relationship between the different micobacterial genomes of the MTC. In the first part of this work the Direct Repeat (DR) region was studied. The DR region is composed of multiple well-conserved 36-bp DRs interspersed with non-repetitive DNA spacer sequences (sps). The polymorphism in the DR region has led to the development of a methodology highly applied in tuberculosis research called Spoligotyping. Upon analysis of this region in argentine bovine isolates of M. bovis, five new spacers were detected. These spacers and a collection of others previously described were included in a new spoligotyping membrane reaching a total of 104 different spacers. The application of the lO4-sps spoligotyping allows the differentiation of isolates from the MTC in 174 spoligotypes while with the application of the traditional membrane 160 spoligotypes were obtained. The discriminatory power of M. bovis isolates was increased from l7 to 26 different patterns respectively. The comparative analysis in silico performed in mycobacteria not-belonging to the MTC as M. smegmatis, M. avium, M. marinum and M. leprae allow to establish that the open reading frames (ORFs) flanking the DR region of M. tuberculosis are adjacent in these mycobacteria. In M. tuberculosis genome, this fragment includes 24kb. with 23 ORFs absent from the referred mycobacteria. This observation was experimentally confirmed by PCR. As the DR locus and the ORFs around it, are absent in M. smegmatis and M. avium and, as it is possible that these species are older than M. tuberculosis, we postulated that the DR locus was acquired by the MTC species or by an ancestor bacterium during evolutionary process. In the second part of this work the genetic variability of different isolates of M. bovis, M. microti and M pinnipedii, these last species agents of tuberculosis in wild voles and marine mammals respectively, was studied by whole genome sequence analysis. A novel M. microti deletion was found here called MiD4. This region removes 5 genes that code for ESAT-6 family antigens and PE-PPE. Two new deletions were found in the M. pinnipedii isolates: PiD1, which removes two genes where one of them code for an oxidoreductase (Rv3530c) involved in cellular metabolism. A second deletion found in M. pinnipedii isolates, PiD2, has been recently defined as RD2 seal since it overlaps the 10,7 kb RD2 region. This region encompasses Rv1977 and Rv1978 genes. Southern blot experiments showed that MID4 was also deleted from M. pinnipedii, but PID1 is a deletion specific to M. pinnipedii. By the other hand the analysis in silico between the M. bovis and M. tuberculosis genomes, allow the identification of new markers. These markers were used to differentiate between both species and from another species. One of these new markers called rpfA, present polymorphism between M. bovis isolates. This polymorphism could be used in typification and differentiation.

Bonifazi, Carla Brenda. "Instrumentación, calibración y simulación de detectores de superficie del observatorio Pierre Auger" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El entendimiento de la física de los rayos cósmicos es aún una de las metas más importantes de la comunidad científica para construir su conocimiento acerca del Universo. Su estudio a lo largo de los años ha permitido avances importantes tanto en las ramas de la física de partículas como de la astrofísica. Para su estudio se han desarrollado muchas técnicas experimentales desde las primeras cámaras de niebla utilizadas en los ascensos en globo hasta el desarrollo de observatorios gigantes dedicados al estudio de las partículas de más alta energía. El espectro de energías de los rayos cósmicos va desde los ~ 100keV hasta ~ 10^20 eV. Estos inciden sobre la tierra en todas las direcciones y con un flujo constante en el tiempo. Los rayos cósmicos de energía superior a los PeV que inciden en la atmósfera producen una cascada de partículas secundarias. Estas partículas inducen la emisión de luz de fluorescencia por parte del nitrógeno atmosférico, que puede ser registrada para la detección del chubasco producido. A su vez, las partículas secundarias que alcancen la Tierra pueden ser registradas por detectores ubicados al nivel del suelo. El observatorio Pierre Auger, que actualmente se encuentra en construcción y funcionamiento parcial, tiene por objetivo el estudio de los rayos cósmicos de energía ultra elevada, mayor a 10^19 eV. Para ello utiliza un sistema híbrido de detección de las partículas secundarias formado por un detector de superficie (detectores de efecto Čerenkov en agua) y telescopios de fluorescencia. En este trabajo se realiza una descripción completa de ambos detectores. Para el detector de fluorescencia se presentan estudios de la luz de fondo de noche que sirvieron para el diseño de la electrónica de los mismos. Para el detector de superficie se presentan trabajos realizados con el objetivo de contribuir con su montaje, instalación y puesta en funcionamiento. Durante la primera etapa de construcción del Observatorio se desarrollaron las técnicas y procedimientos para garantizar el correcto funcionamiento del mismo. Previamente al comienzo de la construcción del Observatorio se realizaron estudios sobre un detector prototipo de efecto Čerenkov en agua emplazado en el Laboratório TANDAR, tales como la caracterización de respuesta frente a distintas direcciones de ingreso de las partículas y el desarrollo de un método de calibración del detector. A continuación se montó un conjunto de cuatro detectores para la medición de rayos cósmicos con energías del orden de ~10^15 eV. En este trabajo se describen el diseño, la construcción y la operación de este arreglo de detectores. También se incluye el desarrollo del sistema de toma de datos y los análisis de estabilidad de su funcionamiento. Finalmente se muestran algunos eventos típicos registrados. Se presenta además el desarrollo del actual método de calibración de los detectores de superficie del Observatorio Pierre Auger. Junto a éste, las diferencias técnicas y estudios realizados para garantizar el correcto funcionamiento de los detectores y para validar el sistema de adquisición de los datos. Finalmente, toda la experiencia adquirida se volcó en un programa de simulaciones del detector de efecto Čerenkov en agua, que esta disponible para ser utilizado pela Coloaboración Pierre Auger.

Abstract:
Understanding the physics of cosmic rays is still a major goal of science in order to build our knowledge of the Universe. Research on Cosmic Rays over the last years has provided important improvements in particle physics and astrophysics by making use of different experimental techniques from the early cloud chambers carried in airborne ballon experiments to gigantic observatories specifically designed to study cosmic rays of the highest energies. The cosmic ray energy spectrum ranges from ~ 100 keV to ~10^20 eV, impinging on the top of the Earth atmosphere from all directions with a constant flux. Those with energy in excess to ~1 PeV produce, when traversing the atmosphere, a cosmic air-shower of secondary particles. These particles induce fluorescence light emission from the atmosphere nitrogen, which may be detected. They may as well be directly detected on reaching the Earth surface by the so-called surface detectors. The Pierre Auger Observatory, which is presently under construction and data taking, has as prime objective to detect cosmic rays with energy in excess to 10^19 eV. In order to achieve this aim it makes use a hybrid detection technique: a surface detector array (water Čerenkov detectors) and fluorescence telescopes. A complete description of both detector systems is performed in this thesis work. For the fluorescence detector, background light measurements were done in order to help designing the telescope electronic system. A further and exhaustive work has been performed for the surface detectors, geared towards their deployment, installation and commissioning. Related to this latter point and during the initial phases of the Project construction, techniques and procedures were developed in order to guarantee the correct functioning of the detector system. In the years prior to commencing the Observatory construction, efforts were committed in experiments with a prototype water Čerenkov detector emplaced at the TANDAR Laboratory, such as the characterization of the detector response to different entry points of impinging particles and the development of an innovative calibration method. At a later stage, an array of four water Čerenkov detectors, was instrumented with a view on the detection of cosmic rays of energy ~10^15 eV. The design, construction and commissioning of this array is described in this thesis. Reference is made to the development of its data acquisition system and to its operation stability analyses. Some typical detected events are shown. Also shown in this thesis are the different surface detector calibration approaches, with special emphasis on the one currently adopted at the Observatory. In adition to contributing towards the development of this calibration procedure, different techniques and studies were performed in an effort to assure the correct detector functioning and to validate the data acquisition system. Finally, all the acquired expertise provided a solid basis on which a water Čerenkov detector simulation computer code was written, which is available to the Auger Collaboration.

Bogo, Horacio Alejandro. "Monitoreo y análisis de la contaminación atmosférica en la Ciudad de Buenos Aires" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se monitorearon gases contaminantes, particularmente CO, NO, NO2 y O3, y material particulado por periodos prolongados en distintos puntos de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires y algunos puntos del AMBA. Éste es el primer estudio sistemático realizado en la zona usando monitores automáticos e incluyendo diseño y modificación de equipamiento, técnicas y software. Los datos recogidos durante seis años en extensos períodos de monitoreo en sitios de características complementarias, representativos de situaciones típicas de la región, fueron analizados en forma comparativa. Se consideraron los promedios horarios y mensuales de los parámetros químicos de interés y se correlacionaron con variables meteorológicas, tratando de establecer tendencias estacionales y de verificar su repetitividad anual. Se analizaron las mediciones realizadas mediante modelos estadísticos y de dispersión. Se comenzó un estudio de caracterización de material particulado mediante microscopias óptica, de fuerza atómica y de barrido electrónico, espectroscopías de superficie y cromatografía iónica, obteniéndose información sobre la morfología de las partículas su distribución de tamaños y su composición. Los resultados indican que la principal fuente de CO, NOx y partículas es el tránsito vehicular. La concentración de O3 es generalmente baja, como resultado de la mezcla de emisiones primarias conteniendo NO con masas de aire limpio. Se establecieron correlaciones entre contaminantes gaseosos y material particulado. Se evaluó la actividad fotoquímica en espacios sin tránsito (área verde), hallándose una relación directa entre la radiación solar total medida y la velocidad de fotólisis de NO2 en verano. Los resultados obtenidos poseen validez como diagnóstico de la situación de la atmósfera de Buenos Aires y pueden usarse con fines predictivos.

Abstract:
Gaseous pollutants, particularly CO, NO, NO2 y O3, and atmospheric particulates were monitored through extended periods in different points of the Ciudad Autónoma de Buenos Aires and the Área Metropolitana de Buenos Aires. This is the first systematic study performed in the area using automatic monitoring and including the design and the improvement of equipment, techniques and software. Data obtained during six years in sites with complementary characteristics were analyzed and compared. Hourly and monthly averages of selected chemical parameters were correlated with meteorological data in order to establish seasonal tendencies and test their yearly repetitivity. Results were analyzed by means of statistical and dispersion models. Studies on the characterization of particulate matter through optical, atomic force and electronic scanning microscopies, surface spectroscopies and ion chromatography were initiated, obtaining information about particle morphology, size distribution and chemical composition. Results show that the main source of CO, NOx and particles are motor vehicles. The O3 concentration is generally low and is determined by the mixing of primary emissions containing NO with clean air masses. Correlations between gaseous and particulate pollutants were established. Photochemical activity was monitored in green areas free of traffic, obtaining a direct relationship between measured overall solar radiation and NO2 photolysis rates in summer. The summarized results constitute a diagnostic on the quality of the atmosphere in Buenos Aires and may be used with forecasting purposes.

Bianchi, María Silvia. "Receptores GABAB en el eje hipotálamo-hipofisario:ontogenia, regulación de su expresión y mecanismo de acción" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis fue el estudio de los receptores GABAb en la pituitaria anterior y el hipotálamo de ratas hembras y machos durante el desarrollo y en la adultez. Observamos un patrón de expresión ontogénico, con una disminución de la expresión de ambas subunidades del receptor GABAb (RGABAb) a lo largo del desarrollo, encontrándose sus niveles más bajos en la adultez. En la hipófisis anterior determinamos, además, una clara expresión secualmente dimórfica, siendo los niveles del receptor significativamente más abundantes en ratas hembras que en machos en edades tempranas del desarrollo. Esta diferencia sexual depende del nivel de andrógenos presente durante etapas críticas de diferenciación sexual, ya que la supresión de los dos picos androgénicos en el macho lleva a una expresión alta, tipo hembra, mientras que la administración neonatal de testosterona a las hembras disminute la expresión del RGABAb1 a niveles de macho. Los niveles hipotalámicos de GABA siguen el mismo patrón que la expresión de los RGABAb1 hipofisiarios y este neurotransmisor es capaz de inducir la expresión de RGABAb1 exclusivamente en células adenohipofisiarias de hembras. Los andrógenos, por su parte, inducen la expresión de la subunidad RGABAb2 en ambos sexos, marcando así una regulación diferencial para cada subunidad del RGABAb. Los RGABAb hipofisiarios están acoplados a proteínas G i/o, y su activación disminuye los niveles de AMPc y lleva al cierre de los canales de calcio, de calcio dependientes del voltaje, modulando así la secresión hormonal. Los RGABAb en el hipotálamo muestran patrones ontogénicos similares a los hipofisiarios, sin evidenciarse diferencias sexuales en su expresión en edades tempranas del desarrollo.

Abstract:
The aim of the present thesis was the study of GABAb receptors (RGABAb) in the anterior pituitary and the hypothalamus in adult and developing male and female rats. We observed an ontogenic expression pattern for this receptors, showing a decrease in both subunits along development, with the lowest levels being detected at adulthood. Furthermore, in the anterior pituitary, we described a clear sexually dimorphic expression of GABAb. These receptors are significantly more abundant in females than in males early in development. This sex difference depends on androgen levels present in the male in critical stages of differentiation, as suppression of both androgenizing peaks in males leads to high, female-like expression levels, while neonatal testosterone administration to female decreases pituitary RGABAb expression to male titers. Hypothalamic GABA titers follow the same pattern as pituitary RGABAb expression levels and this neurotransmitter induces an increase in RGABAb1 expression exclusively in female anterior pituitary cells. Moreover, androgens induce RGABAb2 expression in pituitary cells of both sexes, demonstrating a differential regulation in the expression of each RGABAb subunit. Pituitary GABAb receptors are coupled to G i/o proteins and their activation lead to a decrease in cAMP levels and to the closure of voltage sensitive calcium channels, modulating, this, hormonal secretion. Hypothalamic RGABAb follow ontogenic expression patterns similar to the hypophysis, without evidencing sex differences at early stages of development.

Bergé, Analía. "Un estudio de la evolución del pensamiento matemático : el ejemplo de la conceptualización del conjunto de los números reales y de la noción de completitud en la enseñanza universitaria" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis, enmarcada dentro del campo de Didáctica de la Matemática, se estudia la evolución en la conceptualización del conjunto de los números reales por parte de los estudiantes de nivel universitario. Se toma como referencia las carreras de Licenciatura y Profesorado en Matemática de la Universidad de Buenos Aires. ¿Qué se quiere expresar con “el estudio de la evolución..."? Los alumnos establecen un primer contacto con los números reales temprano en su escolaridad. En un primer momento los ven en las soluciones de problemas geométricos, como raíces cuadradas, como raíces de polinomios, estudian sus desarrollos decimales, etcétera. Pero más adelante, al comenzar los estudios en el área del análisis matemático, cuando el conjunto de los números reales se vuelve el dominio natural de las funciones, ¿qué conocimientos tienen los alumnos acerca de las propiedades de ese dominio? ¿cuáles son las propiedades que ellos reconocen de este conjunto, sobre las que descansan los aprendizajes en análisis? Ha sido de interés focalizar este estudio en una propiedad del conjunto de los números reales central para el trabajo en esa área: la completitud. La tesis tiene seis capítulos. El primero es un estudio histórico-epistemológico del surgimiento del conjunto de los números reales. Varios investigadores en Didáctica de la Matemática han señalado la relevancia del análisis epistemológico para el análisis didáctico, sus potencialidades y sus alcances (Artigue, 1990, 1992, 1995), han analizado la relación entre epistemología, matemática y educación (Sierpinska & Lerman, 1996), han estudiado ciertos aportes específicos del conocimiento de la historia a la práctica docente (Bkouche, 1997) y han alertado acerca de la utilización ingenua de la historia de la matemática en la enseñanza (Radford, 1997). El análisis hecho ha llevado a delinear una reconstrucción de la génesis histórica de la noción conjunto de los números reales, ligando problemas y preguntas de determinados períodos históricos con el estado de conocimientos y las herramientas disponibles en esos momentos, y con las diferentes conceptualizaciones producidas. La manera en la que se ha jugado la correspondencia entre números y puntos de una recta en diferentes periodos de la historia (y más generalmente, como ha evolucionado la relación entre números y magnitudes), cómo era el trabajo de los matemáticos en temas de análisis antes de que la noción de completitud del sistema de los números reales fuera enunciada, qué condiciones hicieron necesaria la formalización de esta noción, cuáles fueron las distintas respuestas que se dieron a este problema y cómo se llega a las formulaciones actuales, son las preguntas que guían este capítulo. Para aportar respuestas, se examinan diferentes momentos particularmente significativos de la historia matemática: el período euclidiano, el intermediario árabe y la Europa Medieval, el desarrollo del cálculo, los comienzos del siglo XIX y la aritmetización del análisis, el fin del mismo siglo que ve diferentes construcciones de un sistema numérico y finalmente la axiomatización de R con los trabajos de Hilbert. En las conclusiones de este capítulo se aborda el papel del método axiomático en matemática y en la enseñanza de las matemáticas, se hace una reflexión alrededor de la evolución del estatuto de una misma afirmación matemática, se analiza la relación modelo matemático —objeto modelizado, que puede representar para el trabajo matemático tanto un punto de apoyo como un obstáculo, y se analiza también la evolución de los argumentos que se consideran suficientes para validar el trabajo matemático. Con este primer capítulo se ha buscado mostrar la complejidad de las relaciones que se han dado a lo largo de la historia entre las nociones de continuidad y de completitud, y los motores principales de las evoluciones, y dar argumentos que faciliten entender la posible existencia de varios tipos de equilibrios cognitivos y niveles de conceptualización acerca de estas nociones, cuidando no caer en una visión ingenua de las relaciones entre ontogénesis y filogénesis. Este estudio también muestra que los comienzos del cálculo y su desarrollo durante tres siglos se llevaron a cabo teniendo como soporte un dominio numérico cuyas propiedades no habían sido explicitadas. La explicitación de esas propiedades supuso transitar una ruptura y una reconstrucción de la noción. La ruptura se produjo en la historia de la matemática como consecuencia de un cambio de racionalidad a partir del cual se reconoció que la base del trabajo matemático había sido empírica, y se deseó superar esa situación. El problema era entonces encontrar cómo expresar la propiedad de completitud. Dedekind encontró una manera, procurando obtener para los números algo análogo a la continuidad de la recta. Para lo cual hubo de precisar —necesariamente como un axioma- en qué consistía dicha continuidad. Cantor por su parte, así como otros matemáticos de la época, expresó la completitud vía la convergencia de sucesiones fundamentales, estableciendo además una correspondencia entre los números y los puntos de la recta y reconociendo el carácter axiomático de dicha correspondencia. Ese fue el sentido que tuvo, para los matemáticos del siglo XIX la construcción de un dominio numérico completo. A lo largo de la tesis se analiza el sentido que tiene para los alumnos y la organización institucional actuales. El segundo capitulo es una puesta al día de las investigaciones didácticas hechas por otros investigadores relacionadas con el tema, y el posicionamiento de la propia problemática. Los trabajos comentados acerca del conjunto de los números reales tratan didácticamente cuestiones vinculadas a la existencia de números irracionales, su desarrollo ilimitado y no periódico, su representación uno a uno en la recta numérica, su aparición en los cálculos de raíces, logaritmos, cálculos trigonométricos, etc. Estas cuestiones están ligadas al hecho de que con los racionales no alcanza para dar respuesta a diversos problemas que aparecen, aun tempranamente, en la escolaridad, y se requiere por lo tanto de la existencia de otros números. Otro nivel de problematización se pone de relevancia al estudiar las propiedades de R cuando se lo ve como el dominio natural del análisis matemático. Éstas se despliegan cuando se sale de lo estrictamente numérico y se trabaja con funciones, sucesiones, etc. y el interés está puesto en fundamentar las afirmaciones y en caracterizar ciertos atributos que tiene R como conjunto. Efectivamente, la completitud no es una propiedad que concierne a un número sino a un conjunto de números. Los trabajos analizados contemplan el primer nivel y no el segundo, que por otra parte es propio de la enseñanza a nivel superior. Más allá de los diferentes marcos teóricos y metodológicos que han sido tomados como referencia en los trabajos, es posible reunir al menos dos puntos de consenso entre ellos. El primero es que en los alumnos de distintos niveles de escolaridad conviven concepciones contradictorias, en cuanto a la densidad, al significado de los desarrollos infinitos, la existencia de números que verifican determinadas condiciones, la irracionalidad, la idecimalidad. Algunas de las investigaciones han mostrado que las mismas nociones funcionan bien en ciertas preguntas y no en otras. El segundo es que la representación de los números en la recta, no contribuye necesariamente a solucionar esas dificultades: muchas veces este objeto suma sus propias dificultades, las investigaciones nos han mostrado que los alumnos conceptualizan de diferentes maneras la recta numérica, por lo cual la referencia a sus atributos y propiedades no es un punto de apoyo seguro, y en algunos casos modifica completamente la problemática en juego. Los trabajos analizados constituyen en cierto modo un mapa de los conocimientos didácticos previosexistentes a esta tesis alrededor de este tema, se han tomado como punto de partida para avanzar en la caracterización de aquello que hace evolucionar las conceptualizaciones de los alumnos en relación con el segundo nivel de propiedades de R que se ha mencionado. El tercer capítulo consiste en el análisis de los aspectos matemáticos y cognitivos vinculados a la completitud de R. En el mismo se profundizan distintas vías matemáticas de entrada y de desarrollo de esa noción, dando lugar a lo que ha sido llamado Panorama Matemático; y se separan ficticiamente los aspectos cognitivos involucrados estructurándolos en seis ejes variables, con el objetivo de modelizar distintos estados de conceptualización de esta noción. Estos ejes vistos globalmente en conjunto con su estado inicial, han recibido el nombre de Panorama Cognitivo. Los mismos no son exclusivos de este concepto, pueden pensarse para otros conceptos matemáticos, pero han podido ser delineados como producto del trabajo realizado sobre la completitud, especialmente del análisis epistemológico. El Panorama Cognitivo consta de seis ejes con un origen en común, como un estado inicial o punto de partida en el cual la completitud es vista como evidente, con un apoyo fuerte en la representación gráfica o mental. A ese nivel la completitud no es identificada como un objeto matemático. Los seis ejes que admiten distintos estados se describen brevemente a continuación. Disponibilidad Técnica: este eje incluye los diferentes grados de dominio técnico sobre los elementos matemáticos, a modo de ejemplo, distintos valores en este eje son : el dominio de demostraciones de teoremas simples en los que se pone en juego la completitud, el manejo de varias caracterizaciones del supremo, el manejo de diferentes maneras de caracterizar la completitud y el conocimiento de su equivalencia, la manipulación de los objetos que le están asociados, como ser, sucesiones, sucesiones de Cauchy, encajes, cortaduras, etc., la completitud de espacios más generales. Instrumentalidad/ Objetivación: este eje valora la percepción de la completitud como una herramienta que posibilita definir números bajo ciertas condiciones, así como su reconocimiento como parte de los objetos que hacen al análisis. Necesidad: Se refiere a la comprensión de un sujeto respecto de la necesidad de incluir el axioma de completitud. De modo más general alguien que percibe que es necesario añadir un axioma para desarrollar una teoría es alguien que ha hecho una reflexión sobre la reorganización de los saberes matemáticos. Valoración/fundamentación: valora el nivel de consciencia de un sujeto acerca de la necesidad de validar en matemática, de lo que es aceptado como válido por su comunidad, de cómo se va modificando lo que es considerado como válido, de cómo esto depende de la institución en la que se lleve a cabo. Flexibilidad: Este eje valora la capacidad de un sujeto de usar una u otra caracterización de la completitud según la tarea a realizar. Posición frente a las construcciones: Este eje valora la comprensión que puede tener un sujeto acerca del sentido de que R sea construido a partir de Q, y acerca del rol de modelo que adquieren esas construcciones con relación a la construcción axiomática. El Panorama Cognitivo fue utilizado como instrumento de análisis en la realización de los últimos tres capítulos. El cuarto capítulo es un Análisis Institucional, que básicamente consiste en el análisis praxeológico (Chevallard, 1998) de cuatro materias y en su puesta en relación con el Panorama Cognitivo. Para su realización se han tenido en cuenta las preguntas siguientes: ¿Qué tipo de apariciones hace la completitud en las tareas, en las técnicas, cómo aparece, cómo se usa? ¿Qué técnicas se utilizan en la resolución de las tareas? ¿Cuánta tecnología y cuánta teoría requieren esas técnicas? ¿Se trata de técnicas que consisten en la aplicación aislada de un teorema o propiedades? En ese caso, la utilización de propiedades ¿“es llamada” desde la formulación de la tarea o permanece implícita? ¿En qué medida es necesario para desplegar la técnica el proceso de demostración de las propiedades o teoremas, en qué medida solamente el enunciado de los mismos? Con respecto al género de tareas y a su formulación, se ha tenido en cuenta si favorecen un funcionamiento del conocimiento más a nivel técnico (“hallar", “resolver”, “calcular”, ítems aislados), a nivel movilizable (“demostrar usando tal resultado", varios ítems secuenciados) o a nivel disponible (“estudiar", “analizar”, “demostrar”, etc.). En el análisis se ha buscado identificar los momentos en los que las técnicas usadas se vuelven insuficientes, así como también los puntos de equilibrio, las continuidades, rupturas y falsas continuidades. Con respecto al grado de problematización de aquello que parece evidente u observable, se tomó en cuenta la presencia de tareas que involucran un trabajo de demostración de propiedades o resultados “observables”, “evidentes” y en qué medida hay una problematización. Se analizó el papel de las representaciones utilizadas. Se hizo una interpretación de a qué parte del Panorama Matemático parece apuntar cada materia, y se analizó en qué medida las tareas contribuyen a hacer evolucionar los ejes del Panorama Cognitivo. El estudio praxeológico muestra que el tipo de tareas que llevan a cabo los alumnos en la primera materia de análisis matemático en Ia universidad en relación a la completitud, se apoya tanto en las representaciones y en la información que éstas proveen como en el uso de teoremas fuertes de cuya fundamentación pueden no preocuparse. Los alumnos en este nivel operan como si las propiedades se verificasen naturalmente, la fundamentación de las mismas les resulta un problema externo. La completitud permanece entonces en estado de preconstrucción, su explicitacíón no es requerida ni utilizada en los problemas y ejercicios. El análisis praxeológico en relación a las otras materias analizadas muestra que hay una ruptura de contrato didáctico que se produce al pasar a Análisis I de Exactas, en donde, las representaciones ya no constituyen un soporte para las argumentaciones, pero el tipo de tareas en relación a la completitud es esencialmente la misma que en la materia anterior. Los alumnos no comprenden las razones de este cambio en la medida que no se les plantean nuevas tareas en relación con este tema, asumen que deben demostrar más debido a la exigencia de sus docentes que por ser algo interesante para ellos desde el punto de vista matemático. En la materia Complementos de Análisis II hay ejercicios en los que aparecen el supremo y el ínfimo en carácter de objeto (equivalencia entre distintas definiciones, aritmética de supremos e íntimos) y también en un rol más instrumental al definir distancias. En Cálculo Avanzado hay un ejercicio en el que hay que demostrar la equivalencia entre diferentes caracterizaciones de la completitud de R, y hay ejercicios clásicos de espacios métricos completos, que pueden ser hechos sin que eso involucre hacer una reflexión. Del análisis hecho se desprende que los ejes Necesidad, Flexibilidad y Posición frente a las construcciones quedan vacantes desde la oferta de la institución, quedando, si esto ocurre, reservados para el trabajo privado del alumno. Los capitulos quinto y sexto constituyen la parte experimental de esta tesis. El quinto contiene los análisis a priori y a posteriori de varias entrevistas clínicas hechas a alumnos de las materias Análisis I, Complementos de Análisis II y Cálculo Avanzado, con el objetivo de identificar su rapport personal a la completitud (Chevallard, 1992) en términos del Panorama Cognitivo y de ponerlo en relación con los resultados del Análisis Institucional. Las preguntas que sirvieron de guión para las entrevistas tenían como objetivo acceder a: en qué medida los estudiantes piensan que es necesario demostrar el Teorema de Bolzano, y en qué medida consideran que la completitud es una herramienta necesaria para probarlo; qué piensan los estudiantes acerca de qué es la completitud, con qué problemas, teoremas, ejercicios la relacionan y cómo evoluciona esta visión a medida que avanzan por las materias; cómo interpretan el hecho de que hay distintas maneras de introducir la completitud y si las tienen disponibles; cómo interpretan el estudio de las construcciones por cortaduras de Dedekind o por sucesiones de Cauchy y cómo lo relacionan con sus conocimientos previos sobre R. El sexto capítulo releva las respuestas dadas por escrito por la mayoría de los alumnos de Análisis I, Complementos de Análisis II y Cálculo Avanzado a dos preguntas: cómo explicaría a un alumno más joven el hecho de que una sucesión creciente y acotada de números reales tiene límite y qué interpreta por completitud de R. La parte experimental que hemos llevado a cabo en este estudio muestra que la resolución de los ejercicios correspondientes a las materias y la aprobación de los parciales no alcanza para hacer que los alumnos perciban a la completitud como una condición necesaria para desarrollar el análisis matemático. Entender la completitud como una propiedad o un axioma que responde a un verdadero problema requiere situarse en cierta perspectiva que no es la mas natural, requiere también de una reflexión que no surge espontáneamente de la resolución de los ejercicios, y no parece propia de la posición de estudiante. Para la mayoría de los alumnos el hecho de hacer los problemas y ejercicios típicos de supremo no tiene por consecuencia la comprensión de que R se distingue por ser el conjunto que contiene todos los supremos de sus subconjuntos superiormente acotados. Pocos alumnos pueden percibir que las sucesiones de Cauchy provienen de la necesidad de caracterizar el tipo de sucesiones que es preciso que converja para poder desarrollar el análisis y que la completitud del conjunto tiene que ver con que el límite pertenezca al conjunto. Poquísimos encuentran sentido en la construcción de R por cortaduras de Dedekind o por sucesiones de Cauchy, y en general cuando lo encuentran, es para considerar el rol de modelo del sistema axiomático que describe a los reales. Las construcciones quedan entonces, un poco desprovistas de sentido. Uno de los objetivos de la parte experimental era identificar el rapport personal de los alumnos a la completitud en términos del Panorama Cognitivo. - El eje de Disponibilidad Técnica es el que queda menos indagado en esta tesis, por no haber incluido explícitamente en las entrevistas preguntas con resoluciones concretas, salvo el pedido a cuatro de los cinco entrevistados de Cálculo Avanzado de demostrar el teorema de Bolzano. Del estado de esos alumnos sobre este eje se puede decir que la noción de completitud no está muy presente para los alumnos a la hora de hacer esa demostración. - Con respecto al eje Instrumentalidad / Objetivación, en particular, en relación al carácter de objeto, hemos encontrado tres tipos de respuestas: respuestas dadas en términos de imágenes o representaciones, respuestas en términos de propiedades que R verifica aunque no caracterizan verdaderamente al conjunto ni son equivalentes a la completitud, respuestas en las que se caracteriza a R y a la completitud correctamente. Alumnos de las tres materias responden en términos de imágenes y en términos de propiedades que no caracterizan la completitud, en el caso de las últimas dos materias también hay respuestas en términos de ciertas propiedades que si la caracterizan: el axioma de supremo en el caso de los alumnos de Complementos y la existencia de limite de sucesiones de Cauchy en el caso de algunos alumnos de Cálculo Avanzado. La concentración de las respuestas en términos de estas últimas dos caracterizaciones es coherente con el análisis praxeológico. Queda un poco débil el carácter de objeto de la completitud por parte de los alumnos de Cálculo Avanzado, de quienes puede esperarse que tengan disponible una mayor cantidad de caracterizaciones. Parece particularmente interesante el caso de un alumno de Cálculo Avanzado, quien nos resulta un buen exponente del hecho que hacer los ejercicios de las prácticas y aprobar los parciales no necesariamente requiere ni implica que se haga una reflexión sobre lo que se está haciendo. Este alumno ha trabajado mucho con el axioma de supremo, con la propiedad de encaje, con sucesiones de Cauchy, solo por el hecho de haber hecho las prácticas de Complementos de Análisis II y de Cálculo Avanzado, pero eso no alcanza para que pueda identificar las completitud de R, ni siquiera puede decir qué es R. Con respecto al carácter de instrumento, no se ve una tendencia al avanzar con las materias en cuanto a la identificación de la completitud como herramienta necesaria en la demostración del teorema de Bolzano. También en este caso queda un poco débil el carácter de instrumento de la completitud por parte de los alumnos de Cálculo Avanzado. Nos parece pertinente relacionar esta “debilidad” con la manera en la que se expresan los alumnos en varios tramos de las entrevistas: las caracterizaciones en términos de imágenes o la idea de “completo es que no tiene huecos” para referirse a la completitud así como también la idea de “acercarse”, son un reflejo débil y no operacional de definiciones matemáticas que no favorece el trabajo matemático, aun si en parte este lenguaje pudo haber sido inducido por la situación no muy formal de entrevista. - Las posiciones sobre el eje de Necesidad fueron indagadas solamente a alumnos de Cálculo Avanzado. Las distintas caracterizaciones de la completitud no son vistas por todos los alumnos como una condición necesaria para definir a R, en algún caso no se las vincula con R, en otros casos son vistas como una condición que R verifica, en otros casos son vistas como una parte constitutiva de la definición de R. - El acceso al eje Validación/Fundamentación estuvo dado fundamentalmente dado por las respuestas a la pregunta que esencialmente indagó sobre los motivos por los cuales demostrar el teorema de Bolzano y los posibles usos de la demostración. Los alumnos de las tres materias manifestaron que en algún momento de su formación vieron como obvio este teorema, y la pregunta nos permite conocer en qué medida y cómo fueron ellos saliendo de esa situación. La heterogeneidad de las respuestas hace dificil estructurar este eje en términos de distintos niveles por materia. Esencialmente hemos encontrado tres tipos de respuestas en relación a este eje: demostrar “porque es lo que se debe hacer” (privilegiando el aspecto normativo), demostrar para convencer o convencerse separándose de la representación, demostrar para comprender la matemática en juego. Podemos suponer que el orden de estos tipos de respuesta es un orden que muestra una evolución en la racionalidad, y sería esperable que el paso por las materias siguiera esa tendencia. No es ese el resultado que obtuvimos. La mayoría de las respuestas de las tres materias están repartidas en los dos primeros tipos. Muy pocas respuestas (una por cada materia) dan razones que nos hacen ubicarlos en “demostrar para comprender mejor”. Hay varios alumnos, aun avanzados que no saben por qué es necesario demostrar el teorema de Bolzano. - No hubo suficientes respuestas que nos permitan establecer estados para el eje Flexibilidad, pero sí es interesante un pasaje de entrevista en el que se muestra que la declaración por parte de uno de los entrevistados de dos formas de expresar la completitud de R (vía el axioma de supremo y via la convergencia de sucesiones de Cauchy) no basta para que él suponga que esas dos formas son condiciones matemáticamente equivalentes. - Como tema de estudio, las construcciones de R fueron parte de los contenidos de la materia Cálculo Avanzado. Para los alumnos las construcciones cumplen roles diferentes, que reflejan distintas posiciones de la comunidad de docentes y matemáticos: en un caso parecen quedar al margen de lo que hay que saber para aprobar los trabajos prácticos de la materia, en otros se toma a las construcciones como un modelo para el sistema axiomático que define a R, en otros se recupera el sentido de construir un conjunto que sea completo. En este último caso es más fácil separarse de una visión natural y preconstruida de R y comprender el papel del axioma de completitud, que en la versión que sea dada, habilita esencialmente a definir números bajo ciertas condiciones. Otro de los objetivos de la parte experimental era analizar si subsisten las contradicciones detectadas por otros investigadores y caracterizar el conjunto que los alumnos creen utilizar. El análisis de las respuestas en entrevistas muestra claramente que muchos alumnos, casi la mitad de los entrevistados de las tres materias, asocian la noción de continuo y de completitud con la de densidad. En el caso de alumnos más avanzados ante una repregunta recuperan la respuesta, en el caso de alumnos principiantes una repregunta puede servir para poner en evidencia la confusión pero no necesariamente alcanza para remediar la situación. Hay otros casos un poco más aislados, a modo de ejemplos, para uno de los alumnos de Cálculo Avanzado alcanza con los números algebraicos para desarrollar el análisis, otro alumno duda acerca de si la completitud podría ser equivalente a densidad más no numerabilidad... estas ideas que tienen los alumnos conviven con muchas otras buenas ideas. La experimentación presentada en el Capitulo VI permite afirmar en primer lugar, que la gran mayoría de alumnos de Análisis I y una proporción importante de alumnos de Complementos de Análisis II parecen no identificar la completitud en el enunciado “toda sucesión creciente y acotada converge”, más bien parecen percibirlo como un enunciado evidente. Esto puede estar ligado al hecho de que los alumnos pueden usar teoremas fuertes derivados de la completitud, y en consecuencia no la enfrentan de modo personal. Del análisis de las dos preguntas, se puede afirmar que la mayoría de los alumnos de Complementos de Análisis II expresan la completitud de un modo que no resulta operatorio: o mediante el uso cotidiano de la palabra completo, o mediante imágenes. Este resultado muestra un desfasaje con las praxeologías a las que los alumnos se enfrentan. Será interesante pensar que tipo de ejercicios y problemas pueden generar la necesidad de adquirir otras caracterizaciones que sí sean operatorias y cómo favorecer la capacidad de reflexión y síntesis sobre lo hecho. Entre los alumnos de Cálculo Avanzado, la existencia de límite de sucesiones de Cauchy, es la caracterización de la completitud que aparece con más frecuencia, respuesta que interpretamos ocurre debido a que los alumnos han trabajado con la completitud de espacios métricos generales y pueden entonces reconocer esa característica de R. Esta tesis es un lugar en donde se ha estudiado didácticamente algo mas amplio que el aprendizaje de R y su completitud: R es un contexto, un lugar en donde estudiar un tipo de racionalidad matemática y su evolución. Cuando se habla de racionalidad, se piensa en abarcar el grado de reflexión y profundización de un sujeto sobre la matemática como disciplina, sus motores de producción, sus elementos de validación y sus modos de comunicación. Se ha elegido especialmente este contenido (la completitud de R) porque está implicado en muchas instancias que hacen a la formación de un matemático y de un profesor de matemática. Y más allá de el estudio de R, sus propiedades reflejan principios más generales que atraviesan toda la matemática: la construcción de objetos por la aproximación de otros de tipo particular, la completación de espacios métricos, la individualización de un elemento mediante un encaje, la realización de extremos, etc. El tipo de análisis y estudio llevado a cabo en esta tesis no es estadístico, es un estudio cualitativo que muestra las sutilezas de los fenómenos ligados a la enseñanza y el aprendizaje. Los alumnos entrevistados son pocos en número pero en sus respuestas se ve que aunque aprueban parciales exigentes, y lo hacen con buenas notas, dudan a la hora de saber por qué demostrar, confunden en un primer momento las nociones de densidad y completitud, sostienen que con los de “aproximarse”, es decir de plantear la distancia entre dos objetos menor que algún valor positivo. números algebraicos alcanza para desarrollar el análisis, utilizan expresiones para referirse a los objetos que no les favorece avanzar en lo operacional, no reconocen el sentido de la equivalencia de dos enunciados, aunque la hayan demostrado... Esto no debe interpretarse como una crítica al sistema, sino como un estudio que muestra la complejidad de ese sistema, poniendo de relevancia la existencia de varios estadios en la adquisición de las nociones, y varios tipos de equilibrios cognitivos conviviendo en el mismo sujeto mientras aprende.

Abstract:
In this thesis, framed within the field of Didactics of Mathematics, the evolution in the conceptualization of the real numbers set is studied in a group of students at a university level. The university courses of Licentiate and Professor in Mathematics of the University of Buenos Aires were taken as reference. What do we mean by “study of evolution”....? Students establish a first contact with real numbers early along their scholastic path. At the beginning, they come accross real numbers in the solutions to geometrical problems, as square roots, polinomial roots, by studying their decimal development, etc. Though further on, when studies in mathematical analysis start, when the real numbers set turn into the natural domain of the functions, what knowledge do students have regarding the properties of this domain? Which are the properties students recognize in this set on which analysis learning lies? It was interesting to focus this study within a property of real numbers set essential to carry out analysis work: completeness. The thesis has six Chapters. The first one is a historic-epistemological study about the emergence of the real numbers set. Several researchers about Didactics of Mathematics have pointed out the relevance of epistemological analysis in the didactic analysis, its potentiality and scope (Artigue, 1990, 1992, 1995); they have analysed the relationship among epistemology, mathematics and education (Sierpinska & Lerman, 1996); they have studied certain specific contributions to the knowledge of history of educational practice (Bkouche, 1997) and have warned about the naive use of history of mathematics in teaching (Radford, 1997). The analysis performed allowed a delineation of a reconstruction of the historical genesis about the notion of real numbers set linking problems and questions of specific historical periods with the state of knowledge and available tools in those times, and to the different generated conceptualizations. The leading questions to this chapter are: in which way the correspondence between numbers and points in a line was performed along different historical periods (and more generally, how the relationship between numbers and magnitudes has evolved); how the work of mathematicians in analysis was before the notion of completeness of the real numbers set was stated; which conditions made necessary the formalization of this notion; which were the different answers given to this problem and how present formulations are reached. In order to contribute with answers, different moments particularly significant in the history of mathematics have been examined, such as the Euclidian period, the intermediate Arab period and the Mediaeval European one, the development of calculus at the beginning of the XIXͭͪ century and the arithmetization of the analysis, the end of the same century that sees different constructions of a numerical system, and finally the R axiomatization in Hilbert’s works. In the conclusions to this chapter, the role that the axiomatic method has played in mathematics as well as in the teaching of mathematics are broached; a reflection is made regarding the evolution of the statute of the same mathematical affirmation, the relationship between mathematical model-modelled object that may represent a fulcrum as well as an obstacle are analysed as well as the evolution of the arguments that are considered sufficient to validate the mathematical work. In this chapter we have attempted to show the complexity of relationships arisen along history between the notions of continuity and completeness, and the main engines of its evolution, and also, to establish arguments that case the understading of the feasible existence of different types of cognitive balances and conceptualization levels regarding these notions, avoiding to fall in a naive view of the relationships between ontogenesis and phylogenesis. Also, this study shows that the beginning of calculus and its development along three centuries were carried out being supported by a numerical domain which properties had not been made explicit. The explanation of these properties assumed to pass through a rupture and reconstruction of the notion. The rupture occurred in the history of mathematics as a consequence of a change in rationality from which the basis of the mathematical work as empirical was recognized and the wish to overcome this situation thus arose. Then, the problem was to find how to express the property of completeness. Dedekind found a way to do so by trying to obtain for numbers something analogous to the continuity of the line. To achieve this he had to specify — necessarily as an axiom- what was the meaning of this continuity. At his turn, Cantor as well other mathematicians of the time, stated completeness by means of the convergence of fundamental sequences, likewise stating a correspondence between numbers and the points of the line and recognizing the axiomatic character of this correspondence. This was the sense that the construction of a complete numerical domain had for the mathematicians of the XIXͭͪ century. Along this thesis the sense that it has, at present, for students as well as for the institutional organization is analyzed. The second chapter updates the didactic researchs performed by other researchers related to the subject, and the position of our own problematics. The works of reference about the real numbers set didactically deal with matters related to the existence of irrational numbers, their ilimited and nonperiodic development, their one-by-one representation along the numerical line, their appearance in root calculation, logarithms, trigonometric calculus, etc. These matters are linked to the fact that the rational numbers are not sufficient to give answers to the different problems that arise early still in scholastic learning and, the existence of other numbers is therefore required. Another level of problematization becomes relevant when studying R properties regarded as the natural domain of mathematical analysis. These are displayed when one is outside the strictly numerical field and works with functions, sequences, etc., and the interest lies on demonstrating the affirmations and characterizing certain attributes that R has as a set. Certainly, completeness is not a property that a number but a set of numbers have. Analyzed works behold the first and not the second level, which, on the other hand, is specific of teaching at a higher level. Beyond the different theoretical and methodological frames taken as a reference in the works, it is possible to gather at least two points of consensus between them. The first one is that the students at different scholastic level coexist with contradictory conceptions regarding density, meaning of infinite development, existence of numbers that verify certain conditions, irrationality, non-decimality. Some researches have shown that the same notions work well in certain answers and not in others. The second one is that the representation of numbers on a line does not necessarily contribute to solve these difficulties: many times this object adds its own difficulties, and research has shown that students conceptualize the numerical line in different ways, therefore the reference to its attributes and properties is not a safe support, and in some cases, it completely modifies the problematics into play. In a certain way, the analysed works represent a map of didactical knowledge about this matter previous to this thesis. They were taken into account as starting point to proceed to the characterization of those elements that make evolve students’ conceptualizations about the above mentioned second level of R’s properties. The third chapter consists on the analysis of the mathematical and cognitive characteristics linked to R completeness. In it, the different mathematical input and development means of this notion are deepened, giving place to what has been named the Mathematical Panorama; and the involved cognitive characteristics are divided and restructured in six variable axes to model different conceptualization states of this notion. Globally, these axes together with their initial state have been named as Cognitive Panorama. These axes are not exclusive of this concept, they can be applied to other mathematical concepts, though they were delineated as the result of the work performed about completeness, mainly from the epistemological analysis. The Cognitive Panorama has six axes with a common origin, as an initial state or starting point where completeness is seen as evident, with a strong support in the graphic or mental representation. At this level, completeness is not identified as a mathematical object. The six axes that allow different states are briefly described herein after. Technical Availability: this axis includes different degrees of technical domain about mathematical elements, e.g., different values on this axis are: the domain of demonstration of simple theorems where completeness is in play, several handling characterizations of the supremum, handling of different ways to characterize completeness and knowledge of its equivalence, handling of objects associated to it such as sequences, Cauchy sequences, nested intervals, Dedekind’s cuts, etc., completeness of more general spaces. Instrumentality/Objectivation: this axis estimates the perception of completeness as a tool that allows to define numbers under certain conditions as well as its recognition as a part of the objects of the analysis. Necessity: it refers to the understanding a subject has, regarding the need to include the completeness axiom. In a more general way, somebody that perceives that it is necessary to add an axiom to develop a theory is somebody who has carried out a reflection about the reorganization of mathematícal knowledge. Validation/Fundamentation: it estimates the level of conscience of a subject regarding the need to validate in mathematics, of what is accepted as valid in his community, of how what is considered as valid is being modified, of how this depends upon the institution it carries it out. Flexibility: this axis estimates the capacity of a subject to use one or other completeness characterization in accordance with the task to be developed. Position in front of constructions: this axis estimates the understanding of the subject regarding IR meaning whether it is constructed from Q, and about the model role that those constructions attain in relation with axiomatic construction. The Cognitive Panorama was used as an analysis tool when writing the last three Chapters. The fourth chapter is an Institutional Analysis that basically consists in the praxeological analysis (Chevallard, 1998) of four subjects and their relationship with the Cognitive Panorama. To perform this, the folowing questions were taken into account: What type of appearances do completeness make in the tasks —technical ones? How does it appear? How is it used? Which techniques are used to solve tasks? How much technology and theory do those techniques require? Do these techniques consist on the isolated application of a theorem or properties? If so, is the use of properties “called” from the formulation of the task or does it remain implicit? Up to what extent is it necessary the demonstration process of properties or theorems in order to display the technique? Up to what extent only their enunciation? With regard to the gender of tasks and their formulation it has been taken into account if they favor the performance of knowledge at a more technical level (“find”, “solve”, “calculate”, isolated items), at a mobilizable level (“demonstrate using that result", several sequenced items) or as an available level (“study”, “analyse”, “demonstrate”, etc.). In the analysis, the moments when the techniques used become insufficient as well as the points of balance, continuities, ruptures and false continuitites have been attemped to be identified. Regarding the degree of problematization of that which seems evident or observable, tasks involving a demonstration work of properties or results that are “observable”, “evident”, were taken into account as well as up to what extent is there a problematization. The role of used representations was analyzed. An interpretation of to which part of the Mathematical Panorama every subject aims was performed, and the extent up to which the tasks contribute to make evolve the axis of the Cognitive Panorama was analyzed. The praxeological study shows that the type of tasks performed by the students in the first subject of the mathematical analysis at the university in relation to completeness lies on representations and the information they provide as well as on the use of strong theorems which principles are not a concern for them. Students at this level work as if the properties verify naturally, their fundamentation is an external problem. Then, completeness remains in a pre-construction state, its explicit explanation is neither required nor used in problems and practices. The praxeological analysis in relationship with the other analyzed subjects shows that there is a breach in the didactic contract that arises when passing to Analysis l of Exact Sciences, where representations are not longer a support for arguments though the type of tasks regarding completeness is essentially the same as in the previous subject. The students do not understand the reasons of this change to the extent that no new tasks are required regarding this subject, they assume that they have to demonstrate more due to their teachers’ demands instead of being something interesting for them from the mathematical point of view. In the subject Complements of Analysis II there are exercises where the supremum and the infimum appear as object (equivalence among different definitions, arithmetic of supremums and infrmums), and a more instrumental role when defining distances. In Advanced Calculus there is an excercise in which the equivalence among different characterizations of R completeness must be demonstrated, and there are classical exercises of complete metric spaces that can be performed without doing a reflection. From the analysis carried out we have two axes, Necessity, Flexibility and Position before constructions that are left vacant from the offer of the institution, if so, they are set aside for the student’s private work. Chapters fifth and sixth involve the experimental pan of this thesis. The fifth chapter bears the a priori and a posteriori analyses of several clinical interviews carried out with students from Analysis l, Complements to Analysis II and Advanced Calculus, with the purpose of identifying their personnal rapport regarding completeness (Chevallard, 1992) in terms of the Cognitive Panorama and to verify this with the results from the Institutional Analysis. The questions that guided the interviews had as objective to approach the following matters: up to what extent students think it is necessary to demonstrate Bolzano’s Theorem, and up to what extent they consider completeness as a necessary tool to test it; what do the students think about completeness; with which problems, theorems, practice do they relate it and how this view evolves along their progress per subject; how to interpret the fact that there are different ways to introduce completeness and if they have them available; how is the study of construction by Dedekind’s cuts or by Cauchy’s sequences understood and how do they relate them with their preceding konwledge about R. The sixth chapter surveys the answers given on writing by the majority of the students from Analysis l, Complements of Analysis II and Advanced Calculus to the following two questions: How would you explain to a younger student the fact that an increasing and limited sequence of real numbers has a limit? What do you interpret by IR completeness? The experimental part that we have carried out in this study shows that solving the corresponding excercises and the approval of midterm examinations are not sufficient enough to make the students become aware of completeness as a necessary condition to develop mathematical analysis. Understanding completeness as a property or axiom that answers to a genuine problem demands the student to place himself in a certain perspective that is not the most natural one, it also requires a reflection that does not arise spontaneously from solving excercises and it does not seem to belong to the student’s position. For the majority of the students the fact of solving typical problems and excercises of the supremum does not mean the understanding that R outstands for being the set that contains all the supremums of its sub-sets superiorly limited. Few students can perceive that Cauchy’s sequences come from the need for characterizing the type of sequences that is necessary to make converge in order to develop the analysis and that the completeness of the set means that the limit belongs to the set. A small number of students find sense in R construction by means of Dedekind’s cuts or Cauchy’s sequences, and, in general, when they find a meaning is to consider the role of model of the axiomatic system that describes real numbers. Therefore, constructions remain partially devoided of meaning. One of the objectives of the experimental part was to identify the student’s personal rapport regarding completeness in terms of the Cognitive Panorama. - The axis of Technical Availability is the least ascertained one, since questions with precise resolutions were not explicitly included in the interviews, except for the request to four of the five interviewed students of Advanced Calculus to demonstrate Bolzano’s theorem. From the student’s state regarding this axís we can say that completeness notion is not present for them at the time of performing a demonstration. - Regarding the Instrumentality/Objectivation axis, mainly, in relation with the object character, we have found three types of answers: answers given in terms of images or representations; answers given in terms of properties verified by R though they neither characterize truthfully the set nor they are equivalent to completeness, and answers where R and completeness are correctly characterized. Students from the three subjects answer in terms of images and properties that do not characterize completeness; in the case of the last two subjects there are also answers in terms of certain properties that do characterize it: the supremum axiom in the case of students of Complements and limit existence in Cauchy’s sequences in the case of some of the students of Advanced Calculus. The concentration of answers in terms of these two last characterizations is coherent with the praxeological analysis. The object character of completeness is a little weak in the students of Advanced Calculus, of whom we can expect to have a greater amount of available characterizations. It seems particularly interesting the case of a student from Advanced Calculus who is a good example of the fact that doing practice excercises and passing midterm examinations necessarily does neither require nor implies that a reflection is performed about what he is doing. This student worked really hard on the supremum axiom, with the nested intervals property, with Cauchy’s sequences, only from the fact of having carried out the practices of Complements of Analysis II and Advanced Calculus, though this is not enough for him to identify R completeness, and he could not even say what R is. Conceming the instrument character, a tendency to progress in the subjects with regard to completeness identification as a necessary tool in the Bolzano’s theorem is not observed. Likewise, in this case, the instrument character of completeness in students from Advanced Calculus is also a little weak. We find relevant to relate this “weakness” to the way in which students express themselves in several sections of the interviews: characterizations in terms of images or ideas such as “complete means that it has no voids” when referring to completeness, as well as the idea of “approaching”, replicate weakly and not operationally mathematical definitions that do not favor mathematical work, still if in part this language could have been induced by the non-formal situation of the interview. - The position about the Necessity axis were checked up only in students from Advanced Calculus. The different characterizations of completeness are not viewed by all students as a necessary condition to define R, in some cases they are not linked to R, in other cases they are seen as a condition verified by R, and still in others are considered as a constituent part of IR definition. - The way towards the Validation/Fundamentation axis was attained basically from the answers to the question that essentially investigated the reasons by which demonstrate Bolzano’s theorem and the feasible uses of that demonstration. Students from the three subjects expressed that at some point of their university training they considered obvious this theorem, and the question allows us to know up to what extent and how were they coming out of this situation. The heterogeneity of the answers turns difficult the structurization of this axis in terms of different levels per subject. Essentially we have found three types of answers with reference to this axis: demonstrate “why is it what should be done” (by privileging the normative characteristic), demonstrate to convice others or convince yourself by detaching from the representation, demonstrate to understand the mathematics in play. We can assume that the order of these types of answers is an order that shows an evolution of rationality, and it could be expected that the pass along the subjects followed this tendency. This was not the result obtained. The majority of the answers from the three subjects are distributed in the two first types. Very few answers (one per each subject) state the grounds to locate them within “demonstrate for a better understanding”. There are several students, still the advanced ones, that do not know why it is necessary to demonstrate Bolzano’s theorem. - There were not enough answers that allowed us to establish states for the Flexibility axis though it is interesting a passage of interview where a declaration by one of the interviewed students is depicted, two ways of expressing R completeness (by means of the supremum axiom and by means of the convergence of Cauchy’s sequences) are not suffice for him to assume that they are mathematically equivalent conditions. - As study subject the R constructions were a part of the contents of Advanced Calculus. For the students, construction plays different roles reflecting different positions in the community of teachers and mathematicians: in one case they seem to stay out from what is the required knowledge to pass work assignments of the subject; in other cases, constructions are taken as a model for the axiomatic system defining R; and still in others, the sense of constructing a complete set is recovered. In the latter is much easier to separate from a natural and preconstructed view of R and understand the role of the completeness axiom, that in the given version allows essentially to define numbers under certain conditions. Another objective from the experimental part was to analyse if the contradictions detected by other researchers remain and characterize the set the students believe they are using. The analysis from the answers in the interviews clearly shows that many students, almost half of the interviewed ones from the three subjects, associate this notion of continuum and completeness with density. In the case of more advanced students, by a new question, they recover the answer; in the case of beginners a new question may work to put in evidence the confusion though not necessarily remedies the situation. There are other more isolated cases, for example, for one of the students of Advanced Calculus algebraic numbers are enough to develop the analysis; other students doubt about if completeness could be equivalent to density plus not numerability these ideas from the students coexist with many other good ideas. The experimentation set out in Chapter VI allows to assert, in the first place, that the great majority of students from Analysis I and an important proportion of students from Complements to Analysis II seem not to identify completeness in the enunciation “every increasing and limited sequence converges”; it seems though they recognize it as an evident enunciation. This can be linked to the fact that the students may use strong theorems derived from completeness, and in consequence, they do not face it in a personal way. From the analysis of the two question we can assert that the majority of the students from Complements of Analysis II express completeness in a way that it is not operative: or by means of the daily use of the word complete, or by means of images. This result shows a nonsynchronicity with the praxeologies faced by the students. It will be interesting to think what type of excercises and problems may generate the need to acquire other characterizations that will be operative and how to favor the reflection and synthesis capacity about what has been done. Among the students from Advanced Calculus, the limit existence in Cauchy’s sequences is the completeness characterization that appears more frequently; we interpret that this answer arises due to the fact that the students have worked with completeness in general metric spaces and can recognize this R characteristic. In this thesis we have didactically studied something larger than the learning of R and its completeness: R is a context, a place where to study a type of mathematical rationality and its evolution. When speaking about rationality it is thought to encompass the degree of reflection and deepness of a subject regarding mathematics as a discipline, his production engines, his validation elements and his ways of communication. This content has been specially chosen -R completeness since it is included in many instances along a mathematician’s and a mathematics professor’s training. And further than the study of IR, its properties reflect more general principles that go through all mathematics: the construction of objects by approximation of other objects of a particular type; the completition of metrical spaces, the individualization of an element by means of a nested sequence of closed sets, the attainment of extremes, etc. The type of analysis and study carried out in this thesis is not an statistical one, it is a qualitative study showing the subtleties of phenomena linked to teaching and learning. Interviewed students are few in number though by their answers we can see that notwithstanding they pass demanding midterm examinations while achieving good grades, they hesitate at the time of demonstration wondering why should they do so; they are confused, at a first instance, about the notions of density and completeness; they affirm that with algebraic numbers is enough to develop the analysis; they use expressions to refer to objects that do not favor a progress in their Operational process; they do not recognize the sense of equivalence of two enunciations, despite the fact they had demonstrated them. This should not be understood as a criticism to the system but as a study that shows the complexin of this system, highlighting that there are several stages in the acquisition of notions, and several types of cognitive balances coexisting in the same subject while learning takes place.

Bava, José. "Metodologías de procesamiento de imágenes NOAA-AVHRR y su utilización en aplicaciones oceanográficas y biológico-pesqueras en el Atlántico Sudoccidental" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo consistió en utilizar la capacidad sinóptica de las imágenes satelitales NOAA-AVHRR,y las variables físicas medidas mediante éstas, para efectuar análisis espacio-temporales que permitan asociar las variables satelitales con procesos oceanográficos e información biológico-pesquera. Se desarrollaron metodologías de procesamiento que permiten el uso de la información AVHRR para la generación estandarizada y confiable de imágenes de TSM (utilizando las bandas 3 a 5 del infrarrojo térmico) e imágenes de reflectancia del agua como indicadoras del grado de turbidez superficial en zonas costeras (empleando las bandas ópticas 1y 2). Se generó una metodología para derivar imágenes de gradientes a partir de las imágenes de TSM, las cuales son utilizadas para la identificación de frentes oceanográficos. Finalmente, se generaron distintos procedimientos para analizar la coherencia y calidad de una serie de 800 imágenes de TSM para el ASO, las cuales abarcan un período de 11 años (1985-1995) de información AVHRR de TSM. La serie temporal de 11 años de datos de TSM se utilizó para describir las condiciones medias de esta variable en el ASO, la amplitud térmica del ciclo anual y las fechas de ocurrencia de las TSM máximas y mínimas, análisis que complementan y refuerzan trabajos previos efectuados. Sin embargo, debido al mayor grado de detalle en relación con mapas climatológicos preexistentes, las distribuciones mensuales y estacionales medias de TSM, pueden ayudar a comprender con mayor detalle el patrón anual de la TSM, el cual resulta de suma importancia para la interpretación de muchos eventos biológicos en esta extensa región. La serie temporal permitió identificar y caracterizar temporalmente las zonas de ocurrencia de frentes oceanográficos en el ASOa partir de imágenes de gradientes de TSM. La considerable extensión espacial de las imágenes permitió una perspectiva a gran escala de los frentes imposible de obtener mediante campañas oceanográficas. Los datos AVHRR de turbidez se utilizaron en la zona del Río de la Plata. Se estableció una metodología que permite estimar la distribución de sedimentos superficiales a partir de la correlación entre la concentración de sedimentos en superficie y los valores de reflectancia. Por otro lado, se analizó la importancia relativa de la distribución de los frentes de salinidad y turbidez en relación con el patrón de distribución de clases de edades de corvina rubia (Micropogonias furnierü en el estuario. La TSM se asoció con las capturas de caballa (Scomberjaponicus) en la zona costera marplatense (38°S) y merluza de cola (Macruronus magellanicus) en la zona del talud continental. La TSM obtenida a partir de datos AVHRR mostró ser útil para analizar la relación entre esta propiedad y las capturas, sugiriendo que metodologías de análisis de la capa superficial de temperatura mediante información satelital AVHRR pueden ayudar en el ahorro de tiempos de búsqueda del cardumen y costos de navegación.

Abstract:
The objective was to use the synoptic capability of NOAA-AVHRR images, and the physical variables inferred from them, in order to achieve spatial and temporal analyses that may allow correlating the satellite variables with oceanographic processes and biological or fishing data. Methodologies of image processing were developed that make possible the use of AVHRR information for the standardized and reliable generation of SSTimages (using bands 3 to 5 in the thermal infrared), and water reflectance images (using optic bands 1 and 2) as an index of surface turbidity in coastal zones. A methodology was also generated in order to obtain gradients images derived from SST images, which allow for the identification of oceanographic fronts. Finally, different procedures were created in order to analyze the coherence and quality of a temporal series made up of 800 SST images for the period 1985-1995. The temporal 11 years series of SST data was utilized to describe the mean conditions of this variable in the SWAO, the thermal amplitude of the annual cycle, and the day of the year in which the maximal and minimal SST are expected to occur. These analyses complement and reinforce previous works carried out in the region. However, due to the improved spatial resolution when compared with available climatologic maps, the satellite images of monthly and seasonal SST distributions could help to a better understanding of the annual pattern, significant for the interpretation of many biological events in this wide region. The temporal series also allowed the identification and characterization of several zones in the SWAO where oceanographic fronts take place, but considering in this case SST gradients images. The considerable extension of the area covered by each single image provided a synoptic perspective of the fronts impossible of getting by means of oceanographic campaigns. Turbidity images were utilized in the Rio de la Plata estuary for two purposes. A methodology involving an atmospheric correction of the AVHRR images was developed for correlating surface sediments concentrations and reflectance values. In addition, the significance of bottom salinity and surface turbidity fronts was analyzed in connection with the spatial distribution pattern of whitemouth croacker (Micropogonias furnieri)age-classes within the estuary. Satellite SST was associated with catches of mackerel (Scomber japonicus) in the coastal zone near Mar del Plata city (38°S), and with catches of long tail hake (Macruronus magellanicus) in the continental shelf break zone. The SST derived from AVHRR data showed to be useful in order to analyze the relationship between this variable and the catches, suggesting that methodologies involving the analysis of the sea surface temperature by means of AVHRR information could help in time saving and costs of sailing when fishing activities are considered.

Basso, María Cecilia. "Tratamiento de aguas contaminadas mediante biosorbentes y carbones activados sintetizados a partir de un precursor lignocelulósico renovable" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se sintetizan carbones activados a partir de un precursor lignocelulósico renovable, la especie herbácea Arundo donax l., mediante el proceso de activación química. Se emplean una solución de ácido H3PO4 como agente activante, condiciones moderadas de operación (500 °C, 0.5 h) y distintas atmósferas de activación (autogenerada, bajo flujo de aire, CO2 y N2, separadamente). Se explora sistemáticamente la incidencia de la atmósfera de activación sobre las características fisicoquímicas y texturales-morfológicas de los carbones activados resultantes y sobre su performance en la adsorción de algunos metales pesados y compuestos orgánicos volátiles representativos, a partir de soluciones acuosas diluidas empleadas como modelo de aguas con bajas concentraciones de estos contaminantes. La activación promueve transformaciones en el precursor, que conducen al desarrollo de las redes porosas que conforman los carbones activados y de la quimica de su superficie. La atmósfera de activación incide sobre las características químicas de los carbones activados. En particular, el contenido total de los grupos funcionales oxigenados ácidos/polarizables superficiales se incrementa conforme resultan más severas las condiciones oxidantes de la atmósfera de activación. En cambio, su influencia no resulta decisiva en el desarrollo de las matrices porosas; éstas se caracterizan por áreas específicas BET y volúmenes totales de poro similares (1100 m²/g y 1 cm³/g), y son predominantemente microporosas. El comportamiento de los carbones activados en la adsorción de las especies metálicas y orgánicas depende de la atmósfera de activación empleada. Las funcionalidades oxigenadas ácidas/polarizables parecen ejercer una influencia predominante sobre la adsorción de las especies metálicas, que resulta favorecida al usar los carbones con mayor contenido total de las mismas. Las muestras obtenidas bajo flujo de aire presentan, en condiciones de equilibrio pre-establecidas, la mayor eficiencia en la remoción de las especies metálicas a partir de soluciones diluidas monosoluto, incluso superior a la de un carbón comercial empleado como referencia. En oposición, la capacidad de los carbones activados de adsorber los compuestos orgánicos se incrementa al disminuir el contenido total de grupos ácidos/polarizables. Para estos compuestos, los carbones sintetizados bajo flujo de N2 resultan los más efectivos. La cinética de adsorción de las especies metálicas y orgánicas, para las muestras que presentan la mejor performance, se describe satisfactoriamente mediante una expresión cinética de pseudo - segundo orden, mientras que las isotermas de adsorción se representan en forma adecuada y similarmediante modelos convencionales de dos y tres parámetros. Se determinan efectos de adsorción competitivos y diferencias en la selectividad al evaluar la performance de las mismas muestras empleando soluciones bi y trisoluto. Además, los carbones saturados con las especies metálicas y orgánicas resultan regenerables mediante tratamientos químico y/o térmico, respectivamente, conservando prácticamente inalterada su capacidad adsortiva original. En forma complementaria, se investiga la potencialidad de algunos materiales lignocelulósicos como biosorbentes de bajas concentraciones de metales pesados en medio acuoso. Se determinan las curvas de dosaje y las isotermas de sorción de los materiales seleccionados y de muestras de lignina pura, empleadas con fines comparativos, a partir de soluciones diluidas modelo. La efectividad de las muestras lignocelulósicas depende del contenido de los biopolímeros constituyentes, encontrándose una tendencia creciente entre la máxima capacidad de sorción, evaluada a partir de las isotermas y su modelado, y el contenido de lignina presente en las mismas. Los materiales lignocelulósicos con altos contenidos de lignina resultan potencialmente aptos para su empleo como sorbentes alternativos de bajas concentraciones de especies metálicas a partir de aguas contaminadas.

Abstract:
Activated carbons are synthesized by chemical activation of a rapidly renewable lignocelullosic precursor, the herbaceous species Arundo donax l., using a solution of H3PO4 acid as activating agent, moderate process conditions (500 °C, 0.5 h) and different activation atmospheres (either self-generated or under a flow of air, C02 and N2, separately). The incidence of the activation atmosphere on chemical and textural-morphological features of the resulting carbons as well as on their performance to uptake some representative heavy metals and volatile organic compounds is systematically explored by using dilute aqueous solutions as models of wastewater with low concentrations of these pollutants. Activation promotes transformations in the precursor, which lead to the development of carbons porous networks and of surface chemistry. The activation atmosphere affects chemical features of the carbons. In particular, the total content of polar or acidic oxygen functional groups developed on the carbons’ surface increases as more severe the oxidation conditions of the activation atmosphere. However, its effect on the porous networks’ development is almost irrelevant. The carbons show similar BET surface area and total pore volume (1100 m²/g and 1 cm³/g) and are dominantly microporous. The behaviour of the activated carbons in adsorbing metallic and organic species is found to be influenced by the activation atmosphere. The carbons obtained under flowing air exhibit the best effectiveness to capture metal ions from dilute single-solute solutions, under pre-established equilibrium conditions, even superior to that determined for a commercial sample used as a reference. Acidic/polar oxygen groups seem to affect predominantly metal adsorption, taking place in a greater extent or the carbons possessing a larger content of these functionalities. In contrast, the capability of the activated carbons to adsorb the organic compounds decreases as smaller the content of acidic/polar oxygen groups. For the organic compounds, the carbons derived under flowing N2 are the most effective ones. A pseudo-second order rate expression is found to represent properly adsorption kinetics for metal and organic species on the carbons showing the best performance, whereas conventional two, three-parameters models describe satisfactorily, in a similar manner, the isotherms obtained for the same systems. Adsorption competitive effects and differences in selectivity are also determined for the best performing carbons using binary and ternary solutions. Furthermore, the spent carbons loaded with metallic and organic species are regenerated through chemical and/or low temperature thermal treatments, respectively, with the samples almost keeping their original adsorptive capacity. Complementary, the potential of ligno cellulosic materials as biosorbents of low-metal concentration from aqueous environment is examined. Dosage curves as well as biosorption isotherms are assessed using some selected materials and model dilute solutions. Pure lignin is additionally employed, for the sake of comparison. Effectiveness of the lignocellulosic samples depends on their content of constituent biopolymers. An increasing trend between maximum sorption capacities, as evaluated from isotherms modeling, and the lignin content of the samples is determined. Accordingly, lignocellulosic materials with larger lignin contents are found potentially adequate as alternative sorbents for metal species removal from dilute wastewater.

Barrionuevo, Paula. "Efecto de los complejos inmunes sobre las moléculas de histocompatibilidad (MHC) y otras moléculas asociadas a fenómenos inflamatorios en monocitos humanos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Un fenómeno inflamatorio se produce la migración unidireccional (quimiotaxis) de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN) hacia el foco inflamatorio, seguidos luego por los monocitos sanguíneos. Esta migración es la respuesta al gradiente de concentración de un agente quimiotáctico determinado, como el leucotrieno B4 o las quimioquinas. También existen productos como los complejos inmunes (Cl), que son quimiotácticos para monocitos y neutrófilos. La formación de Cl circulantes es la consecuencia fisiológica de la respuesta de anticuerpos contra microorganismos u otros antígenos, o bien el resultado de enfermedades autoinmunes como artritis reumatoidea, o lupus eritematoso sistémico. Los Cl son los ligandos fisiológicos de los receptores para la porción Fc de las IgG (FcγRs) y la interacción entre éstos, dispara una variedad de funciones regulatorias y efectoras. Las moléculas de histocompatibilidad (MHC) son glicoproteínas presentes en la superficie celular que participan en la presentación de péptidos antigénicos para la activación de los linfocitos T. Existen dos tipos de moléculas presentadoras de antígenos: las MHC de clase I (MHC-I) y las de clase II (MHC-II). Estas moléculas se expresan constitutivamente en la superficie de los fagocitos mononucleares y su expresión es aumentada por citoquinas como el interferón -γ (IFN-γ). En este trabajo, se ha demostrado que la preincubación de los monocitos humanos con Cl formados por Ovoalbúmina (OA)- IgG anti-OA fue capaz de disminuir la expresión basal e inducida por IFN-γ de las MHC-I y las MHC-II. El efecto de los Cl sobre la expresión de las MHC es mediado a través de la interacción de los Cl con el FcγRI y el FcγRII. La disminución de la expresión de las MHC en los monocitos correlacionó directamente con la capacidad de presentación antigénica de dichas células. Similares resultados fueron obtenidos con sobrenadantes de monocitos tratados con Cl. La inhibición del efecto de los SN sobre las MHC-II por pepstatin y phosphoramidon sugiere que la secresión se proteasas aspárticas y metaloproteasas constituye un mecanismo posible en la regulación de las MHC-II por parte de los Cl. Por otra parte, la inhibición por phosphoramidón para las MHC-I sugiere la participación de metaloproteasas en la regulación de las MHC-I. Además, los sobrenadantes de PMN tratados con el Cl también fueron capaces de disminuir la expresión de las MHC. En el modelos murino de inflamación crónica, los Cl también disminuyeron la expresión basal e inducida por IFN-γ de las MHC-II en macrófagos murinos. Además, los Cl disminuyeron la expresión de otras moléculas de relevancia inmunológica tales como CD14, ICAM-1 y CD40. La disminución de la expresión de CD14 mediada por Cl va acompañada de la inhibición de la producción de factor de necrosis tumoral α (TNF-α) inducida por lipopolisacáridos (LPS). En cuanto al mecanismo, observamos que el efecto de los Cl sobre CD14 podía ser atribuido a la liberación de serinproteasa(s) con especificidad tipo tripsina por parte de los monocitos humanos. Por último, encontramos una forma soluble de CD14 en el sobrenadante de monocitos tratados con Cl, confirmando que la distribución de CD14 en superficie se debe al clivaje y la liberación de la molécula al medio extracelular. Este trabajo contribuye a la comprensión global de los mecanismos mediante los cuales agentes conocidos como pro-inflamatorios pueden tener funciones anti-inflamatorias en determinadas circunstancias. Este efecto anti-inflamatorio de los Cl podría funcionar como mecanismo de atenuación de una respuesta inflamatoria exacerbada por parte del huésped.

Abstract:
Inthe course of the inflammatory phenomenon, polymorphonuclear neutrophils (PMN) migrate unidirectionally (chemotaxis) towards the inflammatory focus, followed by monocytes. This migration occurs in response to the concentration gradient of a chemotactic agent, such as leukotriene B4 or chemokines. Molecules such as inmune complexes (IC) are chemotactic for neutrophils and monocytes. The information of circulating IC is the physiological consequence of antibody response to different antigens, including microorganisms, or lupus erythematosus. IC are the endogeneous agonists of the receptors for the Fc portion of IgG (FCγRs) and their interaction triggers a variety of regulatory and effectors functions. The histocompatibility molecules (MHC) are cell-surface glycoproteins involved in the presentation of peptides for the activation of T lymphocytes. There are two classes of molecules for antigen presentation: the MHC class I (MHC-I) and class II (MHC-II). This molecules are constitutively expressed on the surface of phagocytic mononuclear cells and their and their expression is induced by cytokines such as interferon-γ (IFN-γ). In this study, it has been demonstrated that pre-incubation of human monocytes with ovalbumin (OA)- rabbit IgG anti-OA immune complexes exerted an inhibition of basal and IFN-γ-induced expression of MHC-I and MHC-II. The effect of IC on MHC expression was mediated by the interaction of IC with FcγRI and FcγRII. The down-regulation of MHC expression on monocytes correlated directly with the antigen presentation capacity of this cells. Similar results were obtained with supernatants from IC-treated monocytes. The inhibition of the effects of supernatants on MHC-II by pepstatin and phosphoramidon suggests that the secretion of aspartic proteases and metalloproteases is a possible mechanism that regulates MHC-II. On the other hand, the inhibition of the effect on MHC-I by phosphoramidon supports the role of metalloproteases in this case. In addition, supernatants from IC-treated PMN were also able to reduce the expression of MHC. In a murine model of chronic inflammation, IC also down-regulated the basal and IFN-γ-indiced expression of MHC-II on murine macrophages. In addition, IC down-regulated the expression of other immunologically relevant molecules such as CD14, ICAM-1, and CD40. The down-regulation of CD14 expression mediated by IC correlated with the inhibition of lipopolisacarides (LPS)-induced tumor necrosis factor α (TNF-α) production. Regarding the mechanism, we demostrated that the effect of IC on CD14 could be ascribed to the secretion of serinproteases tripsina-like by human monocytes. Finally, we found a soluble form of CD14 in supernatants from IC-treated monovytes, confirming that the reduction of CD14 on the cell-surface is due to cleavage and release of the molecule into extracellular medium. This study contributes to the understanding of inflammatory phenomena. We have demonstrated that well-known pro-inflammatory molecules could behave, under certain circunstances, as anti-inflammatory agents. This anti-inflammatory effect of IC would attenuate an exacerbated host immune response.

Barrero, Paola Roxana. "Secuencia nucleotídica completa del Adenovirus 7h: análisis de los polimorfismos del gen del hexón de los Adenovirus circulantes en Buenos Aires entre los años 1990-2002" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los Adenovirus circularon en el período 1999-2002 durante todo el año, registrándose un mayor número de casos en el período invernal de baja temperatura y primaveral con cambios de temperatura frecuentes. El diagnóstico virológico se realizó tempranamente luego de la internación siendo la bronquiolitis el diagnóstico clínico al ingreso más frecuente. Se registró un mayor número de casos en menores de 12 meses y la evolución en general fue favorable registrándose 9 casos fatales en un total de 362 muestras analizadas. Se encontró una correlación negativa de grado medio con respecto a la temperatura, indicando un aumento en el número de casos cuando el registro térmico desciende. En cuanto a la humedad relativa y el índice UVB, la relación no es tan clara aunque es siempre de grado menor. Este parece ser un parámetro no necesariamente asociado a la aparición de casos de Adenovirus. El análisis filogenético del hexón completo permitió agrupar las muestras fatales y las separó de las graves y leves en el periodo 1990-1999. El análisis de las regiones hipervariables en el período 1990-2002 posicionó a las muestras analizadas en el cluster GTC2 junto al AV7h. La secuencia completa del AV7h se llevó a cabo por una estrategia de ensamblado de 8 contigs que permitieron elaborar una secuencia consenso de 35259 pb. con un porcentaje G+C del 51%. Se conservaron intactos los genes para las regiones tempranas, intermedias y tardías. El análisis filogenético ubicó al genoma AV7h junto con el AVB con el que tiene una homología del 84%. Se hallaron ORFs relacionados con proteínas pulmonares que podrían inducir autoanticuerpos o daño pulmonar crónico postviral.

Abstract:
In Argentina, Adenovirus 7h (AV7h) has been frequently associated with fatal cases and chronic lung disease. In to order to understand the characteristics of AV7h we accomplished the entire reference sequencing and analysed sample polymorphism in the hexon gene from a twelve-year period (1990-2002). Nasopharyngeal aspirates from children with acute lower respiratory infections were characterized by multiplex-PCR. Primers were designed and PCRs were performed to obtain the full genome for the reference 7h strain 87-922 and the entire hexon gene or hipervariable regions for samples. Amplicons were sequenced, contigs were aligned, a consensus full-length sequence was obtained for the reference strain 87-922 and phylogenetic relationships for hexon gene were inferred by maximum-likelihood criteria. Overall differences between AV7h hexon gene and prototype for serotype 7 (Gomen) sequence were <4% at nucleotide level and <3.5% at amino acid level. Phylogenetic analysis clustered together fatal cases apart from severe and mild cases. The entire genome was completed in 8 contigs with 44, 16, 7, 15, 14, 26, 18 and 15 primer reactions respectively. AV7h was 35263 bp in length and had a GC content of 51% and genes from the early, intermediate, and late regions were present in the expected human adenovirus locations. The genome differs from prototype strain for AVB (subspecie B2) in 16%, and 4% from vaccinal strain AV7(subspecie B1). This work constitutes the first attempt to elucidate intragenotypic variations within AV7h and to reveal particular features of this strain.

Barredo, Silvia Patricia. "Análisis estructural y tectosedimentario de la subcuenca de rincón blanco, precordillera occidental, provincia de San Juan" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la región del río Los Patos, provincia de San Juan, aflora un serie triásica asociada al hemigraben mas septentrional de la cuenca Cuyana. Este ha sido identificado como Rincón Blanco y reúne los depósitos de Barreal, Hilario, Rincón Blanco, quebradas El Salto, El Tigre y Cerro Puntudo. El área de estudio forma parte de la faja corrida y plegada de la Precordillera en donde la deformación compresiva dio lugar al desarrollo de estructuras complejas y fenómenos de inversión tectónica que dificultan el análisis del rift, la historia de su relleno y consecuentemente la correlación a través de la subcuenca. Sin embargo, el mapeo detallado de las estructuras, el estudio cinemático de las fallas y el análisis de la evolución de los ambientes sedimentarios posibilitaron la elaboración de un modelo simplicado del período extensional de la subcuenca. La sedimentación fue continental, epiclástica y piroclástica y tuvo lugar en depocentros aislados que formaron un hemigraben asimétrico con polaridad este. El margen activo corresponde a la zona de Rincón Blanco mientras que la rampa corresponde a la zona de Barreal - Hilario. La evolución del relleno estuvo marcada por un fuerte control tectónico y climático que le imprimieron a las secuencias rasgos distintivos. Estas características permitieron aplicar los conceptos de la estratigrafía secuencial, así se identificaron tres secuencias depositacionales en términos de espacio de acomodación, que representan dos estadíos de rifting (sinrift I y II) y sus correspondientes sags. Los resultados obtenidos correlacionan muy bien con lo observado en la rampa y con lo propuesto por otros autores para el depocentro Uspallata. El interesante contenido fósil compuesto por flora, fauna invertebrada, en especial de trazas fósiles, y vertebrada dada por la presencia de icnitas de tetrápados se utilizó para reconstruir la paleogeografía de la cuenca, al mismo tiempo que constituyó una herramienta de gran valor para ajustar la propuesta estratigráfica secuencial lograda a través de los conceptos tectosedimentarios. El estudio detallado de la asociación de tetrápodos de la Formación Corral de Piedra, asimismo señala que por sus características constituyen hasta el momento el registro más antiguo de este grupo de dinosaurios en el mundo. Finalmente el análisis estructural y tectosedimentario permitieron ver que la secuencia aflorante sobre la margen oriental de la cuenca no está directamente relacionada al Grupo Rincón Blanco y hasta tanto no se cuente con un dato preciso de edad, se la ha identificado como Unidad Marachemill.

Abstract:
A series of Triassic rocks related to the infilling of the northernmost portion of the Cuyana basin outcrop in the surroundings of Los Patos river, in the San Juan province. The corresponding depocenter has been identified as Rincón Blanco subbasin and it is proposed here to involve the Barreal, Hilario, Rincón Blanco, El Salto, El Tigre creeks and the Cerro Puntudo sites. The studied area is part of the Precordillera fold and thrust belt where complex structures and diverse inversion tectonics phenomena have occurred as result of the cenozoic compressional deformation. Consequently the understanding of the rift evolution, the history of its infilling and the correlation throughout the basins require a deep analysis. A detailed mapping of the structures, the kinematic study of the faults and the examination of the sedimentary environments evolution made it possible to build a simplified model for the extensional period of the basin. Continental, epiclastic and pyroclastic sedimentation took place in isolated depocenters which built an asymmetric halfgraben with its deepest portion to the east-northeast, in the Rincón Blanco region, and the ramp to the west in the Barreal - Hilario towns. The infilling was strongly controlled by tectonic and climatic parameters which in term produced distinctive features along the whole sequence. These letter made it possible to applied the so extended sequence stratigraphy concepts and thus recognised three depositional sequences according to the accommodation space. They can be associated with two rifting stages (synrift I and II) and their corresponding sag phases. This evolutive scheme most correlates with the ramp record and with several models proposed by other authors for the Uspallata subbasin. The worthfull fossil record mainly composed of flora, invertebrates, specially trace fossils, and vertebrates consisting of tetrapod tracks were applied to make a paleogeographical model for the basin. Furthermore, it was used as a tool to calibrate the sequence stratigraphic model achieved by using tectosedimentary elements. Comparative study of the tetrapod association of the Corral de Piedra Formation proved that it is the oldest one registered up to now around the world. Finally and in spite of the lack of age data, the structural and tectosedimentary analysis held here permitted to see that the sequence outcropping along the east margin of the basin is not related to the Rincón Blanco Group as previously proposed and hence it has been distinguished here as Unidad Marachemill.

Bado, Silvina G.. "Efectos biológicos de withanólidos de solanaceae sobre plagas agrícolas" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la búsqueda de hallar nuevas sustancias con la actividad insecticida de bajo impacto ambiental se estudiaron los efectos biológicos de un grupo de metabolitos secundarios, denominados withanólidos, extraidos de Salpichroa origanifolia, Jaborosa odonelliana y Nicandra physaloides (Solanaceae), así como de compuestos análogos obtenidos por síntesis química a partir del withanólido mayoritario de S. origanifolia (Salpicrólido A), y de los extractos crudos de Physalis peruviana (Solanaceae) sobre las siguientes plagas agrícolas: Tribolium castaneum (Herbst) (Coleoptera: Tenebrionidae); Ceratitis capitata (Wiedemann (Diptera: Tephritidae); Anticaesia gemmatalis (Hûbner) (Lepidoptera: Noctuidae) y Diabrotica speciosa (Germar) (Coleoptera: Chrysomelidae). Los estudios se llevaron a cabo a través de bioensayos que comprendieron la incorporación de los productos en alimento (dieta artificial, discos foliares y bebederos de adultos, según especie insectil) y por aplicación tópica de larvas. Se realizaron observaciones periódicas registrándose el estado morfológico de los individuos, lo que permitió detectar la aparición de demoras en el desarrollo de los individuos tratados mediante la obtención de los parámetros Tiempo de pupación 50% y Tiempo de desarrollo 50% por el método Probit. Otros datos registrados fueron la presencia de alteraciones morfológicas, mortalidad y talla de los individuos, siendo estos sometidos a análisis de varianza y test de Tukey (p ≤ 0,05). Se realizaron bioensayos de preferencia alimentaria de Lema bilineata (Germar) (Coleoptera: Chrysomelidae) con las solanáceas Salpichroa origanifolia, Physalis peruviana y Solanum gilo, analizándose los resultados teniendo en cuenta la constitución química de metabolitos de las tres especies vegetales. Los resultados obtenidos son producto de una interacción química planta-insecto de alta especificidad, considerándose de gran interés la continuación de estudios acerca de su bioactividad.

Abstract:
In the search of new substances with insecticidal activity of low environmental impact, my dissertation focuses on a new group of secondary metabolites group, named withanolides. The withanolides were exracted from Salpichroa odonelliana, Jaborosa odonelliana and Nicandra physaloides (Solanaceae), and analogue compounds were synthesized from the major natural Salpichroa origanifolia withanolide (salpichrolidae A). Their biological effects of these withanolides and from Physalis peruviana (Solanaceae) crude extracts, were studied on the following agricultural pests: Tribolium castaneum (Herbst) (Coleptera: Tenebrionidae), Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae); Anticarsia gemmetalis (Hûbner) (Lepidoptera: Noctuidae) and Diabrotica speciosa (Germar) (Coleptera: Chrysomelidae). The studies involved biotests which consisted in the incorporation of the products into food (artificial diet, foliar discs, adult drinking vessels, depending on insect species) and topic application on larvae. Periodical observations of individual morphological stage registered development delays of treated individuals by fifty percent population time and fifty percent development time through Probit method. Other data obtained were morphological alterations, mortality and individual lenght, which were submitted to variance analysis and Tukey tests (p≤0,05). Preference alimentary biotests of Lema bilineata Germar(Coleoptera: Chrysomelidae), with Salpichroa origanifolia, Physalis peruviana and Solanum gilo solanaceae were caried out, whose results were analyzed taking into account the chemical constitution of these three plant species. The information here obtained indicates a high specificity in chemical plant-insect interaction, which could be considered of great interest for further bioactivity studies.

Avale, María Elena. "Desarrollo y estudio funcional de un modelo de hiperactividad en ratones con lesión dopaminérgica neonatal" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La dopamina (DA) es un neurotransrnisor que participa en diversas funciones del sistema nervioso central de los mamíferos, como la regulación del movimiento y los procesos cognitivos. Existen varias patologías humanas asociadas a la disfunción dopaminérgica, entre las cuales se postula el déficit de atención e hiperactividad (ADHD), un desorden que afecta del 3 al 5 % de la población infantil mundial. Las lesiones neonatales con 6-hidroxidopamina en la rata se utilizan como modelo experimental de ADHD, porque inducen aspectos comportamentales presentes en el síndrome humano. En este trabajo desarrollamos este modelo en el ratón, cuya ventaja reside en que permite estudiar los genes potencialmente involucrados utilizando ratones modificados genéticamente. Los ratones lesionados neonatalmente con 6-OHDA evidenciaron hiperactividad, respuesta hipolocomotora paradójica frente a la administración de psicoestimulantes, déficits en la inhibición comportamental y en la coordinación motora. Los cambios neuroquírnicos detectados incluyen una disminución del contenido de DA del 80 % en el cuerpo estriado y del 35 % en la corteza prefrontal. A partir de los estudios genéticos que asocian al receptor dopaminérgico D4 (D4R) con el ADHD, estudiamos el papel fimcional del D4R en este modelo. Para esto, realizamos lesiones neonatales con 6-OHDA en ratones carentes del D4R (Drdf-/-). A pesar de mostrar las mismas alteraciones neuroquimicas que sus hermanos de genotipo normal, los ratones Drd4 -/- no desarrollaron hiperactividad ni déficit en la inhibición comportamental, demostrando que la expresión de tales fenotipos depende de la estimulación del D4R. Dado que las lesiones neonatales con 6-OHDA inducen aumento en el contenido de 5-HT estriatal, también analizamos la participación de la 5-HT en este modelo. La reducción de 5-HT normalizó la actividad locomotora de los ratones lesionados pero no previno la respuesta paradójica a la anfetamina. En conjunto estos resultados demuestran que tanto el D4R como la elevada S-HT estriatal son esenciales para la manifestación de las características más relevantes de este modelo murino.

Abstract:
Dopamine (DA) is a neurotransmitter involved in several functions of mammalian brain, like motor control, cognition and emotion. Several human disorders are related to DA dysfunction; among them is attention deficit/hyperactivity disorder (ADHD), a syndrome that affects 3-5 % of school-aged population. Neonatal lesions of dopaminergic pathways with 6-hydroxydopamine (6-OHDA) in rats has been widely used as a model of ADHD. In this work we adapted this model into the mouse, to test the participation of candidate genes in knockout mice. Neonatally 6-OHDA-lesioned mice exhibited hyperactivity, paradoxical hypolocomotor response to psychostimulants, poor behavioral inhibition and deficit in motor coordination. The most salient neurochemical changes included 70-80 % reduction of striatal DA contents and 35 % reduction in the prefrontal cortex. Since genetic studies in humans have associated ADHD with the dopamine D4 receptor (D4R) we aimed to determine whether the D4R plays a role in the behavioral phenotypes of our model, performing neonatal 6-OHDA lesions in mice lacking D4Rs (Drd4-/-). Although striatal DA contents were equally reduced than in their wild-type siblings, Drd4-/- mice did not develop hyperactivity and showed normal behavioral inhibition, demonstrating that the D4R is essential for the expression of these phenotypes. Because neonatal DA depletion leads to an increase in serotonin (S-HT) striatal content we also studied the functional role of S-HT in our model. The reduction of striatal S-HT contents in 6-OHDA neonatally-lesioned mice reversed their hyperactivity to normal locomotor scores, but it did not prevent the paradoxical response to amphetamine. Together, our results from a combination of genetic and pharmacological approaches demonstrate that D4R and elevated S-HT are both essential for the expression of some relevant features present in this mouse model.

Astié, Andrea A.. "Interacciones entre el parásito de cria Molothrus bonariensis y uno de sus hospedadores, Turdus amaurochalinus" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El parasitismo de cría es una estrategia reproductiva en la que el ave parásita deposita sus huevos en los nidos de otras especies, las que realizan el cuidado parental de huevos y pichones. El tordo renegrido es un parásito de cría obligado y generalista que parasita a más de 200 hospedadores, entre ellos al zorzal chalchalero. En este trabajo se estudiaron las interacciones hospedador-parásito entre el tordo renegrido y el zorzal chalchalero. Se registró una tasa de parasitismo del 60% con una intensidad de 1,5 huevos de tordo por nido parasitado. El mayor costo del parasitismo sobre el éxito reproductivo del zorzal fue debido a las picaduras de huevos de zorzal inflijidas por los tordos cuando visitan el nido. Además, en los nidos parasitados el éxito de eclosión de los huevos de zorzal fue menor. La presencia de pichones de tordo en el nido no afectó la supervivencia de los pichones zorzal. El zorzal chalchalero no ha desarrollado defensas efectivas frente al parasitismo, aunque es capaz de reconocer a los tordos como una amenaza. En nidos exitosos (nidos que no fueron predados ni abandonados) sólo el 20% de los huevos de tordo alcanzó el estadío de volantón. Se plantean posibles explicaciones para estos resultados.

Abstract:
Brood parasitism ia a breeding strategy in which the parasitic bird lay eggs in nests of other species (host), which incubate the eggs and provide parental care to the chicks. The shiny cowbird (Molothrus bonariensis) is an obligate brood parasite that lay eggs in nests of more than 200 hosts, included the Creamy-bellied Thrush (Turdus amaurochalinus). In this work, I studied the interactions between shiny cowbirds and creamy-bellied thrushes. I found 60% of nest parasitized with an intensity of 1,5 eggs per nest. The main cost inflicted by the parasite was the puncture of host eggs. Parasitized nests had a lower hatching success, but parasite chicks did not affect the survival of host chicks. On the other hand, creamy-bellied thrushes did not develop effective defences against parasitism, although they recognize shiny cowbird as a threat. In successful nests (those that were not depredated or deserted) only 20% of shiny cowbird eggs produced fledglings. I discuss why creamy-bellied thrushes did not develop better antiparasitic defences, and why shiny cowbirds use so frequently this low-quality host.

Ambrosio, Beatriz. "Algoritmos rápidos para computar estimadores robustos" (2004). Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El método más comunmente usado para estimar los coeficientes de una regresión lineal es el de mínimos cuadrados. Este método que es óptimo en el caso de errores distribuídos normalmente, es muy sensible a la presencia de outliers. Para remediar ese problema se han desarrollado otros métodos de estimación llamados métodos robustos, los cuales se ven poco afectados por la presencia de datos atípicos. Una medida de la robustez de un estimador es su punto de ruptura. Entre los estimadores de regresión robustos se encuentran los LTS, LMS y los S estimadores. Estos estimadores son equivariantes por transformaciones afines, de regresión, y de escala y además tiene un alto punto de ruptura. El inconveniente que presenta su calculo es que requiere muchas horas de computadora. Rouseeuw y Van Driessen desarrollaron un algoritmo, llamado Fast -LTS, que mejora la velocidad de cálculo del estimador de mínimos cuadrados podados. El objetivo de este trabajo es desarrollar un nuevo algoritmo, análogo al Fast-LTS, para computar S estimadores. Del mismo modo que el algoritmo desarrollado por Rouseeuw, este nuevo algoritmo está basado en el mejoramiento local de los nuevos estimadores iniciales. Esto permite una significativa reducción del número de candidatos requeridos para obtener una buena aproximación de la solución óptima. Se ha realizado un estudio de simulación que ha mostrado que los S estimadores calculados con el algoritmo Fast-S, son comparativamente mejores a los estimadores LTS calculados con el algoritmo Fast-LTS. Algunas de las ventajas del nuevo algoritmo son: 1) Menor porcentaje de muestras afectadas por los datos atípicos. 2) Menor error cuadrático medio. 3) Menor tiempo de cómputo.

Abstract:
Regression analysis is an important statistical tool that is applied in most sciences. The purpose of regression analysis is to fit equations to observed variables. The most commonly regression technique is the least squares method, generally adopted because of tradition and easier computation. However these method is very sensitive to the presence of atypical points in the sample. An observation is an atypical point or outlier if it does not follow the model. To remedy this problem the robust mothods have been developed that are not so easuly affected by outliers. One mesure of robustness of an estimate is its breakdown point. Heuristically, the breakdown point is the minimun fraction of arbitrary outliers that can take the estimate beyond any limit. The breakdown point as an asymptotic concept has been introduced by Hampel (1971). Donoho and Huber (1983) gave the corresponding finite sample notion. A desirable property for regression estimates is that the estimate be equivariant with respect to affine, regression and scale transformations. Estimates are computationally expensive, and the corresponding algorithms become unfasible for moderately large number of regressors. In this thesis we propose an algorithm for computing S-estimates, analogous to the algorithm of Rousseeuw and Van Driessen (Fast-LTS) to improve the computational speed of the LTS-estimate. The new algorithm, that we call "fast-S", is based on a "local improvement" step of the re-sampling initial candidates. This allows a substantial reduction of the number of candidates requiered to obtain a good approximation to the optimal solution. We performed a simulation study wich shows that S-estimators computed with the fast-S algorithm compare favourably to the LTS estimator computed with the fast-LTS algorithm.

Alvarez, Laura. "Efecto del hexaclorobenceno sobre la homeostasis de las hormonas tiroideas y parámetros funcionales del tejido adiposo marrón" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Ell hexaclorobenceno (HCB)es un contaminante ambiental ampliamente difundido. Se ha demostrado que el tejido epididimal blanco, interscapular marrón (TAM), el hígado y la tiroides son blancos primarios de la toxicidad del HCB. Se ha demostrado que el HCB disminuye los niveles circulantes de tiroxina total (T4) y tiroxina libre (LT4),sin alterar los de triiodotironina (T3). Este efecto diferencial indica que varios mecanismos podrían estar involucrados en la homeostasis de las hormonas tiroideas. En el presente trabajo se realizaron curvas de tiempo para la actividad de la T4 5’ deiodinasa I (5' D-I) en tiroides, hígado y riñón, y T4 5’ deiodinasa II (5' D-II)en TAM de ratas Wistar macho tratadas con HCB (1000 mg/kg p.c.), con el propósito de evaluar si un aumento en la actividad de las deiodinasas podría contribuir al mantenimiento de la T3 sérica. La actividad de la 5’ D-I aumentó en la tiroides desde los 21 dias. Tanto en riñón como en el TAM la actividad de la 5' D-I y 5’ D-II respectivamente disminuyeron en función del tiempo. La actividad total de 5’ D-I corporal aumentaba a los 30 días, sugiriendo que la tiroides y el hígado hipertrofiado por el tratamiento crónico con HCB podrían al menos contribuir en parte al mantenimiento de los niveles normales de T3 sérica. El HCB aumentaba la actividad de la uridin difosfo glucuronil transferasa (UDPGT) involucrada en la glucuronidación de T4 en forma dependiente del tiempo, sugiriendo que los niveles disminuidos de T4 sérica podrían deberse en parte a un aumento en la glucuronidación de la misma. La UDPGT-T3 no se modificaba. El HCB no modificaba los niveles de RNAm de UCP-1 analizados en TAM de ratas en termoneutralidad y con exposición aguda al frío. Previamente demostramos que el HCB aumentaba los depósitos lipídicos en el TAM. En este trabajo medimos la actividad de la acetil-CoA carboxilasa (ACC) que no se alteraba por efecto del HCB. La actividad del la lipoproteinlipasa (LPL) aumentaría de forma post.transcriptacional ya que el contenido de RNAm de la misma no se modificaba por el HCB. Tanto el contenido del transportador de glucosa (GLUT-4), como la captación de 2-deoxiglucosa por el TAM aumentaban en las ratas intoxicadas en forma crónica. Estos resultados sugieren que el aumento en la captación de glucosa junto con el de los ácidos grasos libres, podrían dar cuenta de los depósitos aumentados de lípidos observados histológicamente en el TAM de ratas tratadas cronicamente con HCB.

Abstract:
Hexachlorobenzene (HCB) is one of the most widespread environmental pollutants. It has been shown that epididymal white, interscapular brown adipose tissue (BAT), liver and the thyroid are primary targets of HCB toxicity. Findings in our and others laboratory have indicated that treatment of rats with HCB decreases circulating levels of total thyroxine (T4) and free L-thyroxine (FT4) but does not affect those of triiodothyronine (T3). Different effects of HCB in terms of serum T3 and T4 indicate that several mechanisms are involved in the development of the particular thyroid hormone status. In the present work, time courses were determined for thyroxine 5' deiodinase I (5’ D-I)activity in thyroid, liver, and kidney and T4 5'deiodinase II (5’ D-II) activity in BAT in male Wistar rats treated with HCB (1000 mg/kg B.W),to test the possibility that increased deiodinase activity in these tissues might contribute to the maintenance of the serum T3 level. 5' D-I activity was increased in the thyroid at 21 days and thereafter, and didn't change in the liver. Kidney and BAT5’ D-I activity was decreased in a time dependent manner. Total whole body 5’ D-I activity increased by 30 days, suggesting that increased T. to T3 conversion in the thyroid and in the greatly enlarged liver of chronic treated rats contribute at least in part to the maintenance of serum T3. Uridine diphosphoglucuronosyl transferase (UDPGT) activity involved in the glucuronidation of thyroid hormones was increased in a time dependent manner. suggesting that decreased serum T4 levels of HCB treated rats may be due in part to increased glucuronidation of T4. T3 UDPGT was not altered under the same experimental conditions. UCP-1 mRNA levels analyzed on thermoneutrality and in rats acuter exposed to cold were not modified by HCB treatment. We have previously demonstrated that HCB increased BAT lipid depots. To gain further insight into lipid metabolism we measured the activity of the key rate-limiting enzyme acetyl-CoA carboxilase (ACC). Our results showed that HCB did not modify this parameter. Lipoprotein lipase (LPL) activity might be increased in a post transcriptional manner, as LPL mRNA content was not modified by HCB. In response to HCB, BAT glucose transporter (GLUT-4),as well as 2-deoxygluoose uptake increased. These results suggest that the increase in 2-deoxyglucose uptake as well as free fatty acids derived from plasma circulating triglycerides may account for the increased lipid depots observed in BAT from HCB-treated rats.

Allende, Luz. "Estructura de las fracciones del fitoplancton de lagos antárticos de Bahía Esperanza con estado trófico contrastante. Variaciones estivales e interanuales, e interacciones con otros componentes planctónicos" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudiaron tres cuerpos de agua con estado trófico contrastante de Bahía Esperanza (Península Antártica) durante los veranos de 1998, 1999 y 2001, con los objetivos de analizar la estructura y dinámica estival del fitoplancton y del bacterioplancton, y de analizar su relación con los factores ambientales y con otros componentes de la trama trófica. Se planteó la hipótesis general de que los cuerpos de agua muestran diferencias en los atributos del fitoplancton, abundancias del bacterioplancton, y en las interacciones entre los componentes planctónicos, asociadas a su estado trófico. El estudio reveló que el lago Chico (Oligotrófico) presentó bajas densidades de fitoplancton y estuvo dominado por algas nanoflageladas mixotróficas (Chrysophyceae) y por picocianobacterias. La laguna hipereutrófica Pingûi presentó altas densidades de fitoplancton dominado por especies nanoflageladas autróficas (Chlorophyceae). El lago Boeckella (meso-eutrófico) mostró abundancias intermedias y dominancias alternadas de uno u otro grupo algal, según la presencia/ausencia de una capa de hielo superficial; el picoplancton autotrófico fue muy abundante. Los tres cuerpos de agua mostraron similitudes en cuanto a la riqueza, estrategias ecológicas y grupos funcionales de fitoplancton. La densidad del bacterioplancton no evidenció diferencias importantes entre los tres ecosistemas. El tipo de control ejercido, por recursos o por pastoreo, sobre las comunidades estudiadas difirió enrte los tres lagos. Se concluye que la etructura y dinámica del fitoplancton, y la abundancia del bacterioplancton de cuerpos de agua antárticos se encuentra determinada no sólo por su estado trófico, sino que por factores físicos, interacciones biológicas y el aislamiento propio del continente antártico. Esta tesis provee el primer estudio sobre las distintas fracciones de tamaño del fitoplancton y de bacterioplancton de cuerpos de agua de Bahía Esperanza, Antártida, analizando de forma experimental las interacciones entre componentes planctónicos.

Abstract:
Three lakes of contrasting trophic status located at Hope Bay (Antartic Peninsula) were studied during summers 1998, 1999, and 2001, in order to analyse the structure and dynamics of phytoplankton and bacterioplankton, and their relationship with environmental factors, and other components of the food web. A general hypothesis was stated: the different water bodies show differences in their phytoplankton communities, bacterioplankton abundances and the interactions among the planktonic components, associated with their trophic conditions. Results revealed that the oligotrophic Lake Chico exhibited the lowest phytoplankto densities, dominated by mixotrophic nanoflagellates (Chrysophyceae) and picocyanobacteria. In the hypertrophic pond Pingûi, phytoplakton was abundant, mainly represented by strictly autotrophic nanoflagellates (Chlorophyceae). In the meso-eutrophic Lake Boeckella, phytoplanlton showed intermediate densities, and was alternatively dominated by both groups of nanoflagellates, according to the presence/absence of a superficial ice-layer. Autotrophic picoplankton was highly abundant. The three lakes exhibit similarities in relation to the species richness, ecological strategies and functional groups of the phytoplankton. Bacterioplankton densities did not show important differences among lakes. The importance of the top-down vs. bottom up control over these communities differed among the water bodies. It is concluded that the structure and dynamics of the ohytoplankton, and the bacterioplankton abundance of Antartic wate bodies are not only affected by their trophic conditions but also by physical factors, biological interactions and the isolation of the Antartic Continent. This thesis constitutes the first survey concerning different size fractions of the phytoplankton and bacterioplankton of continental water bodies of different trophic status at Hope Bay (Antartica), analysing with experiments the interactions among the plankton components.

Alberti, Andrea Claudia. "Las poblaciones argentinas de Anastrepha fraterculus (Diptera: tephritidae) conforman una única especie biológica?" (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Alberghina, Josefina Silvia. "Estudios ultraestructurales en el género Oedogonium Link (Oedogoniales, Chlorophyta) y su posición filogenética dentro de las algas verdes." (2004). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las Oedogoniales constituyen un orden de algas verdes con citocinesis particular, zooides estefanocontos, y forma especializada de reproducción sexual. Los tres géneros incluídos en el orden se diferencian por el tipo de hábito, siendo Oedogonium filamentoso simple. Se seleccionaron 11 especies de Oedogonium provenientes de distintos cuerpos de agua dulce argentinos, se analizó a nivel ultraestructural la citología de los oogonios con distintos tipos de apertura y se secuenció el gen 18S rDNA. Dado que uno de los caracteres diacríticos más importantes para dicho género es el tipo de apertura de los oogonios, se relacionó su estudio ultraestructural con el filogenético molecular y morfológico. Los estudios moleculares, que incluyeron 37 especies de Chlorophyta permitieron demostrar la monofilia del Orden Oedogoniales y que ningún carácter usado tradicionalmente en la determinación específica del género puede ser conciderado como sinapomórfico. Estos análisis también indicaron que el aparato flagelar estefanoconto de los zooides podría haber derivado tanto de una configuración CCW como una DO. Sin embargo, estudios ultraestructurales de la gameogenesis y zoosporogénesis en Oedogonium parecerían indicar que el origen correspondería al tipo DO. Se porpone además elevar el orden Oedogoniales al nicel de Clase Oedogoniophyceae.

Abstract:
Oedogoniales make up a green algae Order with an unusual form of cytokinesis, a ring of flagella on zooids, and complex sexual reproduction. The three genera included in this Order differ from each other in the type of habit. Oedogonium sp. is unbranched filamentous. Eleven Oedogonium species collected from argentinian freshwater bodies were selected. The cytology of their oogonia with different types of aperture was analyzed with ultrastructural techniques, and their 18S rDNA genes were sequenced. As one of the diacritic characters for this Genus is the type og oogonial aperture, the aim of this research is to integrate the ultrastructural study with the molecular analysis. The phylogenetic study including 37 species of Chlorophyta demonstrated the monophyly of Oedogoniales, and that traditional morphological characters used in the specific determination of the Genus can not be considered as synapomorphic. It is proposed that the stephanokont motile cells in this order could be originated either from CCW configuration or DO, although previous ultrastructural studies of gametogenesis and zoosporogenesis in Oedogonium seem to indicate that the origin correspond to the DO type. It is also proposed that the Oedogoniales group raised to the status of Class Oedogoniophyceae.

Villegas, Daniela Claudia. "Suelos, geoformas y materiales originarios entre los Lagos San Martín y Viedma, Prov. de Santa Cruz" (2004-02). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo de Tesis Doctoral se aborda al estudio de los suelos, factores y procesos en un sector cordillerano del centro oeste de la provincia de Santa Cruz, comprendido entre los Lagos San Martín y Viedma (49°00’ y 49°36’ S - 73°30' y 72°00' O). La zona de referencia se caracteriza por sus amplios gradientes bioclimáticos. geomorfológicos y litológicos que se traducen en la diversidad del manto pedológico. Los suelos estudiados fueron clasificados según el sistema “Soil Taxonomy' identificándose 7 Ordenes, 15 Subordenes; 20 Grandes Grupos y 27 Subgrupos. A nivel de la mayor jerarquía taxonómica se ha reconocido los siguientes tipos: Andisoles, Aridisoles, Entisoles, Espodosoles, Histosoles, Inceptisoles y Molisoles. La geomorfología ha sido analizada a partir de imágenes satelitarias, fotomosaicos y controles de campo. Han sido cartografiadas 14 unidades geomórficas, 5 de las cuales resultan del proceso giaciario y abarcan aproximadamente el 50% de la superficie del área estudiada. Los materiales originarios de los suelos han sido clasificados para su cartografia en: depósitos glaciarios; depósitos glacifluviales; depósitos coluviales, criogénicos y afloramientos rocosos; depósitos fluviales y depósitos glacilacustres. Las arenas eólicas y los materiales piroclásticos, dadas las características de sus depósitos no han sido cartografiados. El estudio mineralógico de los suelos denota una amplia participación de los componentes de onrigen volcánico en la fracción arena fina. Se ha analizado la geoquímica de 5 niveles de tefra en tres sectores del área de estudio, observando una variación composicional de las cineritas de intermedia a ácida. Los principales procesos pedogenéticos en la zona de estudio son: humificación, melanización, lixiviación, podosolización, andosolización, argiluviación, carbonatación, alcalinización, salinización, formación de mantillo forestal, paludización, gleización y erosión-agradación La variabilidadde los suelos y de los mencionados gradientes ambientales justifican la división de la zona de estudio en tres sectores, Occidental, Central y Oriental. El primero está caracterizado por la presencia Inceptisoles-Espodosoles-Andisoles; los Molisoles son los suelos representativos del sector Central, y los Aridisoles del Oriental. Los Entisoles. son comunes en toda la región como consecuencia de paisajes recientemente estabilizados (sectores occidental y central) o de condiciones bioclimáticas poco propicias para la pedogénesis (sector oriental).

Abstract:
Soils, soil forming factors & processes in the andean sector of western Santa Cruz Province are studied in present PhD Tesis. Studied area is located between San Martín and Viedma lakes (49°00'S y 49°36’S-73°30’W y 72°00'W). Strong bioclimatic, geomorphic and lithologic west-east gradients characterize studied zone. These gradients influence over soil cover. Soils of seven Orders were recognized: Andisols, Aridisols, Entisols, Spodosols, Histosols, Inceptisols and Mollisols, including 15 Suborders, 20 Great Groups and 27 Subgroups. Fourteen major geomorphic units were recognized and mapped, prevailing glacial landforms (more than 50% surface of studied area). Parent materials are: glacial deposits, glaciofluvial deposits, coluvial deposits, criogenic deposits and outcrops, fluvial deposits. Aeolian sandy and piroclastics deposits due to their distribution and depositional feature could not be mapped at selected scale. Nevertheless, by mineraological analysis a great participation of volcanic materials in all soils was stablished in sand class. Five tephras samples from three different places were geochemically analized, showing intermediate to acid composition. Pedogenetic processes identified are humification, podzolization, leaching; lessivage; calcification, littering, gleization, melanización, organic matter accumulation, waterlogging, and erosion-agradation. Due to great soil spatial variability studied zone could be divided in three sectors: western, central and eastern. The former is characterized by Inceptisol-Spodosols and Andisols association. The second sector is dominated by Mollisols, meanwhile the third Aridisols prevails. Entisols are widespread distributed because of recently stabilized landscapes (central and western sectors) and unfitted bioclimatic conditions (eastern sector).

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