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Tesis > TEMA

Biología [ 2301 tesis ]

Reproducción [ 51 tesis ]

Piantanida, Martha Josefina. "Biología de la reproducción en roedores cricétidos silvestres : Reproducción, desarrollo y factores que afectan el ciclo reproductivo en Akodon Dolores" (1981) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Espinosa, María Beatriz. "Hembras hetero y homogaméticas en el roedor cricétido Akodon azarae : Su desempeño reproductivo y mantenimiento en condiciones de laboratorio" (1991) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Momo, Fernando Roberto. "Ciclo de vida y distribución espacial de Gondogeneia antarctica Chevreux (Crustacea, Amphipoda)" (1995) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Di Iorio, Osvaldo R.. "Biología de Cerambycidae (Coleóptera) de la Argentina" (1996) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudiaron 256 especies de Cerambycidae (Coleoptera) de la Argentina, la biología de las larvas y de los adultos. Para las larvas se estudiaron las plantas hospedadoras de especies de Cerambycidae que desarrollan en madera seca del noreste, noroeste y centro de Argentina, Espinal, Buenos Aires y Entre Ríos, y las especies de Cerambycidae que desarrollan en plantas vivas y en frutos. Se incluye una revisión bibliográfica crítica de las plantas hospedadoras para la Argentina. Se describen las galerías larvales, cámaras pupales y galerías de emergencia (incluyendo orificios de emergencia) de Parandra tucumana Zikán, Mallodon spinibarbis (L.), Callipogon armillatus (L.), Psalidognathus germaini durnfordi Burm., Deltosoma lacordairei (Gah.), Deltosoma xerophila Di Iorio, Compsocerus violaceus (White), Paromoeocerus barbicornis (F.), Criodion torticolle Bates, Chrysoprasis aurigena (Germ.), Ischionodonta semirubra (Burm.), Megacyllene spinifera (Newm.), Megacyllene mellyi Chevr., Neoclytus sobrinus (Lap. & Gory), Compsa nebulosa Martins, Retrachydes thoracicus (Oliv.), Dorcacerus barbatus (Oliv.), Sobralia superba NEW ICHNOGENUS, NEW SPECIES, Dragomiris major Monné & Martins, Torneutes pallidipennis Reich, Oncideres germari Thoms., Trachysomus buqueti Thoms., Alphus guaraniticus Lane, Alphus subsellatus montanus Di Iorio, Unelcus pictus Thomson, Coccoderus novempunctatus (Germ.), Diploschema rotundicolle (Serv.), Praxithea derourei (Chabrill.), Emphytoeciosoma daguerrei Melzer, Apagomerella versicolor (Boh.). Se comentan las defensas químicas de las plantas (alcaloides, limonoides, saponinas y taninos), parasitoides, predadores (Coleoptera , Diptera , Planipennia ) y vertebrados predadores de larvas. Para los aduItos de Cerambycidae se estudiaron los períodos de emergencia (emergencias en masa y emergencias constantes), duración del ciclo de vida, las fechas de emergencia y su relación con las plantas hospedadoras y la localidad, la influencia de factores meteorológicos (temperatura y lluvias), los períodos de vuelo, atracción a la luz y horarios de captura. Se observó la cópula y oviposición de Pathocerus wagneri, Psalidognathus germaini durnfordi, Achryson surinamum, Dorcacerus barbatus, Oxymerus spp., Ethemon basale y Oncideres germari. Se estudió la selección de la planta hospedadora, alimentación sobre flores, frutos, savia, corteza y cariopses; la polinización, morfología floral, mecanismo de polinización y visitantes florales en Clematis montevidensis; las defensas químicas (olores y sabores desagradables); las especies de Cerambycidae con el mismo patrón de coloración que emergen simultáneamente de la misma planta hospedadora y que visitan simultáneamente las mismas flores; la predación y el subsocialismo. Como modalidades particulares de desarrolo, se estudiaron Cerambycidae cortadores de ramas y otros Cerambycidae y Coleoptera asociados a ramas cortadas por Oncideres germari. A partir del estudio de los items previamente enunciados, se llegó a las conclusiones que se consignan a continuación. Los registros de plantas hospedadoras deben estar acompañados de localidad: las plantas hospedadoras de una especie cambian de una localidad a otra. Las familias y/o especies de plantas de mayor cobertura son las utilizadas como hospedadoras por las mayores cantidades de especies de Cerambycidae. En consecuencia, el cambio de planta hospedadora en cada localidad esta dado, en primer lugar, por la abundancia de la planta y/o su disponibilidad. En segundo lugar, por la elección de hospedadores alternativos, menos abundantes si el hospedador principal no esta disponible. Las plantas hospedadoras exóticas deben verse desde el punto de vista de cuales especies de Cerambycidae se han adaptado luego del reemplazo del bosque natural por otro de composición florística totalmente diferente. Las fechas o períodos de emergencia de cada especie de Cerambycidae son independientes de las plantas hospedadoras en las cuales haya desarrollado (el período de emergencia de cada especie es el mismo entre plantas hospedadoras diferentes). Las fechas o períodos de emergencia de cada especie de Cerambycidae son independientes de las localidades de procedencia de las plantas hospedadoras (el período de emergencia de cada especie es el mismo entre localidades diferentes). Las fechas o períodos de emergencia de cada especie de Cerambycidae guardan relación con la climatología de la región y, en cierta medida, están sincronizadas con las estaciones seca y húmeda. Las especies de Cerambycidae con períodos de emergencia restringidos generalmente presentan picos de emergencia. Los picos de emergencia suelen repetirse para cada especie en la misma época del año durante años sucesivos. En algunas especies de Cerambycidae hay una relación entre el o los picos de emergencia con las temperaturas mínimas y máxima. A temperaturas mínimas bajas cesan las emergencias; las temperaturas máximas altas ocasionan picos de emergencia. Variaciones adversas diarias del clima (bajas temperaturas, lluvias) afectan las emergencias durante los días que duran pero influyen muy poco en el período de emergencia de cada especie. Si se restringen las plantas hospedadoras a nivel de familia (a veces tribu y/o género), la mayoría de las especies de Cerambycidae son oligófagas a monófagas, pero a nivel de especie de planta son polífagas. Se presentan pocos casos de especies de Cerambycidae monófagas a nivel de especie de planta hospedadora, aunque se necesitan mayores datos de colecta. La mayoría de las especies de Cerambycidae desarrollan en madera muerta, seca y estacionada. Las fuentes de madera son de orígenes muy diversos: desde ramas secas en la copa del árbol vivo, el duramen expuesto por la rotura de una rama durante una tormenta y aún la misma rama quebrada y caída, árboles secos en pie (posiblemente por descenso de la capa freática en tiempos de sequía) o árboles quemados o talados por el hombre. Una mínima cantidad de especies desarrolla en tejidos vivos de plantas vivas como una adaptación secundaria o especialización para evitar la competencia por madera seca con otras Cerambycidae. Las especies del género Oncideres presentan un comportamiento que les permite independizarse de la disponibilidad de madera seca en el lugar y evitar también la competencia con otras Cerambycidae. Ecologicamente, las Cerambycidae son las primeras en acudir a una planta muerta, iniciando la sucesión cadavérica que permite su degradación. Las especies diurnas de Cerambycidae generalmente poseen colores llamativos (negros y rojos, metálicos), se alimentan al estadio adulto y poseen una mayor sobrevida en ese estadio. Las principales fuentes de alimentación son néctar y/o polen de flores, frutos maduros, savia y corteza. Las flores mas visitadas por Cerambycidae corresponden a las Umbelliferae y Asteraceae. En estas plantas podrían actuar como polinizadores, intermedios entre la efectividad de las moscas y las avispas. En las especies diurnas, las fuentes de alimentación funcionan como lugares de encuentro entre los sexos y de cópula. La mayor sobrevida del estadio adulto en especies diurnas permite separar el lugar de cópula del de oviposición, tanto en el tiempo como espacialmente (el lugar de cópula es diferente del de oviposición). La coloración de algunas especies diurnas de Cerambycidae es verdaderamente aposemática: al ser capturados, los adultos emiten olores que, muy probablemente, causen rechazo en los predadores. Las especies nocturnas son crípticas, de colores grisáceos o pardos, y no se alimentan en el estadio adulto (las observaciones en Clematis montevidensis fueron excepcionales). La sobrevida del estadio adulto de las especies crípticas es corta (solo unos pocos días); se limita a la búsqueda de la planta hospedadora, la cópula y la oviposición. En las especies crípticas, la cópula y la oviposición se efectúan sobre el mismo lugar y separada por pocos minutos una de otra, es decir, sobre la planta hospedadora. Las especies de Cerambycidae atraídas por trampas de luz son nocturnas y crípticas, pero no todas las especies nocturnas y crípticas acuden a la trampa de luz. El horario de captura en trampa de luz siempre comenzó luego de las 21 hs, cuando la oscuridad es total. La finalización de las capturas siempre coincidió con la aparición del rocío. La intercepción, atracción y captura a la luz permite conocer el período de vuelo de muchas especies de las cuales no se conoce ninguna planta hospedadora. El período de vuelo es inmediatamente posterior al período de emergencia de cada especie. Las fechas de rótulos de ejemplares de colecciones entomológicas corresponden a fechas del período de vuelo. Las poblaciones de Cerambycidae son reguladas principalmente por parasitismo y predación. Particularmente en Oncideres las poblaciones son reguladas por factores climáticos: cantidad de días con temperaturas de O C o inferiores en invierno para las larvas de los primeros estadios y las lluvias producidas en primavera-verano para las larvas de los últimos estadios. Los principales parasitoides de Cerambycidae son Hymenoptera de la familia Braconidae y en menor medida, Ichneumonidae y otras familias. Los principales predadores son Coleoptera de las familias Cleridae y Temnochilidae y, en menor medida, algunas Elateridae. Las mismas especies de parasitoides y predadores pueden emerger de diferentes plantas infestadas con diferentes especies de Cerambycidae. Del punto anterior se desprende que los parasitoides y predadores no son especie-específicos sino ecológico-específicos. Las larvas de Cleridae y de Temnochilidae son predadoras sobre las larvas de Cerambycidae, mientras que sus adultos predan a los adultos de Cerambycidae. Las larvas de Cleridae y de Temnochilidae consumen una gran cantidad de sus presas buscando activamente a las larvas que predan, saliendo y entrando de la madera repetidas veces. Hay una relación directa entre tamaño de las larvas de los predadores y de las larvas de las Cerambycidae: las especies mas pequeñas son predadas por especies pequeñas de Cleridae (Corinthiscus tarsalis, C. fossipenne y C. amoenus), las medianas por Temnochilidae y especies mas grandes de Cleridae (Axina analis, Corinthiscus geniculatus) y las más grandes de Cerambycidae (Dryoctenes scrupulosus, Lochmaeocles sladeni, Mallodon spinibarbis) por grandes especies de Elateridae. Los vertebrados predadores de Cerambycidae están escasamente estudiados, y entre los cuales se cuentan a los pájaros carpinteros y los peludos para las larvas; para los adultos son principalmente aves, aunque se conocen datos de reptiles y anfibios.

Abstract:
Larval and adult biology of 256 species of Cerambycidae (Coleoptera) from Argentina were studied. Larval host plants (dry wood) were collected from northeastern, northwestern and central Argentina, Espinal biogeographic province (including Buenos Aires and Entre Ríos). Also, larvae in live plants and fruits were investigated. A bibliographic revision of larval host plants of Argentina is included. Larval galleries, pupal chambers and emergence galleries and holes are described for Parandra tucumana Zikán, Mallodon spinibarbis (L.), Callipogon armillatus (L.), Psalidognathus germaini durnfordi Burm., Deltosoma lacordairei (Gah.), Deltosoma xerophila Di Iorio, Compsocerus violaceus (White), Paromoeocerus barbicornis (F.), Criodion torticolle Bates, Chrysoprasis aurigena (Germ.), Ischionodonta semirubra (Burm.), Megacyllene spinifera (Newm.), Megacyllene mellyi Chevr., Neoclytus sobrinus (Lap. & Gory), Compsa nebulosa Martins, Retrachydes thoracicus (Oliv.), Dorcacerus barbatus (Oliv.), Sobralia superba NEW ICHNOGENUS, NEW SPECIES, Dragomiris major Monné & Martins, Torneutes pallidipennis Reich, Oncideres germari Thoms., Trachysomus buqueti Thoms., Alphus guaraniticus Lane, Alphus subsellatus montanus Di Iorio, Unelcus pictus Thomson, Coccoderus novempunctatus (Germ.), Diploschema rotundicolle (Serv.), Praxithea derourei (Chabrill.), Emphytoeciosoma daguerrei Melzer, Apagomerella versicolor (Boh.). Observations, descriptions and comments concerning the larvae are made for chemical defenses of plants (alcaloids, limonoids, saponins, tannins), parasitoids, predators (Coleoptera , Diptera , Planipennia ) and vertebrate predators. For adults were studied emergence periods, life cycle duration, dates of emergences and their relation with host plants, localities and meteorological factors affecting them (temperatures, rainfalls), flight periods, atraction to lights, and times of captures. Copula and oviposition are described for Pathocerus wagneri, Psalidognathus germaini durnfordi, Achryson surinamum, Dorcacerus barbatus, Oxymerus spp., Ethemon basale y Oncideres germari. Host plants selection, ingestion of food (on flowers, fruits, bark, sap and cariopses), pollination, floral morphology and floral visitors of Clematis montevidensis; chemical defenses (disagreable odours and taste), species of Cerambycidae with the same coloration pattern that emerges simoultaneously from the same host plant and visits the same flowers; predation and subsocialism are studied in adults. Branch girdlers and their associated taxocoenosis of Cerambycidae are described in detail.

Pigozzi, María Inés. "Análisis citológico, ultraestructural y funcional del sistema cromosómico sexual en la clase Aves" (1997) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A partir de un examen global de la bibliografía sobre cariología aviaria, se seleccionaron 5 especies de la clase Aves, pertenecientes a cinco órdenes aviarios diferentes, incluyendo una especie del grupo primitivo Ratitae, y cuatro especies del grupo más evolucionado de las aves carinadas, para realizar un análisis citológico y ultraestructural del cariotipo, y en especial de los cromosomas sexuales Z y W. Se estudió la estructura y comportamiento de los cromosomas, tanto mitóticos como meióticos. Se describen las características morfológicas de los macrocromosomas y las variaciones específicas de los cromosomas Z y W, en Rhea americana (Reiformes, Ratitae), Anas platyrhynchos (Anseriformes), Numida meleagris (Galliformes), Columba livia (Columbiformes) y Poephila guttata (Paseriformes). El cromosoma W está compuesto predominantemente por heterocromatina C+, con amplia heterogeneidad de distribución y morfología en cada especie de las aves carinadas ; en R americana el W es predominantemente eucromático , con bandas C+ sólo en el centrómero y brazo corto. La conducta del par ZW en la profase meiótica femenina y el par ZZ en la masculina se analizaron en microextendidos de meiocitos para el estudio de complejos sinaptonémicos. En el par ZW, el proceso de sinapsis parcial, y el proceso de igualización de los ejes, están presentes en todas las especies analizadas. Asimismo, en todas las aves del grupo de las carinadas, se observa un único nódlulo de recombinación, que tipifica a la zona recombinante. En R. americana, en cambio, existe libre recombinación a nivel de casi todo el brazo largo de ambos gonosomas. Se concluye que la conducta del par ZW se ha conservado durante la filogenia aviaria. El análisis de la frecuencia y distribución de los nódulos de recombinación en los complejos sinaptonémicos de machos y hembras de C. livia, demuestra que existen tasas de recombinación similares en ambos sexos en esta especie. Se propone que esta característica puede ser propia de la clase Aves. El estudio de las células mitóticas y meióticas de P. guttata permitió descubrir la presencia de un cromosoma B restringido a la linea germinal. La conducta de este cromosoma B, se analizó mediante microscopía óptica y electrónica en las gonadas masculina y femenina. Se propone una hipótesis para explicar su mantenimiento, y su transmisión de una generación a la siguiente. En base a las evidencias aportadas por esta Tesis, y de acuerdo con la interpretación de los datos disponibles en la literatura, se propone el primer modelo para la evolución del par ZW aviario desde un estado homomórfico inicial hasta el heteromorfismo que se observa en las aves más evolucionadas.

Abstract:
After an extensive revision of the literature, five species of birds, belonging to five different orders, were chosen to perform a cytological and ultraestructural analysis of the karyotype, specially on the htures of the Z and W chromosomes. One of these species belongs to the primitive group of ratite birds, while the other four species belong to the more evolved group of carinate birds. Morphological features of macrochromosomes and the specific variations of Z and W chromosomes are described in : Rhea americana (Rheiformes, Ratitae), Anas platyrhynchos (Anserifbrmes), Numida meleagris (Galliformes), Columba livia (Columbifonnes) and Poephila guttata (Passeriformes). In all carinate birds the C+ heterochrornatin is the main component of the W chromosome, showing large variations in morphology and distribution of the C banding material. In R americana the W chromosome is mainly euchromatic, with C+ bands only at the centromere and the short arm. The behavior of the ZW pair during female meiotic prophase and that of the ZZ pair during male meiosis, were analized using microspreads for synaptonemal complex studies. Both partial synapsis and axial equalization processes are present in the ZW pairs of all the examined species. In all carinate birds a single recombination nodule is observed, which is strictly located in a recombinating region. In R. americana, however, there is free recombination along most of the extension of Zq and Wq. It is concluded that the ZW pair behaviour is conserved throughout avian phylogeny. The analysis of the recombination nodule distribution and frequency in the synaptonemal complexes in males and females of C. livia, shows the existence of similar recombination rates in both sexes of this species. It is proposed that this h a r e may be distinctive of the class Aves. The presence of a B chromosome restricted to the germ line was discovered in P. guttata, after the analysis of mitotic and meiotic cells in both sexes of this species. The behaviour of this B chromosome was analyzed in male in male gonads, using light and electron microscopy. A hipothesis is proposed to explain the maintenance of this B chromosome, and its transmission from one generation to another. Finally, the first model for the evolution of the avian ZW pair is proposed, based on the evidence presented in this Thesis and according to the interpretation of related data fiom the literature. The model explains the transformation of the ZW pair from an homomorphic state to the highly differentianted state observed in the more evolved, living birds.

Ehrlich, Martín David. "Los primeros estadios de vida de la merluza Merluccius hubbsi, Marini 1933, en el Mar Argentino como aporte al conocimiento de su reclutamiento y estructura poblacional" (1998) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La merluza es la especie demersal más importante del Mar Argentino. Su captura en 1996 ha superado las 600.000 t y se encuentra en estado de sobrepesca. El estudio de los primeros estadios de esta especie se ha encarado bajo dos aspectos, por un lado el análisis de la condición reproductiva de los adultos a través de la determinación de su fecundidad y frecuencia reproductiva y por otra parte la determinación espacio-temporal de la distribución y abundancia de los primeros estadios de vida donde se incluyen huevos, larvas tempranas, larvas tardías y juveniles. Se ha observado que la merluza es un desovante parcial indeterminado que presenta desoves casi todo el año, pero con dos períodos de puesta más intensivos, el invernal (mayo-julio) en la zona norte de su amplia distribución (35°-38°S) y el estival (octubre-marzo) en la zona costera norpatagónica (43°-45°S). La fecundidad relativa para hembras entre 38-58 cm de largo total fue estimada, en este trabajo, entre 520 a 640 ovocitos por gramo de hembra. La fecundidad parcial o por camada osciló entre 267400 a 432240 ovocitos por puesta. La frecuencia reproductiva utilizando la presencia de folículos postovulatorios de edad 0 fue estimada en una puesta cada 22 días aproximadamente. De acuerdo a la presencia de folículos postovulatorios en las muestras y de huevos en estadio I en el plancton, la merluza desova a lo largo de todo el día con un pico matinal. Inmediatamente después del desove la proporción de machos se incrementa notablemente llegando a más del 80 %. A través de experimentos de fecundación artificial se ha establecido que la duración en días desde la fertilización del huevo hasta la eclosión es de 5,01 a 10°C y de 3,1 a 18°C. Con 1470 muestras de ictioplancton provenientes de 39 campañas realizadas entre 1973 y 1989 se ha logrado construir un cuadro sinóptico mensual bastante completo sobre las principales areas de desove de la merluza. En la parte norte de la plataforma (34°00’- 41°30°S) se observa la presencia de huevos en abril entre los 39°-37°S, en mayo y junio entre los 37°35° S y en julio y agosto entre los 34° y 35°S. Los desoves se producen en la plataforma entre los 50 a 160 m con temperaturas que a los 10 m de profundidad oscilan entre 9,4 a 13,3°C. En mayo, septiembre y noviembre se ha reconocido un área de desove entre los 40°- 42°S. En el norte del Golfo San Matías se encuentran huevos en septiembre y octubre. En la parte sur de la plataforma entre 41°30’-47°00’S existe una importante zona de puesta al sudoeste de Península Valdés y litoral del Chubut y otra menor al sur del Golfo San Jorge que se extiende desde noviembre a marzo con picos en diciembre. Los desoves estivales se producen en profundidades de 40 a 60 m en aguas con temperaturas entre l3-l8°C a 10 m. Se ha encontrado un patrón muy similar para la distribución de las larvas tardías y juveniles tempranos. Las áreas senaladas, tienen condiciones oceanográficas muy particulares que brindan a la merluza un hábitat reproductivo favorable por ser áreas de enriquecimiento, disponibilidad de alimento y/o retención. El área de desove invernal está bajo la influencia de frentes de variada naturaleza (talud, térmicos y halinos) y un transporte de Eckman hacia la costa que impide la deriva de larvas hacia las aguas subtropicales. El área de desove estival al sur y sudoeste de Peninsula Valdés está relacionado con frentes de marea. Las áreas de desove más restringidas localizadas en los Golfos San Matías y San Jorge están afectadas por frentes termohalinos. El ajuste que presentan las áreas y épocas de desove con los diferentes procesos hidrográficos, se corresponden con los distintos grupos o stocks de adultos, fortaleciéndose la hipótesis que la merluza presenta un stock múltiple en el Mar Argentino. En la zona de desove intensivo estival, caracterizada por frentes de marea, los huevos y larvas tempranas se encuentran en la zona frontal y estratificada donde las diferencias de temperatura entre la superficie y el fondo oscilan entre 3,8 a 4,0°C. No se ha notado ningún patrón definido en la distribución vertical de huevos en sus diferentes estadios de desarrollo y larvas tempranas. La presencia de larvas y juveniles en distintas épocas y áreas en el Mar Argentino ha permitido aplicar a los procesos de reclutamiento de la merluza la hipótesis de ajuste-desajuste a los ciclos de producción del mar de Cushing (1972) y la de miembro-errante de Sinclair e Iles (1989). Las modalidades reproductivas de los adultos y la distribución temporal y espacial de los primeros estadios permiten afirmar que la merluza es un exitoso desovante ubicuo y una especie eurioica a diversos factores de manera que le permite soportar una intensa presión pesquera.

Abstract:
Hake is the most important demersal species in the Argentine Sea. Its catch in 1996 exceeded 600.000 t and it seemed overfished. The study of the hake early life history was developed in two aspects, reproductive analysis like fecundity and spawning frequency, and early stags (eggs, early larvae, late larvae and juveniles) distribution and abundance. Hake is an indeterminate batch spawner, wich spawns all over the year, with two peak spawning times, one during winter (May-July) in the northern area of its wide distribution (35°-38°S) and the other in summer (October-March) in the north Patagonia coastal waters (43°-45°S). Female relative fecundity between 35-38 cm of total length, expressed as ovocites per ovary free-weight, varied between 520 to 640 and its batch fecundity ranged from 267400 to 432240 ovocites per spawn. The spawning frequency was estimated in 22 days. Considering the presence of post ovullatory follicles in the samples and stage 1 eggs in the plankton, hake spawns all over the day with a matinal peak. Male dominated schools after spawning have finished. The hatching time in reared eggs varied between 5,01 days at 10°C to 3,1 days at 18°C. The analysis of 1470 ichthyoplankton samples obtained in 39 research cruises between 1973 to 1989 allowed to study monthly the main important hake spawning and nursery areas. The eggs were caught in the northern area (34°-4l°30’S) during April (39°-37°S), May - June (37°-35°S) and July August (34°-35°S). Hake spawns in shelf, between 50 to l60 m depth, where temperatures at lO m ranged from 9,4 to l3,3°C. During May, September and November it spawns between 40°-42°S . In the San Matías Gulf northern area hake eggs were caught in September and October. ln the southern platform between 4l°30’ to 47°S it was detected an important spawning area off southwestern Peninsula Valdes and coastal Chubut and another less important in the southern San Jorge Gulf , both during November to March, with peaks in December. In summer hake spawns between 40 to 60 m depth, and temperatures at lO m ranged from l3 to 18°C. The late larvae and early juveniles distribution is consistent with spawning areas. The different spawning areas are related to very particular oceanographic conditions, wich determine an appropiate reproductive habitat associated with retention areas and disponibility of food. The winter spawning area is influenced by different fronts (shelf break and termohaline) and the Ekman’s transport to the coast prevents larval drift to subtropical waters. The summer spawning area is influenced in the south and southwestern Península Valdés by tidal fronts, while in San Matías and San Jorge Gulfs by termohaline ones. The spawning times and areas are related with different hidrographic processes, wich are associated with different adult groups or stocks, supporting the hypothesis that hake presents multiple stocks in the Argentine Sea. In the most important summer spawning area , related with tidal fronts, the eggs and larvae are distributed in frontal and stratified areas where differences of surface and bottom temperatures ranged between 3,8 to 4°C. Eggs in different stages and early larvae were distibuted in the whole water column. The presence of larvae and juveniles in different seasons and areas in the Argentine Sea allowed to associate to the hake recruitment process the match-mismatch production cycles (Cushing, 1972) and member vagrant hypothesis (Sinclair & Iles, l989). Because of the adults reproductive behavior and the early life history stages distribution, the hake may be considered as a succesful spawner, wich supports an important fishery pressure.

Cebral, Elisa. "Citotoxicidad del consumo crónico de alcohol sobre las gametas, la fecundación y embriogénesis preimplantatoria murina" (1998) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se ha descripto que la ingesta crónica y/o aguda de altas concentraciones de etanol durante la gestación produce el síndrome de alcoholismo fetal (FAS). El objetivo principal de este estudio fue profundizar los conocimientos sobre los efectos deletéreos del consumo preconcepcional de etanol y sus consecuencias sobre el desarrollo preimplantativo del embrión. Machos adultos y hembras prepúberes de ratón Fl de (C57 x CBA), ingirieron etanol al 10, 5 y 2.5% en el agua de bebida por 30 días. A los 27 días del tratamiento se indujo la ovulación. Se estudio la calidad de las gametas, la tasa de fecundación y el grado de desarrollo preimplantativo alcanzado por embriones in vitro e in vivo (hasta dia 4), y adicionalmente la incidencia del consumo de etanol en la maduración sexual de las hembras. La administración crónica de etanol al 10 y 5% produjo retraso en la maduración folicular. Como consecuencia, los ovocitos ovulados presentaron altos índices de activación espontánea, partenogenética, y la capacidad de sintesis de PGE por el complejo cúmulo-ovocitario fue reducida con el consumo del 10 y aumentada con el consumo del 5% de etanol. La tasa de fecundación in vitro e in vivo fue reducida cuando las hembras fueron tratadas con ambas dosis de etanol. Los ovocitos intactos de las hembras tratadas no fueron penetrados por los espermatozoides, y los ovocitos haploides oviductales permanecieron sin ser fecundados. El etanol afectó tanto la maduración del ovocito, la regulación y control de su calidad por las células del cúmulo, y también posiblemente la membrana plasmática ovocitaria y otros componentes celulares, lo que resultó en la pérdida de fecundabílidad. El consumo crónico de etanol al lO y 5%, en la fase preconcepcional de las hembras, produjo, tanto en el desarrollo in vitro como in vivo, tasa embrionaria diaria reducida, debido al crecimiento retrasado, al arresto embrionario en estadios de mórulas y en blastocistos tempranos, en los días 2, 3 y 4 (in vivo) y 5 de desarrollo in vitro, con ambas dosis de etanol. Asimismo, fue evidente la alta tasa de fragmentación embrionaria temprana, desde día 2 con etanol al 10%, y menor y más tardía en las hembras tratadas con etanol al 5%. El consumo de etanol al 10% produjo aumento de embriones anormales. El impacto del alcohol en el desarrollo embrionario fue menor con la dosis del 5%, debido a retraso y pérdida embrionaria de reducida intensidad. Se puede concluir que la dosis mínima perjudicial para la gameta femenina y el desarrollo ulterior del embrión preimplantativo, administrada cronicamente a hembras prepúberes, fue el etanol al 5%. Los efectos del consumo crónico de etanol al 5% podrian deberse en parte a las acciones "subcrónicas" del etanol en los días periovulatorios.

Abstract:
It was described that the chronic or acute consumption of high doses of ethanol during gestation produces the fetal alcohol syndrome (FAS). The main objetive of this study was to progress in the aknowledgement about the deleterious effects of preconceptional consumption of ethanol and the consequences on the preimplantation embryo development. Adult male and prepubertal female mice (C57 x CBA) F1), were treated with 10,5 and 2.5 % w/v of ethanol in drinking water for 30 days. On day 27 of the treatment, females were induce to superovulate. The quality of the gametes, the fertilization rates, the stages of preimplantation development reached by the embryos in vitro and in vivo (up to day 4) were studied, and the incidence of the ethanol ingestion on the sexual maturation in the female was determined. The chronic administration of 10 and 5% of ethanol produced delayed follicular maturation. In consequence, the ovulated oocytes showed increased levels of spontaneous parthenogenetic activation, and the capacity of PGE synthesis by cumulus-oocyte complex (COC) was reduced by the 10% ethanol intake and increased by the 5% ethanol. The in vitro and in vivo fertilization rate was only reduced when the females were treated with both doses of ethanol. The intact oocytes from the treated females were not penetrated by spermatozoa, and the increased oviductal haploid oocytes stayed unfertilized. The ethanol affected the maturation of the oocyte, the regulation and the control of the oocyte quality by the cumulus cells, also probably the oolema and others celular components, which resulted in fertility loss. The chronic consumption of 10 and 5% of ethanol by females in the preconceptional phase produced, in both in vitro and in vivo development, reduced daily rates of embryos, due to delayed growth, to embryonary arrest in morulae and early blastocyst stages, in days 2, 3 and 4 (in vivo) and 5 (in vitro) of the development, with both doses of ethanol. Also, it was evident high early embryo fragmentation rates, from day 2 with ethanol 10%, and lower and later in females treated with 5% of ethanol. The ingestion of 10% of ethanol produced increase of abnormal embryos. The ethanol impact in the embryo development was lower with the 5%, due to the reduced intensity of delayed growth and embryo loss. It was concluded that the lower deletereous dose of ethanol, administered chronically to prepubertal females, that affects the gamete an the ulterior development of preimplantation embryos, was the 5% of ethanol. The effects of the chronic alcohol consumption could due to, in part, the "subchronic" actions of the ethanol on the periovulatory days.

Novaro, Virginia. "Influencia de agentes vasoactivos en el proceso implantatorio embrionario : Alteraciones en la diabetes mellitus" (1998) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En el presente trabajo abordamos la implantación embrionaria en ratas controles y diabéticas desde el punto de vista del fenómeno vasoactivo que conlleva. Las prostaglandinas son necesarias para permitir la implantación de los embriones en el lumen, ya sea incrementando el flujo sanguíneo y la vasodilatación del útero durante la decidualización endometrial, como regulando Ia actividad contráctil del tejido miometrial. El óxido nítrico ha sido reconocido como agente vasodilatador y miorrelajante, y parte de su efecto es mediado a través de la regulación de la síntesis de prostaglandinas en diversos procesos fisiológicos. Se ha determinado variaciones en la síntesis uterina de prostaglandinas y de óxido nítrico en la preñez temprana en la rata, y se ha establecido una relación causal entre ambos mecanismos fisiológicos durante la implantación embrionaria. En el útero dichos agentes vasoactivos aumentan durante los días peri-implantatorios de la preñez, como resultado de la combinación de la acción de los esteroides ováricos y de agentes locales derivados del embrión o de la madre. Las isoformas Cab-dependiente y Cap-independiente de la enzima sintetizadora de óxido nítrico son las responsables del incremento en la actividad enzimática en el día de la implantación. La inhibición de la síntesis intraluminal de óxido nítrico reduce el número de embriones implantados en un 50%, probablemente alterando la adecuada irrigación sanguínea al sitio de implantación. También se determinó que la producción uterina de prostaglandina E y qu depende tanto de la producción de óxido nítrico como de señales embrionarias tempranas. Nuestros resultados indican además, que la acción vasoactiva del óxido nítrico y de las prostaglandinas puede modularse de manera tal de compensar alteraciones metabólicas en la rata diabética de tipo no-insulino-dependiente, y permitir que el proceso implantatorio ocurra eficientemente en esta patología.

Abstract:
This thesis addresses the process of embryo implantation in control and diabetic rats focusing in the vasoactive changes it involves. We have established the role of prostaglandins and nitric oxide. The first group of molecules is required to allow embryo implantation in the uterine lumen, by increasing uterine blood flow and vasodilatation during endometrial decidualization and by regulating the contractile activity of the miometrial tissue. On the other hand, nitric oxide, a recognized vasodilating and muscular relaxing agent, exerts part of its effects in several physiological processes by modulating prostaglandin synthesis. In the present work we have determined the existence of significant changes in the uterine synthesis of prostaglandins and nitric oxide during the early pregnancy in the rat and we have established a causal relationship between both mechanisms during the embryonic implantation. The observed increase in the concentration of these vasoactive agents in the uterus takes places in the peri-implantation days, as a result of the combined action of ovarian steroids and local factors derived either from the embryo or the maternal tissue. Both the Cap-dependent and independent isoforms of the nitric oxide synthetase are responsible for the increase in enzymatic activity in the implantation day. The relevant role played by nitric oxide is revealed by the fact that inhibition of uterine nitric oxide synthesis reduces the number of implanted embryos by 50%, probably because it alters the appropriate blood supply to the implantation site. In addition, it was determined that the production of prostaglandin E and an depends both on the production of nitric oxide and on early embryonic signals. Our studies also indicate that the vasoactive effect of nitric oxide and prostaglandins is modified in the non-insulin dependent diabetic rat in such a way as to compensate the metabolic alterations that this pathology involves, thus allowing an efficient embryo implantation.

Cueto, Gerardo Rubén. "Biología reproductiva y crecimiento del carpincho (Hydrochoerus hydrochaeris) en cautiverio : Una interpretación de las estrategias poblacionales" (1999) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A fin de aportar a la comprensión de las estrategias poblacionales del carpincho, se estudiaron diferentes aspectos de la biología reproductiva y del crecimiento de esta especie en cautiverio. Se describió por primera vez la existencia de una jerarquía lineal entre las hembras de los grupos reproductivos, la cual afecta tanto la posibilidad de acceder al alimento como de aparearse con el macho. Se calculó el periodo de gestación en 150 días. Antes de parir, las hembras debieron ser separadas del grupo reproductivo ya que las crias eran atacadas por el resto de las hembras. Las crías nacen muy desarrolladas con el pelaje completo y con los ojos abiertos y luego de media hora son capaces de caminar. Durante la primer semana las crías se alimentaron exclusivamente de leche materna y al finalizar este período comenzaron a incorporar alimentos sólidos a la dieta. A partir de la cuarta semana se alimentaron principalmente con alimentos sólidos y amamantaron con menor frecuencia. Las observaciones realizadas permiten proponer que, al contrario de lo que ocurre con la mayoría de los roedores, para las hembras de carpincho los costos asociados con la gestación serían superiores que los relacionados con el cuidado parental. Debido al avanzado desarrollo de las crias al nacer, el papel del cuidado parental apunta a garantizar la supervivencia de las crias evitando el ataque de predadores mediante los siguientes mecanismos: parir en lugares cubiertos, realizar la limpieza de todo rastro de sangre y heces en el sitio del parto y fijación de la hembra al sitio durante la primer semana con una disminución en la busqueda de alimento. El modelo que mejor describió el crecimiento en peso de esta especie fue el de von Bertalanffy. Se observó que los machos alcanzan un peso maximo mayor que el de las hembras y que la tasa de crecimiento de éstas disminuye a edades más tempranas. Estos resultados están asociados con el sistema de aparcamiento poligínico de esta especie. Se describió por primera vez la presencia de escorbuto en carpinchos y el efecto de la carencia de vitamina c en la dieta de los individuos sobre su sobrevida y reproducción. Se registró que cuando se les ofrece un alimento con un bajo contenido de vitamina c y en forma irregular la actividad reproductiva se detiene. Se detectó una concordancia con las predicciones derivadas de las hipótesis de Trivers y Willard (1973) sobre la manipulación de la proporción de sexos de las camadas en función de la condición materna. Se registró que las hembras en condiciones nutricionales pobres produjeron camadas de menor tamaño, las cuales presentan una mayor proporción de hembras. Las hembras en mejores condiciones presentaron camadas más numerosas y con una mayor proporción de machos, los cuales fueron significativamente más pesados que las hembras. Los resultados obtenidos a la luz del conocimiento de la especie me permiten sugerir que las estrategias reproductivas de las hembras de carpinchos son: l) Contar con un mecanismo de interrupción temprana de la preñez cuando las condiciones nutricionales son malas. 2) Contar con un sistema que permita reducir el número de machos gestados cuando las condiciones nutricionales son intermedias. En este punto adelantamos la hipótesis que la disponibilidad de vitamina c en la dieta actúa corno indicador de la calidad del ambiente.

Abstract:
Different aspects of reproductive biology and growth of capybaras in captivity were studied to understand population strategies of this species. A linear hierarchy among females of reproductive groups was registered, which affected the possibility of mating and acceding food. Gestation period was calculated as 150 days long. Females were separated from the reproductive groups before the birth because its offspring were attacked for the other females of the group. The offspring are born very well developed with open eyes and they are able to walk after half an hour to have been born. The offspring only fed maternal milk during the first week of life, and then they began to incorporate solid feed to their diet. From the forth week, pups principally ate solid feed and they nursed less frequently. The costs associated to gestation period in captivity would be higher than those related to the parental care, contrary to the observed in the majority of rodent species. According to the well development of the offspring, the role of parental care is to guarantee the survivorship of pups avoiding predation risks, as follows: l) to give birth in closed areas, 2) to clean blood tracks and feces in the birth site and 3) to settle the female in a place during the first week decreasing the food search. The growth of body mass of capybaras was best described by von Bertalanffy model. Males came up to the great maximum body mass than females and growth rates of females decreased at earlier ages than those of males. The results obtained are associated with the poligynium mating system of capybaras. The presence of scurvy in capybaras was described and the effect of the lack of vitamin c in the diet on survivorship and reproduction in this species. It was demonstrated that when the capybaras received food with low concentration of Vitamin c, reproduction activity stopped. It was detected a concordance with the derived predictions of Trivers and Willard (1973) hypotheses about the manipulation of sex proportion of litters related to the maternal condition. Females with a poor nutritional condition produced litters with less size, and those presented a great proportion of female pups. On the other hand, females with good conditions had litters more numerous and with great proportion of male pups, and those were significantly heavier than females. According to the results obtained, I can suggest two reproductive strategies for capybaras' females: l) to count with an early interruption mechanism of pregnancy when females have worse nutritional conditions or 2) to count with a system that reduces the numbers of male embryos when females are in intermediate nutritional conditions. At this point, I advance the hypothesis that Vitamin c availability in capybaras' diet acts as an indicator of environmental quality.

Ellerman, Diego A.. "Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad" (2001) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La glicoproteína epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durante la maduración, y participa en el proceso de fusión de gametas a través de sitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin de comprender los mecanismos involucrados en la participación de DE en dicho proceso, se estudió la importancia de la estructura de DE para la actividad de la proteína. El clonado del ADNc de DE permitió obtener la secuencia de los 227 aminoácidos (aa) de la proteína. El análisis de dicha secuencia indicó que DE pertenece a la familia CRISP (cystein rich secretory proteins), y la presencia de 16 cisteínas en la molécula. El ADNc fue utilizado luego para expresar la proteína recombinante en bacterias (recDE). El estudio de recDE y de la proteína nativa deglicosilada, indicó que la actividad biológica residiría en la porción peptídica de la molécula. Por otro lado, el análisis del estado de oxidación de las cisteínas indicó que la mayoría de ellas formaría puentes disulfuro, y que la ruptura de los mismos afectaría la actividad de la proteína. La expresión de distintos fragmentos recombinantes de DE y su empleo en ensayos biológicos, reveló que la actividad de la proteína residiria en la región comprendida entre los aa 62-158. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la inmunización de ratas con proteína DE produce una respuesta inmune y una inhibición significativa de la fertilidad. El presente trabajo indica que los mecanismos responsables de dicha inhibición involucrarían la entrada de anticuerpos anti-DE al tracto reproductivo, su interacción con los espermatozoides, y la disminución de la capacidad fertilizante de los mismos, abriendo la posibilidad del potencial uso de DE para el desarrollo de un método inmunológico de regulación de la fertilidad. Dado que para ello es necesario poder disponer del antígeno en grandes cantidades, la proteína recombinante fue utilizada en ensayos de inmunización, que indicaron que recDE, al igual que la proteína nativa, es capaz de producir una respuesta inmune y una reducción de la fertilidad. Con el fin de investigar la posible aplicación de este método inmunológico en el hombre, la capacidad inmunogénica de la proteína humana homóloga a DE, proteína ARP, fue estudiada en un modelo de primates no humanos, observándose la inducción de una elevada respuesta inmune en los animales inmunizados. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo contribuyen al esclarecimiento de los mecanismos involucrados en la participación de DE en el proceso de fusión de gametas, y apoyan el potencial uso de esta proteína y sus homólogos para el desarrollo de un método inmunológicode regulación de la fertilidad tanto en animales como en el hombre.

Abstract:
Rat epididymal glycoprotein “DE” associates with sperm during maturation and participates in gamete fusion through complementary sites localized on the egg surface. To get a better understanding of the molecular mechanisms underlying the participation of DE in this process, the relevance of protein DE structure for its biological activity was studied. Cloning of DE cDNA allowed obtaining the sequence of the 227 aminoacids (aa) of the protein. The analysis of the sequence, indicated that DE belongs to the CRISP (cystein rich secretory proteins) family, and the presence of 16 cysteines in the molecule. DE cDNA was then used for the bacterial expression of the recombinant protein (recDE). The study of recDE as well as of the deglycosilated native DE (nDE) indicated that the activity of the protein resides on the peptidic portion of the molecule. The evaluation of the oxidative state of cysteines indicated that most of them would be involved in disulfide bridges, and that the rupture of these bridges would affect the protein activity. The expression of different recombinant fragments of DE, and their use in biological assays indicated that the biological activity of DE would be located within the region encompassed by aa 62-158. Previous results from our laboratory indicate that immunization of rats with protein DE induces an immune response and a significant inhibition of fertility. The present study indicated that the mechanisms responsible for this inhibition would involve the entry of antibodies into the reproductive tract, their association to sperm, and the reduction of sperm fertilizing ability. These results suggested the potential use of DE for developing and immunological method of fertility regulation. Since an important requirement for this purpose, is the possibility of obtaining the antigen in large quantities, recombinant DE was used in immunization studies, which revealed that, like native DE, recDE is able to produce an immune response as well as an inhibition of fertility. In order to explore the potential application of this immunological approach to humans, the immunogenic ability of the human protein homologue of DE, protein ARP, was evaluated in a non human primate model. The induction of a high immune response was observed in all the immunized animals. Together, the results obtained in this work contribute to a better understanding of the molecular mechanisms underlying the participation of DE in sperm-egg fusion, and support the potential use of DE for the development of an immunological method of both animal and human fertility regulation.

Ogando, Diego G.. "Rol del óxido nítrico (NO) en la reabsorción embrionaria inducida por LPS" (2002) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El óxido nítrico (NO) cumple importantes funciones durante la preñez (implantación, decidualización, vasodilatación y relajación miometrial). Sin embargo, en altas concentraciones como las encontradas en los casos de sepsis, el NO tiene efectos tóxicos dado su carácter de radical libre. El objetivo de este trabajo es caracterizar la producción del NO en útero y decidua en la reabsorción embrionaria inducida por lipopolisacárido (LPS) y determinar cuáles son las isoformas de la óxido nítrico sintasa (NOS) implicadas en dicho mecanismo. Se ha observado que el LPS produce un 100% de reabsorción embrionaria a las 24 horas, con una expulsión del feto a las 48 hs. El LPS incrementó la producción de NO en decidua y útero con un máximo en su producción a las 6 horas. Este incremento se debe a la inducción de la expresión de la isoforma inducible de la óxido nítrico sintasa en decidua y útero, y de la isoforma neuronal (nNOS) solamente en decidua que fue detectada por western blot e inmunohistoquímica. El LPS aumentó la expresión de iNOS en decidua y células miometriales y la expresión de nNOS en células de la decidua. El LPS produjo, además, la fibrinólisis y la infiltración de macrófagos iNOS y CD14(receptor de LPS) positivos. Por otro lado, el LPS indujo la expresión de CD14 en las glándulas endometriales que podrían amplificar la respuesta inflamatoria. La Aminoguanidina (AG), un inhibidor de la actividad de la isoforma iNOS, revirtió la reabsorción embrionaria inducida por LPS. Este hecho podría explicarse por una inhibiciónen la producción de NO, pero también podría deberse a una inhibición de la infiltración celular y de la fibrinólisis. El tratamiento con LPS produjo un aumento en el daño oxidativo de la decidua debido al anión peroxinitrito,evidenciado por la nitración de las tirosinas proteicas, hecho que también fue revertido por AG. A su vez, se cuantificó un aumento en la síntesis de prostaglandinas en decidua y útero debido al LPS, pero la AG sólo revirtió el efecto en útero. Estos resultados demuestran que el NO cumple un papel fundamental en la reabsorción embrionaria inducida por LPS.

Abstract:
Nitric oxide (NO) fulfills important functions during pregnancy: implantation, decidualization, vasodilatation and myometrial relaxation. However, in high concentrations such as the ones that are produced in sepsis, it has toxic effects since it is a free radical. The purpose of this work is to characterize the uterine and decidual NO production in the lipopolysaccharide (LPS) induced embryonic resorption and to determine which isoforms of the nitric oxide synthases (NOS) take part in it. It has been observed that LPS produced 100% embryonic resorption at 24h, with the complete fetus expulsions at 48 h. LPS increased NO decidual and uterine production - having its maximum production at 6 h. This increase is due to induction of expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) isoform in decidua and uterus, and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) isoform only in decidua detected by western blot and immunohistochemistry. LPS increased the iNOS expression in decidual and myometrial cells and the nNOS expression in decidual cells. LPS also caused fibrinolysis and infiltration of mesometrial decidua by positive iNOS and CD14 (LPS receptor) macrophages. Also, LPS induced the CD14 expression in endometrial glands, that could amplify the inflammatory response. Aminoguanidine (AG), an inhibitor of iNOS activity, totally reversed the LPS-induced embryonic resorption. This could be explained by an inhibition of the increase in the NO production but also by an inhibition of the cellular infiltrationand fibrinolysis. LPS caused an increase in the oxidative damage of the decidua due to the peroxynitrite anion. This was evidenced by nitration of tyrosine proteins which was also reversed by AG. At the same time, an increase in the synthesis of prostaglandins was cuantified in uterus and decidua by LPS, but in this case, AG only reversed the effect in uterus. These results show that NO fulfills a fundamental role in LPS induced embryonic resorption.

Parborell, M.Fernanda A.. "Regulación del crecimiento y diferenciación del folículo ovárico por un agonista de la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH)" (2002) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de esta tesis fue evaluar el efecto de la administración de un agonista de Gn-RH (Acetato de Leuprolide, LA) sobre la apoptosis y la esteroidogénesis ovárica. Se administró dietilestilbestrol (DES) a ratas prepúberes para obtener una población de folículos antrales tempranos. Por otro lado, se utilizó un modelo de ratas inmaduras superovuladas con gonadotrofinas (PMSG: gonadotrofina de suero de yegua preñada) con el objetivo de estimular la foliculogénesis hasta el estadío de folículos preovulatorios; parte de estos animales fueron tratados in vivo con LA tanto en forma crónica como aguda. En folículos preovulatorios, LA produce un efecto directo inhibitorio sobre el desarrollo folicular, causando una disminución del número de folículos reclutados por las gonadotrofinas o bien llevando a la atresia a un mayor número de los mismos. Tanto el efecto in vivo como in vitro de LA produce un aumento de la apoptosis en los folículos preovulatorios provenientes de ratas tratadas con PMSG y este efecto es revertido parcialmente in vitro por EGF. El IGF-1 y el FGF fueron capaces de inhibir completamente el efecto estimulatorio de la apoptosis inducida por el agregado in vitro de LA. Con respecto a la familia de Bcl-2, LA disminuye la estabilidad de la isoforrna antiapoptótica (Bcl-xL), favoreciendo la apoptosis. LA aumenta los niveles de progesterona tisular y disminuye los niveles de estradiol sérico; no modifica los niveles de la enzima P450 scc pero aumenta el contenido de la StAR en folículos preovulatorios. En folículos antrales tempranos, FSH suprime parcialmente la apoptosis inducida por LA. En presencia del agonista, EGF, FGF e IGF-1 no son capaces de rescatar a los folículos de la apoptosis. Teniendo en cuenta las diferencias entre el efecto de FSH y los factores de crecimiento, se sugiere la existencia de un mecanismo complejo de transducción de señales para FSH en la prevención de la apoptosis que utilizaría un mecanismo de sobrevivencia que incluye señales diferentes a las usadas por los factores de crecimiento. En conclusión, GnRH-a sería un modulador atretogénico intraovárico que interfiere en el desarrollo folicular.

Cameo, Paula. "La Leptina : una nueva hormona placentaria? Su función en la placenta humana" (2002) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Desde que se la descubriera en 1994, la leptina, una proteína de 16 kDa (167 aminoácidos) expresada por el gen de la obesidad (OB), ha atraído mucha atención debido a su papel importante en la regulación del balance energético. Durante los últimos años se ha sugerido que la leptina podría tener funciones diferentes durante la preñez, particularmente en la fisiología feto-placentaria. Utilizando cultivos primarios de células de CTB y STB y explantos de vellosidades coriónicas, evaluamos: 1) el papel de la leptina como moduladora de la secreción de hCG, progesterona y IL-6, 2) su efecto sobre la capacidad invasiva del trofoblasto, 3) la regulación de la secreción de leptina por distintos factores presentes en la interfase materno/fetal, 4) la expresión del receptor de leptina en el trofoblasto y 5) los niveles de leptina presentes en sueros de pacientes con problemas de aborto recurrente espontáneo (RSA). Se observó la expresión del ARNmde leptina en estos cultivos por medio de técnicas de RT-PCR. La leptina recombinante humana tuvo un efecto estimulatorio sobre la secreción de hCG y IL-6 y un efecto inhibitorio sobre la secreción de progesterona por el trofoblasto humano. Además, la leptina estimuló la actividad de la MMP-9 en estos cultivos. IL-6, IL-1, estradiol, hCG y pregnenolona estimularon la producción de leptina por la placenta; colesterol, TNF-α y M-CSF no tuvieron efecto. Observamos también la expresión de dos isoformas del receptor de la leptina; una de 187KDa y otra de 28KDa. La concentración de leptina en sueros de pacientes RSA fue significativamente menor, comparada con valores controles publicados por diferentes autores. Todos estos resultados apoyan la hipótesis que la leptina cumple un papel importante en fisiología feto-placentaria humana.

Abstract:
Leptin, the 16 KDa protein product of the obese (OB) gene, was originally seen as an adipocyte-derived signaling molecule. In recent years it has been suggested to be involved in some functions during pregnancy, particularly in the placenta. In this work we investigated the role of leptin in many of the fundamental functions of human placenta. Using cultures of CTB and STB cells and chorionic explant cultures we evaluated leptin role as a modulator of hCG, progesterone and IL-6 secretion, leptin effect on trophoblast gelatinolitic activity, cytokine and hormone modulatíon of leptin secretion by the trophoblast and leptin receptor expression. Additionally we measured leptin levels in sera form patients suffering recurrent spontaneous abortion (RSA). Leptin mRNA expression in these cultures was observed by reverse transcription - polymerase chain reaction. Recombinant human leptin showed a stimulatory effect on hCG and IL-6 secretion and an inhibítory effect on progesterone secretion by human trophoblast. It also stimulated MMP-9 activity in term tropholast cultures. IL-6, IL-1, estradíol, hCG, and pregnenolone stimulated leptin secretion in human trophoblast. Cholesterol, TNF-α and M-CSF had no effect on this activity. We observed the expression of two different isoforms of leptin receptor; one of 187 KDa and one of 28KDa. Leptin concentration in sera from RSA patients was significantly lower than in control groups, according to data published by different authors. All these results suggest a role for leptin in some of the basic functions of human placenta.

Vitale, Alejandra Mariel. "Acción autocrina/paracrina de la inhibina sobre la selección del folículo ovárico" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de la presente investigación consistió en evaluar los efectos in vivo e in vitro de la inhibina A recombinante humana durante distintos estadios del desarrollo folicular. En particular se evaluó el efecto de esta glicoproteína sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo, sobre la apoptosis y la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas y sobre la esteroidogénesis ovárica en ratas prepúeberes tratadas con DES o con PMSG. Los resultados indican que la inhibina A es producida in vitro por las células de la granulosa en cultivo obtenidas de ovarios de ratas estimuladas con DES y que su producción es estingulada por FSH, TGFβ y estradiol. También se observa que concentraciones fisiológicas de inhibina A disminuyen la proliferación celular inducida por estos tres factores. Además del efecto antiproliferatívo se observa, en este mismo modelo experimental, que la administración de inhibina A in vivo produce un retraso en el desarrollo folicular y un aumento de la apoptosis. Estos hallazgos fueron confirmados por ensayos in vitro donde se observa un aumento significativo de a fragmentación del ADN en folículos antrales tempranos incubados con inhibina A. Con respecto a la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas la inhibina A produce tanto in vivo como in vitro un aumento en los niveles de Bax, mientras que los niveles de Bcl-2 permanecen constantes. Por otra parte la inhibina no tiene ningún efecto en la esteroidogénesis. En cuanto a los ensayos realizados con ovarios de ratas estimuladas con PMSG se observó que la inhibina A no tiene efecto alguno sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo. Tampoco se advirtió ningún efecto de esta glicoproteina sobre la fragmentación del ADN en cultivos de folículos preovulatorios. Por otra parte la administración in vivo de inhibina en estas ratas produce un retraso en el desarrollo folicular de folículos inmaduros, pero no tiene ningún efecto en el crecimiento de folículos preovulatorios. Asimismo, en todos los tipos foliculares estudiados se observa una disminución de la apoptosis. Como conclusión, estos resultados sugieren que la inhibina A posee una acción local en el ovario, siendo uno de los factores de acción autocrina o paracrina que regula el crecimiento folicular.

Abstract:
The purpose of this study was to evaluate the role of inhibin A in follicular development and apoptosis- related mechanisms, in preantral and early antral follicles from prepubertal DES- treated rats and in preovulatory follicles in PMSG- treated rats. Granulosa cells isolated from the ovaries of 23-25-day-old DES- treated rats were cultured in serum-free medium containing FSH, TGFβ, and estradiol in the presence and absence of different concentratíons of inhibin A. 3H- thymidine incorporation was decreased in the presence of inhibin, while no significant changes were observed in culture media on progesterone and estradiol levels. An increase in low molecular weight DNA fragmentation indicative of apoptosis, and an increase in the protein levels of Bax with no changes in Bcl-2, were evident in early antral follicles incubated 24 h with inhibin. For each animal inhibin (0.5 μg/ovary) was injected intrabursally in one ovary while the contralateral ovary served as control. Ovarian histology revealed an inhibitory effect of inhibin treatment on the follicular development induced by DES. At 24 h of inhibin injection, the number of preantral follicles was increased as compared to controls, whereas the number of early antral follicles was decreased. In addition, in vivo inhibin treatment caused an increase in the percentage of apoptotic cells in preantral, and early antral follicles with a subsequent increase in Bax levels. On the other hand, granulose cells isolated from the ovaries of PMSG- treated rats were cultured in serum- free medium containing FSH, TGFβ, and estradiol in the presence and absence of different concentratíons of inhibin A. 3H- thymidine incorporation was not changed in the presence of inhibin. There were no changes in low molecular weight DNA fragmentation in early antral follicles incubated 24 h with inhibin. For each animal inhibin (0.5 μg/ovary) was injected intrabursally in one ovary while the contralateral ovary served as control. Ovarian histology revealed no effect of inhibin treatment on follicular development of preovulatory follicles induced by PMSG. At 24 h of inhibin injection, the number of preantral follicles was increased as compared to controls, whereas the number of early antral follicles was decreased. There were no changes in the number of preovulatory follicles. In addition, in vivo inhibin treatment caused a decrease in the percentage of apoptotic cells in all kind of follicles. These results suggest that inhibin produced by the dominant follicle may act as a paracrine factor inhibiting the growth of neighboring follicles; thus participating in the mechanism of follicular selection.

Veaute, Carolina M. I.. "Modelos de inmunidad natural y adquirida para el estudio del sistema proacrosina/acrosina en el proceso de fecundación" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Giménez, Juliana. "Biología reproductiva y crecimiento del caracol Zidona dufresnei (Donovan, 1823) Caenogastrópoda, Volutidae de la Provincia de Buenos Aires, Argentina" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El desarrollo gonadal de Zidona dufresnei (Donovan, 1823) (Caenogastropoda:Volutidae) fue estudiado durante dos años consecutivos, a través del estudio histológico de las gónadas. En una población muestreada mensualmente en el área de Mar del Plata. El índice gonadosomático fue estimado para los machos y la talla oocitaria fue utilizada como un estimativo del desarrollo gonodal en las-hembras. La estación reproductiva en lo que se refiere a evacuación de gametos, para esta especie en esta localidad, se extiende desde octubre a marzo. Un sincronismo en la evacuación de gametos fue evidente para ambos sexos. La estación reproductiva esta ligada a los cambios de temperatura. La producción de gametas es continua durante todo el año. Se describió en detalle a través de la utilización de microscopía electrónica de transmisión, los diferentes estadios de la espermatogénesis y se realizo una descripción de la morfología del espermatozoide. La talla de primera maduración sexual fue estudiada, a través del análisis de tejido gonadal por cortes histológicos, junto al estudio de caracteres sexuales secundarios, como largo de pene, índice de la glándula de la cápsula. Siendo la talla mínima de madurez sexual en las hembras 12,8 cm y en machos 12,0 cm; la talla en la cual el 50% de la población adquiere la madurez sexual fue de 15,7 cm para las hembras y 15,0 cm para los machos. El crecimiento fue determinado a través de la utilización de isótopos radiactivos, con lo cual se determino la periodicidad de las marcas detectadas por rayos x. Dando un modelo de crecimiento de Gompertz que ajusta mejor a los datos. Siendo el crecimiento Lt = 208,84 mm * e^(-e^(-0.211*(t-5.496)), la producción máxima individual fue de 30,264 g de peso fresco sin concha, a los 12 cm de longitud. Basados en la distribución de frecuencia de tallas comerciales, se calculo la tasa anual de mortalidad y fue estimada en 0,61 a^-1. La dinámica de la pesca fue analizada en tres zonas de explotación. Se plantea el riesgo de sobreexplotación dado por la captura de tallas menores a la talla de madurez sexual y se plantea una talla de mínima de captura de 16 cm.

Abstract:
The gonadal development of Zidona dufresnei (Donovan,1823) (Caenogastropoda:Volutidae) was studied over a period of two consecutive years through microscopical analysis of gonadal tissue. Individuals were sampled month at the Mar del Plata area, Argentina. Gonadosomatic index was estimated for males and oocyte size was used to estimate the stage of gonadal development in females. The reproductive season of the species in the sampled locality extended from October to March (austral Spring-Summer). During summer, a stage of advanced gonadal development and spawning predominated in the adult population. In autumn, gonads were generally under atresia; during wintertime (June-August), they underwent a period of recovery that lasted until the spring months, when gametes were released again. Synchronism between both sexes was evident. Marked periods of spawning were followed by resorption periods and then a growing phase; it was very clear that reproductive seasonality was linked to changes in bottom water temperature. These results suggest that Z. dufresnei gonads have a yearly cycle of gamete production, with two major activity peaks in September-October and January-February. Size at sexual maturity was studied in Zidona dufresnei through analysis of gonadal tissue samples and secondary sexual characters. Individuals were sampled during two reproductive seasons (austral spring-summer)in the Mar del Plata area, Argentina. Gonadosomatic index was estimated for males and oocyte size frequency was used to estimate the stage of gonadal development in females. Gonad maturity occurred prior to the development of secondary sexual characters. Size at first gonadal maturity in females was 12.8 cm length and in males 12.0 cm length, but size at which 50%of the population was mature was 15.7 cm in females and 15.0 cm in males. The results of this study could help to establish a minimal catching size. The record of stable isotopes ratio 18 O deposited in the shell carbonate of Z. dufresnei that reflects seasonal oscillations in water temperature was used to infer size-at-age in four snails. A Gompertz growth function Lt = 208,84 mm * e^(-e^(-0.211*(t-5.496)) fitted these data best. Maximum individual production amounted to 30,264 g shell-free wet mass (SFWM) at 120 mm shell length. Based on a size-frequency distribution derived from commercial catches, annual mortality rate of Z. dufresnei was estimated to be 0,61 y^-1. Zidona dufresnei fisheries were analized in three diferents areas. Risk about overfishing is discussed.

Pastorino, Ximena Inés. "Caracterización morfológica y reproductiva de la población de Artemia persimilis (crustacea branchiopoda:Anostraca) de la Laguna Colorada Chica" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los crustáceos anostracos del género Artemía se encuentran globalmente distribuidos en todos los continentes excepto la Antártica. A pesar de la amplia distribución del género, los hábitats que puede ocupar se encuentran restringidos a salinas y lagos o lagunas salados, donde la salinidad puede variar ampliamente entre 30 y 300 g l^-1. Estos crustáceos anostracos, son utilizados habitualmente en Acuicultura, como presa viva en la cría de peces y crustáceos marinos y/o de agua dulce de interés comercial. El género Artemia muestra una notable flexibilidad reproductiva que le permite adecuarse a las más diversas presiones de selección del medio; variando el tipo de descendencia que es liberada al medio en forma de quistes o larvas vivas, (reproducción ovípara u ovovivipara), y distribuyendo temporalmente la descendencia durante el período reproductivo. La reproducción es generalmente bisexual, aunque en Artemia puede presentarse también partenogénesis; en este último caso ambas modalidades son excluyentes. Esta variedad de estrategias reproductivas, sumada al potencial económico de este recurso natural, resalta la necesidad de profundizar el conocimiento de la biología de la reproducción de cada población. Esta tesis analiza en detalle la biología reproductiva de Artemía, realizando la caracterización morfológica, morfométrica y reproductiva de una población Argentina localizada en la provincia de La Pampa. Los resultados obtenidos nos permiten confirmar la ubicación taxonómica de la población de Anemia de la laguna Colorada Chica dentro de la especie A. persimilis mediante el uso de caracteres morfológicos simples y morfometría. Se caracterizaron los 5 estadios que forman parte del ciclo reproductivo de las hembras y se determinaron las fases que forman parte del ciclo de puesta, como resultado de la superposición de ciclos reproductivos sucesivos. El ciclo reproductivo tiene una duración aproximada de 6 días y presenta dos períodos principales, uno que transcurre en los ovarios (aproximadamente 3 días) y otro que transcurre en los oviductos y el útero. Mediante el análisis del comportamiento reproductivo de las hembras mantenidas en estado virginal (aisladas de machos) se descartó la presencia de partenogénesis como una modalidad reproductiva de esta población. El estudio de las variables reproductivas reveló la presencia de un mayor porcentaje de ovíparismo que ovoviviparismo, encontrándose hembras que fueron capaces de presentar estas dos modalidades reproductivas en camadas sucesivas. Las hembras criadas en diferentes condiciones de salinidad presentaron un mayor rendimiento reproductivo en la salinidad de 90 g l^-1, medido en función del número total de descendientes producidos por una hembra y al número total de puestas. Finalmente, un estudio a nivel microscópico, realizado en hembras y machos de las especies A. persimilis y A. franciscana, permite describir la morfología de Ia zona involucrada en el abrazo copulatorio.

Sinner, Débora Inés. "Efecto de prostaglandinas, óxido nítrico y endotelina-1 sobre el metabolismo y desarrollo del embrión en oncogénesis durante la gesta diabética" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El entorno diabético durante la preñez provoca alteraciones en el desarrollo del embrión, sin embargo los mecanismos subyacentes no han sido totalmente clarificados. En este trabajo hemos analizado los efectos de algunos agentes vasoactivos, sobre el desarrollo y metabolismo del embrión de rata durante la organogénesis en dos modelos diferentes de diabetes inducida por estreptozotocina. Ambos modelos presentan anomalías morfológicas y retardo en el crecimiento embrionario, siendo más severo el cuadro en el modelo de diabetes tipo l. En el embrión de rata diabética tipo Il, se hallaron niveles incrementados de Endotelina 1 (ET-1) y de Oxido Nítrico (NO), compuestos que se regulan negativamente entre sí. En forma diferente el embrión de rata diabética tipo 1, presenta niveles disminuidos de ET-1 e incrementados de NO, y no existe modulación entre ambos compuestos. A su vez, estos embriones presentan anomalías en el contenido y la producción de prostaglandina E2 (PGE2) debido a alteraciones en el transporte de dicho prostanoide. La síntesis de lípidos embrionarios es un mecanismo activo, proceso que se encuentra alterado en el embrión de rata diabética, siendo dicha anomalía más severa en el modelo tipo 1, la cual es revertida por acción de PGE; y acentuada por 15 deoxi delta 12,14 prostaglandina J2 (agonista del receptor nuclear PPARγ), ambos moduladores del metabolismo lipídico. Los resultados permiten afirmar que, en respuesta al grado de severidad del entorno materno diabético, se afecta la síntesis, producción y regulación de agentes vasoactivos que alteran en forma directa el desarrollo del embrión.

Abstract:
During pregnancy, diabetic milieu induces anomalies on embryonic development, although underlying mechanisms still remain unclear. In this work we have analyzed the effects of vasoactives agents on embryonic development and metabolism during organogenesis in two different models of diabetes induced by streptozotocin. Both models show morphological anomalies and delayed embryonic growth, being this condition worse in diabetes type 1. Increased levels of Endothelin-1 (ET1) and Nitric Oxide (NO) were found in embryos from diabetic type II rats, where there is a negative modulation between both agents. Differently, embryos from diabetic type I rats show diminished levels of ET-1 and increased levels of NO and no modulation between both compounds. In addition, these embryos show anomalies in embryonic levels and production of Prostaglandin E2 (PGE2) because of the transport alterations of this prostanoid. Embryonic lipid synthesis is an active mechanism, that is impaired in diabetic embryo, being more severe in type 1 model. This alteration is reverted by PGE2 and accentuated by 15 deoxy delta 12,14 prostaglandin J2. (an agonist of nuclear receptor PPARγ), both modulators of lipid metabolism. This results let us to state that, according to severity of maternal diabetic milieu , synthesis, production and regulation of vasoactive agents are affected, altering directly the normal embryonic development.

Díaz, Emilce Silvina. "Influencia de las proteínas de la matriz extracelular sobre la morfología y funcionalidad de las células de Leydig de rata adulta" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Está ampliamente aceptado que las proteínas de la matriz extracelular (MEC) intervienen en la regulación de la diferenciación, morfogénesis, proliferación y migración celular. La mayor parte de las interacciones célula-MEC están mediadas por las integrinas, las cuales regulan a su vez, la reorganización del citoesqueleto, el transporte intracelular de iones, el metabolismo de los lípidos, la activación de quinasas y la expresión génica. Asimismo, en la última década se ha demostrado que las integrinas ejercen un papel importante en los procesos reproductivos, incluyendo la fertilización, implantación y embriogénesís. En el testículo, la regulación de distintos procesos como el desarrollo, la diferenciación y la esteroidogénesis de las células de Leydig, depende de la acción concertada de las hormonas gonadotróficas y de una gran variedad de factores locales producidos de manera autocrina o paracrina. A pesar de lo mencionado en el párrafo anterior, son pocos los estudios realizados que intentan dilucidar el papel que ejercen las proteínas de la MEC sobre la funcionalidad de las células de Leydig. Estas células están rodeadas por proteínas de la MEC organizadas como una membrana basal continua o discontinua. El objetivo de esta tesis fue estudiar la influencia de las proteínas de la MEC sobre la morfología, la adhesión celular, la expresión de integrinas y la esteroidogénesis de las células de Leydig . Como modelo experimental, se utilizó el cultivo de células de Leydig de rata adulta, utilizando como sustrato, la laminina-l, el colágeno tipo IV y la fibronectina. Nosotros observamos que las células de Leydig cultivadas sobre laminina-l, colágeno tipo IV y fibronectina, presentan un mayor número de prolongaciones cítoplasmáticas que las cultivadas sobre vidrio. Asimismo, demostramos que la adhesión de las células al sustrato es un fenómeno que ocurre rápidamente y que el grado de adhesión a las mismas varía según el sustrato al cual se adhieren. Además, observamos que si bien las integrinas se expresan de manera constitutiva en las células de Leydig, su expresión aumenta en respuesta a la adhesión de las células a las proteínas de la MEC. Con respecto al efecto de las proteínas de la MEC sobre la capacidad esteroidogénica de las células de Leydig, demostramos que el colágeno tipo IV y la fibronectina inhiben la producción de testosterona de las células de Leydig de rata adulta, tanto en condiciones basales como estimuladas con hCG y que este fenómeno no se debe a un efecto citotóxíco. En cambio, la laminina-l utilizada como sustrato, no ejerció un efecto modulador sobre la producción de testosterona. En relación al mecanismo de la esteroidogénesis, demostramos que el efecto inhibitorio del colágeno tipo IV y la fibronectina ocurre en un paso posterior a la producción de AMPc y anterior a la entrada del colesterol a la membrana mitocondrial interna. Por otra parte, demostramos que el colágeno tipo IV es capaz de modular la expresión de la proteína StAR, involucrada en el transporte del colesterol a la membrana mitocondrial interna. Teniendo en cuenta estos resultados, se decidió analizar alguna de las vías de señalización intracelular activadas por el colágeno IV, capaces de regular negativamente la esteroidogénesis de las células de Leydig. Demostramos que la modulación negativa del colágeno tipo IV sobre la esteroidogénesis de las células de Leydig de rata está mediada por la activación de tirosina quinasas. En particular, detectamos que la interacción del colágeno tipo IV con las integrinas de la subfamilia β1, activa la cascada de Ras/MEK/ERK, siendo estas las responsables de la modulación negativa del colágeno tipo IV sobre la esteroidogénesis. Asimismo demostramos que las proteínas ERK 1-2 están involucradas en las adhesiones focales inducidas por la interacción de las integrinas de las células de Leydig con las proteínas de la MEC. Las integrinas tienen la capacidad de activar la vía de señalización de las MAPK a través de distintos mecanismos. Uno de ellos, ocurre a través de la activación de las proteínas Ras, pudiendo ser dependiente o no de la proteína FAK. Nosotros demostramos que en las células de Leydig de rata, la activación de la cascada de las MEK, inducida por el colágeno tipo IV, se desencadena fundamentalmente, a través de un mecanismo FAK independiente. La activación de las proteínas ERK l-2 independiente de FAK, podría estar mediada por una proteína denominada caveolina-1. Nosotros identificamos la proteína caveolina-1 en las células de Leydig y detectamos que su fosforilación es modulada por la interacción del colágeno tipo IV con las integrinas de la subfamilia β1. Por otro lado, observamos que la expresión de la proteína StAR (“steroidogenic acute regulatory”) no solo es modulada por la vía de señalización del receptor de LH/hCG, sino que en su regulación participan las MAPK, en particular las MEK 1-2. Asimismo, demostramos que si bien el colágeno tipo IV, a través de las integrinas, es el principal responsable de la activación de las proteínas ERK 1-2, PKA también interviene en la fosforilación de las mismas, siendo capaz de modular la cascada de señalización de las MAPK en las células de Leydig de rata estimuladas con hCG. En conclusión, los resultados obtenidos en este trabajo, nos demuestran que las proteínas de la MEC, son capaces de modular la adhesión, la diferenciación celular y la expresión de integrinas. El colágeno tipo IV, a través de la interacción con las integrinas de la subfamilia β1 y mediante un mecanismo FAK independiente, activa a las proteínas ERK 1-2, las cuales regulan negativamente la expresión de la proteína StAR, inhibiendo la producción de testosterona. Además, observamos que el estímulo de LH/hCG al aumentar la producción de AMPc, activa a la PKA, la cual interacciona con la cascada de señalización de las MAPK, ejerciendo una regulación dual sobre la esteroidogénesis en las células de Leydig de rata adulta Los resultados presentados en esta tesis contribuyen a ampliar los conocimientos sobre la influencia que las proteínas de la matriz extracelular ejercen sobre la morfología y diferenciación de las células de Leydig. Demuestran además, que el colágeno tipo IV, es capaz de modular, in vitro, la esteroidogénesis de las células de Leydig de la rata adulta.

Abstract:
It is well known that extracellular matrix (ECM) proteins are involved in the regulation of the differentiation, morphogenesis, proliferation and migration of cells. Most cell-ECM interactions are mediated by integrins, which in turn regulate the reorganization of the cytoskeleton, intracellular transport of ions, lipid metabolism, activation of kinases and genic expression. In the last decade, integrins have also been shown to have an important role in reproductive processes including fertilization, implantation and embryogenesis. In the testis, the regulation of different processes as the development, differentiation and steroidogenesis of Leydig cells depends on the concerted action of gonadotrophic hormones and a large variety of local factors produced in an autocrine or paracrine way. In spite of the information in the paragraph above, few studies have attempted to elucidate the role of ECM proteins in the functioning of Leydig cells. These cells are surrounded by ECM proteins organized as a continuous or discontinuous basement membrane. The objective of this thesis was to study the influence of ECM proteins on the morphology, cell adhesion, integrin expression and steroidogenesis of Leydig cells. The experimental model used was the culture of adult rat Leydig cells, using laminin-1 , type IV collagen and fibronectin as substrates. We observed that the Leydig cells cultured on laminin-1, type IV collagen and fibronectin present a larger number of cytoplasmic processes than those cultured on glass. We also demonstrated that the cells adhesion to the substrate occurs rapidly and that their degree of adhesion varies depending on the substrate to which they adhere. We also observed that, although integrins are constitutively expressed in Leydig cells, their expression increases in response to the adhesion of the cells to ECM proteins. In relation to the effect of ECM proteins on steroidogenesis, we demonstrated that type IV collagen and fibronectin inhibit the production of testosterone of the Leydig cells of adult rat, both in basal conditions and when stimulated with hCG, and that this phenomenon does not result from a cytotoxic effect. On the other hand, laminin-1 used as substrate had no modulatory effect on testosterone production. With respect to the mechanism of steroidogenesis, we demonstrated that the inhibitory effect of type IV collagen and fibronectin occurs after AMPc production step and before the entry of cholesterol into the internal mitochondrial membrane. We also demonstrated that type IV collagen is able to modulate the expression of the StAR (steroidogenic acute regulatory) protein, involved in the transport of cholesterol to the internal mitochondrial membrane. In view of these results, we decided to analyze some of the intracellular signal pathways, activated by collagen IV and able to negatively regulate the steroidogenesis of Leydig cells. We demonstrated that the negative modulation of type IV collagen on the steroidogenesis of rat Leydig cells is mediated by the activation of tirosine kinases. In particular, we found that the interaction of type IV collagen with β1 subfamily integrins activates the Ras/MEK/ERK cascade, these being responsible for the negative modulation of type IV collagen in steroidogenesis. We also demonstrated that ERK 1-2 proteins are involved in the focal adhesions induced by interaction between Leydig cell integrins and ECM proteins. Integrins have the capacity to activate the MAPK signal pathway through different mechanisms. One of these occurs through the activation of Ras proteins, and may or may not depend on the FAK protein. We demonstrated that in rat Leydig cells, the activation of the MEK cascade induced by type IV collagen is triggered basically through an independent FAK mechanism. The activation of the ERK 1-2 proteins independent of FAK could be mediated by a protein: caveolin-l. We identified the caveolin-l protein in the Leydig cells and found that its phosphorilation is modulated by the interaction of type IV collagen with β1 subfamily integrins. We also observed that the expression of the StAR protein is not only modulated by the signal pathway of the LH/hCG receptor, but that the MAPK participate in its regulation, particularly MEK 1-2. We also demonstrated that although type IV collagen, through the integrins, is the main factor in the activation of ERK 1-2 proteins, PKA also intervenes in their fosforilation and is able to modulate the MAPK signal cascade in rat Leydig cells stimulated with hCG. In conclusion, the results of this work demonstrate that ECM proteins are able to modulate adhesion, cell differentiation and integrin expression. Type IV collagen, through interaction with β1 subfamily integrins and by an independent FAK mechanism, activates the ERK 1-2 proteins that negatively regulate expression of the StAR protein, inhibiting testerosterone production. We also observed that LH/hCG stimulation, by increasing AMPc production, activates PKA; interacting with the MPAK signal cascade, exerting dual regulation on the steroidogenesis of adult rat Leydig cells. The results presented in this thesis contribute knowledge of the influence of extracellular matrix proteins on the morphology and differentiation of Leydig cells. They also show that type IV collagen is capable of modulating, in vitro, the steroidogenesis of adult rat Leydig cells.

Ribeiro, María Laura. "Participación del factor de crecimiento epidermal en el inicio del parto en la rata" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El parto es un proceso complejo, resultado de la delicada interconexión espacial y temporal entre los sistemas endocrinos materno y fetal. Los mecanismos precisos a través de los cuales ejercen su efecto las moléculas involucradas en el disparo del parto aún no han sido dilucidados. En el presente trabajo se investigó la participación de una de estas moléculas, el Factor de Crecimiento Epidermal (EGF) sobre el inicio del parto. En primer lugar se estudió el efecto del tratamiento intra-uterino (i/u) con EGF sobre el inicio del parto. Se realizó una curva dosis — tiempo — respuesta y se observó que la administración i/u de 500 ng de EGF en el día 21 de gestación retrasó 19.8 ± 0.7 h el inicio del parto con respecto a las hembras sham (hembras tratadas i/u con solución fisiológica). Por lo tanto, las hembras tratadas con EGF parieron el día 23 de gestación en lugar del día 22, como ocurrió en el caso de las hembras sham. Seguidamente se investigó el mecanismo por el cual el EGF exógeno modulaba el inicio del parto. Los resultados mostraron que 500 ng de EGF i/u administrados en el día 21 de gestación fueron capaces de: disminuir la síntesis de PGE2 y PGF2α en útero y en líquido amniótico; disminuir la expresión uterina de ambas isoformas de COX; aumentar la concentración de progesterona sérica y disminuir la fuerza de las contracciones miometriales. Los valores obtenidos para estas variables analizadas, fueron similares a los obtenidos en el día 21 de gestación para las hembras controles (día previo al inicio del parto), y recién en el día 23 de gestación (día del parto en las tratadas) alcanzaron el nivel obtenido durante el día 22 por las hembras sham. En la rata, el cuerpo lúteo es responsable de mantener la síntesis de progesterona indispensable para el éxito de la gestación, durante todo este proceso. Se ha postulado que a término, el aumento uterino de la expresión de COX-I y de la síntesis de PGF2α, desencadenaría el proceso luteolítico con la consecuente caída de la progesterona y el desencadenamiento del trabajo de parto. Dado que los resultados anteriores sugerían que el EGF podía estar ejerciendo su efecto a través de un mecanismo protector sobre el cuerpo lúteo, prolongando así la preñez, se procedió a analizar la morfología de los cuerpos lúteos de las hembras tratadas con EGF. Se observó que el tratamiento con 500 ng de EGF i/u en el día 21 de gestación, fue capaz de “re-luteinizar" el cuerpo lúteo, es decir que tomaron un aspecto similar al que poseen aquellos cuerpos lúteos con una alta capacidad de síntesis y secreción de progesterona. Los resultados hasta aquí descriptos, indican que el EGF exógeno estaría participando de los mecanismos moleculares involucrados en el inicio del parto, probablemente a través de un efecto inhibitorio sobre la luteólisis. Por último analizamos si el EGF endógeno participa en el inicio del parto. Se estudió la expresión uterina de los receptores de EGF, observándose una correlación temporal con el transcurso de la gestación. Además, analizamos la concentración de EGF en liquido amniótico y encontramos que este factor se encuentra aumentado en la mañana del día 21, sufriendo una abrupta caída doce horas después, correlacionándose con el aumento en la síntesis de la PGF2α, esencial para la luteólisis previa al inicio del parto.

Abstract:
Parturition is a complex process that results from the interaction between the maternal and fetal endocrine systems. Despite the remarkable increase in the knowledge of the mechanisms underlying parturition, the way in which the molecules involved in this process exerts their action remains unknown. In the present work we investigated the participation of one of these molecules, the epidermal growth factor (EGF) in the onset of labor. First of all we studied the effect of the intra-uterine (i/u) administration of EGF in the onset of labor. A dose — time — response curve was made and we observed that the i/u administration of 500 ng of EGF on day 21 of gestation was capable of delaying 19.8 ± 0.7 h the onset of labor compared to the sham animals (female rats that were treated i/u with saline solution). Thus, rats treated with EGF delivered during day 23 of gestation instead of day 22, as happened with the sham animals. Then we investigated the mechanism by which EGF was modulating gestation. The results showed that 500 ng of EGF administered i/u on day 21 of gestation was capable of: diminishing PGE2 y PGF2α in the uterus and amniotic fluid; diminishing the expression of both COX isoforms; augmenting serum progesterone level and reducing the amplitude of uterine contractions. The values obtained for the variables examined, were similar to those obtained for control rats during day 21 of gestation (the day before delivery), and only on day 23 (day of delivery for EGF treated rats) they reached the values observed on day 22 for the sham animals. In the rat, the corpus luteum is responsible for the maintenance of serum progesterone levels indispensable for the exit of pregnancy, during whole gestation. It has been postulated that at term, the rise in uterine COX-I expression and PGF2α synthesis, promotes the luteolitic process and in consequence the withdrawal of serum progesterone and the onset of delivery. The results presented above, suggested that EGF might have been exerting its effect on the onset of labor through a protective effect over the corpus luteum. Thus, we analyzed the morphology of the corpus luteum from EGFtreated rats. We observed that the i/u administration of 500 ng of EGF on day 21 of gestation was capable of “re-luteinizing” the corpus luteum, as its appearance was similar to that observed for the copus luteum with a high capacity of synthesizing and secreting progesterone. These results demonstrates that exogenous EGF might participate in the mechanisms underlying parturition, probably through an inhibitory effect over luteolysis. At last, we investigated the participation of endogenous EGF in the initiation of labor. When we analysed the expression of uterine EGF receptors, we found a temporal correlation with pregnancy progression. The concentration of EGF in the amniotic fluid was maximun in day 21 of gestation and abruptly decreased 12 h later, correlating with the PGF2α augmentation, essential for the mechanism of luteolysis previous to the initiation of labor.

Ramhorst, Rosanna Elizabeth. "Mecanismos inmunológicos involucrados en la prevención del rechazo semi-alogénico fetal" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Estévez, Alejandra. "Participación de la interleuquina-1ß en el mecanismo de regresión luteal en la rata" (2004) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En los mamíferos, la regresión luteal o luteólisis es un evento determinante para el proceso reproductivo ya que garantiza la finalización de un ciclo no concepcional, permitiendo el inicio de otro ciclo potencialmente fértil. Estudios recientes demostraron la acumulación de leucocitos durante la luteólisis, asociada a la producción de citoquinas pro-inflamatorias y radicales libres. Es por esto que el objetivo del presente trabajo de tesis fue estudiar la participación de la Interleuquina-1 beta (IL-1β) en la luteólisis funcional. Además, dado que inhibidores de la NOS prolongan la vida del CL, se analizó si el óxido nítrico (NO) estaba involucrado en el mecanismo de acción de la IL-lβ. Para ello, se utilizó el modelo de la rata pseudopreñada, en el cual la administración de PMSG induce la formación de CLs con una vida media de aproximadamente lO días. Al comparar el CL en regresión (día 9 de psp) respecto del CL funcional (día 5 de psp) se observó que durante la luteólisis espontánea aumentó la producción endógena de IL-lβ y de PGF2α, mientras que disminuyeron la biosíntesis de P, los niveles del mRNA y de la proteína StAR y el contenido de glutation reducido (molécula antioxidante). La IL-Iβ fue capaz de reducir la biosíntesis de P y de aumentar la producción de PGF2α, incrementando los niveles proteicos de la COX-II pero no los de COX-I, enzimas responsables de la síntesis de PGs. Además, la IL-lβ moduló el estado oxidativo del CL funcional ya que aumentó el índice de lipoperoxidación (TBARs) y redujo el contenido de glutation reducido. Por lo tanto, la incubación de los explantes ováricos (día 5 de psp) en presencia de la IL-lβ reprodujo, en los CLs funcionales, las características observadas en los CLs en regresión sugiriendo que la IL-lβ promueve la luteólisis funcional. Mientras que los niveles del mRNA de la iNOS aumentaron en el CL en regresión, el contenido del mRNA de la eNOS disminuyó en un 50% en el día 9 de psp. A su vez, la producción de NO fue mayor en el CL en regresión, evidenciando la presencia de un sistema generador de NO en los explantes ováricos en las distintas etapas del desarrollo luteal. La IL-lβ estimuló la síntesis de NO y la incubación con el sustrato de la NOS, la L-Arginina, disminuyó la síntesis de P y aumentó la de PGF2α. Por otro lado, la presencia del L-NAME revirtió los efectos inducidos por la IL-lβ, indicando que el NO estaría involucrado en el mecanismo de acción de la citoquina. La activación de la iNOS sería un evento necesario en la acción biológica de la IL-lβ, ya que la citoquina aumentó la expresión del mRNA y de la proteína iNOS, mientras que el 1400W, inhibidor selectivo la iNOS, revirtió completamente su acción sobre la P. La acumulación de GMPc se incrementó por el tratamiento con IL-lβ y, mientras que el 8-Bromo-GMPc, un análogo del GMPc, disminuyó la biosíntesis de P, la presencia del inhibidor de la guanilato ciclasa soluble, el ODQ, anuló la reducción en la esteroidogénesis inducida por la IL-lβ .Estos resultados sugieren que el GMPc participa en el mecanismo de acción de la IL-lβ. Más aún, dado que el ODQ anuló el efecto antiesteroidogénico inducido por la L-Arginina, el GMPc sería un intermediario necesario en el efecto inhibitorio del NO sobre la biosíntesis de P. Los resultados del presente trabajo de tesis sugieren que la IL-Iβ participa en la luteólisis funcional a través de un mecanismo que involucra al NO, la isoforma iNOS y el GMPc.

Abstract:
In mammals, luteal regression or luteolysis is a determinant event for the reproductive process as it guarantees the end of a non-conceptional cycle, enabling the onset of a new potentially fertile cycle. Recent studies demonstrated the accumulation of leukocytes in the regressing CL, associated to pro-inflammatory cytokine production and free radical generation. Thus, the aim of the present work was to study the participation of Interleukin-lbeta (IL-1β) in functional luteolysis. Also, as nitric oxide synthase inhibitors prolong CL lifespan, we evaluated if nitric oxide (NO) was involved in IL-lβ signaling pathway. We used the rat pseudopregnant model, in which the administration of PMSG induces the formation of CLs of approximately lO days of life. Comparative analysis between the regressive (day 9 psp) and functional (day 5 psp) CLs revealed that during spontaneous luteolysis the endogenous IL-1β and PGF2α production increased, whereas progesterone biosynthesis, StAR mRNA and protein expression as well as reduced glutathione diminished. IL-1β was able to reduce P biosynthesis yet augment PGF2α production, enhancing COX-II protein expression but not COX-I expression, rate-limiting enzymes of PGs synthesis. In addition, IL-1β affected the overall mid-luteal redox state, as reactive oxygen species generation (TBARs) was increased in the presence of IL-lβ while intracellular glutathione content was reduced. Therefore, the incubation of ovarian explants with IL-lβ mimicked, in the functional CLS, the features seen in the regressive CLs suggesting that IL-1β promotes functional luteolysis. While iNOS mRNA levels augmented in the regressive CL, eNOS mRNA levels diminished to a 50% on day 9 psp. This was accompanied by a higher production of NO in the regressing CL, unveiling the presence of a NO-generator system in ovarian explants at different stages of CL development. IL-lβ was able to stimulate NO synthesis and the incubation with L-Arginine exerted both a reduction in P production and an increase in PGF2α synthesis. On the other hand, the presence of L-NAME reverted IL-lβ-induced anti-steroidogenic effect, suggesting that NO is involved in lL-lβ signaling pathway. INOS activation might be a necessary event in lL-lβ biological actions, as IL-1β increased iNOS mRNA and protein expression and furthermore, the selective iNOS inhibitor 1400W completely reverted the anti-steroidogenic effect elicited by lL-lβ. IL-1β promoted GMPc accumulation and, whereas the permeable GMPc analogue, 8-Bromo- GMPc mimicked IL-lβ action, reducing P levels, the soluble guanylyl cyclase inhibitor ODQ blocked the IL-lβ-induced anti-steroidogenic effect. These results stroneg suggest that GMPc is involved in IL-Iβ transduction pathway. Moreover, as ODQ prevented L-Arginine-elicited anti-steroidogenic effect, GMPc could be regarded as a necessary intermediary molecule in the NO-induced inhibitory action on P biosynthesis. The results from the present study suggest that IL-lβ participates in functional luteal regression through a mechanism involving NO, the inducible NOS isoform and GMPc.

Sander, Valeria Analía. "Rol de la hiperandrogenización en la presentación antigénica y su consecuencia en la funcionalidad lútea y activación de linfocitos T. Acción de la metformina como tratamiento. Mecanismos moleculares involucrados" (2010) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El Síndrome del Ovario Poliquístico (SOP) es la endocrinopatía más frecuente en las mujeres en edad reproductiva y constituye la causa más común de esterilidad femenina. Su característica principal es el hiperandrogenismo, una condición que ha sido asociada a la insuficiencia lútea y a un incrementado riesgo de pérdida de la preñez temprana. A pesar de la relevancia del cuerpo lúteo (CL) en la reproducción, prácticamente no existen investigaciones abocadas al estudio de esta glándula en SOP. Por ello, en este trabajo evaluamos los mecanismos por los cuales el exceso de andrógenos modula la funcionalidad e involución del CL, en un modelo murino de androgenización con dehidroepiandrosterona (DHEA). También determinamos la capacidad de metformina de revertir dichas alteraciones. Durante la etapa funcional del CL, el hiperandrogenismo indujo la disminución de la progesterona sérica mediante la modulación de las enzimas esteroidogénicas. Por el contrario, la administración de DHEA durante la regresión funcional provocó el “rescate” del CL, incrementando los niveles de progesterona mediante la regulación de su biosíntesis y degradación, su acción anti-oxidante y la modulación de las prostaglandinas. El hiperandrogenismo durante la regresión estructural incrementó la apoptosis y reguló la expresión de moléculas involucradas en la presentación antigénica en las células del CL. La metformina previno muchos de los efectos del hiperandrogenismo en la luteólisis, pero no evitó la disfuncionalidad lútea en su etapa funcional. Concluimos que el hiperandrogenismo posee un efecto dual sobre el CL, dependiendo del estado de desarrollo lúteo en el cuál actúe, generando estados patológicos y disfuncionales, la mayoría de los cuales pueden ser evitados por la metformina.

Abstract:
Polycystic ovary syndrome (PCOS), the most frequent endocrine disease that affects women of childbearing age, constitutes the major cause of female infertility. The main characteristic of PCOS is hyperandrogenism, a condition that has been associated to luteal insuficience and high rates of early pregnancy loss. In spite of the relevance of corpus luteum (CL) in reproduction, research about the influence of PCOS on luteal function is scarce. Therefore, the aim of the present study was to assess the mechanisms by which hyperandrogenization affects the lifespan of CL in a dehydroepiandrosterone (DHEA)-androgenized murine model. We also investigate the action of metformin in preventing ovarian dysfunctions produced by DHEA. During the functional stage of CL, hyperandrogenism induced a decline in serum progesterone levels, mainly due to the modulation of steroidogenic enzymes. On the contrary, treatment with DHEA during functional regression “rescued” CL from luteolysis, increased progesterone levels by regulating its biosyntheses and degradation, modulating prostaglandins and acting as an anti-oxidant agent. Hyperandrogenization during structural regression increased apoptosis and regulated molecules envolved in antigen presentation. Metformin prevented most of the effects of hyperandrogenization at both stages of luteal regression, but did not prevent luteal dysfunction at functional stage. Therefore, we conclude that hyperandrogenism has a dual effect on CL, depending on the stage of its development, leading to pathological and dysfunctional conditions, most of which metformin is able to restore.

Di Giacomo, Adrián Santiago. "Ecología y conservación del Yetapá de Collar (Alectrurus risora, Tyrannidae)" (2010-07-19) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En los últimos 100 años el Yetapá de collar (Alectrurus risora, Tyrannidae) ha reducido su distribución original en un 90% debido a la desaparición de los pastizales naturales de Argentina. En la actualidad persisten algunas poblaciones en las provincias de Formosa, Chaco y Corrientes, está considerada globalmente amenazada de extinción (categoría Vulnerable), y se esperan más disminuciones poblacionales debido a la intensificación agrícola. El conocimiento de la reproducción y uso de hábitat de las especies amenazadas es necesario para estimar el riesgo de extinción y efectuar acciones de conservación. Este estudio describe la selección de sitio de nido, la biología reproductiva, los factores que afectan la supervivencia de nidos y la respuesta al fuego de esta especie en la provincia de Formosa. La especie tiene un sistema de apareamiento poligínico, con machos manteniendo territorios contiguos con hasta tres hembras, y el cuidado parental es realizado exclusivamente por la hembra. La supervivencia de nidos es de 0.23 y disminuye con la edad del nido. Los machos y hembras crían 2.6 y 1.5 pichones respectivamente por año. Los patrones de selección de sitio de nido y de respuesta al fuego proveen evidencias del efecto negativo de la ganadería tradicional en los pastizales naturales donde persisten las últimas poblaciones.

Abstract:
The strange-tailed tyrant, Alectrurus risora, is a tyrant flycatcher that inhabits wet grasslands in north-east Argentina. During the last century, its original range has contracted by 90% in association with conversion of natural grasslands to agriculture. At present, it is classified as ‟vulnerable” and further decline in range and number is expected because suitable habitat is subject to current extensive agricultural intensification. Knowledge of the factors that affect the reproductive success and habitat use of threatened species is necessary for accurate assessments of the extinction risk and conservation of their populations. This study shows nest site selection, breeding biology, factors that affect nest survival and fire response of strange-tailed tyrants in a protected area of the humid Chaco, Formosa Province, Argentina. This species has a social polygynous mating system, with males owning contiguous territories with up to three females and parental care is provided exclusively by females. Nest survival was 0.23 and decreased with age of the nest. Males and females fledged 2.6 and 1.6 chicks respectively per breeding season. Nest site selection and fire response patterns provide evidence of the negative effect of the traditional livestock grazing practices in the natural grasslands where last populations remain.

Veiga, María Florencia. "Estudios sobre la presencia y expresión de cadherina epitelial en gametas humanas y murinas. Evidencias sobre su participación en el proceso de la fecundación" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La fecundación involucra eventos de adhesión celular ovocitoespermatozoide dependientes de Ca2+. Cadherina epitelial (cadE) es una glicoproteína de membrana de 120 KDa, con 5 dominios extracelulares, 1 transmembrana y 1 citoplasmático. CadE se asocia al citoesqueleto de actina a través de moléculas adaptadoras como β-catenina y está involucrada en la adhesión celular dependiente de Ca2+. CadE participa en el desarrollo embrionario, la organogénesis y mantenimiento de tejidos y la tumorigénesis. El objetivo de este proyecto fue evaluar la expresión de cadE en tejidos reproductivos, su presencia y localización en ovocitos y espermatozoides y su participación en la fecundación. Se emplearon 2 modelos: humano y murino. Los estudios describen 1) la expresión del ARNm de cadE en testículo y epidídimo y 2) la presencia de la proteína en extractos de epidídimo y su localización en las células epiteliales 3) la presencia de cadE en estructuras membranosas del plasma seminal humano y del fluido epididimario murino 4) la presencia, formas proteicas y localización de cadE, β-catenina y actina en espermatozoides murinos epididimarios y humanos eyaculados 5) la localización de cadE en espermatozoides capacitados y reaccionados 6) la localización de cadE en ovocitos y formas proteicas en ovocitos murinos 7) la capacidad de anticuerpos bloqueantes de la función adhesiva de cadE de inhibir la interacción espermatozoide-ovocito 8) la evaluación de la presencia de cadE en pacientes en tratamiento por infertilidad e identificación de alteraciones en algunos casos. Este es el primer estudio que aborda de manera exhaustiva la detección de cadE en las gametas humanas y murinas y muestra evidencias de su rol en la fecundación.

Abstract:
Fertilization involves Ca2+ dependent adhesion events between the oocyte and the spermatozoon. Epithelial cadherin (Ecad) is a 120 KDa glycoprotein organized in five extracellular domains, one transmembrane and one cytoplasmic domain. Ecad is linked to the actin cytoskeleton by adaptor molecules, such as β- catenin, and is involved in Ca2+-dependent cell-cell adhesion. Among several functions, Ecad has been shown to participate in embryonic development, organogenesis and maintenance of tissues as well as in tumor progression and metastasis. The aims of this project were to evaluate Ecad expression in reproductive tissues, its presence and localization in oocytes and spermatozoa and its participation in fertilization. Human and murine tissues and gametes were used throughout the study. The studies have shown: 1) expression of Ecad mRNA in the testis and the epididymis 2) presence of the 120 KDa Ecad form in the epididymis mainly localized in the epithelial cells borders 3) immunodetection of Ecad in membranous vesicles isolated from human seminal plasma and murine epididymal fluid 4) presence and localization of Ecad, β-catenin and actin in murine epididymal spermatozoa and in ejaculated human sperm cells 5) a distinctive localization of Ecad in capacitated and acrosome-reacted spermatozoa 6) immunoreactivity towards Ecad in human oocytes and its protein forms in murine oocytes 7) the ability of specific antibodies towards Ecad to inhibit spermoocyte interaction 8) the assessment of Ecad in patients under infertility treatment and the identification of changes in some of them. This is the first report that thoroughly characterizes the expression of Ecad in tissues of the male reproductive tract, as well as in gametes from mice and humans, and shows evidence of its participation in fertilization.

Elia, Evelin Mariel. "Efecto del hiperandrogenismo sobre la fisiología uterina. Acción de la Metformina como tratamiento" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El Síndrome del Ovario Poliquístico (SOP) es una de las endocrinopatías más frecuentes en mujeres en edad reproductiva. Su característica principal es el hiperandrogenismo, condición que tiene efectos perjudiciales sobre la función endometrial, contribuyendo a las altas tasas de aborto, de hiperplasia y cáncer endometrial. La administración de Metformina en pacientes SOP presenta numerosos beneficios aunque existe controversia sobre su efectividad para mejorar las tasas de embarazo. Además, muchas pacientes no responden a este tratamiento y en esos casos se obtienen mejores resultados al administrarla junto con Rosiglitazona. En el presente trabajo estudiamos los mecanismos por los cuales el hiperandrogenismo altera la funcionalidad uterina y la capacidad del tratamiento con Rosiglitazona y/o Metformina de prevenir dichas alteraciones. El hiperandrogenismo, a nivel uterino, alteró su histología, el balance apoptosis/proliferación celular, el metabolismo del ácido araquidónico, la activación de los factores de transcripción PPARγ e incrementó el estrés oxidativo. La administración de Metformina evitó muchas de dichas alteraciones excepto el estrés oxidativo uterino. La combinación Metformina+Rosiglitazona, mejoró las defensas antioxidantes. Concluimos que esta sería una de las causas por las cuales la terapia combinada daría mejores resultados en el tratamiento de mujeres SOP, especialmente en aquellas que no responden óptimamente a Metformina.

Abstract:
Polycystic ovary syndrome (PCOS) is one of the most frequent endocrine diseases that affect women in their childbearing age. This syndrome is characterized by hyperandrogenism that shows detrimental effects on the endometrial function, contributing to the high rates of pregnancy loss, hyperplasia and endometrial cancer. Metformin in the treatment of PCOS shows numerous benefits although there is controversy about its effectiveness to improve pregnancy rates. In addition, many patients do not respond to Metformin-treatment and in those patients better results are obtained when Metformin is administered together with Rosiglitazone. In the present work, we studied the mechanisms by which hyperandrogenism alters uterine function and the capacity of Rosiglitazone and/or Metformin treatment/s to prevent such alterations. Hyperandrogenism altered the uterine histology, the balance between apoptosis/cell proliferation, the arachidonic acid metabolism, the activation of the transcription factors PPARγ and increase the oxidative stress. The administration of Metformin avoided many of these alterations except the oxidative stress. The combination Metformin+Rosiglitazone improved the antioxidant defenses. We conclude that this would be one of the reasons because of the fact that the combined therapy would give better results in the treatment of PCOS women, especially in those who do not respond optimally to Metformin.

González Pisani, Ximena. "Biología reproductiva de los cangrejos ¨Araña¨Leurocyclus tuberculosus y Libinia spinosa (Brachyura, majoidea) del norte de Patagonia" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La presente tesis tiene por objetivo el estudio de la biología reproductiva de dos especies de Majoidea presentes en los golfos norpatagónicos (41°- 43°S, 64°-65° W), Leurocyclus tuberculosus y Libinia spinosa. Se describió la estrutura del sistema reproductor femenino y masculino mediante observaciones macroscópicas y bajo microscopía óptica y electrónica de barrido. En las hembras se observó la inserción oviducto-receptáculo seminal del tipo “intermedia” y los receptáculos presentaron diferencias en la zona de transicion mesodermica-ectodermica entre especies. En los machos se observaron diferencias en la formación de los espermatóforos y en la morfología de los gonopodios. Posteriormente se estableció la talla de madurez sexual y se determinaron los estadios de crecimiento. La talla a la cual el 50% de las hembras está madura gonadal, morfométrica y funcionalmente podría corresponder al mismo estadio de crecimiento. En los machos de Leurocyclus tuberculosus se determinó que la madurez gonadal podría ocurrir en un estadio de crecimiento previo a la talla de madurez morfométrica y funcional mientras que en Libinia spinosa la madurez gonadal y morfométrica ocurrirían en el mismo estadio y la madurez funcional en un estadio posterior. Se propone que la muda puberal no sería la muda terminal. La frecuencia de tallas mostró un patrón de crecimiento similar entre sexos en Leurocyclus tuberculosus y diferencias en Libinia spinosa. La proporción de sexos en Leurocyclus tuberculosus fue de 2:1 (hembras: machos) y en Libinia spinosa la proporción varió entre estaciones. La fecundidad estimada fue mayor en Leurocyclus tuberculosus con menor tamaño de huevos. El esfuerzo reproductivo fue menor al de otras especies de Eubrachyura, siendo en Leurocyclus tuberculosus significativamente menor que en Libinia spinosa. Las especies no mostraron una buena correlación entre la fecundidad y la talla lo que sugiere que otros factores modulan la fecundidad. Finalmente se caracterizó el desarrollo embrionario y el efecto de la temperatura sobre el tiempo de desarrollo. Se describieron 5 etapas de desarrollo. El crecimiento embrionario fue mayor en Leurocyclus tuberculosus y la temperatura de incubación tuvo un efecto significativo sobre el tiempo de desarrollo embrionario total en ambas especies.

Abstract:
This thesis is aimed at investigating the reproductive biology of two Majoidea species occurring in the gulfs of northern Patagonia (41°-43°S, 64°-65° W), Leurocyclus tuberculosus and Libinia spinosa. The female and male reproductive systems were described based on macroscopic study, light microscopy and scanning electron microscopy. The oviducts connect with the seminal receptacles at the midlength of the mesoderm-derived region, and there are different structures in the transition zone of the seminal receptacles. Males of both species show differences in spermatophore formation and gonopod morphology. In addition, the size at sexual maturity was estimated by combining the concepts of gonadal, morphometric and functional maturity, and growth stages were determined. The size at which 50% of females reach gonad, morphometric and functional maturity would be attained at the same growth stage. Males of Leurocyclus tuberculosus may reach gonad maturity before morphometric and functional maturity, while males of Libinia spinosa may reach gonad and morphometric maturity at the same stage and functional maturity at the next stage. For both species, the pubertal moult may not coincide with the terminal moult. Size frequency distribution of males and females showed a similar and different growth pattern for Leurocyclus tuberculosus and Libinia spinosa, respectively. The sex ratio in Leurocyclus tuberculosus was 2:1 (females: males), while in Libinia spinosa it depended on the season. The fecundity and the reproductive effort were also estimated. Leurocyclus tuberculosus females had higher fecundity and smaller eggs. The reproductive effort of both species was lower than those reported for other Eubrachyura, with the value for Leurocyclus tuberculosus being significantly lower than that for Libinia spinosa. The fecundity did not show a good correlation with size, suggesting that other factors modulate fecundity. Finally, the embryonic development was characterised and the effect of temperature on development was evaluated. Five developmental stages were determined. Embryo volume was greater in Leurocyclus tuberculosus. The effect of incubation temperature on total developmental time was significant for both species.

Luaces, Juan Pablo. "Citogenética molecular y reproducción de la tribu Euphractini Winge, 1923 (Dasypodidae, Xenarthra, Mammalia) de Argentina" (2011-12-12) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los armadillos de la tribu Euphractini son un grupo de mamíferos xenartros, que se encuentran clasificados en 5 especies cuya distribución ocurre principalmente en la Argentina (salvo Euphractus sexcinctus). Por su condición filogenética basal en placentados, su biología requiere ser cuidadosamente revisada y estudiada. Se caracterizó citogeneticamente y desde el punto de vista reproductivo a Euphractini, para poder esclarecer posibles mecanismos de aislamiento reproductivo (MAR) acontecidos durante su historia evolutiva: 1). MAR post-cigóticos: mediante la caracterización citogenético-molecular de: 223 ejemplares (131 machos y 92 hembras) de Chaetophractus villosus, 2n=60 y NF=88; 103 ejemplares de Chaetophractus vellerosus, en sus dos distribuciones disyuntas, 2n=62 y NF 88-90 ; 14 ejemplares (4 machos y 10 hembras) de Zaedyus pichiy, 2n=62 y NF=98; y 7 ejemplares (4 machos y 3 hembras) de E. sexcinctus, 2n=58 y NF=106. 2). MAR precigóticos: con el estudio de la morfología del tracto genital masculino en machos de Ch. villosus, y de la fisiología reproductiva, con estudio del ciclo reproductivo en machos de Ch. villosus y en hembras de Ch. villosus y Ch. vellerosus.

Abstract:
The armadillos of the tribe Euphractini are a group of xenarthrous mammals, which divided in five species, are manly distributed in Argentina (except for Euphractus sexcinctus). Due to its basal phylogenetic position within placentals, its biology has to be carefully analysed. Cytogenetic and reproductive characterization of Euphractini were carried out in order to bound reproductive isolation mechanisms (RIM) that occurred during its evolutive history: 1). Post-mating RIM: throughout a molecular cytogenetic study of the group in: 223 individuals (131 males and 92 females) of Chaetophractus villosus, 2n = 60 and NF = 88; 103 individuals of Chaetophractus vellerosus in it two disjunct distributions, 2n = 62 and NF 88 -90 ; 14 individuals (4 males and 10 females) Zaedyus pichiy, 2n = 62; and NF = 98 and 7 specimens (4 males and 3 females) E. sexcinctus, 2n = 58 and NF = 106. 2). Pre-mating RIM: throughout the study of the reproductive morphology, of the male genital tract in Ch. villosus and physiology, with the study of the reproductive cycle in males of Ch. villosus and in females of Ch. villosus and Ch. vellerosus.

Julianelli, Vanina Laura. "El Heparán Sulfato y la descondensación del núcleo espermático humano: estudio de su rol específico en dicho proceso y caracterización molecular de la interacción Heparán Sulfato-ADN-Protaminas" (2012) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A diferencia de las células somáticas, el espermatozoide posee su cromatina empaquetada principalmente por protaminas en lugar de histonas. Las protaminas son proteínas pequeñas y básicas, debido a su alto contenido de residuos lisina, arginina y cisteína. Las cisteínas forman puentes disulfuro intra e intercatenarios, lo que le proporciona al núcleo espermático gran estabilidad y resistencia para poder atravesar el tracto masculino, el femenino y llegar con su ADN intacto hasta el sitio de fecundación. Una vez que el espermatozoide penetra en el ovocito, es imprescindible que se produzca la descondensación de su cromatina, es decir el desempaquetamiento del ADN para poder reemplazar las protaminas por histonas ovocitarias. La descondensación de la cromatina consiste en dos eventos, deben reducirse los puentes disulfuro (tiorreducción) y removerse las protaminas. Las moléculas involucradas en estos procesos son el glutatión reducido (GSH) y el heparán sulfato (HS) ovocitarios. Hasta el momento se consideraban eventos independientes y sucesivos: primero el GSH tiorreduce las protaminas, y luego el HS las remueve. Sin embargo, nuestros resultados indican que estos procesos podrían ser simultáneos y cooperativos. El objetivo de esta tesis fue avanzar en el estudio del mecanismo de la descondensación de la cromatina del espermatozoide humano in vitro en presencia de heparina (análogo estructural del HS) y GSH y su extrapolación al mecanismo in vivo durante la fertilización. Al coincubar espermatozoides humanos o núcleos espermáticos aislados con heparina y GSH, se produce un mayor porcentaje de descondensación de la cromatina, con respecto a la incubación en forma secuencial con los mismos agentes, independientemente del orden de los mismos. Utilizando naranja de acridina como técnica para evaluar en forma indirecta el estado de tiorreducción de los núcleos espermáticos, se observa que la heparina colabora con el GSH en la tiorreducción, durante la descondensación. Estos resultados fueron confirmados utilizando monobromobimane como método directo para evaluar tiorreducción. Los resultados aportados por esta tesis indican que la tiorreducción producida por el GSH, y la remoción de las protaminas producida por la heparina, durante la descondensación de la cromatina de espermatozoides humanos in vitro, ocurriría en forma simultánea, y no secuencial, ya que ambos factores cooperarían entre sí.

Abstract:
Unlike somatic cells, sperm have a highly packed chromatin due to the presence of protamines instead of histones. Protamines are small basic proteins, very rich in cysteine, lysine and arginine. Cysteine residues form disulfide bonds, both intra and interchain, rendering the sperm nucleus high stability and resistance during transit along the male and female reproductive tracts, thus enabling the spermatozoon to arrive at the fertilization site intact. Once the sperm penetrates the oocyte, chromatin decondensation must occur, implying the unpacking of DNA through the replacement of protamines by oocyte histones. Decondensation comprises two steps: disulfide bonds must be reduced (thioreduction) and protamines must be removed. The molecules involved in these steps are reduced glutathione (GSH) and heparan sulfate (HS) from the oocyte. Until now, these events were considered independent and consecutive: first GSH thioreduced protamines and, then HS removed them. Our results indicate otherwise, suggesting that both processes could be simultaneous and cooperative. The aim of this thesis was to advance in the study of the mechanism of nuclear decondensation of human sperm in vitro, using heparin (HS structural analog) and GSH and the extrapolation to the in vivo mechanism during fertilization. A higher degree of decondensation was observed upon coincubating of human sperm or isolated nuclei with heparin and GSH, compared to sequential incubation with the same agents, regardless of the order in which they were added. Use of an acridine orange staining technique as a means to indirectly evaluate the thioreduced status of sperm chromatin, revealed that heparin enhanced GSH thiol reducing activity, suggesting the existence of a cooperative effect between both reagents during decondensation. These results were confirmed by direct thiol reduced status evaluation uthrough labeling of free thiols in sperm chromatin with monobromobimane. The results presented herein indicate that protamine thiol reduction by GSH and removal of protamines by heparin during chromatin decondensation of human sperm in vitro, occur simultaneously rather than sequentially, since a cooperative effect could be observed between both decondensing agents.

Rey Vázquez, Graciela. "Espermatogénesis, ciclo reproductivo anual y parámetros hematológicos de Cichlasoma dimerus (Teleostei, Perciformes). Efecto de la exposición a 4-tert-octilfenol" (2012-06-28) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En el presente trabajo se analizó primeramente la espermatogénesis y el ciclo reproductivo anual del pez Cichlasoma dimerus, un perciforme representativo de la ictio-fauna de la Cuenca del Río de La Plata. Los estudios realizados con microscopía óptica y electrónica permitieron determinar que los testículos pertenecen al tipo lobular irrestricto. La espermatogénesis es de tipo cística y se estudiaron las características de los distintos estadios de las células germinales durante este proceso, desde espermatogonia hasta espermatozoide. Los espermatozoides en esta especie corresponden a la categoría acuasperma anacrosomal tipo I y se determinó que son biflagelados, carácter excepcional entre los cíclidos. Se estableció que la estación de alta actividad reproductiva se extiende a lo largo de siete meses (desde septiembre hasta marzo) durante los cuales las puestas tienen lugar cada 29,4 ± 16,2 días. Se describieron los cambios del epitelio germinal a lo largo de todo el año, estableciéndose cinco clases reproductivas: proliferación, maduración temprana, media y tardía (final) y regresión. Además, se caracterizaron a nivel óptico y electrónico los distintos tipos celulares de la sangre y se determinaron los valores de referencia de los índices hematológicos (RGR, RGB, HTC, Hb, VCM, HCM, CHCM) de esta especie bajo condiciones estandarizadas. En una segunda etapa, utilizando métodos semiestáticos se evaluó el efecto de la exposición de C. dimerus a concentraciones subletales de octilfenol (OF), uno de los surfactantes más comúnmente utilizado, que puede contaminar el ambiente acuático. Se determinó en primer lugar la toxicidad aguda del compuesto y posteriormente, se realizaron ensayos de exposición subcrónica. Se observó que el OF tiene acción estrogénica consistente en la inducción de la síntesis de Vtg y daño en la morfología testicular que determina la infertilidad de los machos de esta especie. Por otra parte, produce estrés hemodinámico que lleva a anemia normocrómica, normocítica, con un aumento significativo de eritroblastos y presencia de eritrocitos amitóticos como patología eritrocítica. Todos los efectos resultaron ser dependientes de la concentración y reversibles tras un proceso de depuración.

Abstract:
The first step in the present study was the analysis of spermatogenesis and annual reproductive cycle in Cichlasoma dimerus, a typical perciform of the Río de la Plata basin ichthyiofauna. The studies performed under light and electron transmission microscopy revealed that the testicular structure corresponds to an unrestricted lobular type. Spermatogenesis is of cystic type and the characteristics of the different stages of the germ cells during this process, from spermatogonia to spermatozoa, were studied. Sperm in this species correspond to the anacrosomal type I aquasperm and they are biflagellate, an exceptional character among cichlids. It was established that the season of highest reproductive activity extends over seven months, from September to March, during which spawning took place on average every 29.4 ± 16.2 days. The changes that occur in the germinal epithelium throughout the year were described, determining five reproductive classes: proliferative, early, mid-, and late maturation and regression. The different blood cell types were characterized under light and electron microscopy, and reference values of the hematological indexes (RBC, WBC, HCT, Hb, MCV, MCH, MCHC) were determined for this species under standardized conditions. In a second step, under semistatic conditions, the effects of exposure of C. dimerus to sublethal concentrations of octylphenol (OP), one of the surfactants most widely used that can pollute the aquatic environment, were evaluated. First, the acute toxicity of OP was assessed, and afterwards subchronic essays were performed. It was observed that OP acts as a xenoestrogen, since there was Vtg synthesis in males and testicular damage which determined infertility. Besides, it produces hemodynamic stress that leads to normochromic and normocytic anemia, a significant increase of erythroblasts and amitotic erythrocytes as erythrocytic pathology. All effects were concentrationdependent and reverted after a depuration process.

Palmerio, Andrés Gabriel. "Maduración tardía del plumaje y costo reproductivo en el Jilguero Dorado Sicalis flaveola" (2012-07-11) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El estudio de las “historias de vida” comprende el balance entre las demandas energéticas que requieren los organismos para nacer, crecer hasta la madurez, reproducirse y sobrevivir. La mayoría de los estudios sobre la historia de vida y biología reproductiva de las aves se han realizado en el Hemisferio Norte donde habitan menos del 25 % de las especies del planeta. El Jilguero Dorado es un Passeriforme relativamente abundante en Argentina y poco estudiado; son frecuentemente capturados como aves de jaula y los machos de esta especie presentan maduración tardía del plumaje (MTP). Los objetivos de esta Tesis fueron determinar si existen diferencias en los caracteres de historia de vida relativos a los nidos de machos blancos y amarillos y, además, determinar mediante una manipulación, si los adultos disminuyen el esfuerzo reproductivo presente resguardando su supervivencia, o si aumentan el esfuerzo parental a costa de su propia supervivencia en relación a la MTP. El estudio se llevó a cabo en un sistema de cajas nido ubicado en el IIBInTeCh, Chascomús, Pcia. de Buenos Aires, entre los años 2005 y 2010. Se encontró que las hembras apareadas con machos amarillos resultaron ser significativamente más pesadas que aquellas apareadas con machos blancos así como el peso de sus huevos; la vida media de los machos reproductivos amarillos de Jilguero Dorado fue de 3.2 años y la de los machos reproductivos blancos fue 5 meses menor; las hembras manipuladas apareadas con machos blancos disminuyeron su peso un 10% más que los controles así como fue menor la duración de sus visitas de alimentación a los pichones; los pichones pertenecientes a nidos de hembras manipuladas apareadas con machos blancos presentaron una menor tasa de crecimiento y peso asintótico al abandonar el nido. Estos resultados apoyan la existencia de un apareamiento selectivo y en este caso, las hembras de menor calidad estarían obligadas a reproducirse con los machos blancos. Las respuestas encontradas en las variables analizadas de los machos blancos son idénticas a las de los machos amarillos en todos los aspectos analizados en este trabajo.

Abstract:
The study of "life history traits" comprises the balance between the energy required by organisms to born, grow to maturity, reproduce and survive. Most studies of life history traits and reproductive biology of birds have been conducted in the Northern Hemisphere, where less than 25% of the planet's species live. The Saffron Finch Sicalis flaveola is a relatively abundant but understudied species in Argentina; they are often captured as birds of cage and males present delayed plumage maturation. The goals of this Thesis were to determine whether the birds associated to nests held by yellow and white males differ at any life history trait and if, when handicapping one of the members of the white or yellow male’s pair, the adults reduce the reproductive effort and prioritize their own survival, or increase the parental effort at the expense of their survival, keeping in mind the fact the species shows delayed plumage maturation. The study was conducted in a nest box system located at the IIB-INTECH, Chascomús, Buenos Aires, between 2005 and 2010. We found that females mated with yellow males were significantly heavier than those paired with white males, and so were their eggs; the average life expectancy of reproductive yellow Saffron Finch males was 3.2 years and that of white reproductive males was 5 months shorter; manipulated females paired with white males were significantly lighter than females in the control group, and lost 10 % of their weight; their visits to the nestlings were also significantly shorter, and the nestlings belonging to these females had lower growth rate and asymptotic weight at the time they fledged from the nest. These results point at the existence of assortative mating: low-quality females would be accepted by younger, white males. However, white and yellow males did not differ on their life history traits and responses to the manipulation and were identical in all the aspects analyzed in this Thesis.

Di Yorio, María Paula. "Regulación de la expresión de los receptores de leptina en el eje reproductivo de la rata" (2012-09-14) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Leptina, proteína de 16 kDa sintetizada y secretada principalmente por el tejido adiposo, parece ser un regulador de la función reproductiva. En este trabajo evaluamos la acción de distintos niveles de leptina sobre la expresión de las principales isoformas de su receptor en el eje hipotálamo-hipófisis- ovario, y el efecto de NPY y 17β-estradiol sobre estos receptores en el eje hipotálamo-adenohipófisis, ambos durante el proceso ovulatorio. Utilizamos como modelo biológico ratas inmaduras estimuladas con gonadotrofinas y evaluamos mediante estudios in vivo e in vitro la expresión del mensajero (RTPCR) y de la proteína (western blot) de los receptores de leptina. Encontramos que tanto leptina como las gonadotrofinas son capaces de regular diferencialmente la expresión del mensajero y de la proteína de ambos tipos de isoformas en el eje reproductivo, en forma dosis y tejido dependiente. Por otro lado, NPY y 17β-estradiol fueron capaces de inducir la expresión del mensajero y de la proteína de ambas isoformas en el eje hipotálamo-adenohipófisis a través del receptor de NPY tipo 1 y de los receptores estrogénicos α y/o β, respectivamente. Como el efecto estimulatorio o inhibitorio de leptina sobre la función ovárica podría depender de la activación diferencial de sus receptores, estudiamos las vías JAK2/STAT3 y ERK1/2, y la expresión de SOCS3 (western blot) en el eje reproductivo durante el proceso ovulatorio. Utilizamos ratas estimuladas con gonadotrofinas las que recibieron los siguientes tratamientos: i) tratamiento agudo, las que recibieron 5 dosis de leptina (5 μg c/u) o vehículo durante el proceso ovulatorio, o ii) tratamiento diario, las que recibieron 3 μg de leptina o vehículo por día durante 12 días a partir del destete. Observamos que el tratamiento agudo, que inhibe la función ovárica, i) disminuye la expresión de p-ERK1/2 en hipotálamo, adenohipófisis y ovario; ii) disminuye la expresión de p-STAT3 en adenohipófisis y ovario; y iii) aumenta la expresión de SOCS3 en adenohipófisis y ovario. En el tratamiento diario, que estimula la función ovárica, observamos que i) aumenta la expresión de p-STAT3 y p-ERK1/2 en hipotálamo y en ovario; ii) disminuye la expresión de SOCS3 en ovario; y iii) no hubo cambios en estas vías en adenohipófisis. Al evaluar in vitro la acción directa de leptina sobre estos caminos de señalización en ovario observamos que la presencia de leptina es capaz de aumentar la expresión de p-STAT3 a bajas y altas concentraciones, la expresión de p-ERK1/2 a bajas concentraciones y los niveles de SOCS3 a altas concentraciones. Con estos resultados podemos concluir que las gonadotrofinas, leptina, NPY y 17β-estradiol son capaces de regular la sensibilidad a leptina a lo largo del eje reproductivo por modular la expresión de sus receptores, y que los cambios observados en las distintas vías de señalización inducidos por diferentes niveles de leptina pueden ser, al menos en parte, responsables del efecto positivo o negativo que leptina ejerce sobre el proceso ovulatorio. Palabras claves: receptor de leptina, leptina, NPY, 17β-estradiol, hipotálamo, adenohipófisis, ovario, proceso ovulatorio, JAK2/STAT3, ERK1/2, SOCS3.

Abstract:
Leptin, a 16 kDa protein synthesized and secreted mainly by adipocytes, modulates the reproductive function. The aims of the present work were to investigate the expression of leptin receptors in the hypothalamic-pituitary-ovarian axis, and to assess whether different levels of leptin in this axis were able to modulate the expression of both the long and the shorts isoforms of its receptors. Moreover, we also evaluated the direct effects of some factors involved in the reproductive function, like NPY and 17β-oestradiol, on the expression of these receptors in the hypothalamic-pituitary axis. Immature rats primed with gonadotropins were used and either in vivo or in vitro assays were performed to evaluate the expression of both RNA messenger (RT-PCR) and proteins (western blot) of the leptin receptors. Gonadotropins and leptin were able to regulate the expression of RNA messenger and proteins of both isoforms in the reproductive axis in a differential way and in a dose and tissue dependent manner. Furthermore, NPY and 17β-oestradiol up-regulated the receptor expression in the hypothalamic-pituitary axis by the interaction with the receptor Y type 1 and the oestrogen receptors α and/or β, respectively. Leptin is able to both stimulate and inhibit the ovarian function and this effect could be induced by a differential activation of its receptors. Thus, we investigated whether changes in the signalling pathways, mediated by JAK2/STAT3 or ERK1/2 and the SOCS3 expression (western blot), were involved in this biphasic response in the hypothalamic-pituitary-ovarian axis during the ovulatory process. Immature rats primed with gonadotropins received one of the following treatment: i) acute treatment, in which the rats received five ip injection of leptin (5 μg each) or vehicle during the ovulatory process, and ii) daily treatment, at 22 days of age, in which the rats received an ip injection of leptin (3 μg) or vehicle per day for 12 days. We found that the acute treatment, which inhibits the ovulatory process, caused a reduction in the expression of p-ERK1/2 in hypothalamus, pituitary and ovary; p-STAT3 in pituitary and ovary; and an increase in SOCS3 expression in pituitary and ovary. The daily treatment, which induces the ovulatory process, increased the expression of both p-STAT3 and p-ERK1/2 in hypothalamus and ovary; caused a reduction of SOCS3 expression in the ovary; but no changes were found in pituitary. In vitro studies were performed to evaluate a direct effect of leptin on those signaling pathways in the ovarian tissue. Leptin was able to activate both STAT3 and ERK1/2 in the presence of physiological levels, but only STAT3 at high concentrations. In addition, the expression of SOCS3 protein increased at high levels of leptin. These results indicate that gonadotropins, leptin, NPY and 17β-oestradiol are able to modulate the responsiveness to leptin by regulating the expression of its receptors. Furthermore, changes in different signaling pathways throughout the reproductive axis, induced by different levels of leptin may be, at least in part, responsible for the positive or negative effects of leptin on the ovulatory process. Key words: Leptin receptor, leptin, NPY, 17β-oestradiol, hypothalamus, pituitary, ovary, ovulatory process, JAK2/STAT3, ERK1/2, SOCS3.

Ernesto, Juan Ignacio. "Caracterización de distintos miembros de la familia de proteínas CAP en tracto reproductor masculino y femenino y su participación en el proceso de fertilización" (2012-10) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A pesar de la importancia del proceso de fertilización, es aún muy escasa la información disponible acerca de las moléculas involucradas. Las evidencias de nuestro laboratorio indican que las proteínas de la familia CRISP, miembro de la superfamilia CAP, serían claros mediadores del proceso de interacción de gametas. Teniendo en cuenta que las CRISP se expresan principalmente en el tracto reproductor masculino, el primer objetivo de esta Tesis ha sido investigar si las mismas también se expresan en el tracto reproductor femenino y cumplen un rol en el proceso de fertilización. Los resultados obtenidos utilizando los modelos de rata y ratón indicaron que mientras CRISP1 se encuentra presente en útero, oviducto, ovario, y células del cúmulus, CRISP2 se detecta sólo en ovario, y CRISP4 no se expresaría en el tracto de la hembra. Ensayos de fertilización in vitro utilizando espermatozoides y COC (complejos ovocito-cúmulus) provenientes de ratones knockout para CRISP1 indicaron que la proteína presente en el cúmulus cumpliría una función en el proceso de fertilización. Estudios posteriores revelaron que CRISP1 exhibe propiedades quimioatractantes hacia los espermatozoides, sugiriendo que éste podría ser el mecanismo por el cual CRISP1 del cúmulus participa en el proceso de fertilización. Dada la gran homología entre las CRISP y las GLIPR1, las cuales constituyen las dos familias mejor caracterizadas de la superfamila CAP, el segundo objetivo de este trabajo consistió en estudiar la presencia de proteínas GLIPR1 en el tracto reproductor masculino y su participación en la fertilización. Los resultados indicaron la expresión de GLIPR1L1 a nivel testicular y de GLIPR1L2 tanto en testículo como en epidídimo de ratón. La generación de ambas proteínas en forma recombinante y de sus correspondientes anticuerpos confirmó la presencia de las mismas en el espermatozoide y su participación específica en la primera etapa de unión a la zona pellucida. La información obtenida acerca del rol de las proteínas CRISP y GLIPR1 contribuirá a una mayor comprensión de los mecanismos moleculares involucrados en la interacción de gametas como así también al desarrollo de futuros métodos de regulación de la fertilidad tanto en animales como en el humano.

Abstract:
Despite the importance of the fertilization process, there is still little information about the molecules involved in it. Evidence from our laboratory indicates that proteins from de CRISP family, members of the CAP super family, would be clear mediators of the gamete interaction process. Considering that the CRISP are expressed primarily in the male reproductive tract, the first objective of this thesis was to investigate whether these proteins are expressed in the female reproductive tract and if they play a role in the fertilization process. The results indicated that while CRISP1 is present in uterus, oviduct, ovary and cumulus cells, CRISP2 is detected only in the ovary and CRISP4 is not expressed is the female reproductive tract. In vitro fertilization assays using both sperm and COC (oocyte-cummulus complex) from CRISP1 knockout mice indicated that the protein present in the cumulus fulfill a role in the fertilization process. Further studies revealed that CRISP1 exhibit sperm chemoattractant properties, suggesting that this might be the mechanism by which CRISP1 present in the cumulus participates in the fertilization process. Given the high homology between CRISP and GLIPR1, which are the two best characterized families from the CAP super family, the second objective of the present work was to study the presence of GLIPR1 proteins in the male reproductive tract and their participation in the fertilization process. Our results indicated that GLIPR1L1 is expressed in the testis while GLIPR1L2 is present in the testis and the epididymis. The generation of both recombinant proteins and their corresponding antibodies confirmed the presence of these proteins in the sperm (human and mouse) and their specific involvement in the first stage of binding to the zona pellucida. The information obtained about the role CRISP and GLIPR1 proteins will contribute to a greater understanding of the molecular mechanisms involved in gamete interaction as well as to the development of future methods to regulate fertility both in animals and humans.

Loreti, Rosana Nazareth. "Implicancia del grado de sialilación y complejidad de los oligosacáridos de FSH en la regulación de la función ovárica: estudios clínicos y experimentales" (2012-12-20) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La FSH se sintetiza y secreta como una familia de variantes glicosiladas, las cuales difieren en el grado de sialilación y complejidad de sus oligosacáridos y en la inducción de respuestas biológicas en células blanco, in vivo e in vitro. El objetivo general de esta Tesis Doctoral fue establecer la relación existente entre las características de los carbohidratos presentes en la molécula de FSH y la inducción de respuestas biológicas en las células de la granulosa. La acción de variantes glicosiladas, aisladas de FSH recombinante humana (FSHrh), fue evaluada in vitro utilizando dos modelos experimentales. Se estudió la producción de inhibinas diméricas en células de la granulosa de rata; de esteroides e inhibinas en la línea celular de granulosa humana, KGN, como así también el patrón de expresión génica global y la expresión de enzimas esteroidogénicas y subunidades de inhibinas. Estudios in vitro demostraron que el grado de sialilación y la complejidad de los oligosacáridos presentes en la FSHrh reguló en forma diferencial la producción de esteroides y péptidos. Asimismo, el análisis de ontología génica reveló la capacidad que poseen las variantes glicosiladas de FSHrh de modular en forma diferencial la expresión de genes involucrados en funciones o procesos esenciales para el mantenimiento de la función celular. Las características de las variantes glicosiladas de la FSH circulante fueron determinadas en condiciones fisiológicas y en pacientes infértiles con ciclos regulares. Se observaron alteraciones en el grado de sialilación de la FSH circulante en las pacientes con trastornos reproductivos y en mujeres jóvenes ovodonantes. Los resultados obtenidos demuestran que los oligosacáridos de la molécula de FSH regulan distintas funciones de la célula de la granulosa. Alteraciones precoces en el grado de sialilación de la gonadotrofina podrían comprometer la capacidad reproductiva en la mujer.

Abstract:
FSH is produced and secreted as a family of glycosylation variants which differ from each other in the oligosaccharide sialylation and complexity and in the induction of different biological responses in vitro and in vivo. The aim of this Doctoral Thesis was to establish the relationship between the FSH carbohydrate characteristics and the induction of biological responses in granulosa cells. The effect of recombinant human FSH glycosylation variants were evaluated in two experimental models in vitro. Dimeric inhibin production was assessed in rat granulosa cells, steroids and inhibin production in human granulosa cell line KGN, as well as global gene expression profile and the expression of steroidogenic enzymes and inhibin subunits. In vitro studies demonstrated that sialylation and complexity of rhFSH oligosaccharides induced a differential regulation of steroid and inhibin production. Gene ontology analysis revealed the ability of rhFSH glycosylation variants to differentially modulate the expression of genes involved in essential cell biological processes and molecular functions. Circulating FSH oligosaccharides characteristics were determined under physiological conditions and in infertile patients. Alterations in FSH sialylation were observed in infertile patients and in ovodonors. The results obtained in this study show that FSH oligosaccharides regulate different functions in granulosa cells. Early alterations in FSH sialylation may jeopardize the reproductive capacity in women.

Di Giorgio, Noelia Paula. "GABA y receptores GABA B en el eje reproductivo: su relación con GnRH y kisspeptinas" (2013) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Kisspeptina, GnRH y GABA juegan un papel fundamental en la regulación del eje gonadotrófico, si bien la interacción entre ellos está poco caracterizada. Estudios previos en ratones carentes del RGABAB funcional (GABAB1KO) sugerían alteraciones reproductivas, principalmente en la hembra. Nuestra hipótesis fue que GABA, a través de sus RGABAB, interviene en la regulación de la reproducción impactando sobre los sistemas GnRH/kisspeptina en el cerebro, durante el desarrollo y en la adultez. Demostramos por primera vez la co‐localización del RGABAB1 en neuronas Kiss1 del AVPV/PeN y ARC. La falta de un RGABAB funcional impacta diferencialmente según la edad evaluada. En ratones de 4 días de edad los cambios se observan en el hipotálamo medio basal, mientras que en ratones adultos aparecen en el hipotálamo anterior. Sin embargo, no se deberían a alteraciones hipotalámicas de Kiss1 ni a los niveles de esteroides circulantes. Además, los ratones GABAB1KO adultos presentaron un aumento drástico de Kiss1 en áreas extra hipotalámicas (MeA, BNST y Septum) relacionadas con la reproducción y la conducta sexual. En conclusión, GABA, a través de sus RGABAB, interactuaría con GnRH y kisspeptina en la regulación del eje gonadotrófico de manera diferencial durante el desarrollo y entre los sexos, alterando la reproducción.

Abstract:
Kisspeptin, GnRH and GABA play an important role in the control of the gonadotrophic axis, although the interaction between them is not well known. Previous studies in mice which lack of functional GABAB receptors (GABAB1KO) point to reproductive alterations, mainly in females. Our hypothesis was that GABA, through GABAB receptors (GABABRs), acts in the regulation of reproduction and impacts on the GnRH/Kisspeptin systems in the brain, along development and in adulthood. We demonstrated for the first time the co-localization of the RGABAB1 subunit in AVPV/PeN and ARC Kiss1 neurons. The lack of functional GABABRs impact differentially according to the stage of life evaluated. While at postnatal day 4 we observed changes in the medial basal hypothalamus, in adulthood we found them in the anterior hypothalamus. However, these changes were not due to alterations in hypothalamic Kiss1 or serum steroid levels. Moreover, adult GABAB1KO mice showed a dramatic increase in Kiss1 expression in extra-hypothalamic areas (MeA, BNST y Septum), which are related to reproduction and sexual behaviour. In conclusion, GABA, through GABABR, interacts with GnRH and kisspeptin in the regulation of the gonadotrophic axis in a different way between sexes and along development. Lack of GABABRs impairs normal reproduction in females.

Ojeda, Fabiana Soledad. "Nectarios extraflorales de especies de Vigna de la Argentina : morfología, origen, función" (2013) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudió la biología reproductiva de cuatro especies de Vigna nativas de la Argentina con potencial forrajero y/u ornamental. Vigna adenantha (G. F. W. Meyer) Maréchal Mascherpa & Stainier, Vigna candida (Vell.) Maréchal Mascherpa & Stainier, Vigna caracalla (L.) Verdc. y Vigna luteola (Jacq.) Benth., en poblaciones naturales y en un cultivo en C.A.B.A. Se investigó la ontogenia, morfología y función de los nectarios extraflorales (NEFs) asociados a las inflorescencias, así como la utilidad de éstos para la taxonomía. Además se exploraron otros aspectos reproductivos relacionados con los NEFs plausibles de contribuir a esta disciplina: morfología de semillas y plántulas, longevidad de las plantas, biología floral y sistema reproductivo. Los caracteres que resultaron útiles fueron la morfología de las semillas y de las plántulas, el tipo de germinación, la longevidad de las plantas, los atributos florales, la cantidad de NEFs, su anatomía y citología. Los NEFs se originan de flores abortivas. La secreción e granulocrina. La ontogenia del primer o único NEF funcional es concordante con el desarrollo del polen y del megagametofito de las flores del mismo nudo. Las hormigas que visitaron los NEFs no constituyeron una defensa biológica contra los fitófagos, tratándose de un mutualismo laxo.

Abstract:
The reproductive biology of four species of Vigna native from Argentina with potential value as forage or ornamental crops, Vigna adenantha (G. F. W. Meyer) Maréchal Mascherpa & Stainier, Vigna candida (Vell.) Maréchal Mascherpa & Stainier, Vigna caracalla (L.) Verdc. and Vigna luteola (Jacq.) Benth., was studied in natural populations and in a culture in C.A.B.A. The ontogeny, morphology and function of the extrafloral nectaries (EFNs) associated with the inflorescences were investigated, as well as the utility of these for taxonomy. Additionally, other reproductive features related with the EFNs that could contribute to that discipline were studied: the morphology of the seeds and seedlings, plant longevity, floral biology and reproductive system. The useful characters were the seed and seedling morphology, germination type, plant longevity, the floral atributes, quantity of EFNs, their anatomy and citology. The EFNs develop from abortive flowers. The secretion is granulocrine. The ontogeny of the first or single EFN coincides with the pollen and megagametophyte development of the flowers in the same node. The ants that visited the EFNs did not constitute a biological defense against phytophages, so this relationship must be interpreted as a lax mutualism.

Rossi, Luis Francisco. "Citogenética y biología de la reproducción en Myrmecophagidae (Xenarthra) de Argentina" (2013-02-22) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La familia Mymercophagidae, constituida por cuatro especies, son mamíferos xenartros con distribución endémica del Neotrópico. Al pertenecer esta familia a un grupo basal en placentados, es de particular interés para el establecimiento de las relaciones filogenéticas en mamíferos. Como constituyente de nuestra fauna autóctona su biología requiere ser cuidadosamente analizada. Se caracterizó citogenética-molecularmente a 39 ejemplares (20 machos y 19 hembras) de Mymercophaga tridactyla (2n=60 y NF=110-12) y 29 ejemplares (17 machos y 12 hembras) de Tamandua tetradactyla (2n=54 y NF 108). Se establecieron dos poblaciones cariológicas para M. tridactyla y una para T. Tetradactyla en su distribución Argentina. El par 1 al igual que otros pares cromosómicos, como los sexuales, resultaron estar compartidos en la familia. Se describió también la morfología de los tractos reproductivos en machos y hembras. El tracto reproductor femenino, reveló características arcaicas (seno-urogenital) presentes en otras especies de Xenarthra. Los machos de Tamandua tetradactyla presentaron inhibición testicular, en relacion con una variación en el tamaño del tracto reproductor y se caracterizó morfométricamente el espermatozoide. Tambien se determinó el ciclo hormonal en hembras de ambas especies resultando poliéstricas anuales.

Abstract:
The four species of the Mymercophagidae family are Xenarthra mammals with endemic distribution in the Neotropics. The basal status of this family, in the placental mammals, makes them important for establishing phylogenetic relationships in mammals. Being part of our native fauna makes it necessary for us to carefully analyze and reformulate again their biology. 39 specimens (20 males and 19 females) of Mymercophaga tridactyla (2n = 60 and NF = 110-12) and 29 individuals (17 males and 12 females) of Tamandua tetradactyla (2n = 54 and NF 108) were characterized cytogenetic and molecularly. Two karyological populations of M. tridactyla and one of T. Tetradactyla were established for their Argentine distribution. The pair 1, as other pairs like the sex chromosomes, was found to be shared in the family. The morphology of the reproductive tracts and hormone cycle in females of both species, which were determined as annual polyestrous, were described. The female reproductive tract showed archaic features (urogenital sinus) present in other species of Xenarthra. The males of Tamandua Tetradactyla showed testicular inhibition, correlated to a size variation of the reproductive tract and the spermatozoon was morphometrically characterized.

Weigel Muñoz, Mariana. "Las proteínas CRISP: desde la fertilización al sistema inmune" (2013-04-22) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las proteínas CRISP (Proteínas Secretorias Ricas en Cisteínas) de mamíferos se encuentran presentes en el tracto reproductor masculino y han sido propuestas como mediadores del proceso de fertilización. En base a ello, y a su alta homología con las proteínas PR1 y Ag5 involucradas en el sistema de defensa, el objetivo de esta Tesis ha sido investigar la relevancia de las CRISP tanto para la fertilidad como para el sistema inmune. Previos resultados de nuestro grupo indican que los ratones knockout para la proteína epididimaria CRISP1 (Crisp1-/-) son fértiles pese a presentar espermatozoides con una menor capacidad fertilizante. Dado que una mutación puede producir fenotipos diferentes según su fondo genético, evaluamos el fenotipo de los animales Crisp1-/- generados en un fondo genético homogéneo. Los resultados revelaron que los machos presentaron no sólo una desventaja en la fertilidad sino también nuevos defectos en parámetros funcionales de los espermatozoides, confirmando la importancia de realizar estudios en animales con diversos fondos genéticos. La proteína testicular CRISP2 participa en el proceso de fertilización y ha sido propuesta como un auto-antígeno capaz de generar orquitis. Con el fin de investigar su relevancia para la fertilidad, ratas macho y hembra fueron inmunizadas con CRISP2, observando que esta proteína es capaz de generar una respuesta inmune específica en animales de ambos sexos, que no genera orquitis ni compromete la fertilidad. Estos resultados sugieren que, a diferencia de CRISP1, CRISP2 no seria un blanco anticonceptivo ni un antigeno responsable de la inmunoifertilidad. En cuanto a CRISP3, observamos que si bien existen dos isoformas en el espermatozoide humano, una de las cuales se libera durante la capacitación y otra que permanece en el espermatozoide capacitado, esta proteína no actuaría como factor decapacitante ni sería relevante para la fertilización. Finalmente, en lo que respecta al posible rol de las CRISP en el sistema inmune, observamos que tanto CRISP3 como su homólogo CRISP1 se expresan en células dendríticas inmaduras y maduras. Más aún, el empleo de animales knockout para CRISP1 reveló que esta proteína modularía el perfil secretorio de citoquinas de las células dendrítricas. En conjunto, los resultados obtenidos indican la relevancia de las CRISP para la regulación tanto de la fertilidad como del sistema inmune.

Abstract:
The CRISP proteins (Cysteine Rich Secretory Proteins), in mammals, are primarily expressed in the male reproductive tract and have been proposed to participate in the fertilization process. Based on this, and considering the high homology between the CRISP proteins and the PR1 y Ag5 proteins involved in the immune system, the objective of the present thesis was to investigate the relevance of CRISP in fertility and in the immune system. Previous results from our group indicated that in spite of been fertile, the CRISP1 knockout mice contain sperm that exhibit a reduced ability to fertilized eggs. Considering that it has been reported that different phenotypes can arise from the same mutation depending on the genetic background, we investigated the phenotype of Crisp1−/− animals of a homogenous background. Results showed that males exhibited not only a disadvantage in fertility but also new defects on sperm parameters, confirming the importance of performing studies in animals with different genetic background. Testicular protein CRISP2 is involved in the fertilization process and has been proposed as an auto-antigen capable of generate autoimmune orchitis. With the aim of investigate its relevance for fertility, male and female rats were immunized with CRISP2. Results showed that this protein is capable of generating a specific immune response in male and female rats that neither generates autoimmune orchitis nor compromises fertility. These results suggest that, differently from CRISP1, CRISP2 would not be a target for immunocontraception or a molecule responsible for immunoinfertility. About CRISP3, we observed that even though two forms of the protein exist in human sperm, one of which is released from the sperm during capacitation and the other one that remains associated with the sperm after the acrosome reaction, this protein would not behave as a decapacitating factor and would not be relevant for fertility. Finally, regarding the role of CRISP in the immune system, we observed that CRISP3 and CRISP1 are expressed in immature and mature dendritic cells. Moreover, the use of CRISP1 knockout animals revealed that this protein would modulate cytokine secretion by dendritic cells. Altogether, the results obtained in the present thesis indicate not only the relevance of the CRISP protein in the regulation of fertility but also of the immune system.

Gervasi, María Gracia. "Participación de la anandamida en la liberación de los espermatozoides del epitelio oviductal bovino" (2013-05-13) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El oviducto de los mamíferos actúa como un reservorio funcional de espermatozoides proveyendo un ambiente que permite su mantenimiento y competencia para la fecundación del oocito. La unión de los espermatozoides con las células epiteliales del oviducto (CEO) prolonga la vida del espermatozoide, retrasando la capacitación, hasta que señales asociadas a la ovulación inducen su liberación. Varias moléculas del fluido oviductal participan en la regulación de la interacción espermatozoide-oviducto. La anandamida es un endocannabinoide que actúa a través de los receptores cannabinoides y ha sido detectada en el fluido oviductal. Previamente demostramos que la anandamida induce la liberación de los espermatozoides de las CEO en bovinos. En este trabajo estudiamos la regulación y el mecanismo de acción de la anandamida en este proceso. Se caracterizó la principal vía metabólica de la anandamida durante el ciclo estral en el oviducto bovino, encontrándose que tanto las CEO como los espermatozoides expresan a las enzimas del metabolismo de la anandamida. Además la mayor concentración de anandamida en el fluido oviductal bovino fue detectada en el momento peri-ovulatorio, siendo el estradiol la hormona involucrada en la vía de activación de este endocannabinoide. Asimismo la anandamida indujo la capacitación espermática y la liberación de los espermatozoides de las CEO a través de los receptores CB1 y TRPV1 con un incremento de Ca2+ espermático. En conjunto, proponemos que en el momento peri-ovulatorio, las hormonas ováricas podrían inducir un incremento de anandamida oviductal favoreciendo la capacitación espermática con la consecuente liberación de los espermatozoides del reservorio oviductal.

Abstract:
Mammals’ oviduct acts as a functional reservoir of spermatozoa, providing an environment that is proper for their maintenance and competence for the fecundation of the oocyte. The interaction of spermatozoa with oviductal epithelial cells (OEC) prolongs spermatozoa’s life, delaying capacitation, until ovulation-related signals induce their release. Several molecules from the oviductal fluid participate in the regulation of the spermoviduct interaction. Anandamide is an endocannabinoid that acts through cannabinoid receptors and it has been detected in oviductal fluid. In previous work, we have demonstrated that anandamide induces spermatozoa release from OEC in bovines. In this work we studied the regulation and the mechanism of action of anandamide in this process. The main metabolic pathway of anandamide during estrous cycle in bovine oviduct was characterized. Both OEC and spermatozoa express enzymes from anandamide metabolism. Also, the highest anandamide concentration in oviductal fluid was found in peri-ovulatory stages, being estradiol the hormone involved in the activation pathway of this endocannabinoid. Also, anandamide induced sperm capacitation and sperm release from the OECs through CB1 and TRPV1 receptors with an increase of intracellular calcium in spermatozoa. From these results we propose that in peri-ovulatory stages, ovarian hormones could induce an increase in oviductal anandamide, promoting sperm capacitation of bound spermatozoa with subsequent release of spermatozoa from the OECs.

Calderón, Pablo Luciano S.. "Ecología molecular de dos especies de cormoranes endémicas de Patagonia (Phalacrocorax magellanicus y P. atriceps)" (2013-05-30) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En la presente tesis se abordarán diversos aspectos de la biología de dos especies hermanas de cormoranes: Phalacrocorax magellanicus (Cormorán cuello negro, CCN) y Phalacrocorax atriceps (Cormorán imperial, CI), utilizándo herramientas moleculares para responder a las preguntas de interés. Estas especies son endémicas de la Patagonia, y comparten muchos de sus requerimientos ecológicos, difiriendo principalmente en lo que respecta a la dispersión post-reproductiva y a los patrones de alimentación. Ambos aspectos han demostrado tener gran influencia en el moldeado de la estructura genética y filogeográfica de otros taxa de aves marinas. Nuestros análisis demostraron que ambas especies presentan una significativa estructuración genética; resultando todo los estimadores (i.e. Fst, Φst) mas altos en el CCN que en el CI, presentando el CI mayores tasas de migración (m) que el CCN, además solo la segunda de éstas especies presentó un clara estructura filogeográfica. Estos resultados son acordes a nuestras hipótesis iniciales, y con lo observado en otros taxa de aves marinas, dado que el CCN es una especie residente anual, que forrajea en las cercanías de su colonia; mientras que el CI es una especie dispersiva con un mayor campo de acción en el mar durante los viajes de forrajeo. Por otro lado, se revisaron aspectos taxonómicos y de la biología reproductiva del CI, la cual es una especie politípica y socialmente monogámica. En éste caso encontramos falta de sustento genético para las subespecies P. atriceps atriceps y P. a. albiventer, aunque si se encontró evidencia soportando la distinción entre P. atriceps y P. bransfieldensis. Además se demostró que el CI presenta una clara correspondencia entre las denominadas monogamia social y monogamia genética, ya que no se encontró evidencia de copulas por fuera de la pareja, como así tampoco de parasitismo intraespecífico de nidada. Palabras clave: Cormoranes, aves marinas, Patagonia, estructura genética, filogeografía, flujo génico, copulas extra pareja.

Abstract:
In this thesis we addressed different aspects of the biology of two sister shag species: Phalacrocorax magellanicus (Rock shag, RS) and Phalacrocorax atriceps (Imperial shag, IS), employing molecular tools to answer our questions. These species are endemic of Patagonia, and share most of their ecological requirements, differing strongly in relation to their non-breeding season dispersion and feeding patterns. These ecological traits have shown to be important at the time of shaping the genetic and phylogeographic structure of other seabird taxa. Our analysis showed that both species have a significant genetic structure, although all estimators (i.e. Fst, Φst) were higher in RS than in IS, the later showed the higher migration rate values (m), also only RS showed a neat phylogeographic structure. These results are in agreement with our staring hypothesis and with the observed in other seabird taxa, because RS is a year-round resident species that forages in the proximities of its colonies (inshore); whereas the IS is a dispersive species with offshore foraging habits. On the other hand, we addressed aspects realted to the taxonomic status and the reproductive biology of P. atriceps, which is a polytypic and socially monogamus species. In this case, we did not find genetic evidence supporting the P. a. atriceps and P. a. albiventer subspecies, although we did find support for the distinction between P. atriceps and P. bransfieldensis. Also, we showed that the Imperial shag presents a clear correspondence between social and genetic monogamy, because we did not find evidence of extra pair paternity, nor intraspecific brood parasitism in it. Key words: shags, seabirds, Patagonia, genetic structure, phylogeography, gene flow, extra pair paternity.

Hurtado, Juan. "Selección sexual post-copulatoria en Drosophila: ¿cuántas moscas no nacen por causa de la competencia espermática?" (2014) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La competencia espermática (CE), ampliamente extendida entre las especies sexuales cuyas hembras son promiscuas, podría representar potentes presiones selectivas promoviendo conflictos intra e intersexuales. Por ello, es considerada un componente dominante de la selección sexual que teóricamente puede disparar evolución adaptativa rápida en caracteres sexuales. Estos caracteres constituyen potenciales barreras reproductivas entre poblaciones divergentes, por lo que la CE también podría facilitar la especiación. El verdadero rol de la CE en la evolución rápida o la especiación, sin embargo, permanece oculto. ¿Que tan frecuente es la promiscuidad de las hembras como para posibilitar la CE? ¿es la CE una fuerza selectiva intensa? ¿su intensidad varía entre las especies? Frente a estas cuestiones, en este trabajo estudiamos la intensidad de la CE y los factores del sistema de apareamiento (conjunto de comportamientos sexuales y reproductivos) que dan cuenta de ella en las especies hermanas Drosophila buzzatii y D. koepferae. Los análisis de promiscuidad que realizamos con hembras inseminadas en la naturaleza revelaron que la incidencia de paternidad múltiple y, por tanto, el riesgo de CE es mayor en D. buzzatii que en D. koepferae. El número estimado de padres por camada fue 3,57 en D. buzzatii y 1,95 en D. koepferae. En consecuencia, la proporción esperada de hembras inseminadas naturalmente por más de un macho fue 0,89 en D. buzzatii y 0,58 en D. koepferae. Según los experimentos de laboratorio, este patrón podría explicarse tanto por la mayor velocidad con la que las hembras inseminadas de D. koepferae utilizan el esperma almacenado, como por la mayor tasa de reapareamiento de las hembras de D. buzzatii. Además, encontramos que el costo reproductivo que la CE impone sobre los machos es también mayor en D. buzzatii. Cuando una hembra inseminada copula con un segundo macho, la fertilidad del primero se reduce alrededor de 71% en D. buzzatii y sólo 33% en D. koepferae. En vista de las estimaciones del riesgo y del costo reproductivo de la CE, concluimos que la selección sexual postcopulatoria o CE representa una fuerza selectiva intensa en D. buzzatii. En esta última pudimos inferir que el 71% del esperma funcional no alcanza la fertilización a causa de la CE, en tanto que en D. koepferae sólo el 6% del esperma funcional perece a causa de la CE. Frente a estos resultados contrastantes, extendimos los experimentos a una tercera especie cercanamente emparentada, D. antonietae, en la cual estimamos que la CE excluye al 69% del esperma funcional. Creemos entonces que la CE tiene un gran potencial para generar evolución adaptativa ya que, en promedio, uno de cada dos espermatozoides no consigue la fecundación a causa de la CE en estas moscas cactófilas.

Abstract:
Sperm competition (SC), which is widespread among sexual species with promiscuous females, may represent strong selective pressures by enhancing intra and intersexual conflicts. Therefore, it is considered a major component of sexual selection that can theoretically trigger rapid adaptive evolution in sexual characters. These traits may promote reproductive isolating barriers between divergent populations, thus SC may also facilitate speciation. The actual role of SC on rapid and adaptive evolution or speciation, however, is poorly understood. Are females promiscuous enough to enable SC? Does SC represent powerful selective pressures? Does its intensity vary among species? In the face of these issues, we studied in this thesis the intensity of SC and the mating system factors (sexual and reproductive behaviours) that account for it in the sibling Drosophila buzzatii and D. koepferae. Promiscuity analyses on wild inseminated females revealed that the incidence of multiple paternity and, in turn, SC risk are greater in D. buzzatii than in D. koepferae. The estimated number of sires per brood was 3,57 in D. buzzatii and 1,95 in D. koepferae. Therefore, the expected proportion of wild caught females inseminated by more than one male was 0,89 in D, buzzatii and 0,58 in D. koepferae. Lab experiments indicated that this pattern is accounted for by the fact that D. buzzatii females retain sperm for longer periods and remate more often than D. koepferae females. In addition, we found that SC imposes a greater reproductive cost in D. buzzatii. When sperm of two different males cooccurred inside a female, first mating male fertility was reduced by 71% in D. buzzatii and only 33% in D. koepferae. Based on the estimations of SC risk and cost, we concluded that postmating sexual selection or SC represents a powerful selective pressure in D. buzzatii. In the latter, we infer that 71% of functional sperm do not reach fertilization because of SC, while only 6% of functional sperm fail because of SC in D. koepferae. In view of these contrasting results, we extended the experiments to a third related species, D. antonietae, in which we estimated that SC excludes 69% of functional sperm. Then, we believe that SC has a great potential to generate adaptive evolution since, on average in these flies, one out of two spermatozoids does not reach fertilization because of SC.

Faut, Mónica. "Rol de los receptores nucleares activados por proliferadores peroxisomales gamma frente al exceso de andrógenos durante la foliculogénesis temprana" (2014) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La reproducción es uno de los procesos fisiológicos con mayor costo energético, tal es así que los mecanismos fisiológicos que controlan el balance energético se hallan ligados a la fertilidad. Existen múltiples endocrinopatías asociadas a desbalances metabólicos, entre ellas el Síndrome de Ovario Poliquístico (SOP). Esta es una de las patologías más frecuentes en mujeres en edad reproductiva y cuya alteración principal es el hiperandrogenismo. Estas pacientes presentan alteraciones en la foliculogénesis temprana dado que, por mecanismos aun no conocidos, no ocurre la selección de folículos dominantes. Con el propósito de dilucidar estos mecanismos, en el laboratorio se ha generado un modelo murino de hiperandrogenización con dehidroepiandrosterona (DHEA) para el estudio del desarrollo folicular temprano. El objetivo principal de este trabajo es evaluar si “es el exceso de andrógenos durante la vida peripuberal el que genera alteraciones en la funcionalidad ovárica” y “cuál es el rol de los receptores nucleares activados por proliferadores peroxisomales de tipo γ (PPARγ) en esta alteración”. En el presente trabajo encontramos que el estímulo con eCG indujo un aumento en el número de folículos, disminuyendo la atresia folicular de manera controlada, sin alterar los procesos apoptóticos. Por otro lado, el aumento en los niveles de progesterona sérica (P4), indica la capacidad esteroidogénica de estos ovarios, permitiéndonos estudiar los efectos del hiperandrogenismo sobre las primeras etapas de la foliculogénesis y la regulación de la esteroidogénesis. En ovarios provenientes de animales hiperandrogenizados, encontramos un aumento en la expresión de proteínas fundamentales, como StAR, mientras que otras enzimas reguladoras, como P450scc, se encuentran disminuídas. Esta alteración provocó una disminución en la producción de P4, generando un efecto deletéreo en estos folículos. Los PPARγ actuarían como factores de transcripción, regulando la expresión de estas enzimas y estimulando la producción de P4 en las primeras etapas de la foliculogénesis, pero no siendo capaz de hacerlo en un ambiente hiperandrogénico. En estas condiciones, se produce un desbalance oxidativo en donde el GSHt es consumido rápidamente generándose daño a lípidos, lo cual alteraría la estructura de las membranas, provocando que las células no respondan correctamente al ambiente que las rodea, y entrando en un estado proapoptótico. De esta manera, el folículo entra en atresia.

Abstract:
Reproduction is one of the physiological processes with higher energy costs, that is so the physiological mechanisms that control energy balance are linked to fertility. There are multiple metabolic imbalances associated endocrinopathies, including Polycystic Ovary Syndrome (PCOS). This is one of the most frecuent pathology in women of childbearing age and whose main alteration is hyperandrogenism. Women with PCOS have many troubles during early folliculogenesis given that, by unknown mechanisms, the dominant follicles can´t be selected. To try to elucidate this phenomenon, in the laboratory we have generated a rat model of early follicular development with dehydroepiandrosterone (DHEA). The main objective of this work is to evaluate if "it´s the excess of androgens during peripubertal life that generates alterations in ovarian function" and "Which is the role of peroxisome proliferator-activeted receptors γ (PPARγ) in this condition". In this work, we found that ECG stimulation induces an increase in the number of follicles, decreasing the follicular atresia in a controlled manner, without exacerbating apoptotic processes. In the other hand, an increase in the serum progesterone (P4) indicates the steroidogenic capacity of these follicles, allowing us to study the effects of hyperandrogenism on the early stages of folliculogenesis and the regulation of the steroidogenic pathway. Ovaries from animals treated with DHEA, we found an increase in the expression of key proteins such as StAR, while others regulatory enzymes are diminished, such as P450scc. This alteration causes a decrease of P4, producing a deleterious effect on these follicles. PPARγ act as transcription factor of these enzymes by stimulating the production of P4 in the early stages of folliculogenesis, but not being able to do so in a hyperandrogenic environment. In these conditions, GSHt is rapidly consumed which increases the damage to lipids, altering the membrane structure and causing the cells do not respond to the surrounding environment, and entering into a proapoptotic state. In this manner, the follicle is leading to atresia.

Wolfson, Manuel Luis. "Participación del sistema endocannabinoide en el sitio de implantación y de las células infiltrantes en la reabsorción embrionaria inducida por LPS" (2014-03-25) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se ha demostrado una estrecha asociación entre el aborto y cambios en el sistema endocannabinoide (SEC) en linfocitos periféricos de mujeres. En un modelo murino de reabsorción embrionaria (RE) inducida por LPS estudiamos la participación del SEC tanto del sitio de implantación como de las células inmunes infiltrantes y su posible regulación por progesterona (P). En este modelo observamos niveles plasmáticos elevados del principal endocannabinoide, anandamida (AEA). Por otro lado encontramos que la RE inducida por LPS era mucho menor en ratones transgénicos deficientes en el receptor de cannabinoides tipo 1, como así también la disminución de los niveles séricos de P. Demostramos la presencia del SEC en las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de ratón y que la actividad de la enzima metabolizante de la AEA (hidrolasa de amidas de ácidos grasos, FAAH) de las PBMC de ratones preñados es mayor que la de los ratones no preñados. Asimismo observamos un efecto protector de la P sobre la actividad de la FAAH y que el mismo estaba mediado por los receptores clásicos de esta hormona (PR). Encontramos que el 70% de las PBMC estudiadas son linfocitos T, demostramos la presencia de los PR en estas células. Por otro lado el LPS incrementó tanto los niveles de óxido nítrico (NO), como de la enzima que lo sintetiza (NOSi). La P abolió el incremento inducido por el LPS, actuando a través de los receptores de glucocorticoides. Durante la RE, la decidua es infiltrada por células del sistema inmune, sufre importantes daños y finalmente es expulsada. Investigamos el efecto de la infiltración leucocitaria sobre la actividad de FAAH en las deciduas mediante un sistema de cocultivo. Cuando las deciduas de animales controles se cultivaron en presencia de PBMC provenientes de animales preñados tratados con LPS, la actividad de la FAAH decidual disminuyó, efecto que fue revertido por la coadministración de P o la de un inhibidor selectivo de la NOSi, aminoguanidina. Asimismo observamos un aumento en la nitración de las proteínas deciduales y específicamente de la FAAH cuando las decidua se co-cultivaban junto a las PBMC de animales tratados con LPS y que este efecto fue revertido por la P. Este trabajo demuestra que el SEC participa en la RE inducida por LPS y que los cambios de este sistema en la decidua están influenciados tanto por las células inmunes infiltrantes como por alteraciones en el sistema endócrino. Palabras claves: Reabsorción embrionaria - Lipopolisacárido - Sistema endocannabinoide - Células mononucleares de sangre periférica - Progesterona - Anandamida - Óxido nítrico

Abstract:
A close association between abortion and changes of the endocannabinoid system (eCS) in peripheral lymphocytes of women has been demonstrated. In a murine model of LPSinduced embryonic resorption (EmR), we studied the involvement of eCS in the site of implantation and in the infiltrating immune cells and its possible regulation by progesterone (P). We observed an elevated anandamide (AEA) plasma levels, a major endocannabinoid, in this model. On the other hand, we found that the LPS-induced less EmR in cannabinoid receptor 1 (CB1) knock-out mice, together with a lower drop of P plasma levels. We showed the presence of eCS in murine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and that the PBMC’s fatty acid amide hydrolase activity (FAAH, the main catalytic enzyme for AEA) from pregnant mice was higher than from non pregnant mice. Moreover, we observed that P, via its classical receptors for this hormone (PR), has a protective effect on FAAH activity. Given that the 70% of PBMC are lymphocytes, we demonstrated the presence of PR in this subpopulation. Furthermore, LPS produced an increased levels of both nitric oxide (NO) and inducible NO synthase (iNOS). Interestingly, P abolished these LPS effects acting through glucocorticoid receptors. During EmR, decidua is infiltrated with immune system cells, suffers important damage and is finally expelled. Using a co-culture system, we investigated the effects of leukocytary infiltration on decidual FAAH activity. When deciduas from control mice were cultured in presence of PBMC from LPS-treated animals, decidual FAAH activity was abolished. This effect was reverted by the co-administration of P or aminoguanidine (a selective inhibitor of iNOS). When deciduas were co-cultured with PBMC from LPS treated mice, we observed an increase in decidual protein nitration and particularly in FAAH enzyme; an effect that was reverted by P. This work shows that the eCS is involved in the LPS-induced EmR and that changes in the decidua are influenced both by infiltrating immune cells as well as by alterations in the endocrine system. Keywords: Embryonic resorption - Lipopolysaccharide - Endocannabinoid system - Peripheral blood mononuclear cells - Progesterone - Anandamide - Nitric oxide

Volonteri, María Clara. "Efecto de los esteroides testiculares y del órgano de Bidder sobre la actividad del eje hipotálamo-hipófisis-gonadal en el sapo macho Rhinella arenarum (Amphibia, Anura)" (2014-08-13) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los machos de anfibios anuros tienen variaciones estacionales en los andrógenos y los estrógenos plasmáticos, aunque poco se conoce acerca de los cambios estacionales en las gonadotrofinas. En Rhinella arenarum, los andrógenos plasmáticos disminuyen durante el período reproductivo y los estrógenos aumentan. Los objetivos de esta tesis fueron: caracterizar la histología de los órganos involucrados y analizar la localización de factores como GnRH y Kispeptinas en el eje hipotálamo-hipófisis-gonadal; caracterizar la secuencia del ADNc de LHβ y FSHβ de la hipófisis del sapo; estudiar los cambios estacionales en los dos mensajeros por RT-PCR en tiempo real, relacionando dichos cambios con la concentración de esteroides sexuales y la espermatogénesis y estudiar el rol de dichos esteroides en la regulación de las gonadotrofinas. El análisis de los marcos de lectura abiertos de los ADNc de LHβ y FSHβ indicó que las proteínas tienen, respectivamente, 113 y 104 aminoácidos. Los alineamientos múltiples de la secuencia de aminoácidos de ambas subunidades β sugieren que los tetrápodos estudiados tienen 12 cisteínas conservadas y uno (LH) y dos (FSH) sitios de N-glicosilación. LHβ de sapo es más cercana a los teleósteos que a los mamíferos y las aves mientras que FSHβ es más parecida a los mamíferos. La expresión del ARNm de LHβ y FSHβ tiene cambios estacionales, con un perfil de expresión opuesto a la concentración de andrógenos y el tratamiento con andrógenos durante el período reproductivo inhibe la expresión de ARNm LHβ. En conclusión, existe una buena correlación entre los andrógenos y estrógenos plasmáticos y la expresión de LHβ, y entre FSHβ y la espermatogénesis.

Abstract:
Male anuran amphibians have seasonal changes in androgens and estrogens. However, information regarding seasonal variations in gonadotropins is scarce, probably due to the lack of a suitable method for the determination. In Rhinella arenarum, plasma androgens decrease during the reproductive season while estrogens increase. The main objectives of this thesis were to characterize the histology of the brain and the pituitary gland as well as to localize the distribution of GnRH and Kisspeptins in the hypothalamus-pituitary-gonadal axis; to characterize the cDNA sequence of LHβ and FSHβ from toad pituitary, to study seasonal variation in both mRNA by using quantitative real-time RT-PCR and to analyze the relationship between both mRNA with plasma steroids and spermatogenesis. Besides, the role of androgens and estrogens in gonadotropin regulation was studied. The open reading frames analysis of LHβ and FSHβ cDNAs indicate that mature proteins have 113 and 104 amino acids, respectively. Multiple alignments of aminoacid deduced sequences of both β subunits showed that all the tetrapods studied conserve 12 cysteins and one (LH) or two (FSH) N-Glycosylation sites. LHβ is closer to teleosts than to mammals and birds while FSHβ is closer to mammals. The analysis of seasonal changes in LHβ and FSHβ mRNA indicates that transcript levels have seasonal variations and that the profile of androgens is opposite to that of the gonadotropins mRNA. As well, androgen treatments inhibit the expression of LHβ during the reproductive season. In conclusion, there is a good correlation between plasma androgens and estrogens and the expression of LHβ, and between spermatogenesis and FSHβ.

Bourguignon, Nadia Soledad. "El arsenito de sodio, un disruptor endócrino que afecta el eje reproductivo y la homeostasis de la glucosa" (2014-12-18) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La contaminación con As (As) en el agua de bebida se considera una amenaza para la salud en todo el mundo, ya que está asociado a un mayor riesgo de contraer enfermedades como cáncer de piel y pulmón, provocar efectos indeseables sobre el desarrollo, la reproducción las secreciones internas y alteraciones cardiovasculares. Debido a que el As puede actuar como un disruptor endócrino aquí investigamos el efecto de la exposición a As, durante períodos críticos del desarrollo neuroendócrino como es la gestación y las semanas postparto, sobre el eje reproductivo y el metabolismo de la glucosa, en las madres y sus crías. Se administraron 5 (A5) o 50 ppm (A50) de arsenito de sodio en el agua de bebida a ratas Sprague Dawley preñadas, desde el día 1 de gestación hasta el sacrificio (2 meses postparto). Al destete, se dividieron las crías en dos grupos: uno continuó recibiendo el mismo tratamiento que la madre y el otro recibió agua destilada hasta el día del sacrificio (4 meses). En las madres, la exposición a As produjo alteraciones en la homeostasis de la glucosa durante la preñez, probablemente alterando la funcionalidad de las células β, incrementando el riesgo de desarrollar diabetes gestacional. Además, alteró la fisiología reproductiva, sugiriendo el desarrollo de una falla ovárica prematura. Las crías expuestas a As durante el desarrollo presentaron alteraciones en la fisiología reproductiva, principalmente las hembras, mientras que el metabolismo de la glucosa no se vio afectado.

Abstract:
Arsenic contamination in drinking water is considered a worldwide threat to health, that is associated with an increased risk of diseases such as skin and lung cancer, cause undesirable effects on development, internal reproduction secretions and cardiovascular disorders. Because As can act as an endocrine disruptor, here we investigated the effect of As exposure, during critical periods of neuroendocrine development as gestation and postnatal weeks, on the reproductive axis and metabolism of glucose in dams and their offspring. We administered 5 (A5) or 50 ppm (A50) of sodium arsenite in drinking water to Sprague Dawley rats from gestational day 1 until sacrifice (two months postpartum). At weaning the offspring were divided in two groups: one of each continued to receive the same treatment and the other one received distilled water until sacrifice (4 months of age). In dams, As exposure induces glucose homeostasis alterations during pregnancy, probably by altering β-cell function, increasing the risk of developing gestational diabetes. In addition, profoundly impaired reproductive physiology, suggesting premature ovarian failure due to arsenic exposure, may have developed. Offspring rats exposed to arsenic during development present altered reproductive physiology, mainly females, while metabolism is not affected.

Villanueva Gomila, Gabriela Luján. "Estrategias reproductivas de las especies de peces óseos más conspicuas y abundantes en los arrecifes rocosos costeros de la Patagonia norte" (2015-03-23) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los peces exhiben una gran diversidad de patrones reproductivos en comparación con el resto de los vertebrados. Los rasgos reproductivos que presentan todos los individuos de una misma especie constituyen su estrategia reproductiva, mientras que las tácticas reproductivas son aquellas variaciones del patrón típico que los individuos llevan a cabo en respuesta a las condiciones locales. Estas estrategias y tácticas en los peces de arrecife presentan características particulares. Los arrecifes rocosos de los golfos norpatagónicos San Matías (GSM), San José (GSJ) y Nuevo (GN), ofrecen grietas, cuevas y aleros que un ensamble de peces particular, de alrededor de 30 especies, utilizan como refugio. El objetivo general de esta tesis es caracterizar las estrategias reproductivas de las cuatro especies de peces óseos más conspicuas y abundantes que habitan los arrecifes rocosos costeros en la Patagonia norte: mero Acanthistius patachonicus (Jenyns 1840), salmón de mar Pseudopercis semifasciata (Cuvier 1829), escrófalo Sebastes oculatus Valenciennes 1833 (en Cuvier y Valenciennes 1833) y turco Pinguipes brasilianus (Cuvier 1829). Los objetivos particulares incluyen: la descripción de los primeros estadios de A. patachonicus, desde el huevo hasta el juvenil post-transicional (Capítulo I); el estudio de los patrones espacio-temporales de presencia de larvas de P. semifasciata y S. oculatus en el GSJ (Capítulo II), así como el patrón temporal de presencia de los juveniles post-transicionales en GSJ y GN (Capítulo III); y la caracterización de la biología reproductiva de P. brasilianus (Capítulo IV). Sobre la base de los resultados obtenidos y de la información preexistente recopilada se corroboró que las cuatro especies presentan características reproductivas comunes a otras de aguas templadas. Sin embargo, difieren en otros aspectos, tal como se discute a lo largo de esta tesis, lo que da lugar a estrategias diferentes que representan respuestas adaptativas alternativas igualmente exitosas frente a presiones ambientales similares.

Abstract:
Marine fishes have several different reproductive strategies compared to other vertebrates. The reproductive pattern of a species is its reproductive strategy, while reproductive tactics are variations in the pattern as a response to local conditions. These strategies and tactics in the reef fishes present special characteristics. Rocky reefs of Northpatagonian gulfs, San Matias (SMG), San José (SJG) and Nuevo (NG) have cracks, caves and eaves used as shelter by an assemblage of about 30 species of fish. The most conspicuous and abundant species that inhabit these reefs are Acanthistius patachonicus (Argentine sea bass), Sebastes oculatus (Patagonian redfish), Pseudopercis semifasciata (Argentine sandperch) and Pinguipes brasilianus (Brazilian sandperch). The general objective of this thesis was to characterize the reproductive strategies of those species. The particular objectives were to describe the early stages of A. patachonicus from eggs to posttransitional juveniles (Chapter I); to describe the spatio-temporal pattern of larval distribution in P. semifasciata y S. oculatus in SJG (Chapter II) and the temporal pattern of presence in post-transitional juveniles in SJG and NG (Chapter III), and to characterize the reproductive biology of P. brasilianus (Chapter IV). Based on our results and on previous information, we corroborated that the four species have reproductive characteristics similar to species from template waters. However, they differ in other aspects, which are discussed throughout this thesis. Those differences confer them alternative and equally successful adaptive responses to similar environmental pressures.

Torroglosa, María Eugenia. "Biología reproductiva y crecimiento de Brachidontes rodriguezii (d´Orbigny, 1846) en sustratos duros artificiales en playas arenosas de la provincia de Buenos Aires" (2015-03-26) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En las playas arenosas de la provincia de Buenos Aires, la presencia de estructuras como escolleras y muelles ha constituído un sustrato duro alternativo, para el desarrollo de la comunidad bentónica del intermareal rocoso. En la costa bonaerense el mitílido Brachidontes rodriguezii, es la especie dominante de esta comunidad denominada mejillinar. En sustratos artificiales de la localidad de Villa Gesell, se ha observado el desarrollo de una población de B. rodriguezii característica de las costas rocosas. En este estudio se describió el ciclo reproductivo, la talla de primera madurez sexual y la caracterización morfológica gonadal mediante técnicas histológicas. Se registró actividad gametogénica a lo largo del año en machos y hembras. Se evidenció un período de desove comprendido en los meses de febrero y mayo. Se estudió la espermatogénesis y la morfología del espermatozoide mediante microscopia óptica, electrónica de transmisión y de barrido. El espermatozoide resultó ser de tipo primitivo, como se ha descrito para otras especies del género. Así mismo, como resultado de un estudio comparado en el puero de Mar del Plata, se observaron alteraciones en las células espermatogénicas como resultado a la exposición a factores antropogénicos. El crecimiento, se estudió in situ, mediante un método de marcado y recuperación. Se utilizó calceína como marcador y se determinó el incremento de la valva mediante microscopia óptica de florescencia. Se observó un crecimiento diferencial en relación con la temperatura, la talla de los ejemplares y su distribución vertical en relación a la exposición al agua.

Abstract:
The rocky shore of Buenos Aires province has a dominance of mussel beds B. rodriguezii. At sandy beaches, the presence of structures such as docks and piers is an alternative hard substrate for the development of the benthic community of rocky shores. In Villa Gesell town, the development of a population of B. rodriguezii proper of rocky shores has been observed in artificial substrates in the dock. The reproductive cycle and size at first sexual maturity were studied through the histological characterization of the gonad. Males and females with an advanced gonadal development were found throughout both years of study. There was a main spawning event during summer. Size at first sexual maturity was determined during two reproductive periods. Ultrastructure of spermatogenesis and sperm morphology was studied. The sperm morphology is a taxonomic character and can be used in subsequent phylogenetic studies. Our results show that spermatogenesis in B. rodriguezii is very similar to that reported in other mytilids. The spermatozoon was of the primitive or ect-aquasperm type. Also alterations in spermatogenic cells as a result of exposure to anthropogenic factors at Mar del Plata harbour were detected and described. Growth determination was made through a marked and recuperation experiment. For the marking the fluorochrome calcein was used. Growth increment was observed by fluorescence microscopy. There was a relationship between growth, temperature and water exposure and shell length.

Scaia, María Florencia. "Rol de los estrógenos en la fisiología testicular del sapo Rhinella arenarum (Amphibia, Anura)" (2015-03-31) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El órgano de Bidder (BO) es una estructura característica de los bufónidos, entre ellos, Rhinella arenarum. Este órgano expresa varias enzimas esteroidogénicas, incluyendo la aromatasa, responsable de la síntesis de estrógenos. En algunos anfibios se propuso que el estradiol (E2) tiene un efecto negativo directo sobre la función testicular, más allá de la regulación de las gonadotrofinas hipofisarias. En este marco, y utilizando como modelo experimental machos de R. arenarum, los objetivos de esta tesis fueron: analizar la capacidad del BO de producir E2 a partir de sustratos endógenos, medir las variaciones estacionales en la concentración plasmática de E2, determinar la presencia del receptor testicular de estrógenos (ER) y analizar el efecto del E2, a lo largo del año, sobre las enzimas esteroidogénicas citocromo P450 17α-hidroxilasa-C17–20 liasa (CypP450c17) y 3β- hidroxiesteroide deshidrogenasa/ isomerasa (3β-HSD/I), sobre la apoptosis y la proliferación. Los resultados obtenidos muestran que los niveles de E2 plasmático son significativamente menores durante el período pre reproductivo (PreR) y que el BO es una de las principales fuentes de E2. Además, se determinó la presencia de ER en testículo. El tratamiento con E2 no modificó ni la actividad ni la expresión del CypP450c17, mientras que se detectó una inhibición significativa de la actividad de 3β-HSD/I durante el período post reproductivo (PostR). Por otra parte, se observó una elevada tasa de proliferación espermatogonial durante el período reproductivo (R) y una marcada apoptosis durante el PostR. El tratamiento con E2 estimuló la apoptosis solo durante el período R y no se observó efecto en la proliferación de la línea espermatogénica. En conclusión, esta tesis describe las variaciones estacionales en el E2 plasmático, la apoptosis y la proliferación testicular, y demuestra que el E2 regula la esteroidogénesis testicular y la espermatogénesis.

Abstract:
Bufonids, among them Rhinella arenarum, are characterized for having a structure called Bidder's organ (BO). This organ expresses steroidogenic enzymes, including aromatase that is responsible for estrogens synthesis. In several amphibians, it has been proposed that besides regulating pituitary gonadotropins, estradiol could have direct negative effects on testicular function. In this context, the purpose of this study was to describe seasonal variations in plasma estradiol (E2) in males of R. arenarum, to determine the capacity of the BO to synthesize E2 from endogenous substrates, to determine the presence of estrogen receptor (ER) in the testes and to analyze the effect of E2 on testicular steroidogenic enzymes, like the cytochrome P450 17α-hidroxilase-C17–20 liase (CypP450c17) and 3β- hydroxysteroid dehydrogenase/isomerase (3β-HSD/I), and on proliferation and apoptosis of the germ line. Results indicate that plasma E2 is significantly lower during the pre reproductive (PreR) season than during the reproductive (R) and post reproductive (PostR) seasons, and that the BO is one of the main sources of plasma E2. After the presence of ER was determined, testicular fragments were incubated with different concentrations of E2. Results indicate that E2 has no effect either on CypP450c17 activity or on protein level, while it reduces 3β-HSD/I activity only during the PostR season. Furthermore, high rate of spermatogonial proliferation was found during the breeding and elevated apoptosis in the PostR season, mostly in spermatocytes. Treatments with E2 stimulate testicular apoptosis during the R season, with no effect on testicular proliferation all year long. Taken together, these results demonstrate that E2 is involved in the regulation of testicular steroidogenesis and spermatogenesis.

Barrionuevo, Melina. "Inversión parental en el Pingüino de Magallanes (Spheniscus magellanicus): asincronía de eclosión, causas próximas y últimas" (2015-06-25) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Durante los años 2010 a 2013 se estudió la biología reproductiva del Pingüino de Magallanes (Spheniscus magellanicus) que se reproduce en la Isla Quiroga, Santa Cruz, Argentina (47°45´S, 65°53´W). Investigando la inversión parental que realizan los padres en los huevos de una misma nidada, y las consecuencias que esa inversión y otras variables provocan en el crecimiento y mortalidad de los pichones. Además, se investigó la asincronía de eclosión mediante tres aproximaciones diferentes: a) cómo se establece; b) las consecuencias que genera en el crecimiento y la mortalidad de los pichones; y c) el valor adaptativo de la asincronía, poniendo a prueba la “Hipótesis de Reducción de Nidada” a través de manipulaciones de las asincronía de eclosión. Se encontró que las hembras en mejor condición física pusieron segundos huevos más grandes que primeros, y que en el año “bueno” el tamaño de la yema de los segundos huevos fue más grande que la de los primeros. La condición física de los machos determinó la cantidad de pichones criados y el crecimiento del pichón en nidadas con un pichón independizado. Además, el crecimiento también se relacionó con el volumen del huevo y en nidadas tardías los pichones crecieron más rápido cuando los padres fueron de mejor condición. La yema y el año influyeron en la supervivencia, en el año “malo” los segundos pichones murieron más. El grado de asincronía de eclosión dependió de la temperatura del primer huevo durante la puesta, de la diferencia de temperatura entre los segundos y primeros huevos a lo largo de la incubación y del tamaño inicial del parche de incubación. A pesar de no tener un rol en los nidos controles, la asincronía de eclosión en los nidos manipulados afectó el peso y la supervivencia de los pichones en función de su orden de eclosión y el año de estudio. En las nidadas asincrónicas durante el año “malo”, los segundos pichones murieron en mayor proporción que los primeros. En este año, los pichones de las nidadas asincrónicas murieron antes y pesaron más a la independencia que los pichones de las nidadas sincrónicas. Si bien estos son indicios a favor de la “Hipótesis de Reducción de Nidada” en esta especie, no se puede aseverar que así sea debido a que los segundos pichones de nidadas asincrónicas no murieron más en proporción que los segundos de nidadas sincrónicas. La asincronía de eclosión pareciera ser el resultado de una limitación fisiológica a nivel del parche de incubación que provoca un retraso en el comienzo de la incubación y que su efecto sobre los pichones tendría importancia durante años “malos”. PALABRAS CLAVES—Asincronía de eclosión, crecimiento de pichones, incubación, inversión parental, Pingüino de Magallanes, reproducción, Spheniscus magellanicus, temperatura de los huevos.

Abstract:
During the years 2010-2013, we studied the breeding biology of Magellanic Penguin (Spheniscus magellanicus) at Quiroga Island, Santa Cruz, Argentina (47 ° 45'S, 65 ° 53'W). We investigated parental investment between and within clutches of eggs, and the consequences of that investment and other variables in nestling growth and survival. In addition, we explore hatching asynchrony through three different approaches: a) the mechanisms through which it is established; b) the consequences it has on the growth and mortality of chicks; c) the adaptive significance of asynchrony, by testing the "Brood Reduction Hypothesis" through a manipulation of the hatching asynchrony. We found that females in better body condition laid larger second eggs than females in bad body condition and in the "good" year second laid eggs had larger yolk areas than first eggs. The body condition of males determinates the number of nestlings that fledge per nest, and, in those nests where only one chick fledge, the growth of nestlings. Moreover, nestling growth was also associated with egg volume and late-breeders had nestlings that grew faster when parents were in better condition. Yolk and year influenced nestling survival, in the "poor" year second nestlings died more often than first. Hatching asynchrony depended on the egg temperature during the laying period, on the temperature difference between the second and first eggs along the incubation period, and on brood patch area. Although hatching asynchrony did not influence nestling performance in control nests, it do affected the weight and survival of chicks in manipulated nests, according to their hatching order and the study year. In those nests, hatching asynchrony was manipulated and forced. In asynchronous clutches during the "poor" year, the second chick died more often than the first. This year, the chicks died before in asynchronous clutches and nestlings weight at fledging was heavier than in synchronous clutches. While these are evidence in favor of the "Brood Reduction Hypothesis", it is not totally fulfill because the second nestling of asynchronous clutches did not die more often or weight less at fledging than the second nestling of synchronous clutches. Hatching asynchrony seems to be the result of a physiological constraint of the brood patch that causes a delay in the onset of incubation and would affect the nestlings mostly in "bad" years. KEY WORDS— breeding biology, egg temperature, hatching asynchrony, incubation, Magellanic Penguin, nestling growth, parental investment, Spheniscus magellanicus.

de Paola, María Matilde. "Caracterización molecular de las proteínas SNSP y NSF en ovocito de ratón: su rol en la exocitosis de gránulos corticales e implicancias en la fertilidad" (2016-03-10) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La exocitosis de gránulos corticales (EGC) es un tipo de secreción regulada por Calcio que involucra un proceso de fusión de membranas esencial para la fecundación. Luego de la fusión del espermatozoide, los gránulos corticales son exocitados y liberan su contenido al espacio perivitelino. Esta secreción difunde hacia la zona pelúcida, y la transforma en una barrera física, evitando así la poliespermia, y asegurando un desarrollo embrionario normal. El mecanismo molecular que media la fusión de membranas durante la EGC se encuentra escasamente caracterizado y se cree que es mediado por la vía de las SNARE (SNAP receptors). El objetivo principal de este trabajo fue investigar si las SNAP (soluble NSF attachment proteins) y NSF (N-ethilmaleimide sensitive factor), proteínas clave en la vía de las SNARE, median la EGC en ovocito. El análisis de la expresión génica mostró que α SNAP, γ SNAP y NSF se expresan en ovocitos de ratón. Ensayos de Western blot mostraron que la expresión de estas proteínas se mantiene en niveles similares durante la maduración y activación temprana del ovocito. Su localización fue observada principalmente en la región cortical, enriquecida en GC. Para evaluar la función de estas proteínas en la EGC, se perturbó a las SNAP y NSF endógenas previo a la activación de ovocitos en metafase II. La microinyección de α SNAP salvaje y de la mutante dominante negativa L294A de α SNAP inhibió la EGC estimulada por Estroncio. NEM, un inhibidor irreversible de NSF y la microinyección de la mutante dominante negativa D1EQ de NSF inhibieron la EGC. La microinyección de los anticuerpos anti-α SNAP y anti-NSF fueron capaces de inhibir la EGC. Para comprender el rol de α SNAP en la fertilidad femenina, utilizamos la cepa de ratones hyh (hydrocephalus with hop gait), portadora de una mutación puntual (M105I) en el gen de α SNAP. Debido a que el ratón knockout para α SNAP es letal embrionario, los ratones hyh proveen un modelo único para el estudio de su función in vivo. Los resultados obtenidos indicaron que las hembras hyh presentan una severa reducción en su fertilidad debido a una combinación de defectos producidos por la proteína mutada. Nuestros resultados revelan que α SNAP, γ SNAP y NSF son expresados en ovocitos de ratón, que α SNAP y NSF son requeridos para la EGC y que la mutación M105I en α SNAP conduce a defectos multifactoriales en la fertilidad de las hembras hyh. Estos datos demuestran por primera vez que α SNAP y NSF juegan un rol importante en la reproducción femenina.

Abstract:
Cortical granule exocytosis (CGE) is a calcium-regulated secretion that represents a membrane fusion process essential for fertilization. Following sperm fusion, cortical granules (CG) undergo exocytosis to release their content into the perivitelline space. The secretion diffuses into the zona pellucida and transforms it into a physical barrier, avoiding polyspermy and ensuring normal embryonic development. The molecular mechanism of membrane fusion during CGE is still poorly understood and is thought to be mediated by the SNARE (SNAP receptors) pathway. The main purpose of the present study was to investigate if SNAP (soluble NSF attachment proteins) and NSF (N-ethilmaleimide sensitive factor), two key proteins in the SNARE pathway, mediate CGE in an oocyte model. We first investigated the gene expression of SNAP and NSF. RT-PCR results showed that α and γ SNAP (but not β), and NSF are expressed in mouse oocytes. Immunoblotting analysis showed that the expression of these proteins maintains a similar level during oocyte maturation and early activation. Their localization was mainly observed at the cortical region, which is enriched in CGs. To evaluate the function of these proteins in CGE, endogenous SNAP and NSF proteins were perturbed prior to CGE activation in metaphase II oocytes. The microinjection of wild type α SNAP and L294A mutant of α SNAP inhibited CGE stimulated by strontium. NEM, an irreversibly inhibitor of NSF, and the microinjection of the dominant negative mutant D1EQ NSF inhibited CGE. The microinjection of anti-α SNAP and anti-NSF antibodies was able to abolish CGE. Furthermore, in an attempt to further understand the role of α SNAP in female fertility, we used a spontaneous mutant mouse model for α SNAP known as hyh (hydrocephalus with hop gait), carrying a point mutation M105I. Due to α SNAP knockout mice is embryonic lethal, the hyh mice provide a unique in vivo model for in-depth research of α SNAP function. We have demonstrated that hyh female mice exhibit strongly reduced fertility parameters. Our findings revealed that α SNAP, γ SNAP, and NSF are expressed in mouse oocytes, that α SNAP and NSF are required for CGE and that M105I mutation in α SNAP leads to multifactorial fertility defects in hyh female mice. These data demonstrate for the first time that α SNAP and NSF play an important role in female reproduction.

Sánchez, Melisa Celeste. "La descondensación de la cromatina de espermatozoides de mamíferos: estudio de su mecanismo molecular y su posible utilidad como bioindicador del efecto de disruptores endócrinos" (2016-03-18) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A diferencia de las células somáticas, el espermatozoide posee su cromatina empaquetada principalmente por protaminas en lugar de histonas. Las cisteínas presentes en las protaminas forman puentes disulfuro intra e intercatenarios, lo que le proporciona al núcleo espermático gran estabilidad y resistencia para poder atravesar el tracto masculino, el femenino y llegar con su ADN intacto hasta el sitio de fecundación. Luego que el espermatozoide penetra el oocito es imprescindible que se produzca la descondensación de su cromatina para que se reemplacen las protaminas espermáticas por histonas oocitarias. La descondensación de la cromatina involucra dos eventos: se deben reducir los puentes disulfuro (tiorreducción) y removerse las protaminas. Las moléculas involucradas en estos procesos serían el glutatión reducido (GSH) y el heparán sulfato (HS) oocitarios. Cuando este proceso de condensación de la cromatina, que ocurre durante la espermatogénesis para mantener la integridad del espermatozoide, se ve afectado por diversas causas, puede resultar en fallas de la descondensación que se evidencian una vez que el oocito es penetrado. Por otro lado, es sabido que la exposición a tóxicos ambientales puede provocar efectos deletéreos sobre la calidad de los espermatozoides y la fertilidad masculina. Las técnicas de reproducción asistida han podido resolver problemas de motilidad, defectos espermáticos, concentración de gametas muy reducida en el fluido seminal (oligozoospermia) pero todavía no pueden solucionar los defectos de la descondensación del núcleo espermático dentro del oocito. Esto pone en evidencia la importancia del proceso de descondensación, que no puede ser reemplazado por las técnicas de reproducción asistida, y permite pensar en utilizarlo como un posible indicador del efecto de disruptores endocrinos, tanto in vivo como in vitro. Los objetivos de esta tesis fueron (1) avanzar en el estudio del mecanismo de la descondensación de la cromatina de espermatozoides, así como también en su (2) rol como posible bioindicador de efectos deletéreos causados por tóxicos ambientales o ingeridos, tales como el alcohol y el plaguicida endosulfán. En primer lugar, fue posible caracterizar el sistema de descondensación in vitro en el modelo de ratón al coincubar los espermatozoides con distintos glicosaminoglicanos y GSH, determinándose de esta manera las moléculas candidatas a ser posibles agentes descondensantes, las concentraciones y tiempos óptimos de incubación. Como consecuencia de esto, fue posible detectar un efecto sinérgico existente entre la heparina (utilizada como equivalente molecular del heparán sulfato) y el dermatán sulfato, los únicos glicosaminoglicanos estudiados con potencial capacidad descondensante. El efecto de estos dos glicosaminoglicanos también fue evaluado mediante la técnica de microscopia electrónica de transmisión, la cual puso en evidencia los cambios sufridos por los espermatozoides durante el proceso de descondensación. Una vez caracterizado el sistema, se logró evidenciar el aumento de la descondensación in vitro que ocurre cuando se incuban los espermatozoides con endosulfán o etanol, como también luego de la ingesta de etanol. Además, fue posible evaluar el efecto del plaguicida sobre la fragmentación del ADN, así como también si existe alguna correlación entre la misma y la descondensación de la cromatina. Los efectos del etanol observados in vitro fueron confirmados en experimentos in vivo, en los cuales se intoxicaron ratones macho para realizar experimentos de fecundación in vitro. Estos son los primeros resultados obtenidos descondensando in vitro en presencia de heparina y GSH, espermatozoides previamente incubados con endosulfán o etanol, que ponen de manifiesto que este ensayo podría utilizarse como centinela para evaluar posibles efectos de tóxicos ambientales o ingeridos.

Abstract:
In contrast to somatic cells, sperm has its DNA packed mainly by protamines rather than histones. The presence of cystein in protamines allows for the formation of intra and interchain disulfide bonds, giving great stability and resistance to the sperm nucleus, enabling it to travel through the male and female reproductive tracts and reach the site of fertilization with its DNA intact. An essential step, once the sperm enters the oocyte, is the decondensation of its chromatin by replacing sperm protamines by oocyte histones. Chromatin decondensation involves two events: disulfide bridges should be reduced (thio-reduction) and the protamines removed. The molecules involved in these processes in vivo would be reduced Glutathione (GSH) and heparan sulfate (HS) present in the oocyte. When this process of chromatin condensation, which occurs during spermatogenesis to maintain the integrity of sperm, is affected by various causes, decondensation failure may result following oocyte penetration at fertilization. It is also well known that exposure to a toxic environment can cause deletereous effects on sperm quality and male fertility. Assisted reproduction techniques have been successful in solving problems of motility, various sperm defects, very low concentration of gametes in seminal fluid (oligozoospermy) but still cannot solve the shortcomings of the decondensation of the sperm nucleus within the oocyte. This highlights the importance of the decondensation process, which cannot be replaced by assisted reproduction techniques and led us to think of its possible use as a bioindicator of the effect of endocrine disruptors, both in vivo and in vitro. The objectives of this thesis were (1) to advance in the study of the mechanism of sperm chromatin decondensation as well as (2) its role as a possible bioindicator of environmental toxicity caused by toxic agents, such as alcohol and the pesticide endosulfán. First, it was possible to characterize the process of decondensation in vitro in the mouse by incubating sperm with different glycosaminoglycans and GSH, which led us to identify molecules which could behave as putative decondensing agents, concentrations and optimal incubation times. Subsequently, it was possible to detect a synergistic effect between heparin (as a substitute for heparan sulfate) and dermatan sulfate, the only glycosaminoglycans studied with potential to decondense the sperm nucleus in vitro. The effect of these two glycosaminoglycans was also evaluated on sperm morphology and ultrastructure through transmission electron microscopy, which allowed us to visualize the changes suffered by sperm during the decondensation process. Once the system was characterized, we were able to demonstrate the increase in in vitro decondensation that occurs when sperm are incubated with endosulfán or ethanol, as well as after ethanol ingestion. In addition, it was possible to assess the effect of this pesticide on DNA fragmentation as well as its possible correlation to chromatin decondensation. The alcohol effects observed in vitro were confirmed with in vivo experiments in which male mice were intoxicated and their sperm subsequently used to perform in vitro fertilization. These are, to our knowledge, the first results obtained decondensing in vitro in the presence of heparin and GSH, sperm previously incubated with endosulfán or ethanol, suggesting that the sperm decondensation assay could be used as sentinel to evaluate possible effects of environmental or ingested toxic agents.

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