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Weisz, Ariel Dan. "Interacción de TiO2 con Carboxilatos Acuosos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se reportan los resultados del estudio espectroscópico (ATR-FTIR) de la formación de complejos superficiales por químisorción de una serie de ligandos orgánicos (ácidos alifáticos dícarboxílicos, ácido salicílico y carboxipiridinas) sobre TiOz. Los espectros obtenidos a diferentes concentraciones de complejante y diferentes valores de pH se utilizaron para derivar el número mínimo de especies superficiales independientes requeridas para interpretar los datos, sus espectros FTIR, y sus constantes de estabilidad de tipo Langmuir. La información espectroscópica permitió la caracterización estructural de los complejos superficiales, y las constantes de estabilidad de una serie de complejos relacionados se usó para analizar las tendencias de estabilidad. Se muestra que la complejación superficial puede describirse como la quimisorción disociativa electroneutra del ácido neutro, involucrando frecuentemente la formación de quelatos mononucleares con sitios superficiales. Se encuentra una relación lineal de energía libre (LGER) entre la estabilidad de los complejos superficiales y la primer constante de acidez de los ligandos con una pendiente de 1.7. El tipo de estudio presentado en esta tesis será útil en la comprensión del comportamiento de mezclas de contaminantes en el curso de su tratamiento mediante catálisis heterogénea usando dióxido de titanio.

Abstract:
In this work we report the results of a spectroscopic (FTIR-ATR) study of the formation of surface complexes by chemisorption of a series of organic ligands (dicarboxylic aliphatic acids, salicylic acid and carboxypyridines) onto TiO2. The spectra obtained at different complexant concentrations and pH values were used to derive the minimum number of independent surface complexes required to interpret the data, their FTIR spectra, and their Langmuir-type stability constants. The spectroscopic information allows the structural characterization of the surface complexes, and the stability constants give a data set on a series of related complexes that was used to analyze the stability trends. It is shown that surface complexation can be described as the dissociative electroneutral chemisorption of the neutral acid, frequently involving the formation of mononuclear surface chelates. A linear Gibbs energy relationship (LGER) between the stability of the surface complexes and the first acidity constant of the ligand is found with slope 1.7. The type of study presented here should be useful in understanding the behavior of pollutant mixtures in the course of their treatment by heterogeneous photocatalysis using titanium dioxide.

Wald, Flavia A.. "Caracterización bioquímica y molecular de la glicosiltransferasa autocatalítica UDP-glucosa : proteína transglucosilasa" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La enzima UDP-glucosa: proteína transglucosilasa (UPTG) es una glicosiltransferasa autocatalítica descripta tanto en tubérculo de papa (Solanum tuberosum L.) como en endosperma de maíz (Zea mays), involucrada en la síntesis de polisacáridos. Encontramos diferentes isoformas de UPTG de papa las cuales se expresaron en E. coli y se caracterizaron bioquímicamente. Las isoformas UPTG1 y UPTG2 no sólo presentan características cinéticas diferentes sino que además se expresan diferencialmente en los diversos tejidos de la planta. Se encontró una alta expresión de los transcriptos de UPTGl en estolones, tubérculos y raíces mientras que la expresión de los mensajeros de UPTG2 era elevada en todos los tejidos analizados, principalmente en hojas y tallos. El análisis del ADN genómico de papa sugiere la existencia de nuevas isoformas de UPTG, lo que sumado a la presencia de proteínas homólogas a la UPTG en otras especies vegetales, muestran que dichas glicosiltransferasas autocatalíticas constituirían una pequeña familia multigénica presente sólo en plantas superiores. Los estudios bioquímicos de la reacción de glicosilación de la UPTG mostraron que un único residuo de glucosa, xilosa o galactosa se une a la enzima en configuración β, con un tipo de unión que se comportaria más bien como las del tipo N. Además, el análisis de la reversibilidad de la reacción de glicosilación mostró que la UPTG catalizaría la ruptura del enlace glicosídico. El estudio de la naturaleza del inhibidor de la UPTG en maíz reveló que éste seria la isoforma SS1 de la sacarosa sintetasa presente principalmente en el endosperma. La isoforma SS1 ha sido relacionada recientemente con la biosíntesis de polisacáridos de pared celular y su asociación con la UPTG de maíz aporta una nueva evidencia a favor de dicha hipótesis. Los resultados de esta Tesis muestran que la UPTG de papa podía ser fosforilada in vitro. El tratamiento con fosfatasa de la proteína UPTG recombinante mostró que la defosforilación de la UPTG incrementa su glicosilación y que a su vez, la glicosilación de la enzima favorece la aparición de formas de mayor tamaño molecular inmunológicamente relacionadas con la UPTG. Se piensa que la defosforilación de UPTG incrementaría su glicosilación promoviendo la asociación de la proteína a otras proteínas o a sí misma. Se propone que la proteína UPTG se asociaría funcionalmente a elementos de anclaje, desconocidos hasta el momento, presentes en la membrana del Golgi facilitando el transporte de los UDP-azúcares sustratos de la biosíntesis de pectinas y hemicelulosas. Así, no podemos descartar que la defosforilación de la UPTG favorezca su asociación a membranas lo que podria involucrar un mecanismo de localización de la enzima. Los resultados con respecto al análisis de la expresión de ARNm de UPTG, sugieren que la enzima se expresaría principalmente en tejidos cuyas células estarían en estado de activo crecimiento y/o elongación. Basados en el hecho que en tejidos en elongación hay una activa síntesis principalmente de pectinas y hemicelulosas, los datos mostrados constituyen una fuerte evidencia que apoya la hipótesis que propone que la UPTG estaría involucrada en la síntesis de los polisacáridos no celulósicos que componen la pared celular vegetal. Más aún, la existencia de isoenzímas redundantes de UPTG sugiere que la enzima formaría pane de un sistema complejo esencial para la viabilidad de la célula vegetal.

Abstract:
The enzyme UDP-glucose: protein transglucosylase (UPTG) is an autocatalytic glycosyltransferase involved in the biosynthesis of polysaccharides, which was described in potato tubers (Solanum tuberosum L.) and in maize endosperm (Zea mays). We found at least two different UPTG isoforms from potato, we expressed the recombinant proteins in E. coli and their biochemical characteristics were determined. UPTG1 and UPTG2 isoforms not only showed different kinetic properties but also a differential mRNA expression in potato plants was observed. While UPTG1 expression was found predominantly in stolons, tubers and roots, UPTG2 expression was high in all the analyzed tissues but mainly in stems and leaves. The analysis of the potato genomic DNA suggested the existence of new isoforms of UPTG, what in addition to the presence of homologue UPTG proteins showed that these autocatalytic glycosyltransferases constitute a small multigenic family present only in higher plants. The biochemical analysis of the UPTG glycosylation reaction showed that only one residue of glucose, xylose or galactose was bound to the enzyme in β configuration and that the carbohydrate behaved like N-glycosidically linked. Furthermore, when we analyzed the reversibility of the glycosylation reaction we found that in the presence of UDP, the glycosidic bond between UPTG and glucose was broken. The nature of the UPTG inhibitor in maize was studied. We found that the SS1 isoform of sucrose synthase that is expressed predominantly in the endosperm, was responsible for UPTG inhibition. This isoform was recently related to cell wall polysaccharide biosynthesis and its association with UPTG provides a new evidence that supports this hypothesis. The Thesis work showed that the potato UPTG can be phosphorylated in vitro. After phosphatase treatment, an increase in UPTG glycosylation was observed. Furthermore, the enzyme glycosylation promotes the appearance of high molecular weight polypeptides, which are immunologically related to UPTG. We think that UPTG dephosphorylation could stimulate its glycosylation favoring its association with other proteins or with itself. We suggest that UPTG may functionally associates to anchoring elements, yet unknown, that are present in Golgi membranes facilitating the UDP-sugars transport from the cytosol for the synthesis of pectins and hemicelluloses. We cannot rule out that UPTG dephosphorylation could favor its association to membranes what may involve a localization mechanism of the enzyme. The results related to the expression of UPTG mRNA, suggested that the enzyme might be mainly expressed in actively growing or elongating tissues. The fact that in elongating tissues there is an active synthesis of pectins and hemicelluloses in addition to the results presented here, represent a strong evidence that supports the hypothesis that UPTG is involved in the synthesis of noncellulosic polysaccharides that constitute the plant cell wall. Moreover, the existence of redundant UPTG isozymes points out that the enzyme may form part of a complex system essential for the viability of the plant cell.

Vázquez, Stella Maris. "Descripción, caracterización y regulación de receptores alfa sub 2- adrenérgicos en células tumorales y no tumorales de mama humana" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se han descripto interacciones entre el stress y el cáncer, aunque su mecanismo es aún desconocido. Las catecolaminas interaccionan con diferentes receptores adrenérgicos de membrana, produciendo acciones específicas según el receptor presente en la célula en cuestión. Por esta razón, el propósito de Ia presente Tesis fue la descripción de los receptores α2-adrenérgicos en líneas celulares tumorales y no tumorales de mama humana y determinar su acción biológica. Para dicho estudio no sólo se utilizaron las líneas celulares ya establecidas sino que también se puso a punto una técnica para desarrollar cultivos primarios a partir de tumores de pacientes con cáncer de mama de los que surgieron nuevas líneas. Estas líneas son transformadas (dado que son capaces de crecer en agar blando) y epiteliales (expresan citoqueratinas). Todas ellas responden con un aumento en la proliferación celular al ser incubadas con estrógenos, progesterona y EGF. Se describe, entonces, por primera vez la presencia de receptores α2-adrenérgicos en células mamarias. Su expresión fue analizada a nivel de ARN (por RT-PCR) y a nivel de proteína (por unión al antagonista específico -rauwolscina). Además, la activación de estos receptores está asociada con un aumento de la proliferación celular (evaluada por incorporación de -timidina). Esta descripción y caracterización podrían brindar al conocimiento científico un vasto campo de investigación.

Abstract:
Interactions between stress and cancer have been described, although their mechanism is yet unknown. Catecholamines interact with different membrane adrenergic receptor, causing specific actions depending on which cellular receptor is present. For this reason, the aim of this Thesis was the description of α2-adrenergic receptors in tumoral and non-tumoral human breast cell lines and their biological action determined. For this study, not only cell lines already established were used, but also a technique for culturing human breast tumors was developed. These primary cultures allowed the establishment of different cell lines. These cells lines are transformed (they are able to grow in soft agar) and epithelial (they express cytokeratins). All of them showed an enhancement of proliferation with estradiol, progesterone and EGF. The presence of α2-adrenergic receptors has been described for the first time in mammary cells. Their expression was analyzed at the ARN level (by RTPCR) and at the protein level (by binding to specific antagonist -rauwolscine). Moreover, receptor activation is associated by an increase in cell proliferation (evaluated by -thymidine incorporation). The description and characterization could greatly improve scientific knowledge. The characterization of their receptors could encourage both clinical and epidemiological trials in order to assess their actions in breast cancer.

Volpedo, Alejandra. "Estudio de la morfometría de las sagittae en poblaciones de sciaenidos marinos de aguas cálidas del Perú y aguas templado-frías de Argentina." (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los otolitos (sagitta. asteriscus y lapillus) son estructuras complejas compuestas por carbonato de calcio, otros minerales y una matriz proteica. Los otolitos se encuentran en el oído interno de los teleósteos. La forma y estructura de los otolitos son específicas de cada taxón. Por esta razón se los utiliza para identificar especies en estudios biológicos y ecológicos. Los sciaenidos son un grupo de peces de importancia comercial y el manejo de este recurso es un tema prioritario para las economías locales y nacionales de los países que explotan estas especies. La propuesta de este trabajo es estudiar diferentes aspectos de las sagittae de sciaenidos marinos de Argentina y Perú. Analizando la morfología, la morfometría y la composición química de las sagittae en relación al ambiente. Los sciaenidos estudiados de la costa de Buenos Aires son: Cynoscíon guatucupa, Macrodon ancylodon, Menticirrhus americanus, Micropogonias fumieri, Paralonchurus brasiliensis y Umbrina canosai, y de Grau (Perú) son: Cynoscion analis. Lan’mus acclivis, Micropogonias altipinnis, Paralonchurus brasiliensis y Sciaena deliciosa. Se evalúa la identificación de stocks pesqueros de las especies a través de la morfología, morfometría y composición de elementos traza de la sagittae. Además la composición de elementos de las sagittae es evaluada como bioindicador de las condiciones ambientales. Se elaboraron claves dicotómicas para la identificación específica de los otolitos utilizando caracteres de la topografía de la cara interna, externa y vista lateral de la sagitta. Se analizaron los patrones morfológicos genéricos y las variaciones intraespecíficas relacionadas con cambios en el desarrollo de los peces. Las variaciones en la morfología del desarrollo de la sagitta encontradas en C. guatucupa, C. analis, M. americanus, M. fumieri y P. brasiliensis se asociaron a cambios en los parámetros físico-químicos de los diversos hábitats, que producirían cambios en la acumulación del carbonato de calcio en la sagitta durante el ciclo de vida del pez. En las sagittae de adultos de M. fumieri provenientes de las diferentes localidades bonaerenses. se registró variabilidad morfológica y morfométrica, lo que permite inferir la presencia de por lo menos dos stocks pesqueros que posiblemente corresponderían a dos grupos poblacionales diferentes. El análisis morfométrico no mostró diferencias entre las sagittae derecha e izquierda de cada espécimen. Las dimensiones de las sagittae están influenciadas por factores ambientales (temperatura, salinidad y latitud) y el crecimiento somático del pez, mientras que las dimensiones del ostium y la cauda estarían influenciadas principalmente por un patrón genético. Para los caracteres morfométricos de las sagitfae de C. guatucupa, M. americanas, M. fumieri y C. analis se halló una correlación negativa con la temperatura y una correlación positiva con la salinidad y con la latitud, en otras palabras las sagittae de grandes tamaños se presentan a bajas temperaturas y estas áreas corresponden a altas latitudes. Del análisis de los elementos traza de las sagittae se estableció que estos elementos precipitan homogéneamente sobre la superficie del otolito. Las sagittae de M. fumieri presentaron elementos comunes a todas las localidades costeras de Buenos Aires estudiadas (estroncio y potasio) y elementos particulares de las sagittae de los peces del Partido de La Costa (fósforo y cromo) y de San Blas (cadmio). La presencia de elementos particulares estaría estrechamente relacionada con el tipo de fuentes de contaminación antrópica que influencian las zonas de cría de ambos grupos de peces. En consecuencia, las sagittae pueden ser utilizadas como bioindicadores de la calidad del agua. Las sagittae de C. guatucupa, M. ancylodon, M. americanus y M. fumieri poseen una mayor concentración relativa de estroncio en San Blas con respecto a las del Partido de La Costa. Esto puede asociarse a las diferencias de temperatura entre ambas áreas que afectaría la precipitación del estroncio. Esta característica sería una herramienta útil para la identificación de stocks pesqueros bonaerenses.

Abstract:
Otoliths (sagitta, asteriscus and lapillus) are complex structures composed of calcium carbonate, other minerals, and a protein matrix. Otoliths are located in the internal ear of the teleost fishes. The shape and structure of otoliths are specific for each species. For this reason, otoliths are used to identify species in biological and ecological studies. Sciaenids conform a group of fishes of commercial importance, so the handling of this resource is a high-priority topic for the local and national economies of countries that exploit these species. The purpose of this work is to study different aspects of the sagittae of marine sciaenids from Argentina and Peru. The morphology, morphometry and chemical composition has been analyzed in relation to the environment. The sciaenids studied from Buenos Aires coast are: Cynoscion guatucupa, Macrodon ancylodon, Menticirrhus americanus, Micropogonias fumieri, Paralonchurus brasiliensis and Umbrina canosai, while from Grau (Peru) they are: Cynoscion analis, Larimus acclivis, Micropogonías altipinnis, Paralonchurus brasiliensis and Sciaena deliciosa. The identification of fishing stocks species through the morphology, morphometry and elemental composition of the sagittae is evaluated. Moreover, the elemental composition has been evaluated in order to be used as bioindicator of environmental conditions. An otolith specific identification key has been elaborated using the characteristics of the topography of internal and external faces and of the lateral view of sagitta. Generic morphological patterns and intraespecific variations related with changes in the development of the fish have been analyzed. Morphological variations have been found in the sagittae of C. guatucupa, C. analis, M. americanas, M. fumieri and P. brasíliensis associated to changes in physical and chemical parameters of the habitats that would produce changes in the deposition of the calcium carbonate on the sagitta during the life cycle. Morphological and morphometrical variability has been recorded in the sagittae of M. fumieri adults coming from different coastal localities from Buenos Aires, which allows to infer the presence of at least two population groups. The morphometric analysis showed no differences in the right and left sagittae of each species. The dimensions of the sagittae are mainly influenced by environmental factors (temperature, salinity and latitude) and somatic growth of the fish, while the dimensions of ostium and cauda would be mainly influenced by the genetic pattern, the evolutionary history of the species and the ontogeny. For C. guatucupa, M. americanus, M. fumieri and C. analis, a negative correlation of the temperature and a positive one of the salinity and latitude with the morphometric characteristics of the sagittae were recorded (i.e. sagittae of bigger size at low temperature, and high latitude environments). The analysis of trace elements of the sagittae showed that they precipitate homogeneously on the surface of the otolith. The sagittae of M. fumieri have some elements (strontium and potassium) in common in all the coastal localities studied from Buenos Aires, while phosphorus and chromium were present only in otoliths from Partido de La Costa, and cadmium in the ones from San Blas. The presence of particular elements might related with the type of antropic pollution that would influence the nursery areas of fishes. As a consequence, sagittae could be used as bioindicadors of water quality. The sagittae of C. guatucupa, M. ancylodon, M. americanus and M. fumieri have higher relative concentration of strontium in San Blas than in Partido de La Costa. This may be associated to differences in temperature between both areas that would affect the precipitation of strontium. This characteristic could be an useful tool for the identification of fishing stocks from Buenos Aires.

Vinocur, Alicia Liliana. "Taxonomía y ecología de algas de agua dulce de cuerpos lénticos de península Potter (Isla 25 de mayo, Shetland del Sur, Antártida)" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Durante las campañas antárticas de verano de 1995-96 y 1996-97 se relevaron un total de 26 cuerpos de agua lénticos ubicados en Península Potter (Isla 25 de Mayo, Shetland del Sur, Antártida). Para la zona en estudio se registraron 182 entidades algales entre especies y taxones infraespecíficos, distribuidos en 84 géneros. Las Bacillariophyceae presentan la mayor riqueza específica, seguida por las Cyanobacteria y Chlorophyceae. El 71 % de la ficoflora está formada por entidades cosmopolitas o ampliamente distribuidas en el mundo. Cabe destacar que el 10 % del total de la flora constituyen nuevos registros para el Continente Antártico, siendo las Chlorophyceae las que presentan la mayor proporción de nuevos registros. Predominan los taxones epilíticos, seguidos por los planctónicos y en menor proporción representantes de otras comunidades. Cabe señalar que el 79 % de las entidades son raras o poco frecuentes en los sitios muestreados. La tipificación de 26 cuerpos de agua en base a sus características físico-químicas y a su composición fitoplanctónica permitió diferenciar 5 grupos de lagos distribuidos a lo largo de un amplio gradiente trófico, siendo la mayoría ultraoligotróficos. Las diversas características limnológicas de cada uno de los cuerpos de agua estudiados son el resultado de la combinación de una serie de factores: el tipo de sustrato, la presencia de animales y/o vegetación en la cuenca, la exposición a los vientos, la proximidad al mar, los ciclos de congelamiento-descongelamiento y los ciclos de mezcla de las aguas. La macrofauna sería uno de los factores más importantes en los procesos de eutrofización de estos ambientes lacustres (laguna B). Por otra parte, los cuerpos de agua afectados por el rocío marino y aquellos próximos o dentro de pingüineras se caracterizan por elevados valores de conductividades (lago F, laguna B). En general, los grupos algales dominantes tanto en riqueza como en densidad fueron Bacillariophyceae y Cyanobacteria. La mayor parte de los taxones registrados fueron ticoplanctónicos (epilíticos o asociados a la nieve o a suelos húmedos). Las especies euplanctónicas fueron en su mayoría flageladas o pequeñas y cocoides. La tipificación de los 26 cuerpos de agua en base a la comunidad epilítica, permitió describir 6 tipos de asociaciones algales. Las Bacillariophyceae predominaron en cuanto a riqueza específica, seguidas por las Cyanobacteria y Chlorophyceae. Las algas euepilíticas fueron las mejor representadas y también se registraron muchos taxones aerófilos. Muchos cuerpos de agua presentaban la cubeta cubierta por musgos y presencia de metafiton. El aspecto macroscópico de los “microbial mats” fue muy variable dependiendo de la presencia o frecuencia relativa de los distintos taxones algales, la morfología del sustrato y la acumulación del sedimento. Dominaron las Cyanobacteria cocoides y filamentosas que formaban la matriz de los “microbial mats” (en especial, especies de Gloeocapsa y Leptolyngbya) y sobre esa matriz se aglutinaban, en general, especies de Bacillariophyceae pennadas. El fósforo reactivo soluble, la conductividad y la clorofila-a fitoplanctónica fueron identificadas como las variables más importantes en la distribución algal de los “microbial mats” (Grupos α y β). Sin embargo, la composición de los “microbial mats” de los restantes cuerpos de agua reunidos en el Grupo γ, no pudo ser explicada en base a las variablesconsideradas. Probablemente estén involucrados otros factores, tales como diferencias en la habilidad colonizadora de las especies y en las tolerancias a variables ambientales no consideradas. Al analizar en particular la estructura y dinámica del fitoplancton de la laguna B y de los lagos H, F y W se observó en general que las comunidades fitoplanctónicas estaban dominadas tanto en riqueza como en densidad por taxones ticoplanctónicos de Bacillariophyceae y Cyanobacteria. Al comparar la estructura y dinámica del fitoplancton para cada cuerpo de agua durante las 2 campañas de verano realizadas, se observó que en general la sucesión estival fue muy variable y pudo ser fácilmente modificada por factores climáticos cambiantes como los vientos, la temperatura, las precipitaciones, etc.

Abstract:
An intensive survey of 26 water-bodies was carried out during the summer Antarctic season of 1995-1996 and 1996-1997 at Potter Peninsula (King George Island, South Shetland, Antarctica). 182 algal entities, among species and infraspecific taxa distributed in 84 genera, were registered in the study area. Bacillariophyceae presented the highest specific richness followed by Cyanobacteria and Chlorophyceae. Either cosmopolitan or world-widely distributed entities comprised 71 % of the ficoflora. 10 % of the total taxa constitute new registers for the Antarctic Continent, most of them Chlorophyceae. The epilithic taxa are dominant followed by planktonic taxa and a lesser proportion belonging to other communities. Almost 79 % were rare or low frequent entities. According to physico-chemical characteristics and phytoplanktonic composition the typology of the 26 surveyed water bodies produced five groups of lakes distributed along a wide trophic gradient, being most of them ultraoligotrophic. The limnology of each system obeys to a combination of several factors: type of substrata, animal and/or vegetation occurrence in the basin, wind exposure, sea proximity, freezing-melting and water mixing cycles. Macrofauna would result one of the stirring factors of the eutrophication processes in these lake environments (pond B). On the other hand, water-bodies subject to sea spray or located close or in the penguin rookeries are characterised by high conductivities (lake F, pond B). Bacillariophyceae and Cyanobacteria generally dominated both in richness and density. Most taxa registered were ticoplanktonic: epilithic or associated with snow or with humid soils. The euplanktonic species were mostly flagellated or small coccoids. The typology according to the microbial mats community produced six types of algal associations. Bacillariophyceae was the dominant class in terms of species richness, followed by the Cyanobacteria and Chlorophyceae. Euepilithic algae were the best represented, with a large contribution of aerophilic taxa. Many water-bodies presented their basins covered by mosses and metaphyton. The macroscopic aspect of the microbial mats varied greatly on account of the relative occurrence of different algal taxa, substrate morphology and sediment accumulation. Matrix components common to all microbial mats are mainly filamentous and coccoids species of Cyanobacteria (specially Gloeocapsa and Leptolyngbya species) where some diatoms are imbibed. Soluble reactive phosphorus, conductivity and phytoplanktonic chlorophyll-a concentration appeared as the most important variables in the algal distribution of the microbial mats (Group α and β). The composition of the microbial mats of the remaining water-bodies clustered in Group γ could not be explained by the variables here considered. Other factors such as differences in colonization ability of the taxa and tolerance to environmental variables were probably involved here. The comparison of the phytoplankton structure and dynamics from the pond B and the lakes H, F and W during the two considered summer seasons, revealed that succession in water-bodies of scarce dimensions are highly variable and may be easily modified by changing climatic factors such as wind, temperature and precipitation, etc.

Verbitsky, Miguel. "Caracterización farmacológica y estudio de la relación estructura - Función del receptor nicotínico alfa 9" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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En este trabajo se presenta una extensa caracterización del receptor colinérgico nicotínico α9, utilizando el sistema de expresión heteróloga de ovocitos de Xenopus laevis. Durante la mayor parte del desarrollo del mismo se tuvo como hipótesis de trabajo que α9 sería la única subunidad integrante del receptor colinérgico nativo de las células ciliadas externas de la cóclea y de las células tipo II del aparato vestibular. Este receptor es responsable de la inhibición de la actividad de dichas células, mediada por la inervación colinérgica eferente coclear y vestibular. En 2001 se identificó y clonó una nueva subunidad de receptores nicotínicos, α1O. Esto condujo a modificar la hipótesis de trabajo, para incluir la posibilidad de un receptor heteromérico α9αl0 en las células ciliadas, pero sin excluir la posible existencia del receptor homomérico α9 en otros tipos celulares. La caracterización del receptor homomérico recombinante α9 incluyó el estudio de las propiedades farmacológicas del mismo. En particular, se demostró que a pesar que α9 es un miembro de la familia de genes de subunidades de receptores nicotínicos, el receptor no puede ser clasificado farmacologicamente como nicotínico o muscarínico y presenta un perfil farmacológico mixto, en coincidencia con lo reportado para el receptor nativo de las células ciliadas. Se mostró que tanto agonistas colinérgicos no específicos como la acetilcolina y el carbacol, agonistas nicotínicos como el metilcarbacol, la suberildicolina y el DMPP y agonistas muscarínicos como la oxotremorina - M, el metilfurtretonio y el McN-A-343 son capaces de activar al receptor α9. También la colina, un producto de degradación y precursor en la síntesis de la acetilcolina, activó al receptor α9. Notablemente, agonistas nicotínicos clásicos como la epibatidina, la nicotina y la citisina bloquearon al receptor α9 (IC50 : 1.6±0.l, 31.5±l.0 y 43.1±3.5 µM, respectivamente). Se estudió la sensibilidad de α9 a diversos antagonistas nicotínicos. En particular la metillicaconitina, un antagonista selectivo de receptores nicotínicos neuronales sensibles a la α-bungarotoxina, inhibió las respuestas de α9 a la acetilcolina en forma competitiva (IC50 : l.l±0.2 nM), siendo este el antagonista más potente de α9 hasta ahora reportado. Se demostró también que el receptor α9 es bloqueado tanto por agonistas como por antagonistas muscarínicos con el siguiente orden de potencia: atropina (IC50: l.0±0.1µM, ) ~ galamina (IC50: 1.5±0.2 µM) > pilocarpina (IC50: 76±9 µM) ~ muscarina (IC50: 84±6 µM) ~ betanecol (IC50: 105±14 µM), un rango de concentraciones comparable con las requeridas para el bloqueo producido por compuestos nicotínicos. Por otra parte, se demostró la inhibición de la respuesta a acetilcolina de los receptores α9 y α9α10 por morfina y péptidos opioides. Estos péptidos estarían presentes en la inervación eferente a las células ciliadas del aparato vestibular y modularían su actividad a través de su acción sobre α9αl0. Se demostró también que el receptor homomérico α9 es bloqueado por Ca++ extracelular (IC50: 100±10 µM a -70 mV), en forma dependiente del potencial de membrana. Este resultado es relevante para la fisiología de las células ciliadas. Mediante la construcción de una subunidad quimérica entre α9 y el receptor de serotonina de tipo 3A, se aportó evidencia de que el dominio aminoterminal de α9 es el determinante estructural de la interacción de α9 con agonistas y antagonistas. También se construyó una subunidad quimérica mediante el empalme de porciones de las subunidades α7 y α9. Los resultados obtenidos con las dos quimeras mencionadas, indican que los determinantes estructurales de la particular relación corriente - potencial de α9 (relacionada con la presencia de Ca++ extracelular), estarían confinados a la región que se extiende desde el comienzo del segundo segmento hidrófobo, supuestamente transmembranal, hasta el extremo carboxiterminal. Se identificó un residuo en el segmento hidrófobo M2 (Q261) involucrado en la rectificación de la corriente y en el bloqueo por el Ca++. En suma, el presente trabajo demuestra que el receptor α9 presenta una farmacología mixta nicotínica - muscarínica coincidente con la del receptor colinérgico de las células ciliadas. Esta coincidencia incluye también la sensibilidad de los receptores que contienen la subunidad α9 a péptidos opioides y a cationes divalentes. Por otro lado aporta evidencia de la importancia clave del dominio aminoterminal en determinar características farmacológicas de α9 y del segundo segmento hidrófobo en las propiedades del canal de los receptores α9 y α9α10.

Abstract:
This work provides an extensive characterisation of the α9 nicotinic acetylcholine receptor, making use of the Xenopus laevis oocytes heterologous expression system. As a working hypothesis during most of the process of this work, the α9 protein was thought to be the only subunit present at the native acetylcholine receptors of cochlear outer hair cells and type II vestibular hair cells. These receptors mediate inhibition of the activity of these cells by cholinergic cochlear and vestibular efferent innervation. In 200l α10, a new nicotinic subunit, was identified and cloned. This led to the modification of the previous hypothesis, in order to include the possibility of an heteromeric α9α10 receptor present in hair cells, not excluding the occurrence of homomeric α9 receptors in other cell types. The characterisation of the homomeric recombinant α9 receptor included the study of its pharmacological properties. It is demonstrated that although α9 is a member of the nicotinic receptor subunit gene family, the receptor cannot be pharmacologically classified either as nicotinic or muscarinic, since it displays a mixed pharmacological profile, in coincidence with what has been reported for the hair cells native receptor. It is shown that the α9 receptor is activated by the non-specific cholinergic agonists acetylcholine, and carbachol, as well as by the nicotinic agonists methylcarbachol, suberyldicholine and DMPP and the muscarinic agonists oxotremorine-M, methylfurthretonium and McN-A-343. Moreover choline, both a degradation product and a precursor of the synthesis of acetylcholine activates α9. Remarkably nicotinic agonists such as epibatidine, nicotine and cytisine blocked the α9 receptor (IC50 : 1.6±0.l, 31.5±l.0 y 43.l±3.5 μM, respectively). The sensitivity of α9 to various nicotinic antagonists is reported. Methyllycaconitine, a specific antagonist for α-bungarotoxin-sensitive neuronal nicotinic receptors, inhibited α9 acetylcholine-evoked responses in a competitive manner (IC50: l.1±0.2 μM), thus being the most potent α9 antagonist identified so far. It is also demonstrated that the α9 receptor is blocked by both muscarinic agonists and antagonists with the following rank order of potencies: atropine (IC50: l.0±0.1 μM) ~ gallamine (IC50: 1.5±0.2 µM) > pilocarpine (IC50: 76±9 µM) ~ muscarine (IC50: 84±6 µM) ~ betanechol (IC50: 105±14 µM), a concentration range which is similar to that required for the block by nicotinic compounds. It is also demonstrated that morphine and opioid peptides inhibit acetylcholine-evoked responses in α9 and α9αl0 receptors. These peptides are present at the efferent innervation to vestibular hair cells and would modulate their activity through their action on α9αl0. It is also demonstrated that the α9 homomeric receptor is blocked by extracellular Ca++ (IC50: 100±10 µM a -70 mV) in a voltage-dependent manner, a result relevant to hair cell physiology. By means of the construction of a chimeric subunit between α9 and the type 3 serotonin receptor, evidence is provided that the α9 aminoterminal domain is the structural determinant of the α9 interaction with agonists and antagonists. A chimeric subunit was also constructed by splicing portions of the α7 and α9 subunits. Results obtained with the aforementioned chimeras, indicate that the structural determinants underlying the peculiar α9 current-voltage relationship, are confined within the region that extends from the beginning of the putative transmembrane second hydrophobic segment, to the carboxiterminus. A residue (Q26l) within the the hydrophobic region M2 was identified as being involved in the rectification properties and in the block by Ca++. In summary, the present work demonstrates that the α9 receptor displays a mixed nicotinic-muscarinic pharmacology that matches that of the cholinergic receptor of cochlear and vestibular hair cells. The similarities between the native and the recombinant receptors extends to the sensitivity of the α9-containing receptors to opioid peptides and divalent cations. Evidence indicating the key importance of the aminoterminal domain in determining the α9 receptor pharmacological characteristics and of the second hydrophobic segment in the channel properties of the α9 and α9α10 receptors are also presented.

Valenzuela, Sergio O.. "Dinámica oscilatoria de la red de vórtices en superconductores de alta temperatura crítica" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los vórtices en los superconductores de alta temperatura crítica constituyen un sistema modelo para el estudio de transiciones de fase dinámicas y termodinámicas. La combinación de las interacciones vórtice-vórtice y el anclaje por defectos en la matriz superconductora determina la respuesta electromagnética de los superconductores tipo-II y, a su vez, provee un sistema ideal para estudiar el efecto del desorden en un medio elástico. Mientras que las interacciones entre vórtices tienden a ordenar la estructura de vórtices y los defectos a desordenarla, su efecto combinado da lugar a una variedad de comportamientos colectivos y dinámicos notablemente rico. En esta Tesis, estudiamos la respuesta dinámica en estos sistemas de vórtices principalmente en respuesta a la aplicación de fuerzas oscilatorias por debajo de la transición de solidificación. La motivación de este trabajo surge por la observación de nuevos fenómenos que incluyen una dependencia en la historia de la muestra y efectos de memoria en la respuesta de los superconductores tipo-II y por la necesidad de lograr un control completo del comportamiento de los vórtices ante fuerzas externas, lo que es requerido para posibles aplicaciones. El objetivo de esta Tesis es presentar una descripción de la respuesta de los vórtices tanto desde un punto de vista experimental como numérico. Midiendo susceptibilidad ac en cristales de YBa2Cu3O7 con maclas, mostramos que el sistema de vórtices puede ser atrapado en estados metaestables con diferente grado de orden que aparecen en respuesta a diferentes historias termomagnéticas del sistema. Demostramos que la presión ejercida por el campo ac oscilante ordena el sistema de vórtices en la zona de penetración, incrementando localmente su movilidad. La estabilidad de los estados ordenados y desordenados junto con el perfil espacial de la movilidad de los vórtices generan la aparición de efectos de memoria. Mostramos también que cuando los vórtices son “agitados” por un campo temporalmente simétrico (ej., sinusoidal) se organizan en una estructura ordenada y fácil de mover pero que, por el contrario, cuando el campo ac es temporalmente asimétrico (ej., diente de sierra), la estructura final es más desordenada y anclada. Esto es característico de un movimiento plástico de la red de vórtices y sugiere que el ordenamiento debido a campos simétricos es esencialmente distinto a un proceso de equilibración o a una cristalización dinámica por la aplicación de corrientes altas. Proponemos un modelo fenomenológico para la respuesta ac basada en observaciones experimentales y obtenemos los perfiles de campo y corriente en forma analítica y numérica para distintas geometrías. La hipótesis principal del modelo es un anclaje efectivo inhomogéneo en la muestra lo cual se infiere de la movilidad variable de los vórtices. Completamos nuestra descripción realizando simulaciones de dinámica molecular sobreamortiguada con el objetivo de hallar una conexión entre la respuesta macroscópica y el comportamiento microscópico o, entre la movilidad y el grado de orden de la red de vórtices. Modelamos el sistema de vórtices como un conjunto de partículas interactuantes en un medio desordenado con una gran densidad de centros de anclaje distribuidos al azar y estudiamos la concentración de defectos y la movilidad de la red de vórtices en repuesta a distintas fuerzas externas. Complementamos estos resultados con estudios de transporte y susceptibilidad ac en muestras que presentan un efecto pico en la densidad de corriente crítica. Mostramos que el desorden generado en la zona del pico puede ser inhibido en forma parcial forzando un movimiento oscilatorio de los vórtices aún cuando la red es blanda y su movimiento plástico. La red de vórtices puede ser ordenada en forma adicional por debajo de un temperatura definida en donde las interacciones entre vórtices parecen vencer a las tensiones generadas por el anclaje y ocurre un cambio a un régimen elástico. La Tesis concluye con dos proyectos relacionados menores que son incluidos como Apéndices. En primer lugar, extendemos el algoritmo con el que obtuvimos los perfiles de campo y corriente en muestras con anclaje inhomogéneo para poder incluir corrientes de transporte. En segundo lugar, describimos una técnica ac que desarrollamos para medir la magnetización remanente en la muestra y presentamos resultados que muestran efectos de historia.

Abstract:
Vortices in high temperature superconductors comprise a model system for the study of thermodynamic and dynamic phase transitions. The interplay of vortex-vortex interactions and pinning by defects in the superconducting matrix both determines the electromagnetic response of type-II superconductors and provides an ideal system to study the effect of quenched disorder on elastic media. While vortex-vortex interactions tend to order the vortex structure and defects tend to disorder it, their combined effect leads to a remarkably rich variety of collective and dynamical behaviour. We study the dynamic response in such vortex systems focusing mainly on oscillatory driving forces below the first order melting transition. We are motivated by the observation of new puzzling phenomena that include history dependence and memory effects in the response of type-II superconductors in the vicinity of order-disorder transitions and by possible applications which require the complete control of the vortex behaviour under external applied currents. The goal of this Thesis is to provide both an experimental and theoretical description of the vortex response. By measuring ac susceptibility in twinned YBa2Cu3O7 single crystals, we show that the vortex system can be trapped in different metastable states with variable degree of order arising in response to different system histories. We demonstrate that the pressure exerted by the oscillating ac field assists the vortex system in ordering, locally increasing the mobility of the vortices in the penetrated outer zone of the sample. The robustness of the ordered and disordered states together with the spatial profile of the vortex mobility lead to the appearance of strong memory effects. We also show that when vortices are “shaken” by a temporarily symmetric ac field they are driven into an easy-to-move, ordered structure but, on the contrary, when the ac field is temporarily asymmetric, they are driven into a more pinned disordered state. This is characteristic of tearing of the vortex lattice and it suggests that ordering due to symmetric ac fields is essentially different from an equilibration process or a dynamical crystallization that is expected to occur at high driving currents. The experiments also provide evidence that vortex movement in an oscillating magnetic field is partially reversible as order can be recovered by a temporal inversion of the asymmetric ac field. We then propose a phenomenological model for the ac response based on experimental observations and obtain the magnetic field and current profiles in the sample both analytically and numerically. The main hypothesis of the model is an inhomogeneous effective pinning in the sample that is inferred from the variable mobility of the vortices. The connection between the macroscopic response of the superconductor and the microscopic behaviour of vortices or, between the mobility and the degree of order of the vortex lattice, is fulfilled by overdamped molecular dynamics simulations. We model the vortex system as a set of interacting particles in a disordered environment with a high density of randomly situated pinning centres and study the concentration of defects and mobility of the vortex lattice as a function of different driving forces. We complement these results with transport and ac susceptibility studies in samples that present a peak effect in the critical current density. We show that disorder generated at the peak effect can be partially inhibited by forcing an oscillatory movement of vortices even while the lattice is soft and its movement is plastic. The flowing phase can be additionally ordered below a well defined temperature where elastic interactions between vortices overcome pinning-generated stress and a plastic to elastic crossover seems to occur. Two related and smaller projects, that are included as Appendices, conclude the Thesis. Firstly, we extend the numeric algorithm that provides the current and field profiles in samples with inhomogeneous pinning to include transport currents. Secondly, we describe an ac technique that we developed to measure the remanent magnetization in the sample and we present some results on history effects.

Valencia Rodríguez, Manuela Teresa. "Efecto del tratamiento de preservación por depresión de la actividad acuosa en la calidad del alga Porphyra columbina" (2001). Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Vaisman, Alejandro Ariel. "Actualización y mantenimiento de vistas en bases de datos multidimensionales = Updates and view maintenance in multidimensional databases" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Abstract:
Usually, OLAP(On Line Analytical Processing) systems provide data visualization through a multidimensional data model according to which a data fact is viewed as a mapping from a point in a space of dimensions into one or more spaces of measures. Moreover, dimensions are organized in levels which conform a hierarchy, providing a way of defining different levels of data aggregation, a central issue in data analysis. In a relational implementation of OLAP(usually called ROLAP), we can think of facts as being stored in fact tables, while each dimension is described in a dimension table. The industry solutions were built under the assumption that data in fact tables reflect the dynamic aspect of the data warehouse, while data in dimension tables represent static information. However, if we think of the data warehouse as a materialized view of data located in multiple sources, it is usual to find situations in which the structure of these sources changes, a new source is added, or an old one dropped. Any of these changes may require updates to the structure of some dimensions. Further, as multidimensional views are designed according to requirements from end users, a redefinition of the initial requirements may cause a dimension update. In this thesis we argue that accounting for dimension updates is necessary in an OLAP tool in order to avoid constantly rebuilding dimensions from scratch. Thus, we first characterize these updates and study the view maintenance problem when they occur. We developed algorithms which, taking advantage of the nature of the dimension updates, in some cases outperform well-known view maintenance algorithms. We then propose an extension to the MDX language(a standard query language for OLAP) and describe the implementation of TSOLAP, a multidimensional repository which supports dimension updates and view maintenance, developed following the OLE DB for OLAP standard. We discuss the experimental results of tests performed over a real-life case study, a medical center in Buenos Aires. In the second part of the thesis we embed our proposal in the temporal database framework, introducing the Temporal Multidimensional Data Model, and a temporal query language for OLAP which we called TOLAP. TOLAP allows expressing complex OLAP queries in an elegant and declarative fashion. We discuss issues like syntax, semantics, safety and expressive power. We also present an implementation including a graphic environment for temporal OLAP. Finally, we show how the temporal approach can be applied to the case study mentioned above.

Unrein, Fernando. "Efecto de los nutrientes y el pH sobre el crecimiento y la estructura del fitoplancton en ambientes de la llanura aluvial del Paraná Inferior" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se evaluó experimentalmente la importancia del N como factor limitante para el desarrollo del fitoplancton en distintos ambientes acuáticos, distribuidos sobre un eje transversal al cauce principal del Paraná Inferior.Se analizaron además las diferencias espaciales en la composición de esta comunidad y el efecto del N y el pH sobre su estructura, principalmente sobre la abundancia de algas mixotróficas y fijadoras de N2. La primer parte del estudio se llevó a cabo en tres ambientes (rio Paraná, laguna Montiel, bañado El Ciego) aledaños a Villa Constitución (Santa Fe). Aquí se analizaron en cuatro ocasiones (mayo'96 - febrero'97) las características limnológicas de estos cuerpos de agua y se realizaron bioensayos in vitro con agregado de N y P. La segunda parte correspondió a un estudio intensivo (octubre'98 - mayo'00)de la laguna Grande (Otamendi, Buenos Aires), donde se realizaron bioensayos in situ con agregado de nutrientes y de Na2CO3 para elevar artificialmente el pH del agua. Desde el cauce principal hacia la planicie de inundación se observó un marcado gradiente limnológico. A lo largo de este eje disminuyeron la concentración de sólidos en suspensión, de NID y la profundidad, y aumentaron la transparencia, la relación Secchi:profundidad, la concentración de nutrientes totales (NT y PT) y la biomasa fltoplanctónica. En el río, donde la luz es limitante, dominaron diatomeas típicamente potamoplanctónica adaptadas a vivir con bajas intensidades lumínicas y alta turbulencia (Aulacoseira granulata y sus variedades), mientras que en el otro extremo del gradiente donde el principal factor limitante es la falta de NID, el fitoplancton estuvo dominado principalmente por fitoflagelados mixotróficos (Cryptomonas, Euglena, Peridinium) de las asociaciones W e Y (sensu Reynolds, 1997) y por pequeñas Chlorococcales C-estrategas de la asociación X1. El grado de conectividad con el cauce principal determina la importancia relativa de la luz y el N como factores limitantes. El NID sería potencialmente limitante cuando su concentración disminuye por debajo de los 100 μg L-1. La ventaja de los fitoflagelados dominantes en los ambientes más alejados del curso principal no sería sólo la mixotrofiasino además su capacidad para mantenerse en suspensión en un ambiente vegetado relativamente calmo, mientras que las algas autotróficas obligadas sin movilidad propia dependen de condiciones de turbulencia para ser dominantes. La abundancia de cianobacterias fijadoras de N2 de la asociación H (Anabaena) en los ambientes donde el N es limitante está condicionada no solo por la baja concentración de NID sino que además requerirían valores de pH elevados. Por otro lado, Cyclotella meneghiniana fue dominante durante el verano'00 en la laguna Grande debido principalmente a los altos valores de pH registrados durante este período.

Abstract:
The aim of this work is to evaluate the importance of N as limiting factor for phytoplankton growth in different environments from a floodplain stretch of the Lower Paraná River. The changes in natural phytoplanktonic community as well as the main physico-chemical parameters were also studied along this section. Experiments were performed in order to assess the effect of N and pH on the phytoplankton structure, principally on the abundance of mixotrophic algae and N2-fixing Cyanobacteria. The first part of the study was carried out in three environments (the main channel, a lake and a swamp) across the Lower Paraná River floodplain opposite to Villa Constitución city (Santa Fe). Each site was seasonally sampled (May'96 - February'97), in vitro bioassays with addition of N and P were also performed. The second part was an intensive study (October'98 - May'00)of the Grande lake (Otamendi). In situ bioassays with addition of nutrients and Na2CO3 (to rise pH) were performed using bottles and mesocosms. A decrease in depth, suspended solids and DIN(dissolved inorganic N)was observed from the main channel towards the swamp. whereas transparency, Secchi:depth ratio. total nutrients (TP and TN) and phytoplankton biomass increased. In the mainstream, where light is the major limiting factor for phytoplankton growth, typical potamoplanktonic species adapted to grow in turbid and turbulent environments dominated (Aulacoseira granulata and its varieties). Oppositely, in the swamp phytoplankton was mainly composed of mixotrophic phytoflagellates (Cryptomonas, Euglena, Peridinium) from associations W and Y (sensu Reynolds. 1997) and small-size green algae, typically C-strategists (association X1). NlD is the main limiting factor in the latter environment. The connectivity degree between floodplain environments and the main channel determines the relative importance of light and N as limiting factors. NID concentration below 100 μg L-1 would indicate potential N-limitation. Phytoflagellates, dominating in low connectivity and N-limiting water bodies. would be favored not only by their mixotrophic behavior, but also by their capacity to maintain suspension in a vegetated and relativer calm environment; whereas autotrophic algae lacking motility depend on turbulent conditions (less macrophytes) to become dominant. The abundance of N2-fixing Cyanobacteria from association H (Anabaena) in N limiting environments depends on the low DIN concentration, as well as on the high pH values. On the other hand, Cyclotella meneghiniana dominated Grande lake during the summer'00 due to the high pH values encountered during this period.

Tunik, Maísa Andrea. "Análisis sedimentológico y tectónico de la primera ingresión Atlántica en la Alta Cordillera de Mendoza" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Tripaldi, Alfonsina. "Análisis sedimentológico de depósitos eólicos de valles intermontanos : su aplicación al estudio de secuencias terciarias del noroeste argentino" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se presenta en esta Tesis el estudio sedimentológico de ambientes eólicos desarrollados en áreas intermontanas, con el propósito de contribuir a su identificación y caracterización tanto en depósitos modernos como en secuencias antiguas. Las investigaciones fueron llevados a cabo desde dos perspectivas diferentes. Por un lado, los estudios desarrollados en depósitos eólicos actuales y subactuales de las provincias de La Rioja y San Juan (localidades de Lomas de La Estancia, Médanos Grandes, valle del río Guandacol y Campo de Talampaya) y, por el otro, el análisis detallado de secuencias miocenas que incluyen importantes espesores de eolianitas (Formaciones Vallecito y Vinchina). Sobre la base de la caracterización morfológica, dinámica y de escala de las diferentes geoformas eólicas identificadas, se propone un esquema de clasificación que inicialmente reconoce: 1) formas de acreción y progradación y 2) formas de deflación. Las primeras son divididas según su escala en: microformas (óndulas de impacto-proyección e impacto reptaje), mesoformas (sombras de arena, zibars, gozes y protodunas), macroformas (distintos tipos de dunas) y megaformas (draas). En lo que respecta a las formas de deflación, son clasificadas de acuerdo a su morfología en hoyos de voladura y canaletas de deflación. Los estudios focalizados sobre ambientes actuales permitieron reconocer cuatro tipos principales de ambientes de acumulación eólica: 1) campos de dunas, 2) interacción eólica-fluvial, 3) manto eólico y 4) margen de valle. El ambiente de campo de dunas fue primeramente caracterizado en el área de Lomas de la Estancia, donde resulta relativamente simple, formado por una única generación de dunas transversales y con evidencias de fuerte deflación (generación de hoyos de voladura y canaletas de deflación). En contraposición, el campo eólico de Médanos Grandes constituye un sistema complejo, que muestra varias etapas de desarrollo e incluye tanto dunas como draas. La caracterización detallada de este campo eólico permitió reconocer cinco unidades geomórficas principales, que posibilitan interpretar su dinámica y reconstruir parte de la historia de acumulaciones eólicas del área de Médanos Grandes. En lo que respecta a los depósitos de interacción eólica-fluvial, los mismos fueron caracterizados en el valle del río Guandacol, donde la estrecha interrelación entre procesos eólicos y fluviales produce singulares asociación de facies, en las que coexisten depósitos de canales efímeros y geoformas eólicas, éstas últimas desarrolladas principalmente en las áreas de intercanal. Para caracterizar al ambiente de manto eólico se efectuaron estudios en el Campo de Talampaya, allí predominan las micro y mesoformas eólicas, mayormente fijas (sombras de arena, zibars y gozes), que generan una topografía suavemente irregular, de relativamente bajo relieve, que se asocia estrechamente al ambiente de interacción eólica-fluvial que rodea el curso efímero del río Talampaya. Finalmente, al aquí denominado ambiente de margen de valle, reúne a depósitos eólicos formados al pie de frentes montañosos y comúnmente asociados a sedimentos de origen aluvial y coluvial. Este ambiente fue estudiado en la vertiente occidental de la Sierra de los Tarjados, y en el han podido reconocerse dos tipos de acumulaciones principales: dunas ascendentes, de morfología compleja (formadas a barlovento de la sierra), y abanicos de arena (a sotavento). Los cuatro ambientes hasta aquí considerados fueron además caracterizados desde el punto de vista textural y se ha brindado en cada caso una breve reseña sobre la composición de las arenas que conforman las geoformas eólicas. Para el análisis de secuencias antiguas se ha utilizado un código de litofacies adaptado a las caracterísiticas propias de los depósitos eólicos. Dicho código se encuentra integrado por tres términos. El primero hace alusión a la textura dominante del sedimento (S para areniscas y F para pelitas), el segundo corresponde a los rasgos estructurales mayores (laminación entrecruzada, horizontal, de bajo ángulo, etc.) y el tercero describe rasgos particulares, generalmente de pequeña escala, que brindan información acerca de los procesos de transporte y depositación. Al análisis de litofacies se ha sumado la caracterización y ordenamiento jerárquico de las superficies limitantes observadas en secuencias eólicas, habiéndose distinguido un total de cinco órdenes de superficies. Las de orden 0 corresponden a las láminas de sets horizontales o entrecruzados y las de orden 1 son superficies que limitan sets de laminación horizontal o entrecruzada de bajo ángulo y base hoyos de deflación de escala pequeña. Se ha incluido en el orden 2 a las superficies que limitan subsets en estructuras entrecruzadas, las que resultan en gran medida equivalentes a las superficies de reactivación de autores previos. Las superficies de orden 3 separan sets de estratificación entrecruzada, paquetes de sets con laminación horizontal o entrecruzada de bajo ángulo y superficies extensas de deflación. En la clasificación propuesta se identifica como superficies de orden 4 a las que limitan cosets de estratificación entrecruzada. Finalmente, las de orden 5 son las de mayor extensión areal y resultan planos que cortan a todas las estructuras eólicas y superficies limitantes previas. La suma del análisis litofacial, de superficies limitantes, escala de los cuerpos de roca y la geometría de los depósitos ha permitido definir un total de 8 elementos arquitecturales: MA(manto de arenas), MF(mesoformas eólicas), DC1 (dunas crecientes de crestas rectas), DC2 (dunas crecientes de crestas ligeramente sinuosas), DC3 (dunas crecientes de geometría variable), DCS(dunas crecientes de crestas sinuosas), DR(draas) e ID (interdunas). Utilizando la metodología arriba señalada, se efectuó el estudio facial de las eolianitas de la Formación Vallecito, aflorante en la Precordillera de San Juan y La Rioja. Esta unidad representa la depositación en un gran campo eólico intermontano, desarrollado durante el Mioceno en conección con el inicio de los corrimientos andinos. Los perfiles analizados (quebrada de La Flecha, nacientes del río Guandacol y Ciénaga del Vallecito) permitieron reconocer seis asociaciones de facies en Ia unidad. La asociación I, interpretada como depositada en un ambiente de manto eólico, está dominada por areniscas con laminación horizontal o entrecruzada de bajo ángulo, que representan los elementos arquitecturales MA y MF, y a las que se asocian discretos niveles de areniscas entrecruzadas de moderado a alto ángulo (elemento DC1). La asociación II incluye sets gigantes (hasta 20 metros) de estratificación entrecruzada (elemento DR), que aparecen junto con sets de similares estructuras pero más delgados (elemento DCl). El conjunto ha sido interpretado como originado a partir del crecimiento de draas y dunas sobreimpuestas. En lo que respecta a la asociación III muestran sets acuñados y en artesa de estratificación entrecruzada de escala mediana y grande. Esta asociación fue originada por el apilamiento de dunas crecientes de crestas ligeramente sinuosas (elemento DC2) a sinuosas (elemento DCS). Delgadas intercalaciones correspondientes a depósitos de interduna se presentan en la asociación de facies IV, la que se encuentra compuesta por areniscas con laminación horizontal, ondulítica, entrecruzada de bajo ángulo o bien capas masivas. Un importante cambio litológico ocurre en la asociación de facies V, integrada por conglomerados, areniscas guijarrosas, pelitas laminadas y areniscas finas bien seleccionadas. El conjunto presenta una génesis compleja, en la que interactúan procesos fluviales, lacustres y de interacción eólica-fluvial. Finalmente, la asociación de facies VI, compuesta por areniscas con estratificación entrecruzada festoneada (elemento DC3) y tabular planar (elemento DC1), sería el resultado de la migración de dunas crecientes de crestas rectas, que muy probablemente sufrían periódicas fluctuaciones en su morfología (altura o espaciamiento) y/o velocidad de migración. El análisis espacial de las asociaciones de facies citadas permite describir la evolución del campo eólico en los tres perfiles analizados. En el caso de la quebrada de La Flecha, la sedimentación se inició con depósitos de manto eólico (asociación de facies I), los que pasaron verticalmente a secuencias de draas con dunas de menor porte sobreimpuestas (asociación de facies II). Por el contrario, en los perfiles de Ciénaga del Vallecito y nacientes del río Guandacol la acumulación de arena comenzó directamente con depósitos de draas y dunas de gran porte (asociación de facies II), señalando un muy rápido crecimiento del campo eólico. En todos los perfiles y localidades de control analizadas, las acumulaciones de draas fueron seguidas por dunas crecientes de crestas ligeramente ligera o fuertemente sinuosas (asociación de facies III), las que pueden asociarse a delgados depósitos de interdunas (asociación de facies IV). El avenimiento de sistemas fluviales (Formación Cerro Morado), puso fin a la sedimentación eólica en los perfiles más occidentales (Ciénaga del Vallecito y nacientes del río Guandacol). Por el contrario, en la quebrada de La Flecha, de posición más distal, la incursión fluvial tuvo una duración limitada, determinando un ambiente de interacción eólica-fluvial junto con facies lacustres efímeras asociadas (asociación V). Posteriormente, se reestableció la sedimentación eólica, primero con dunas crecientes de cresta ligeramente a muy sinuosas (asociación de facies III) y luego de crestas rectas (asociación VI). Finalmente, existe una recurrencia a la asociación de facies V, que marca una nueva incursión fluvial. Los depósitos de interacción eólica-fluvial fueron también estudiados en secciones pertenecientes al miembro superior de la Formación Vinchina. Esta unidad, también de edad miocena, fue depositada mayormente en distintos tipos de ambientes fluviales, pero muestra esporádica aparición de intervalos eólicos. El análisis detallado de perfiles métricos y decamétricos levantados a lo largo del río de La Troya (perfil tipo de la unidad) permitió discriminar entre los términos fluviales y eólicos de las secuencias de interacción. Los principales criterios que permitieron la identificación de las eolianitas fueron: 1) presencia de muy fina laminación, 2) gradación inversa de intralámina, 3) muy buena selección granulométrica, 4) fábrica abierta y 5) ausencia de intraclastos pelíticos. Además de los rasgos megascópicos de las secuencias eólicas, se examinaron rasgos microscópicos, con el objeto de caracterizar los mecanismos de sedimentación eólica. De esta forma, y en el caso de la Formación Vallecito, se practicaron estudios texturales en sección delgada que demostraron un fuerte control de los mecanismos de transporte y sedimentación sobre las distribuciones granulométricas. Paralelamente, en la Formación Vinchina fueron comparados los rasgos de fábrica entre las areniscas de los términos fluviales y eólicos en los depósitos de interacción. Estos estudios, efectuados mediante análisis de imágenes petrográficas, evidenciaron las distintas heterogeneidades de la fábrica que muestran las eolianitas y el empaquetamiento más abierto que exhiben frente a los términos de origen fluvial. Finalmente, y sobre la base de la información obtenida en el estudio de ambientes actuales y antiguos se proponen modelos que caracterizan la sedimentación eólica en valles intermontanos. Para ello fueron consideradas dos escalas diferentes de trabajo: 1) la mesoescala, en la que se analizan los criterios de identificación de los diferentes subambientes eólicos reconocidos y 2) la megaescala, en la que se examina la evolución vertical (temporal) de las asoclaciones de facies. En lo que corresponde al primer punto fueron identificados y caracterizados un total de 7 subambientes para las eolianitas de valle: 1) campos de dunas dominados por megaformas, 2) campos de dunas dominados por macroformas bidimensionales, 3) campos de dunas dominados por macroformas tridimensionales, 4) mantos eólicos con alta tasa de agradación, 5) mantos eólicos con baja tasa de agradación, 6) ambiente de interacción eólica-fluvial y 7) ambiente de margen de valle. En lo que hace al modelo de megaescala se han discutido los factores que condicionan la construcción y preservación de los campos eólicos intermontanos. En este sentido, fue analizado el concepto de “estado de sedimento”, especialmente las variables que lo definen: aporte, disponibilidad y capacidad de transporte. Estos conceptos fueron aplicados a la evolución del campo eólico representado por la Formación Vallecito, donde han sido reconocidas tres secuencias depositacionales, limitadas por superficies de progradación de sistemas fluviales.

Abstract:
The sedimentological characteristics of the intermontane eolian deposits are analyzed in this Thesis. The studies were carried out from two different points of view. On the one hand, modern eolian depositional environments from different valleys of La Rioja and San Juan Provinces (Lomas de La Estancia, valle del Río Guandacol, Campo de Talampaya and Médanos Grandes localities) were studied and on the other, ancient intermontane eolian deposits belonging to Vallecito and Vinchina Formations were analysed. On the basis of morphology, dynamics and size a classification of eolian geoforms, frequently found in intermontane areas, is proposed. Initially, this model recognized two major types: 1) acretional and progradational forms and 2) deflationary forms. The former are divided according to their size in: microforms (different kinds of eolian ripples), mesoforms (sand shadows, zibars, gozes and protodunes), macroforms (severals types of dunes) and megaforms (draas). Deflationary forms comprise saucer and trough blowouts. Four major kinds of intermontane eolian depositional environments were recognized in modern valleys: 1) dune fields, 2) eolian-fluvial interaction, 3) eolian sand sheets and 4) valley side. The dune field environment was studied in the Lomas dela Estancia area, where a unique formation of partially deflationed transversal dunes is developed. On the contrary, several draas and dunes generations are present in the Médanos Grandes eolian dune field. In this area, a complex network of mega and macroforms points out different stages of eolian development. The eolian-fluvial interaction environment was characterized in the río Guandacol valley, where eolian sands are closely connected with fluvial deposits. A group of conspicuos eolian geoforms appear mainly in interchannel areas. In so far as, the eolian sand sheet was studied in Campo de Talampaya area where eolian micro and mesoforms (sand shadows, zibars, gozes) predominate, which promote a low and irregular relief. Finally, the here named valley side environment, includes eolian geoforms located at the foot of cliffs, commonly associated to alluvial fan and talus deposits. This environment was analyzed on the western slope of the Sierra de los Tarjados where climbing and falling dunes were identified. Ancient sequences were investigated using lithofacies description, bounding surfaces characterization and architectural elements analysis. As regards the latter, eight architectural elements were defined: MA(sand sheets), MF(eolian mesoforms), DC1(straight-crests crescentic dunes), DC2(low-sinuosity crescentic dunes), DC3(crescentic dunes with changeable morphology), DCS(high-sinuosity crescentic dunes), DR(draas) and ID (interdunes). The Vallecito Formation, outcroping in Precordillera, was studied using the above mentioned methodology. This unit represents the deposition in a large intermontane eolian field during the Miocene. According to lithology and sedimentary structures observed in three logs (quebrada de La Flecha, nacientes del río Guandacol and Ciénaga del Vallecito), Vallecito was divided in six facies association. Association I, interpreted as deposited in an eolian sand sheet, is made up by horizontally laminated or low-angle crossbedded sandstones (MA and MF architectural elements) with discrete intercalations of high-angle crossbedded sandstones (DC1 element). Association II includes large and giant-scale tabular crossbedded sandstones (DR element), together with thinner crossbedded sets (DC1 element). These rocks have been interpreted as originated in a large dune field dominated by draas with superimposed dunes. Wedge and trough crossbedded sets of fine-grained sandstones (DCS and DC2 elements) which are attributed to migration of moderate sinuosity crescentic dunes associated to highly sinuosity ones form Asociación III. Thin intercalations of interdune deposits (Association IV) are mainly composed of horizontally bedded and ripple crosslaminated sandstones. An important lithological change occurs in Association V, where gravelly sandstones, conglomerates, mudstones and very well-sorted fine-grained sandstones predominate. These sediments represent a conspicuous fluvial flooding that produces sandy rivers, ephemeral lakes and eolian-fluvial interaction deposits. Finally, Association VI is made up by scalloped and tabular planar crossbedded sandstones (DC3 and DC1 elements) which could be interpreted as changeable morphology crescentic dunes. Ancient deposits of eolian-fluvial interaction were studied in some sections of the Upper Member of the Vinchina Formation (Miocene). This unit was deposited in different kinds of fluvial environments but isolated eolian deposits are also found. Metric to decametric logs were obtained along the La Troya river (type section of the unit) to separate fluvial and eolian terms in the interaction sequences. The principal features that allowed the identification of eolianites were the following: 1) presence of very fine lamination, 2) inverse gradation development inside the laminae, 3) fine-grained and very well-sorted sandstones, 4) open packing and 5) lack of muddy intraclasts. Besides megascopic features here considered, microscopic studies were made in order to characterize mechanisms of eolian deposition. In this manner, analyses carried out in Vallecito Formation sandstones have shown a strong control in the textural parameters depending on the dominating mechanism of transport and deposition. At the same time, similar studies in Vinchina Formation sandstones have revealed different kinds of fabric in the eolianites as well as a more open packing compared with those of fluvial sandstones. Finally,on the basis of the information obtained in both modern and ancient deposits some models for intermontane eolian sedimentation are proposed. This analysis considered two different scales of work: 1) the mesoscale that deals with the criterion for different eolian environments characterization, and 2) the megascale that examines with the vertical (temporal) evolution of the facies associations. In so far as the mesoscale, seven different environments for the intermontane eolian deposits were characterized: 1) megaform dominated dune fields, 2) dune fields formed by bidimentional macroforms, 3) dune fields made up by tridimentional macroforms, 4) highly aggradational eolian sand sheets, 5) lowly aggradational eolian sand sheets, 6) eolian-fluvial interaction environments and 7) valley side environment. The megascale model deals with the “sediment stage” concept and its major variables: sediment supply, availability and transport capacity. These principles were applied to recent intermontane eolian fields and to the Vallecito Formation, where three depositional sequences bound by fluvial progradation surfaces were recognized.

Thompson, Gustavo. "Distribución y abundancia del microzooplancton en el Atlántico Sudoccidental, con especial énfasis en la biogeografía de Tintinnina (Protozoa : Ciliata)" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo está basado sobre materiales microplanctónicos obtenidos en cuatro campañas oceanográficas llevadas a cabo durante sendas primaveras australes consecutivas en aguas oceánicas y de talud del Atlántico Sudoccidental, entre 29 y 62°S. Las campañas en cuestión fueron TABIA I (noviembre de 1993), TABIA II (noviembre de 1994), TABIA III (noviembre de 1995), y TABIA IV(noviembre de 1996). En total se cubrieron 77 estaciones oceanográficas obteniéndose 236 muestras con red de plancton de 30 μm de malla munida de flujómetro digital (TABIA I, II y V), mediante arrastres verticales estratificados (entre 0 y 100 m), o con botella Niskin-filtración reversa (10 μm) a 5, 10, 25 y 50 m (TABIA III). El análisis de la distribución y abundancia de los tintínidos, foraminíferos, radiolarios, pterópodos y larvas de crustáceos de estas muestras mostró un patrón irregular, muy variable latitudinalmente y con densidades características de ambientes oceánicos de baja productividad. Los tintínidos presentaron densidades de hasta 500 ind. I(-1)y valores de biomasa de hasta 1.79 μg C I(-1), siendo especialmente importantes en la fracción inferiora 35-40 μm y en aguas del talud. Los foraminíferos, radiolarios (polycystina y feodarios) y pterópodos, por el contrario, mostraron preferencia por las aguas oceánicas llegando a valores de hasta 13, 7.8, 1.6 y 9 ind. I(-1), respectivamente. Las larvas de crustáceos (nauplii y copepoditos) fueron muy abundantes en ambos sectores, con valores de hasta 221 ind. I(-1).Las densidades de todos los grupos variaron poco de un año a otro, y con frecuencia fueron máximas en las áreas de frentes oceánicos (Frente Subtropical, Frente Polar, Frente del Talud). La distribución vertical de los foraminíferos y las larvas de crustáceos fue homogénea en los primeros 50 m, mientras que las abundancias de los tintínidos, y en menor medida de los radiolarios polycystina y pterópodos, disminuyeron con la profundidad, registrándose máximos aislados entre 30 y 50 m. Las densidades de tintínidos, foraminíferos y larvas de crustáceos covariaron entre si, posiblemente debido a relaciones tróficas mutuas. La relación entre la concentración de clorofila a y las densidades de los microzoopláncteres fue generalmente laxa, probablemente debido al bajo tiempo de residencia de los manchones de fitoplancton. Se identificaron 117 taxones de tintínidos, 14 de los cuales representaron entre el 52 y 96% de los ejemplares observados en cada campaña (Acanthostomella norvegica, forma typica, Amphorides quadrilineata, Codonellopsis balechí, C. gaussi, forma typica, C. pusilla, Cymatocylis antarctica, forma typica, Dictyocysta elegans, var. lepida, D. elegans, var. speciosa, D. mitra, Epilocylís acuminata, forma typica, Protorhabdonella curfa, P. simplex, Steenstrupiella pozzii y S. steenstrupil). La mayoría de los taxones tuvieron distribución en parches, aunque geográficamente centrada en una determinada masa de agua. Las profundidades preferenciales calculadas para 49 tintínidos mostraron valores de entre 15 y 45 m, con un aumento en el rango vertical a medida que aumenta la profundidad media. En líneas generales, la riqueza y diversidad específica de los tintínidos aumentaron con la profundidad y disminuyeron gradualmente de norte a sur. También se observaron mínimos de diversidad en áreas restringidas fuertemente dominadas por una sola especie; estas zonas estuvieron laxamente relacionadas con incrementos locales de clorofila a. Se observó que el comparativamente bajo tamaño muestral de los datos obtenidos con botella-filtración reversa fueron responsables de una subestimación significativa de la riqueza y la diversidad especificas. EI análisis de la distribución de los taxones de tintínidos indicaron la existencia de cuatro zonas biogeográficas. De norte a sur éstas son: Zona Subtropical; Zona de Transición (con 3 subzonas; norte, centro y sur); Zona Subantártica y Zona Antártica. Los límites de estas zonas fueron coincidentes con la presencia de los frentes oceánicos de la Corriente de Brasil, Frente Subtropical y Frente Polar. Cada una de éstas zonas estuvo caracterizada por valores de abundancia, biomasa, riqueza y diversidad especifica disímiles, y por asociaciones de tintínidos particulares.

Abstract:
This work is based on microplanktonic materials collected in four oceanographic cruises during four consecutive austral springs in oceanic and slope waters of the Southwestern Atlantic, between 29 and 62°S. The cruises in question are TABIA I (November 1993), TABIA II (November 1994), TABIA III (November 1995), and TABIA IV(November 1996). Seventy-seven stations were covered collecting 236 plankton samples with closing nets (30 μm gauze, provided with digital flowmeters: TABIA I, II and V), in vertical 0-100 m stratified hauls, or with Niskin bottles (reverse-filtered through a 10 μm gauze), from 5, 10, 25 and 50 m (TABIA III). Analysis of the distribution and abundance of the tintinids, foraminifers, radiolarians, pteropods and crustacean larvae yielded a very irregular pattern, highly variable latitudinally and with abundances characteristic of low productivity oceanic regions. Tintinnid abundances were up to 500 ind. I(-1)and their biomass reached 1.79 μg C 1(-1).They were particularly important in the <35-40 μm size class and in slope waters. Foraminifers, radiolarians (polycystines and phaeodarians) and pteropods, on the other hand, were more abundant in oceanic waters; their peak abundances were 13, 7.8, 1.6 and 9 ind. I(-1), respectively. Crustacean larvae (naupliiand copepodits) were abundant in both environments, reaching up to 221 ind. I(-1).Abundances of all groups varied little interannually, and were often highest in frontal areas (Subtropical Front, Polar Front, Slope Front). Vertical distribution of foraminifers and crustacean larvae was homogeneous in the top 50 m, whereas tintinnid abundances, and to a lesser extent those of polycystine radiolarians and pteropods, decreased with depth. showing isolated maxima at 30 and 50 m. Numbers of tintinnids, foraminifers and crustacean larvae covaried, possiny due to trophic interactions. Spatial association between chlorophylla concentrations and microzooplanktonic densities was generally weak, perhaps due to the low residence times of phytoplanktonic blooms. In total, 117 tintinnid taxa were identified, 14 of which represented between 52 and 96% of all the specimens recorded in any one cruise (Acanthostomella norvegica, forma typica, Amphorides quadrilineata, Codonellopsís balechi, C. gaussi, forma typica, C. pusilla, Cymatocylis antarctica, forma typica, Dictyocysta elegans, var. lepida, D. elegans, var. speciosa, D. mitra, Epiplocylis acuminata, forma typica, Protorhabdonella curia, P. simplex, Steenstrupiella pozzii and S. steenstrupirl. Most taxa were distributed very irregularly, but with a more or less clear affinity for a single water mass. Preferred vertical ranges for 49 of the tintinnids recorded varied between 15 and 45 m; the vertical span of the records increased with increasing preferred depth. In general terms, tintinnid species richness and diversity increased with depth and decreased gradually southwards. Diversity minima were also observed in restricted areas were strong dominance of a single species occurred; these areas were loosely associated with local peaks in chlorophyll a. The relativer low bottle sample size was responsible for biased tintinnid species richness and diversity data in these samples. Analysis of the distribution of the tintinnid taxa recorded yielded four biogeographic areas. From north to south these are: Subtropical Zone, Transition Zone (with 3 subzones: north, central and south), Subantarctic Zone, and Antarctic Zone. Boundaries between these zones coincided with fronts of the Brazil Current, The Subtropical Front and the Polar Front. Each zone yielded distinctive tintinnid associations, characterized by dissimilar values of biomass, specific richness and specific diversity.

Tekiel, Valeria. "Autoinmunidad en la infección experimental por Trypanosoma cruzi" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En Argentina, el 10% de la población crónicamente infectada con Trypanosoma cruzi presenta patología en sistema nervioso periférico (SNP). En la presente Tesis se estudió la participación de mecanismos inmunes en la inducción de patología a nivel de lo que denominamos genéricamente SNP, representado por el arco médula espinal-nervio ciático-músculo isquiotibial. Empleamos como modelo, ratones C3H/HeN infectados con las cepas RA o CA-I de T. cruzi que evidencian signos de daño principalmente en nervio ciático y médula espinal o en músculo esquelético, respectivamente. Además, linfocitos T (LT) de estos animales son capaces de injuriar de manera selectiva los órganos antes mencionados por transferencia pasiva en ausencia de parásitos. Hemos definido esos tejidos como blanco de daño para cada una de las cepas de T. cruzi. La respuesta inmune humoral, evaluada por IFI sobre cortes de tejido normal, no mostró diferencias cepa-dependientes; los patrones de marcación evidenciaron depósitos de IgG en intersticio de músculo y en vainas de mielina en nervio. Los sueros con reactividad positiva hacia antígenos conformacionales de nervio fueron definidos como Ne+. La inyección epineural de sueros Ne+ altera la conducción del nervio ciático de manera cepadependiente. Así, sueros de ratones infectados con la cepa RA/Ne+ inducen aumento del tiempo de latencia y disminución en la amplitud del potencial de acción nervioso (PAN) en los animales receptores, 4 días post- inyección (dpy). Por el contrario, sueros de animales infectados con la cepa CA-I no afectan ningún parámetro del PAN. La inyección de IgG purificada de sueros RA/Ne+ también disminuye la amplitud del PAN, indicando la presencia de un menor número de axones funcionantes. En coincidencia se observan depósitos de IgG marcando fibras axonales y/o vainas de mielina e infiltrados inflamatorios leves en los nervios inyectados con suero RA/Ne+ pero no en los inyectados con suero CA-I/ Ne+, a los 4 dpy. No se detecta presencia de parásitos en los nervios de animales receptores de sueros (PCR). Las alteraciones del PAN luego de la inyección de suero RA/Ne+ son similares a las detectadas en animales crónicamente infectados y en ratones inyectados con tripomastigotes en el epineuro l7 dpy. En conjunto, estos resultados indican la participación directa de autoanticuerpos en las alteraciones electrofisiológicas observadas en sistema nervioso periférico en la enfermedad de Chagas. En relación con la participación de LT en esta patología, se estudió el repertorio de las cadenas variables β del receptor de células T (TCRVβ) en distintos tejidos de animales crónicamente infectados con ambas cepas de T. cruzi. En bazo, se observa la sobreexpresión del segmento TCRVβ l3 y sub-expresión del segmento TCRVβ l4, lo cual podría ser marcador de infección. En SNP, se detecta un alto número de cadenas expresadas en los tejidos blanco de daño, que refleja la presencia de un importante infiltrado inflamatorio. Significativamente, se observa el uso relativo aumentado del segmento TCRVβ9 en los tejidos blanco de daño para cada cepa: nervio y médula en los animales infectados con RA y músculo en los infectados con CA-I. Esto demuestra la existencia de un patrón de expresión diferencial de segmentos en el sitio de lesión con respecto a la expresión periférica. El clonado, secuenciación y análisis del polimorfismo de secuencia de la región CDR3 de los segmentos TCRVβ9 sobre-expresados demostró una alta proporción de clones idénticos en animales infectados con RA (médula y nervio), que podría estar indicando la presencia de LT autorreactivos en el sitio de lesión. Además, la elevada producción de citoquinas pro-inflamatorias en los tejidos blanco de daño sugiere que la respuesta inmune local tiene un papel relevante en el proceso inflamatorio. Por otro lado, en los órganos que no son blanco principal de daño para cada una de las cepas de T. cruzi, donde no se encontraba sobre-expresión del segmento TCRVβ9, se observó dominancia clonal en la secuencias de la región CDR3. Este hecho, conjuntamente con la imposibilidad de reproducir daño por transferencia pasiva de células, el hallazgo de material parasitario y la baja producción de IL-6 y TNFα, sugiere que los clones mayoritarios detectados en los tejidos que no son blanco principal de daño están dirigidos hacia antígenos parasitarios contribuyendo al control local de la infección.

Abstract:
In Argentina, l0% of the chronically Trypanosoma cruzi-infected population develops peripheral nervous sytem (PNS) pathology. Herein we studied the participation of immune mechanisms in the pathology of the PNS (spinal cord-sciatic nerve- hamstring muscle axis). Using the C3H/HeN mouse strain and two T. cruzi subpopulations (RA and CA-I) it is possible to induce pathology mainly in skeletal muscle (CA-I) or in sciatic nerve and spinal cord (RA). T cells are able to injure the organs above mentioned in absence of parasites in a strain-dependent way. Therefore, we have defined these organs as target of pathology for each T. cruzi strain. The humoral immune response, evaluated by IFAT, against comformational muscle and nerve antigens was simmilar for RA and CA-I antisera; deposits of IgG were observed at the interstitial matrix in skeletal muscle and in the myelin sheats in sciatic nerve. Sera with positive reactivity against sciatic nerve were defined as Ne+. The epineural injection of sera from infected mice in syngeniec recipients altered the sciatic nerve conduction. This effect was parasite-strain dependent since just recipients of sera obtained from mice infected with the RA strain showed electrophysiological alterations. Moreover, among the sera from RA-infected mice, only those RA/Ne+ were able to induce prolonged latencies and diminished amplitudes of the sciatic nerve action potential (SNAP). On the contrary, sera fron CA-I-infected mice did not alter any SNAP parameter. The abnormalities observed in the amplitude of SNAP seemed to be mediated by IgG since purified antibodies from RA/Ne+ injected epineurally provoke the same effect than the whole sera, demonstrating the expression of a lower number of functional axons. In accordance with these results, IgG deposits labeling the axonal course and/or mielyn sheats as well as mild inflamatory infiltrates were found in the nerves injected with RA/Ne+ sera but not in those injected with CA-I/Ne+ sera 4 days post-injection (dpi). No parasite DNA was detected in the nerves. SNAP alterations in serum recipients are simmilar to those observed in chronically-infected animals or in mice injected in the epineurum with trypomastigotes, l7 dpi. Results presented here indicate the direct participation of autoantibodies in the pathology observed in PNS in chronic Chagas’ disease. To analyze the participation of TL in pathology in our model, we have studied the T cell receptor Vβ (TCRVβ) repertoire in different tissues of chronically-infected mice. Overexpression of TCRVβ 13 and underexpression of TCRVβ l4 segments were observed in spleen of infected mice, suggesting that these peripheral TCRVβ usages can be markers of infection. In PNS tissues, it was deteceted a high number of segments expressed in the target organ of damage, reflecting the strong inflammatory infiltrate. There was an over representation of TCRVβ 9 segment in sciatic nerve and spinal cord in RA- and in skeletal muscle in CA-I-infected mice, showing a differential expression pattern between the target organ of disease and the peripheral repertoire. The sequence polymorphism analysis of the CDR3 region of over-expressed TCRVβ9 segments showed a high proportion of identical clones in sciatic nerve and spinal cord in RA-infected mice, that could denote the presence of autoreactive TL. Moreover, the elevated production of pro-inflammatory cytokines in situ suggests that the local immune response is contributing to the severe pathology observed in those organs. On the other hand, clonal dominance was observed in TCRVβ9 segments not-over-expressed in the tissues that are not the main target of damage for each T. cruzi strain. This fact, together with the fail to induce damage by passive cell transfer in these tissues, the presence of parasite in situ and the low production of TNFα and IL-6, suggest that the the main clones are directed to parasite antigens and contribute locally to the control of the infection.

Spinelli, María Fernanda. "Requerimientos estructurales de un porfirinógeno para resultar sustrato de la enzima uroporfirinógeno decarboxilasa" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Sozzi, Gabriel Oscar. "Glicosidasas de pared celular y su regulación hormonal durante el crecimiento, maduración y postcosecha del fruto de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.)" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las α- y ,β-D-galactosidasas (α- y ,β-Gal)y α-L-arabinofuranosidasas (α-Af) son enzimas capaces de liberar restos galactosilos y arabinofuranosilos de polímeros pécticos y hemicelulósicos como así también de diferentes glicoconjugados. Algunas de estas glicosidasas han sido vinculadas al ablandamiento de los frutos. En esta Tesis, se desarrollaron métodos de separación de la β-Gal II y de 3 isoformas de la α-Af. Se demostró que la ,β-Gal II es la única ,β-Gal involucrada en la maduración. Asimismo, mediante el uso de frutos de tomate antisentido para la enzima 1-aminociclopropano-l-carboxílico sintasa (ACC-S)se determinó que la actividad de β-Gal lI responde a muy bajas concentraciones de etileno. Los frutos ACC-S presentan una disolución incipiente de los polímeros pécticos de la lámina media, la cual puede ser atribuirse, entre otras causas, a hidrolasas de pared celular capaces de responder a muy bajas concentraciones de etileno. Las isoformas α-Af I y II mostraron actividad durante toda la ontogenia del fruto. α-Af I es la primera enzima de pared dependiente de zinc extraída del pericarpo de fruto de tomate, y sugiere la participación del catión en el metabolismo de la pared celular de los frutos. La actividad de α-Af II es superior al 80% de la actividad arabinofuranosidásica total en frutos de 10 días, pero disminuye durante la maduración. La isoforma α-Af III, en cambio, es específicamente activa durante la maduración y sensible al etileno, aún a muy bajas concentraciones. Se obtuvieron diferentes respuestas de las α-Af al ácido giberélico, auxinas sintéticas y etileno, mediante un nuevo sistema de discos de pericarpo de tomate ACCS. Las isofonnas I y II mostraron incrementos significativos de actividad por la aplicación de ácido giberélico o ácido 2,4-diclorofenoxiacético, mientras que la aplicación de etileno exógeno sólo incrementó la actividad de la isoforma III. Estos y otros resultados sugieren que las enzimas α-Afs están codificadas por una familia multigénica sujeta a distintos comroles hormonales, cuyos miembros desempeñan diferentes funciones in vivo. Esto último se sustenta en la capacidad de extractos de las isoformas de α-Af para liberar arabinosa de diferentes fracciones de la pared celular. Se discuten además los resultados de la influencia de atmósferas controladas y estrés por altas temperaturas in vivo sobre la actividad de α- y β-Gal y α-Af. El sistema in vitro que utiliza pericarpo ACC-S permitirá por vez primera la realización de estudios completos referidos a los efectos fisiológicos de diferentes reguladores sobre la expresión génica y la actividad de diversas enzimas, sin interferencia del etileno generado por heridas al tejido.

Abstract:
α- and ,β-D-galactosidases(α- and ,β-Gal)and α-L-arabinofuranosidases (α-Afs) are plant enzymes that have the capacity to release galactosyl and arabinofuranosyl residues from pectic and hemicellulosic polymers, as well as from different glycoconjugates. Some of these glycosidases have been related to fruit sofiening during ripening. Here, different separation methods for , β-Gal II and three α-Af isoforms were assessed. This thesis shows that , β-Gal II is a ripening-dependent β-Gal in tomato fruit. Moreover, its activity is responsive to very low levels of ethylene, as determined in antisense l-aminocyclopropane-l-carboxylic synthase tomatoes (ACC-S). In electron micrographs, ACC-S fruits showed the incipient dissolution of the middle lamella pectic polymers. This may be attributable, among other causes, to cell-wall hydrolases responsive to very low levels of ethylene. α-Af I and II are active along the entire ontogeny of the fruit. α-Af I is the first zinc-dependent cell wall enzyme isolated from tomato pericarp tissues, and provides evidence for the involvement of zinc in fruit cell wall metabolism. α-Af II is active at a very high level (accounting for over 80% of the total α-Af activity) in 10-day fruit but its activity drops during ripening. In contrast, α-Af III is ethylene-dependent and specifically active during ripening. Moreover, it is sensible even to very low levels of said plant growth regulator. Different α-Af responses to gibberellic acid, synthetic auxins, and ethylene were obtained in a novel ACC-S mature-green tomato pericarp disc system. α-Af I and II displayed increased activity levels when gibberellic acid or 2,4-dichlorophenoxyacetic acid were applied while exogenous ethylene enhanced only α-Af III activity. These and other results suggest that tomato α-Afs are likely to be encoded by a gene family under various hormonal controls, and probably have different in vivo functions. This is based on the capacity of α-Af I- and III-enriched extracts to release arabinose from different cell wall fractions. The influence in Vivo of controlled atmosphere storage and high temperature stress on α- y ,β-Galand α-Af activity are also discussed. The ACC-S pericarp in vitro system will allow comprehensive studies involving the effects of physiological levels of different growth regulators on gene expression and enzyme activity with negligible wound-induced ethylene interfering.

Sionara, Eliasaro. "Estudio taxonómico y florístico sobre las Parmeliaceae Sensu Stricto (Ascomycota Liquenizados) del segundo planalto del estado de Paraná, Brasil" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El presente trabajo es la primera revisión de las especies de Parmeliaceae s. str. del Segundo Altiplano (24°30’-26°06' S y 49°49’-50° 25' W) del Estado de Paraná, Brasil. La vegetación predominante del área de estudio varía desde campos abiertos sin árboles, hasta campos con arbustos y formación forestal denominada Cerrado. En las partes abiertas, las rocas de arenisca son el sustrato principal para los líquenes. Se describen e ilustran los ambientes donde se coleccionó el material. El clima es subtropical templado, con algunas heladas nocturnas en el invierno. Se resume la historia de la delimitación de la familia Parmeliaceae Zenker y se analiza el uso de los diferentes caracteres de importancia taxonómica al nivel de género y de especie. Se ha aceptado la delimitación de la familia Parmeliaceae propuesta por Rogers & Hafellner de 1992, que se basa en gran parte en caracteres anatómicos y morfológicos del talo, apoyados por algunos caracteres químicos como la sustancia predominante en la corteza superior y el tipo de polisacóridos de paredes hifales. Los especímenes estudiados fueron coleccionados principalmente por la autora e incorporados en el herbario UPCB de la Universidade Federal do Paraná (Curitiba, Paraná); además se depositaron algunos duplicados en BAFC, herbario de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA (Buenos Aires). Se estudiaron especímenes de referencia de distintos herbarios, incluyendo ejemplares tipo. La identificación de las sustancias de importancia taxonómica se ha realizado en su mayor parte por cromatografía en capa delgada. Los polisacáridos de paredes hifales se identificaron mediante la técnica histoquímica de Common. Se identificaron noventa y tres especies correspondientes a los siguientes catorce géneros, indicándose entre paréntesis el número de especies: Bulbothrix (6): Canomaculina (5); Canoparmelia (5); Flavoparmelia (3); Hypotrachyna (20); Myelochroa (1); Paraparmelia (1): Parmelinella (2); Parmelinopsis (5); Parmotrema (22); Punctelia (8); Relicina (1); Rimelia (8) y Xanfhoparmelia (6). Se propone una clave para diferenciar estos géneros. También se elaboraron claves para la identificación de las especies de cada género. Cada especie se describe e ilustra. También se da la distribución mundialde cada una de ellas y una distribución detallada dentro de Brasil, agregandose observaciones ecológicas y comentarios taxonómicos. Los principales hallazgos de este trabajo se resumen a continuación: descripción de dos especies nuevas para la ciencia, Rimelia succinreticulata Eliasaro & Adler y R. pontagrossensis Eliasaro & Adler primera mención de tres especies para el continente Americano: Flavoparmelia subamplexa (Hale) Hale, Parmelinella wallichiana (Taylor) Elix & Hale y Xantoparmelia mougeotina (Nyl.) D. Galloway; primera mención de tres especies para Brasil: Hypotrachyna neodissecta (Hale) Hale, H. pustulifera (Hale) Skorepa, y H. primitiva Hale & López; primera mención de cincuenta y una especies para el Estado de Paraná.

Abstract:
The present work is the first revision in the Parmeliaceae s. str. species from the Segundo Planalto (24°30'-26°06' S and 49°49'-50 ° 25' W), in the State of Paraná, Brasil. The predominant vegetation in the study area varies from open fields without trees, to fields with shrubs and the forest formation named Cerrado: in open places, sandstone rocks are the main substrate for lichens. Collection environments are described and illustrated. The climate is subtropical temperate, with some nocturnal frosts in winter. The history of the delimitation of family Parmeliaceae Zenker is summarized and the use of different characters of taxonomic significance at genus and species level is analysed. Delimitation of Parmeliaceae s. str. proposed by Rogers & Hafellner in 1992, is followed; it is mainly based on anatomical and morphological characters, but additionally supported by some chemical characters as the predominant substance in the upper cortex and the typeof polysaccharide of hyphal walls. Specimens were collected mostly by the author and housed at herbarium UPCB (Curitiba, Paraná); some duplicates were also deposited at BAFC, the herbarium of the Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA (Buenos Aires). Reference specimens from different herbaria were also examined, including types. Identification of taxonomically important lichen substances was mainly achieved by thin layer chromatography. Polysaccharides of hyphal walls were identified by means of Common's histochemical technique. Ninety three species were identified in the following fourteen genera, with species number in brackets: Bulbothrix (6): Canomaculina (5); Canoparmelia (5); Flavoparmelia (3); Hypotrachyna (20); Myelochroa (1); Paraparmelia (1): Parmelinella (2); Parmelinopsis (5); Parmotrema (22); Punctelia (8); Relicina (1); Rimelia (8) y Xanfhoparmelia (6). A key to differentiate these genera is proposed. Keys to identify the species in each genus are also given. Each species is described and illustrated. the world distribution of each species and the detailed distribution inside Brazil are also given, as well as ecological observations and taxonomic comments. the foremost findings of this works are summarised as follows: description of two species new to science: Rimelia succinreticulata Eliasaro & Adler y R. pontagrossensis Eliasaro & Adler; first report of three species for the American continent: Flavoparmelia subamplexa (Hale) Hale, Parmelinella wallichiana (Taylor) Elix & Hale y Xantoparmelia mougeotina (Nyl.) D. Galloway; primera mención de tres especies para Brasil: Hypotrachyna neodissecta (Hale) Hale, H. pustulifera (Hale) Skorepa, y H. primitiva Hale & López;: first report of fifty one species for the State of Paraná.

Simeone, Claudio. "Desparametrización y cuantización de modelos cosmológicos homogéneos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Existen diferentes puntos de vista acerca de cómo debería construirse el formalismo de la cosmología cuántica, y también acerca de la interpretación de dicho formalismo. Una razón para esto es un problema peculiar que proviene del hecho de que estamos buscando una teoria para todo el universo: mientras que lo usual es tratar con sistemas para los cuales la noción de “evolución” es clara porque es posible suponer que existe algo externo que juega el papel de reloj, esto no es posible en cosmología. Existen entonces dos posibilidades: se puede abandonar la idea de una descripción con una noción clara de tiempo; o se puede asumir que un subconjunto de las variables que describen el estado del universo pueden usarse como reloj para el resto del sistema. Aquí se presenta una propuesta para tratar modelos cosmológicos en este último marco. Esta propuesta consiste en suponer que el vínculo hamiltoniano de la teoría refleja la existencia de un tiempo escondido entre las variables canónicas, que es entonces identificado mediante la elección del gauge, para luego proceder a la cuantización, tanto vía integral funcional como en la forma canónica.

Abstract:
There are different points of view about how the formalism of quantum cosmology should be constructed, and also about its interpretation. A reason for this is a peculiar problem which comes from the fact that we are looking for a theory of the whole universe: while one usually deals with systems for which the meaning of “evolution” is clear as it is possible to assume that there is something external which plays the role of a clock, this is not possible in cosmology. There are then two possibilities: one could abandon the idea of a description with a clear notion of time; or we can assume that a subset of the variables describing the state of the universe can be used as a clock for the remaining of the system. Here a proposal for dealing with cosmological models within this last framework is presented. This proposal consists in assuming that the Hamiltonian constraint of the theory reflects the existence of a time hidden among the canonical variables, which is the identified by menas of gauge fixation; the we proceed to the quantization, both in the path integral approach, and by canonical methods.

Sciamarella, Denisse. "Estructura topológica de flujos caóticos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Schwartz, Gustavo Ariel. "Propiedades eléctricas de compuestos de caucho cargados con negro de humo" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los compuestos de caucho con negro de humo son ampliamente utilizados en la industria, principalmente en la del neumático, por la posibilidad de sintonizar las propiedades físicas a los requerimientos del producto. Sin embargo, a pesar de que estos materiales se utilizan con éxito desde hace más de un siglo, y a la gran cantidad de esfuerzo y dinero dedicados a la investigación de los mismos, aun es poco lo que se conoce acerca de los mecanismos físicos que determinan sus propiedades físicas. Muchos de los procedimientos utilizados, por ejemplo en su formulación, obedecen más a un arte, o a un conocimiento adquirido,que a un método científico. La estabilidad térmica de estos materiales compuestos presenta una relevancia tecnológica significativa y un interesante desafío para la investigación científica. Se ha observado desde hace tiempo, que variaciones importantes se producen en las propiedades físicas de los compuestos de caucho cargados con negro de humo durante el envejecimiento a temperatura constante, aun en ausencia de esfuerzos mecánicos. Estos cambios pueden ser observados a través de la medición de las propiedades eléctricas o mecánicas de estos compuestos. Numerosos estudios han sido publicados en relación con este comportamiento. En ellos, los cambios en las propiedades físicas han sido relacionados con la floculación o aglomeración de las partículas de negro de humo en la matriz polimérica. Esto significa la difusión de los agregados de negro de humo, debido al movimiento Browniano, para formar aglomerados termodinámicamente más estables. Generalmente la ecuación de Stokes es utilizada para estimar la constante de difusión (Δ=kT/6πηa). En esta ecuación, k es la constante de Boltzmann, T la temperatura absoluta, η la viscosidad y a el radio de los agregados. Sin embargo, algunos resultados parecen contradecir las predicciones de la teoría de la floculación. La floculación no ha sido observada por TEM y la modificación física o química de la superficie del negro de humo produce resultados anómalo que no pueden ser explicados sólo en términos de la teoría de la floculación. El propósito de este trabajo es determinar si los cambios observados en las propiedades eléctricas y mecánicas, durante el envejecimiento de las muestras a temperatura constante, se deben exclusivamente al movimiento de los agregados de negro de humo, si es que este movimiento existe, o si otros mecanismos físicos son los responsables de estos cambios. Para ello, numerosas muestras han sido preparadas utilizando diferentes matrices poliméricas, diferentes tipos y cantidades de negro de humo con distintos tratamientos térmicos y diferentes procesos de mezclado entre otras variables. Las muestras fueron envejecidas a varias temperaturas (entre 60 y 150°C) durante diferentes tiempos (entre 10 minutos y varios días). La resistividad eléctrica y el módulo dinámico fueron medidos antes, durante y después del envejecimiento. Además, la evolución de la cantidad de caucho ligado (bound rubber)con el tiempo de envejecimiento fue medida para tener en cuenta el efecto de la interacción entre el negro de humo y el polímero. Se diseñó y construyó un dispositivo experimental para medir la evolución de la resistividad eléctrica en función del tiempo, de una muestra de caucho con negro de humo, durante su envejecimiento a temperatura constante. El dispositivo permitió realizar mediciones en aire y en vacío, controlar la rampa de temperatura y medir en un amplio rango de condiciones experimentales. Se observó que junto con el aumento de la conductividad eléctrica (o del módulo dinámico) se producía un incremento de la cantidad de bound rubber. Más aun, se observó que la dependencia con la temperatura y el tipo de polímero era la misma para ambas cantidades. Cuanto mayor era el incremento de la cantidad de bound rubber, mayor era el incremento de la conductividad eléctrica. De acuerdo con trabajos previos de Medalia y jachym, y con los resultados obtenidos en este trabajo, es posible que las cadenas de polímero, unidas químicamente a los agregados de negro de humo, actúen como hilos conductores entre agregados próximos. De este modo, un incremento de la cantidad de bound rubber implicaría un incremento de la conductividad eléctrica. Mediciones en vacío de la variación de las propiedades eléctricas con el tiempo, más nuevos ensayos mecánicos y la irradiación gamma de algunas muestras, han permitido verificar la hipótesis de conducción eléctrica a través de las cadenas de polímero y explicar la reversión observada para tiempos largos, tanto en las propiedades eléctricas como mecánicas. Finalmente se analizan los mecanismos de conducción eléctrica y el incremento del cluster percolante a partir del incremento de bound rubber. Un nuevo modelo de percolación por enlaces dependientes del tiempo es propuesto para describir el fenómeno en términos de la nueva interpretación propuesta.

Abstract:
Carbon black filled compounds are fully used in the industry, mainly in tire industry, due to their ability to tune the physical properties to product requirements. However, in spite of these materials have been used successfully since a century ago, and too much effort and money have been put in research, still is not much what we know about the physical mechanisms that fix their physical properties. Most of used procedures, for instance in their formulation, seem more like an art, or acquired knowledge, than a scientific method. Thermal stability of these compounds present an important technological relevance and an interesting challenge for scientific research. It has been observed that appreciable changes occur in carbon black filled rubber compounds during aging at constant temperature, even in the absence of shear. These changes can be monitored through the electrical and mechanical properties of these compounds. Several studies have been published concerning this behavior and are related to flocculation of the filler entides. That means by diffusion of aggregates of carbon black, due to Brownian motion, to form thermodynamically stable agglomerates. Usually the Stokes equation is used to estimate the diffusion constant (Δ=kT/6πηa). In the previous equation k is the Boltzmann constant, T the absolute temperature, η the viscosity and a the aggregate radius. However, some results seem to be contradictory with the flocculation theory. The flocculation has not been observed by TEM and the physical and chemical modification of carbon black surface produce an anomalous behavior, which cannot be explained within the flocculation frame only. The purpose of this work is to elucidate if the observed changes on electrical and mechanical properties, during thermal aging, are due exclusively to the movement of the carbon black aggregates, if exist, or if other mechanisms responsible for those changes may exist. In order to do that, several samples were prepared using different polymer matrixes, different carbon black grades at various loading levels and also using physically and chemically modified carbon blacks. The samples were aged at several temperatures (between 60 and 150°C) during different times (between 10 minutes and several days). The electrical resistivity and mechanical modulus were measured before, during and after aging. Additionally, the evolution of the bound rubber with aging time was measured to take into account the effect of the polymer-filler interaction. An experimental device was designed and built to measure the electrical resistivity as a function of the time, for a carbon black filled rubber sample, during aging at constant temperature. This device allowed measuring sample resistivity in air and vacuum, controlling temperature ramp and measuring in a broad range of experimental setups. A simultaneous increment of the amount of bound rubber and electrical conductivity was observed. Furthermore, the temperature and polymer type dependence of both quantities is similar noticing that the higher the increment of bound rubber the higher the increment in the electrical conductivity. According to Medalia and jachym, and the results obtained in the present work, it is possible that polymer chains, grafted to carbon black aggregates, act like conductive hairs between close aggregates. In this way, an increment in the amount of bound rubber implies and increment in the electrical conductivity. Vacuum measurements of the electrical properties, new mechanical measurements and gamma irradiation have allowed verifying the hypothesis of electrical conduction through polymer chains and explaining the observed reversion for long times in both, electrical and mechanical properties. Finally, electrical conduction mechanisms and the increment of the percolating cluster from the increment of bound rubber have been analyzed. A new model of dynamic bond percolation is proposed in order to describe the behavior in terms of the new proposed interpretation.

Romera, Sonia Alejandra. "Inmunomodulación de la respuesta inmune inducida por vacunas inactivadas contra herpesvirus bovino-1" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se evaluó en bovinos la respuesta inmune humoral y celular inducida después de la vacunación con vacunas contra HVB-l y el subsecuente desafío con la cepa LA de HVB-l. Los animales fueron vacunados intramuscularmente (IM) con vacunas inactivadas contra HVB-I conteniendo aceite mineral , aceite mineral con Avridine (emulsiones agua en aceite), o aceite no mineral (squalane) con un sulfolipocliclodextrin (SL-CD/S/W, emulsión aceite en agua). No se registraron diferencias significativas en los niveles de anticuerpos inducidos por las 3 vacunas evaluadas. Sin embargo la respuesta celular fue más elevada y temprana cuando estaba incluido en la formulación vacunal el SL-CD/S/W. Se evaluó la eficacia de las vacunas después del desafpio intranasal con la cepa virulenta LA de HVB-I. Los animales vacunados con SL-CD/S/W tuvieron menor excreción viral y menores síntomas clínicos que los animales controles sin vacunar. Cuando se relacionaron los niveles de IgG2 e IgG1 con la reducción de excreción viral se observó que, independientemente del adyuvante utilizado, el grupo que presentó al momento del desafío, niveles de la relación IgG2/IgG1 mayores a l fue el grupo que presentó menor número de animales con excreción viral. Además los animales inoculados con SL-CD/S/W no presentaron reacciones adversas. Todos estos factores combinados con la gran eficacia y la fácil manipulación del aceite biodegradable hace de la vacuna formulada con este nuevo adyuvante una importante contribución para la industria de vacunas veterinarias.

Abstract:
The antibody and cell mediated immune responses induced by BHV-l were analysed in cattle after vaccination and challenge exposure to the virulent strain LA of BHV-l. Animals were vaccinated intramuscularly (IM) with inactivated virus vaccines against BHV-I containing either a water in mineral oil adjuvant (W/O), a water in mineral oil adjuvant plus Avridine (W/0+Avridine) or sulfolipo-cyclodextrin in squalane in-water emulsion (SL-CD/ S/W). No significatives difierences were registered in the antibody response induced by the three evaluated vaccines. However, the BHV-l specific cell-mediated immunite response was stronger and appeared earlier when SL-CD/S/W was included in the formulation. The efficacy of the vaccines was also evaluated after intranasal challenge of the calves with a virulent BHV-1 LA strain. Animals vaccinated with SL-CD/S/W had reduced virus excretion and clinical symptoms compared with the mock-vaccinated animals. Comparison of levels of BHV-1 specific IgG2 and IgG1 with virus shedding revealed that, regardless of the adjuvant administered, animals showing BHV-l specific IgG2/IgG1 ratios higher than 1 were those with a significant lower number of individuals shedding virus. Additionally, animals vaccinated with SL-CD/S/W presented no postvaccinal reactions. These factors, combined with the higher efficacy and the ease of manipulation of the biodegradable oil, makes the vaccine formulated with this new adjuvant an important contribution for the veterinary vaccines industry.

Pozzi, Andrea Gabriela. "Regulación de la actividad de la 3 beta-hidroxiesteroide deshidrogenasa/isomerasa en el testículo de Bufo arenarum : Relación con la espermiación inducida por hCG" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presente tesis describe los estudios realizados sobre la actividad de la enzima 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa/isomerasa (3βHSD/I), así como su participación en la regulación de la espermiación inducida por hCG en testículos de Bufo arenarum. La enzima 3βHSD/I se localiza en las fracciones mitocondrial y microsomal. Ambas localizaciones muestran diferente especificidad de sustrato, dehidroepiandrosterona (DHE) es el sustrato preferido de la enzima microsomal en tanto que la mitocondrial utiliza solamente pregnenolona. Esta doble localización establecería una compartimentalización de las dos vías de síntesis de esteroides previamente descriptas en B. arenarum: la via Δ4 en las mitocondrias y la via Δ5 en los microsomas. La actividad de ambas fracciones subcelulares es mayor en el período reproductivo que en el no reproductivo. Cuando se incluye DHE en el análisis cinético de la transformación de pregnenolona, se observa una importante modificación de la Vmax, en tanto que el Km permanece constante. Estos resultados indican que DHE se comporta como un inhibidor no competitivo de la conversión de pregnenolona. Los valores de Km y Ki sugieren la presencia de dos sitios de unión. Por otra parte, cuando se utiliza pregnenolona como inhibidor de la transformación de DHE, solo se modifica ligeramente el valor de Km, en tanto que la Vmáx se mantiene constante. Esto indica que pregnenolona se comporta como un inhibidor competitivo. Los valores del coeficiente de Hill para la transformación de DHE y pregnenolona son, respectivamente, 1.04 and 1.01. Estos estudios sugieren que en esta especie la biosíntesis de andrógenos y progesterona es catalizada por sitios activos diferentes. En esta tesis también se ha utilizado un sistema de espermiación in vitro, con el objeto de identificar, en el sapo, los posibles mediadores esteroideos de la espermiación. La espemiación fue inducida con hCG, utilizándose además distintos inhibidores de la esteroidogénesis. Cianocetona, inhibidor de la síntesis de 3-oxo-4-ene esteroides, no afectó la espermiación inducida por hCG aún cuando la síntesis de aquellos esteroides y sus derivados reducidos disminuyó en más de un 95%. Aminoglutetimida, usada en una concentración que bloqueó la síntesis de esteroides, tampoco afectó la espermiación estimulada por la gonadotrofina. Resultados similares se obtuvieron con spironolactona, inhibidor de la enzima 17α-hidroxilasa/17-20 liasa. Como conclusión, puede decirse que en B. arenarum, la espermiación inducida por hCG no está mediada por la síntesis de esteroides. Cuando el ensayo de espermiación se realizó utilizando FSH Humana recombinante (FSHrh), se observó tanto inducción de la espermiación como aumento en la síntesis de esteroides. La capacidad esteroidogénica de las células de Leydig ha sido establecida desde hace tiempo, sin embargo, la potencialidad esteroidogénica de las células de Sertoli es aún controversial. En este trabajo se informa, también, la separación de dos poblaciones celulares que responden diferencialmente a las gonadotrofinas humanas. Las fracciones con una densidad de 1.05 g/ml respondieron a hCG con un aumento en la producción de testosterona (T). Sin embargo no respondieron a FSHrh con un aumento de andrógenos ni de cAMP. La formación de cAMP fue estimulada en las fracciones con una densidad de 1.038 g/ml. Estas también respondieron a FSHrh con un aumento en la síntesis de T. Cuando FSHrh se ensayó sobre fragmentos de testículo, se observó también un aumento dosis-dependiente de la secreción de T. El método utilizado permitió la separación de dos poblaciones de células con características similares a las células de Leydig y Sertoli de cerdo y trucha. Sin embargo, la fracción con una densidad semejante a las células de Sertoli, respondió a FSHrh no solo con un aumento en la formación de cAMP, sino también con un incremento en T. Se podría concluir que el testículo de B. arenarum tendría células de Sertoli con capacidad esteroidogénica, como fuera descripto para otras especies, y que la espermiación podría ser inducida por las gonadotrofinas directamente sobre las células de Sertoli.

Abstract:
This thesis describes studies on the activity of the enzyme 3β-hydroxysteroid dehydrogenase/isomerase (3βHSD/I), as well as its participation in the regulation of hCG-induced spermiation in the testes of Bufo arenarum. 3βHSD/I localises in mitochondria and microsomes. Both locations have different substrate-specificity: microsomal enzyme prefers dehydroepiandrosterone (DHE) while mitochondria1 enzyme converts only pregnenolone. As a consequence of this dual localisation, a compartmentalisation of theΔ4 and Δ5 pathway previously described in 5. arenarum, can be proposed: the Δ4 pathway in mitochondria and the Δ5 pathway in microsomes. The activity of both fractions is higher during the reproductive season than during the nonreproductive period. The inclusion of DHE in the kinetic analysis of pregnenolone conversion affected Vmax while Km was not modified, suggesting a non-competitive inhibition of the conversion of pregnenolone. The Km and Ki values suggest the presence of two different binding sites. However, when pregnenolone was added in the assays with DHEA as substrate, no effect was observed on the Vmax while Km values slightly increased with pregnenolone concentration. Consequently, pregnenolone inhibited the transformation of DHEA in a competitive fashion. The Hill coefficient for the conversion of DHE and pregnenolone are 1.04 and 1.01, respectively. These studies suggest that, in this species, the microsomal biosyntheses of androgens and progesterone are catalysed by different active sites. This thesis also employs an in vitro system to identify potential steroidal mediators of spermiation in the toad. Spermiation was induced by hCG and the effect of different inhibitors of steroid-biosynthesis was analysed. Cyanoketone, an inhibitor of 3-oxo-4-ene steroid biosynthesis, do not block hCG-inducing activity even though biosynthesis of 3-oxo-4-ene is inhibited by 95%. Aminogluthetimide, at a concentration that inhibited testosterone (T) biosynthesis, do not alter hCG actions. Similar results were obtained with spironolactone, an inhibitor of 17α-hydroxylase/17-20 lyase activity. It is possible to conclude that in B. arenarum, hCC-induced spermiation is not mediated by steroid biosynthesis. The inclusion of Human recombinant FSH (rhFSH) in the spermiation-assay not only induces spermiation but also an increase of testosterone biosynthesis. The steroidogenic capability of Leydig cell has been largely established, however, the steroidogenic potentially of Sertoli cell is still controversial. in this work it is also reported the separation of two population cells with different responsiveness to human gonadotropins. T production was stimulated by hCG in fraction with a density of 1.05 g/ml. However, this fraction did not respond to rhFSH either with an increase in cAMP production or with T synthesis. rhFSH induced cAMP production in fraction corresponding to 1.038 g/ml. This fraction also responded to rhFSH with an increase in T production. The effect of rhFSH on testosterone production by testis fragment was also assayed. The gonadotropin evoked a dose-dependent increase in T secretion. The method employed in the present work has permitted the separation of two population cells resembling pig and trout Leydig and Sertoli cells. However, the fraction with a density similar to Sertoli cells responded to rhFSH not only with an increase in cAMP production but also with an important augment in androgen synthesis. We can conclude that the testes of B. arenarum have Sertoli cells with steroidogenic capability and that spermiation could be elicited by the action of gonadotropins on Sertoli cells.

Peñalva, Rosana G.. "Neurotransmisión serotoninérgica en el hipocampo : Interacciones con el sistema de la hormona liberadora de corticotrofina y el ciclo de vigilia-sueño en roedores" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La hormona liberadora de corticotrofina (CRH) y el neurotransmisor serotonina (5-HT) son mediadores importantes en las respuestas neuroendocrinas y comportamentales al estrés. Alteraciones en el funcionamiento de CRH y 5-HT han sido implicadas en la etiología de enfermedades psiquiátricas relacionadas con el estrés, como la depresión mayor. Sin embargo, hasta el momento, no se ha estudiado en profundidad la relación existente entre estos trastornos. Un estudio reciente demostró que niveles crónicos elevados de CRH en el cerebro de ratas reduce la respuesta de la neurotransmisión serotoninérgica en el hipocampo frente al estrés. Esto es relevante debido a la importancia de este área en el procesamiento de la información sensorial y la coordinación de las respuestas comportamentales y neuroendocrinas al estrés. Uno de los síntomas más severos de la depresión mayor son las perturbaciones en el sueño. Dado que 5-HT y CRH han sido involucradas en la regulación del ciclo de vigilia-sueño y del estado de alerta, sería factible que la disfunción de ambos sistemas este implicada en las alteraciones del sueño asociadas a la depresión mayor. El trabajo de investigación desarrollado en esta tesis tiene como objetivo una caracterización detallada de la interacción entre CRH y 5-HT y de la participación de 5-HT en el hipocampo en la regulación del ciclo de vigilia-sueño. A fin de alcanzar estos objetivos, se realizaron estudios de microdiálisis para la determinación de la neurotransmisión serotoninérgica y la actividad del eje hipotálamo-pituitario-adrenal (HPA), y de registro del sueño en ratas y ratones. Los resultados presentados en este trabajo de tesis indican que CRH y el péptido relacionado, urocortina, estimulan la neurotransmisión serotoninérgica hipocampal en ratas. Se observó que una alteración crónica del sistema de CRH tiene consecuencias sobre la neurotransmisión serotoninérgica y la actividad del eje HPA. Ratones deficientes del receptor de CRH tipo 1 mostraron un aumento en la síntesis de 5-HT en condiciones basales, niveles indetectables de corticosterona libre y una respuesta elevada de 5-HT durante y luego de una situación de estrés. Ademas, se señala la participación diferencial de los distintos receptores de CRH en la regulación de la actividad del eje HPA y en la actividad comportamental. Los resultados de este trabajo de tesis indican una correlación entre los niveles hipocampales de 5-HT y los estados de vigilancia del animal. 5-HT presenta niveles elevados durante la vigilia,intermedios durante el sueño lento y valores mínimos asociados al sueño REM. La privación del sueño provoca un aumento en los niveles de 5-HT y corticosterona libre. Sin embargo, los mismos retornan a valores basales durante el subsiguiente período de recuperación del sueño. Así, los resultados obtenidos en esta tesis permiten concluir que CRH y la neurotransmisión serotoninérgica interaccionan marcadamente en el hipocampo. Mas aún, las alteraciones en el sistema de CRH tienen profundas consecuencias en la neurotransmisión serotoninérgica. Puesto que estos resultados indican también la participación de la 5-HT hipocampal en la regulación del ciclo de vigilia-sueño, los mismos podrán contribuir a un mejor entendimiento de la etiología y sintomatología de la depresión mayor.

Abstract:
The neuropeptide corticotropin-releasing hormone (CRH)and the neurotransmitter serotonin (5-HT)are key mediators of neuroendocrine and behavioural responses to stress. Interestingly, there is now some evidence that the functioning of both CRH and 5-HT is disturbed in stress-related psychiatric disorders such as major depression, although it is still unclear whether there exists a relationship between these aberrations. A recent study has demonstrated that rats with chronically elevated concentrations of CRH in the brain show reduced responsiveness of serotonergic neurotransmission in the hippocampus to a stressful challenge. This is of interest because the hippocampus is an important brain structure for sensory information processing and behavioural and neuroendocrine responses to stress. One of the most severe symptoms of depression is disturbed sleep. Because regulatory effects of 5-HT and CRH have been shown on vigilance and the sleep-wake cycle, it may be suggested that dysfunctioning of these systems may underlie the sleep disturbances observed in major depression. The research described in this thesis was designed to further elucidate how CRH and 5-HT interact and to find out which role 5-HT in the hippocampus plays in the regulation of the sleep-wake cycle. In vivo microdialysis to assess serotonergic neurotransmission and HPA axis activity and EEG recording in rats and mice were used to pursue these goals. The results presented in this thesis show that CRH and the CRH-like neuropeptide urocortin stimulate hippocampal serotonergic neurotransmission in rats. Moreover, it was found that life-long disturbance of the CRH system has profound consequences for serotonergic neurotransmission and HPA axis activity.Dysfunction of CRH receptor type 1 in mutant mice evolves in increased synthesis of 5-HT under basal conditions, undetectable levels of free corticosterone and elevated responsiveness of 5-HT during and after a stressful experience. Furthermore, the data indicate a differential participation of the different CRH receptor types in the regulation of HPA axis activity and behaviour. The data described in this thesis further show that the levels of hippocampal 5-HT highly depend on the vigilance state of the animal. Highest levels were found during wakefulness, whereas they drop going to nonREM-sleep reaching lowest levels during REM-sleep. Sleep deprivation markedly increases hippocampal 5-HT and free corticosterone levels. However, during the subsequent period of sleep recovery 5-HT and corticosterone return to basal values. From the results presented in this thesis it may be concluded that CRH and serotonergic neurotransmission highly interact on the level of the hippocampus. Disturbances in the CRH system seem to have profound subsequent consequences for serotonergic neurotransmission. These observations may be of interest for our understanding of the etiology and symptomatology of major depression, especially because the data indicate that hippocampal 5-HT may play a role in the regulation of vigilance and the sleep-wake cycle.

Ombrosi, Sheldy Javier. "Sobre los espacios asociados a primitivas de distribuciones en espacios de Hardy laterales" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Neuman de Kurlat, María Isabel. "Relación y función de proteínas citosólicas y mitocondriales activadoras de esteroidogénesis : Regulación hormonal de una acil-CoA tioesterasa-intermediaria en la esteroidogénesis - en corazón, un tejido no esteroidogénico" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La proteína ARTISt (Arachidonic acid-Related Thioesterase Involved in Steroidogenesis) es miembro de una nueva familia de acil-CoA tioesterasas recientemente caracterizadas que catalizan la liberación de ácidos grasos de cadena larga utilizandocomo sustrato acil-CoAs. Se ha comprobado que esta proteína interviene en la liberación de ácido araquidónico por estimulación hormonal en tejidos esteroidogénicos, siendo éste un paso obligatorio en el control de la esteroidogénesis. La proteína ARTISt fue detectada tanto en tejidos esteroidogénicos, como no esteroidogénicos. Dado que se encontró una alta expresión de la proteína en corazón y el ácido araquidónico cumple un rol esencial en la función cardíaca, el objetivo del presente trabajo de Tesis fue investigar si ARTISt es activa en tejido cardíaco y si la activación y expresión de la misma pueden ser regulados por agonistas β-adrenérgicos. Los resultados muestran que ARTISt es activa en tejido cardíaco y su bioactividad puede ser regulada por agonistas β-adrenérgicos a través de la estimulación de los sistemas de transducción AMPc-dependientes. Los agonistas β-adrenérgicos regulan también los niveles del ARN mensajero de ARTISt. Se ha demostrado que los aumentos en la abundancia del ARNm de ARTISt son al menos, debidos a un aumento en la transcripción. Por otra parte, la abundancia del ARN mensajero de ARTISt aumentó cuando las ratas fueron sometidas a ayuno. Estos resultados sugieren la existencia de un nuevo camino de liberación de ácido araquidónico en tejido cardíaco regulado por agonistas β-adrenérgicos. Este sistema puede representar un camino alternativo o paralelo al de la fosfolipasa A2 para la regulación hormonal de los niveles intracelulares de ácido araquidónico.

Abstract:
ARTISt (Arachidonic acid Related Thioesterase Involved in Steroidogenesis) is member of a recently characterized family of acyl-CoA thioesterases that are involved in the hydrolysis of the thioester linkage of very long-chain fatty acids, using acyl-CoAs as substrates. It has been demonstrated that this protein is involved in arachidonic acid release by hormonal stimulation in steroidogenic tissues, an obligatory pathway in steroidogenesis control. ARTISt has been detected in steroidogenic and non steroidogenic tissues. Given the presence of ARTISt in heart and the involvement of arachidonic acid in the regulation of cardiac function, the aim of the present work was to determinate if ARTISt is active in cardiac tissue and if activation and expression of ARTISt could be regulated by β-adrenergic agonists. The results show that ARTISt presents activity in cardiac tissue and its bioactivity can be regulated by β-adrenergic agonists through the stimulation of cAMP-dependent transduction pathways. β-adrenergic agonists also regulate the mRNA levels of cardiac ARTISt. It has been demonstrated that the increase of the abundance of ARTISt mRNA is, at least, due to enhanced transcription. Otherwise, starvation also increased the abundance of ARTISt mRNA. These results suggest the existence of a new pathway of arachidonic acid release in cardiac tissue regulated by β-adrenergic agonists. This system can represent an alternative or parallel pathway to phospholipase A2 for the hormonal regulation of the intracellular levels of arachidonic acid.

Muñoz, Denise Paula. "Detección de actividad de telomerasa en distintos trypanosomátidos : Caracterización bioquímica y clonado de los genes (subunidad catalítica y ARN) de la telomerasa de Trypanosoma cruzi" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los trypanosomátidos son organismos que pueden causar serias enfermedades de gran impacto en la salud mundial. Desafortunadamente la terapéutica actual muestra relativa eficacia con significativos efectos colaterales. Es por esto que es necesario incrementar el conocimiento de la biología de estos parásitos con el propósito de desarrollar terapéuticas racionales más específicas tendientes a reducir o eliminar la proliferación de los mismos en el ser humano infectado. En organismos de reciente divergencia se ha demostrado que el mantenimiento de la longitud telomérica es un requisito esencial para la viabilidad celular a corto y largo plazo. El mecanismo más distribuido a lo largo de la evolución para tal fin es la telomerasa. En este trabajo demostramos que varios kinetoplástidos relacionados poseen actividad de telomerasa, lo cual sugiere que desde muy temprano en la evolución la telomerasa ha surgido como un mecanismo casi universal para el mantenimiento de los telómeros en organismos eucarióticos. Hemos caracterizado bioquímicamente a la enzima de Trypanosoma cruzi, demostrando que la actividad de la misma está presente en los cuatro estadios del ciclo de vida de este parásito, tanto en extractos citoplasmáticos como nucleares de la forma espimastigote y que la combinación de las características de esta enzima son únicas en comparación con las descriptas para otras telomerasas. El peso molecular aparente de la telomerasa de T. cruzi es superior a 670 kDa. En contraste con lo que sucede con otras telomerasas, la enzima de este parásito interactúa principalmente con sus sustratos por hibridización con el templado en la molécula de ARN con un irrelevante papel desempeñado por el/los sitio/s de anclaje en esta función. Esta enzima posee también una especificidad de sustratos y una permutación del templado que son únicas. A pesar de que las telomerasas de T. cruzi y la humana sintetizan la misma repetición telomérica, las mismas difieren en la procesividad, en la regulación por dGTP, en la especificidad de sustratos y en la permutación del templado presente en sus moléculas de ARN. El presente estudio es el primero en caracterizar bioquímicamente a la telomerasa de un organismo patógeno para el hombre en todo su ciclo de vida y el mismo extiende los conocimientos de la enzimología de las telomerasas a eucariotas de temprana divergencia. Estos resultados podrían contribuir en un futuro al diseño de nuevos agentes terapéuticos orientados a inhibir específicamente a la enzima del parásito con la consecuente reducción de los efectos colaterales.

Montanelli, Silvana Beatriz. "Notas sobre ecología alimentaria, densidad relativa e impacto turístico en los carnívoros del Parque Nacional Iguazú, Misiones, Argentina" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Parque Nacional Iguazú de 67.000 ha., está ubicado al N. de Misiones, Argentina y protege una porción representativa de la Selva Paranaense. Las especies de carnívoros estudiadas fueron: Panthera onca, Puma concolor, Leopardus pardalis, 1,. wiedi, L. tigrina, Herpailurus yaguarondi, líira barbara, Galicris caja, Nasua nasua, Procyon cancrivorous y Cerdocyon thous. El objetivo general del presente estudio consistió en obtener nuevos conocimientos sobre los carnívoros que habitan este área protegida con el fin de contar con información básica para la conservación y manejo de éstas especies. Se determinaron los hábitos alimentarios y la disponibilidad de alimento con que cuentan a lo largo del año. Se estimó la presencia y el número mínimo de estas especies en áreas de uso antrópico del Parque. Se estudió el impacto de las actividades humanas sobre estos carnívoros en distintas áreas del Parque Nacional Iguazú. La demanda alimentaria de los carnívoros de gran porte se centró en grandes presas como Mazama sp.,Tapirus Terrestris y medianas como Agouti paca, Dasyprocla azarae, Dasypus 5p., además de didélfidos y reptiles. En un área subtropical como la estudiada, la variabilidad estacional observada en la dieta de los carnívoros y su amplio espectro de presas, incluyen tanto animales como vegetales. Esto podría ser considerado una estrategia que permite superar periodos de escasez de alimento y, además, aprovechar recursos localmente abundantes tanto en el espacio como en el tiempo. Para los carnívoros - frugívoros (predadores medianos) la estacionalídad o la escasez en la disponibilidad de frutos carnosos podría ser amortiguada por los frutos de las palmeras, principalmente por A. romanzoffanum cuyos frutos fueron hallados en heces de C. thous, P. cancrivorous y N. nasua. En el caso de los carnívoros especialistas el oportunismo juega un papel importante en la obtención de las presas, pudiendo consumir prácticamente todas las especies de vertebrados que tengan a su alcance, amortiguando así sus variaciones estacionales. Con respecto a las interacciones hombre-fauna silvestre, el aumento del tránsito vehicular aparece relacionado con una mayor frecuencia de atropellamientos de fauna. Los sectores donde se registraron el mayor número de atropellamientos coinciden con las rutas asfaltadas, donde los vehículos se desplazan a mayor velocidad. Surge de este estudio que al menos las rutas asfaltadas deberían minimizar el impacto que ocasionan sobre la fauna estando restringidas solamente al turismo o a un área periférica al Parque. La ingesta de desperdicios o comida "no natural" que le brindan los turistas a los carnívoros es otro de los problemas relacionados con el impacto que ocasionan los visitantes, sobre la fauna de carnívoros silvestres. Uno de los factores más importantes en la declinación de las poblaciones de carnívoros es la pérdida del hábitat, principalmente debido al avance de la frontera agrícola ganadera, que propicia la deforestación. La desaparición de la fauna cerca de las áreas pobladas y un manejo ineficiente del ganado predisponen a estos predadores a consumir ganado doméstico. La captura de los animales - problema debe ser realizada por personal experimentado respondiendo a un programa de manejo y conservación de estas especies encarado por organismos gubernamentales, apoyando y educando a la par al ganadero. Se deberán considerar a los programas de educación ambiental como una herramienta prioritaria de manejo para solucionar estos problemas. El tiempo y costo que estas actividades demanden retomará con mayores beneficios tanto para la fauna como para los visitantes.

Abstract:
The Iguazú National Park consists of 67,000 ha, it is located in the North of Misiones, Argentina and it protects a relevant portion of the Paranaense Forest. The species of carnivores studied were: Panthera onca,Puma concolor, Leopardus pardalis, L. wiedi, L. ligrina, Herpailums yaguarondi, Eira barbara, Galiclis cuja, Nasua nasua, Procyon cancrivorous and Cerdocyon rhous. The general objective of the present study was to obtain updated knowledge on the carnivores inhabiting these protected area so as to count on basic information for the conservation and management of said species. Their feeding habits and the food availability they count on along the year were assessed. Presence and minimum number of these species in antropogenic used areas of the Park were estimated. And the impact of antropogenic activities on these carnivores in different areas of the Iguazu National Park was studied. For large carnivores the food demand would be centered in big prey such as Mazama sp, Tapirus Terrestris y medianas como Agouri paca, Dasyprocra azarae, Dasypus sp., apart from didelphians and reptiles. The season variability observed in the diet of carnivores inhabiting subtropical areas and their wide prey range which includes animals as well as plants, is a strategy that allows them to overcome periods of food shortage and also take advantege of locally abundant resources, along space and time. For the carnivores — frugivores (medium predators) seasonality or the shortage in the availability of fleshy fruits could be softened by the fruits of palms, mainly those of A. romanzoffíanum whose fruits were found in heces of C. thous, P. cancrivorous y N. nasua. In the case of specialists carnivores opportunity plays an important role in the obtention of prey, as they can consume practically all the vertebrate species they have at hand, thus softening seasonal variations. With respect to the interaction human - wild fauna, the increase of vehicle traffic is related to a larger frequency of fauna being run over. The areas where the highest frequencies of run over fauna were registered coincide with paved roads, where vehicles run at higher speeds. This study suggest that paved roads should at least minimize the impact they exert on the fauna, being restricted only to tourism to a peripheric area of the park. The ingestion of trash or “non-natural ” food provided by tourists is another problem related to the impact provoked by visitors on carnivores wild fauna. One of the most important factors in the decline in carnivore populations is the loss of habitat, mainly as a result of the advance of the agricultural borders, which promotes deforestation. The disappearance of fauna near human inhabited areas and the inefficiency in the management of cattle predispose these predators on consuming livestock. The capture of these problem-animals must be made by specialized staff as part of a management and conservation program for these species developed by government agencies, training and helping farmers as well. Environmental education programs are to be considered as priority plans of management to solve these problems. The time and cost these activities demand will turn back in benefits both for the fauna and the visitors.

Miretzky, Patricia S.. "Procesos geoquímicos en la cuenca baja del Río Salado, Provincia de Buenos Aires" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudiaron los procesos geoquímicos que determinan la composición de las aguas superficiales en la cuenca baja del río Salado, en especial con referencia a los elementos mayoritarios y al Si como elemento minoritario. Los procesos geoquímicos que ocurren en el camino de evolución del agua de lluvia que percola a través de los sedimentos loéssicos son: disolución del CO2; disolución de sedimentos marinos, yeso y calcita; meteorización de aluminosilicatos; intercambio catiónico. Por último, el agua superficial está sometida a evaporación-eristalización. El intercambio catiónico permite explicar las desviaciones al patrón de Gibbs, y la predominancía del sodio. Los resultados de los estudios de isótopos ambientales estables demostraron el origen meteórico del agua subterránea y el hecho de que es el caudal de base del agua superficial. Con respecto al Si, se demostró que la disolución de la sílice arnorfa cuyas fuentes son el vidrio volcánico presente en el loess y la sílice biogénica también presente en el loess y en el horizonte A, es el único proceso que permite explicar el alto contenido de sílice disuelta en los niveles más someros del acuífero pampeano. Las lagunas pampásicas constituyen sistemas muy particulares, y requieren por lo tanto el desarrollo de metodologías y modelos que contemplen sus peculiaridades, para conocer su funcionamiento y poder prever las consecuencias de una influencia antrópica creciente. El muestreo mensual de las aguas de la laguna de Chascomús permitió determinar que las variaciones estacionales en la abundancia total de diatomeas, están estrechamente ligadas con la concentración de sílice disuelta en la columna de agua. Se realizó un balance de masa de sílice anual en la laguna de Chascomús, aplicando un modelo de una sola caja, de mezcla perfecta, con el que se pudo establecer, que la concentración de sílice soluble en la columna de agua está condicionada por la formación de sílice biogénica y que el máximo stock de invierno debido a los aportes de los arroyos y del agua subterránea no coincide con la época de mayor demanda por las diatomeas. Es necesaria la disolución de fases minerales, o procesos de desorción de sílice amorfa de óxidos metálicos, en primavera y verano, para disponer de la sílice soluble indispensable para soportar el aumento en abundancia de diatomeas estacional. Se analizó la influencia antrópica en la hidroquímica de las lagunas pampásicas y en particular en la laguna de Chascomús, desde el punto de vista de la eutrofización y la modificación de la hidrología regional a través de canalizaciones. Estos estudios constituyen un aporte importante al conocimiento de estos ecosistemas, frecuentes en una zona de gran importancia económica en nuestro país y pueden servir de modelo para comprender otros cuerpos de agua de dinámica muy susceptible a influencias climáticas, cuyo tratamiento difiere notablemente del que se aplica a los grandes lagos del hemisferio Norte.

Abstract:
Geochemical processes, responsible for surficial water hydrochemistry in the lower Salado river basin, were studied, with especial reference to major elements and Si as minor element. The geochemical processes that take place in the evolution from rainwater to groundwater when it percolates loessic sediments are: dissolution of CO2, dissolution of marine sediments, gypsum and calcite, weathering of aluminosilicates and cationic exchange reactions. Finally, surficial water is subjected to the evaporation-crystallization process. The cationic exchange process explains the deviations to the Gibbs pattern, and the predominance of sodium. The results of environmental stable isotopes demonstrated the meteoric origin of groundwater and the fact that it is the base flow of surficial water. With regards to Silicon, it was demonstrated that amorphous silica dissolution is the only process that explains the high dissolved silica content of the shallow levels of the Pampeano aquifer. The sources of amorphous silica are volcanic glass shards present in loess sediments and biogenic silica also present in pampean loess and in the A soil horizon. Pampasic ponds constitute very particular systems, and they require the development of methodologies and models that contemplate their peculiarities, in order to understand their dynamics and to foresee the consequences of an increasing anthropic influence. Monthly sampling of Chascomús pond, determined that seasonal variations in the total diatom abundance, were closely bound with dissolved silica concentration in water column. Also, an annual silica mass balance was performed, applying a single box model. It was determined, that the dissolved silica concentration in the water column was conditioned by the biogenic silica production and that the maximum winter stock due to groundwater and stream contributions didn’t coincide with the spring and summer diatom demand. It is necessary the dissolution of silicate mineral phases, or amorphous silica desortion from metallic oxides, to provide the indispensable soluble silica for the seasonal increase in diatom abundance. The anthropic influence in pampas ponds hydrochemistry, in particular in Chascomús pond, was analysed taking in account eutrofization and modification of the regional hydrology by canalisations. These studies constitute an important contribution to the knowledge of these ecosystems, frequent in an area of great economic importance in our country, and they can serve as a model to understand other systems with dynamics susceptible to climatic influences, whose treatment differs notably from that applied to the big lakes of the North hemisphere.

Mazzobre, María Florencia. "Propiedades de no equilibrio en sistemas vítreos y sobreenfriados en relación con la estabilidad enzimática" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo del presente trabajo fue analizar propiedades de no equilibrio en sistemas amorfos o sobre-enfriados obtenidos por liofilización o congelación (transición vítrea (Tg), cristalización de hielo o azúcar, propiedades de sorción) y su influencia sobre la estabilidad enzimática (β-galactosidasa). Se estudió en particular el impacto de la cristalización de la matriz sobre la capacidad protectora de azúcares en sistemas de baja humedad. La estabilidad enzimática se vio afectada por cambios moleculares independientes de Tg en matrices vítreas y por la cristalización del azúcar en estado sobreenfriado. Los azúcares no reductores trehalosa y rafinosa en estado amorfo ofrecieron mayor protección que las matrices poliméricas de Tg más elevada, lo cual sugiere un mecanismo de protección no relacionado con el estado físico del medio pero sí con interacciones intermoleculares específicas. La dependencia de la cinética de inactivación enzimática y de la cristalización de azúcar con la temperatura se pudo describir con las ecuaciones de Arrhenius, VTF y WLF, empleando los coeficientes adecuados. El uso de excipientes como azúcares, sales o polímeros permitió retrasar la cristalización de azúcares o la formación de hielo y extender el efecto protector a la zona de liquido sobreenfriado. Tanto la inactivación enzimática en matrices vitreas como el retraso de la cristalización de hielo o azúcar se asociaron con cambios microestructurales (a nivel molecular) no relacionados con cambios en el valor de Tg del sistema (nivel supramolecular). Los mecanismos por los cuales los azúcares y las sales retrasan la cristalización del azúcar, analizados por la ecuación de JMAK, serían distintos.

Abstract:
The objective of present work was to analyze several non-equilibrium properties in amorphous or supercooled liquid systems prepared by freeze-drying or freezing (glass transition (Tg), ice or sugar crystallization, sorption properties) and their influence on enzyme stability ((β-galáctosidase). The impact of crystallization on the protective effect of sugars in low moisture systems was particularly investigated. Enzyme stability was affected by molecular changes, not related with Tg in the glassy matrices, and by sugar crystallization in the supercooled region. The stability in the reducing sugars trehalose and raffinose, was better than in the polymeric matrices of higher Tg, indicating that the protective mechanism was more related with specific molecular interactions than with physical properties of the system. Arrhenius, VTF and WLF equations described fairly well the temperature dependence of both, the kinetic of enzyme inactivation and sugar crystallization, using the adequate coefficients. The addition of sugars, salts or polymers promoted a delay on sugar or ice crystallization, being the protective effect extended to the supercooled region. Enzyme inactivation in glassy systems and the delay on sugar or ice crystallization were associated with microstructural changes (at a molecular level) not related with changes of the Tg value (supramolecular level). However, the mechanisms by which sugars or salts delay sugar crystallization (analyzed using equation JMAK),seem to be different.

Mazzella, María Agustina. "Interacción entre fitocromos y criptocromos en el control del crecimiento y desarrollo de Arabidopsis thaliana" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La luz provee a las plantas la energía necesaria para la fotosíntesis e información sobre el ambiente. Las señales lumínicas son percibidas por fotorreceptores específicos. En Arabidopsix thaliana se identificaron y clonaron tres grupos de fotorreceptores: los fitocromos que son fotorreceptores de de luz roja (R) y roja lejana (RL), que son codificados por cinco genes (PHYA,PHYB,PHYC,PHYD,PHYE); los criptocromos que son fotorreceptores de luz azul, codificados por dos genes (CRY1 y CRY2) y las fototropinas. Los fitocromos y criptocromos tienen funciones independientes y coordinadas que regulan el desarrollo de las plantas durante todo el ciclo de vida. El objetivo de esta tesis es estudiar la interacción entre fitocromos (específicamente phyA y phyB ) y criptocromos (cryl y cry2) en distintas respuestas durante el desarrollo de Arabidopsis thalíana. Para cumplir este objetivo hemos obtenido los dobles, triples y cuádruple mutantes a partir de los simples mutantes de phyA, phyB, cry1 y cry2 para analizar el efecto de un fotorreceptor en ausencia/presencia de los demás fotorreceptores. El uso de los simples, dobles, triples, y cuadruple mutantes permitió revelar nuevas interacciones entre los fotorreceptores e identificar funciones no conocidas de los mismos. En plántulas etioladas expuestas a luz R, el phyA mostró un efecto dual. Cuando el phyA fue activado con bajos flujos de luz R produjo por un lado la inhibición del alargamiento del hipocotílo, y por otro lado, redujo la inhibición del alargamiento del hipocotílo mediado por el phyB, es decir que el phyA interactuó antogonísticamente con el phyB. En nuestras condiciones, el phyA retrasó la transición del estado vegetativo al reproductivo, sólo en determinados contextos genéticos: cry1, cry2 y cry1 cry2, poniendo en evidencia un nuevo rol del phyA en el control de la floración. El phyB y el cry1 fueron redundantes en la represión del alargamiento del entrenudo, y la ausencia de ambos permitió demostrar que el alargamiento del tallo no está obligadamente acoplado al desarrollo reproductivo. La redundancia entre phyB y cry1, sin embargo, fue condicional a la temperatura. En la inhibición del alargamiento del hipocotílo, el phyB y el cry1 interactuaron sinergísticamente. La interacción del phyB y el cry1 en ésta respuesta fue condicional al ambiente lumínico. En la mayoría de las respuestas el cry2 fue redundante con el cry1. La interacción del cry2 con phyA y phyB en las distintas respuestas durante el desarrollo puede dividirse en dos patrones, en el primero la actividad del cry2 requirió la presencia de phyA y phyB (efecto sinérgico), y en el segundo requirió la ausencia de phyA y phyB (efecto redundante). El análisis del comportamiento del cuádruple mutante phyA phyB cry1 cry2 mostró que la deficiencia en la percepción de luz durante el desarrollo no está restringida sólo a la des-etiolación sino que continúa incluso hasta al estadío adulto. Basados en los datos de esta tesis y de la literatura presentamos un modelo de los patrones de interacción para dos procesos: des-etiolación y floración. Las interacciones observadas en condiciones de radiación natural entre los fotorreceptores reflejan aquellas observadas en condiciones controladas. La compleja red de interacciones entre fitocromos y criptocromos en condiciones de radiación natural generó homeostasis en la des-etiolación contra los cambios en irradiancia y fotoperíodo que no forman parte de la señales relacionadas con la posición del vástago por debajo o por encima de la superficie del suelo. El phyA, phyB, cry1 y cry2, se acoplan con diferentes jerarquías durante el desarrollo de Arabidopsis. La dependencia o redundancia entre las vías es afectada por las condiciones ambientales, el estado ontogénico y el contexto genético. La redundancia entre los fotorreceptores en el control de los procesos del desarrollo genera estabilidad del fenotipo que evita caer en patrones aberrantes, mientras que las jerarquías entre los fotorreceptores permite un patrón específico de crecimiento y desarrollo bajo señales lumínicas particulares.

Abstract:
Light provides plants not only the energy necessary for photosynthesis but also information about the environment. Light signals are perceived by specific photoreceptors. In Arabidopsis thalíana three groups of photoreceptors have been identified and cloned: phytochromes,that are red - far-red light photoreceptors encoded by five genes (PHYA, PHYB,PHYC,PHYD and PHYE);cryptochromes, that are blue light photoreceptors encoded by two genes (CRY1 and CRY2);and phototropin. Phytochromes and cryptochromes have independent and coordinated functions that control plant development throughout all the life cycle. The aim of this thesis is to study the interactions between phytochromes (specifically phyA and phyB) and cryptochromes (cry1 and cry2) in the control of Arabidopsis thaliana development. For this propose we have obtained all the double, triple and quadruple mutant combinations of the phyA, phyB, cry1 and cry2 mutants to analyze the effect of one photoreceptor in the presence/ absence of other(s). The use of single, double, triple and quadruple mutants revealed novel interactions among photoreceptors and identified unknown photoreceptor functions. In etiolated seedlings exposed to continuous red light, phyA showed a dual effect. On one hand phyA inhibited hypocotyl growth, and on the other, it reduced hypocotyl growth inhibition mediated by phyB. Thus, phyA interacted antagonistically with phyB. Also under white light photoperiods, phyA delayed the transition from the vegetative to the reproductive stage only in specific genetic backgrounds: cry1, cry2 and cry1 cry2, evidencing a novel roll of phyA in the control of flowering. phyB and cry1 were redundant on intemode growth repression, and the absence of both photoreceptors demonstrated that stem growth is not inevitably linked to the reproductive developmental program. In hypocotyl growth inhibition responses, phyB and cry1 interacted synergistically, and this interaction was light conditional. In most of the responses studied here, cry2 was redundant with cry1. The interaction of cry2 with phyA and phyB in different developmental responses followed two patterns, one in which cry2 activity required the presence of phyA and phyB (synergistic effect), and the other in which cry2 required the absence of phyA and phyB (redundant effects). The behavior of the phyA phyB cry1 cry2 quadruple mutant indicates that deficiencies in light perception are not restricted to de-etiolation , and continue during the adult stage. Based on our results and complementary literature we propose a genetic model of photoreceptor interactions for two processes: de-etiolation and flowering. The interactions observed under natural radiation were compatible with those observed under laboratory conditions. The complex network of interaction between phytochromes and cryptochromes under natural radiation generated de-etiolation homeostasis against the changes in irradiance and photoperiod not associated to the position of the shoot above or below soil level. phyA, phyB, cry1 and cry2 are coupled to Arabidopxis development with different hierarchies. Dependency or redundancy between pathways is affected by environmental conditions, ontogeny, and genetic context. Redundancy among photoreceptors in the control of developmental processes generates stability of phenotype that prevents aberrant patterns, while different hierarchies among photoreceptors allow a specific pattern of growth and development under specific light conditions.

Martinez, Eric Javier. "Herencia de la reproducción apomíctica e identificación de marcadores moleculares ligados al carácter en Paspalum notatum" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La manipulación de la apomixis, reproducción asexual por medio de semillas, puede tener un gran impacto en la agricultura. La apomixis es el modo principal de reproducción en Paspalum notatum, una gramínea forrajera nativa de América Central y del Sur. Los citotipos diploides son sexuales mientras los tetraploides son apomícticos. Los objetivos de este trabajo fueron estudiar el control genético de la apomixis e identificar marcadores moleculares ligados al carácter. Se generaron progenies F1, F2s y retrocruzas a partir de un cruzamiento original entre una planta tetraploide 100 % sexual con una apomíctica obligada. Las progenies fueron clasificadas en sexuales o apomícticas mediante la observación directa de sacos embrionarios en 60 óvulos por cada planta. Las plantas que poseían únicamente sacos meióticos fueron consideradas sexuales, mientras que se clasificó como apomíctica a aquella que tenia sacos apospóricos. En todos los cruzamientos sexuales X apomícticos la segregación fenotípica fue cercana a 3:1 (sexuales:apomícticas). La autopolinización de plantas F1 sexuales y los cruzamientos entre ellas, siempre dieron origen a descendientes sexuales. Estos resultados no se ajustan a un modelo Mendeliano clásico para una herencia de tipo tetrasómica y con control monogénico. Es probable que algún mecanismo de distorsión gamética o genotípica provoque la muerte de algunas gametas o genotipos que condicionan para apomixis. El análisis de segregantes en grupos (Bulked Segregant Analysis) fue usado para identificar marcadores de RAPD, AFLP y RFLP asociados con la apomixis. Diez plantas fueron incluidas en cada uno de los grupos (S y A). Se probaron cuatrocientos iniciadores de RAPD y se utilizaron 10 combinación de pares de oligonucleótidos de AFLP. Se ensayaron 77 sondas de RFLP de maíz y arroz. Dos marcadores RAPD,2 de AFLP y 2 RFLP mostraron diferencias entre los grupos. Todos fueron específicos del padre y del grupo apomíctico. El análisis de segregación en una población de 175 individuos F1 para RAPD, 100 para AFLP y 132 para RFLP, mostró un ligamiento completo entre el locus Apo y los seis marcadores moleculares descubiertos. El locus de la apomixis fue encontrado relacionado con el extremo distal del brazo largo del cromosoma 12 de arroz. Los marcadores moleculares confirmaron que el carácter posee un control monogéneico y es dominante sobre la sexualidad, pero la segregación también mostró distorsión de las proporciones Mendelianas esperadas.

Abstract:
Manipulation of apomixis, asexual reproduction by seeds. may have a great impact in agriculture. Apomixis is the main mode of reproduction of Paspalum notatum. a forage grass native to Central and South America. Diploid cytotypes are sexual while tetraploids are apomictic. The objectives of this work were to study the genetic control of apomixis and the identification of molecular markers linked to the trait. F1, F2s and backcrosses were generated by crossing a 100 % sexual tetraploid plant with an obligated apomictic one. The progeny was classified in sexual or apomictic individuals by direct observation of embryo sacs in 60 clarified ovaries for each plant. Sexual plant was considerate that only had meiotic embryo sacs, while apomictic plant that had aposporous embryo sacs. The segregation in all crosses of sexual x apomictic plants was close to 3:1 (sexual:apomictic). Self-pollination of sexual F1 plants and crosses between two F1plants gave always origin to 100 % sexual offsprings. Taking in account tetrasomic inheritance. these results do not adjust to a classic Mendelian model for monogenic inheritance. It is probable that some mechanisms of gametic or genotype distortion cause the death of some gametes or genotypes conditioning apomixis. Bulked segregant analysis was used to identify RAPD, AFLP and RFLP markers associated with the trait. Ten plants were included in each group (sex, apo). Four hundred RAPD primers and 10 pairs of oligonucleotides for AFLP were tested. 77 RFLP probes of maize and rice were evaluated as well. Two RAPD, 2 AFLP and 2 RFLP markers showed differences between the groups. All markers resulted specific to the apo group and were present in the apo parent. Linkage analysis performed using 175 individuals with RAPD, 100 with AFLP and 132 with RFLP showed complete association between the apo locus and the six molecular markers detected. The apo locus is related with the telomeric region of the long arm of rice chromosome. Molecular markers confirmed that apo locus have a monogenic control and is dominant over sexuality, but the segregation also showed distortion from the expected Mendelian proportions.

Marchi, María Claudia. "Estudio de la transición SOL-GEL y de la estructura de geles de titania con sondas fotofísicas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la presente Tesis se utilizan diversas técnicas experimentales, principalmente fotofïsicas, para estudiar la transición sol-gel de sistemas basados en titania. La sintesis de los mismos se realizó en diversos medios -acuoso, alcohólico y en micelas inversas- a partir de la hidrólisis de Ti(OBnu)4. Se empleó una variedad de sondas ópticas en estudios de anisotropía de fluorescencia y optoacústica, obteniéndose información sobre cambios de microviscosidad y de la evolución de las cavidades formadas al desarrollarse redes de polímeros o de nanopartículas de titania, según el tipo de gel. Complementariamente se utilizaron técnicas de caracterización de los materiales obtenidos: espectoscopía IR y UV-visible, difractometría de RX, mediciones con balanza de cuarzo y de viscosidad macroscópica. Las características del material obtenido dependen del medio en el que se realiza la síntesis. En cada caso se discute el tipo de estructura obtenida. La variación de los parámetros viscoelástícos, microscópicos y macroscópicos, durante la transición sol-gel se analiza empleando modelos de percolación.

Abstract:
Different experimental methods, with emphasis on photophysical experiments using optical probes, were performed to study the sol-gel transition in titania. The synthesis were done in several media: water, buthanol and reversed micelles, using Ti(OBnu)4 as precursor. A variety of optical probes were used for measurements of fluorescent anisotropy and laser-induced optoacoustic. Information about the changes of viscoelastic parameters and the evolution of microcavities through the sol-gel transition was obtained. Characterization techniques, such as IR and UV-visible spectroscopy, X-ray diffractometry and quartz microbalance were also employed. Polymeric or nanoparticle-based gels were obtained depending on the synthetic media. The variation of the microscopic and macroscopic viscoelastic parameters is discussed on the basis of percolation models.

Mannarino, Gabriela S.. "Coordinates : Un Lenguaje para el modelado de empresas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Mancilla Aguilar, José Luis. "Estabilidad y estabilización de sistemas de control a datos muestreados" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo estudiamos la estabilidad y estabilización de sistemas de control a datos muestreados. Con tal fin introducimos un tipo de ecuación híbrida que permite modelar estos sistemas en toda la escala temporal, y estudiamos la estabilidad del sistema dinámico híbrido determinado por las soluciones de una de tales ecuaciones. Obtenemos así caracterizaciones de las distintas propiedades de estabilidad en términos de funciones de Lyapunov. Luego analizamos la estabilidad de sistemas híbridos lineales perturbados con perturbaciones evanescentes o persistentes y caracterizamos la estabilidad exponencial del sistema híbrido en términos de la estabilidad exponencial de su linealización (una extensión del Primer Método de Lyapunov). Aplicando estos resultados al estudio del problema de la estabilización exponencial de una planta no lineal mediante un controlador digital, obtenemos condiciones necesarias y suficientes para la existencia de estabilizadores exponenciales y demostramos la robustez de estos controladores. También estudiamos la implementación digital de leyes de control estabilizantes vía muestreo y retención de orden cero. Demostramos que tal implementación estabiliza semiglobalmente al sistema a un entorno del origen. La técnica de demostración que empleamos nos permite por un lado obtener cotas para el paso de muestreo y por el otro derivar una condición suficiente para la estabilización asintótica. Por último estudiamos la implementación digital de soluciones del problema de seguimiento de trayectorias. Mostramos un ejemplo en el cual la implementación digital vía muestreo y retención de orden cero produce un error de seguimiento inaceptable. Inspirados en construcciones desarrolladas por Krasovskii y Subbotin en el contexto de la teoría de juegos posicionales, presentamos un algoritmo de control que, a partir de una solución del problema de seguimiento de trayectorias y, empleando los datos muestreados del sistema, asegura la estabilidad práctica semiglobal del error de seguimiento, con error final arbitrariamente pequeño si el período de muestreo es suficientemente pequeño. También demostramos que el controlador propuesto es robusto respecto de pequeñas perturbaciones y de pequeños errores en los actuadores y en las mediciones, aún si la ley original no lo era.

Abstract:
In this work we study the stability properties and the stabilization of sampled-data control systems. With this aim we introduce a class of hybrid equations that enables us to model these systems in the whole time scale and we study the stability properties of the hybrid dynamical system originated from the solutions of any of these equations. In this way we obtain, in terms of Lyapunov functions, characterizations of the various stability properties of this class of systems. Next, we analyze the stability of perturbed hybrid linear systems for both non-evanescent and evanescent perturbations, and we characterize the exponential stability of the hybrid system in terms of the exponential stability of its linearization (an extension of the Indirect Lyapunov Method). These results enable us to obtain necessary and sufficient conditions for the existence of digital exponential stabilizers for nonlinear continuous-time plants and to prove the robustness of these controllers. We also study the digital implementation of stabilizing control laws via Sampling and Zero-order Hold (SZH), and we show that with this implementation practical semiglobal stabilization to the origin is obtained. The technic used in the derivation of these results enables us, on one hand, to obtain bounds for the sampling ratio and on the other, to establish a sufficient condition for the asymptotic stabilization of the origin. Finally, we study the digital implementation of continuous-time trajectory tracking laws. We present an example where the SZH-implementation of one of these laws results in an unacceptable tracking error. Then, and based on certain results obtained by Krasovskii and Subottin in the context of positional games, we develop a control algorithm that guarantees semiglobal practical stability of the tracking error, with final error arbitrarily small for small enough sampling periods. This algorithm uses a known continuous-time solution of the tracking problem and the sampled-data of the system. We show that this controller is robust to small perturbations and to small errors in the measurements and in the actuators, even if the original continuous-time law is not so.

Mairal, María Liliana. "Evolución temporal de la dinámica asociada a series electroencefalográficas" (2001). Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La interpretación clínica de los registros EEG intenta establecer una relación entre los rasgos patológicos (sintomatología clínica) con el reconocimiento de patrones (“patterns”) determinados, a través de la inspección visual. Si bien este análisis tradicional es muy útil, la inspección visual de un registro EEG es una práctica subjetiva y de difícil sistematización. Con el objetivo de superar estos inconvenientes, el análisis cuantitativo EEG (qEEG) introduce medidas que reflejan las características de la actividad eléctrica cerebral, como así también las de su dinámica asociada. Recientemente algunos grupos de investigadores han reportado resultados, acerca de la caracterización de la evolución temporal de la dinámica asociada a registros EEG de pacientes epilépticos, utilizando cuantificadores basados en técnicas métricas de la dinámica no-lineal. Ellos analizaron el registro EEG durante el inicio de la crisis epiléptica y también la actividad de base (pre y post-ictal), siguiendo la evolución temporal de la complejidad de la señal, asociada con la dimensión de correlación, D2, y el grado de caoticidad dado por el mayor exponente de Lyapunov, Λmax. Uno de los principales hallazgos reportados fue la disminución observada en estos dos cuantificadores durante el estadio ictal. Esto sugiere la existencia, al inicio de la crisis, de una transición en el comportamiento dinámico de la red neuronal desde un sistema complejo a uno más simple. Más aún, algunos investigadores reportan un decrecimiento significativo de los cuantificadores mencionados minutos antes del inicio mismo del ataque, generando la hipótesis de que el mismo podría ser predicho. La aplicación de las técnicas métricas de la dinámica no-lineal a un conjunto de datos experimentales exige como requisito básico la estacionariedad de la serie de tiempo que representa. La serie temporal, a su vez, debe ser representativa de un atractor único y estable. Asimismo, la evaluación de la D2 y el Λmax requieren registros con un elevado número de datos significativos, puesto que se definen como propiedades asintóticas de dicho atractor. Se pueden caracterizar diferentes estados a través de las medidas estáticas de D2 y Λmax en porciones seleccionadas de la actividad cerebral (series de tiempo EEG) que satisfagan las hipótesis matemáticas requeridas. Sin embargo, estos invariantes métricos requieren la computación previa de ciertos parámetros y además se degradan rápidamente con el ruido aditivo, dando muchas veces vagos resultados. Desafortunadamente, no se puede asumir la existencia de un atractor estable cuando tratamos con registros de larga duración de la actividad de la masa neuronal, por consiguiente, no se pueden inferir en forma directa conclusiones acerca de las características de su dinámica. A fin de caracterizar la dinámica, es posible relajar el requisito de estacionariedad de la serie temporal e introducir dos cuantificadores: la dimensionalidad y la caoticidad. De este modo, computando sus valores en ventanas temporales deslizantes se podría acceder a la dinámica asociada a la señal EEG. Estos nuevos cuantificadores esencialmente están definidos del mismo modo que la Dz y el Λmax, pero no son equivalentes, ya que violan el requisito matemático básico de estacionariedad de la serie temporal dada. Otra posibilidad para abordar el estudio cuantitativo de una señal EEG es por medio del análisis tiempo-frecuencia, basado en la Transformada Wavelet Discreta Ortogonal (ODWT). En este método no es necesario el cumplimiento del requisito de estacionariedad de la señal y solo se trabaja con la respuesta mensurable del sistema, es decir, la serie temporal misma. Tomando entonces como herramienta básica la Transformada Wavelet de la señal EEG, definimos dos cuantificadores: la Energía Wavelet Relativa (RWE) y la Entropia Wavelet Total (SWT). La RWE brinda información acerca de la energía relativa asociada con las diferentes bandas de frecuencias presentes en el EEG y su correspondiente grado de importancia. La SWT da una medida del grado de orden/desorden presente en una serie de tiempo, y en consecuencia, si se la evalúa a lo largo de todo el intervalo temporal del registro EEG, proveerá información importante que se puede relacionar con cambios en la dinámica subyacente. Los resultados provistos por la SWT son independientes de la energía de la señal y por otra parte, de su definición se desprende que, es una magnitud libre de parámetros y del requisito de estacionariedad de la serie temporal. En este trabajo de tesis se comparan los resultados obtenidos a partir de cuantificadores basados en las técnicas métricas de la dinámica no-lineal y en el análsis wavelet (en particular a través de la Caoticidad y la Entropía Wavelet Total) para señales EEG de pacientes epilépticos, provistas por electrodos profundos y de superficie. El objetivo de esta comparación es elegir la técnica más adecuada para una posible aplicación de la misma en la detección automática de cambios en la dinámica de la señal. En este sentido, se intenta determinar de las dos técnicas analizadas la que presenta mayores ventajas, tanto en su implementación como en su interpretación.

Abstract:
The clinical interpretation of EEG attempts to link pathological features (clinical symptomatology) with the visual inspection and pattern recognition of the EEG. Although this traditional analysis is quite useful, the visual inspection of the EEG is subjective and hardly allows any systematization. In order to overcome this, quantitative EEG (qEEG) analysis introduces objective measures reflecting the characteristics of the brain activity as well as the associated dynamics. Recently, several results have been reported about the characterization of the temporal evolution of the EEG associated dynamics by some research groups. They used quantifiers based on metric techniques of nonlinear dynamics applied to EEG epileptic records. Following the temporal evolution of the signal complexity, associated with the measurement of the correlation dimension D2, and the chaoticness degree, throughout the largest Lyapunov exponent, Λmax); they not only analyzed the EEG during the seizure onset but also the background neuronal activity (pre- and post-ictal). The main findings from these reports were a reduction of these two quantifiers during the ictal stage, suggesting that a transition takes place at the seizure onset in the dynamical behavior of the neural network from a complex behavior to a simpler one. Furthermore, some researchers reported a significant decrease of these quantifiers a few minutes before the seizure-onset raising the hypothesis that epileptic seizure could be predicted. The basic requirement for applying the nonlinear dynamics metric tools to experimental data is the stationarity of the time series. This means that the time series is representative of a unique and stable attractor. The evaluation of D2 and Λmax requires long time recordings, because they are defined as asymptotic properties of the attractor. Applying static measurements of D2 and Λmax to selected portions of brain electrical activity (EEG time series), which satisfy all the mathematical hypothesis, different states could be characterized. These metric invariants require the computation of some previous parameters and also degrade rapidly with additive noise, giving many times vague results. Unfortunately, for long recordings of neural mass activity we can not assume a stable attractor and, therefore we can not come straightforward conclusions concerning dynamic characterization. Moreover when one is interested in state transitions that are not strictly defined, it is possible to relax the stationarity requirement. In these cases we can introduce two quantifiers: the dimensionality and the chaoticity. Computing their values in slide time windows the EEG associated dynamics could be accessed. They are formally defined as D2 and Λmax, but they are not equivalent, because they violate the basic mathematical hypothesis of stationarity. Another kind of qEEG methods is based on time-frequency analysis, like the Wavelet Transform for example. This method only uses the data set, that means the time series. It is not necessary to assume any mathematical hypothesis. Then, taking as a basic element the Orthogonal Discrete Wavelet Transform (ODWT). of the EEG signal, we define two quantifiers: the Relative Wavelet Energy (RWE) and the Total Wavelet Entropy (TWS). The RWE give information about the relative energy associated with the different frequency bands present in the EEG and their corresponding degree of importance. The TWS is a measure of the order/disorder degree in the EEG signal. Furthermore, it gives information in relation with the changes in its underlying dynamical process. The TWS is independent of the signal energy and parameter free. Furthermore, it is not necessary the stationarity requirement for computing the TWS of the EEG time series. In this work we compare the results based on the two different methods mentioned above. Firstly, we apply metric techniques of no lineal dynamic defining the Chaoticity and then the wavelet analysis through the Total Wavelet Entropy. These two quantifiers were computing in EEG signals of epileptic patient providing by depth and scalp electrodes. This study tries to determine the better method in order to detect changes in the EEG signals, from the point of view of its interpretation and implementation. Finally, the main goal of this comparison is to select a suitable technique to a possible application in automatic detection of changes in the underlying dynamic of the EEG time series.

Lorenzi, Hernán Alejandro. "Estructura genómica y diseño de nuevos vectores de transfección para Trypanosoma cruzi" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Trypanosoma cruzi es un parásito protozoario causante de la enfermedad de Chagas. Dentro del marco del proyecto genoma de T. cruzi y como un activo aporte a su concreción, se ha caracterizado un nuevo tipo de marcador genético asociado a la secuencia repetida SIRE denominado SAS, que condujo a la identificación de cuatro nuevos genes y de las secuencias repetidas TCREL y VIPER. Para contribuir a la construcción del mapa fisico, se construyó y caracterizó una biblioteca de ADN genómico de T. cruzi en vectores YAC con un tamaño promedio de inserto de 365 kpb, que fue utilizada para construir el mapa fisico de una región de ~900 kpb del cromosoma XVI y comenzar la construcción del mapa fisico del cromosoma XX. También se construyeron cromosomas circulares en levaduras por el método de clonado RAT utilizando las secuencias repetidas como base del clonado, y se probó la utilidad de un vector de fragmentación que sirvió para ubicar el gen TcP2β cerca de una región telomérica de un cromosoma de ~1 Mpb. Para contribuir con los estudios genómicos funcionales se diseñó y construyó el vector necesario para obtener cromosomas artificiales de T. cruzi. Finalmente, estos estudios llevaron a utilizar comparaciones de secuencia para definir las características de sintenía de extensas regiones genómicas de T. cruzi, Trypanosoma brucei y Leishmania major.

Abstract:
Trypanosoma cruzi is a parasitic protozoan that causes Chagas disease. As part of the T. cruzi genome project and to contribute to its concretion we have characterized a new type of chromosomal marker associated to the repetitive element SIRE named SAS, that allowed the identification of four novel genes and two repetitive sequences, TcREL and VIPER. To accomplish the construction of the physical map of the T. cruzi genome, we constructed and characterized a genomic YAC library of T. cruzi with an average insert-size of 365 kbp that was used to get the physical map of a ~900 kbp region from chromosome XVI and to start the assembly of contigs from chromosome XX. In addition, we also constructed circular artificial chromosomes in yeast, based on a T. cruzi repetitive sequence by RAT cloning, and verified the utility of a fragmentation vector in the position of the TcP2β gene near a telomeric region of a chromosome of ~1 Mbp. To perform functional genomic studies we designed and constructed a vector that can be used as an artificial chromosome in T. cruzi. Finally, comparison and sequence analysis allowed us the identification of large genomic sintenic regions among T. cruzi, Trypanosoma brucei and Leishmania major.

Lopez de Casenave, Javier Nestor. "Estructura gremial y organización de un ensamble de aves del Desierto del Monte" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Entre mayo de 1993 y febrero de 2000 se estudiaron la estructura gremial y la organización del ensamble de aves de la Reserva de la Biosfera de Ñacuñán, ubicada en la porción central del desierto del Monte, en la provincia de Mendoza. Los objetivos generales del trabajo fueron: (1) analizar la estructura en gremios del ensamble, su asociación con factores ecológicos y sus variaciones; y (2) evaluar la importancia de la competencia interespecífica como proceso organizador del ensamble. En la primera parte del trabajo se cuantificaron los patrones de alimentación de 18 especies de aves y se las clasificó en cuatro gremios (del suelo, herbívoras arborícolas, de la vegetación y cazadoras al vuelo). El uso del suelo y de los estratos en altura, así como la utilizaci ón de ciertas especies de plantas, fueron las características que determinaron la clasificación obtenida. A continuación, se examinaron las diferencias estacionales en los patrones de alimentaci ón. La estructura gremial del ensamble cambió entre estaciones (tres gremios estuvieron presentes durante la estación no reproductiva y cuatro durante la estación de cría), debido a la presencia estacional de las especies migratorias y a los cambios en la ecología de alimentación de las especies residentes. En la segunda parte del trabajo se compararon los patrones observados en el ensamble de Ñacuñán con predicciones derivadas de la hipótesis que la estructura del ensamble es consecuencia de la acción de la competencia interespecífica. Se evaluaron las variaciones a mediano y largo plazo de la avifauna de la reserva, comparando los registros de presencia y ausencia de especies en los últimos 30 años, analizando las variaciones de la densidad de aves durante diez años y el grado de asociación en las fluctuaciones de la abundancia de las especies. Los resultados no fueron compatibles con la hipótesis de competencia, postulándose la hipótesis alternativa que el ensamble está organizado de acuerdo al modelo de .cuello de botella.. A continuaci ón, se evaluaron las diferencias morfológicas entre seis especies de aves granívoras de Ñacuñán. No hubo evidencia de desplazamiento comunitario de caracteres en ninguno de los caracteres morfológicos estudiados. Tampoco se halló relación entre las características de las semillas consumidas por las aves y ninguno de los caracteres, ni a nivel poblacional ni a nivel individual. Otra vez, los resultados fueron mejor explicados bajo el modelo de .cuello de botella.. Finalmente, se evaluó la hipótesis .derivada de ese modelo. que las aves granívoras no están limitadas por el alimento en inviernos de años con una abundancia promedio de semillas. Se calcularon los requerimientos alimentarios de las poblaciones mediante modelos bioenergéticos y se los comparó con la disponibilidad de alimento. Los resultados indicaron que las aves no están habitualmente limitadas en invierno. En el mejor de los casos, podrían estar solo ocasionalmente limitadas, tal como propone el modelo. El conjunto de los resultados indica que es improbable que la competencia interespecífica sea un factor de organización importante en este ensamble. El modelo de .cuello de botella. constituye una hipótesis alternativa digna de ser evaluada con mayor profundidad

Abstract:
Guild structure and organisation of the avian assemblage of Ñacuñán Biosphere Reserve (central Monte desert, Mendoza Province, Argentina) were studied between May 1993 and February 2000. General objectives of the study were: (1) to analyse the guild structure of the avian assemblage, its association with ecological factors, and its variations; and (2) to assess the role of interspecific competition as an organising process of this assemblage. In the first part of the study, foraging patterns of 18 bird species were quantified, and on this base they were classified into four guilds (ground foraging birds, arboreal herbivores, foliage foraging birds, and aerial foragers). The use of the ground and height strata, along with the utilisation of certain plant species, were the features determining the classification. Then, seasonal differences in the foraging patterns were assessed. The guild structure showed seasonal changes (three guilds were present during the nonbreeding season, and four guilds were present during the breeding season), due both to the seasonal occurrence of migratory species and to changes in the foraging ecology of resident species. In the second part of the study, observed patterns at Ñacuñán were compared to predictions derived from the hypothesis that interspecific competition is responsible of the structure of the avian assemblage. Medium and long.term variations of the avifauna were evaluated, by comparing presence.absence records for bird species during the last 30 years, and by analysing bird density variations and the degree of association in the species. abundance fluctuations during ten years. Results were no compatible with the competition hypothesis, and the alternative hypothesis that the assemblage is organised in accordance with the .crunch model. was postulated. Then, morphological differences among six granivorous species of Ñacuñán were evaluated. There was no evidence of community.wide character displacement for the studied morphological characters. There was no relationship between the characteristics of seeds consumed by birds and bird morphological characters, neither to population nor to individual level. Again, results were better explained under the .crunch model.. Finally, the hypothesis .derived from the model. that granivorous birds are not limited by food in winters with average seed abundance was evaluated. Populations. food requirements were estimated with bioenergetic models, and then compared to food availability. Results indicate that birds are not usually limited by food during winter. At best, birds could be only occasionally limited, as proposed in the model. Overall, results indicate that interspecific competition is not an important organising process in this assemblage. The .crunch model. appears to be a better hypothesis and deserves a deeper evaluation.

Lin, Min Chih. "Grafos self-clique y otras clases de grafos clique" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Dada una familia de conjuntos, el grafo intersección de esta familia es generado colocando un vértice por cada conjunto de la familia y dos vértices son adyacentes si y sólo sí los conjuntos correspondientes se intersecan. El grafo clique de un grafo G (se denota como K (G)) es el grafo intersección de los cliques (cada uno de ellos es un subconjunto de vértices de G que induce un subgrafo completo maximal de G) de G. Por lo tanto, K es un operador que transforma un grafo en otro grafo. Si aplicamos t veces este operador K a un grafo G, el grafo resultante (denotamos como Kt(G)) es isomorfo a G, G se llama grafo t-self-clique (si t = 1, se abrevia como self-Clique). Una familia de subconjuntos S satisface la propiedad de Helly cuando toda subfamilia de S consistente en subconjuntos que se intersecan de a pares tiene intersección no vacía. Un grafo es llamado Clique-Helly si la familia de los cliques del grafo verifica la propiedad de Helly. Presentamos aquí una condición suficiente relacionada con el grado mínimo δ(G) y el girth g(G) de un grafo G para que algunas potencias pares de este grafo sean grafos self-Clique. A través de esta condición conseguimos una nueva familia de grafos self-Clique.También presentamos otra familia de grafos self-Clique generados a partir de los grafos bipartitos que poseen una matriz de adyacencia reducida, simétrica. Además presentarnos una caracterización de los grafos self-Clique para los grafos Clique-Helly. Esta caracterización indica que un grafo G posee una matriz clique AG quasi-simétrica si y sólo sí G es un grafo self-Clique y Clique-Helly. A su vez conjeturamos que en lugar de “una matriz clique quasi-simétrica”, puede ser reemplazada por “una matriz clique simétrica” en la caracterización anterior. A continuación presentarnos dos condiciones suficientes para encontrar grafos 2-self-clique. Las familias de grafos 2-self-clique que surgen de estas condiciones están contenidas en la clase de los grafos Clique-Helly y una de ellas es una extensión de la familia descripta por Escalante en . Los grafos arco-circular son los grafos intersección de arcos alrededor de un círculo. Un grafo arco-circular que tiene una representación de arcos alrededor de un círculo y a su vez estos arcos verifican la propiedad de Helly, se denomina arco-circular Helly. Presentamos también en esta tesis, una caraterización de los grafos clique de los grafos arco-circular Helly. También probamos que los grafos clique de los grafos arco-circular Helly son una subclase de los grafos arco-circular y analizamos la relación entre esta subclase con las otras ya conocidas. Además analizamos algunas propiedades sobre la segunda iteración de grafos clique de los grafos arco-circular Helly. Los grafos circular son los grafos intersección de cuerdas dentro de un círculo. Una subclase de los grafos circular es la de los grafos circular Helly, aquellos que tienen un modelo de cuerdas que verifican la propiedad de Helly. Presentamos una clase de grafos llamada dualmente circular Helly y probamos que los grafos clique de los grafos circular Helly son exactamente los grafos dualmente circular Helly y viceversa. Probamos además que estas dos clases de grafos son distintas. A continuación, introducimos otros conceptos relacionados con los cliques de un grafo, revisamos la definición de los grafos Clique-perfectos y presentamos una familia de grafos altamente clique-imperfectos. Por último, presentamos algunas conclusiones que surgen de este trabajo y las líneas futuras de investigación en estos tópicos, destacando algunos problemas interesantes que permanecen abiertos.

Levi, Valeria. "La estabilidad térmica de la bomba de calcio de membrana plasmática" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio estructural y funcional de las proteínas de membrana se ve dificultado por la gran complejidad de los sistemas en las cuales éstas se hallan insertas, y porque, en general, estas proteínas se inactivan espontáneamente. La estructura tridimensional de una proteína está determinada por la interacción entre los grupos que componen la cadena polipeptídica, y entre estos grupos y el medio en el cual se halla inserta. Estas fuerzas intra e intermoleculares también definen su estabilidad. Además, para que una proteína cumpla su función biológica, se requiere que conserve su estructura nativa. Estas observaciones muestran una estrecha relación entre la estructura, la estabilidad y la función de las proteínas, y sugieren que se pueden evaluar características estructurales y funcionales de las mismas a partir del estudio de su estabilidad. Este enfoque fue empleado en el estudio de la bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA), una proteína integral de membrana, de Mr 134000, responsable del transporte de Ca2+ hacia el exterior de células eucariotas. La energía requerida para esta función proviene directamente de la hidrólisis del ATP. En una primera etapa, determinamos que la pérdida espontánea de la actividad Ca2+-ATPasa de la bomba de calcio purificada y reconstituida en micelas de fosfolípidos y detergente, sería consecuencia de la desnaturalización de la proteína. La inactivación siguió una cinética de pseudo-primer orden, que estaria asociada a una transición entre dos estados y ocurriría a través de un único mecanismo en el intervalo 33-45 °C. Dado que el proceso es irreversible, el coeficiente cinético de la inactivación es inversamente proporcional a la estabilidad de la enzima. Una vez caracterizado este proceso, estudiamos los cambios en la disposición estructural de la enzima durante la desnaturalización térmica. Para ello empleamos un análisis combinado que incluyó el análisis de la fluorescencia de un conjunto de sondas específicas y ensayos de actividad enzimática. Establecimos que el dominio de unión a calmodulina se desnaturaliza antes que el dominio catalítico, en tanto que el dominio transmembránico permanece plegado durante la desnaturalización térmica. Como la función vinculada a los distintos dominios es afectada por ligandos específicos de la enzima, exploramos el efecto de éstos en la estabilidad. Determinamos que Ca2+, calmodulina y un análogo no hidrolizable del ATP estabilizan al dominio catalítico. Exploramos además el efecto de un ligando cuya relevancia sobre la estructura y función de la bomba no ha sido determinada, i.e., la propia bomba de calcio. La dimerización fue caracterizada empleando la transferencia de energía entre la bomba de calcio marcada con la sonda fluorescente FITC y la marcada con EITC. El mecanismo molecular de la dimerización fue estudiado determinando la eficiencia de la transferencia de energía entre FITC-PMCA y EITC-PMCA luego de desplegar distintas regiones de la enzima. Estos ensayos permitieron definir que la dimerización involucra la interacción entre el dominio de unión a calmodulina y dos segmentos de la bomba a las cuales se une el péptido C28W cuya secuencia se encuentra incluida en la del mencionado dominio. La relevancia biológica del proceso de dimerización fue estudiada determinando la dependencia de la estabilidad de la bomba de calcio con su concentración. El análisis teórico de los resultados obtenidos permitió determinar que la estabilidad de la bomba de calcio dimérica es 200 veces mayor que la monomérica. La estructura y función de las proteínas de membrana se encuentran íntimamente relacionadas con los sistemas micelares en el cual se hallan insertas. Por este motivo, exploramos la dependencia de la estabilidad de la bomba purificada con la composición de las micelas. Basándose en los resultados obtenidos en tres sistemas micelares diferentes, postulamos un modelo que propone que la estabilidad de la enzima aumenta a medida que la monocapa de anfifilos que recubre la superficie hidrofóbica del dominio transmembránico se enriquece en fosfolípidos. La composición de la monocapa está relacionada con la afinidad de los fosfolípidos respecto a la del detergente por esta superficie (KLD). Desarrollamos un método que permite determinar KLD utilizando transferencia de energía entre los residuos triptofano de la PMCA y un fosfolípido marcado con pireno. Los valores de KLD obtenidos por este procedimiento son consistentes con los determinados a partir del modelo. En conclusión, los resultados obtenidos en este trabajo de tesis sugieren que el estudio de la estabilidad de proteínas podría constituir una metodología general de gran utilidad para explorar aspectos estructurales y funcionales de una amplia gama de proteínas.

Abstract:
Structural and functional studies on membrane proteins are limited by the complexity of the micellar system in which these proteins are inserted. In addition, these proteins undergo spontaneous inactivation. Protein structure is determined by intra and intermolecular forces that also define its stability. Moreover, the proteins are biologically functional only if they preserve their native structure. These observations show the close relation among structure, stability and function, and suggest that structural and functional characteristics of a protein could be evaluated from stability studies. This approach was applied to an integral membrane protein, i.e., the plasma membrane calcium pump (PMCA) reconstituted in mixed micelles of phospholipids and detergent. This protein of Mr 134000 is responsible for the active Ca2+ transport through the membrane to the external milieu in the eukaryotic cells. Initially, we characterized the spontaneous lost of the Ca2+ ATPase activity, and determined that this process is a consequence of the enzyme denaturation. The inactivation followed a first-order kinetics that could be associated with a transition between the native and the denatured states with a common mechanism in the range 33-45 °C. Since this process was irreversible, the kinetic coefficient of the enzyme inactivation provides a measure of the enzyme stability. The structural domain organization of the enzyme was studied by using a combined spectroscopic and kinetic approach that allows the parallel evaluation of the structural and functional changes occurring at specific regions of the protein. We established that the calmodulin-binding domain unfolds earlier than the catalytic domain while the transmembrane domain remains folded during thermal inactivation. Since specific ligands of the pump affect the enzyme function, we explored their effects on protein stability. We determined that Ca2+, calmodulin and a nonhydrolyzable analog of ATP increased the enzyme stability. In addition, we studied the effects of the plasma membrane calcium pump self-association on the structural stability of the enzyme. Energy transfer measurements between the enzyme labeled with the fluorescent probes FITC and EITC were employed to evaluate the dimer and monomer distributions as a function of the total enzyme concentration. The enzyme thermal stability was assayed at different dimer/monomer ratios and analyzed in terms of a model that considers the equilibria among dimers, monomers and mixed dimers formed by a thermal-inactivated and an active monomers. Each of these species is inactivated following an irreversible step. The dimer stability was 200 fold higher that the stability of the monomeric enzyme indicating that thermal inactivation of the calcium pump proceeds mainly through the monomeric pathway. To explore the molecular mechanism of dimerization, energy transfer efficiency was determined after the unfolding of different enzyme domains by using different thermal treatments. We demonstrated the existence of two regions involved in the self-association process: the calmodulin-binding domain and the C28W-binding regions. The structure and the function of membrane proteins are intimately related to the micellar systems in which they are inserted. Therefore, we studied the calcium pump thermal stability in three micellar systems. The obtained results were explained in terms of a model that considers that thermal stability of the pump depends on the composition of the amphiphile monolayer directly in contact with the transmembrane protein surface. Application of this model shows that the maximal pump stability is attained when 80% of this surface is covered by phospholipids. This analysis also provides an indirect measure of the relative affinity phospholipid/detergent for the hydrophobic transmembrane surface of the protein (KLD) showing that those phospholipids with higher affinity provide greater stability to the Ca2+ pump. KLD values obtained by this procedure agreed with those obtained by measuring fluorescence resonance energy transfer from the protein tryptophan residues to a pyrene-labeled phospholipid. In summary, the results shown in this thesis, suggest that the study of protein stability could constitute a general methodology to explore structural and functional properties of membrane proteins.

Legnani, Walter E.. "Modelización de las perturbaciones dinámicas del vórtice polar sobre la Antártida y América del Sur" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es mostrar la influencia de perturbaciones de escala sinóptica (de longitudes o escalas menores a 5000 km. aproximadamente) sobre el vórtice polar austral y sobre el agujero de ozono antártico. Estas perturbaciones se propagan desde la tropósfera y alcanzan la estratósfera inferior. Por este motivo se realizó un estudio de la presencia de perturbaciones sinópticas y sus características a distintas alturas para comprender su estructura vertical. Para realizar este análisis se diseñaron filtros espectrales bidimensionales en el espacio cuya función fue permitir el estudio por separado de los efectos de las diferentes perturbaciones en función de sus propiedades de onda. En este sentido se trabajó con valores diarios de forma tal de retener las posibles contribuciones no lineales en el tiempo. Se evaluaron las condiciones de penetración / propagación en la estratósfera inferior de los sistemas sinópticos y se estudió su impacto sobre la dinámica del vórtice polar y el agujero de ozono. Para ello se empleó un seguimiento de la dinámica del agujero de ozono en base a la evolución dinámica de la altura geopotencial y su participación en la deformación del sistema en análisis. Para completar el estudio se implementó un modelo de aguas poco profundas cuasitrídimensional que integra en forma espectral, mediante armónicos de Hough, las ecuaciones de movimiento, escritas en coordenadas isentrópicas. Esta metodología de integración numérica proveyó al modelo de un elevado rendimiento computacional, ya que la base espectral seleccionada fue la de autofunciones del operador de aguas poco profundas, de tal forma que no se hizo necesario el mapeo de la esfera para la resolución del sistema de ecuaciones. Este modelo posee una frontera inferior dada por la posición de la tropopausa y una superior libre, es decir, que constituye un problema clásico de aguas poco profundas con fondo móvil. El modelo es de tipo mecanístico y es forzado (mediante el ingreso de condiciones de contorno) por los valores de la temperatura de tropopausa, extraídos a partir de datos del ECMWF (European Centre for Medium Range Weather Forecasting). Este proceso requirió técnicas precisas de interpolación y de procesado de bases de datos para acoplar con el debido tiempo de integración el resto del modelo. Para establecer las condiciones iniciales del modelo al momento de realizar las integraciones de estudio se diseñó una integración previa de “warm up” hasta alcanzar condiciones dinámicas y termodinámicas de la atmósfera, apropiadas con la fecha del inicio de la integración propuesta en el experimento. También fue necesario ajustar el diseño de una capa de esponja en el contorno superior del modelo para evitar que se inestabilizara. A su vez se le añadió difusividad selectiva en la horizontal y la vertical para evitar que las perturbaciones de menor escala fuesen amortiguadas numéricamente. Para validar el modelo se tomó un caso de estudio comprendido entre los meses de octubre y noviembre de 1990 comparando los resultados del mismo con datos independientes del Goddard Space Flight Center de NASA (vorticidad potencial), y del National Oceanic and Atmospheríc Administration (NOAA), E.E.U.U. (vientos y temperatura). El modelo reprodujo estas condiciones con alta fidelidad. Los resultados del modelo convalidan los resultados observacionales sobre la contribución de los procesos de escala sinóptica en la deformación y evolución del vórtice polar y del agujero de ozono. En síntesis, la confirmación del aporte de perturbaciones de escala sinóptica en la deformación del vórtice polar constituye un novedoso aporte en el conocimiento de los mecanismos que participan en la evolución dinámica de este último. Dicho resultado es consolidado por un extenso estudio observacional y un modelo teórico, que incluye importantes implementaciones en modelado fisico-computacional, que lo respaldan.

Abstract:
The aim of this thesis is to demonstrate the influence of synoptic scale disturbances (with scale under 5000 km approximately), upon the southern polar vortex and the Antarctic ozone hole. These perturbations propagate from the troposphere and reach the lower stratosphere. In order to verify this a study was carried on to determine the presence and characterisation of synoptic perturbations at different heights so as to understand their vertical structure. Such an analysis required the design of bidimensional spectral filters in space. Their function was to separate the perturbations as a function of their wave properties and thus allow their separate study. Daily values were used so as to preserve the non-linear time relationships. The conditions for penetration/propagation of these system into the lower stratosphere were evaluated. The impact of such synoptic systems upon the vortex and ozone hole dynamics was then analysed. Geopotential height dynamics was used to follow the ozone hole dynamics. In order to complete the study, a quasi 3-dimensional shallow water model was implemented. The model integrates spectrally, with Hough's harmonics, the motion equations, written in isentropic coordinates. This numeric integration methodology provided the model with a high computational performance, since the selected spectral base corresponded to the shallow water eigenfuntions. Thus it was not necessary to generate a special grid for the equation system resolution. This model has a lower boundary determined by the tropopause and a free upper boundary. It thus constitutes a classic shallow water problem with mobile bed. It is a mechanistic model and is forced by the boundary conditions given by the tropopause temperature, obtained from the ECWMF (European Centre for Medium Range Weather Forecasting) . This process required precise interpolation and data processing techniques to couple the boundary conditions to the model with the appropriate timing. A "warm-up" integration was implemented to establish the model dynamic and thermodynamic initial conditions for a given date. It was also necessary to calibrate the design of a sponge layer for the upper boundary so as to avoid model instabilities. Furthermore selective horizontal and vertical diffusitivity were added to avoid the numerical damping of the lower scale perturbations. A case study covering the months of October and November 1990 was chosen to validate the model, by comparing model outputs with independent data from NASA's Goddard Space Flight Center (potential vorticity) and NOAA (wind and temperatures). The model was able to faithfully reproduce these observations. The model results agree with the observational results on the contribution of synoptic scale processes to the polar vortex and ozone hole evolution and deformation. Summing up, the confirmation of the synotic scale perturbation contribution to the polar vortex deformation is itself a new result towards the understanding of the mechanisms involved in the dynamics of this phenomenon. Such result is supported by a detailed observational analysis and a theortetical model that includes important contributions towards the improvement of physical computational modelling.

Lassalle, Silvia Beatriz. "Polinomios sobre un espacio de Banach y su relación con el Dual" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Dado un espacio de Banach E estudiamos tres aspectos de la relación entre el espacio de polinomios definidos sobre E y el espacio dual E’. Definimos la clase de polinomios K-acotados PK(nE; X) (polinomios cuya continuidad está dada por subconjuntos de E´) y mostramos que la extensión de Aron-Berner preserva esta clase. Investigamos propiedades sobre K que relacionan el espacio PK(nE; X) con subespacios usuales de P(nE; X) probando a valores escalares que polinomios K-acotados son aproximables para K conjuntos compactos donde la identidad puede aproximarse uniformemente por operadores de rango finito. Lo mismo es cierto cuando K está contenido en la cápsula convexa equilibrada de una sucesión básica débil-nula de E'. En este caso también probamos que todo polinomio K-acotado es extensible. Además, dimos enunciados equivalentes a la existencia de espacios de Banach sin la propiedad de aproximación. Dado un morfismo entre duales s : E’ —>F’, damos un morfismo 3 que vincula los espacios de polinomios P(nE; X) y P(nF; X"). Mostramos bajo condicionesde regularidad que si E' es isomorfoa F’ entonces los espacios de polinomios homogéneos sobre E y F a valores en X, son isomorfos. Además probamos que los subespacios de polinomios, cuya definición está relacionada en forma más directa al dual (débil-continuos, integrales, regulares), resultan isomorfos sin hipótesis adicionales sobre E, F o X. Finalmente estudiamos diferentes topologías débil-polinomiales centrándonos en la dada por una familia de seminormas asociadas al conjunto de polinomios ortogonalmente aditivos sobre reticulados de Banach reales. Caracterizamos esta topología en espacios ℓp,Lp y sobre espacios de Banach con base incondicional.

Abstract:
For a Banach space E we study three aspects of the relation between the space of polynomials on E and the dual space E’. We define the class of K-bounded polynomials PK(nE;X) (whose continuity is given by a subset K of E’) and we show that the Aron-Berner extension preserves this subspace. We investigate properties of K that bind the space PK(nE;X) with subspaces of P(nE;X). We prove that scalar-valued K-bounded polynomials are approximable when K is a compact set on which the identity can be uniformly approximated by finite rank operators. The same is true when K is contained in the absolutely convex hull of a weakly null basic sequence of E’. Moreover, in this case we prove that every K-bounded polynomial is extendible to any large space. Also, we give equivalent statements for the existence of Banach spaces without the approximation property. For a mapping between dual spaces, s : E' —>F', we give a morphism s relating the spaces of polynomials P(nE;X) and P(nF;X”). We show that under conditions of regularity, if E’ is isomorphic to F’ then the spaces of X-valued homogeneous polynomials on E and F are isomorphic. Also, we prove that some subspaces of polynomials more closely related to the structure of dual spaces (weakly continuous, integral, regular) are isomorphic in full generality. Finally we study different weak polynomial topologies focusing in the topology determined by a family of seminorms given by the set of orthogonally additive polynomial that are defined on real Banach lattices. We characterize this topology on ℓp,and Lp spaces and on Banach spaces with unconditional basis.

Kramarz, Alejandro G.. "Estudio de la fauna de roedores de la formación pinturas, Mioceno medio inferior de la Provincia de Santa Cruz" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La fauna "Astrapothericulense" fue reconocida por Ameghino en 1906 en base a los primeros y escasos registros de mamíferos fósiles procedentes de los sedimentos continentales del Mioceno, aflorantes en el valle inferior del río Pinturas. Tanto éste, como luego Frenguelli y Castellanos, sugirieron que esta fauna sería distinta y más antigua que la proveniente de las localidades costeras de la Formación Santa Cruz, por compartir elementos en común con la del Colhuehuapense. Sin embargo, autores posteriores adjudicaron causas biogeográficas más que temporales a las diferencias entre ambas faunas. Los escasos restos de roedores provenientes de esta unidad que se conocían hasta la actualidad carecen de una procedencia geográfica y estratigráfica precisa. Además, muchos de estos materiales no han sido correctamente distinguidos de otros taxones mejor conocidos de la Formación Santa Cruz, posiblemente por la presunción de la contemporaneidad de ambas faunas. Se estudian aquí nuevas y abundantes colecciones de roedores Caviomorpha de la Fm. Pinturas, su diversidad, su sistemática y su significado bioestratigráfico y paleoambiental. Se diferencian dos asociaciones de distintas procedencias estratigráficas. En las secuencias inferior y media de la Formación se reconoce el registro de las siguientes especies: Prostichomys bowni gen. et sp. nov., Acarechimys sp., Galileomys eurygnathus sp. nov., Eostelromys annectens oomb. nov., Eosteiromys cf. homogenidens, Branisamyopsis presigmoides sp. nov., "Steiromys" principalis, Steiromys duplicatus, Scleromys quadrangulatus sp. nov., Neoremys pinturensis sp. nov., Luantus propheticus y Perimys intermedias sp. nov. Esta asociación constituye la fauna típicamente "Pinturense". En la secuencia superior se registran: Stichomys spp., Adelphomys candidus, Spaniomys modestas, Acarechimys minuttissimus, Acaremys cf. A. murinus, Luantus toldensis sp. nov., Phanomys mixtus , Perimys erutus y Perimys 3p., mayormente conocidas también para los típicos afloramientos costeros de la Fm. Santa Cruz. Neoreomys australis y Prolagostomus sp. se registran positivamante en ambas asociaciones. En base al conjunto de roedores fósiles, y en particular de Spaniomys modestas, la secuencia superior de la Fm. Pinturas sería correlacionable con los niveles inferiores de la Fm. Santa Cruz aflorantes en Monte Observación y Monte León, a los niveles "Notohippidenses" aflorantes en la región de Karaiken y, tentativamente, a los niveles inferiores del Miembro Ea. La Costa de la Fm. Santa Cruz. Por lo tanto, las secuencias inferior y media de Pinturas deben ser necesariamente más antigüas que la base de la Fm. Santa Cruz en Monte Observación y Monte León. La mayoría de las especies del "Pinturense inferior"parecen estar muy estrechamente relacionadas a la ancestralidad de sus aliadas santacrucenses. Aunque sutiles, las diferencias son concordantes en indicar un estado más primitivo para los taxa propios de Pinturas, en general, relacionadas a un menor desarrollo de la hipsodoncia que los del Santacrucense. Estas relaciones reafirman la idea de la mayor antigüedad de esta fauna, como lo sugieren también recientes estudios de los marsupiales caenolestoideos de la misma procedencia y las últimas dataciones radimétricas. La fauna de roedores "Pinturense" es muy rica en grupos asociados a ambientes boscosos y de clima cálido (erethizóntidos y cavioideos protohipsodontes) y muy pobre en diversidad de formas euhipsodontes y de pequeños octodontoideos. Sin embargo, hacia el techo de la Formación, aumenta la proporción de las formas hipsodontes, lo que sugiere un deterioro climático concordantemente con los datos litológicos.

Abstract:
The "Astrapothericulan" fauna was recognized by Ameghino in 1906 based on the first and scarce record of fossil mammals found in the continental Miocene deposits at the lower valley of the Pinturas river. Then he, as later Frenguelli and Castellanos, suggested that this fauna would be different from and older than that found in the coastal localities of the Santa Cruz Formation, because it sheared elements in common with that of the Colhuehuapian. However, later authors awarded biogeographical more than temporal causes to the differences between both faunas. The scarce remains of rodents so far known from this unit lack a precise geographic and stratigraphic provenance. Moreover, many of these materials have not been correctly distinguished from other better known taxa from the Santa Cruz Formation, probably due to the presumption of the contemporaneity of both faunas. New and abundant collections of Caviomorph rodents from the Pinturas Formation are here studied in order to analyze their diversity, systematics and bioestratigraphic and palaeoenviromental meaning. Two associations from different stratigraphic origin are recognized. The following species were recorded in the lower and middle sequences of the Pinturas Formation: Prostichomys bowni gen et sp. nov., Acarechimys sp., Galileomys eurygnathus sp. nov., Eosteiromys annectens comb. nov., Eosteiromys cf. homogenidens, Branisamyopsis presigmoídes sp. nov., "Steiromys" principalis, Steíromys duplicatus, Scleromys quadrangulatus sp. nov., Neoremys pinturensis sp. nov., Luantus propheticus and Perimys intermedias sp. nov. This association constitutes the typically "Pinturean" fauna. While the following species were recorded in the upper sequences: Stichomys spp., Adelphomys candidus, Spaníomys modestus, Acarechimys minuttissimus, Acaremys cf. A. murinus, Luantus toldensis sp. nov., Phanomys mixtus, Perimys erutus and Perimys sp.; most of them are also well-known taxa from the typical coastal localities of the Santa Cruz Formation. Neoreomys australis and Prolagostomus sp. are positiver recorded in both associations. Based on the fossil rodents, and especially on Spaniomys modestus, the upper sequences of the Pinturas Formation may be correlated with the lower levels of the Santa Cruz Formation at Monte Observación and Monte León, the "Notohippidean" levels at Karaiken and, tentatively, with the lower levels of the Ea. La Costa Member of the Santa Cruz Formation. Therefore, the lower and middle sequences of the Pinturas Formation should be necessarily older than the base of the Santa Cruz Formation at Monte Observación and Monte León. Most of the "Pinturean" species seem to be very closely related to the ancestrality of their Santacrucian allied. Although subtle, the differences are consistent with a more primitive state for the characteristic taxa of Pinturas, related in general to a lesser development of the hypsodonty than those of the Santacrucian. These relationships reaffirm the idea of the greater antiquity of this fauna, as it is also suggested by recent studies on caenolestoid marsupials from the same origin and the last radiometric dates. The "Pinturean" rodent fauna is very rich in those groups associated with warm forested environments (erethizontids and protohypsodont cavioids) and very poor in diversity of euhypsodont species and small octodontoids. However, toward the top of the formation, the proportion of hypsodont forms increases, suggesting a climatic deterioration consistent with the lithological data

Kandus, Alejandra. "Origen y evolución de campos magnéticos asociados a las grandes estructuras cosmológicas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tésis presentamos un nuevo mecanismo de inducción de campo magnético primordial, con el objetivo de poder explicar la presencia y características de los campos magnéticos que se observan en galaxias y cúmulos de galaxias. Asumiendo que durante la etapa inflacionaria del universo existe un campo de materia cargado, el estado cuántico del campo cambia al producirse la transición de esa etapa a la siguiente, debido al cambio en la geometría del universo, dando lugar a la aparición de corrientes eléctricas estocásticas. Como el valor medio de las corrientes es cero, también lo serán los valores medios de los campos por ellas inducidos. Sin embargo fluctuaciones cuánticas y estadísticas respecto del valor medio de la corriente construyen varianzas no nulas. Esas varianzas son entonces fuente de campo electromagnético, que también se manifiesta a través de desviaciones respecto de la media. Calculamos el núcleo de ruido debido a las partículas creadas y lo usamos como fuente de las ecuaciones de Maxwell para la correspondiente función de dos puntos del campo magnético. Calculamos la intensidad inducida a escala galáctica, teniendo en cuenta de manera fenomenológica la conductividad finita del plasma en el cual se propaga el campo magnético. Para el caso de transición instantánea de inflación a radiación la intensidad resultante es muy pequeña. Para el caso en que la transición no sea instantánea, o sea el recalentamiento del universo tenga una cierta duración, el campo inducido podría tener intensidad suficiente como para explicar el campo galáctico. Además en este caso es posible enmarcar el mecanismo en el modelo supersimétrico de la física de partículas, ya que en él hay un campo de materia con las propiedades que requiere nuestro mecanismo, y además estos modelos predicen una baja tempertura de recalentamiento, lo que implicaría una menor disipación del campo inducido. Para estudiar el efecto de la conductividad de las propias fuentes de campo magnético sobre la intensidad final inducida, planteamos ecuaciones consistentes para la evolución del sistema de cargas y campo electromagnético durante las etapas tempranas del recalentamiento, utilizando técnicas apropiadas para estudiar sistemas de campos cuánticos fuera del equilibrio. Encontramos que las cargas creadas se comportan como un medio superconductor y por lo tanto el campo inducido es apantallado. En virtud de los resultados obtenidos, discutimos la validez del mecanismo estudiado.

Abstract:
In this thesis we present a new mechanism to induce primordial magnetic fields, aimed at explaining the existence and features of those fields in galaxies and clusters of galaxies. Asuming that during inflation there exists a charged matter field, the quantum state of the field changes when the transition from that epoch to the subsequent one occurs, due to the change in the geometry of the universe, giving rise to stochastic electric currents. As the mean value of the currents is zero, the same will happen to the mean values of the induced electromagnetic fields. However quantum and statistical fluctuations around the mean value of the current build non null variances. Those variances induce fields, which also manifest throught their rms deviations around the mean. We evaluated the noise kernel due to the created charges and used it as source in the Maxwell equations for the corresponding electromagnetic two point function. We estimated the induced intensity on a galactic scale, taking into account in a phenomenological way the finit electric conductivity of the primordial plasma through which the field propagates. For the case of instantaneous reheating of the universe the resulting intensity is too weak to account for the observed fields in galaxies. But if the reheating epoch has a certain duration, the induced fields are strong enough to seed further amplifying mechanisms that gave rise to the galactic fields. Besides, in this case we can frame the proposed mechanism in the supersymmetric version of the standard model of particle physics. It provides a candidate matter field with the required properties for our mechanism and also allows a low reheating temperature which in our case implies that the induced field will be less dissipated. To study the effect of the own sources of the magnetic field on its final intensity, we derived consistent equations to study the system of charges and field during the first stages of reheating. This derivation was done using specific techniques to study quantum fields out of equilibrium. We found that the created charges behave as a superconducting medium and hence screen the induced field. In view of all the results obtained, we discuss the usefulness of the proposed mechanism to acount for the observations.

Iscla, Irene. "Modulación serotoninérgica de un circuito sensoro-motor en la sanguijuela Hirudo medicinalis" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El rol neuromodulador de la serotonina ha sido conservado a lo largo de la evolución y se ha observado en invertebrados y en vertebrados. Los invertebrados han sido utilizados como modelos de estudio de la modulación por serotonina, ya que la simpleza de sus sistemas nerviosos, permite correlacionar alteraciones comportamentales con modificaciones en los circuitos neuronales subyacentes a dichos comportamientos. La posibilidad de identificar inequívocamente a las neuronas serotoninérgicas, permite correlacionar su actividad con los efectos atribuidos a la serotonina. La serotonina es un importante neuromodulador en la sanguijuela: interviene en la modulación de varios comportamientos tales como la alimentación, el acortamiento defensivo y la natación. Las neuronas serotoninérgicas Retzius constituyen su fuente principal de liberación. La estimulación mecánica de la piel del animal produce la activación de las células mecanosensoriales P. Dicha activación es suficiente para evocar diversas respuestas motoras y a su vez, en paralelo, activar a las neuronas Retzius. Este trabajo de tesis tuvo como objetivo el estudio de la modulación serotoninérgica de un circuito sensoro-motor en el sistema nervioso central de la sanguijuela Hirudo medicinalis, basándose en la hipótesis de que la salida motora final estará determinada por la interacción de la via sensoromotora y la vía sensoro-moduladora. En la primera parte del trabajo se caracterizó la vía sensoro-motora entre las neuronas mecanosensoriales sensibles a presión (P) y las motoneuronas annulus erectus (AE), que inervan los músculos responsables de las erección de los ánulos en que se divide la pared corporal del animal. Losresultados muestran que: - La motoneurona AE recibe dos señales simultáneas ante la activación de la neurona mecanosensorial P: una excitatoria y otra inhibitoria. La fase excitatoria está mediada por una sinápsis directa y la inhibitoria por una interacción polisináptica. - La interneurona pasiva 151 ejerce un rol modulador sobre la sinápsis P-AE, interactuando con la motoneurona AE y con la(s) interneurona(s) que media(n) la fase inhibitoria de la conexión P-AE. En la segunda parte del trabajo se analizó el efecto de la serotonina exógena y de antagonistas serotoninérgicos sobre las propiedades intrínsecas de las neuronas P y AEy sobre la interacción P-AE. - La aplicación de serotonina exógena produjo la hiperpolarización de las neuronas AE, por activación de una conductancia a cloro sensible a los antagonistas metiotepina y mianserina. - La serotonina exógena causó una disminución de la amplitud de la fase inhibitoria de la interacción P-AE,y los antagonistas metiotepina y mianserina bloquearon este efecto. - La serotonina endógena ejercería una inhibición sobre la interacción P-AE.

Abstract:
The role of serotonin as neuromodulator has been conserved along evolution, being observed in vertebrates as well as in invertebrates. Invertebrates have been extensively used as models to study serotonin modulation because their simple nervous systems allow correlating behavioral changes with changes in the pattern of activity of the neural circuits that underlie specific behaviors. The precise identification of serotonin-containing neurons allows correlating their activity with the effects attributed to this amine. Serotonin is an important neuromodulator in the leech: it is responsible for the expression of feeding behavior and modulates shortening and swimming. Retzius neurons contain approximately half of the total ganglionic serotonin. Mechanical stimulation of the skin activates mechanosensory cells sensitive to pressure, P cells. This activation is capable to evoke several motor responses and in parallel to activate the serotonin-containing Retzius cells. The goal of this thesis work has been to evaluate the serotonin modulation of a sensory-motor circuit in the central nervous system of the leech Hirudo medicinalis, based on the hypothesis that the final motor output results of the interaction between a sensory-modulatory and a sensory-motor pathways. The aim of the first part of this work was to characterize the interaction between a pair of specific sensory and motor neurons: the P mechanosensory neurons and the AE(annulus erector) cells, a pair of motor neurons that innervate the muscles responsible for erecting the annuli into sharp ridges. The results show that - The response of the AE neurons was composed of excitatory postsynaptic potentials (EPSPs) and of inhibitory postsynaptic potentials (IPSPs). The EPSPs were transmitted via a monosynaptic pathway, and the IPSPs via a polysynaptic one. - The non-spiking neuron 151 is able to modulate the P-AE interaction, by means of rectifying electrical synapses with AE motoneuron and with the interneuronal layer that mediates the inhibitory response. In the second part of this work we studied the effects of serotonin and serotonin receptor antagonists on the P-AE interaction and on the intrinsic properties of the neurons involved. - Exogenously applied serotonin produced the hyperpolarization of AE motorneurons, due to the activation of a chloride conductance that was sensitive to methiothepine and mianserin. - Exogenously applied serotonin specifically diminished the amplitude of the inhibitory response to P cell stimulation, and this effect was also sensitive to methiothepine and mianserin. - Endogenous serotonin would exert an inhbitory modulation on this sensory-motor circuit.

Iñón, Fernando A.. "Un nuevo enfoque en el estudio del proceso de dispersión en FIA : el método conductimétro integral (ICM) y modelado matemático de las curvas ICM" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La alta frecuencia de análisis y el escaso manipuleo de muestras son características propias de los sistemas de análisis por inyección en flujo (conocidos generalmente como sistemas FIA), lo que les otorga una gran relevancia en la química analítica contemporánea Sin embargo, el FIA (sin una etapa de preconcentración) es inviable en aplicaciones que requieren bajos límites de detección, ya que presenta una disminución de la sensibilidad y un incremento en los límites de detección. Esta desventaja es causada por la dispersión característica que estos sistemas presentan y que afecta, negativamente, a dichos parámetros de mérito. La potencialidad analítica de estas técnicas se basa en controlar la dispersión, a través del control de los procesos difusivos de mezcla manteniendo la integridad de la muestra inyectada, que a su vez permite, conforme se requiera, manipular la performance de una determinación. Los intentos realizados para entender el mecanismo dispersivo son numerosos, pero existen puntos aún no esclarecidos como consecuencia del método empleado (estímulo-respuesta). La presente tesis doctoral estudia el proceso de dispersión contemplando el estudio teórico de los fenómenos de transporte en FIA y su utilidad en la optimización de la performance. Para ello, se desarrolló una nueva metodología, la que fue denominada método conductimétrico integral (ICM) y consiste en medir la conductividad entre dos puntas de platino colocadas en ambos extremos de un sistema línea única y conectadas a un conductímetro. En tal sistema, se inyecta un dieléctrico (H2O) en una solución transportadora conductora (HNO3) y se monitorea la conductancia del sistema en función del tiempo. El ICM fue aplicado al estudio de sistemas en ausencia y presencia de una reacción química, evaluándose el efecto de las distintas variables operacionales sobre el perfil del mismo. El tipo de reacción química escogida fue la neutralización ácido-base ya que cumple con dos requisitos básicos: es rápida y brinda importantes cambios en la conductividad del sistema. A través de este método se puede analizar el fenómeno de dispersión en función del tiempo, hecho inédito hasta la fecha. Además, se ponen en evidencia detalles de la componente radial de la dispersión inaccesibles a la detección convencional puntual, así como la interdependencia entre las componentes física y química de la dispersión. Se define un nuevo coeficiente de dispersión física (IDQ), que surge como un medidor más robusto que el tradicional D de Růžička y Hansen. Se propone un modelo matemático que ajusta el patrón de respuesta de las curvas conductimétricas y se muestran las relaciones entre estos perfiles con los parámetros de los picos FIA convencionales. Este modelo permite relacionar directamente el coeficiente IDQ con las variables experimentales del sistema FIA. Con el fin de mostrar dinámicamente la formación de las curvas experimentales, se analiza la potencialidad de técnicas de simulación (random walk y Cell-DEvS). Se comparan la patrones de variación predichos por la simulación en función de las distintas variables con los obtenidos experimentalmente, encontrándose un alto grado de concordancia.

Abstract:
Flow injection analysis (FIA) is a widely used technique in analytical chemistry due to important features such as: high sample throughput, minimal sample handling and automation capabilities. Nevertheless, although a preconcentration stage is included, it may not be a suitable choice when trace analysis is required: a loss in sensitivity and an increase in detection limits (when compared to that of a similar batch procedure) are observed, which are ascribed to a global process called dispersion. Thus, mass transfer control plays a key role in any flow injection technique as, the final performance of the analytical system is related to this process. Many attempts have been made to understand the dispersion mechanism, but it seems to remain unelucidated, mainly as a consequence of the method used for these studies (stimulus-response). In order to study physical dispersion a new method has been developed while allows the continuous monitoring of the process. The method measures the electrical conductance (G) of the whole system in function of time (t), by placing two platinum electrodes in both ends (before the injection valve and after the reactor) of a single line manifold. The injection of a dielectric fluid (H2O) into the electrolytic carrier (HNO3) produces a perturbation which is ascribed to the mass redistribution process undergoing inside the tube. The response curves at different flow rates, tube lengths and diameters, reactor types, injection volumes and electrodes location for systems involving or not a chemical reactions were obtained, and its relationship with the mass distribution of the analyte in the flow system is assessed. For system involving chemical reactions, acid-base neutralizations were chosen because of the sharp conductance changes and their fast kinetics. Comparison between G vs. t profiles for systems not involving a chemical reaction and their analogues, in which neutralization process is promoted, demonstrates an interdependence between physical and chemical processes. A new parameter for physical dispersion measurements (IDQ) is defined. This parameter can be evaluated as function of time, in contrast to the dispersion coefficient of Růžička and Hansen . A mathematical model for fitting experimental curves is proposed for the first time, and its correlation with the typical FIA peak parameters is presented. The proposed model fits the experimental curves with great precision and allows to predict the flow systems and adequate their performance to the analytical needs. Moreover, its possible to predict the IDQ coefficient when operational FIA variables are changed. Simulation techniques (random walk and Cell-DEvS) were employed to show and understand the ICM profile. Experimental and simulated profiles are compared as a function of the system’s variables, showing an excellent agreement.

Herszage, Julián. "Oxidación de compuestos sulfurados en presencia de óxidos metálicos de interés en química de medio ambiente" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los óxidos de manganeso presentes en los sedimentos y el material particulado suspendido en las aguas naturales, juegan un importante papel en los ciclos biogeoquímicos del azufre, la materia orgánica y el manganeso. Estos óxidos participan en variados procesos redox que pueden ser o no mediados por microorganismos. Los sulfuros y los tioles no volátiles de importancia biológica como cisteína y glutationa, son ubicuos en el medio ambiente y pueden actuar como reductores de los óxidos de manganeso. El estudio de la disolución reductiva de MnO2 por acción de éstos reductores podría contribuir a un conocimiento más completo de los ciclos biogeoquímicos del manganeso y el azufre. Para el estudio de las reacciones mencionadas se sintetizaron tres óxidos de manganeso, uno coloidal y dos en fase sólida que fueron caracterizados como vernadita y akhstenskita. Para la reacción del MnO2 con sulfuro de hidrógeno y con los tioles se estudió la dependencia de la velocidad de reacción con el pH, la temperatura y la concentración de reactivos, manteniendo constantes la temperatura, el pH y la fuerza iónica de la solución. Para la primera reacción se usaron los óxidos en fase sólida y mezclas de H2S/N2 de concentración conocida. El óxido coloidal se usó para la caracterización electroquímica de posibles intermediarios de reacción como Mn(III), polisulfuros, azufre, etc, usando soluciones de Na2S como fuente de sulfuros. Los productos de reacción con sulfuros fueron identificados y cuantificados como: Mn(II), sulfato, tiosulfato y azufre. Otros posibles productos como sulfito y polisulfuros no fueron detectados. Se estudió también la especiación de los productos de oxidación del sulfuro con el pH, observándose que a valores bajos de pH predomina el sulfato y a valores neutros o ligeramente alcalinos predomina el azufre. El tiosulfato es en todos los casos un producto minoritario. La reacción con cisteína y glutationa se estudió usando el óxido coloidal. La cistina y glutationa disulfuro son los respectivos productos de oxidación observados a pH entre 4 y 9. Por debajo de pH 2, no se detectó cistina y el correspondiente producto de oxidación fue identificado como ácido cisteinsulfonico. La ley de velocidad experimental para las dos reacciones estudiadas tiene la forma R = k τ-

Abstract:
The manganese oxides which are present in the suspended particulate material and in the sediments of natural waters, play an important role in the biogeochemical cycles of sulfur, organic matter and manganese. These oxides participate in various redox processes that or may not be mediated by microorganisms. The sulfides and the nonvolatile thiols of biological importance, such as cysteine and glutathione, are ubiquitous in the environment and they can behave as reductants of manganese oxides. The study of reductive dissolution of manganese oxides produced by these reductants could contribute to a deeper and more complete knowledge of the sulfur and manganese biogeochemical cycles. For the study of the above mentioned reactions three different manganese oxides were synthesized, one colloidal and other two in the solid phase that were identified as vernadite (δ-MnO2) and akhstenskite (ε-MnO2). For the reactions of MnO2 with hydrogen sulfide and with the thiols, the reaction rate dependence with pH, temperature and reactants concentration, keeping temperature, pH and ionic strength constant of the solution throughout the experiments. For the first reaction, the solid phase oxides and H2S/N2 mixtures of known concentration were used. The colloidal oxide was used for the electrochemical characterization of possible reaction intermediates such as Mn(lII), polysulfides, sulfur, etc, using Na2S solutions as a sulfide source. In the reaction with sulfide, the reaction products were identified and quantified as: Mn(II), sulfate, thiosulfate and sulfur. Other possible products like sulfite and polysulfides were not detected. The speciation of sulfide oxidation products with pH was also studied, it was noticed that at low pH values sulfate is the main product, and at neutral or slightly alkaline pH values sulfur is the main oxidation product. Thiosulfate is in all the cases a minor reaction product. The reaction with cysteine and glutathione was studied using the colloidal oxide. Cystine and glutathione disulfide are the only oxidation products found between pH 4 and 9. Below pH 2, cystine was not found and the corresponding oxidation product was identified as cysteinsulfonic acid. The experimental rate law for both of the reactions studied has the expression R = k τ

Gottschalk, Karin Virginia. "El ángulo de Brewster y el comportamiento del vector polarización eléctrica en la óptica de cristales birrefringentes" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis se investiga el comportamiento de la polarización eléctrica de una interfaz entre un medio isótropo y un cristal birrefringente uniaxial. En primer lugar, se consideran los casos en que el eje óptico está contenido en el plano de incidencia y se produce por lo tanto la separación de modos. Cuando el ángulo de incidencia es el de Brewster, se demuestra que el vector polarización eléctrica efectiva tiene la dirección del rayo reflejado, tanto cuando la luz incide desde el medio isótropo como cuando incide desde el cristal. Tambien se considera el caso en que el plano de incidencia no coincide con un plano principal. Como en este caso no se produce la separación de modos, aparecen en el cristal ambos rayos refractados: el ordinario y el extraordinario. Para esta interfaz, mostramos que existe una polarización del rayo incidente para la cual el vector polarización eléctrica efectiva total correspondiente a ambas ondas refractadas, está contenido en el plano de incidencia y tiene la dirección del rayo reflejado cuando el ángulo de incidencia es el de Brewster. Los resultados obtenidos se discuten desde el punto de vista del modelo dipolar.

Abstract:
The behaviour of the electric polarization of an interface between an isotropic medium and a birefringent crystal is investigated. In first place, the cases in which the optical axis lies on the incidence plane are considered. When the incidence angle is Brewster angle is shown that the effective electric polarization of the interface has the direction of the reflected ray in both cases, when the first medium is the isotropic medium and when the first medium is the birefringent crystal. It is also considered, the case in which the incidence plane is not a principal plane. As the separation into modes is not produced, both refracted rays appear in the crystal: the ordinary- and the extraordinary-ray. It is shown that a polarization of the incident ray exists, for which the resulting effective electric polarization vector lies on the incidence plane and has the direction of the reflected ray, when the incidence angle is that of Brewster. The obtained results are discussed from the point of view of the dipolar model.

González Iglesias, Arturo E.. "Angiotensina II en la hipófisis normal e hiperplásica" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presencia de todos los componentes del sistema renina-angiotensina (RAS) en la adenohipófisis ha sugerido que el componente activo de este sistema, el octapéptido Angiotensina II (AngII), actuaría en dicha glándula como un factor autócrino o parácrino. Aún cuando se ha demostrado que AngII libera prolactina (PRL) y adrenocorticotrofina (ACTH) tanto in vivo como in vitro a través de sus receptores de tipo l (ATl), sc ignora todavía la relevancia fisiológica dc estos efectos. El objetivo de esta Tesis fue estudiar la participación del octapéptido cn la función hipofisaria normal y cómo la misma puede alterarse por procesos patológicos característicos dc la glándula. Con tal motivo, los ensayos se realizaron en adenohipófisis de ratas hembra adultas normales y en dos modelos experimentales de adenomas hipofisarios prolactinosecretantes (prolactinomas). Dado que AngII es un secretagogo de PRL utilizamos como parametros de estudio diferentes aspectos del proceso prolactinoliberador de AngII, incluyendo su mecanismo de transducción de señales (especialmente la señalización de Ca2+i y los subtipos receptores del octapéptido involucrados en el mismo. En una primera caracterización de los efectos de AngII en adenohipófisis de rata normal (grupo control, CON), demostramos que la producción de inositol trifosfato (IP3), la movilización de Ca2+i y la liberación de PRL inducidas por AngII sufren una rápida y prolongada desensibilización homóloga y heteróloga. Asimismo, puesto que el Ca2+i es un factor esencial para la secreción hormonal y la proliferación y diferenciación celular, ampliamos nuestro estudio del mecanismo de señalización intracelular del Ca2+i en la hipófisis normal y lo comparamos en detalle con los modelos experimentales mencionados. En experimentos de cultivo primario de células adenohipofisarias y ensayos de señalización de i observamos que AngII libera PRL a concentraciones fisiológicas en la hipófisis normal (grupo CON) a través de una respuesta de i bifásica, la cual se compone de una espiga inicial dependiente de la movilización del contenido de Ca2+ de reservorios intracelulares sensibles a tapsigargina e IP3 y una fase posterior de meseta dependiente del influjo de Ca2+e. En contraste, el efecto prolactinoliberador del octapéptido se encuentra significativamente disminuido en células adenohipofisarias provenientes de prolactinomas inducidos mediante el tratamiento crónico in vivo con dietilstilbestrol (grupo DES). Además de la disminución del número de receptores hipofisarios AT1 ya descripta en este modelo experimental, la atenuación del efecto prolactinoliberador del octapéptido en estas células se encontró asociada con una profunda alteración de su patrón de señalización de i, que se caracterizó por la ausencia completa de la fase inicial de espiga de i y la presencia de una señal monofásica de tipo meseta enteramente dependiente del influjo de Ca2+e y mediada parcialmente por canales de calcio dependientes del voltaje tipo L (VDCC). A pesar de estas modificaciones, las respuestas fueron mediadas por el mismo subtipo receptor (AT1) en ambos grupos experimentales. En otros ensayos, demostramos la especificidad de la alteración de la señal de Ca2+i en respuesta al estímulo de AngII, cuyo patrón característico fue reproducido en prolactinomas de ratones con deficiencia funcional del receptor dopaminérgico D2. Por otra parte, dado que se ha descripto que el octapéptido actúa como factor angiogénico y mitogénico en varios tejidos, evaluamos la capacidad de AngII para inducir la proliferación y la activación de p44/p42 en células adenohipofisarias normales e hiperplásicas. Experimentos de incorporación de 3 -timidina indicaron que el octapéptido no promueve la proliferación celular en células adenohipofisarias tanto normales (grupo CON) como hiperplásicas (grupo DES), a pesar de que dicho agonista estimula significativamente la actividad de p44/p42 en ambos grupos. El tratamiento in vivo de las ratas estrogenizadas con el agonista dopaminérgico D2, bromocriptina (DES+Bro), retornó parcialmente la prolactinemia a niveles normales e indujo una marcada regresión de los prolactinomas, si bien no fue evidente una recuperación del contenido hipofisario de PRL. La recuperación parcial de los parámetros in vivo se correlacionó con una restauración paralela de la secreción de PRL y la espiga de Ca2+i inducidas in vitro por AngII en células hipofisarias de este grupo. Inesperadamente, el tratamiento in vivo de la hiperplasia hipofisaria con progesterona (grupo DES+P4) potenció el efecto prolactinoliberador del octapéptido a través de un mecanismo sinérgico entre los receptores AT1 y AT2, a pesar de que dicho progestágeno no revirtió ni la hiperprolactinemia ni el tamaño de los tumores. Resultados de Western Blot indicaron por primera vez la presencia de los receptores AT2 en la adenohipófisis, cuya expresión se encontró marcadamente aumentada en los grupos hiperplásicos (DES y DES+P4). Por otra parte, cuando la hiperplasia fue revertida con el tratamiento in vivo con bromocriptina (DES+Bro), la expresión del receptor AT2 disminuyó hasta recuperar el nivel expresado en el grupo control. Ninguno de los cotratamientos empleados (bromocriptina o P4) indujo cambios en la baja expresión de los receptores AT1 característica del grupo DES. En conclusión, los presentes estudios en modelos animales de prolactinoma indicarían la existencia de una compleja interrelación entre el RAS hipofisario, el sistema dopaminérgico, y los esteroides ováricos en la función hipofisaria. Modificaciones en esta delicada red de interacciones, podrían explicar la alteración del comportamiento hipofisario frente a ciertos secretagogos como AngII. Los resultados obtenidos son compatibles con la hipótesis de una activación del RAS hipofisario durante el proceso de hiperplasia y podrían ser de potencial interés en diversas áreas de la farmacoterapia como el tratamiento de prolactinomas resistentes o no a agonistas D2, el tratamiento hormonal de reemplazo en la postmenopausia y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares como la insuficiencia cardíaca y la hipertensión.

Abstract:
The description of all components of the renin-angiotensin system (RAS) in the adenohypophysis has suggested that the biologically active element of this system, the octapeptide Angiotensin II (AngII), might act locally as an autocrine and paracrine factor. In spite of that it has been previously demonstrated that AngII releases prolactin (PRL) and adrenocorticotrophin hormone (ACTH) in vivo and in vitro through type 1 receptors (AT1), the significance of these effects in endocrine physiology remain largely unknown. The main focus of the present Thesis was on the role of the octapeptide in pituitary physiology and so studies were performed in normal adult female rat adenohypophyseal cells and on prolactin-secreting tumoral cells obtained from two experimental models of prolactinoma. Since AngII is a PRL secretagoge, different aspects of the AngII induced PRL release process such as receptor subtypes involved and signal transduction mechanism (specially, intracellular Ca2+ signaling) were studied as parametters of biological action. In our first characterization studies on AngII action in normal adenohypophyseal rat cells (CON group), we showed that the octapeptide induced inositol triphosphate (IP3) production, Ca2+ mobilization and PRL release undergo homologous and heterologous desensitization that was rapid in its outcome but prolonged in its duration. Since Ca2+i is an essential factor for hormonal secretion and cell differentiation and proliferation, we extend our work on the Ca2+i signaling mechanism evoked by AngII in normal pituitaries in order to compare it in detail with responses obtained in the above mentioned prolactinoma models. In primary cell culture and Ca2+i signaling assays, we demonstrated that AngII releases PRL at physiological concentrations in normal adenohypophyseal cells (CON group) through a biphasic i response composed by an initial spike increase dependent on IP3 and tapsigargin sensitive intracellular Ca2+ pools and a delayed plateau phase that relied in Ca2+e influx. In contrast, the octapeptide PRL releasing effect was found to be significantly diminished in adenohypophyseal cells from experimental prolactinomas induced in vivo by chronic treatment with dietilstilbestrol (DES group). Besides the previously described downregulation of hypophyseal AT1 receptors in this experimental model, attenuation of the AngII induced prolactin releasing effect in these cells was found to be associated with a dramatic alteration in its i signaling pattern, which was characterized by a complete absence of the initial i Spike phase, and the presence of a monophasic, plateau phase entirely dependent on e influx and partially mediated by L- type voltage dependent calcium channels (L type-VDCC). In spite of these changes, responses were mediated by the same receptor subtype (AT1) in both experimental groups. Further studies demonstrated that the alteration of the AngII induced i signal was specific; and its characteristical pattern could be reproduced in experimental prolactinomas from dopamine D2 receptor-deficient mice. Since it was described that the octapeptide can act as both an angiogenic and a mitogenic factor in several tissues, we evaluated the ability of AngII to induce cell proliferation and activation of p44/p42 in normal (CON group) and hyperplasic (DES group) adenohypophyseal cells. -tymidine incorporation assays showed that the octapeptide does not promote cell proliferation in adenohypophyseal cells from either group at the concentration range studied (0.1-100 nM), though the agonist significantly stimulates p44 and p42 activity in these cells. In vivo treatment of estrogenized rats with a D2 receptor dopaminergic agonist, bromocriptine (DES+Bro group), paitially returned prolactinemia to normal values and induced a remarkable regression of the pituitaiy adenomas, though a restoration of pituitary PRL content was not evident. Partial recovery of the in vivo parameters was correlated with a paralleled restoration of in vitro effects of AngII on PRL secretion and i spike increase in freshly obtained adenohypophyseal cells from this group. Unexpectcdly, though the in vivo treatment of pituitary hyperplasia with progesterone (DES+P4 group) could not revert neither the hiperprolactinemia nor the adenoma growth, it effectively potentiated the octapeptide PRL releasing effect through a sinergistic mechanism that couples both AT1 and AT2 receptors. Western blot results indicated for the first time the unequivocal presence of AT2 receptor subtype expression at the adenohypophysis, which was found notably upregulated in the hyperplasic groups (DES and DES+P4 groups). On the other hand, when development of hyperplasia was reverted by the in vivo co-treatment with bromocriptine (DES+Bro group), AT2 receptor expression dropped until it recovered control levels. Neither bromocriptine, nor P4 cotreatrnent induced any change on the diminished AT1 receptor expression level typical of hyperplasic cells. In conclusion, the present studies and results drawn from these animal models of prolactinoma seem to indicate the existence of a complex anay of interactions between the hypophyseal RAS, the dopaminergic system and ovaric steroids, that determine pituitary function. Subtle changes in this delicate net of interactions might explain the alteration of pituitary behaviour in front of certain secretagogues such as AngII. The results obtained are compatible with the hypothesis that RAS becomes activated during the genesis of the hyperplasic process in the pituitary, and thus they might be of potential interest in multiple areas of pharmacotherapy, like the treatment of agonist D2 resistant prolactinomas, replacement hormone therapy at postmenopausia and the management of cardiovascular disorders like cardiac failure and hypertension.

González Guerrico, Anatilde María. "Expresión de genes asociados a fibrosis quística" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Fibrosis Quística es la más frecuente de las enfermedades humanas severas, de origen genético, en la población caucásica (Welsh MJ, 1995). Se produce por mutaciones en un único gen, que codifica para el canal de Cl- CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)(Kerem et al., 1989; Riordan et al., 1989; Rommens et al., 1989). Aún no ha sido establecida una relación clara entre el defecto genético y los mecanismos que gobiernan esta enfermedad. Todas las citoquinas proinflamatorias que han sido estudiadas en el ambiente inflamatorio de los pulmones FQ están elevadas y la concentración de la citoquina antinflamatoria interleuquina-10 (IL-10) está considerablemente reducida (Khan et al., 1995). A su vez, la IL-1β regula la expresión del CFTR (Cafferata E G A, 2001; Cafferata et al., 2000). Por otro lado, las proteínas proinflamatorias TNF-α, IL-1β y IL-6 regulan positivamente los genes de las mucinas muc2 y muc5 (Dohrman et al., 1998) e incrementan la quimioatracción de neutrófilos (Ohishi, 2000) que liberan gran cantidad de proteínas, especies reactivas de oxígeno y NO, que pueden causar daño celular. Entonces, es posible que genes diferencialmente regulados por IL-1β tengan una participación en los mecanismos que llevan a la muerte celular, la exacerbación de los procesos inflamatorios o la acumulación de mucinas en el tracto respiratorio FQ. Con el fin de identificar nuevos intermediarios en la vía de señalización de IL-1β, o de identificar genes que tuviesen una regulación similar al CFTR, se realizó un "Differential Display" sobre las células T84 tratadas con distintas concentraciones de IL-1β. Se aisló un gen regulado por dicha citoquina, que poseía el mismo patrón de modulación que el CFTR. La banda aislada fue clonada y secuenciada. La misma mostró una homología del 99% con otras del banco de datos que codificaban para proteínas cuya actividad es desconocida. A este gen diferencial se lo denominó hsccl (Homo sapiens T84 colon carcinoma cell line IL-1beta regulated mRNA 1). Por el análisis de la secuencia completa del ARNm se determinó que hscc1 contiene dominios que se hallan conservados en la familia de las proteínas transportadoras. Mediante "Northern blots" se observó una doble banda correspondiente a 3,5 kb, que mostraba un máximo de activación cuando las células fueron tratadas con 0,5 ng/ ml de IL-1β. Por otro lado, la expresión de hscc1 se inhibió a concentraciones de IL-1β mayores a 1 ng/ml. La IL-1β induce al factor de transcripción NF-κB cuando se encuentra presente en el medio de cultivo a una concentración de 0,5 ng/ml (Cafferata E G A, 2001), mientras que con 2,5 ng/ml de IL-1β se inducen los factores c-jun y c-fos, pero no NF-κB. Usando un virus que sobre-expresa a un dominante negativo de NF-κB, se determinó que la inducción de este factor es necesaria para que se produzca el aumento en la expresión de hscc1 por IL-1β, en forma similar a lo que ocurre con CFTR. Por otro lado, el inhibidor de proteína quinasa C, GF109203X (Battle et al., 1998) y los inhibidores de proteína quinasas de tirosina Genisteína (Rao et al., 1997) y Herbimicina A (Taylor et al., 1997), bloquearon la inducción mediada por IL-1β, sugiriendo que estas proteína quinasas estan también involucradas en el camino de transducción de la señal de IL-1β. Otro objetivo de este trabajo fue identificar genes cuya expresión fuese dependiente de la actividad del CFTR, con el fin de determinar cuales eran las funciones celulares dependientes del canal CFTR y de identificar factores que contribuyesen a la deficiencia pulmonar en fibrosis quística. Realizamos un "Differencial Display" usando células de epitelio de traquea fibroquística (CFDE) y las mismas células transfectadas con el CFTR normal (CFDE/6RepCFTR). Aislamos e identificamos un ARNm de expresión diferencial que codifica para la quinasa de tirosina c-Src. Este mensajero se encontró sobre-expresado en las células CFDE. Cuando las células CFDE/6RepCFTR fueron tratadas con el inhibidor del canal CFTR NPPB, los niveles del ARNm c-Src se elevaron. Es decir, la actividad del canal CFTR sería necesaria para la regulación de c-src. Asimismo, los análisis de la proteína c-Src por inmunohistoquímica mostraron que ésta se encuentra elevada en los pulmones FQ. La fibrosis quística se caracteriza por la acumulación de mucus que obstruye los conductos de distintos órganos (Hutchison and Govan, 1999). A su vez, este aumento en la producción de mucinas puede hacer a los enfermos más susceptibles de sufrir infecciones pulmonares por Pseudomonas aeruginosa (Parmley and Gendler, 1998). Se sabe que MUC1 se encuentra elevada en el colon de los ratones FQ, pero los ratones FQ que no producen MUC1 (ratones "knock out" para MUC1) tienen una obstrucción intestinal mucho menor. Además, a c-Src se la ha involucrado en la producción de mucinas en respuesta a diversas injurias (Bausbaum et al., 1999). Era posible entonces que el aumento de c-Src inducido por la falla en CFTR fuese responsable de la acumulación de mucus. Para corroborar esta hipótesis, se midió la expresión de la MUC1. Esta fue encontrada elevada en células CFDE respecto de las células CFDE/6RepCFTR. Además, cuando las células CFDE fueron tratadas con un dominante negativo o con un inhibidor de c-Src (PP2) los niveles de MUC1 disminuyeron. Estos resultados indican que c-Src estaría involucrada en el camino de señalización que lleva el aumento de MUC1. Estos datos sugieren, además, que la falla en el CFTR produciría un incremento en la expresión de MUC1 en el sistema respiratorio y que esto ocurre previamente a la infección pulmonar. En consecuencia, la quinasa c-Src podría ser el nexo entre la falla del CFTR y la acumulación de mucinas en fibrosis quística.

Abstract:
Cystic Fibrosis (CF) is the most important severe genetic in Caucasian population (Welsh MJ, 1995). It is caused by mutations in a single gene that codifies for the chloride channel named cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)(Kerem et al., 1989; Riordan et al., 1989; Rommens et al., 1989). A clear relationship between the genetic defect and the mechanisms governing the disease has not been fully established. In the inflammatory medium of CF lung every pro-inflammatory cytokines tested were elevated and the concentration of anti-inflammatory cytokine interleukin-10 (IL-10) was considerably decreased. In addition, IL-1β regulates CFTR expression. In this work, a differential display from T84 cells treated with different concentrations of IL-1β was performed, in order to identify new second messengers of IL-1β signaling pathway or other genes that have a regulation similar to cftr. The proinflammatory cytokines TNF-α, IL-1β and IL-6 up-regulate muc2 and muc5 gene expression (Dohrman et al., 1998) and increase neutrophils chemioattraction (Ohishi, 2000), which produce proteins, NO, and oxygen reactive molecules that can cause cellular injure; then, IL-1β differential expressed genes may be involved in processes that produce cell died, inflammation exacerbation or mucus accumulation in the CF airway. One of the differential display isolated fragments was cloned and sequenced. The sequence showed 99% homology with other sequences present in the data bank. They codify for proteins with unknown activity. This differential expressed gene was called hscc1 (Homo sapiens T84 colon carcinoma cell line IL-1beta regulated mRNA 1). The complete hscc1 mRNA sequence analysis predicted that HSCC1 sheared some conserved domains with transport proteins. Northern blots assays, using 32P labeled hscc1 as a probe, a double band of 3,7 kbp was observed. Maximum mRNA levels were obtained after treating the cells with 0.5 ng/ml of IL-1β. Hscc1 expression was inhibited with 1 ng/ml or higher concentrations of IL-1β. On the other hand, IL-1β at 0.5 ng/ml induced the transcription factor NF-ĸB (Cafferata E G A, 2001) but 2.5 ng/ml of this cytokine induced c-jun and c-fos but not NF-ĸB. In this work it was determinated that NF-ĸB is essential for the IL-1β induction of hscc1 by using a NF-ĸB dominant negative expressing virus. The pre-treatment with PKC inhibitor GF109203X (Batlle et al., 1997) blocked the IL-1β induction of hscc1, suggesting that these protein-kinases are involved in the IL-1 signal transduction pathway. In order to better understand which cellular functions depend on CFTR channel activity and which factors contribute to the pulmonary defects in cystic fibrosis, we search for possible genes having a CFTR-dependent expression. We performed a differential display assay using human CF tracheal epithelial cells (CFDE) and the same cells transfected with normal CFTR (CFDE/6RepCFTR). We have isolated and identified the tyrosine kinase c-Src as a differential gene, which was up-regulated in CFDE cells. When CFDE/6RepCFTR cells were treated with the CFTR channel inhibitor, NPPB, the levels of the c-Src mRNA raised, suggesting that the chloride channel activity should be involved in CFTR-dependent regulation of c-Src expression. In addition, immuno-histochemical analysis showed and increased c-Src in the CF lung. The most important problem in cystic fibrosis results from obstruction of ducts in several organs due to excessive mucus secretion (Hutchison and Govan, 1999). The overexpression of mucins in turn might lead to susceptibility to Pseudomonas aeruginosa infection in cases of CF (Basbaum et al., 1999). The expression of the mucin MUC1 is elevated in the colon of CF mouse, and CF mouse lacking MUC1 exhibits greatly diminished intestinal mucus obstruction (Parmley and Gendler, 1998). In addition, c-Src has been involved in mucin production in response to diverse insults (Basbaum et al., 1999). Therefore, we studied the possible role of c-Src in mucus accumulation due to the CFTR failure. We found taht MUC1 was elevated in the tracheal CFDE cells compared with CFDE/6RepCFTR cells. When CFDE cells were treated with a c-Src dominant negative plasmid or the c-Src inhibitor PP2, the MUC1 levels diminished, suggesting that c-Src might be involved in the signalling pathway that drives the elevation of MUC1 in CF. These data suggest that the CFTR failure produce an elevated MUC1 expression in the airway and this occurs previously to lung infection. Therefore, the tyrosine kinase c-Src seems to constitute a bridge between MUC1 over-expression and the CFTR channel failure.

Gómez, Marisa Inés. "Inducción de inmunidad humoral y celular contra Staphylococcus aureus por inmunización local con una cepa viva atenuada y su rol en la prevención de las infecciones intramamarias" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Staphylococcus aureus es el agente causal de infecciones de importancia médica y veterinaria. Las infecciones por S. aureus suelen ser recurrentes o persistentes a pesar de la presencia de anticuerpos específicos circulantes y asociados a mucosas, y del uso de antibióticos a los cuales la bacteria es susceptible. Entre las infecciones persistentes que S. aureus puede ocasionar, la infección intramamaria (lma) crónica constituye la patología infecciosa más prevalente de los bovinos destinados a la lechería. Hasta el presente, no se cuenta con una vacuna efectiva de uso práctico que permita prevenir las infecciones lma estafilocóccicas. La hipótesis de este trabajo de investigación postula que la administración de una vacuna viva atenuada por la ruta local lma sería un método idóneo para inducir una respuesta inmune adaptativa efectiva en la glándula mamaria contra S. aureus. En el marco de esta hipótesis, el objetivo general de este trabajo de investigación es proveer conocimiento acerca de las respuestas inmunes, tanto humorales como celulares, que es necesario inducir en la glándula mamaria para prevenir las infecciones por S. aureus. Se obtuvo una cepa viva atenuada de S. aureus (CVA A523) por termosensibilidad, la cual se utilizó como cepa prototípica en los estudios de inmunidad de la glándula mamaria. Para demostrar la hipótesis propuesta se desarrolló un modelo de infección lma por la cepa 8325-4 ɸ11 de S. aureus. Las lesiones histológicas observadas concordaron con las descriptas durante la mastitis bovina. La inmunización con la CVA A523, por la ruta local lma durante la etapa final de la preñez, confirió protección en la glándula mamaria frente a la infección experimental. La protección se evidenció a través de una significativa reducción en el número de UFC remanentes en la glándula mamaria de los ratones inmunizados luego del desafio experimental con la cepa virulenta parental de S. aureus. La inmunización por la ruta sistémica intraperitoneal indujo la presencia de elevados niveles de IgG circulantes pero no otorgó protección frente al desafío lma. La protección inducida mediante la inmunización lma se correlacionó con la presencia de elevados niveles de IgA e IgG en leche así como también con la presencia de poblaciones de linfocitos T capaces de producir IFN-γ frente al estímulo in vitro o durante la infección in vivo por S. aureus. La presencia en forma conjunta de anticuerpos específicos y de linfocitos capaces de producir citoquinas de tipo Th1 inducidos por la inmunización local constituye una estrategia promisoria para prevenir el establecimiento de la infección lma crónica por S. aureus en un huésped vacunado. Se requerirán futuros ensayos controlados de inmunización en bovinos con CVA para extender la validez de nuestros hallazgos a rumiantes destinados a la lechería.

Abstract:
Staphylococcus aureus can cause a variety of infections relevant to humans and domestic animals of economic importance. S. aureus infections are usually persistent in spite of the presence of high levels of antibodies in blood and at mucosal surfaces and the use of antibiotics to which this pathogen is susceptible. Among the persistent infections that S. aureus can cause, the chronic intramammary (lma) infection constitutes the most prevalent infectious disease of dairy ruminants. To the present, there is no useful vaccine available that provides significant protection from lma S. aureus infection. The hypothesis of this investigation is that local lma administration of a live-attenuated (la) vaccine may be used to induce an effective adaptive immune response in the mammary gland against S. aureus. The final goal of this study is to provide information for the better understanding of the appropriate immune responses, humoral and cell mediated, that it is necessary to induce in the mammary gland to prevent S. aureus infections. A la-S. aureus strain (la-A523) with temperature-sensitive phenotype was obtained. This prototype strain was used as the immunogen in mammary gland immunity studies. To demonstrate the hypothesis, a mouse model of lma infection by the S. aureus wild type (wt) strain was developed. The histopathological lesions observed were in agreement with those described in bovine mastitis. Local lma immunization with la-A523 in the last week of pregnancy protected the mammary gland from experimental infection. Protection was determined as a significant decrease in the CFU numbers remaining in the mammary glands of immunized mice after challenge with the wt-S. aureus strain. Systemic intraperitoneal immunization induced the presence of high IgG levels in blood but did not confer protection against lma challenge. The protection induced by lma immunization was related to increased IgA and IgG levels in milk as well as lymphocyte populations able to produce IFN-γ during in vitro stimulation or in vivo S. aureus infection. The presence of both, specific antibodies and lymphocytes able to produce type 1 cytokines, induced by local immunization may constitute an effective strategy to prevent the establishment of chronic lma S. aureus infection in a vaccinated host. Further controlled immunization trials in bovines with la-S. aureus will be required to extend the validity of these findings to dairy ruminants.

Giambiagi, Susana. "Estudios moleculares del gen 11 de rotavirus" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los mecanismos de variación y evolución en los rotavirus comprenden no sólo las mutaciones puntuales introducidas por la RNA polimerasa durante la replicación y la reasociación de segmentos virales durante infecciones mixtas, sino también los reordenamientos que se producen dentro de cada segmento genómico. Estos reordenamientos no afectan la estructura conservada de los segmentos genómicos (extremos 5' y 3' conservados), y esta estructura se supone relacionada con la capacidad de replicación y empaquetamiento del genoma viral en nuevas partículas virales. Con el objetivo de estudiar los mecanismos de reordenamiento genómicos en rotavirus se analizó la estructura molecular del segmento genómico 11 reordenado de distintos rotavirus humanos de "electroferotipo corto", aislados de niños infectados. De acuerdo a los resultados obtenidos, el segmento 11 reordenado de los aislamientos virales analizados tiene una inserción de 148 nucleótidos en la región 3' no traducida del segmento viral. Las secuencias obtenidas de los segmentos 11 de los distintos aislamientos virales analizados fueron altamente homólogas entre sí y con las secuencias de los segmentos 11 de otras dos cepas de rotavirus humanos decriptas previamente: RVS y DS-1. La inserción no afecta la región codificante del gen 11, ni la secuencia y localización de la región 3' no codificante, común a todos los segmentos 11 de los rotavirus tipo A. La secuencia de la inserción, rica en A y T, no presenta homología con el segmento 11 normal ni con otros segmentos virales. Los resultados obtenidos permitieron identificar y estudiar un nuevo mecanismo de reordenamiento genómico en rotavirus, en el cual no hay una duplicación parcial del segmento genómico. Un segundo objetivo de la tesis consistió en el desarrollo de un sistema que permita obtener rotavirus recombinantes. Se estudiaron las secuencias requeridas para que un ARN sea reconocido por la maquinaria viral y sea replicado y empaquetado en nuevas partículas virales. Para estudiar las secuencias involucradas en el reconocimiento del ARN viral por la polimerasa viral hemos construído un plásmido recombinante que al ser transcripto produce un ARN que contiene las secuencias 5' y 3' no traducidas del segmento 11 viral, flaqueando la región codificante del gen CAT. Este ARN es amplificado cuando es transfectado en el citoplasma de células infectadas con rotavirus. De acuerdo a los resultados obtenidos, las señales involucradas en el reconocimiento del ARN por la polimerasa viral con actividad replicasa están localizadas en el extremo 3' no codificante. La polimerasa requiere para iniciar la síntesis de la cadena - del segmento 11, no sólo la secuencia consenso 3', común a todos los segmentos virales, sino también la formación de una estructura de horquilla dejando un extremo 3' libre de 18 nucleótidos que incluyen la secuencia consenso terminal. Aunque la metodología propuesta ha permitido desarrollar un método valioso para el análisis de las secuencias de RNA capaces de ser reconocidas por el complejo de replicación viral, la misma no resultó satisfactoria para la obtención de partículas virales recombinantes. Es posible que existan otras señales importantes para el empaquetamiento que probablemente se localicen en la región codificante del segmento 11, y por lo tanto que están ausentes en nuestra construcción.

Abstract:
The mechanisms of genome variation and evolution in rotavirus, involve not only the mutations introduced by RNA polymerase during replication and the reassociation of genomic segments during infection, but also the rearrangement of genomic segments. The rearrangements don't modify the conserved structure of the genomic segments (conserved 5' and 3' ends), and this structure is supposed to be related with the replication and packaging of the viral genome. The first objective of this thesis was to study the genomic rearrangement mechanism in rotavirus. We have studied the molecular structure of the rearranged genomic segment 11 of different virus isolated from infected children. According to the results, the rearranged segments 11 of the viral isolates have an insertion of 148 nt in the 3' untranslated region. The sequences in all 6 isolates were highly conserved among them, and with those of human strains DS-1 and RVS. The insertion does neither affect the gene 11 coding region nor the sequence and localization of the 3' non coding region, conserved in all the 11 segments of rotavirus group A. The sequence of the insertion, A + T rich, has no clear resemblance with the normal gene 11 sequence nor with other viral segments. The results obtained have allowed identifying and studying a new mechanism of genomic rearrangement in rotavirus, in which partial duplication of genomic segment is not involved. The second objective was to develop a system for obtaining recombinant rotaviruses. We have developed an assay to study the RNA cis-acting signals that promote the synthesis of dsRNA. We have constructed a recombinant plasmid that transcribed with T3 polymerase yields a positive sense RNA containing the rotavirus gene 11 5' and 3' untranslated regions, flanking the coding region of CAT reporter gene. This RNA is amplified when transfected into the cytoplasm of rotavirus infected cells. The results obtained in the study of 3' mutant RNAs have shown that the cis-acting signals to promote the synthesis of dsRNA involved, not only the 3' consensus sequence, but also a "stem-loop" structure and a single strand 3' end of 18 nt that include the 3' conserved termini. We couldn't obtain recombinant rotavirus using this methodology. It is possible that the packaging signals are not located in the 5' or 3' untranslated region of segment 11, but into the coding region, absent in the RNAs we have studied.

García, Gabriela Andrea. "Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las drogas utilizadas para el tratamiento de la infección por T. cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, presentan múltiples efectos colaterales y una eficacia variable en las etapas indeterminada y crónica de la infección. Por otro lado, no existe una vacuna para esta parasitosis que impida la transmisión y/o la enfermedad. Teniendo en cuenta la necesidad de la obtención de buenos inmunógenos y nuevas drogas tripanocidas más efectivas y seguras, el objetivo del Trabajo de Tesis fue definir nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de la infección por T. cruzi a partir de la identificación de proteínas en este parásito relacionadas con glutatión-S-transferasas (GSTs)de otros organismos. la selección de las GSTs para dirigir esta búsqueda se basó en la participación de esta enzima, cuyos genes aun no fueron identificados en T. cruzi, en un metabolismo divergente entre el parásito y su hospedero mamífero y en una respuesta inmune protectiva contra la infección experimental por este parásito. En la primera parte del trabajo, que se denominó Parte A, se planteó la identificación de secuencias de genes funcionales resultantes del Proyecto Genoma de T. cruzi con homología con GSTs y su posterior caracterización a fin de determinar si su producto puede postularse como posible blanco de quimioterapia. Como resultado de esta búsqueda se identificó un nuevo gen de copia única, denominado TCGRX,cuyo producto presentó el patrón aminoacídico completo de glutarredoxinas (ers) y similitud con ers y GSl‘sde diversos organismos pero no con enzimas de mamíferos. El modelado molecular de una porción de la TCGRX sobre la Grx 3 de Escherichia coli sugiere que esta proteína tendría la estructura típica de ambas familias. En la segunda parte del trabajo, (Parte B),teniendo en cuenta la existencia en T. cruzi de antígenos de reactividad cruzada con la GST de 26 kDa de Schistosoma japonicum (GSTsj) y que las GSTs son enzimas muy conservadas en su estructura tridimensional se planteó la identificación de estos antígenos utilizando como herramienta un suero anti-GSTsj y su posterior caracterización y evaluación en protocolos de inmunoprotección. Por cromatografía de inmunoafinidad con el suero anti-GSTsj se purificó una fracción a partir de epimatlgotes de T. cruzi, denominada PHGST, que presentó actividad de GST.Por otro lado, el rastreo de una biblioteca genómica de T. cruzi con este antisuero dio como resultado la selección de 38 clones que codificaron para antígenos de la familia Tc13 de la superfamilia de antígenos de superficie de tripomastigotes. la identificación de un miembro de esta familia en la cepa Tulahuén del parásito, denominado PHGST#5, permitió su comparación con los ya conocidos en cuanto a su estructura aminoacídica. Mediante la hibridación de cromosomas separados y transferidos a membranas, se determinó que los genes Tc13 se localizan principalmente en el cromosoma III y su homólogo. Las funciones inmunomoduladoras descriptas para ciertas proteínas de la superfamilia de antígenos de superficie y su participación en el desarrollo de una respuesta inmune protectiva, sustentó la evaluación del antígeno PHGST#5 en experimentos de inmunoprotección en ratones de la cepa BALB/c. La inmunización plasmídica con PHGSTT#5 no indujo una respuesta humoral específica y la respuesta celular, evaluada por efecto de hipersensibilidad retardada (DTH) frente a la inoculación con el antígeno recombinante, fue muy leve; mientras que, la inmunización con la proteína recombinante MBP-PHGST#5 indujo tanto una respuesta humoral como celular, evaluada por DTH. La inmunización plasmídica de PHGST#5, así como la inmunización con MPB-PHGST#5 produjeron una disminución significativa de la parasitemia luego del desafío con formas infectantes del parásito. La inmunización plasmídica con PHGST#5,además disminuyó el daño y el parasitismo tisular luego del desafío. Por lo tanto, la selección de las GSTs para dirigir la definición de nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de la infección por T. cruzi permitió identificar el gen TCGRX,cuyo producto por no poseer contraparte en el mamífero, luego de la caracterización bioquímica podría postularse como posible blanco para el diseño de drogas tripanocidas e identificar el antígeno PHGST#5, un nuevo miembro de la familia Tc13 con posibles epitopes compartidos con la GSTsj, y definir su efecto inmunoprotector tanto de la infección y como de la patología chagásica.

Abstract:
Trypanosoma cruzi is the ethiological agent of Chagas’disease. Drugs that have been utilized so far in the treatment of T. cruzi infection have shown colateral effects. No vaccine does exist against this parasitosis. The objective of this thesis has been to define new possible targets for the control of the transmission of T. cruzi infection by means of the identification of parasite proteins related to Glutathion-S-Trasferases (GST)of other organisms. The selection of the GSTs to direct this screening was based on the participation of this enzyme in a divergent metabolism between the parasite and the mammal host and in a protective immune response against the experimental infection with the parasite. These genes have not been identified in T.cruzi yet. The identification of functional T. cruzi gene sequences which showed GST homology resulted from the T. cruzi Genome Project and allowed to identify a unique (single) gene copy TcGRX.The product of this gene showed homology to glutaredoxin (ers) and GSTs from different organisms, but no homology was found to enzymes from mammals. This characteristics support biochemical studies of TcGRX with the purpose of postulating a new possible target for the design of trypanocidal drugs. The utilization of an anti-GST of Schistosoma japonicum serum as a tool for the identification of cross reacting antigens in T. cruzi allowed the purification of an epimastigote fraction, which showed GST activity. The purification of this fraction was performed by immunoaffinity chromatography. The a-GSTsj serum was used to screen a T. cruzi genomic library and allowed the finding of a new member of the Tc13 family. This family belongs to the denominated PHGST#5 superfamily of trypomastigote surface antigens. This antigen showed an immunoprotective effect against the infection as well as the chagasic pathology, and was evaluated by means of both plasmid and recombinant protein immunization.

Fu, Chu Chun. "Estudio por dinámica molecular de la difusión de Si y depósito de C sobre la superficie (001) de Si" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La superlicie (001) de silicio ha sido objeto de numerosos estudios debido a sus interesantes propiedades, que aportan al avance de la física de semiconductores y a sus aplicaciones en dispositivos microelectrónicos. Si(001) es además un buen candidato para usar como sustrato del crecimiento de capas delgadas de carbono amorfo, material que tiene una dureza comparable a la del diamante. En esta tesis se estudiaron tres problemas vinculados con esta superficie: 1. El movimiento de balanceo (flipping) de los dímeros de Si(001) y su correlación dinámica tanto en la superficie perfecta como en la presencia de defectos. El período característico del balanceo y la correlación del movimiento de dímeros vecinos fueron investigados usando el método de simulación por dinámica molecular tight-binding. Los resultados fueron corroborados en parte por cálculos de primeros principios y también comparados con los obtenidos por un modelo de Ising bidimensional. Son importantes para la interpretación de imágenes obtenidas por STM a diferentes temperaturas. 2. La estabilidad y difusión de dímeros de Si adsorbidos sobre la superficie Si(001) a temperatura alta. Se observaron diferentes caminos y mecanismos de difusión en la simulación por dinámica molecular. Los resultados se compararon con los de cálculos a 0K y con los datos experimentales obtenidos por STM disponibles en la literatura. También se estimaron las energías de activación de algunos de estos procesos. 3. El depósito de carbono sobre Si(00l), tratando de simular el experirmmto realizado en Tandar. Con este propósito se propuso un modelo tight-binding para sistemas mixtos de C y Si, a partir de los modelos conocidos para los materiales puros. Se observó la formación de una capa de SiC amorfo que sirve como interfaz para crecer sobre ella el carbono amorfo duro, y se estudiaron sus propiedades estructurales y electrónicas. En particular, se lo caracterizó por su densidad, sus funciones de distribución radiales y angulares, su orden químico y su densidad de estados electrónicos.

Abstract:
The surface Si(001) has been studied in a large number of previous papers, due to its interesting physical properties. These studies have improved the knowledge of semiconductor physics and led to its application in micro-electronic devices. Si(001) is also an excellent substrate for the growth of amorphous carbon thin films, which have a hardness similar to that of diamond. In this thesis three problems related to Si(001) have been studied: I. The flipping of the surface dimers on Si(001) and its dynamical correlation, in the case of perfect and defective surfaces. The characteristic time between flips and the probability of correlated flips, when two nearest neighbouring dimers exchange their buckling positions, hare been studied using tight binding molecular dynamics simulations. The results have been compared with first principles calculations and with Monte Carlo simulations using a two-dimensional Ising model. Thev are important in order to understand STM images and their temperature dependence. 2. The stabilitv and diffusion of Si adsorbed dimers on Si(001) at high temperature. Several mechanisms and diffusion pathways have been observed by means of molecular dynamics simulations. The results have been compared with those from first principles calculations, at 0K, and also with available STM experimental ones. The dynamical activation energies along some pathways have also been estimated. 3. The deposit of energetic C atoms over Si(001), attempting to simulate the experimental procedure used in Tandar Laboratory. For this purpose we have proposed a tight binding model for systems containing both Si and C atoms starting from the available models for the pure materials. The formation of an amorphous SiC (a-SiC) thin film has been observed. It may be the interface over which the amorphous carbon thin film would grow. Structural and electronic properties of the a-SiC film so obtained have been investigated, in particular the density, the radial and angular distribution functions, the chemical order and the local density of electronic states.

Fresina, Mirta Elida. "Comportamiento hidrogeológico-hidroquímico del acuífero pampeano en la Cuenca inferior del Río Carcaraña, Provincia de Santa Fe" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo de Tesis, se encara el estudio de la evolución hidroquímica creciente de las aguas freáticas de la cuenca inferior del río Tercero - Carcarañá desde las posibles áreas de recarga a la de descarga. Para tal fin se analizaron y establecieron los parámetros, que permitieron subdividir la Cuenca inferior en cuatro Sub-cuencas respondiendo a una litología, hidrología y química. Para la realización del trabajo se partió de la interpretación cartográfica que permitió complementar la información geomorfológica existente, además de establecer el diseño de la red hidrográfica y poder definir la división del area considerada en Sub-cuencas. Se individualizaron los suelos presentes en la región y sus usos tanto actuales como potenciales. En base a datos climatológicos de 90 años se determinaron los tipos de clima, se evaluó el escurrimiento superficial y se calculó la infiltración a partir del Balance Hídrico. El estudio textura], mineralógico y químico de siete perfiles permitió conocer detalladamente las caracteristicas los sedimentos pampeanos, en los cuales se aloja el acuífero libre. Por último se realizó un análisis hidrodinámico e hidroquímico del acuífero freático comprobando estadísticamente las relaciones presentes entre iones. Los estudios anteriores permitieron individualizar cuatro Sub-cuencas superficiales, delimitadas por las divisorias y que presentan ligeras variaciones de clima, distintos tipos de suelos y diferentes pendientes topográficas; estas Sub-cuencas superficiales coinciden con cuatro zonas con distinta hidrodinámica, en donde la calidad química del agua subterránea presenta notorias diferencias. A su vez se estableció un orden de ponderación en la participación de las variables fisicoquímicas, en la sensibilidad del sistema. De esta manera, se verificó que, cuando la pendiente de la llanura es inferior al 0.55 ‰,actúan principalmente los parámetros fisicos de desplazamiento vertical del agua, infiltración (I), precipitación (Pp), evapotranspiración real (EvR) y cuando la pendiente topográfica supera el 0.55 ‰ comienzan a actuar los parametros físicos con tendencia al desplazamiento horizonta del agua, escurrimiento superficial (Es), gradiente subterráneo (G.S), velocidad efectiva (Ve), pendiente topográfica (Pte). Así, las cuencas en donde predominan las variables fisicas de actividad horizontal sobre las de actividad vertical, presentan mejor calidad química en el agua subterránea, que a la inversa. Las cuencas en donde predominan tanto las variables físicas de actividad horizontal como las variables físicas de actividad verticales, tienen la mejor calidad química. Las cuencas en donde no predominan ningua de las variable físicas, ni de actividad horizontal ni vertical, tienen la mala calidad química.

Abstract:
The following doctoral paper concerns the study of the increasing hydrochemical evolution of the freatic waters of the lower basin of the Tercero- Carcarañá River from the possible area of refilling to that of the refill itself. To that aim, parameters were established and analyzed in order to subdivide the lower basin into four sub-basins according to certain lithography, hydrology and chemistry. In order to perform this task, the starting point considered was the cartographic interpretation which allowed to complete the already existing geomorphologic information, apart from allowing for the mapping of the hydrographic net and to be able to define the division of the areas considered under sub-basins. The soil surfaces present in the region were individualized as well as their present and potential uses. Based on 90- year climatology data, kinds of weather were determined, superficial oozing was evaluated and the infiltration as from the Hydro. Balance was estimated. The textural, mineralogical and chemical 7- profile study made it possible to know in detail the characteristics of the Pampean sediments, in which the free aquifer is located. Lastly, a hydrodynamic and hydrochemical analysis of the freatic aquifer was made statistically checking the present relationships among ions. The above mentioned studies allowed us to individualize four superficial sub-basins, limited by divisor lines and which present slight variations in weather, different kinds of soil and different topographic slopes; these superficial sub-basins coincide with four areas of different hydrodynamics, in which the chemical quality of underground water shows notorious differences. At the same time, a weighting order was established in the participation of the physical chemical variables in the sensitivity of the system. In this way, it was verified that when the slope of the plain is lower than 0,55 ‰ the main determiners are the physical parameters of vertical moving of the water, infiltration (I), precipitation (Pp), real evapotransportation (EvR) and when the topographic slope is higher than 0,55 ‰ the physical parameters beginning to act tend to horizontal moving of the water, superficial moving (Es), underground gradient (S G), effective velocity (E V) and topographic slope (Pte). In this way, those basins in which physical variables of horizontal activity prevail over those of vertical activity present better chemical quality in underground water than in the opposite case. Those basins, in which both physical variables of horizontal activity as well as physical variables of vertical activity prevail, possess the best chemical quality. Those basins in which neither of the physical variables predominate- that is- neither horizontal nor vertical activity- present bad chemical quality.

Flores, Graciela B.. "Las antenas y el sentido térmico de la vinchuca triatoma infestans (Heteroptera: Reduviidae)" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió el sentido térmico de la chinche hematófaga Triatoma infestans para dilucidar la función de las antenas en la orientación espacial y en la evaluación de las propiedades de una fuente de calor. Los resultados demuestran que la función de termorreceptores específicos para distintos comportamientos en los que la clave térmica es relevante depende de la localización anatómica. Bajo ciertas circunstancias, otros receptores de calor pueden asumir la función de aquellos localizados en las antenas. Sin embargo, la falta de la entrada antenal altera la respuesta comportamental. El análisis del papel de las antenas durante la aproximación hacia una fuente de calor permitió definir dos mecanismos de orientación: la telotaxis, que opera a distancia y la tropotaxis, que actúa en proximidad. El cambio de un mecanismo a otro ocurre abruptamente, a una distancia de 1,5-2 cm de la fuente, aun en ausencia de una de las antenas y con la información térmica como única clave. El estudio de la dinámica de los movimientos antenales en insectos suspendidos reveló la existencia de patrones definidos diferentes durante la aproximación a una fuente de calor. Durante la fase de locomoción, los insectos despliegan movimientos suaves y coordinados. En contraste, durante las fases detención las antenas exhiben movimientos sacádicos y con cambios de dirección abruptos. Sobre esta base, proponemos que las antenas son usadas como “instrumentos de medición” de las discontinuidades térmicas. La respuesta comportamental de las vinchucas frente a fuentes térmicas de distintos tamaños aparentes, obtenidos variando el área emisora de la fuente o la distancia entre la fuente y el insecto, reveló una correlación positiva, estadísticamente significativa, entre el ángulo de apertura antenal y el ángulo subtendido por la fuente. Con estos resultados se construyó un modelo para explicar el mecanismo por el cual las vinchucas reconocen a sus hospedadores utilizando sólo el calor que éstos emiten.

Abstract:
The thermal sense of the haematophagous insect Triatoma infestans was studied to elucidate the role of the antennae in spatial orientation and in the evaluation of the properties of the thermal source. The results demonstrate that the function of specific thermoreceptors involved with those behaviours for which the thermal cue is important depends on anatomical location. Under certain circumstances other heat receptors can assume the function of those located on the antennae. Nevertheless, the lack of the antennal input alters the behavioural response. The analysis of the role of the antennae during the approach to a thermal source made it possible to define two mechanisms of orientation: telotaxis, which acts at a distance and tropotaxis which acts in proximity. The shift from one mechanism to the other occurs abruptly at a distance of 1.5-2 cm from the source even in the absence of one of the antenna and with thermal information as the only cue. The study of the dynamics of antennal movements in suspended insects revealed the existence of defined and different patterns during the approach to a thermal source. During the walking phases the insects display smooth and co-ordinated movements. In contrast, during the standing phases the antennae exhibit saccadic movements with sudden changes of direction. On this basis, we propose that the antennae are “measuring instruments” for thermal discontinuities. The behavioural response of the insects to thermal sources of differing apparent sizes, obtained by varying the area of the emitting surface or its distance from the insect, revealed a statistically significant positive correlation between the antennal opening and the angles subtended by the sources. A model was constructed with these results to explain the mechanism by which the insects recognise their host by using only their emitted heat.

Ferreyra, Gabriela Alejandra. "Mecanismos de transducción de señales en el reloj biológico de mamíferos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los ritmos biológicos diarios son el resultado de la interacción entre un reloj circadiano endógeno y factores ambientales sincronizadores, principalmente la luz, que ejerce su efecto a través de cambios en la fase de los ritmos controlados. El objetivo del presente trabajo de tesis fue caracterizar la vía (o una de las vías) de transducción de señales fóticas que ponen en hora al reloj circadiano de mamíferos. Para ello, se realizaron técnicas de registro comportamental (medición de actividad locomotora), neuroquímico (actividad de neurotransmisores), bioquímico (actividad enzimática, cuantificación proteica, fosforilación, etc.) y molecular (western blot, hibridación in situ) en hámsters (Mesocricetus auratus), obteniendo tejido hipotalámico conteniendo los núcleos supraquiasmáticos, sede del reloj circadiano. Los resultados de esta tesis, junto con las evidencias de la bibliografía sobre el tema, permiten sugerir un modelo de señalización de cuya entrada es la interacción del glutamato de la vía retinohipotalámica con receptores de tipo NMDA, que inducen un aumento en el influjo de calcio. A su vez, este ion es capaz de activar tanto a la proteína quinasa dependiente de Ca2+ y calmodulina (CaMKII) y a la óxido nítrico sintetasa (NOS). El óxido nítrico, y posiblemente también el monóxido de carbono, otro mensajero gaseoso, producen un aumento en la actividad de la guanilil ciclasa soluble (GC), que promueve una subida en los niveles del GMPc y la activación de la proteína quinasa G (PKG). Si bien son pocos conocidos los sustratos de esta en el cerebro, se aportan evidencias en favor de que esta vía de señales lleva a la expresión fótica de genes reloj como mPer2.

Abstract:
Daily biological rhythms are the result of the interaction between an endogenous circadian clock and environmental entraining agents, the main of which is light, which exerts its effect through phase changes in overt rhythms. The aim of this thesis work was to characterize the signal transduction pathway that put the mammalian circadian clock on time. For this, techniques of behavioral recording (locomotor activity), neurochemistry (neurotransmitter activity), biochemistry (enzymatic activity, protein quantification, phosphorylation, etc.) and molecular biology (western blot, in situ hybridization) were performed in hamsters (Mesocricetus numtus), obtaining hypothalamic tissue which contained the suprachiasmatic nuclei (SCN), the site of a biological clock. The results of this work, together with previous evidences from the literature, suggest a signaling model whose input is retinohypothalamic glutamate interaction with NMDA receptors in the SCN, inducing an increase in calcium influx. This ion might activate both Ca2+/calmodulin dependent kinase (CaMKII) and nitric oxide synthase (NOS). Nitric oxide, and possibly also carbon monoxide, another gaseous messenger, induces an increase in soluble guanylate cyclase (GC)activity, which in turn elevates cGMP levels and activate protein kinase G (PKG). Although PKG substrates in the brain are not well known, evidences suggesting that this pathway leads to the photic expression of clock genes such as mPer2 are provided.

Fernández Degiorgi, Cristina Haydeé Carolina. "Utilización de las radiaciones ionizantes en procesos industriales" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta Tesis ha sido la aplicación de las radiaciones ionizantes, en particular la radiación gamma del 60Co, en dos campos diferentes: la obtención de hidrogeles y la inactivación de agentes patógenos en materiales biológicos, con la característica común que, en ambos, las condiciones de irradiación fueron en estado supercongelado (-78°C). Los hidrogeles son matrices poliméricas radioinducidas que absorben y retienen agua sin disolverse. En la polimerización por radiaciones a bajas temperaturas de una solución o suspensión de monómeros (ésteres de ácido metacrílico o ácido acrílico), el agua forma microcristales dispersos en el monómero mientras éste polimeriza en estado líquido supercongelado. Al finalizar la irradiación, cuando el sistema alcanza la temperatura ambiente, los microcristales de hielo retenidos por la matriz polimérica forman poros, en las paredes de los cuales los biocomponentes son inmovilizados principalmente por adhesión. Esta propiedad se puede utilizar para inmovilizar sustancias biológicamente activas o como soporte de especies vivas tales como levaduras, hongos, bacterias, etc. Los hidrogeles fueron utilizados para la inmovilización de un antibiótico con el fin de obtener un sistema de liberación controlada y como soporte para la inmovilización de bacterias para ser empleadas en la remoción de metales pesados de soluciones contaminadas. En los dispositivos obtenidos con ampicilina inmovilizada se realizaron estudios de liberación in vivo e in vitro para determinar los parámetros fármacocinéticos y la determinación de la estabilidad del antibiótico en las condiciones de irradiación. Por otra parte, dada la capacidad de los hidrogeles para ser usados como soporte de bacterias y al uso potencial de biomasas de microorganismos inmovilizadas como bioadsorbentes de metales, en el presente trabajo se realizaron estudios de adhesión de bacterias aisladas del Río de la Plata capaces de crecer en presencia de Cd(II), Pb(II) y Cu(II) en hidrogeles obtenidos por polimerización radioinducida y su aplicación en procesos de remoción de tales iones metálicos. Con este propósito, se obtuvieron diferentes hidrogeles variando el tipo de monómero (diferente hidrofilicidad), la cantidad de agua y glicerina, y también incluyendo otros monómeros (copolimerización), con el objeto de obtener la matriz polimérica más adecuada para lograr la máxima adhesión de los microorganismos. A estos fines. se estudiaron: la hidrofilicidad de los hidrogeles por determinanción de los valores del contenido de agua en equilibrio; la adhesividad de bacterias por microscopía electrónica para seleccionar el soporte polimérico adecuado, y por último, la inmovilización de bacterias aisladas del Rio de la Plata en hidrogeles con el propósito de realizar estudios de descontaminación de soluciones. Respecto de Ia inactivación de agentes patógenos por radiaciones ionizantes a bajas temperaturas (-78°C) se utilizaron dos sistemas de estudio: i) la radioesterilización de sueros fetales bovinos para su uso en cultivos celulares y ii) la inactivación de virus herpes bovino tipo-1. En el primero, el propósito fue determinar si se producían cambios en las propiedades físico-químicas o en las funciones biológicas específicas de las proteínas séricas por efecto de las dosis necesarias para obtener una esterilización eficiente y controles microbiológicos de los sueros irradiados a bajas temperaturas. En el segundo, el propósito fue determinar la dosis necesaria que reduce la población viral en un 90% (D10)en medio Glasgow-MEMlibre de suero, antes y después de la remoción de los restos celulares a bajas temperaturas.

Fernández Borda, Roberto A.. "Observaciones solares en H alfa : Innovaciones técnicas y aplicaciones científicas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo central de esta Tesis de Doctorado es la puesta a punto del HASTA (Ha Solar Telescope for Argentina) para su aplicación a las observaciones solares. El HASTAes un telescopio solar provisto de un filtro Lyot sintonizable, optimizado para trabajar en 6562.7 ± 1 Å con un ancho de banda de 0.3 Å. Las imágenes son adquiridas por una cámara CCD (Charge Coupled Device) de 1280 x 1024 pixeles. Cada pier del instrumento subtiende 2.07 arcseg obteniéndose una resolución espacial de ~ 4 arcseg. Este instrumento posee dos modos de operación, el modo de patrullaje y el modo de fulguración. En el modo de patrullaje se adquieren imágenes cada 2 min; mientras que en el modo de fulguración cada 10 seg. El control de estos dos modos de adquisición, mediante métodos automáticos de detección de fulguraciones. hace del HASTA un instrumento versátil capaz de estudiar fenómenos transitorios en el Sol con una excelente resolución temporal. En este trabajo describiremos los pasos seguidos para adaptar al HASTAa su nueva ubicación. a sus nuevos periféricos y sus tareas de patrullaje continuo del Sol. Mostraremos como se realizó la calibración de sus datos y presentaremos un nuevo método de detección automática de fulguraciones solares. También describiremos observaciones en las que el HASTA desempeñó un papel preponderante o fue usado como un eficiente instrumento de apoyo. Por último, se discutirán las potencialidades de este instrumento y las posibles modificaciones que puedan incrementar sus ya excelentes capacidades operativas.

Abstract:
The aim of this Thesis is to develop the necessary tools to make of the Ha Solar Telescope for Argentina (HASTA) an efficient instrument for solar observations. HASTA is a solar telescope provided with a tunable Lyot filter, optimized to work in 6562.7 ± 1 Å with a bandwidth of 0.3 Å. The images are acquired by a CCD (Charge Coupled Device) camera having 1280 x 1024 pixels. Each pixel covers 2.07 arcsec on the Sun, reaching a spatial resolution of ~ 4 arcsec. The instrument has two operating modes. a patrol mode and a flare mode. Images are obtained every 2 min. in patrol mode, and every 10 sec. during flare mode. These two modes are controlled using automatic methods to detect solar fIares. which make HASTA a very versatile instrument to study transitory phenomena on the Sun with an excellent temporal resolution. We will describe the steps followed to adapt HASTA to its new location in the Argentinean mountains, to its new peripheral interfaces and its continuos patrolling of the Sun. We wiIIdescribe the data calibration and we will present a new method to automatically detect solar flares. We will also analyze observations of events in which HASTA either played an important role or supported other instruments. Finally, we will discuss the potentials of the instrument and the improvements to be applied to increase its already excellent operational capabilities.

Favier Dubois, Cristian Mario. "Análisis geoarqueológico de los procesos de formación del registro, cronología y paleoambientes, en sitios arqueológicos de Fuego-Patagonia" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Falsetti, Marcela Cristina. "Dimensión de Minkowski, autosimilaridad y aplicaciones" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo abordamos el estudio de algunos tópicos de Geometría Hactal y se presenta en dos partes. Comenzamos con un análisis de aspectos teóricos y prácticos de la dimensión de Hausdorff y de la dimensión de Minskowski, dado que la dimensión es un parámetro esencial para estudiar conjuntos fractales. Usando integración de medidas unidimensionales, se encuentra un método alternativo para el cálculo de la dimensión de Minkowski para cualquier conjunto acotado del plano. Este abordaje es computacionalmente más eficiente que el cálculo directo de la dimensión de Minkowski (see , ). De los conjuntos en general ponemos especial interés en las curvas. Las curvas, y especialmente las “curvas fractales”, son importantes pues modelizan una amplia clase de fenómenos naturales tales como costas geográficas, señales de sonido, etc. El caso de curvas planas ha sido tratado por Tricot (ver ) quien desarrolló un análisis de las mismas basado en parámetros geométricos asociados a conjuntos convexos. La idea es aproximar el engordado de una curva por cápsulas convexas de subarcos y, usando el diámetro y la anchura de dichas cápsulas, obtener una fórmula más simple y eficiente para el cálculo de la dimensión de Minkowski. En este trabajo se realiza un análisis geométrico para. las curvas tridimensionales y se introduce un nuevo parámetro: la anchura secundaria. Se define la clase de curvas expansivas para el caso tridimensional y se encuentra para ellas una fórmula alternativa para calcular dimensión de Minkowski. Finalmente mostramos cómo este abordaje generaliza el desarrollado por Tricot para curvas planas y analizamos las dificultades que aparecen al aumentar la dimensionalidad del espacio de base. En la Segunda Parte presentamos los fundamentos matemáticos de la Compresión Fractal de imágenes. Se revisan los principales modelos matemáticos de compresión fractal que tienen estrecha relación con nuestro trabajo y se explican diferentes modelos para el problema de compresión de imágenes. Estos modelos dependen esencialmente del espacio de representación de las imágenes con niveles de gris: pueden usar medidas o funciones definidas sobre puntos. En particular se analiza el modelo de Codificación por Bloques de J acquin (ver ) y el modelo IFZS (ver ) como ejemplos de uno y otro caso. Se estudia el esquema funcional de Autosimilaridad Generalizada como modelo teórico para resolver el problema inverso para fractales y otros conjuntos. La idea en este caso es la siguiente: dada una función, que representa una imagen o una señal, se quieren encontrar dos conjuntos finitos de funciones i} 1«i«m, y un operador contractivo que los involucra, tal que el punto fijo de ese operador sea una función cercana a la dada. Se presenta un modelo que combina elementos de la Autosimilaridad Generalizada con la codificación por bloques. El mismo permite mayor flexibilidad en la estructura autosimilar de la compresión fractal estandard, un mejor aprovechamiento de la redundacia de la imagen, una completa automatización del algoritmo y control del error de aproximación entre la imagen original y la reconstruida. Por último se muestra la relación entre los modelos funcionales IFZS y de Autosimilaridad Generalizada que están definidos sobre espacios funcionales esencialmente distintos.

Abstract:
This thesis is about Fiactal Geometry and is presented in two parts. Since dimension is an essential parameter to study fractals, in Part I we analyze the theoretical and practical aspects of Hausdorfi dimension and Minskowskidimension. We present a theoretical approach, by using integration of unidimensional measures, for the computation of Minskowskidimension of any bounded planar set. This approach is computationally more efficent than stright computation of the Minkowski dimension (see , ). We are particularly interested in curves. Curves, and specially “fractal curves”, are important because they represent a wide class of natural fenomena such that geographical coasts, sígnals, Brownian motion,etc. Planar curves have been studied by Tricot (see ). He developed an analysis for expansive planar curves based on geometrical parameters associated to convex sets. The main idea is to approximate the e-saussage of a curve by convex hulls of subarcs, obtaining a more simple and eflicient formula for the computation of the Minkowski dimension, by using the diameter and breadth of these convex hulls. In this work we present a geometrical analysis of tridimensional curves and we introduce a new parameter: the secondary breadth. We define the class of expansive curves for the tridimensional case and find an alternative formula for computing he Minskowski dimension. First we need to demonstrate some results about convex sets. We show that this method generalizes the Tricot's approach. In Part II, we present the mathematical foundations of Fractal Block Compression of images. We review the main mathematical models that are closely related to our work and analyze different approaches to the fractal compression problem. They are mainly two possible approaches: the first one uses measures to represent images with grey-levels and the second one uses functions. In particular we review the Block-codingmethod introduced by Jacquin in , as an example of the first approach, and the IFZS method introduced by Cabrelli et al. in as an example of the second one. We study the functional scheme of Generalized Self-Similarity (see and ) as a theoretical model to solve the inverse problem to fractals and other sets. The idea in this case es the following: Given a target function, that represents an image or signal, we must find two finite sets of functions: i} 1«i«m, and a contractive operator that involves these functions, such that the attractor of this operator is a function close to the target. In this thesis we present a model that combines the main ideas of Generalized Self-Similarity and the Block-coding method. It allows more fiexibility in the self-similar structure of standard fractal compression, it takes more advantages of redundancy of the image, and furthemore it enables us to incorporate a complete algorithm automatization and the control of the approximation error. Finally, we show the relation between the IFZS and the Generalized SelfSimilarity models that are defined on essentialy different functional spaces.

Escobar, Gustavo Carlos Juan. "La circulación en la tropósfera asociada con irrupciones de aire frío en el centro de Argentina" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta Tesis es definir un criterio para detectar irrupciones de aire frío en la región central de Argentina determinada por los paralelos 25°S y 45°S, y encontrar los principales modelos de circulación en la tropósfera sobre el cono sur de Sudamérica asociados con estos eventos durante los meses de Mayo a Septiembre. En primer lugar, utilizando distintos parrámetros estadísticos, se realizó una caracterización regional y temporal de la temperatura media diaria, de su variación interdiurnal y particularmente de los descensos interdiurnos en la región de estudio. A continuación se analizaron en detalle los descensos intensos de temperatura y en función de los resultados obtenidos se definió un criterio de detección irrupciones de aire frío. Este criterio se definió en base a la variabilidad regional de la temperatura media diaria, y de las características térmicas antes y después del descenso interdiurno intenso. En la mayoría de los casos, las irrupciones de aire frío estaban asociadas con el pasaje de frentes fríos moderados o intensos sobre la región de estudio. Una vez definido este criterio, se procedió a realizar una clasificación sinóptica de secuencias diarias de campos de circulación asociados con irrupciones de aire frío en la región central de Argentina mediante el método de componentes principales. El objetivo planteado en esta oportunidad fue aumentar el valor predictivo de estas situaciones especiales que tienen importantes impactos sociales y económicos en la región. La información utilizada en esta Tesis consistió en datos diarios de temperaturas mínimas y máximas correspondientes al período 1967 - 1996 (SMN) y datos diarios de altura geopotencial de 1000 hPa y 500 hPa provistos por el Centro Europeo de Pronóstico de Mediano Plazo (período 1979 / 1993). Los resultados obtenidos mostraron que los descensos intensos de temperatura son más importantes en la región Centro Norte y Litoral Fluvial Argentino y que los procesos de escala sinóptica, reflejados principalmente por el pasaje de frentes fríos, presentaron una marcada periodicidad al sur del paralelo 35'. Las irrupciones de aire frío mostraron un mínimo de frecuencia porcentual durante Mayo en el Centro Oeste de la Provincia de Buenos Aires y Centro Oeste del país. Luego este mínimo se desplaza hacia el Litoral Fluvial Argentino en Junio y Julio y finalmente retrocede en Septiembre a una posición similar a la que ocupaba en Mayo. Una explicación posible de este comportamiento es la variación mensual de la posición media de la corriente en chorro polar en relación con el desplazamiento hacia el norte de las irrupciones de aire frío. La clasificación sinóptica de las secuencias diarias de campos de circulación en la tropósfera asociada con irrupciones de aire frío en la región central de Argentina mostró tres modelos patrones característicos. Dos de ellos corresponden a vaguadas de ondas largas en niveles altos que afectan el continente. Uno con el anticiclón de superficie moviéndose sobre latitudes medias, y el otro con un anticiclón en superficie afectando latitudes mas bajas sobre el continente. Por último, se obtuvo el patrón mas clásico de circulación asociado con irrupciones de aire frío en la región central de Argentina. Este modelo presentó una importante cuña en el Océano Pacífico al Oeste de la costa continental que provoca movimientos de descensos sobre el centro de Argentina y que se haya acompañado por un anticiclón postfrontal en niveles bajos que advecta aire frío desde el Sur.

Abstract:
The objective of this Thesis is to define a criterion to detect cold surges over central Argentina determined by parallels 25°S and 45°S, and to find the main models of circulation in the troposphere over the South cone of South America associated with these events during the months of May to September. At first, a regional and temporally characterisation of the daily mean temperature, the mean daily temperature differences and particularly of the interdiurnal descents in the study region were made by means of different statistical parameters. Then the intense descents of temperature were analysed in detail and based on the obtained results it was defined a detection criterion related to cold air surges. This criterion was defined on the basis of the regional variability of the daily mean temperature, and the thermal characteristics before and after of the intense descent. In most of the cases, the cold surges were associated with the passage of moderate or intense cold fionts over the analysed region. Once defined this criterion, it was come to make a synoptic classification of daily sequences of circulation fields associated with cold surges in the central of Argentina by means of Principal Components Analysis. The objective purposed in this opportunity was to increase the value predictive of these special situations that have important social and economic impacts in the region. The information used in this Thesis consisted of daily data of minimum and maximum temperatures corresponding to the period 1967 - 1996 (SMN) and daily geopotential heights at 1000 and 500 hPa based on 15 years (1979-1993) provided by the European Centre for Medium Range Weather (ECWMF). The results showed that the intense descents of temperature are more important in the Centre North region and in the Littoral Fluvial of Argentina and the processes of synoptic scale, reflected mainly by the passage of cold fionts, presented a major periodicity to the south of the parallel 35°. The cold surges showed a minimum of percentage fiequency during May in the Centre West of Buenos Aires Province and in the Centre West of the country. Then the minimum moves towards the Argentine Littoral in June and Julio and finally backs down in September to a similar position to which occupied in May. A possible explanation of this behaviour is the monthly variation of the mean position of the polar jet stream in relation to the displacement towards the north of the cold surges. The synoptic classification of the daily sequences of circulation fields in the tropo~pherea ssociated with cold surges in the central Argentina showed three basic patterns of sequences. Two of them correspond to long wave troughs in high levels that affect the continent. One of them shows the surface anticyclone moving over middle latitudes and the other with an anticyclone in surface affecting lower latitudes over the continent. Finally, it was obtained the most classic pattern of circulation associated with cold surges over central Argentina. This model presented an important wedge in the Pacific Ocean to the West of the continental coast that produces subsidence over the centre of country and that has been accompanied by a postfiontal anticyclone in low levels that advects cold air fiom the South.

Errea, María Inés. "Estudio de los galactanos del alga roja pterocladiella Capillacea" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Existen dos familias de polisacáridos sintetizados por algas rojas, los carragenanos y el ágar, que, debido a sus propiedades reológicas, que les permiten estabilizar soluciones o emulsiones acuosas, son utilizados en la industria farmacéutica y alimentaria de todo el mundo. Este Trabajo de Tesis comprende los tópicos que se indican a continuación: a) Estudio de la estructura de los galactanos que componen el sistema de polisacáridos de la agarofita Plerocladíella capillacea (Gelidiales, Gelidiaceae). Hasta el momento, todos los estudios realizados indicaban que las algas pertenecientes al orden Gelidiales sintetizaban básicamente agarosa. La mayoría de dichos estudios se realizaron sobre el producto obtenido por tratamiento de las algas con agua a ebullición, y posterior purificación de la agarosa por congelamiento y descongelamiento; mediante esta técnica de purificación todos los polisacáridos que no gelificaban se despreciaban. En este Trabajo de Tesis se extrajo secuencialmente el alga con agua a distintas temperaturas (ambiente, 50°, 70° y 90°C) y se estudiaron los productos aislados a temperatura ambiente, 50° y 90°C. Los resultados obtenidos son sumamente interesantes dado que revelaron la presencia, en algunas de las fracciones estudiadas, de estructuras que, hasta el momento, no habían sido detectadas en algas pertenecientes al orden Gelidiales. b) Desarrollo de dos metodologías que representan un aporte original para el estudio estructural de los galactanos sintetizados por algas rojas. c) Investigación de la capacidad de gelificación del sistema de polisacáridos sintetizado por el alga Cryptopleura ramosa (Ceramiales, Delesseriaceae),que es epífita de P. capillacea. Es muy probable que, al recolectar el alga P. capillacea con fines industriales, resulte contaminada con C. ramosa y, si el sistema de polisacáridos sintetizado por C. ramosa gelificara en soluciones acuosas, podría contaminar la agarosa obtenida a partir de P. capíllacea afectando la calidad del gel. d) Evaluación de la actividad antiviral de algunos de los productos obtenidos a partir de P. capillacea y C. ramosa determinándose, en algunos casos, que los mismos poseen una elevada actividad antiviral.

Abstract:
Agars and carrageenans are synthesized by red seaweeds. These polysaccharides form gels or viscous solutions, which due to their reological properties are appropriate for pharmaceutical and food applications. This Thesis comprises the following topics: a) The structural study of the galactans from the agarophyte Pterocladiella capillacea (Gelidiales,Gelidiaceae). Previous studies carried out on algae belonging to Gelidiales indicated that these seaweeds produced mainly agarose. However, in these studies, the seaweeds were subjected to hot water extraction and the isolated products purified by freeze-thawing; thus, by this purification method the non-gelling polysaccharides were discarded. In the present work, P. capillacea was sequentially extracted with water at room temperature, 50°, 70° and 90°C and the products obtained at room temperature, 50° and 90°C were fractionated and subjected to structural analysis. The results were unexpected because they showed that, besides agarose, this seaweed synthesized polysaccharides with unsual structures for algae belonging to this order. b) Development of new methods for the analysis of these polysaccharides which involve determination of the absolute configuration of 3,6-anhydrogalactose and 2,6-di-0-alkylgalactose units. c) Investigation of the gelling capability of the polysaccharides from Cryptopleura ramosa (Ceramiales, Delesseriaceae), an epiphyte on P. capíllacea. In the collection of P. capillacea contamination with C. ramosa may occur. It must be considered that the eventual gelling properties of the polysaccharides from C. ramosa might affect those of the agarose from P. capíllacea. d) As several sulfated polysaccharides have proved to be useful antiviral agents, fractions from both seaweeds were tested against different herpesviruses.

Ellerman, Diego A.. "Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La glicoproteína epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durante la maduración, y participa en el proceso de fusión de gametas a través de sitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin de comprender los mecanismos involucrados en la participación de DE en dicho proceso, se estudió la importancia de la estructura de DE para la actividad de la proteína. El clonado del ADNc de DE permitió obtener la secuencia de los 227 aminoácidos (aa) de la proteína. El análisis de dicha secuencia indicó que DE pertenece a la familia CRISP (cystein rich secretory proteins), y la presencia de 16 cisteínas en la molécula. El ADNc fue utilizado luego para expresar la proteína recombinante en bacterias (recDE). El estudio de recDE y de la proteína nativa deglicosilada, indicó que la actividad biológica residiría en la porción peptídica de la molécula. Por otro lado, el análisis del estado de oxidación de las cisteínas indicó que la mayoría de ellas formaría puentes disulfuro, y que la ruptura de los mismos afectaría la actividad de la proteína. La expresión de distintos fragmentos recombinantes de DE y su empleo en ensayos biológicos, reveló que la actividad de la proteína residiria en la región comprendida entre los aa 62-158. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la inmunización de ratas con proteína DE produce una respuesta inmune y una inhibición significativa de la fertilidad. El presente trabajo indica que los mecanismos responsables de dicha inhibición involucrarían la entrada de anticuerpos anti-DE al tracto reproductivo, su interacción con los espermatozoides, y la disminución de la capacidad fertilizante de los mismos, abriendo la posibilidad del potencial uso de DE para el desarrollo de un método inmunológico de regulación de la fertilidad. Dado que para ello es necesario poder disponer del antígeno en grandes cantidades, la proteína recombinante fue utilizada en ensayos de inmunización, que indicaron que recDE, al igual que la proteína nativa, es capaz de producir una respuesta inmune y una reducción de la fertilidad. Con el fin de investigar la posible aplicación de este método inmunológico en el hombre, la capacidad inmunogénica de la proteína humana homóloga a DE, proteína ARP, fue estudiada en un modelo de primates no humanos, observándose la inducción de una elevada respuesta inmune en los animales inmunizados. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo contribuyen al esclarecimiento de los mecanismos involucrados en la participación de DE en el proceso de fusión de gametas, y apoyan el potencial uso de esta proteína y sus homólogos para el desarrollo de un método inmunológicode regulación de la fertilidad tanto en animales como en el hombre.

Abstract:
Rat epididymal glycoprotein “DE” associates with sperm during maturation and participates in gamete fusion through complementary sites localized on the egg surface. To get a better understanding of the molecular mechanisms underlying the participation of DE in this process, the relevance of protein DE structure for its biological activity was studied. Cloning of DE cDNA allowed obtaining the sequence of the 227 aminoacids (aa) of the protein. The analysis of the sequence, indicated that DE belongs to the CRISP (cystein rich secretory proteins) family, and the presence of 16 cysteines in the molecule. DE cDNA was then used for the bacterial expression of the recombinant protein (recDE). The study of recDE as well as of the deglycosilated native DE (nDE) indicated that the activity of the protein resides on the peptidic portion of the molecule. The evaluation of the oxidative state of cysteines indicated that most of them would be involved in disulfide bridges, and that the rupture of these bridges would affect the protein activity. The expression of different recombinant fragments of DE, and their use in biological assays indicated that the biological activity of DE would be located within the region encompassed by aa 62-158. Previous results from our laboratory indicate that immunization of rats with protein DE induces an immune response and a significant inhibition of fertility. The present study indicated that the mechanisms responsible for this inhibition would involve the entry of antibodies into the reproductive tract, their association to sperm, and the reduction of sperm fertilizing ability. These results suggested the potential use of DE for developing and immunological method of fertility regulation. Since an important requirement for this purpose, is the possibility of obtaining the antigen in large quantities, recombinant DE was used in immunization studies, which revealed that, like native DE, recDE is able to produce an immune response as well as an inhibition of fertility. In order to explore the potential application of this immunological approach to humans, the immunogenic ability of the human protein homologue of DE, protein ARP, was evaluated in a non human primate model. The induction of a high immune response was observed in all the immunized animals. Together, the results obtained in this work contribute to a better understanding of the molecular mechanisms underlying the participation of DE in sperm-egg fusion, and support the potential use of DE for the development of an immunological method of both animal and human fertility regulation.

Dus Santos, María José. "Expresión de antígenos del virus de la fiebre aftosa en plantas de alfalfa transgénicas: su utilización como inmunógenos experimentales" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El uso de plantas transgénicas como sistema de expresión de antígenos relevantes ha sido ampliamente evaluado dada la posibilidad de utilizar plantas modificadas genéticamente para la producción de vacunas. Las vacunas a base de plantas serían más baratas y más fáciles de elaborar en grandes cantidades. Estas vacunas se podrían producir en países en desarrollo sin necesidad de instalaciones sofisticadas y costosas como las que se necesitan en la actualidad. Por otra parte, estas vacunas eliminarlanel riesgo de virus contaminantes que existe en las vacunas producidas en líneas celulares de mamíferos ya que los posibles vian de plantas contaminantes no constituyen un peligro potencial ni para el hombre ni para los animales. Adicionalmente, las plantas transgénicas que expresen antígenos en sus tejidos comestibles podrían ser usadas como sistemas de producciónde vacunas de administración oral. Hasta el momento, la mayoría de los antígenos expresados consisten en péptidos, proteínas únicas ó estructuras muy simples. Sin embargo, la producción de antígenos vacunales en sistemas heterólogos requiere, en muchos casos. ía expresión de estructuras antigénicas complejas. EIVirus de la Fiebre Aftosa (VFA)produce una de las enfermedades más temidas del ganado debido a su amplia distribucióngeográfica y por ser altamente contagiosa. La vacuna utilizada actualmente es polivalente y a virus inactivado. El progreso en la producción de vacunas antiaftosas está dirigido hacia el logro de vacunas de elaboración más fácily económica y que eviten la manipulación de grandes cantidades de virus. Una alternativa a las vacunas convencionales es la preparación de cápsides vacías expresando y procesando la poliproteína precursora en un sistema de expresión heterólogo. Se han obtenido cápsides vacías confonnacionalmente correctas de los serotipos A, 0 y C del VFA utilizando sistemas de expresion en E. CoIi, baculovirus o virus vaccinia. Los resultados obtenidos hasta ahora al expresar cápsides vacías del VFA en sistemas heterólogos, con relación a Ia conservación de epitopes protectivos, las convierten en antígenos candidatos para la formulaciónde vacunas. Sin embargo, aún no se ha logrado un método de expresión masiva de un inmunógeno eficaz como para ser utilizado a campo, ya que los sistemas desarrollados hasta ahora resultan costosos y poco aplicables a nivel industrial. Como primer objetivo de este trabajo de tesis se propuso producir plantas de alfalfa transgénicas conteniendo el gen que codifica para la poliproteína P1 precursora de las proteínas estructurales del VFA. Las construcciones utilizadas involucran únicamente a P1 ó a P1 junto con la proteasa SC. La presencia del gen foráneo se detectó, en las plantas transgénicas, por PCR y su actividad transcripcional específica por RT-PCR y Northern blot. Fue posible visualizar por microscopía electrónica estructuras que por su tamaño y morfología podrían corresponder a cápsides vacías del VFA. La inmunogenicidad de los productos expresados fue evaluada en el modelo murino. Ratones adultos inmunizados intraperitonealmente desarrollaron una respuesta de anticuerpos detectada por su reactividad. en ELISA, frente a un péptido sintetico que representa la zona más inmunogénica de VP1 y partículas virales completas; y, en Western blot, frente a las proteínas estructurales del virus nativo. Además, estos animales desarrollaron anticuerpos neutralizantes y resultaron completamente protegidos frente al desafío con virus infeccioso. Estos resultados demuestran la factibilidad de expresar antígenos altamente complejos en plantas transgénicas y su utilizacióncomo efectivos inmunógenos experimentales. Los resultados obtenidos por nuestro y otros grupos de investigación demuestran la factibilidad de la utilización de plantas transgénicas como fuente de producción de antígenos vacunales. Sin embargo, uno de los principales problemas que posee este sistema de expresión es que los niveles de proteína expresada en las plantas transgénicas son relativamente escasos como para extrapolar su uso a una vacuna de aplicabilidad real. De modo que, el desarrollo de estrategias que generen una mayor concentración de la proteína recombinante es sumamente importante, especialmente cuando se desea utilizar los extractos de planta sin ningún proceso de enriquecimiento y/o purificación posterior. Dado que la inserción del transgen en el genoma vegetal es al azar, es altamente probable que los niveles de su expresión varíen entre los individuos producidos. Una alternativa posible, entonces, consiste en poder identificar aquellos individuos que presentan niveles excepcionalmente altos de la proteina foránea. Sin embargo, la identificación de aquellas plantas que expresen cantidades significativas de antígeno por métodos inmunológicos es un proceso lento y labioroso. Teniendo en cuenta lo mencionado anteriormente, y como segunda parte de este trabajo de tesis, hemos desarrollado una metodologia que nos permite evaluar un gran número de individuos y seleccionar de un modo fácil y rápido aquéllos que presentan mayores niveles de expresión de la proteina recombinante. Esta metodologia se basa en la expresión de un gen de interés fusionado a un gen reportero, codificante para la enzima B-Glucuronidasa (B-GUS), cuya presencia puede ser detectada cuantitativamente por colorimetrla. A fin de evaluar el sistema de selección propuesto, utilizamos como antígeno un péptido que comprende los residuos 135 a 160 de la proteina VP1 del VFA para generar la proteina de fusión con la enzima B-GUS.Las plantas transgénicas obtenidas fueron primeramente evaluadas por su actividad enzimática de B-GUS. Fue posible detectar por Western blot la proteina de fusión en aquellas plantas que presentaron mayores niveles de B-GUS. Las plantas seleccionadas expresaron 0.5-1 pglmg de proteina soluble total. El péptido p135-160 expresado como proteina de fusión conservó sus caracteristicas inmunogénicas ya que ratones inmunizados parenteralmente con una vacuna elaborada con extracto foliar desarrollaron una respuesta de anticuerpos especificos detectada por su reactividad en ELISAfrente a p135-160, particulas virales completas y en Western blot frente a VP1. Además, se detectaron anticuerpos neutralizantes que resultaron protectores frente al desafio con virus infeccioso. Estos resultados demuestran la posibilidad de utilizaruna metodologia simple para detectar las plantas que expresan altos niveles del péptido recombinante, el cual conserva sus propiedades antigénicas e inmunogénicas al ser expresado como proteina de fusión.

Abstract:
The use of transgenic plants as a system for expressing recombinant antigens has already been widely evaluated and constitutes a feasible methodology for vaccine production. Plant based vaccines would be less expensive and easier to be produced in large scale. These vaccines could be produced in undeveloped countries without requiring sophisticated facilities, as they are currently needed. On the other hand, the use of these vaccines would eliminate the risk of contaminating viruses present in mammalian cellular lines since the plant contaminating viruses do not constitute an actual risk for animals or humans. Additionally,edible transgenic plants expressing antigens in their tissues could be used as oral vaccines. Up to now, most antigens expressed in plants are peptides, unique proteins or very simple structures. Nevertheless, production of vaccine antigens in heterologous systems often require the expression of complex antigenic structures. Foot and mouth disease virus is the causal agent of a worldwide distributed highly contagious disease of cattle. The currently used vaccine is based in the utilization of polyvalent inactivated virus. In general, progress in the process of FMDV vaccine production are pointed toward the development of simpler and cheaper protocols involving the use of lower amount of virulent viruses. An alternative to the conventional FMDV vaccines are those containing recombinant virus empty capsids after the expression of the precursor polyprotein.In the past, it has been possible to obtain empty capsids of serotypes 0, A and C using as expression systems E. coli, baculovirus and vaccinia virus. Although the products resulted immunogenically efficient, the methodologies for producing them are not suitable to be used at the industrial level. The first objective of this thesis was the production of transgenic plants of alfalfa containing the gene encoding for the polyprotein P1, which is the precursor of all structural FMDV proteins. The transgenic constructs used contained either just P1 nor P1 along with the 3C gene. The presence of the foreign gene in the recombinant plants was detected by PCR and their transcriptional activity analyzed by RT-PCR and Northen blot. Additionally. it was possible to demonstrate, by electron microscopy, the presence of structures with a size and shape resembling those of the FMDV empty capsides. The immunogenicity of the obtained products was evaluated in mice. Intraperitoneally immunized adult mice presented a FMDVantibody response detected by its activity,in ELlSA, against a synthetic peptide representing the major immunogenic area of VP1, and against complete virus particles, and in Western blot, against all the FMDV structural proteins. Additionally, these animals developed a significant neutralizing antibody response and protection when experimentally challenged with the virulent virus. These results demonstrated the feasibility of expressing highly complex structures in transgenic plants and its use as effective experimental immunogens. As stated earlier, results obtained by us and other research groups demonstrated the potential feasibility of using transgenic plants as a source of antigen for vaccine production. Nevertheless, the main problem presented by this approach resides in the relatively low concentration of the recombinant protein in the plant tissues, which hampers its possible utilization at the industrial scale. Thus, the development of strategies which allow the production of transgenic plants expressing high levels of recombinant protein would substantially modify the expectations on the utilization of this system in the future, specially in those cases where no further steps toward the enrichment or purification of the recombinant product will be needed. Due to the fact that the insertion of the transgene in the plant genome is a random process, it is expected the development of individuals presenting very different expression levels of the recombinant protein. An interesting approach could be the identification of those individuals presenting exceptionally high levels of the foreign protein. Nevertheless, the identification of those individuals,using immunological approaches, is usually a laborious and slow process. Focusing in this particular problem, the second part of this thesis deals with the development of a methodology that allows us to evaluate a significant number of individuals and select, in an easy and quick way, those presenting the highest levels of expression of the foreign protein. The methodology is based in the expression of the gene of interest as a fusion protein along with a reporter gene which encodes for the enzyme ß-Glucuronidase (ß-Gus), which could be quantitatively detect by a oolorimetric test. In order to evaluate this methodology, we selected as antigen a peptide which represent the amino acid residues at position 135 to 160 of the structural FMDV protein VP1. This peptide was expressed as a fusion protein along with ß-Gus. The obtained transgenic plants were first evaluated based in their ß-Gus activity. Among those presenting the highest enzymatic activity it was possible to detect, by Western blot, the presence of the FMDV epitope. The selected plants expressed a concentration of the recombinant protein between 0.5 to 1 mg/g of the total soluble protein extracted for the plant tissue. The peptide 135-160 appears as conserving its native immunogenic characteristic since adult mice parenterally immunized with a vaccine prepared with the foliar extracts developed a specific FMDV antibody response detected in ELISA, against the p135-160 synthetic peptide. and complete virus particles, and against native VP1 in Western blot. Additionally,the sera of these animals showed significant neutralizing antibodies titers and the mice resulted protected against the experimental challenge with infectious virus. These results demonstrate the feasibility of using this simple methodology to detect transgenic plants expressing high levels of recombinant peptide, which completely conserves its antigenic and immunogenic properties when expressed as a fusion protein.

Duek, Paula Débora. "Tiorredoxinas cloroplastídicas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Las Tiorredoxinas (Trxs) son proteínas que se encuentran en todos los sistemas biológicos y poseen una secuencia muy conservada Cys—Gly-Pro—Cys cuyos tioles reducen los puentes disulfuro de una gran variedad de proteínas. En los cloroplastos de los organismos fotosíntéticos oxigénicos la reducción mediada por la Trx modula la actividad proteica ya que este proceso promueve un cambio conformacional en la enzima sustrato. En esta organela se han caracterizado dos Trxs filogenéticamente distantes: la Trx-m tendría un origen procarióticol mientras que la Trx-f presenta gran homologia con la Trx humana. La Trx-f es particularmente eficiente en la modulación in vitro de la actividad la fructosa-1,6-bisfosfatasa (cFBPasa), mientras que la Trx—m es ineficaz. La disponibilidad de las estructuras tridimensionales de las Trxs de diferentes organismos, su pequeño tamaño, gran solubilidad y termoestabilidad hacen de esta proteína un modelo interesante para el estudio de sus características conformacionales. Uno de los objetivos de este trabajo de tesis fue caracterizar estructural y funcionalmente a la Trx— m, y compararla con la Trx de Escherichia coli. La Trx bacteriana se tomó como referencia ya que ha sido ampliamente estudiada y presenta además un alto porcentaje de identidad con la Trx—m.Por otra parte, si bien todas las Trxs comparten el mecanismo catalítico (el intercambio tiol-disulfuro) interaccionan con diferentes proteínas. Las interacciones no covalentes previas a la formación del disulfuro mixto serían las que determinan la especificidad de la Trx por los diferentes sustratos. En este sentido, se analizó la contribución de las interacciones electrostáticas en el reconocimiento Trx-m . cFBPasa. Para realizar estos estudios se aisló la secuencia codificante de la Trx—m de Brassica napus (colza), se sobreexpresó en un sistema heterólogo y se purificó la proteína recombinante. Los aspectos estructurales y funcionales se analizaron mediante mutagénesis sitio-dirigida. A pesar de la gran homología estructural que tienen la Trx—m y la Trx de E. coli, casi todos los estudios realizados mostraron que poseen diferencias fisicoquímicas y funcionales. La Trx—m fue menos eficiente que la Trx de E. coli en la reducción e isomerización de puentes disulfuro. Por otra parte, si bien las Trxs son muy termoestables la Trx—m es aún más estable que la Trx bacteriana. La mutante W17F Trx-m, que conserva los dos triptofanos próximos a las cisteínas catalíticas, permitió establecer que a pesar de que la Trx-m y la Trx bacteriana mantienen la geometría del sitio activol el entorno de estos triptofanos es distinto. Tanto la Trx—m salvaje como la mutante W17F tienen un rendimiento cuántico menor que la proteína bacteriana y la dependencia de la fluorescencia intrínseca con el pH también es distinta. Por otra parte, la mutante Wl7F permitió identificar que el triptofano l7 en la Trx-m es el residuo que más contribuye a la emisión de la fluorescencia intrínseca de la proreína oxidada y contribuye también al espectro de dicroismo circular en el UV lejano. La importancia del triptofano 17 en el núcleo aromático de la proteína se determinó con el reemplazo por un residuo alifático y pequeño (WWA). Esta mutante modificó no sólo las propiedades estructurales (fluorescencia intrínseca y dicroismo circular en el UV lejano) sino también la estabilidad frente a perturbantes físicos y químicos. y la capacidad reductora (insulina y cFBPasa). La prolina en la posición 35 está estrictamente conservada en las Trxs-m y ausente en todas las otras. El reemplazo de esta prolina aumentó la sensibilidad de la molécula a perturbantes químicos y fisicos. La incorporación de una carga positiva en esa posición (P35K) favoreció la interacción con la cFBPasa, mientras que una carga negativa la empeoró (P35E). Estos resultados son congruentes con la densidad de cargas negativas que rodea a las cisteínas de la cFBPasa sujetas a la regulación redox y al contenido de cargas positivas que rodea el sitio activo de la Trx—f,el modulador más eficiente. Por otra parte. altas concentraciones salinas condujeron a todas la Trxs a valores similares de activación. Como conclusión, la cFBPasa discriminaría a las distintas Trxs por interacciones electrostáticas de largo alcance, que determinarían la diferente eficiencia de las Trxs en la modulación de la actividad de esta enzima. Sin embargo, las interacciones electrostáticas no influirían en la interacción entre la Trx y la malato deshidrogenasa, ya que todas las mutantes en la Pro35 resultaron menos eficientes en la acrivación que la Trx-m salvaje El conjunto de estos resultados no sólo establece la participación de las interacciones electrostáticas sino también revela la contribución de otros factores en la formación del complejo no covalente (Trx-m)reducida/(proteína sustrato)oxidada.

Abstract:
Thioredoxins (Trxs) are found in all biological systems. They have a very conserved sequence Cys-Gly-Pro—Cys whose thiols reduce a wide array of protein disulfide bridges. In chloroplasts of oxygenic photosynthetic organism reduction carried out by Trxs modulate protein activity, as this process promotes conformational changes in proteins. In this organelle two phylogenetically divergent Trxs have been charaCterized: Trx—m of prokaryotic origin, while Trx—fdisplays great homology with human Trx. In vitro. Trx—fis particularly efficient modulating fructose—1,6-bisfosfatase (cFBPase) activity, whereas Trx—m is inefficient. The availability of Trx three-dimensional structures from different species, their small size, great solubility and termostability made them an interesting model for studying their Structure. One of the objectives of this thesis was to characterize Trx-m structurally and functionally, and compare it with Escherichiacoli Trx. Prokaryotic Trx was taken as reference since it has been extensively studied and has high identity with Trx-m. On the other hand, although all Trxs share the same catalytic mechanism (thiol—disulfide exchange), they interact with different proteins. Non covalent interactions prior to the formation of the disulfide mixed would determine the specificity of Trx by different substrates. In this context, electrostatic interactions in Trx-m/cFBPase recognition were analyzed. For these purposes the coding sequence of Brassica napus (rapeseed) Trx-m was determined, and the recombinant protein was overexpressed and purified. The study of functional and structural aspects was followed by a site-directed mutagenesis strategy. In spite of the great structural homology shared by Trx—mand E. coli Trx, almost all the studies carried out showed that they possess physicochemical and functional differences. Trx—m was less efficient than E. coli Trx in reduction and isomerization of disulfide bridges. On the other hand, although Trxs are very stable, our studies showed that Trxm is still more stable than prokaryotic Trx. W17F mutant of Trx—m conserves tryptophans near the catalitic cysteines. This mutant established that in spite of the fact that Trx-m and E. coli Trx maintain the geometry of the active site, the environment of these tryptophans is distinct. Both wild type Trx-m and Wl7F mutant have a lower quantum yield than prokaryotic protein and the intrinsic fluorescence in function of pH shows a different behavior. On the other hand, W17F mutant allowed us to identify that triptophan 17 in Trx-m is the residue that contributes more to the fluorescence emission of oxidized protein and also contributes to UV dicroism circular. The role of Trpl7 in the protein aromatic nucleus was determined replacing Trpl7 with a small and aliphatic residue (W17A). This mutant modified not only the structural properties (intrinsic fluorescence and UV circular dicroism) but also the stability towards physical and chemical perturbants. and reducing capacity (insulin and cFBPase). Proline in position 35 is strictly conserved in Trxs-m and absent in all the other. Replacement of proline enlarged the sensibility of the molecule to chemical and physical perturbants. Incorporation of a positive charge in that position (P35K) favored the interaction with cFBPase. while a negative charge impaired it (P35E). These results are congruent with the great negative density of charges that surround the redox regulating cysteins of cFBPase and the major positive charges that surround the active site of Trx—f,the more efficient modulator. On the other hand, high salt concentration conducted to all Trxs to similar values of activation. As conclusion, cFBPase would discriminate distinct Trxs by long—range electrostatic interactions. which would determine the different efficiency of Trxs in modulating enzyme activity. However, interactions would not influence interaction among Trx and malate dehydrogenase, since all mutants in Pr035 resulted less efficient in activation that wild type Trx—m.These results establish the participation of electrostatic interactions but also reveal the contribution of other factors in the formation of the non covalent complex (Trx-m)reduced/(substrate protein) oxidized.

Doyle, Moira Evelina. "Algunos factores que determinan la climatología de la precipitación estival en Argentina subtropical" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El trabajo realizado en esta tesis tuvo como fin identificar mecanismos físicos que determinan la climatología de la precipitación y su variabilidad interanual en Argentina subtropical durante los meses de verano. La información proveniente de los pocos radiosondeos realizados sobre Sudamérica no era suficiente para llevar a cabo este estudio. En consecuencia se optó por buscar un conjunto de datos que utilizara esta información, pero que a su vez incorporara otros parámetros, como ser los perfiles de humedad medidos por los satélites. Se partió de un estudio comparativo entre dos bases de datos: agua precipitable entre superficie y 700 hPa proveniente del proyecto NVAP (NASA Water Vapor Project) y humedad específica en distintos niveles de presión pertenecientes al NCEP/NCAR Reanalysis Project. Se concluyó que dada la poca diferencia entre ambos conjuntos y siendo que el segundo conjunto permite extender el período de tiempo hasta 1958 se opta por trabajar con los datos del NCEP/NCAR Reanalysis Project. El área considerada abarca desde 10°N hasta 55°S y se extiende desde 90°O hasta 20°O, es decir cubre la myor parte del continente Sudamericano. Esta área seleccionada permite visualizar con mayor claridad los mecanismos de transporte de humedad que ocurren sobre el continente. A partir del estudio del transporte de vapor de agua se determina que existen dos fuentes que alimentan al continente: el océano Atlántico y la Selva Amazónica. También se pudo establecer que la corriente continental tropical en la cual se encuentra inmersa la corriente en chorro en capas bajas, es quien desempeña el papel principal en este transporte hacia latitudes subtropicales. No obstante, se muestra que estas latitudes se caracterizan por tener una alta variabilidad que no es explicada por los campos medios y a través de un análisis de componentes principales se muestra cuales son los distintos patrones que pueden modificar diariamente en estas latitudes el campo medio del transporte de humedad integrado entre superficie y 700 hPa. Esta variabilidad en el transporte de vapor de agua se ve reflejado en la distribución de la precipitación. Durante los meses de verano las precipitaciones en Argentina subtropical están altamente asociadas al ingreso de vapor desde el Amazonas, mientras que no hay una correlación significativa entre las lluvias y el aporte de humedad desde el Atlántico en esta región. Sin embargo, el vapor en este último caso, en ocasiones penetra hasta la cordillera y favorece las lluvias en la región andina. Las precipitaciones entre 15° - 20°S están asociadas en forma negativa al ingreso de vapor directamente del océano Atlántico en latitudes subtropicales, es decir precipita cuando la humedad viene desde el continente. Surge, por tanto, un comportamiento dipolar entre las precipitaciones en la región de la Zona de Convergencia del Atlántico Sur (ZCAS) y el SE de Sudamérica subtropical. Aplicando un análisis de correlación canónica se estudió la respuesta de la precipitación a otro factor, la temperatura de la superficie del mar (TSM). Durante los meses de verano se observa nuevamente el comportamiento dipolar en las lluvias: anomalías cálidas (frías) están asociadas a mayores (menores) lluvias en el sur de Brasil, Uruguay y el litoral Argentino, mientras que en la región de la ZCAS las precipitaciones son menores (mayores) que el valor medio. A fin de analizar en más detalle este comportamiento dipolar se seleccionaron los Eneros en que la TSM en la región al sur de la ZCAS se encontraba por encima de un desvío estándar y los años en que se encontraba un desvío estándar por debajo del valor medio. El análisis de los campos compuestos para los eventos cálidos y fríos muestra que, durante los eventos cálidos el transporte de humedad se dirige hacia el SE de Sudamérica subtropical debido al gradiente entre la intensa baja del NO argentino y la rama noroccidental del anticiclón del Atlántico que ingresa al continente. En niveles altos esta asociado a una Alta de Bolivia intensa que desplaza la corriente en chorro subtropical hacia el sur. Esta región esta asociada a un núcleo de actividad convectiva, observándose una segunda región sobre el Amazonas. Durante el evento frío el sistema de baja presión se extiende sobre el continente dirigiendo la corriente continental tropical en capas bajas hacia la ZCAS. La circulación debilitada del anticiclón boliviano permite la formación de una vaguada sobre el NE de Brasil. A su vez, la corriente en chorro subtropical se desplaza hacia el norte, ya que es allí donde se registran las mayores precipitaciones, como lo muestra la actividad convectiva. Este comportamiento dipolar no sólo se observa a nivel mensual durante el verano, sino que también se encontró al analizar dos casos en escala diaria. Debe considerarse que los resultados encontrados en esta tesis señalan un comportamiento cualitativo de la precipitación y la circulación estival sobre Argentina subtropical, pero cuantitativamente deberían tomarse con recaudo considerando que la base de datos utilizada no esta libre de errores. En este caso, como en otros trabajos, se pudo observar un error en la posición de los sistemas inmediatamente al este de los Andes, probablemente debido al modelo utilizado por los reanálisis, pero haria falta un estudio profundo que analice las falencias del conjunto de datos sobre la región.

Abstract:
The purpose of this thesis was to identify physical mechanisms, which determine rainfall climatology and its interannual variability in subtropical Argentina, particularly during summer months. The information provided by the few radiosondes over South America was not enough to fulfill this investigation. Consequently, a data set based on this information, but which incorporated other parameters, as humidity profiles from satellites was considered the best option. The first part consists of a comparative study between two data sets: Precipitable water between surface and 700 hPa belonging to NVAP (NASA Water Vapor Project) and specific humidity in different pressure levels resulting from the NCEP/NCAR Reanalysis Project. Due to the small difference between both sets, and considering that the second data set is available for a greater number of years, it was decided to work with the NCEP/NCAR Reanalysis Project data during the period 1958—1992. The area considered extends from lO°N to 55°S and between 90°W and 20°W; i.e. it covers most of the South American continent. This area permits a better visualization of the water vapor transport mechanisms that take place over the continent. Two water vapor sources are established from the analysis of the water vapor transport: the Atlantic Ocean and the Amazon Forest. The principal responsible of the transport from the Amazon towards southern latitudes, is identified as the continental tropical jet, a part of which is the low level jet. Furthermore, it is shown that subtropical latitudes are characterized by presenting a high variability, which is not completely explained by the mean fields. Through Principal Component Analysis the different patterns which daily modify the mean water vapor transport fields in subtropical latitudes are established. This variability in water vapor transport is reflected in the precipitation distribution over South America. During summer months rainfall in subtropical Argentina is highly associated to the entrance of water vapor from the Amazon, while there is no significant correlation between precipitation and advection from the Atlantic Ocean. Nevertheless, the entrance of water from the sea, on some occasions reaches the Andes favoring rainfall in this area. Between 15° and 20°S precipitation is negatively associated to water vapor advection from the ocean, i.e. it rains when humidity is transported from the continent. A dipolar structure in the rainfall pattern is evidenced in this behavior, between the South Atlantic Convergence Zone (SACZ) and SE South America. Canonical Correlation Analysis was applied to study the response of precipitation to the Atlantic sea surface temperature (SST). Once again, during summer, the dipolar structure is present in rainfall fields showing that: cold (warm) SST anomalies are associated to above (below) normal rainfall in southern Brazil, Uruguay and eastern Argentina, while the SACZ area evidences below (above) normal precipitation. In order to study in more detail this dipolar structure, Januarys with SST exceeding one standard deviation and with values colder than one standard deviation were selected. The composite fields, for the denominated warm and cold events, show that, during warm events water vapor transport is directed towards SE South America by the pressure gradient between the low pressure system in NW Argentina and the NW branch of the Atlantic anticyclone entering the continent. In higher levels, an intense Bolivian High is observed, which displaces the subtropical jet southwards. Two centers of convective activity occur during the warm events, one over SE South America and the other over the Amazon Basin. During cold events the low pressure system extends over the continent conducting the continental tropical jet towards the SACZ. A weakened circulation in the Bolivian High is continued into a trough over NE Brazil, while the subtropical jet stream moves up north, towards the precipitation area, as shown by the convective activity. This dipolar behavior was also depicted in the analysis of two daily events. It must be considered that the results presented in this thesis identify a qualitative behavior of summer rainfall and atmospheric circulation over subtropical Argentina, but, quantitatively these results must be look at with caution considering that the data base used is not free of error. In this case, as in other papers, an error can be observed in the position of systems immediately to the east of the Andes, probably due to the model used by the reanalysis, but a complete study of the errors in this data base, over the region is still missing.

De Nápoli, Pablo Luis. "Soluciones de ecuaciones no lineales del tipo p-Laplaciano." (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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De Lorenzo, Mariana S.. "Acción del antiestrógeno Nafoxidina y del inhibidor tisular de metaloproteinasas-1 (TIMP-1) en la angiogénesis tumoral" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La terapia antiangiogénica se basa en estrategias moleculares que intentan bloquear la neovascularización tumoral y así detener la progresión de la masa neoplásica. Las células endoteliales suelen responder al estímulo estrogénico. La angiogénesis implica la proliferación del endotelio junto a la remodelación de la matriz extracelular, donde participan, las metaloproteinasas (MMPs) y sus inhibidores (TIMPs). En el presente trabajo se investigaron los posibles mecanismos antiangiogénicos del potente antiestrógeno nafoxidina y el intrincado papel del TIMP-1 en la vascularización y progrésión tumoral. Se encontró que el tratamiento in vitro de células endoteliales humanas de vena umbilical (HUVEC) con dosis no citotóxicas de nafoxidina disminuye de manera dosis-dependiente la proliferación. Nafoxidina redujo también la adhesión, la capacidad de extensión sobre el sustrato y la migración de las células endoteliales, e indujo un aumento en la activación de la MMP-2 y en la secreción de TIMP-1. Además, inhibió significativamente la invasión y la formación de cordones endoteliales sobre Matrigel. La acción antiangiogénica de nafoxidina podría asociarse a acciones indirectas, mediadas a través del aumento del TIMP-1, como también a efectos directos del antiestrógeno sobre las células HUVEC. Los cotratamientos in vitro con nafoxidina y el éster de forbol PMA indicaron que la acción antiangiogénica podría estar relacionada con la inhibición de vías de señalización intracelular dependientes de la proteína quinasa C. El cotratamiento con el inhibidor de fosfodiesterasas IBMX y el derivado de CAMP dbcAMP sugirieron la participación de múltiples vías de señales en la acción antiangiogénica de nafoxidina. Otros ensayos in vitro con el inhibidor de fosfolipasa D n-butanol, el ionósforo A23187 y el bloqueante de canales de calcio verapamilo indicaron la importancia de estas vías de señales en la formación de capilares endoteliales. Finalmente, se exploraron in vivo los efectos de nafoxidina y TIMP-1, empleando un modelo singénico de carcinoma mamario en ratones BALB/c y un melanoma murino inoculado en hídridos C57BL/6j-CBA transgénicos que sobrexpresan TIMP-1 humano en hígado y lo vuelcan a la circulación. Los datos obtenidos en animales ratifican La complejidad de los mecanismos regulatorios que operan in vivo durante la vascularización tumoral y diseminación metastásica. Este trabajo aporta elementos útiles para el futuro diseño de ensayos clínicos con nuevos agentes antiangiogénicos para el tratamiento del cáncer.

Abstract:
Antiangiogenic therapies use molecular strategies to block tumor neovascularization and arrest neoplasic progression. Endothelial cells respond to estrogenic stimulation. Angiogenesis involves endothelial cell proliferatíon and extracellular matrix remodeling, in which take part metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs). In this present study it was investigated the potential antiangiogenic mechanisms of the antiestrogen nafoxidine and the intrincate role of TIMP-1 in vascularization and tumor progression. It was found that teatment in vitro with non citotoxic doses on human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) decreased endothelial growth in a dose manner dependent. Nafoxidine reduced adhesion, spreading and migration of endothelial cells and induced an increment in MMP-2 activation and TIMP-1 secretion. Invasion and endothelial tube formation on Matrigel were inhibited. Antiangiogenic effect of nafoxidine could be associate with indirect actions, mediated by TIMP-1 increment, or also with direct effects of the antiestrogen on HUVEC. In vitro cotreatments with nafoxidine and phorbol ester PMA indicated that antiangiogenic action could be related with inhibition of PKC intracellular signalling pathways. Cotratments with phosphodiesterases inhibitor IBMX and cAMP derivative dbcAMP suggested the involvement of multiple signalling pathways. Other in vitro assays with phospholipase D inhibitor n-butanol, ionosphore A23l87 and L-type Ca2+ channels blocker veraparnil indicated that their pathways are important in endothelial tube formation. Finally, it was investigated the in vivo effects of nafoxidine and TIMP-1, using a murine mammary carcinoma in BALB/c mice and a murine melanoma inoculated in hybrid C57BL/6j-CBA transgenic mice that overexpress human TIMP-1 in liver and overturn it at circulation. The results in animals ratify the complexity of regulating mechanisms that act in vivo during tumor vascularization and metastatic dissemination. The present study supplies useful elements to future clinic trials designs with new antiangiogenic agents for cancer treatment.

de la Torre, Fernando Román. "Estudio integrado de la contaminación acuática mediante bioensayos y parámetros fisiológicos y bioquímicos indicadores de estrés ambiental" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo estuvo orientado al estudio experimental de algunos de los aspectos de la Ecotoxicologia regional relacionados con un cuerpo de agua periurbano (río Reconquista). Con el propósito de evaluar la calidad toxicológica del mismo se diseñaron y aplicaron técnicas de bioensayos agudos y prolongados, de laboratorio y de campo, mediante métodos originales con organismos test nativos (alevinos, juveniles y adultos de Cnesterodon decemmacularus y larvas premetamórficas de Bufo arenarum), y con un teleósteo exótico (juveníles de Cyprinus carpio). Se demostró que las especies nativas son aptas para su utilización en diversos bioensayos de toxicidad brindando resultados confiables; por ello, podrían ser incorporados a la batería de tests de evaluación de calidad ecotoxicológica de cuerpos de agua continentales. En los organismos centinela se evaluaron los efectos tóxicos (letalidad y modificación en los parámetros biomarcadores bioquímicos y fisiológicos e indices somáticos) luego de su exposición a distintos medios (agua del río, agua potable de diferente dureza y soluciones conteniendo cadmio como tóxico de referencia); las respuestas se correlacionaron con los parámetros fisicos y químicos determinados en forma contemporánea. Además se estudió el grado de reversibilidad de los cambios producidos en los biomarcadores; esta información resultó valiosa como complemento para conocer la intensidad del daño sufrido por los peces. Los resultados obtenidos permitieron establecer diferencias de sensibilidad entre las especies y entre los distintos estadios de las especies nativas. Los parámetros bioquímicos y fisiológicos fueron seleccionados como biomarcadores del funcionalismo de los sistemas de osmoregulación, metabolismo energético y nervioso evaluados en preparaciones de branquias, hígado y cerebro; así mismo se estudió el impacto sobre índices somáticos y contenidos tisulares de proteinas. Un considerable número de las técnicas bioquímicas y estadisticas utilizadas fueron desarrolladas especialmente para su aplicación en este estudio. En su conjunto, los resultados obtenidos brindaron elementos objetivos para caracterizar y diferenciar los sitios muestreados del río sobre la base de la calidad ecotoxicológica del agua. Se detemiinó una línea de base para los parámetros estudiados teniendo en cuenta su variabilidad temporal. También se aplicaron técnicas que permitieron abordar el análisis integrado de los resultados con un nivel de mayor complejidad, evaluando con de forma mas precisa las diferencias en la sensibilidad de los teleósteos utilizados; todo lo anterior se pudo expresar mediante un Indice integrado descriptivo de su estado de salud general. Por último cabe señalar que fue la primera vez que se estudió la calidad toxicológica del agua del rio Reconquista en toda su extensión mediante un programa de biomonitoreo prolongado con el enfoque integrador de los parámetros fisicoquimicos con las respuestas biológicas asociadas de los organismos test mediante índices de calidad de agua e índices biológicos.

Abstract:
This research work involved the experimental study of some features of the regional Ecotoxicology related to a periurban water body (Reconquista River). In order to evaluate its toxicological quality we developed and applied techniques for acute and prolonged bioassays at laboratory and in situ, which involved original procedures with native test organisms (larvae, juveniles and adults of Cnesterodon decemmaculatus and premetamorphic larvae of Bufo arenarum) and an exotic teleost (juveniles of Cyprinus carpio). These experiments demonstrated that native species are adequate to be used in several toxicity bioassays because they provided reliable results, in this way, they could be integrated to the battery of tests for assessing the ecotoxicological quality of continental water bodies. We evaluated the toxic effects (such as lethality, modificatim of the physiological and biochemical biomarkers parameters and somatic index) in the sentinel organisms after their exposition to different media (river water, tap water with different hardness and solutions containing cadmiun as a reference toxicant); these responses were correlated with the chemical and physical parameters measured contemporaneously. Besides, we studied the reversibility of the biomarker changes and these results were very important to recognize the degree of damage the fishes supported. With the results obtained here we were able to establish different levels of sensitivity levels between species and between stages of the native species. The biochemical and physiological parameters measured in liver, gills and brain homogenates were selected as biomarkers of the functionalism of the osmoregulatory, energetic and nervous systems; besides, the impact on somatic index and protein content were studied. Most of the used biochemical and statistical techniques were particularly developed for this work. The results obtained here provided unbiased elements to characterise and discriminate the sampling sites based on in the toxicological river water quality. A baseline for the studied parameters was determined considering its temporary variability. The used techniques also allowed us to carry out the integrated analysis of the results with a higher level of complexity, assessing with more precision the teleost species sensitivity differences; the aforementioned was expressed by an integrated index descriptive of their general status of health. Finally, this is the first time that the toxicological quality of Reconquista River water was studied in all its length following a prolonged biomonitoring program with an integrated view of the physicochemical parameters and the associated biological responses of the test organisms by both water quality and biological indexes.

de Cabo, Laura Isabel. "Dinámica de nutrientes en el valle aluvial del Río Paraná Inferior" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El dinamismo del sistema río-valle aluvial del Paraná Inferior se basa en el importante intercambio de agua producto de las crecientes, mareas y vientos; resultando de interés estudiar la influencia recíproca entre los procesos limnológicos del río y del valle aluvial y cuantificar las relaciones entre las mencionadas variables y el régimen hídrico. Los sólidos suspendidos del río son retenidos en el valle aluvial. La reserva de nutrientes más importante del sistema está en los sedimentos superficiales del pajonal, debido al aporte del río y a la acumulación de detritus de macrófitas enriquecidos en N. Los sólidos suspendidos, fosfatos y calcio en el Paraná Inferior estuvieron asociados positivamente al caudal del Bermejo. La equivalencia de iones conservativos entre el río y los humedales denotan un intercambio continuo de agua. Las formas principales de NI son nitratos en el río y amonio en el valle aluvial. Los pulsos de inundación del río producen notorios aportes de nitratos al valle, pero debido a la denitrificación, y a la fijación por las macrófitas y los detritus las concentraciones de nitratos en el valle son muy bajas o no detectables. Las bajas concentraciones de oxigeno disuelto determinan un flujo neto de NI desde el agua hacia los sedimentos e inversamente uno de PRS desde los sedimentos hacia el agua resultando en las bajas relaciones NI/PRS observadas en el valle aluvial. Las bajas relaciones N/P en las macrófitas y las experiencias de fertilización demuestran la limitación por N, consistente con la disminución en la concentración de amonio en el agua intersticial, al final de la estación de crecimiento. Los procesos descriptos se podrían extender a todo el valle aluvial del Paraná. Las crecientes del Paraná determinan un importante aporte de nitratos y ocurren al finalizar la estación de crecimiento, compensando parcialmente el déficit de N. Cambios en el hidrograma anual llevarían a un desacople temporal en la interacción río-valle aluvial.

Abstract:
The river-floodplain interaction is highly dynamic in the Lower Paraná system due to the important exchange of water in relation to floods, tides and wind action. It is of great interest to study the mutual influence of limnological processes occurring at the river itself and within the floodplain, and its relation to the hydrological regime. The floodplain retained riverine suspended matter. The main nutrient pool of the system consist of the superficial sediment layers representing the sedimentary riverine contribution plus the decomposing macrophyte litter enriched with N. Suspended matter, SRP and calcium in the Lower Paraná river correlated with the Bermejo River discharge. The equivalence of the conservative ions between the river and the floodplain marshes points the important water exchange between them. Nitrate is the main inorganic nitrogen component in the river while ammonia represent the main component in the marshes. Water exchange result in high nitrate inputs to the floodplain. However, because denitrification and detritus and macrophyte uptake, nitrate is depleted within the floodplain. Low oxygen concentration determines a strong inorganic nitrogen flux from the water to the sediments and inversely an SRP flux from the sediments to the water resulting in a low inorganic nitrogen to SRP ratio within the floodplain. Low N/P ratios within the macrophyte tissue and fertilization experiments shows N limitation within the floodplain, consistent with the ammonia depletion observed in the pore water at the end of the macrophyte growing season. Main processes described are prone to occurred in the whole floodplain extension. The Paraná river floods at the end of the growing period and therefore attenuate the floodplain N deficit. Changes in the hydrologic regime would cause deep changes in the river-floodplains interaction.

De Brasi, Carlos Daniel. "Marcadores genéticos ligados al gen del factor VIII de coagulación : Su utilidad diagnóstica en hemofilia y en el estudio del mecanismo molecular de la recombinación homóloga en meiosis humanas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La hemofiliaA (HA)es una enfermedad hemorrágica hereditaria, ligada al sexo, causada por deficiencia del factor VIIIde coagulación (FVIII). La ruta preferida para la provisión de datos para diagnóstico molecular es la detección directa de mutaciones. Entre las mutaciones que afectan al gen del FVIII, la inversión del intrón 22 (inv22) constituye la causa de casi la mitad de las HA severas (SHA). Mediante análisis de Southern blot fueron estudiadas 47 familias Argentinas con SHA. En cercano acuerdo a lo reportado series internacionales, 19 de ellas (40%) resultaron informativas para la Inv22 y pudo proveerse diagnóstico molecular por el método directo. Dentro de éstas, 14 (79%) resultaron Inv22 tipo distal y las restantes 5 (21%), proximal. No fueron encontradas significativas asociaciones entre la presencia o no de la Inv22 en SHA, y el origen de la enfermedad (esporádica o familiar), ni tampoco con la propensión o no a desarrollar anticuerpo inhibidor neutralizante contra el FVIII terapéutico. El camino alternativo para el diagnóstico es por vía indirecta usando polimorfismos ligados a la enfermedad. Entre los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) ubicados dentro del gen del FVIII, el marcador Xbal A del intrón 22 a pesar de proveer una alta informatividad en los distintos ganos étnicos analizados, fue casi excluido de la rutina diagnóstica por la lentitud y laboriosidad de su detección. Aquí se describen dos métodos rápidos, no-radioactivos, basados en PCR de larga distancia (LDPCR), para genotipificación del RFLP Xbal A. Los amplimeros de 6,6 y 6,9 kb incluyen el sitio polimórfico y un sitio constante de Xbal que provee control de digestión. La especificidad del método fue desafiada en experimentos a ciegas de muestras previamente genotipificadas por Southern blot, obteniéndose una perfecta correlación entre ambos métodos. Mediante este método, 53 cromosomas X de la población Argentina general fueron genotipificados para Xbal A, lo que permitió proyectar una informatividad de aproximadamente el 47%. Los estudios de asociaciones alélicas entre Xbal A (X) y el polimorfismo Bc/l (B) del intrón 18 del gen del FVIII, determinaron un alto, pero no-completo desequilibrio de ligamiento entre los marcadores, proyectando una informatividad combinada (X+B) del 55%. A 737 bp rio abajo del RFLP Xbal, fue localizado y caracterizado un nuevo polimorfismo bialélico, de cambio de nucleótido que afecta el sitio de reconocimiento de la enzima Mspl (CCg/aG). La genotipificación especifica del RFLP Mspl A se realiza utilizando la LD PCR específica para Xbal A como primera vuelta. seguida por una PCR anidada de 176 bp que incluye al sitio polimórfico y uno constante de Mspl para proveer control de digestión. Su análisis en las poblaciones nomiales Argentina y Británica permitió estimar una heterocigocidad de 49 y 46%, respectivamente. A pesar de su proximidad física y su desequilibrio de ligamiento, X y M proyectan una informatividad conjunta del 62% para población Argentina y 59% para la Británica. Ambos RFLPs (X y M) están incluídos en una región de 9,5 kb dentro del intrón 22 del gen del FVIII(int22h-1), que se encuentra repetida por lo menos 2 veces fuera del gen del FVIII, también sobre Xq28 (int22h-2 y -3). Para investigar los sitios correspondientes de X y M sobre los homólogos extragénicos fueron diseñados abordajes específicos similares a aquellos usados para los sitios intragénicos. Los sitios Mspl extragénicos (B y C) resultaron polimórficos en población Argentina y Británica aunque con frecuencias del alelo mucho menores a las intragénicas. La Inv22 es originada por un evento de entrecruzamiento recíproco intracromosómico por recombinación homóloga entre las secuencias int22h descriptas resultando en la interrupción inactivante del gen del FVIII en su intrón 22. Debido a (1) que los marcadores X y M ubicados dentro de int22h permiten mediante sus frecuencias alélicas diferenciar las copias intra de las extragénicas y (2) que en el cromosoma X de varones de la población normal podemos estimar el estado de estos marcadores antes del evento y en los hemofílicos con la Inv22 podemos analizar el estado de estos marcadores después del evento; se diseño una estrategia para recabar datos del mecanismo molecular que origina la Inv22 como modelo de entrecruzamiento recíproco en meiosis humanas. La aplicación del método planteando nueve hipótesis de posibles intermediarios moleculares de la Inv22 asociadas a la predicción de resultados numéricos utilizando las estimaciones sobre población de varones normales y su comparación con los datos obtenidos en el grupo de afectados con la Inv22, permitió determinar que el evento molecular de recombinación meiótica está acoplado a la conversión génica del marcador Xbal, con la secuencia extragénica como dadora de la información. El mismo análisis sobre Mspl si bien proyecta resultados similares, no permite determinado con significación estadística. El aumento de la población hemofílica para la obtención de resultados más precisos además de los estudios de mapeo de puntos calientes para rupturas meióticas de doble cadena dentro de las secuencias int22h permitirá la elucidación específica del mecanismo de la Inv22 como modelo de recombinación homóloga en meiosis humanas.

Abstract:
Haemophilia A (HA) is a sex linked inherited haemorragic disorder characterised by deficiency in the coagulation factor VIII (FVIII). Direct mutation detection in the gene is the best choice to obtain data for molecular diagnosis. Intron 22 FVIII gene inversion (Inv22) is involved in almost half of severe HA (SHA). It has been studied by Southern blot 47 Argentinean families with SHA and found inversions in 19 (40%), 15 (32%) with distal and 4 (8%) with proximal pattern. In this group of Inv22 informative families definitive information for molecular diagnosis could be provided. No significant correlation between the inheritance of the disease (either familiar or sporadic haemophilia) and the presence of inversions was found. The development of therapeutic-FVIII inhibitor in inv22-positive SHA-affected families was found increased but not significantly. The alternative route to obtain molecular information for genetic counselling is gene tracking using DNA polymorphisms. Among the restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) in the FVIII gene, the Xbal A (intron 22) (X) despite its high informativity in almost all ethnic groups analysed, has not been frequently used in the routine because its reliable detection is tedious and labour-intensive. Two rapid, non-radioactive, long distance PCR-based methods (LD PCR) to genotype the X RFLP are described. The amplimers of 6.6 and 6.9 kb long include both the polymorphic and a constant Xbal site, which provides a digestion control. The specificity of the method was challenged by a blind experiment with genomic DNA samples previously genotyped using Southern blot analysis: a perfect correlation was obtained using both approaches. Fifty-three alleles from the Argentinean normal population were Xbal A genotyped. The results predict an informativity of 47%. Despite the high degree of allelic associations found between X and Bc/l (intron 18) (B), they predicts a combined heterozygocity (X+B) of 55%. A new polymorphism in the human FVIII gene has been localised and characterised. It is a bi-allelic single nucleotide polymorphism which affects an Mspl site (CCg/aG)located 737 bp downstream frorn the Xbal marker. The specific genotyping of the so termed Mspl A RFLP (M) requires a nested PCR approach using the X-specific LD PCR as first round and a 176 bp-long second round which includes both the polymorphic and a constant control digestion Mspl site. M genotyping from the Argentinean and the British normal population estimate an informativityof 49 and 46%, respectively. Despite their close proximity, the X and M polymorphisms are not in complete linkage disequilibnum: haplotype analysis from Argentinean and British population predict a combined informativity (X+M)of 62 and 59%, respectively. The markers X and Mare located in intron 22 of the FVIII gene within a 9.5 kb int22h-1segment. Int22h is duplicated at least twice extragenically at Xq28. Both extragenic copies (int22h-2 and —3) are also polymorphic with respect to X. There have been designed LDPCR-based methods to specifically genotype these extragenic X and M sites. The extragenic sites of both X and M resulted also polymorphic in Argentinean and British normal populations but with much lower frequencies of the allele than those obtained frorn int22h-1. Inv22 originates by an intrachromosomic crossing over due to homologous recombination between int22h-1 and int22h-2 or —3. The molecular inversion interrupts the normal sequence of the intron 22 of the FVIII gene causing SHA. Due to (1) X and M enable the discrimination of the intra from the extragenic copies of int22h by means of differences in their allelic frequencies, and (2) that there can be estimated these frequencies before the event in males from the normal population and the frequencies after the event in the Inv22-SHA population; it was possible to design an genetic testing strategy to address the molecular mechanism of the Inv22 as a model for homologous recombination in human meiosis. The inspection of the literature prompts the design of 9 possible hypothesis of the intermediaries of the mechanism involved. Each hypothesis was associated with numerical values calculated from the parameters estimated in the normal populations, to predict the results to be obtained from the Inv22-affected population. This analysis allowed us to conclude that the molecular inversion is coupled to the gene conversion from a DNA segment including the Xbal extragenic site to its intragenic homologue. The results obtained using Mspl, although similar than those using Xbal, are not statistically significant. The increase in the number of the haemophilic population in order to gain precision in the test and the investigation of meiotic double-strand-breaks hot spots within int22h would allow further insights in the molecular mechanism of the Inv22 as a model for homologous recombination in human meiosis.

Díaz Villanueva, Verónica. "Efecto del pastoreo sobre la estructura y dinámica de la comunidad perifítica de arroyos andinos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo se analizó la relación de herbivoría en el bentos de arroyos andino-patagónicos. En estos sistemas lóticos, el perifiton es el principal responsable del aporte de materia orgánica autóctona. El objetivo de este trabajo fue determinar cómo es afectado el perifiton en ambientes lóticos ritrónicos como consecuencia del pastoreo que realizan los macroinvertebrados bentónicos. Para ello se investigó la estructura del perifiton así como también la de los herbivoros en tres arroyos andinos (Ñireco, Casa de Piedra y Gutiérrez) con distintas características en cuanto al orden, sombreado y pendiente. En todos ellos, las diatomeas (Bacillariophyceae) fueron las algas perifiticas más abundantes, contribuyendo con más del 80% del total de las especies algales. El tramo superior del arroyo Ñireco es un ambiente de montaña; está densamente cubierto por bosques caducífolios de Nothofagus pumilio (P.& E.) Krasser (lenga) y sostiene una alta proporción de insectos fragmentadores de materia orgánica particulada gruesa. En cambio, en el tramo inferior del arroyo Casa de Piedra y en el arroyo Gutiérrez, ambos ambientes pedemontanos, abundan los macroinvertebrados herbivoros, tanto insectos como moluscos. El efecto de la herbivoría sobre el perifiton fue analizado en los dos tipos de ambientes: de montaña y pedemontanos. Con tal fin, se llevaron a cabo estudios que incluyeron muestreos del perifiton y de los macroinvertebrados, conjuntamente con estudios morfológicos de las piezas bucales y de dieta. En primer lugar se determinó la dieta de larvas del plecóptero Notoperla archiplatae (Illies), abundantes en la sección superior del arroyo Ñireco. Se realizaron estudios de las piezas bucales, del contenido de los tubos digestivos y de selectividad de los distintos ítems alimentarios. Se determinó que era un herbívoro, pues su dieta estaba constituida principalmente por diatomeas (>50%). Además, se encontró que las diatomeas con hábito arborescente poseían una mayor susceptibilidad a ser ingeridas. Luego se realizó un experimento in situ que permitió calcular sus tasas de remoción, tasa de crecimiento y eficiencia de conversión de alimento. En el mismo experimento se estudió su efecto sobre la biomasa y composición específica del perifiton. N. archiplatae redujo la biomasa perifítica significativamente, y produjo cambios en las frecuencias relativas de las especies más abundantes. La diatomea Melosira varians Ag. fue la especie más negativamente afectada mientras que la abundancia de Achnanthes minutissima Kütz. se incrementó como efecto del pastoreo, con lo cual se generó un perifiton ralo y altamente autotrófico. En segundo lugar se analizó el efecto de pastoreo por parte de larvas del efemeróptero Meridialaris chiloeensis (Demoulin) y del caracol Chilína dombeiana (Bruguiere), siendo ambas especies abundantes en el arroyo Gutiérrez. Se realizaron observaciones de sus piezas bucales y de los mecanismos que utilizan para adquirir el alimento. También se llevaron a cabo experimentos en canales artificiales utilizando clausuras para determinar el efecto de cada especie sobre la biomasa y composición específica del perifiton. Ambos herbívoros redujeron la biomasa perifitica significativamente pero no modificaron sustancialmente las frecuencias relativas de las especies algales. Por lo tanto, se estableció que tanto la rádula del caracol como la batería de cerdas presentes en las piezas bucales del efemeróptero pueden actuar como estructuras raspadoras del perifiton. Por otro lado, se calcularon las tasas de remoción algal para ambos herbívoros, determinando que el efecto individual del caracol es mayor que el del efemeróptero pero que por unidad de biomasa Meridíalaris es capaz de remover mayor cantidad de perifiton. Por lo tanto, dado que la biomasa poblacional del efemeróptero puede superar a la del caracol en el ambiente, la reducción de la biomasa perifitica puede ser mayor por efecto de estos herbívoros. Asimismo se observaron distintos patrones en cuanto al uso del sustrato donde pastorean. El insecto posee un comportamiento altamente dependiente del refugio, permaneciendo debajo del sustrato en horas del día. Por el contrario, el caracol permanece expuesto tanto en el día como en la noche. Estas diferencias se tradujeron en una actividad de pastoreo diferente; restringida a los bordes del sustrato en Meridialaris y a toda la superficie del mismo en el caso del caracol. Se postuló que estas diferencias posibilitarían la coexistencia de estos dos herbívoros que utilizan el mismo recurso en el mismo hábitat. Por otra parte, se evaluó el efecto de las larvas de M. chíloeensís variando las densidades del herbívoro y el tiempo de colonización del perifiton previo a la introducción del pastoreador. Como resultado, se determinó que M. chíloeensis puede alimentarse del perifiton siempre y cuando la biomasa sea mayor a 0.3 g m-2. El efecto sobre la composición específica es leve ya que este herbívoro es capaz de acceder a todas las formas de crecimiento algales presentes en el perifiton ofrecido. En cuanto al efecto sobre la sucesión algal, se planteó la hipótesis de que existe una aceleración debido a que se observó un aumento en la frecuencia relativa de especies más típicas de estadios avanzados, como Nitzschia palea (Kütz.) W. Sm. Por último, se llevó a cabo un experimento con Meridialaris, con el objetivo de analizar la digestibilidad algal a partir de la observación del contenido de las heces. La proporción de células vivas es significativamente menor en las heces que en el perifiton, lo cual indica que Meridialaris posee una alta capacidad de digerir las algas que consume (70%). Sin embargo, se hallaron diferencias en la digestibilidad de las especies algales, que conllevarían a cambios en la composición de la comunidad hacia especies que logran atravesar con vida el tubo digestivo de los pastoreadores. A pesar de que los herbívoros resultaron más abundantes en arroyos pedemontanos que en los de cabecera, en ambos tipos de ambientes desempeñan un papel importante en el control de la biomasa perifitica y pueden influir en la composición específica dominante.

Abstract:
Herbivore-periphyton relationship was analysed in the benthos community of three Andean-Patagonian streams. In these lotic systems, periphyton is the main responsible for the autochthonous organic matter input. The main goal of this work was to determine the way in which periphyton is affected by grazing of benthic macroinvertebrates in these rithronic environments. As a first step, the structure of the periphyton and macroinvertebrate community was investigated in three Andean streams (Ñireco, Casa de Piedra and Gutiérrez), with differences in order, canopy and slope. Diatoms (Bacillariophyceae) were the most abundant periphytic algae in all the streams, constituting more than 80% of the total algal species. The upper section of Ñireco stream is a typical mountain environment; it is densely covered by a deciduous forest of Nothofagus pumilio (P.& E.) Krasser (lenga) and bears a high proportion of Shredder insects. In contrast, Casa de Piedra and Gutiérrez streams are both piedmont environments in which herbivores, in particular insects and molluscs, are abundant. Herbivory on periphyton was studied in a gradient of altitude, from the mountain to the piedmont. Periphyton and macroinvertebrates were surveyed concurrently, and herbivores’ mouthpart morphology and gut content were examined. The feeding habit of Notoperla archiplatae (Illies) larvae, an abundant plecopteran from the upper section of Ñireco stream, was determined combining direct observations and selectivity measurements on different food items. N. archiplatae was found to be an herbivore, since its diet consisted mainly of diatoms (>50%), specially those with an arborescent habit. Field experimental work was performed in order to determine the algae removal rates, growth rates and food conversion efficiency of N. archiplatae. In the same experiment, I analysed the effect of this grazer on biomass and species composition of periphyton. Notoperla reduced significantly periphytic biomass and changed the relative abundance of the dominant species. Melosira varians Ag. was the most negatively affected species while Achnanthes minutissima Kütz, seemed to have been favoured. Notoperla’s grazing led to a thin and highly autotrophic periphyton. Grazing patterns of the mayfly Meridialaris chiloeensis (Demoulin) and the snail Chilina dombeiana (Bruguiere), both abundant species from Gutiérrez stream, were analysed through their mouthpart morphology and feeding mechanisms. I performed a series of experiments to determine the effects of each species on periphytic biomass and specific composition. Accordingly, field experiments were carried out in artificial channels manipulating presence and absence of the macroinvertebrates. Both herbivores reduced algal biomass significantly but species relative abundances were not modified. I found that the radula of the snail and the sets of setae present in the mouthparts of the mayfly act similarly as scraping structures. The removal rates measurement showed that the individual effect of the snail is greater than that of the mayfly. However, in terms of biomass, Meridialaris is able to remove a higher periphytic biomass. In natural environments (Gutiérrez Stream) mayfly population biomass is higher than that of the snail and thus, the greatest reduction of periphytic biomass may be attributed to mayfly grazing. Besides, I observed a differential use of the substrate by M. chiloeensis and Ch. dombeiana. The mayfly sought refuge under the substrate during daytime, while the snail remained on the substrate during day and night. These different behaviours, probably responses to differential vulnerability to visual predators, are related with the particular grazing effect of each herbivore. In addition, I studied the effect of different densities of the grazer M. chiloeensis on periphyton communities of different age. Meridialaris fed on periphyton depressing algal biomass up to 0.3 g m-2 but remarkably, its effect on the species composition was negligible since all algal growth habits were consumed. Algal succession was accelerated resulting in an increment on the relative abundance of late-stage species like Nitzschia palea (Kütz.) W. Sm. Algal digestibility was analysed through examination of Meridialaris faeces. The mayfly showed a high capacity (70%) in digesting the algae consumed, however some species were digested better than other. These differences in species digestibility may drive the species composition of the periphyton towards a higher occurrence of the most resistant species. Although in this study herbivores were found to be more abundant in piedmont streams than in headwaters, they appear to control the periphyton biomass in both type of environments.

D’Andrea, Carlos Antonio. "Fórmulas explícitas para el cálculo de resultantes y aplicaciones" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Presentamos fórmulas para calcular resultantes ralas como cociente de dos determinantes, que extienden a las fórmulas de Macaulay clásicas. En el caso homogéneo, presentamos fórmulas a la Macaulay más compactas. Mostramos además que estas fórmulas explicitan el único morfismo no trivial de un complejo cuyo determinante es la resultante. Además, se exploran las extensiones a resultantes ralas en dos variables. Como aplicaciones, se obtiene una familia de operadores de proyección aplicando perturbaciones a resultantes ralas, que proveen de un método general para calcular todas las raíces aisladas de sistemas polinomiales, aún ante la presencia de componentes de dimensión positiva. También, se estudia la validez de la implicitación de superficies racionales por el método de superficies móviles, mostrando relaciones entre resultantes y algunos determinantes que se usan en la formulación del método, y consiguiendo extenderlo al case de superficies no propiamente parametrizadas, en ausencia de puntos base.

Abstract:
We present formulas for computing sparse resultants as a quotient of two determinants, which extend the classical Macaulay formulas. In the homogeneous case, we present compact Macaulay style formulas. We show that these latter make explicit the unique non trivial morphism of a complex whose determinant equals the resultant. We also explore the extensions of these formulas to bivariate sparse resultants. As applications, we obtain a family of projection operators applying perturbations on sparse resultants, which yield a general method for computing all isolated roots of polynomial systems, even in the presence of excess components or other degenerate inputs. In addition, we study the validity of the implicitization of rational surfaces by the method of moving surfaces, give some relationships among resultants and some determinants arising in the formulation of that method, and extend it to the case of not properly parametrised surfaces without base points.

D’Alessio, Cecilia. "Rol de los oligosacáridos monoglucosilados en el plegamiento de glicoproteínas en Schizosacchatomyces pombe" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El retículo endoplasmático (RE) es el compartimiento de varias modificación post-traduccionales y plegamiento de proteínas destinadas a secreción, a membrana plasmática o a organelas del sistema endocítico. Una de las modificaciones post-traduccionales mas frecuentes, la N-glicosilación, está relacionada con el plegamiento de las proteínas ya que sin la adición de N-glicanos, numerosas especies proteicas son incapaces de alcanzar su conformación nativa. Los intermediarios de plegamiento, las proteínas oligoméricas no totalmente ensambladas, las proteínas mal plegadas y los agregados son selectivamente retenidos en el RE. El transporte hacia el aparato de Golgi ocurre solamente cuando las proteínas se han plegado y ensamblado correctamente. El mecanismo que asegura la funcional de las proteínas que salen del RE, ha sido denominado “control de calidad del plegamiento de glicoproteínas". En la mayoría de los eucariotas la N-glicosilación comienza con la transferencia de un oligosacárido de composición Glc3Man9GlcNAc2 desde un intermediario lipídico (dolicol difosfato) a la secuencia Asn-X-Ser/Thr de proteínas nacientes en el RE. Las tres glucosas terminales del oligosacárido transferido son inmediatamente removidas pordos glucosidasas del RE, I y II (GI y GII). Parodi y colaboradores demostraron la existencia de una reglucosilación transitoria de los N-oligosacáridos libres de glucosa dentro del RE por la acción de la enzima luminal UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa (GT). Esta enzima glucosila glicoproteínas, en ensayos libres de células, sólo si éstas han sido previamente desnaturalizadas. Por esta característica especial se ha propuesto a la GT como posible sensor del estado conformacional de las glicoproteínas en el RE. Los oligosacáridos monoglucosilados, que se generan por la deglucosilación parcial por la GI (encargada de remover la glucosa más externa) y GII (encargada de remover las dos glucosas más internas) y por la actividad de la GT, permiten la interacción de las glicoproteínas con dos lectinas del RE, la calreticulina (CRT) y/o calnexina (CNX). Esta interacción facilita el plegamiento de las glicoproteínas, evita la formación de agregados, permite la interacción de las glicoproteínas unidas a CNX con otras chaperonas del RE y constituye un mecanismo para retener en el RE las estructuras proteicas mal plegadas. En la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe existen todos los componentes del modelo de control de calidad de glicoproteínas en el RE, ya que esta levadura expresa actividad GT y posee un homólogo de CNX. Además, el oligosacárido transferido a polipéptidos nacientes es Glc3Man9GlcNAc2 y este compuesto es procesado en el RE a Man9GlcNAc2, indicando la presencia de actividades GI y GII. La disrupción del gen que codifica la CNX en S. pombe ha resultado ser letal para estas células. Sin embargo una mutante deficiente en actividad GT (mutante gpt1) obtenida en nuestro laboratorio no posee ningún fenotipo distintivo. Esto planteó el interrogante de cuál es la importancia y el rol de la formación de oligosacáridos monoglucosilados en el plegamiento de glicoproteínas en estas levaduras. En este trabajo se realizaron además experimentos destinados a analizar si una conformación mal plegada es condición suficiente para para la glucosilación de todos los olgosacáridos N-unidos a proteínas por la GT in vivo, tal como ocurre in vitro. En este trabajo de Tesis se presentan evidencias genéticas de la estructura heterodimérica propuesta para la GII. La GII de S. pombe está compuesta de dos subunidades GIIα y GIIβ. La actividad catalítica está presente en la subunidad GIIα, que carece de señal conocida para permanecer en el RE. La subunidad GIIβ posee en el extremo C-temiinal el tetrapéptido VDEL, homólogo a conocidas señales de retención/recuperación en el lumen del RE. En S. pombe la CNX es esencial para la viabilidad celular. Sin embargo, la disrupción del gen que codifica para GIIα abolió totalmente la formación de oligosacáridos monoglucosilados, tanto por deglucosilación del compuesto transferido a las proteinas como por reglucosilación mediada por la GT. Estas mutantes de S. pombe resultaron viables a todas las temperaturas ensayadas. Esto significa que la CNX y no los oligosacáridos monoglucosilados son esenciales para esta levadura en condiciones normales de crecimiento. Si bien la formación de oligosacáridos monoglucosilados no es esencial para la viabilidad celular, células defectivas total (mutantes GIIα-) o parcialmente (mutantes GIIβ- o GT-) en la formación de oligosacáridos monoglucosilados presentaron una acumulación de proteínas mal plegadas en el RE en ausencia de estrés adicional. Esto se evidenció por la inducción de mensajeros que codifican para chaperonas del RE (respuesta a proteínas mal plegadas o UPR). La acumulación de proteínas mal plegadas en estas mutantes se evidenció además por la presencia en sus glicoproteínas de una mayor proporción de oligosacáridos con estructuras específicas del RE y no del aparato de Golgi. Los glicanos sintetizados por estas mutantes son similares a los obtenidos cuando se agregó a células salvajes un agente reductor que provoca un mal plegamiento en las glicoproteínas que se están sintetizando en el RE. Tal como fue descripto para células de mamifero, en células intactas de S. pombe la formación de oligosacáridos monoglucosilados reduce la velocidad de plegamiento, pero incrementa su eficiencia. Esto fue evidenciado por una comparación de la cantidad de carboxipeptidasa y la velocidad de llegada a la vacuola de esta proteína en células salvajes y GIIα-. Este resultado indicó que los oligosacáridos monoglucosilados están involucrados en la facilitación del plegamiento de las glicoproteínas de S. pombe. La formación de proteínas mal plegadas causada tanto por el agregado de una agente que impide la formación de puentes disulfuro (ditiotreitol) a células intactas, como por un shock de calor, no fueron condiciones suficientes para la glucosilación in vivo mediada por la GT. dichos tratamientos no resultaron en un aumento generalizado de la glucosilación. La explicación para este resultado podría estar en las restricciones de la GT para reconocer sus sustratos: aparentemente la GT sólo glucosilaría glicoproteínas que presentan una estructura parcial o un intermediario del plegamiento con flexibilidad limitada, ausente en las formas completamente desplegadas. Estos resultados sugieren que las glicoproteínas que se pliegan en el RE son sometidas al sistema de control de calidad del plegamiento en las etapas finales del proceso de plegamiento.

Abstract:
The endoplasmic reticulum (ER) is the intracellular location of some post-translational modifications and folding of proteins destined to secretion, to the plasma membrane or to organelles of the endocytic system. N-glycosylation is one of the most frequent modifications. This modification is related to protein folding, as many species are unable of properly fold without N-glycan addition. Folding intermediates, incomplete assembled oligomers, misfolded proteins and aggregates are selectively retained in the ER. Transport to Golgi compartments takes place only if proteins are in their native conformation and properly assembled. The mechanism that ensures the functionality of proteins that exit the ER, is the so called “quality control of glycoprotein folding”. In most eucariotic cells, N-glycosylation is initiated on transfer of an oligosaccharide (Glc3Man9GlcNAc2)from a lipid-carrier (dolichyl diphosphate), to the sequence Asn-X-Ser/Thr in nascent proteins in the ER. The three terminal glucose residues of the transferred oligosaccharide are irnmediately trimmed by two ER glucosidases, I and II (GI and GII). Parodi and coworkers demonstrated the occurrence of transient reglucosylation of glucose-free N-linked oligosaccharides in the ER by a lumenal enzyme, the UDP-Glc:glycoprotein glucosyltransferase (GT). This enzyme glucosylates glycoproteins in a cell-free assay, only if they have been previously denatured. For this especial feature, GT has been proposed as a possible sensor of glycoprotein conformation in the ER. Monoglucosylated oligosaccharides can be generated by partial deglucosylation by of GI (that removes the most terminal glucose) and GII (that trims both inner glucose residues), or by GT. Monoglucosylated oligosaccharides allow interaction of glycoproteins with two ER lectins, calnexin (CNX) and/or calreticulin (CRT). This interaction facilitates glycoprotein folding, avoids aggregation of glycoproteins, allows interaction of bound glycoproteins with the ER chaperone system and constitutes a retaining mechanism of misfolded glycoproteins in the ER. The fission yeast Schizosaccharomyces pombe has the three elements of the quality control of glycoprotein folding in the ER as this yeast expresses a GT activity and a CNX homologue. In addition, the oligosaccharide transferred to nascent polypeptides is Glc3Man9GlcNAc2 and this compound is processed in the ER to Man9GlcNac2 indicating the presence of both GI and GII activities. The disruption of the gene encoding CNX in S. pombe has been shown to be lethal. However, a mutant lacking GT activity (gpt1) obtained in our laboratory had no discernible phenotype. This raised the question of the actual importance of monoglucosylated oligosaccharide formation in glycoprotein folding in this yeast and its role in glycoprotein folding. Further work reported here was performed in order to test whether a misfolded conformation is a sufficient condition for in vivo glucosylation of all N-linked oligosaccharides by GT as was observed in vitro. Results presented herein provide genetic support for a proposed heterodimeric structure of GII. S. pombe GII appears to be composed by two subunits GIIα and GIIβ. Catalytic activity is contained in GIIα subunit, which in turn lacks any known ER retrieval signal. GIIβ has in its C-terminal sequence the tetrapeptide VDEL, homologous to known lumenal ER retrieval signal. A model is proposed in which GII β-subunit functions as the retrieval element of GII α-subunit to the ER. CNX resulted essential for S. pombe viability. However, GIIα subunit disruption completely abolished the formation of monoglucosylated oligosaccharides, both by deglucosylation of the transferred compound as by GT-mediated reglucosylation. This mutant was viable at all temperatures tested. It was concluded that CNX but not monoglucosylated oligosaccharides is essential for this yeast. Although monoglucosylated oligosaccharide formation is not essential for cell viability, cells totally (GIIα minus) or partially (GIIβ or GT minus) defective in monoglucosylated oligosaccharide formation showed accumulation of misfolded proteins in the ER in the absence of any exogenous stress. This was evidenced by the induction of mRNAs encoding ER chaperones (unfolded protein response). Besides, misfolding of glycoproteins in those mutants was reveled by the much higher proportion of protein-linked oligosaccharides having ER-specific structures and lacking Golgi-specific modifications. Glycans synthesized by the mutants displayed sizes similar to those found when a reducing agent that prevents proper protein folding in the ER was added to wild type cells. As was described for mammalian cells, also in intact S. pombe cells formation of monoglucosylated oligosaccharide decreased the folding rate but increased the folding efficiency as judged by comparison of amounts and rates of arrival of carboxypeptidase Y to the vacuole in wild type and GIIα minus cells. This result indicated that monoglucosylated glycans are indeed involved in glycoprotein folding facilitation in the fission yeast. Protein misfolding caused both by addition of a reagent that prevents disulfide bond formation (dithiothreitol) to intact cells as well as by a heat shock treatment were not conditions sufficient for in vivo GT-mediated glucosylation. Those treatments did not result in a generalized glycoprotein glucosylation. The explanation for this result may lie in GT restrictions to recognize its substrates. Apparently GT only glucosylates partially structured conformers or folding interrnediates bearing a limited flexibility that is absent in less structured species. These results suggest that glycoproteins are mainly subjected to ER quality control in the last folding stages.

Coronel, Alejandra Silvia. "Climatología sinóptica de las masas de aire que afectan a la República Argentina" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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El análisis de las masas de aire fue ampliamente usado en los primeros estudios de fenómenos de tiempo en la década del ’30 y ’40. Ya en la década del ’50, con el desarrollo de los modelos numéricos y la información en niveles de la troposfera disminuyó la importancia del uso de las masas de aire como herramienta de pronóstico. En las dos últimas décadas el análisis de masas de aire tuvo un gran impulso principalmente desde el punto de vista del análisis sinóptico, ya que esta variable permite examinar relaciones entre procesos en superficie y características del campo de circulación en la atmósfera. El desarrollo de esta Tesis tiene como objetivo conocer la estructura espacial y temporal y los campos de circulación asociados a las masas de aire que afectan la República Argentina. Los datos utilizados, del Servicio Meteorológico Nacional, corresponden a observaciones de radiosondeo (1958-1997) (altura geopotencial, temperatura, humedad relativa, temperatura de rocío y viento) y de superficie (1959-1991) (temperatura máxima, mínima, viento, humedad relativa, tensión de vapor, presión atmosférica y precipitación) obtenidas en las estaciones aerológicas de la Argentina. También se utilizaron los reanálisis del ECMWF (1979-1993) en los niveles 1000 y 500 hPa. Se identifica la masa de aire a través de la temperatura adiabática equivalente (Өae) en 850 hPa. en cada estación aerológica. Los valores de Өae incluyen las características de la región fuente, de la trayectoria y de la transformación que sufrió la masa de aire a lo largo de su recorrido. A partir de esta premisa se analizaron características estadísticas de las masas de aire en cada estación aerológica. Los resultados mostraron que en invierno Resistencia es afectada en forma similar por tres masas de aire: las cálidas, las frías y las retrógradas, característica que no se observa en otro lugar del país. En verano en general la distribución de frecuencias es unimodal. El análisis de la estabilidad mostró mayor inestabilidad en verano respecto del invierno principalmente en el centro y norte del país. El análisis de la persistencia de las masas de aire frías y cálidas (identificadas a partir de los dos primeros y dos últimos deciles) permitió detectar situaciones que oscilan entre 9 y 14 días en invierno y 5 y 10 días en verano. También pudo encontrarse que la probabilidad de que una masa de aire cálida sea desalojada por una masa fría es mayor que la situación inversa. En su relación con parámetros de superficie se encontró que las masas frías y cálidas podían discriminar la temperatura, presión y parámetros de humedad en diferentes horas, el día de la ocurrencia del evento (primer día de ocurrencia de masa cálida o fría). La evolución temporal de las variables en superficie y en la troposfera, en los días previos y posteriores a la ocurrencia del evento frío permitió identificar: en superficie un máximo de presión que ocurre el día posterior al evento, un mínimo de temperatura que ocurre el día del evento (excepto la temperatura mínima que ocurre en general uno o dos días después) y una mayor probabilidad de precipitación previa a la ocurrencia del evento. En la troposfera se observó un máximo enfriamiento y estabilización de la masa de aire a partir del día del evento. Con referencia al evento cálido se pudo identificar: en superficie un mínimo de presión y un máximo de temperatura y una mayor probabilidad de precipitación posterior a la ocurrencia del evento. En la troposfera se observó el máximo calentamiento el día del evento y una disminución en la estabilidad de la masa de aire. Como paso final se analizó la variabilidad interanual de la frecuencia relativa de masas de aire frías y cálidas que permitió inferir anomalías importantes en el campo de circulación en algunos años del período analizado. Como conclusión general se puede destacar un calentamiento en verano, identificado a través de una tendencia positiva y significativa de temperatura en las estaciones y período analizado. La variabilidad interanual de la temperatura en superficie está correlacionada con la frecuencia relativa de las masas de aire extremas y en forma indirecta con patrones de circulación. Como corolario, esta Tesis permitió avanzar en el conocimiento de la Climatología Sinóptica de eventos identificados a partir de la ocurrencia de masas de aire extremas en diferentes estaciones de la Argentina.

Abstract:
The analysis of air masses was widely used in the early weather studies, in the 30´s and 40´s. Already in the 50´s, with the advent of numerical models and tropospheric observations the importance of air masses as a forecast tool decreased. During the last two decades the air mass analysis enjoyed a rebirth from the perspective of synoptic analysis, given that this variable allows the study of relations between surface processes and the characteristics of atmospheric circulation fields. This aim of this thesis is to understand the spatial and temporal structure and the circulation fields associated with the air masses that evolve over the Argentine Republic. The data used, from the Servicio Meteorológico Nacional, correspond to aerological observations (1958-1977), specifically geopotencial, temperature, relative humidity, dew point temperature and wind) as well as surface observations (1959-1991), specifically maximum and minimum temperature, wind, relative humidity, atmospheric pressure and precipitation, obtained at the Argentine aerological stations. ECMWF products (1979-1993) at 1000 and 500 hPa were used too. The air mass is identified using the equivalent adiabatic temperature at 850 hPa at each aerological station. The Өae values include the characteristics of the source region, of the trajectory and the modifications that the air mass endured along its displacement. Given this premise, the characteristic statistics for the air masses were analysed at each station. The results showed that the winter in Resistencia is equally influenced by three air masses: warm ones, cold ones and retrogressive ones. Such characteristics are not observed in other regions of Argentina. In summer the frequency distribution is mostly unimodal. The stability analysis yielded a greater instability in summer, with respect to winter, mainly in the center and north of the country. The air mass persistency analysis for both cold and warm air masses, allowed for the detection of events that can last between 9 and 14 days in winter and 5 to 10 days in summer. It was also possible to find that the probability that a cold one could displace a warm air mass is greater than the inverse process. Regarding the surface parameters, it was found that cold and warm air masses could discriminate the temperature, pressure and humidity parameters at different times, the day of the event occurrence (first day of the existence of the cold or warm air masses). The temporal evolution of the surface variables at the surface and in the troposphere, during the days before and after the occurrence of the cold event helped determine that: on the surface a pressure maximum that takes place on the following day, a temperature minimum that takes place on the day of the event (except when the minimum temperature that takes place two or three days later) and a greater precipitation probability before the event occurrence. A maximum cooling and air mass stabilisation is observed in the troposphere from the day of occurrence of the event. As for the warm event, it was possible to identify on the surface a pressure minimum and a temperature maximum and a greater precipitation probability subsequent to the event. A maximum warming was observed in the troposphere on the day of the event and a decrease in the air mass stability. Finally the interannual variability in the relative frequency of the cold and warm air masses was studied. Important anomalies in the circulation field were inferred for some of the years sampled. As a general conclusion it is possible to point out a warming during summer, identified in the positive, significant trend for the stations and period under study. The surface temperature interannual variability correlates well with the relative frequency of the extreme air mases and indirectly with circulation pattern. Finally, this thesis has made way in the understanding of Synoptic Climatology of events identified through the occurrence of extreme air masses in different Argentine stations.

Corley, Juan Carlos. "La diapausa prolongada y su papel en la dinámica poblacional de sistemas huesped-parasitoide" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La habilidad de insectos univollinos de demorar la emergencia de una fracción de adultos de la población, salteando oportunidades de reproducción, es un rasgo de historia de vida común en muchas especies que habitan ambientes poco predecibles. La diapausa prolongada o extendida, como se denomina este fenómeno, ha sido relacionada con una estrategia dc distribución de riesgos y sc ha demostrado que puede contribuir a la persistencia de poblaciones sin interacciones. Sin embargo, con la excepción de escasos trabajos, su papel en la dinámica de sistemas con interacciones, como aquellos conformados por insectos fitófagos y sus parasitoides, es un tópico aún por resolver. En esta disertación, explore el papel de la diapausa prolongada en sistemas huesped-parasitoide desde el punto de vista teórico, considerando las posibles relaciones entre este evento y la biologia de los parasitoides. A partir del modelo oentral de Nicholson-Bailey y con un creciente grado de complejidad desde la búsqueda al azar, el parasitismo agregado y la densodependencia en la población huésped desarrolle y analice 15 modelos para incluir los casos de patrones de desarrollo de huésped y parasitoides que involucran la diapausa prolongada. biológicamente fundados. Los hallazgos más importantes son que la diapausa prolongada en la población huésped incrementa la persistencia en sistemas altamente inestables con búsqueda al azar sólo cuando la diapausa se extiende por más de una estación reproductiva adicional; incrementa ligeramente la estabilidad cuando el parasitismo es agregado, a través de densodependencia de la fracción diapausante y desestabiliza cuando la densodependencia en el huésped es explícita. La prolongación de la diapausa por el parasitoide, posee fuertes consecuencias desestabilizantes. No obstante, el comportamiento dinamico de las diferentes relaciones entre este evento y el parasitismo, es diferente. La conclusión principal es que, contrariamente a la predicción hecha anteriormente, el poder estabilivante de la diapausa prolongada es mínimo y que los detalles de la biología son importantes para predecir sus consecuencias dinámicas. Luego, utilizando uno de estos modelos, analice las consecuencias de la diapausa prolongada en la dinámica poblacional de la avispa Sirex noctilio (Hymenoptera:Siriciade) y su parasitoide Ibalia leucospoides (Hymenoptera:Ibaliidae). La primera especie, es la más importante plaga de pinos implantados en el hemisferio sur, y, como cl 50% de la especies fitófagas de este grupo arbóreo, posee un régimen de desarrollo con diapausa prolongada, que varía según las condiciones ambientales. Asimismo posee una dinámica con dañinos e impredecibles pulsos eruptivos, asociados a eventos densoindependientes. Mi modelo sugiere que es posible describir dicha dinámica, simulando un disturbio instantáneo, para un rango de mrámetros. Finalmente evalúe alternativas para su control biológico con enemigos naturales con estrategias diferentes frente a la diapausa prolongada, analizando los niveles de equilibrio y de supresión. Los resultados permiten interpretar adecuadamente los éxitos y fracasos de programas pasados sobre Snoctilio y sugieren que en sistemas que involucran plagas con diapausa prolongada en general, la elección del mejor agente depende de las condiciones ambientales (y en consecuencia el grado de diapausa prolongada) en donde se desarrolla la plaga y de cómo se relaciona con ella los parasitoides.

Abstract:
Prolonged diapause is a common life history feature of many species living in unpredictable environments. This phenomenon has been related to a risk-spreading strategy, which has been shown to contribute to the persistence of single population models. However, with the exception of a few works, the role of prolonged diapause in systems with interacting species, such as those involving phytophagous insects and their parasitoids, remains still an open question. Throughout this thesis, I address this issue from a theoretical perspective and study the role of prolonged diapause in coupled host-parasitoid systems, considering the possible relationships between this life history feature and the biology of the parasitoids. Using Nicholson-Bailey's model as a baseline, and following an increasing degree of complexity, including random search, aggregated parasitism and host densitydependence. I developed and analysed 15 models to include the developmental patterns of hosts and parasitoids in a biologically feasible scenario. The most important findings are that prolonged diapause increases population persistence in (otherwise unstable) systems with random search when it extends for more than a single reproductive season; increases local stability when parasitism is aggregated by means of delayed densitydependence of the fraction emerging after prolonged diapause; and a decrease in stability in systems with host-density dependence. Parasitoid prolonged diapause has strong destabilising properties as well. However, the dynamic behaviour of the different relationships between prolonged diapause and parasitism is different. My main conclusion is that, in contrast with past work, prolonged diapause contributes little to population stability and that that the biological details of host-parasitoid interactions with prolonged diapause may be important when considering the consequences of prolonged diapause for host-parasitoid dynamics. By using one of the models, I also studied the consequences of prolonged diapause in understanding the population dynamics of Sirex noctilio (Hymenoptera:Siriciade) and its parasitoid Ibalia leucospoides (Hymenoptera:Ibaliidae). The former wasp is major pests of pine tree forestation in the Southern Hemisphere and as 50% of the insects that attack conifers. suffers from prolonged diapause as related to its environment. Further-more,S. noctilio 's populations undergo damaging pulse eruptions, related to environmental disturbances. My model with prolonged diapause describes such behaviour for a range of parameters. Finally. I have looked at alternatives for biological control, studying equilibrium and suppression levels for this pests, considering parasitoids that deal with its prolonged diapause differently. The results allow understanding past failures and success in the control of S. noctilio in other countries and shed light on the fact that for pests with prolonged diapause in general, the correct choice of controlling parasitoids depends on the environmental conditions (and on the degree of prolonged diapause) in which the Post is present and on how this relates to the parasitoids biology.

Cogliati, Marisa Gloria. "Estudio térmico y del flujo del aire en septiembre y octubre en los Valles de los Ríos Limay, Neuquén y Negro" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las condiciones de suelo fértil, con abundante agua disponible hacen que los valles sean lugares preferenciales para asentamientos poblacionales y emprendimientos productivos. El estudio del flujo del aire y los intercambios de calor entre meseta y valle son considerados relevantes por sus múltiples aplicaciones de índole práctica. Los valles de los ríos Neuquén, Limay y Negro ubicados en la Patagonia Norte argentina constituyen una región con las características señaladas anteriormente y una importante producción fruti-hortícola. Por ejemplo, los cultivos agrícolas ocupan en el valle del Río Negro, el 60% de la superficie total del mismo. El comportamiento de los factores meteorológicos, muchas veces actúa de manera decisiva sobre la producción frutícola. En el Alto Valle, su influencia promedio se encuentra entre el 5 y el 6%. Si bien, durante la época de descanso vegetativo, los frutales necesitan de la ocurrencia de temperaturas bajas, en el período crítico de floración, dichas temperaturas pueden ocasionar daños severos a la producción. Las heladas tardías que afectan la producción frutícola ocurren en los meses de setiembre y octubre, y representan para la región de los valles de los ríos Limay, Neuquén y Negro, uno de los mayores riesgos para la actividad productiva, llegando a ocasionar grandes pérdidas económicas. El número medio de días con heladas en los meses de setiembre y octubre es 10 días en Villa Regina, 8.7 días en Alto Valle, 8.3 días en Cinco Saltos, 5.4 días en Neuquén y 3.5 días en Cipolletti. Esto pone en evidencia la variabilidad espacial de este fenómeno. En este trabajo se analizan las características espaciales y temporales de la temperatura del aire y el viento en los valles de los ríos Neuquén, Limay y Negro durante los meses de setiembre y octubre en los que ocurren heladas tardías. La diversidad de escalas involucradas en el fenómeno de las heladas hizo necesaria la inclusión en este trabajo de información con diferentes características dentro de los valles. Se utilizaron datos de temperatura del aire y del viento de varios puntos ubicados sobre la meseta y en el interior del valle, obtenidos con intervalos de tiempo de 1 minuto, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora. Los datos con intervalo de observación menor, fueron adquiridos durante el experimento de campo MECIN realizado en la zona entre 1992 y 1998. Este trabajo, encara el análisis de distintas escalas involucradas en la determinación de las características de las fluctuaciones de temperatura del aire y viento a partir de distintos enfoques metodológicos. En un primer enfoque, se analizan las características climáticas de la zona comprendida por los valles de los ríos Neuquén, Limay y Negro mediante el estudio de datos de temperatura del aire e intensidad y dirección del viento incluidos en las estadísticas climatológicas (período: 30 años) del Servicio Meteorológico Nacional en las estaciones Neuquén Aero, Cipolletti, Alto Valle y Villa Regina. En este análisis de mayor escala, se incluyó también una climatología sinóptica realizada mediante los datos del reanálisis elaborado por el NCAR/NCEP correspondientes al período 1982-1994. Estos análisis proveyeron un marco de las características de escala sinóptica de la meteorología de la región durante los meses de setiembre y octubre. El análisis de escalas menores, se efectuó desde dos enfoques diferentes: - A partir de las series horarias, cada 15 min y cada 1 minuto de temperatura del aire y viento, se obtuvieron los espectros de dichas variables mediante la técnica de la Transformada Rápida de Fourier (Cooley y Tukey, 1965) en estaciones meteorológicas instaladas sobre la meseta y en el interior de los valles y se identificaron algunos procesos físicos a partir de los máximos de densidad espectral en escala sinóptica, meso y micro-escala. Se calcularon los espectros cruzados (coespectro, espectro de cuadratura) entre la temperatura del aire en distintos lugares de medición con la finalidad de obtener los períodos en que se presentan las mayores covarianzas. A partir de los espectros cruzados entre la temperatura del aire y las componentes u y v de la intensidad del viento se obtuvieron los estimadores de los transportes horizontales de temperatura. Las covarianzas estre la temperatura del aire y las componentes u y v del viento, se asocian con las características del intercambio horizontal de calor en las escalas sinóptica, meso y micro-escala. Realizando un análisis similar entre la componente u y la componente v de la intensidad del viento se calculó el intercambio horizontal de cantidad de movimiento. - Las interacciones del viento en los valles con el flujo de escala sinóptica, generan procesos característicos de escalas menores. En diversas partes del mundo se han realizado trabajos al respecto. Para el estudio de las relaciones entre el viento de escala sinóptico y el viento en el interior de los valles, se utilizó el modelo conceptual propuesto por Whiteman y Doran (1993) en el que se identifican cuatro mecanismos. El tipo de forzante se determina a partir de la distribución conjunta de los vientos de valle y los vientos en escala sinóptica. A partir de este análisis y de la descripción de las varianzas de la temperatura del aire y la dirección e intensidad del viento, se infirieron procesos físicos que regulan la conducción del aire en los valles de los ríos Neuquén, Limay y Negro en condiciones diurnas y nocturnas. El estudio en la microescala se completó con el análisis de los perfiles verticales de temperatura y viento en la capa cercana al suelo en el valle del río Neuquén. Las fluctuaciones en la dirección del viento en los valles de los ríos Neuquén y Negro ponen de manifiesto la existencia de un ciclo diurno que podría indicar un efecto térmico. En el valle del río Limay este efecto no fue observado. La distribución de frecuencias de direcciones de viento presenta una alineación del viento en superficie a lo largo de las direcciones de los ejes de los valles. El valle del Río Negro en Allen, no presenta un sólo proceso sino que se observa canalización forzada y transporte de cantidad de movimiento desde el viento en escala sinóptica. En el valle del río Limay se presentan dos giros en la dirección del viento, el primero se ajustaría a procesos producidos por el gradiente de presión y el segundo se asociaría a la canalización forzada. De manera similar a lo obtenido en el análisis de la temperatura, los valores de energía cinética varían entre la meseta y el interior de los valles, observándose mayores valores sobre la barda y valores en disminución hacia el interior de los valles. Los transportes horizontales de temperatura en Neuquén Aero, Allen y colonia Valentina Sur son mayores en la dirección N-S, mientras que en Centenario barda y Centenario valle los transportes son mayores en la dirección W-E. Esto significa que en todos los casos los transportes son mayores en la dirección transversal a los valles. El perfil del viento dentro del valle presentó una capa de calma y a mayor altura un aumento abrupto de la velocidad del aire. Esta configuración y la estratificación que se da en la capa de inversión nocturna, bajo condiciones propicias podrían provocar ondas de Kelvin- Helmholtz.

Abstract:
The fertile soil and available quantity of water made valleys wanted for population settlement and productive enterprices. The study of air flow and transport of heat between the plain and the valley are decisive results for practical aplications. The Neuquén, Limay and Negro river valleys located in Northern Patagonia are one of the most important fruit production region. The fruit crops ocupies the 60% of total Río Negro river valley surface (41671 has). The behaviour of meteorological factors acts in a decisive way over fruit production. In Alto Valle the mean influence is between 5 and 6%. During winter fruit trees need low temperatures, but in spring time low temperatures might cause extreme damage to crops. Late freeze affects fruit production during September and October and are one of the dangerous risks for production that could generate important economical losts. The mean number of freeze days in September and October is 10 days in Villa Regina, 8.7 days in Alto Valle, 8.3 days in Cinco Saltos, 5.4 days in Neuquén and 3.5 days in Cipolletti, showing the spatial variability of freeze occurrence. In this job the spatial and temporal characteristics of air temperature and wind in Neuquén, Limay and Negro rivers valleys in September and October are analyzed. A great density of data was included in this work because of the variety of scales involved in late freeze fenomena. Air temperature and wind in some points in the valley and the plain obtained by 1 min, 15 min or an hour were considered. Some data was obtained during MECIN field experiment (Nocturnal Inversion Layer Measurements) from 1992 to 1998. The variety of scales involved in temperature and wind fluctuations determined the use of different methodologies in the analysis. The first point of view is the analysis of climatic characteristics of Neuquén, Limay and Negro river valleys zone by studying 30 years climatic statistics in Neuquén Aero, Cipolletti, Alto Valle y Villa Regina and a synoptic climatology from NCEP/NCAR reanalysis from 1982-1994 for September and October. The spectrum of hourly, 15 minutes and 1 minute series of air temperature and wind were obtained using Fast Fourier Transform technique (Cooley and Tukey, 1965) in meteorological stations over the plain and in the valley, to identify physical processes connected with spectrum maxima in synoptic, meso and micro scale. Air temperature cross spectrum (coespectrum and quadrature spectrum) in different locations were calculated. Temperature and momentum estimations of the fluxes were obtained from air temperature and wind components cross spectrum. The interaction of winds in a valley with winds above the valley produces micro scale processes. Several authors made papers concerning this topic in different countries. Whiteman y Doran (1993) present a conceptual model of four different forcing mechanisms of valley winds. They determined the type of forcing that occurs at a site from a scatterplot of the synoptic winds versus the ambient winds. This analysis and standard deviation of temperature and wind inferred the channelling forcing within valleys. The wind direction fluctuations in Neuquén, and Negro river valley shows a diurnal cycle from thermal forcing. Limay river valley does not show evidences of diurnal cycle. The micrometeorology study was completed with vertical air temperature and wind soundings in Neuquén river valley. The surface wind direction distribution evidence directions aligned with valley axis. Neuquén river valley present forced channelling (Whiteman and Doran 1993), Río Negro valley present forced channelling and downward momentum transport influences and Limay valley present two shifts in wind direction: the first process was pressure driven channelling and the second forced channelling. Horizontal temperature transport in Neuquén Aero, Allen and Colonia Valentina Sur are important in N-S direction and in Centenario in W-E both in the cross valley direction. Wind profile in the valley shows a calm layer and an abrupt increase above. This pattern and nocturnal inversion layer temperature stratification could produce Kelvin Helmholtz waves.

Cirigliano, Adriana Mónica. "Aislamiento y elucidación estructural de withanolidos de Datura ferox, Jaborosa runcinata y Jaborosa ordonelliana" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se describe el aislamiento y elucidacíón estructural de los withanólidos presentes en las especies Datura ferox, Jaborosa runcinata y Jaborosa odonelliana, utilizando técnicas espectroscópicas combinadas con modelado molecular. De la especie Datura ferox recolectada en la provincia de Córdoba, se aislaron, por dos métodos diferentes, cuatro withanólidos novedosos: el 15-hidroxiderivado de la nicandrina B y las daturolactonas 5, 6 y 7, además de siete withanólidos conocidos, withaferoxólido, withanólido mayoritario de esta especie, withanicandrina, withastrarnonólido, withametelina E y las daturolactonas l, 2 y 3. De la especie Jaborosa runcinata recolectada en la provincia de Entre Ríos, se aislaron siete jaborosolactonas novedosas de tipo espiránico: las jaborosolactonas 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 9. Estos compuestos presentaron un sistema l7(20)-en-22- ceto, funcionalizacíón no encontrada previamente en la familia de los withanólidos, siendo la principal diferencia entre los mismos la sustitución en el anillo B. De la especie Jaborosa odonelliana recolectada en la provincia de Salta en abril y diciembre, se aislaron, además de jaborosolactona P, compuesto mayoritario previamente reportado en esta planta, seis withanólidos espiránicos novedosos: las jaborosolactonas 10, ll, 12, 13 , 14 y 15. Como en el caso de los withanólidos aislados de Jaborosa runcinata, la principal diferencia entre los compuestos aislados era la sustitución en los anillos A y B, siendo la cantidad y tipo de withanólidos diferente en ambas épocas de recolección. Esta variación estacional había sido encontrada previamente en otro tipo de Solanáceas, habiéndose relacionado en algunos casos, con mecanismos de defensa química. Los compuestos mayoritarios de las especies antes mencionadas se evaluaron como antialimentarios de larvas de insectos y como agentes quimiopreventivos del cáncer obteniéndose resultados prometedores.

Abstract:
The isolation and structural elucidation of the withanolides from Datura ferox, Jaborosa runcinata and Jaborosa odonelliana, using spectroscopic methods and molecular modeling are described. From plants of Datura ferox collected in Cordoba Province, we isolated using two different methods, four new withanolides: the 15-hydroxyderivative of nicandrin B and daturolactones 5, 6 and 7, and also seven known withanolides withaferoxolide, the major compound in this species, withanicandrine, withastramonolide, withametelin E and daturolactones 1, 2 and 3. From plants of Jaborosa runcinata collected in Entre Rios Province, we isolated seven new spiranoid withanolides: the jaborosolactones 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 9. These compounds present a l7(20)-en-22-keto system, a new arrangement within the withanolide family, being the main difierence among them the substitution on ring B. From plants of Jaborosa odonelliana cóllected in Salta Province in April and December, we isolated besides jaborosolactone P, the major compound in this species, seven new spiranoid withanolides: the jaborosolactones 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 9. As was the case with Jaborosa runcinata, the main difference among the withanolides isolated from Jaborosa odonelliana was the substitution pattern on rings A and B. The amount and type of isolated withanolides differed depending on the collection dates. This seasonal variation has been observed in other type of Solanaceae, and it has been related to chemical defense mechanisms. The main compounds of each species were evaluated not only as antifeedant agents but also as chemopreventive agents, with promising results.

Cavagnari, Brian M.. "Proteínas transportadoras de ácidos grasos (FABP) y de acil-CoA (ACBP) en glándula de Harder" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La glándula de Harder es un órgano de secreción exócrina que secreta lípidos por un mecanismo merócrino. Más del 20% del peso seco de esta glándula está dado por los lípidos, los cuales son secretados en grandes proporciones. A éstos, se les atribuyen múltiples funciones tales como lubricar al ojo para facilitar el normal movimiento del párpado, actuar como solvente de sustancias bioactivas tales como feromonas y factores de crecimiento, colaborar con la termorregulación del animal y tener un efecto bactericida para la protección del ojo como vía de entrada de microorganismos. La mayoría de las investigaciones sobre el metabolismo lipídico de esta glándula realizadas hasta el momento, se concentró en las enzimas involucradas en el mismo, pero la presencia de proteínas transportadoras de lípidos en la glándula de Harder no había sido descripta hasta el presente trabajo. Los resultados aquí presentados muestran la presencia de una proteína transportadora de ácidos grasos (FABP) en la glándula de Harder del armadillo Chaetophractus víllosus, cuya secuencia de aminoácidos parcial sugiere su ubicación dentro de las FABP de tipo cardíaco. Sorprendentemente, a pesar del intenso metabolismo lipídico de esta glándula, la misma solo presenta una pequeña cantidad de FABP. En este trabajo encontramos que en la glándula de Harder también está presente una proteína transportadora de acil-CoA (ACBP). Determinamos su estructura primaria completa y encontramos que su concentración es mucho mayor que la de la FABP. El hecho de que la concentración de la ACBP sea mayor que la de la FABP sugiere que la glándula de Harder puede almacenar acil-CoA en la ACBP en mayor proporción que ácidos grasos en la FABP. Los acil-CoA serán luego utilizados para la síntesis del 1-alquil-2,3-diacilglicerol, el principal producto de secreción de la glándula de Harder de armadillo. Teniendo en cuenta la dificultad en la obtención de las glándulas de armadillo, su pequeño tamaño y la escasa cantidad de proteína que se puede obtener de cada una de ellas, decidimos clonar la ACBP de glándula de Harder para sobreexpresarla y así poder determinar sus características estructurales. Esta es la primera vez que se describe la presencia de una FABP y de una ACBP en la glándula de Harder.

Abstract:
Harderian glands are exocrine glands that secrete lipids through a merocrine mechanism. Secretory lipids account for approximately 20% of Harderian gland fresh tissue weight and are secreted in large amounts. Lipids excreted by Harderian glands are extremely important and lots of functions are ascribed to them. For instance, they act as lubricants facilitating eyelid movement, they act as a solvent for biologically active substances like pheromones or growth factors, they have a thermoregulation function. A bactericidal effect has also been attributed to them. Most investigations of this gland lipid metabolism have been concentrated on the enzymes related to the metabolic pathways but the presence of lipid-binding proteins has not been reported so far. Results herein show the presence of one fatty acid-binding protein (FABP) in the Harderian gland of the armadillo Chaetophractus villosus, whose partial amino acid sequence suggests that it belongs to the heart type. Unexpectedly, despite its important lipid metabolism, this gland has only very small amounts of FABP. In this work we found that there is also an acyl-CoA-binding protein (ACBP) in said gland. We determined its complete aminoacid sequence and found that its concentration is far higher than that of the heart-type FABP. The fact of the ACBP concentration being higher than that of FABP suggests that the Harderian gland is able to store acyl-CoA amounts in ACBP larger than those of fatty acids in FABP for 1-alkyl- 2,3-diacylglycerol synthesis, the main secretory product of armadillo Harderian gland. Tacking into account the difficulty in obtaining armadillo Harderian glands, their small size, and the small amount of protein that can be obtained from each gland, we decided to clone the Harderian gland ACBP and overexpress it, in order to be able to determine its structural characteristics. This is the first time that FABP and ACBP are reported in a Harderian gland.

Cataldo, Daniel Hugo. "Dinámica poblacional y potencial bioindicador de contaminación acuática del molusco bivalvo Corbicula fluminea en el delta del Río Paraná" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La estructura y la dinámica poblacional del molusco invasor Corbicula fluminea, así como su potencial como especie bioindicadora de estrés ambiental,fueron analizados en el delta inferior del río Paraná entre abril de 1995 y octubre de 1996. Muestras de agua y sedimentos fueron colectadas en cuatro sitios con diferentes niveles de contaminación para evaluar el impacto antropogénico por medio de análisis químicos y bioensayos de laboratorio. Se determinaron las concentraciones de bifenilos policlorados (BPCs), plaguicidas organoclorados (POCs), hidrocarburos alifáticos (HALs), hidrocarburos aromáticos (HARs) y metales pesados (MP) en el agua superficial, el agua de profundidad y los sedimentos. Estas mismas tres fases también se sometieron a ensayos de toxicidad utilizando juveniles de charnela recta de Corbicula fluminea. Las concentraciones de las sustancias contaminantes presentaron una gran tendencia geográfica, con valores más altos en la vecindad de las áreas mas densamente pobladas sobre los ríos Reconquista y Luján, disminuyendo sensiblemente en el río San Antonio, y con valores mínimos en el sitio mas remoto ubicado sobre el río Paraná de las Palmas. Este gradiente concuerda muy bien con los patrones de mortalidad, de los juveniles de charnela recta de Corbicula fluminea. Las condiciones ambientales más adversas para los organismos fueron registradas en las aguas de los ríos Reconquista-Lujan (mortalidades de 40 a 93%), mientras que los niveles de respuesta en el río Paraná no difirieron significativamente del control (3.3-2.3% de mortalidad). Ademas la mortalidad de juveniles fue menor en agua superficial (3.3-53%) que en agua de poro (12-73%), y en esta última que en los sedimentos(23-93%). Si bien la toxicidad probablemente fue debida principalmente a los contaminantes disueltos, la mayor concordancia espacial entre las evidencias de contaminación químicas (determinación de tóxicos) y las biológicas (tasas de mortalidad de almejas juveniles) fue registrada en los sedimentos, mientras que las evidencias obtenidas de las muestras de agua de poro y del agua superficial fueron mas heterogéneas y menos concluyentes. Individuos bentónicos y juveniles planctónicos de Corbicula fluminea fueron colectados mensualmente en los ríos Paraná de las Palmas (PP) y San Antonio (SA). Los cambios en la distribución de frecuencias de talla de las almejas de PP a lo largo del periodo de estudio indican claramente una estructura poblacional dinámica, con cohortes anuales claramente definidas y una alta abundancia de reclutas jóvenes durante el único periodo reproductivo centrado sobre los meses de octubre y noviembre. Los parámetros poblacionales estimados mediante el análisis de progresiones modales, aplicando la formula estacionalizada de crecimiento devon Bertalanffy, fueron: largo infinito (La) 32 mm (talla mínima observada: 33mm); constante de crecimiento (K): 0.65; factor de amplitud (C, indicador de variación del crecimiento entre verano e invierno): 0.7; punto de invierno (PI), fracción del año donde el crecimiento es mínimo): 0.5 . El rango de tallas estimadas para los individuos de PP en el primer año de vida fue de 15.3-22.4mm, para el segundo año 23.5-27 mm, y para el tercer año 27.5-29.3 mm. La comparación con los parámetros

Castro, Pablo A.. "Caracterización molecular de superficies de óxido de hierro en relación a modificaciones químicas por adsorción de fosfatos y fosfonatos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de este trabajo de Tesis es el estudio de la interacción a nivel molecular entre fosfatos (fosfato inorgánico y ácidos fosfóricos y fosfónicos de cadena larga) y superficies de óxidos dc hierro. El estudio dc la adsorción sobre óxidos de hierro de compuestos que contienen el grupo funcional fosfato es de gran interés en varios campos de la ciencia que van desde la química del suelo y las aguas naturales hasta la protección contra la corrosión. Como óxido de hierro modelo se emplearon superficies de hierro pasivadas en medio alcalino y magnetita (Fe3O4), tanto de origen geológico como artificial. geological and artificial. Para el estudio de la adsorción de fosfatos inorgánicos se emplearon soluciones de ortofosfato de sodio (Na3PO4, Na2HPO4 y NaHgPO4). La adsorción de ácidos fosfóricos y fosfónicos dc cadena larga fue estudiada a partir de soluciones de acido dodecanfosfórico (DPA) y ácido octadecilfosfónico (OPA), respectivamente. La interacción fosfato/óxido de hierro fue estudiada mediante una variedad dc técnicas tales como Espectroscopía de Impedancia Faradaica (ElS), Microbalanza de cristal de cuarzo (QCM), Espectroscopía infrarroja de reflexión-absorción por transformada dc Fourier (FT-IRRAS), Espectroscopía infrarroja in situ por transformada de Fourier (Substractively Nonnalized Interracial Fourier InfraRed Spectroscopy, SNIFTIRS), ángulo de contacto, y Espectroscopia electrónica para el análisis químico (ESCA o XPS). Los experimentos SNIFTIRS y QCM indican que a valores altos de pH y bajo control potenciostático, los fosfosfatos inorgánicos forman un complejo superficial bidentado, aunque no puede descartarse totalmente la formación de complejos monodentados. Los experimentos de FT-IRRAS y QCM muestran que los ácidos DPA y OPA forman una monocapa de complejos superficiales bidentados al adsorberse sobre hierro pasivo y magnetita desde soluciones etanólicas. Estos filmes presentan un nivel de ordenamiento bajo, pero continúan ordenándose con el tiempo. Estos resultados son muy interesantes desde el punto de vista de la mejora de la estabilidad de los recubrimientos poliméricos sobre metales. Una parte importante del trabajo presentado aqui fue realizado bajo la dirección del Prof. Dr. Martin Stratmann at the "Institut für Werkstoffwisscnchaften, Lehrstuhl für Korrosion und Oberflächentechnik (LKO), Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg", Erlangen, Alemania.

Abstract:
The objective of this thesis research is the study of the interaction between phosphate species (inorganic phosphate and long chain organic phosphoric and phosphonic acids) and iron oxide surfaces at the molecular level. The study of the adsorption of compounds containing the phosphate group on iron oxide is of great interest for many fields of science and technology from soil and natural water Chemistry to corrosion protection. As a model iron oxide surface alkaline passivated iron surfaces and geological and artificial magnetite (Fe3O4) were chosen. For the study of inorganic phosphate adsorption on these surfaces solutions of sodium orthophosphate salts (i.e. Na3PO4, Na2HPO4 and NaH2PO4) were used. The adsorption of long chain organic phosphoric and phosphonic acids was studied using dodecanphosphoric acid (DPA) and octadeylphosphonic acid (OPA), respectively. The phosphate/iron oxide interaction was studied by a variety of techniques such as Electrochemical impedance Spectroscopy (EIS), Quartz Crystal Microbalance (QCM), Fourier Transform infraRed Reflection-Absorption Spectroscopy (FT-IRRAS), Substractively Nonnalized Interracial Fourier InfraRed Spectroscopy (SNIFTIRS), contact angle and X-ray Photoelectron Spectroscopy (XPS). The SNIFTIRS and QCM experiments indicates that at high pH values and under potentiostatic control the inorganic phosphates form a bidentate surface complex, even though based solely on the evidence presented here it is not possible to rule out the formation of a mixture of bi and monodentate surface complexes. The FT-IRRAS and QCM results show that the organic phosphoric and phosphonic acids (DPA and OPA) forms a monolayer of bidentate complexcs upon adsorption from ethanolic diluted solutions. These monolayers formed rapidly (in approximately 2000 seconds) on passive iron and magnetitc but they continue to rearrange from a liquid like state to a more crystallinc state. The alkyl chains presents low order even for large adsorption times this could indicate the existence of domains with different molecular orientation or order. These results are very interesting from the point of view of the enhancement of the metal/polymer stability. There is a good possibility that long chain phosphonic or phosphoric acid monolayers adsorpted on iron or steel surfaces and covalentely attached to a polymer using a proper terminal group (such a amino group) could be used to enhance the adhesion and stability of coatings. A significant pan of the research presented here was done under the direction of Prof. Dr. Martin Stratmann at the "Institut für Werkstoffwisscnchaften, Lehrstuhl für Korrosion und Oberflächentechnik (LKO), Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg", Erlangen, Germany.

Carrari, Fernando O.. "Participación de los genes VP1 y GA20-oxidasa en el control hormonal de la germinación de semillas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los niveles de dormición de las semillas de sorgo (Sorghum bicolor) determinan la susceptibilidad al brotado pre-cosecha (BPC), uno de los principales problemas agronómicos de este cultivo. Con este escenario en mente, el objetivo de este trabajo fue aproximarse a las bases moleculares de la regulación hormonal de la dormición de las semillas. En primer lugar, se clonó el gen vp1 de sorgo (Sbvp1) y un fragmento del gen de la GA20-oxidasa (SbGA20-ox). Estos genes están involucrados en el control de la sensibilidad al ácido abscícico (ABA)y en la síntesis de giberellinas (GAs), respectivamente. Utilizando un sistema experimental compuesto por dos líneas homocigotas de sorgo con comportamiento contrastante con respecto al BPC, se estudiaron las estructuras y funcionalidad de estos genes durante el desarrollo y la germinación de las semillas. Además, se determinó la posición del gen Sbvp1 en un mapa genético previamente construido. Los resultados muestran que los niveles de expresión del gen Sbvp1 durante el desarrollo de las semillas no permiten predecir el futuro comportamiento germinativo. Sin embargo, en condiciones favorables de germinación, la expresión de este gen resultó diferencialmente regulada en semillas con distintos niveles de dormición, correlacionando con la sensibilidad de los embriones al ABA. El análisis de segregación demostró que este gen no está ligado a ninguno de los QTLs para dormición previamente detectados. Esto permite proponer que este gen estaría involucrado río abajo en la cascada de señalizaciones que disparan la germinación de las semillas. Además, los resultados indican que el gen SbGA20-ox es diferencialmente regulado en cariopses con fenotipos de dormición contrastantes. El ABA inhibió la expresión de este gen durante la incubación de los embriones, implicando que esta hormona actúa antagónicamente a las GAs a través de la interferencia en su síntesis.

Abstract:
The extent of dormancy of sorghum seeds (Sorghum bicolor) determines the susceptibility to pre-harvest sprouting (PHS), one of the main agronomic problems of this crop. With this scenario in mind, the goal of this work was to approach to the molecular grounds of the hormonal adjustment of seed dormancy. Firstly, the vp1 gene (Sbvp1) and a fragment of the gene encoding the GA20-oxidase (SbGA20-ox) from sorghum were cloned. These genes are involved in the control of abscicic acid (ABA) sensitivity and in gibberellin (GA) biosynthesis, respectively. Using an experimental system consisted of two sorghum inbred lines with contrasting behaviour with regard to PHS, the structure and functionality of these genes were studied during the ontogeny and the germination of the seeds. Also, the position of the Sbvp1 gene was determined in a genetic map. The results show that the expression levels of the Sbvp1 gene during seed ontogeny does not allow to predict the future germinative behaviour. However, under favourable germination conditions, the expression of this gene was differentially regulated in seeds with different dormancy phenotypes, correlating with the embryo sensitivity to ABA. Linkage analysis proved this gene not to be associated with any of the QTLs previously detected for dormancy. Taken together, the experiments suggest that this gene may be involved downstream in a signalling cascade that triggers seed germination. In addition, the results indicate that the SbGA20-ox gene is differentially regulated in caryopses with contrasting dormancy phenotypes. Also, the ABA inhibited the expression of this gene during the incubation of the embryos, implying that this hormone acts as an antagonist of the GAs by blocking their synthesis.

Carp, Dina Judith. "Formación y estabilidad de espumas de proteínas de soja: efecto de la desnaturalización térmica y de la interacción con polisacáridos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se desarrolló un método de batido —reológico para la caracterización cinética de los mecanismos principales que conllevan a la desestabilización de espumas protéicas (drenaje de liquido, desproporción y colapso). El comportamiento de las espumas se correlacionó con propiedades de la interfase aire —agua, composición y agregación de las proteinas, y características viscosas de la fase continua. El agregado de un polisacárido no gelificante, goma xántica, presentó un efecto espesante y adicionalmente, aumentó el grado de agregación de las fracciones proteicas en solución y en la interfase aire — agua, e incrementó la presencia del polipéptido B en el film interfacial de la proteína desnaturalizada térmicamente, debido a una limitada compatibilidad termodinámica entre la proteína y el polisacárido a pH neutro. La goma participaría además en la interfase, por interacción electrostática con la proteína adsorbida, dominando la reologia de la misma y contribuyendo ulteriormente a la estabilización de las espumas. La desnaturalización presentó efectos contrapuestos en los diferentes mecanismos de desestabilización de espumas. En presencia de un polisacárido gelificante, K-carragenano (KC ≥ 0,3% p/p), las espumas gelificaron y la fase continua gelificada (KC conteniendo proteina de soja no adsorbida) fue determinante en la estabilidad de las espumas. La desnaturalización de la proteina de soja potenció efectos sinérgicos posibilitando una mayor velocidad de gelificación del KC, una mayor temperatura de fusión de los geles y un aumento de la histéresis entre la temperatura de gelificación y de fusión, aumentando la estabilidad de las espumas.

Abstract:
A whipping —rheological method was developed for the study of the main kinetic mechanisms of protein foams destabilisation (drainage, disproportionation and collapse). Foam behaviour was correlated with the interfacial properties, protein composition and aggregation and the continuous phase properties. Addition of a non-gelling gum, xanthan gum, showed a thickening effect. It also increased protein aggregation in solution and at the water — air interface and increased polypeptide B in the interfacial film of thermally denaturated protein, due to limited thermodynamic compatibility between the protein and the polysaccharide at neutral pH. Also, an electrostatic interaction of the gum with the adsorbed protein, may contribute to foam stability and dominated the interfacial rheology. Denaturation played opposite roles on the different mechanisms of foam destabilisation. In the presence of a gelling gum, K-carragenan (KC ≥ 0,3% p/p), foams gelled, and the continuous gelled phase (KC and non-adsorbed protein) determined foam stability. Soy protein denaturation increased synergetic effects, allowing greater gelling rates of KC, higher fusion temperatures of the gels and an increase in the histeresis between melting and gelling temperatures that increased foam stability.

Carlucci, María Josefina. "Modo de acción antiherpética de distintas clases de carragenanos aislados del alga roja Gigartina skottsbergii" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La evaluación de la actividad antiviral in vitro contra los virus herpes simplex (HSV) tipos l y 2 de las diferentes clases de carragenanos obtenidos del alga roja patagónica Gigartina skottsbergii y sus derivados cíclicos mostró la presencia de varios compuestos con actividad antiherpética. Los estudios de modo de acción y propiedades antivirales se realizaron con tres carragenanos con la mayor potencia antiviral, pertenecientes a cada uno de los distintos tipos estructurales: 1T1, λ-carragenano, 1C1, carragenano K/i, y 1C3, carragenano μ/v. Los tres compuestos mostraron un amplio espectro de actividad antiherpética contra cepas de referencia de HSV-1 y HSV-2, mutantes TK' resistentes a aciclovir y aislamientos clínicos, con un índice de selectividad superior a 1000. La acción antiherpética de estos polisacáridos fue independiente de la célula huésped, la cepa de virus, la multiplicidad de infección y el ensayo de actividad antiviral empleado. Asimismo, en las concentraciones inhibitorias antivirales, los carragenanos carecieron de actividad anticoagulante. Los estudios del mecanismo de acción de 1T1, lC1 y 1C3; sobre la infección de células Vero con HSV-1 se llevaron a cabo analizando su efecto en las distintas etapas del ciclo de multiplicación viral. Su principal blanco de acción fue la adsorción del virus a la célula, interfiriendo con la unión del virión a los receptores primarios, que son los residuos heparan sulfato de proteoglicanos presentes en la superficie celular. No fueron activos en etapas posteriores del ciclo viral, y uno de los carragenanos, 1T1, mostró además propiedades virucidas produciendo inactivación del virión. Para evaluar la capacidad de inducir resistencia antiviral y también caracterizar mejor el blanco de ataque de los compuestos, se realizaron pasajes seriados de HSV-l en células Vero en presencia de concentraciones crecientes de 1C3; y 1T1. Con 1T1, no se indujo resistencia, en tanto que las variantes virales seleccionadas con 1C3 mostraron un muy bajo nivel de resistencia, con valores de CI50 5-10 veces mayores que la cepa parental, y adquirieron la capacidad de formar sincicios en células Vero. El fenotipo sincicial fue independiente de la adquisición de resistencia parcial y se deberia a una alteración en la glicoproteína gB. Los tres carragenanos fueron también efectivos en inhibir la infección de HSV-1 y HSV-2 en astrocitos murinos, importante característica dado el caracter neurotrópico de estos virus. También mostraron efectos moduladores sobre la expresión de la proteína gliofibrilar ácida de los astrocitos. Se han realizado estudios in vivo con 1C3; y 1T1 utilizando el modelo de infección vaginal de ratones BALB/c con HSV-2, encontrándose protección superior al 90% en los animales que recibieron por lo menos dos dosis por via vaginal del carragenano 1T1. El conjunto de estos resultados indican la trascendencia de los carragenanos naturales estudiados como potenciales agentes antivirales, con promisorias posibilidades de aplicación terapéutica en forma tópica.

Abstract:
The evaluation of the antiviral activity in vitro against herpes simplex virus (HSV) types 1 and 2 of different classes of carrageenans obtained from the red patagonian seaweed Gigartina skottsbergii and their cyclic derivatives, showed the presence of many compounds with antiherpetic activity. The studies about the mode of action and the antiviral properties were carried out with the three more active carrageenans, belonging to each one of the different structual types: 1T1, λ-carrageenan, 1C1, K/t carrageenan, and 1C3, μ/v carrageenan. The three compounds showed a broad spectrum of antiherpetic activity against the reference strains of HSV-1 and HSV-2, as well as acyclovir resistant TK' mutants and clinical isolates, with a selectivity index greater than 1000. The antiherpetic activity of these polysaccharides was independent of the host cell, the virus strain, the multiplicity of infection and the antiviral assay. Furthermore, the carrageenans were devoid of anticoagulant activity at the antiviral effective concentrations. The studies of mode of action of 1T1, 1C1 and 1C3 on HSV-1 infected Vero cells were carried out analyzing their effect on the different stages of the virus replication cycle. Virus adsorption to the host cell was the main target of carrageenans, which interfered with virus binding to proteoglycan heparan sulphate residues present at the cell surface. No effect on later stages of the viral cycle were detected, but the λ-carrageenan 1T1 exerted virucidal action leading to virion inactivation. To evaluate the carrageenan ability to induce antiviral resistance and characterize the target of the compounds, serial passages of HSV-1 on Vero cells in the presence of increasing concentrations of 1C3 and lT1 were done. 1T1 did not induce viral resistance, whereas 1C3 selected viral variants with IC50 values 5-10 fold higher than parental strain. The HSV-1 variants arising in the presence of 1C3 acquired the ability to develop syncytia in Vero cells. An alteration on glycoprotein gB could be responsible of the syncytia] phenotype, which was not related to drug-resistance. The three carrageenans were also effective inhibitors of HSV-1 and HSV-2 infection of murine astrocytes, a relevant finding given the neurotropic properties of these viruses. They also showed modulatory effects on the expression of the gliofibrilar acid protein of astrocytes. The carrageenans 1C3 and 1T1 were evaluated for antiviral activity in vivo in a murine model of vaginal infection with HSV-2. More than 90% of the BALB/c mice receiving at least two doses of 1T1 were protected. These results indicate the relevance of natural carrageenans isolated from Gigartina skottbergii as potential antiviral agents, with promising perspectives of topical application.

Caputo Suarez, Carla Paula. "Regulación de la exportación de aminoácidos al floema en plantas de trigo (Triticum aestivum L.) y su impacto en la concentración final de proteínas en el grano" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La concentración de proteínas en el grano de trigo es uno de los determinantes de la calidad panadera y por lo tanto del precio del grano. Como los aminoácidos que las conforman provienen de los órganos vegetativos desde donde son transportados por el floema, el estudio de los factores que regulan la exportación de aminoácidos al floema es relevante para la comprensión de la acumulación de proteínas en el grano. En el presente trabajo se estudiaron las causas fisiológicas de la disminución en la concentración de proteínas en el grano debido a la ausencia del brazo corto del cromosoma 7B de trigo (Triricum aestivum L.) en la línea ditelosómica CSDT7BL de la variedad Chinese Spring. Se evaluó el transporte de aminoácidos desde los órganos fuente hacia el grano, que mostró estar disminuido a altas disponibilidades de N, con respecto a las plantas euploides. Por lo tanto se emprendió el estudio de la regulación de la exportación de aminoácidos al floema en plantas jóvenes de otras variedades cultivadas en condiciones controladas mediante la técnica de exudación facilitada con EDTA. Las plantas fijeron sometidas a diferentes regímenes de nitrógeno, lumínicos, o al agregado exógeno de citocininas. Se concluyó que en condiciones estables de crecimiento los aminoácidos exportados al floema provendrían del nitrógeno recientemente reducido, mientras que en situaciones de estrés, serían los aminoácidos almacenados previamente en las hojas o los derivados de la proteólisis los que se exportan. Por otro lado, esta exportación resultó ser independiente de la exportación de azúcares al floema, tanto como de la disponibilidad de fotoasimilados en las hojas, en cambio las citocininas mostraron un efecto promotor dependiente de la disponibilidad de nitrógeno. Luego, se emprendieron ensayos con las plantas CSDT7BL en cámara de cultivo exponiendolas a las condiciones determinadas en la primera parte, capaces de generar cambios en la exportación de aminoácidos. El conjunto de los resultados obtenidos sugiere que esta línea posee una deficiencia para la exportación de aminoácidos al floema que se manifiesta en altas disponibilidades de nitrógeno, alcanzando una meseta a una concentración externa de nitrógeno menor que en las euploides, que no pareciera depender de la forma en que éste se suministre. Esta deficiencia podria ser la causante de la disminución en la concentración de proteínas en el grano maduro, ya que se encontró una correlación positiva entre estos parámetros en las plantas cultivadas en el campo.

Abstract:
Grain protein concentration in one of the major determinants of wheat baking quality, and grain price. Nitrogen requirement of the developing grain is larger supplied by the amino acids transported via the phloem from vegetative organs. But, the regulation of amino acid export to the phloem is still far from clear. Through the present work the physiological causes of the decrease in grain protein concentration observed in the ditelosomic line CSDT7BL of wheat (Triticum aestivum L.) cv. Chinese Spring (CS), in which the short arm of chromosome 7B is missing, as compared to the normal line, were studied. As a first approach, the amino acid transport via the phloem was analyzed using the exudation in EDTA technique in CS and CSDT7BL plants grown to maturity in the field under two fertilization regimens. During grain development, when high nitrogen was supplied the CSDT7BL plants showed a lower amino acid concentration in the phloem exudate of the flag leaf than CS ones. In order to understand the processes that regulate the amino acids export to the phloem, a series of experiments were performed during vegetative growth period of different wheat cultivars grown in controlled condition and exposed to different nitrogen availability, light irradiance or external cytokinin addition. It was concluded that the rate of amino acid export from the leaf to the phloem is dependent on the nitrogen available to the plant. In plants grown under an adequate nitrogen and light supplies the amino acid export-pool is mainly originated from recently absorbed nitrogen, while under stress conditions the main amino acid source for export are the leaf amino acid-reserve pool or the proteolisis products. Besides, the export of amino acids did not show dependence on the rate of sugar export to the phloem, while cytokinins externally-supplied promoted it at high nitrogen availability. Finally, in a third set of experiments the ditelosomic line CSDT7BL of cv. Chinese Spring was cultured in controlled growth conditions and under different nitrogen and light supplies to alter the amino acid export, to the phloem. The results suggests that this line has a deficiency for the amino acid export to the phloem, revealed when nitrogen supplied is high but independently of the nitrogen source. This deficiency may account for the decrease in grain protein concentration observed in this line.

Calviño, María Ana. "Estudio de moduladores endógenos de la Na+, K+ -ATPasa cerebral durante el desarrollo postnatal en ratas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Na+, K+-ATPasa es una enzima especialmente abundante en las membranas neuronales de la región sináptica, que parecería ser crucial en el ciclo celular normal y durante la diferenciación del Sistema Nervioso. Los resultados aquí presentados demuestran la presencia de dos fracciones solubles de corteza cerebral de rata, picos I y II, con distinta capacidad modulatoria sobre la Na+, K+-ATPasa de membranas sinaptosomales en un estadio temprano del desarrollo postnatal de la rata (4 días de edad). Además, una subfracción más pura del pico II se aisló de la corteza cerebral de ratas neonatas semejante a la de ratas adultas (denominada endobaína E por las propiedades símil-ouabaína), pero con mayor actividad sobre la enzima. Sin embargo, debido al comportamiento del modulador sobre la actividad de la Na+, K+-ATPasa de membranas sinaptosomales de corteza cerebral de ratas neonatas se sugirió que dicha sustancia podría fijarse además a sitios no relacionados con la inhibición de la enzima. Trabajando con prismas de corteza cerebral de rata, se comprobó que la endobaína E estimula la hidrólisis de fosfoinosítidos en forma transitoria a lo largo del desarrollo postnatal, un mecanismo de señalización intracelular implicado en la regulación de la plasticidad sináptica de los períodos críticos en el desarrollo del Sistema Nervioso. Se demostró que el mecanismo de acción de esta sustancia endógena sería diferente del de la ouabaína, aún cuando el efecto de ambas involucra la activación del subtipo 5 del receptor metabotrópico del glutamato y la liberación de glutamato por reversión del transportador de dicho neurotransmisor. Los datos sugieren que la liberación del neurotransmisor no sería suficiente para explicar el efecto de dichas sustancias y en el caso de la ouabaína los resultados estarían de acuerdo con la existencia de un sitio de unión en el receptor glutamatérgico.

Abstract:
Na+, K+-ATPasa is a synaptic membrane enzyme which seems to be crucial in the normal cell cycle and differentiation of the Nervous System. The presence of two brain soluble fractions -peaks I and II- which differently modulate Na+, K+-ATPase activity is described at an early postnatal stage of rat development (4-day-old rats). A more purified II-E fraction, termed endobain E (endogenous ouabain-like factor), was isolated from neonatal rat brain cortex which exerted a higher inhibitory activity than the homologous fraction prepared from adult brain. Such endogenous Na+, K+-ATPase modulator behavior on neonatal versus adult synaptosomal membrane suggested its binding to membrane sites unrelated of enzyme inhibition. Employing rat brain prisms, we found that, similar to ouabain, endobain E transiently stimulates phosphoinositide hydrolysis during postnatal brain development, a mechanism most likely responsible for neuronal neocortical plasticity during critical periods. Although the effect of both endobain E and ouabain involve subtype 5 metabotropic glutamate receptor activation and glutamate release through reversal of the plasma membrane glutamate transporter, a dissimilar mechanism was proved. Data suggested that glutamate release is not enough to explain the effect of both substances and are in favour of the existence of a glutamate receptor binding site for ouabain.

Calcagno, Graciela Elena. "Comportamiento reproductivo en la Mosca del Mediterráneo, Ceratitis capitata (Díptera: Tephritidae) y su aplicación en programas de Control Genético" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La mosca del Mediterráneo, Ceralitis capirata (Wiedeman), constituye una de las plagas de los frutales de mayor importancia en el mundo por los graves perjuicios económicos que produce. En la actualidad la prosperidad de una región fruti-horticola depende principalmente de que pueda ser declarada zona libre de la mosca del Mediterráneo. Un método no contaminante para su control es la técnica del insecto estéril (TIE), este está siendo aplicado con éxito en algunas regiones de nuestro país. La eficiencia de esta técnica depende de la capacidad de los machos esterilizados, producidos por cría masiva, para aparearse en el campo con hembras salvajes. Por ello el análisis del comportamiento sexual de esta especie es fimdamental para establecer controles de calidad de las líneas a ser utilizadas en la TIE. El presente trabajo se refirió al análisis del comportamiento reproductivo y la selección sexual en la mosca del Mediterráneo. Se comparó el comportamiento reproductivo de líneas de cría masiva de C. capitala con el de las moscas salvajes. Asimismo se analizó el efecto que produce la radiación sobre dicho comportamiento. Esto se hizo en dos condiciones experimentales: a) En condiciones seminaturales por observación directa en jaulas de campo y b) En condiciones simuladas en laboratorio, por observación fina a través de videograbaciones. Se verificaron diferencias entre líneas en cuanto al patrón de comportamiento en el cortejo. Los machos de laboratorio tendieron a usar menos tiempo que los salvajes en actividades que no conducen directamente a la cópula. Como consecuencia, hay una tendencia de las líneas de laboratorio a alcanzar la cópula antes que las salvajes en condiciones de laboratorio. Por otro lado, se observó una disminución de la eficiencia de las moscas irradiadas en su capacidad para competir por el aparcamiento tanto en laboratorio como en jaulas de campo.

Abstract:
The Mediterranean fruit fly (medfly), Ceratitis capitata (Wideman), is one of the most important world wide pest of commercial orchards, causing severe economical damages. Nowadays the prosperirty of a production areas is highly dependent of it could get the status of medfly free zone. The sterile insect technique (SIT) is a non-contaminating method currently applied in Argentina for medfly control. The efficiency of this technique depends on the ability of mass-reared and sterilized males to mate wild females in the field. Consequently, the analysis of sexual behavior in this species is paramount to set quality control procedures to test the strains used in SIT programmes. This work dealt with the analysis of mating behavior and sexual selection in the medfly. Mating behavior was compared between mass-reared strains and wild flies. Two experimental conditions were used: a) Semi-natural conditions, through direct observations in field cages, and b) laboratory simulated optimal conditions, through video-recording fine observations. Differences in courtship behavior were verified between strains. Usually laboratory males spend less time in activities that do not lead to copulation than wild males do. Consequently, laboratory strains tend to reach copulation before than wild males in laboratory conditions. By contrast, the efficiency of radiation sterilized laboratory males is lower than that of wild males in laboratory and field cage conditions.

Buzzola, Fernanda Roxana. "Aislamiento, caracterización e identificación clonal de mutantes auxótrofas de Staphylococcus aureus : aplicación al desarrollo de vacunas" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Burín, Leila. "Reacciones químicas en sistemas lácteos de humedad reducida y su relación con transformaciones físicas del medio" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo fue investigar la influencia de las propiedades físicas de las matrices (grado de compactación, transición vítrea, cristalinidad), con cambios a nivel molecular, evaluados a través de la determinación del grado de avance de reacciones químicas: pardeo no enzimático (PNE), actividad enzimática, resistencia térmica enzimática y su relación con la composición, los cambios de pH y la humedad. Los sistemas empleados consistieron en matrices de baja humedad con componentes de suero lácteos. Tanto el PNE como la inactivación enzimática tuvieron lugar en muestras en estado vítreo. La velocidad a la que ocurrieron las reacciones químicas (PNE, actividad enzimática, resistencia térmica enzimática) en matrices amorfas estuvo afectada por modificaciones en las matrices que no se manifestaron en cambios en el valor de la temperatura de transición vítrea de los sistemas. En sistemas vítreos, las muestras comprimidas desarrollaron mayor velocidad de PNE que las muestras en polvo, para todas las composiciones estudiadas. La cristalización (parcial o total) de las matrices provoca un incremento de la velocidad de reacciones químicas debido a la concentración de reactivos en las regiones amorfas excluidas del cristal. Estas observaciones llevan a distinguir entre fenómenos que ocurren a un nivel supramolecular, e involucra aspectos cooperativos entre las moléculas (como lo es la transición vítrea) de fenómenos que ocurren a un nivel molecular, como las reacciones de PNE,actividad enzimática o resistencia térmica enzimática. Es importante notar que ambos tipos de fenómenos se desarrollan en diferentes escalas de espacio y tiempo, y esto lleva a que las reacciones químicas puedan no estar gobernadas por las propiedades macroscópicas del medio.

Abstract:
The objective of the present work was to investigate the influence of physical properties of the system (porosity degree, glass transition, crystalline state) with molecular changes evaluated through measurements of chemical reactions: non-enzymatic browning (NEB),enzyme activity and enzyme thermal resistance, and its relationship with the system composition, changes on pH and moisture content. The systems consisted in low moisture matrices composed mainly of dairy components. NEB and enzyme inactivation were observed to occur in the glassy state. The rate at which the chemical reactions (NEB, enzyme activity and enzyme thermal resistance) were performed in amorphous matrices were affected by matrices modifications, not manifested as changes in the value of the glass transition temperature. Glassy compressed samples developed higher NEB rates than porous samples at all studied compositions. System crystallization (partial or total) promoted an increase of chemical reactions due to the reactants concentration at the amorphous regions, excluded from the crystal. These observations able us to distinguish between supramolecular phenomena, which involucrate cooperative mechanisms between molecules (like the glass transition), from a molecular level, as NEBreactions, enzyme activity or enzyme thermal resistance. It’s important to note that both phenomena developed at different time/space scales, accordingly, chemical reactions may not be governed by the macroscopic properties of the system.

Bucci, Sandra Janet. "Arquitectura hidráulica y relaciones hídricas de árboles de sabanas neotropicales : efectos de la disponibilidad de agua y nutrientes" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las sabanas neotropicales se caracterizan por tener una matriz herbácea continua con árboles y arbustos aislados. El objetivo de este estudio fue evaluar el significado funcional de las respuestas morfológicas y fisiológicas de especies leñosas a variaciones espacio-temporales en la disponibilidad de recursos en una de las sabanas neotropicales más importantes (el Cerrado en el Centro de Brasil). Las variaciones en los recursos disponibles para los árboles de estas sabanas, están determinadas por factores tales como la estacionalidad en las precipitaciones, el déficit de saturación del aire (DSA) y la disponibilidad de nutrientes en el suelo, así como por variaciones espaciales en la densidad de árboles. Las densidades aumentan desde campo sujo (960 individuos por ha) hasta el cerradão (3343 individuos por ha), pasando por el cerrado en sentido estricto con densidades intermedias. Se observaron fluctuaciones estacionales promedios de un 10 % en el contenido de agua del suelo en los primeros 300 cm de profundidad y también en la demanda evaporativa del aire. Como respuesta a estos cambios, los árboles de varias especies tuvieron potenciales hídricos foliares menores en la estación seca, con disminuciones de hasta 2,6 MPa entre las estaciones húmeda y seca. En ambas estaciones, los árboles del Cerrado mostraron un fuerte control estomático de la transpiración, pero las conductancias estomáticas fueron casi el 50% menores en la estación de sequía. A pesar de este cierre estomático parcial, las tasas diarias de transpiración fueron similares entre estaciones, mientras que los flujos diarios por individuos tendieron a ser menores en la estación seca. La reducción en el área foliar total durante la estación seca provocó una disminución de la razón entre el área foliar y el área de xilema activo (AF/AX); esto condujo a una mayor eficiencia en el sistema de transporte de agua. Como consecuencia de DSA altos durante las horas de la noche, los flujos nocturnos fueron relativamente altos, en especial durante la estación seca, observándose que hasta un 24 % del consumo diario de agua ocurre durante la noche. Los árboles en el cerradão, que dispusieron de una menor cantidad de agua por debajo de los 100 cm de la superficie del suelo debido a la alta densidad de árboles, experimentaron ajustes osmóticos pasivos como consecuencia de la disminución del contenido simplástico de agua, sin que los potenciales hídricos foliares mínimos cambiaran, en comparación a los árboles en el campo sujo. Las propiedades específicas de cada individuo, relacionadas con la eficiencia en el transporte de agua y el tamaño de los reservorios internos de agua influyeron significativamente en la economía de agua de los árboles. Los árboles que tuvieron tasas diarias de transpiración altas no experimentaron déficit hídricos significativos debido a que tienen reservorios de agua relativamente grandes y una mayor eficiencia del sistema de transporte de agua. Se observaron cambios diurnos en la conductividad específica, lo que sugiere que en el sistema de conducción de agua existen procesos continuos y dinámicos de formación y reparación de vasos embolizados, que ocurren a una escala temporal menor a 24 hs. Como resultados de fertilizaciones con N y P se produjeron cambios sustanciales en la arquitectura hidráulica de las plantas debido a modificaciones en el área foliar total y en el diámetro de los troncos. Estos cambios fueron más favorables desde el punto de vista de las relaciones hídricas en los árboles de sitios con fertilizaciones con P. En este tratamiento los cambios produjeron un aumento en la capacidad de transporte de agua en relación al área foliar total (AF/AX), lo que les permitió mantener potenciales hídricos mayores (más positivos). Los árboles en sitios fertilizados con N tuvieron respuestas opuestas. Toda estas series de combinaciones de características morfológicas y funcionales, así como las respuestas fisiológicas de aclirnatación, que ocurren cuando se producen cambios en condiciones ambientales, les permiten a los árboles del Cerrado mantener flujos de agua altos durante el año, sin que experimenten déficit hídricos, lo cual posibilita que una gran cantidad de especies leñosas pueda expandir sus hojas durante la estación seca.

Abstract:
The neotropical savannas are characterized by a continuous herbaceous layer with isolated trees and shrubs. The objective of this study was to assess the functional significance of morphological and physiological traits of woody species in response to temporal and spatial variation in resource availability. This study was carried out in one of the most important neotropical savannas, the Brazilian Cerrado. The variations in resource availability in Cerrado ecosystems are determined by factors such as seasonal precipitation and changes in the air saturation deficit (ASD), soil nutrient content and tree density which affect soil water availability. Tree density increases from campo sujo (960 individuals per ha) to cerradão (3343 individuals per ha), with other physiognomies containing intermediate tree densities. Soil water content differed by about 10% between wet and dry seasons in the upper 300 cm of soil. Air saturation deficits were substantially higher during the dry season. Leaf water potentials of several tree species were more negative during the dry season compared to the wet season. In some cases 2,6 MPa water potential differences were observed between both seasons. Also in both seasons the trees exhibited a strong stomatal control of transpiration. Average stomatal conductance, however, was 50 % lower during the dry season. Despite lower stomatal conductance during this period total daily sap flow per unit leaf area tended to be similar among plants but daily water loss per individuals was significantly lower. As a consequence of a lower total leaf surface area during the dry season, the ratio between leaf area and sapwood cross sectional area (LA/XA) was also lower, resulting in an increase in the water transport efficiency from soil to leaves. Nocturnal transpiration was relatively high due to high ASD, particularly during the dry season. Nocturnal transpiration accounted up to 24% of the total daily water use per tree. Soil water availability was lower in the cerradão below the first 100 cm soil depth compared to the campo sujo sites. The cerradão trees experience passive osmotic adjustment due to the decrease in the symplastic water content. However the leaf water potentials were not different between both sites. The water transport efficiency in each individual tree, and therefore their water economy, were influenced by the size of the internal water storages. Trees with higher transpiration rates did not experienced larger water deficits due to the relatively larger water storages and more efficient water transport system. Diurnal changes in specific hydraulic conductivity observed in two tree species suggest that embolism formation and repair occurred on a daily basis. N and P fertilizations resulted in substantial changes in the hydraulic architecture of trees due to variations in total leaf surface area and stem diameter. Trees in P fertilized sites improved their water relations due to an enhancement of the water transport efficiency (lower LA/XA) which allowed them to maintain higher leaf water potentials. Trees in N fertilized sites had opposite responses in terms of water transport efficiency. The morphological and physiological acclimation responses observed in Cerrado trees have an adaptive value allowing the trees to maintain high flow rates even during the dry season without experiencing water deficits, which allow them to expand new leaves during this unfavorable period for growth.

Braga Gomes, Paula. "Estudio de la Vicariancia en alguna especies de anémonas de mar (CNIDARIA, ACTINIARIA) del intermareal de Brasil y Argentina con el uso de datos morfológicos y genéticos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Estudio de la vicariancia en algunas especies de anémonas de mar (Cnidaria, Actiniaria) del interrnareal de Brasil y de Argentina con el uso de datos morfológicos y genéticos. Se realizaron estudios morfológicos y genéticos con la anémona de mar Bunadosoma cangicum de Brasil. Para los estudios morfológicos se utilizaron cuatro poblaciones provenientes de: Piedade y Tamandaré en Pemambuco, Aracruz en Espírtu Santo y Buzios en Río de Janeiro. Se estudiaron 14 caracteres morfológicos cuyas variaciones fueron analizadas con el test no parametrico de Kruskal-Wallis. Siete variables no presentaron la misma media en las cuatro localidades: número de vesículas por fila, número de tentáculos y de acrorhagi, diámetro de los acrorhagi, peso húmedo, altura de la columna y diámetro del margen. La población de Buzios fue la que más se diferenció, indicando la presencia de ecotipos. Se utilizó el test de correlación de Pearson para evaluar si los caracteres variaban de forma concomitante. Entre los caracteres estimadores de la talla, el peso húmedo fue el que mejor se correlacionó oon los demás, resultando ser éste el carácter más representativo del tamaño real del individuo. El largo y ancho del esfinter se relacionaron significantemente entre sí pero con independencia de la talla. Asimismo se realizaron estudios genéticos comparando las especies B. cangícum de Brasil (Buzios y Tamandaré), B. zamponianum n. sp. de Argentina (Santa Clara del Mar y Punta Cantera), B. caissarum de Brasil (Buzios) y B. granuliferum de Curacao (Caracas baai y Boka Saint Mitchel). Los estudios aloenzimátieos confirmaron que B. zamponianum pertenece al género en estudio, y es diferente de todas las demás especies. Esta especie y B. cangicum mostraron la identidad génica más elevada. Considerando las similitudes morfológicas y ecológicas, se discute la posible vicariancia de estas dos especies.

Abstract:
Studies on vicariance of some sea anemone species (Cnidaria: Actiniaria) from the intertidal zone of Brazil and Argentina using morphologic and genetic data. The present work carries out a morphologic and genetic study on Bunodosoma cangicum, a species of sea anemone from Brazil. Four populations were used for the morphologic studies: Piedade and Tamandaré in Pemambuco, Aracruz in Espírito Santo and Buzios in Rio de Janeiro. Fourteen characters were studied and the results analized by the Kruskall-Wallis Test. Seven characters did not present the same average in the four localities: number of vesicles by row, number of tentacles and acrorhagi, acrorhagi diameter, wet weight, height of the column and diameter of the margin. The population of Buzios was the most different, indicating the presence of ecotypes. The Pearson Correlation Test was used to evaluate whether the characters varied in a concomitant way. The wet weight related positiver to all the other characters estimators of the stature, verifying itself to be the most representative character of the real size of the individual. The length and width of the sphincter were related significantly, but independent of the stature. Genetic studies were also done comparing the species, B. cangicum from Brazil (Buzios and Tarmndaré), B. zamponianum (new species described in this work) from Argentina (Santa Clara del Mar and Punta Cantera), B. caissarum from Brazil (Buzios) and B. granuliferum from Curacao (Caracas Baai and Boka Saint Mitchel). The allozyme analysis confirmed that B. zamponianum belongs to the genus under study, and it is different from all the other species. In addition, this species and B. cangicum had the highest genetic identity. Thus, considering the morphological and ecological similarities, the possibility of these two species to be vicariants is discussed.

Borges da Silveira, Rosa Mara. "Contribución al conocimiento del género Polyporus s. str. (Basidiomycetes) en el Cono Sur de América en base a sus características morfológicas, biológicas y moleculares" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo se estudió el género Polyporus s. str. en el Cono Sur de América. Para ello, se dividió su tratamiento en 4 partes: l) morfología; 2) ensayos de compatibilidad; 3) estudios isoenzimáticos y 4) taxonomía numérica. Se analizaron los caracteres macro- y micromorfológicos de 350 colecciones y 88 holotipos de los Herbarios K, PC, UPS, LPS, BAFC, ICN y SP. Se hicieron cruzamientos intra- y interespecificos de l44 cultivos monospóricos y lO cultivos polispóricos. Se estudiaron 42 aislamientos dicarióticos, 42 monocarióticos y 34 cruzamientos entre ellos mediante la electroforesis horizontal en geles de poliacrilamida, para seis actividades enzimáticas: EST, 6PGD, IDH, MDH, SHDH y SOD. Se analizaron 44 bandas totales. Por otra parte, se hizo un análisis numérico de los patrones de bandas isoenzimáticas y de los caracteres morfológicos. Los resultados de los ensayos de compatibilidad y estudios isoenzimáticos corroboraron aquellos obtenidos en el análisis morfológico. Además, en el análisis numérico se pudo establecer buena correlación entre los datos moleculares y los morfológicos. Este trabajo permitió identificar 20 especies y una variedad en el área estudiada. Estas fueron separadas en 5 subgéneros: Polyporus, Melanopus, Polyporellus, Favolus y Austropolyporus subgen. nov.

Abstract:
In the present work, the genus Polyporus s. str. in the “Southern Cone of America was studied. For this, the analysis was divided into 4 parts: l) morphology; 2) compatibility tests; 3) isoenzymatic studies and 4) numerical analysis. The macro and microscopic characters of 350 collections and 88 holotypes from the Herbaria K, PC, UPS, LPS, BAFC, ICN and SP were examined. Intra- and interspecífic pairings of l44 single-Spore cultures and 10 polyspore cultures were made. Forty two dikaryotic isolates, 42 monokaryotic isolates and 34 pairings were examined by horizontal polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) for six enzymatic activities: EST, 6PGD, IDH, MDH, SHDH and SOD. A total of 44 bands were analysed. On the other hand, a numerical analysis of the isoenzymatic patterns and the morphological characters was undertaken. The results of the compatibility tests and isoenzymatic studies, corroborated those furnished by morphological characters. By analysing numerically the isoenzymatic patterns and the morphological characters, a good correlation between molecular and morphological data was established. This research allowed us to identify 20 species and one variety in the area under study. These were distributed among 5 subgenera: Polyporus, Melanopus, Polyporellus, Favolus and Austropolyporus subgen. nov.

Bessega, Cecilia. "Estructura poblacional y relaciones filogenéticas (Distancia y Parsimonia) en especie de Prosopis (Leguminosae) en base a marcadores moleculares" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Prosopis es un género que presenta gran importancia desde el punto de vista económico, ecológico y evolutivo. Habita en las principales zonas áridas y semiáridas del mundo y en base a su morfología ha sido dividido en cinco secciones denominadas Prosopis, Anonychium, Monilicarpa, Strombocarpa y Algarobia. Esta última incluye 30 especies de las cuales la mayor parte habitan en América, con el principal centro de diversidad en Argentina. Algunas especies de esta sección hibridan frecuentemente en la naturaleza dando lugar a individuos con fenotipos intermedios, difíciles en algunos casos de determinar. En este trabajo se analizaron marcadores bioquímicos y moleculares en poblaciones de P. glanadulosa, P. velutina, P. alba, P. nigra, P. vinalillo, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P. chilensis, P. affinis, P. kuntzei de Algarobia, P. reptans de Strombocarpa y P. argentina de Monilicarpa. Se estudiaron poblaciones naturales mediante las técnicas de electroforesis de isoenzimas y RAPD con el objeto de identificar loci diagnóstico, estimar la variabilidad y analizar la estructura poblacional. Se compararon poblaciones naturales de diferente subcontinentes pertenecientes a Algarobia junto con P. reptans (Strombocarpa) y P. argentina (Monilicarpa). Los resultados señalaron que P. velutina y P. kuntzei son las únicas que presentaron loci isoenzimóticos diagnósticos. Las especies Norteamericanas P. grandulosa y P. velutina no presentaron bandas RAPD diagnósticas con los “primers” ensayados. Los niveles de variabilidad genética estimados en las poblaciones Norteamericanas son semejantes a los de las especies Sudamericanas de la misma sección; y las poblaciones presentan las misma variantes isoenzimóticas. Los niveles de variabilidad genética de P. reprans (Strombocarpa) y P. argentina (Monilicarpa) no difieren entre sí, aunque son significativamente menores que las de las especies de Algarobia. La diferenciación genética entre las poblaciones de la sección Monilicarpa es menor a la presentada por las especies de Algarobia estudiadas. Como consecuencia, el flujo génico estimado entre las poblaciones de P. argentina es mayor que el de las especies de Algarobia. Un estudio de individuos agrupados por familias fue realizado mediante electroforesis de isoenzimaspara inferir el sistema de apareamiento en siete especies de la sección Algarobia. Los resultados mostraron que las especies presentan en la mayoría de los casos fecundación cruzada pero que hasta un 28% de autofecundación puede ocurrir (tm varió entre 0.72 y 1). El valor promedio en todas las especies aquí estudiadas es de 15%. Las tasas de fecundación cruzada variaron entre los árboles dentro de las poblaciones y la mayoría de los individuos analizados (semillas) dentro de cada familia eran hermanos completos. Se realizó un estudio de RFLP utilizando como sonda 27.7 kb de cpDNA heterólogo de Nicotina tabacum en 11 especies del género. Los resultados no mostraron variación intraespecífica en ningún caso y sólo permitieron diferenciar a P. reptans y a P. kuntzei de las restantes especies de Algarobia estudiadas (P. alba, R nigra, P. vinalillo, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P.glandulosa, P. affinis). Por último, las relaciones filogenéticas entre las especies fueron reconstruidas mediante métodos de distancia y parsimonia a partir de las frecuencias alélicas isoenzimáticas, de las secuencias correspondientes al intergén TrnD-TrnT(cpDNA) y de las secuencias de los espaciadores internos transcriptos de ADN ribosómico (ITS-1 e ITS-2). Los fenogramas obtenidos a partir de los datos de enzimas señalaron que P. reptans (Strombocarpa), P argentina (Monilicarpa) y P. kuntzei son las especies mas diferenciadas. A pesar de que los cladogramas de cpDNA y de ADNr resultaron incongruentes, presentan consistencia. El orden relativo de divergencia señalado en ambos cladogramas concuerda con el nivel de diferenciación genética en los fenogramas. Además, ni los fenogramas ni los cladogramas están de acuerdo con la clasificación morfológica en series propuesta para este grupo.

Abstract:
Prosopis is a very important genus from the economic, ecological and evolutionary point of view. It occupies the main arid and semi-arid areas of the world and, based on the morphology, its species have been divided into five sections denominated Prosopis, Anonychium,Monilicarpa, Strombocarpa and Algarobia. The latter includes 30 species, most of which are American, with the main diversity center in Argentina. Some species of this section frequently hibridise in the nature producing individuals with intermediate phenotypes that sometimes are difficult to determine. In this work biochemical and molecular markers were analyzed in populations of P. glandulosa, P. velutina, P. alba, P. nigra, P. vinalillo, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P. chilensis, P. affinis, P. kuntzei of Algarobia, P. reptans of Strombocarpa and P. argentina of Monilicarpa. Natural populations were studied by means of isoenzyme electrophoresis and RAPD techniques, in order to identify diagnostic loci, to estimate the variability and to analyze the structure of populations. Populations of species from different subcontinents belonging to Algarobia were compared, together with P. reptans (Strombocarpa) and P. argentina (Monilicarpa).The results indicated that P. velutina and P. kuntzei are the only ones which showed isoenzymatic diagnostic loci. The North American species, P. glandulosa and P. velutina, did not present diagnostic RAPD bands with the primers here used. Genetic variability estimates in populations of North American species of Algarobia are similar to those of the South American ones of the same section, and they share most isoenzymatic alleles. P. reptans (Strombocarpa) and P. argentina (Monilicarpa)do not differ from each other in genetic variability, but their variability is significantly lower than that of species of Algarobia. The genetic differentiation among populations in the section Monilicarpa is lower than in the species studied of Algarobia. Thus, the estimated gene flow among populations of P. argentina is higher than those of Algarobia species. A study of individuals grouped by families was carried out by isoenzyme electrophoresis to estimate parameters of the mating system in seven species of the section Algarobia. The results showed that species are mostly outcrosser but up to 28% of selfing can occurs (tm varied between 0.72 and 1). The average value in all the species here studied is of 15%. Outcrossing rates vary among the trees within the populations and most of the analyzed individuals(seeds) within each family are full sibs. A study of RFLP using a heterologous cpDNA probe of Nicatiana tabacum (27.7 kb) was carried out in 11 species of the genus. The results did not show intraspecific variation in any of the species studied. Only P. reptans and P. kuntzei could be distinguished from the remaining studies species of Algarobia (P. alba, P. nigra, P. vinalilla, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P.glandulosa, P. affinis). Finally, the phylogenetic relationships among species were reconstructed through distance and parsimony methods from isoenzymatic allelic frequencies, the sequences corresponding to the intergenic region TrnT-TrnD(cpDNA) and the sequences of internal transcribed spacers from ribosomic DNA (ITS-1 and ITS-2). The phenograms obtained from the enzyme data indicated that P. reptans (Strombocarpa), P. argentina (Monilicarpa)and P. kuntzei are the most differentiated species. Although the cpDNA and rDNA cladograms were incongruent, they present some consistence. The relative divergences of basal nodes in both cladograms are consistent with the level of genetic differentiation in the phenograms. Furthermore, none of the trees agrees with the morphological classification of proposed series for this group.

Berretta, Marcelo Facundo. "Dos nuevos genes de Beauveria bassiana : Una quitonasa y una proteína de transporte que podrían estar relacionados con la patogenicidad" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La búsqueda de genes relacionados con la patogenicidad de Beauveria bassiana, se llevó a cabo siguiendo la estrategia de estudiar la expresión de una cepa virulenta del hongo, cultivada in vitro, en condiciones nutricionales similares a las que este patógeno se encuentra sometido durante la penetración del hospedante. Para ello se utilizó como única fuente orgánica de crecimiento, una preparación de la cutícula del insecto Diatraea saccharalis, el sustrato natural cuya degradación es requerida para el establecimiento de la infección. Se aplicó la técnica de Differential display para la detección de genes que se expresaran en forma diferencial bajo esta condición. Por comparación entre los productos de amplificación de ADNc, obtenidos por RT-PCR del ARN extraído del hongo cultivado con cutícula, o sin ella, se detectaron fragmentos únicamente presentes en el primer caso. Los patrones de bandas se obtuvieron utilizando un primer oligo-dT, en combinación con decámeros de secuencia arbitraria. Se desarrolló una metodologia que consistió en la marcación de los productos de PCR con grupos fluorescentes, y su análisis en un sistema de secuenciación automática. Los fragmentos amplificados diferencialmente fueron utilizados como sondas, para estudiar el nivel de expresión de los transcriptos correspondientes, por la técnica de northern. Paralelamente, se determinó el número de copias de los genes respectivos, en el genoma de B. bassiana, mediante la técnica de southern. Se construyó una genoteca de ADN genómico de B. bassiana en un vector de sustitución derivado del fago λ. El screening de la misma con una sonda de expresión diferencial, permitió identificar un gen que codifica para una proteína deducida de 495 aminoácidos. La secuencia de la misma, presentó homología con una familia de proteínas de transporte a través de membrana, de especificidades diversas. Adyacente a dicho gen, en posición aguas arriba de la secuencia genómica, se identificó otro gen de copia única y de expresión concertada con el anterior, que codifica para la enzima quitosanasa. Con la secuencia del ADNc se comprobó la existencia de dos intrones en la estructura primaria del gen. La proteína deducida, de 232 aminoácidos, presenta 74% de identidad de secuencia con la misma enzima de otro hongo entomopatógeno, Metarhizium anisopliae. Otras tres secuencias fúngicas completan el grupo de quitosanasas eucariotas conocidas, separado de las enzimas de origen bacteriano, por análisis de agrupamiento en base a similitud de secuencia. Se propone la participación de esta enzima en la degradación de la cutícula de los insectos, por parte de los hongos entomopatógenos.

Abstract:
A virulent strain of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana was cultured in vitro under nutritional conditions resembling those encountered by the pathogen during penetration of the host. This strategy was followed to study the expression of fungal genes related to pathogenicity. The fungus was grown with the cuticle of the insect Diatraea saccharalis as the sole source of carbon and nitrogen. The degradation of this substrate is needed for the infection to be accomplished. The Differential display technique was used to detect genes that were differentially expressed under this culture condition. The cDNA amplification products obtained by RT-PCR of the mRNA extracted from the fungus cultured with, or without cuticle, were compared. By this means, fragments only present in the former condition, were detected. The banding patterns were obtained by using an oligo-dT primer in combination with 10-mer primers of arbitrary sequence. Original protocols were developed to perform the analysis on an automated DNA sequencer, through the incorporation of fluorescent labels in the PCR products. The differentially amplified fragments were used as probes to study the expression level of the corresponding genes by northern. The southern technique was used to estimate the copy number of the genes within the genome. A λ derived cloning vector was employeed in the construction of a genomic library of the fungus. The screening of this library with a differential probe allowed for the detection of a gene encoding a protein of 495 amino acids. The deduced sequence of this protein shows similarity to members of a family of membrane transporters with diverse specificities. Another gene is located immediately upstream. This one was also found to be overexpressed in culture on cuticle. It encodes the enzyme chitosanase. The cDNA sequence evidenced the existence of two introns in the primary structure of the gen. The deduced protein has 232 amino acids, and it shows 74% identity with the same enzyme of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae. The other three chitosanase genes from eukaryotic origin, which are known to date, belong to fungi. They cluster together and remain separate from the bacteria] proteins, when their sequences are compared. The enzyme produced by entomopathogenic fungal species is a good candidate to participate in the degradation of the insect cuticle

Berenstein, Mariana G.. "Diseño, caracterización, producción y utilización de vectores virales y plasmídicos para terapia génica del cáncer" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La transferencia in vivo del gen de la timidina kinasa del virus herpes-1 seguido por la administración de la prodroga ganciclovir (HSV-tk/GCV) y su posterior activación in situ, surgió como una estrategia de terapia génica eficaz para el tratamiento de tumores experimentales y humanos. Se había demostrado la existencia de un efecto “bystander” por el cuál las células no modificadas por el gen también eran eliminadas por GCV activado por el gen HSV-tk. Sin embargo, su validez fue cuestionada desde diferentes perpectivas, entre ellas el sistema de transferencia y el modelo tumoral utilizado. Dada la disparidad de resultados en diferentes modelos experimentales, construimos un vector retroviral conteniendo el gen de HSV-tk y obtuvimos células productoras de vectores retrovirales (VPC). Utilizando dichas células como fuente de tranferencia génica, estudiamos la eficiencia de transducción in vivo en células malignas sobre tres modelos tumorales distintos: melanoma murino B16, melanoma humano IIB-MEL-LES y glioblastoma de rata C6. En estudios in vitro pudimos observar un efecto bystander sólo en células C6. Los estudios in vivo mostraron una inhibición del crecimiento tumoral en los dos modelos de melanoma cuando las células eran co-inoculadas con VPC productoras de vectores retrovirales portando el gen HSV-tk (VPC-tk) y tratadas con GCV. Sin embargo, el 100% de los animales fue capaz de desarrollar tumores en ambos modelos . Bajo las mismas condiciones experimentales, 70% de las ratas fueron capaces de rechazar células de glioma C6 transferidas de modo intracraneal por técnicas estereótaxicas y el 50% de los animales mostró un aumento significativoen el tiempo de sobrevida. El tratamiento de tumores C6 establecidos con VPC-tk y GCV, llevó a la cura del 33% de los animales. Las ratas que rechazaron el tumor primario fueron capaces de desarrollar una respuesta inmune de memoria que lleva al rechazo de desafíos contralaterales con células parentales. A los efectos de aumentar el efecto terapéutico estudiamos el efecto antitumoral de la tranferencia del gen de interleuquina-12 solo o en combinación con el gen HSV-tk y tratamiento con GCV, sobre tumores de cerebro intracraneales y los mecanismos involucrados en el rechazo tumoral. Luego de la transferencia i.c.de células productoras VPC-IL12, se lograba suprimir el crecimiento de tumores C6, aún en tumores establecidos de 10 días. La combinación con células VPC-tk y GCV tuvo mejor efecto terapéutico que los dos tratamientos por separado sobre tumores incipientes. Los estudios de los mecanismos asociados a la respuesta antitumoral demostraron la participación de eventos inmunológicos y no inmunológicos. Secciones histológicas de cerebros con expresión local de IL-12 mostraron una activación inmediata de macrófagos/microglia y su reclutamiento a áreas intratumorales. La expresión de IL-12 también fue capaz de estimular un reclutamiento de PMN e inducir necrosis de vasos tumorales, mientras los vasos del parénquima normal no se vieron afectados. Por otro lado, el tratamiento con HSV-tk/GCV mostró un infiltrado mayoritario de células CD5+. Además, únicamente la combinación de IL-12 y HSV-tk/GCV fue capaz de reclutar células CD4+ y CD8+ cuando el tratamiento era aplicado a tumores de gran tamaño. Los animales sobrevivientes desarrollaron una inflamación crónica en el sitio de inyección primario compuesto de macrófagos y linfocitos en distintas proporciones según el tipo de terapia inicial aplicado. Este infiltrado crónico no fue perjudicial para el cerebro ya que no se observaron evidencias de desmielinización ni tampoco daños neurológicos asociados. Por lo tanto este estudio provee las bases para comprender los mecanismos involucrados en la respuesta antitumoral inducida por IL-12, sola o en combinación con el sistema del gen suicida y apoya el uso de la terapia combinada para el tratamiento de tumores de cerebro. Un clon de VPC terapéutico portando el gen de HSV-tk fue también seleccionado para su utilización en protocolos clínicos. Este clon mostró una mayor eficacia antitumoral que la preparación original. Finalmente, se construyeron y caracterizaron nuevos vectores para su uso en terapia génica, basados en sistemas regulables e inducibles por condiciones exógenas (tetraciclina) y endógenas del tumor (hipoxia tumoral).

Abstract:
In vivo transfer of the herpes simplex virus thymidine kinase gene followed by ganciclovir administration (HSV-tk/GCV) and in situ activation of the prodrug, has evolved as an effective approach to the treatment of tumors of experimental and human origin. In vitro studies were able to demonstrate the development of a“bystander effect" that led to the death of cells that do not express the gene, in the presence of GCV activated by HSV-tk modified cells. However, several studies have questioned the validity of this approach, mainly in terms of the gene transfer system being used and the experimental model to which they applied. Considering the different results that were reported on different experimental tumor models, we made a retroviral vector containing the HSV-tk gene and retroviral vector producer cells (VPC) were obtained. By using these (VPC) as a source for in vivo gene transfer we evaluated the efficacy of in vivo transduction of malignant cells using three different tumor cell models: 816 murine and IIB-MEL-LES human melanomas, and C6 rat glioblastoma. In vitro studies have shown a bystander effect only in C6 cells. In vivo studies showed an inhibition of tumor growth in the two melanoma models when tumor cells were co-injected with VPC producing retroviral vectors carrying the HSV-tk gene (VPC-tk), followed by GCV treatment, but 100% of mice developed tumors in both models. Under similar experimental conditions, 70% of syngeneic rats completely rejected stereotactically transferred C6 tumor cells and 50% of them showed a prolonged_survival. Treatment of established C6 tumors with VPC-tk and GCV led to cure of 33% of the animals. Rats which rejected tumor growth developed an anti-tumor immune memory leading to rejection of a stereotactic contralateral challenge with parental cells. In order to increase the therapeutic efficacy of the system we studied the antitumoral response after interleukin-12 (IL-12) gene transfer alone or in combination with the herpes virus thymidine kinase gene/gancyclovir (HSVtk/GCV), on i.c. implanted brain tumors and the underlying mechanisms mediating tumor rejection. Following i.c. transplantation of retroviral vector producer cells (VPC) VPC-IL12 were able to suppress rat C6 glioma tumor growth even when rats carried 10 days-old tumors. Its combination with VPC-tk had better therapeutic effect than each single treatment on incipient tumors. The study of the mechanisms involved in the antitumoral response, clearly showed that it was mediated by immune and no immune mechanisms. IL-12 expression was characterized by the immediate activation of microglia/macrophage and their recruitment to the intratumoral area. IL-12 expression also stimulated PMN recruitment and induced tumor vessel necrosis, while normal brain vessels remained intact. Conversely, CD5+ lymphocytes were the main immune cell type recruited by HSV-tk/GCV. In addition, only the combination of IL-12 and HSV-tk/GCV was able to recruit CD4+ and CD8+ when large tumors were treated. Surviving rats developed a chronic inflammation at the site of injection composed of macrophages and lymphocytes which was not harmful to the brain since no demielynization or neurological signs were observed. The present study provides a basis to understand the mechanisms underlying the antitumor response induced by IL-12 alone and in combination with HSV-tk/GCV and supports their use in combination therapy of brain tumors We also selected a therapeutic clone of VPC carrying the HSV-tk gene for its clinical application. This clone showed a higher antitumor efficacy than the original cell preparation. Finally, new gene therapy vectors, based on systems regulated by exogenous (tetracycline) and endogenous (tumor hypoxia) conditions, were developed and further characterized

Bejarán, Rubén Aníbal. "Factores que afectan a la temperatura media mensual en Argentina subtropical" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo principal de esta Tesis es avanzar en el conocimiento de los factores que determinan la temperatura media mensual en Argentina subtropical a través del análisis de las relaciones de dicha variable con la nubosidad, la humedad del suelo, la temperatura de los océanos Atlántico y Pacífico y la circulación atmosférica. A través de este estudio se busca establecer en qué medida, desde el punto de vista estadístico, las relaciones físicas conocidas a nivel diario pueden ser transferidas a escalas temporales mayores. Del análisis de correlación entre la temperatura media mensual y la nubosidad se encuentra que el signo es distinto según la época del año. Durante el semestre cálido (octubre a marzo) predominan las correlaciones negativas mientras que entre abril y septiembre dominan las correlaciones positivas. La relación inversa observada durante los meses cálidos se debería a que domina el efecto de la nubosidad previniendo la ocurrencia de temperaturas máximas elevadas mientras que la relación directa que se encuentra en el semestre frío estaría asociada al efecto de la nubosidad moderando las temperaturas mínimas. Con respecto a la relación entre el contenido de humedad en el suelo, calculado a través del Indice de Precipitación Estandarizado (SPI), y las temperaturas mínima, máxima y media en Argentina subtropical, los resultados obtenidos muestran que existen correlaciones débiles de signo positivo entre la humedad del suelo y la temperatura mínima y correlaciones más altas en valor absoluto y de signo contrario entre la humedad del suelo y la temperatura máxima. La temperatura media muestra un comportamiento similar al de la máxima, principalmente durante el verano, reflejando que el efecto de la humedad del suelo sobre la temperatura media es una consecuencla de la utilización del calor disponible en el ambiente en el proceso de evaporación. En invierno no se encontraron correlaciones significativas indicando que la mayor o menor capacidad calorífica de los suelos debido a su mayor o menor contenido de humedad, no es un factor importante en la regulación la temperatura media. La relación entre la temperatura media mensual en Argentina subtropical y la posición de los vientos máximos en 200 hPa muestra que cuanto más al norte se encuentra la posición de los vientos zonales máximos, menores son las temperaturas medias en la mayoría de las estaciones de la región analizadas. Durante los meses de invierno y primavera la correlación es mayor que para el trimestre de verano y los primeros meses del otoño así como el área donde alcanza valores significativos. Las débiles correlaciones obtenidas para los meses estivales se deben a que la región está caracterizada por una marcada barotropía y los vientos máximos superiores se encuentran desplazados hacia la Patagonia. Existe una correlación negativa entre el número de pasaje de perturbaciones (N) en Santa Rosa, Paraná y Posadas y la temperatura media que es mayor en valor absoluto en el otoño y comienzo del invierno en Posadas y Paraná y más irregular espacial y temporalmente en Santa Rosa. Estas correlaciones indican que la relación entre la temperatura media y N es tal que, a escala mensual, el mayor pasaje de perturbaciones está asociado a menores temperaturas. Los resultados obtenidos del análisis de la relación entre la temperatura del mar del océano Atlántico (TSMAtlántico)la temperatura media mensual en Argentina subtropical (Tsup) muestra que en los meses de verano, anomalías frías (cálidas) en Argentina subtropical están asociadas a anomalías cálidas (frías) en el Atlántico en la banda 20°S-30°S. Estos resultados se deberían a que anomalías negativas de Tsup podrían ser consecuencia del aumento de la precipitación y por ende de la nubosidad asociadas a un desplazamiento hacia el sur de la Zona de Convergencia del Atlántico Sur (ZCAS) como resultado de un calentamiento en el Atlántico hacia el sur de la ZCAS. Durante el otoño se encuentra una relación directa entre Tsup y TSMAtlántico que se debería a que el flujo en superficie en Argentina subtropical durante esa época del año es predominantemente del este mientras que no se encuentran señales claras en la relación entre Tsup y TSMAtlántico durante el invierno. Del análisis de la relaclón entre Tsup y la temperatura del océano Pacífico (TSMPacífico) se encuentra que los patrones correspondientes al verano, asociados a eventos El Niño/La Niña muestran una relación inversa entre la temperatura del mar del Pacífico tropical y la temperatura en el noreste de Argentina. Las anomalías negativas en la temperatura en el noreste de Argentina durante eventos cálidos se deberían al aumento de la nubosidad debido a la mayor precipitación. En las componentes de otoño en las que no aparece el modo Niño/Niña, se observa que es significativa la región del Pacífico subtropical próximo a la costa sudamericana de forma que se encuentra una relación directa entre TSMPacífico y Tsup. Esta relación podría deberse a que esa región del Pacífico es donde en general tienen origen los sistemas frontales que ingresan al continente y por lo tanto su temperatura aparece condicionando la advección térmica. Durante el invierno se observa una relación directa entre las anomalías de TSMPacíflco en la región ecuatorial y Tsup en Argentina subtropical de forma que eventos El Niño están asociados a anomalías cálidas de Tsup y eventos La Niña a anomalías frías. Esto se debería a la modificación de la circulación regional durante eventos cálidos (fríos) que implica una menor (mayor) frecuencia de irrupciones de frentes fríos y una mayor (menor) permanencia del aire cálido advectado desde el norte en Argentina subtropical. Durante la primavera se encuentra una relación directa entre la temperatura del Pacífico ecuatorial y la temperatura en Argentina subtropical, confirmando que eventos cálidos (fríos) están asociados a una intensificación (debilitamiento) de la advección de aire cálido y húmedo sobre el sudeste de Sudamérica. El Pacífico subtropical muestra una relación inversa con la temperatura en Argentina subtropical, con diferencias entre los distintos meses de la primavera pero que en general es significativa en la región este. Se formula un modelo de estimación de la temperatura media mensual para tres subregiones de Argentina subtropical (oeste, noreste y sudeste) en función de la nubosidad, humedad del suelo, posición de los vientos máximos en 200 hPa, número de pasaje de perturbaciones y temperatura de la superficie del mar de los océanos Atlántico y Pacífico y pesando la importancia relativa de cada uno de ellos. Los resultados obtenidos a partir de la aplicación del método de regresión múltiple muestran que existe disparidad en la bondad del ajuste entre las diferentes subregiones. En general, la zona oeste es la que presenta la menor proporción de varianza explicada. Con respecto a las variables que se incorporan a los modelos, los resultados son en general bastante dispares y no se observan variables que expliquen individualmente la variabilidad interanual de la temperatura mensual. Los resultados obtenidos a lo largo de los diferentes capítulos permitieron establecer relaciones importantes entre la temperatura media mensual en Argentina subtropical y un conjunto de variables atmosféricas y oceánicas. Si bien estos factores no alcanzan para explicar la totalidad de la variabilidad de la temperatura media mensual en la región, se ha demostrado que según la época del año y la subregión, la varianza explicada por los factores analizados puede superar el 50%. A través de este estudio de diagnóstico se demuestra que la temperatura media mensual en Argentina subtropical depende un conjunto de factores que varían según la época del año y la subregión considerada y que ninguno de los factores es capaz de explicar individualmente la variabilidad interanual de la temperatura poniendo de esta forma de manifiesto la complejidad del pronósüco climático de la temperatura mensual en la región.

Abstract:
The main objective of this Thesis is to advance in die knowledge of the factors that determine monthly mean temperatures in subtropical Argentina through the analysis of the relations with a set of variables as cloudiness, soil humidity, Atlantic and Pacific sea surface temperature and atmospheric circulation. Through this study we look for to establish to what extent, from the statistical point of view, the physical daily level relations can be transferred to larger temporary scales. From the analysis of correlation between the monthly mean temperature and total cloudiness, it can be appreciated that the sign is different according to the time of the year. During the warm semester (October to March) the negative correlations predominate whereas between April and September the positive correlations are dominant. The observed inverse relation during the warm months indicates that the effect of the cloudiness preventing high maxima temperatures is the most important whereas the direct relation during the cold semester could be associated to the modulation of minimum temperature by cloudiness. With respect to the relation between the ground humidity content, calculated through the Standarized Precipitation Index (SPI), and the minimum, maximum and mean temperature in subtropical Argentina, the results show weak positive correlations between the soil humidity and minimum temperature and higher correlations in absolute value and of opposite sign between soil humidity and maximum temperature. The mean temperature shows a similar behavior to the one of the maximum, mainly during the summer, reflecting that the effect of the soil humidity on the mean temperature is a consequence of the use of the heat available in the atmosphere in the evaporation process. In winter not significant correlations were found indicating that the greater or smaller heat capacity of grounds due to its greater or smaller humidity content, is not an important factor in the regulation the average temperature. The relation between the monthly mean temperature in subtropical Argentina and the position of maximum winds in 200 hPa shows that the most to the north is the position of maximum zonal winds, smaller is the mean temperatures in most of the analyzed stations of the region. During the winter and spring months the correlation is greater than for the trimester of summer and the first months of the autumn as well as the area where it reaches significant values. The weak correlations obtained for the summer months are probably a consequence of the noticeable barotropy of the region and that the superior maximum winds are moved towards the Patagonia. A negative correlation between the number of passage of disturbances (N) in Santa Rosa, Paraná and Posadas and the mean temperature is greater in absolute value in the autumn and beginning of the winter in Posadas and spatially and temporally more irregular in Paraná and Santa Rosa. These correlations indicate that the relation between temperature average and N is so that, on monthly scale, the greater passage of disturbances is associate to smaller temperatures. The results of the analysis of the relation between the Atlantic sea surface temperature (SSTAtlantic) and monthly mean temperature in subtropical Argentina (Tsup) shows that in summer months, cold (warm) anomalies in subtropical Argentina are associate to warm (cold) anomalies in the Atlantic band 20°S-30°S. Negative anomalies of Tsup could be consequence of the increase of the precipitation and therefore of the cloudiness associated to a displacement towards the south of the South Atlantic Convergence Zone (SACZ) as a result of a heating in the Atlantic towards the south of the SACZ. During the autumn there is a direct relation between Tsup and SSTAtlantic because the surface flow in subtropical Argentina during that time of me year is predominantly of the east whereas there are not clear signals in the relation between Tsup and SSTAtlantic during winter. The analysis of the relation between Tsup and the Pacific sea surface temperature (SSTPacific) shows that the patterns corresponding to the summer, associated to El Niño/La Niña events present an inverse relation between the tropical SSTPacific and the mean temperature in northeastern Argentina. The negative temperature anomalies in the northeast of Argentina during warm events could be due to the increase of the cloudiness associated to greater precipitation. In autumn, components in which it does not appear the El Niño/La Niña signal, it is observed that the region of me subtropical Pacific next to the South American coast is significant with a direct relation between SSTPacific and Tsup. This relation could be due to that that region of the Pacific is where in general the frontal systems that enter the continent have their origin and therefore its temperature appears conditioning the thermal advection. During winter, a direct relation between the anomalies of the equatorial SSTPacific and Tsup in subtropical Argentina is observed so that El Niño events are associated to warm anomalies of TSup and La Niña events to cold anomalies. This could be related to the modification of the regional circulation during warm (cold) events that imply a minor (greater) frequency of irruptions of cold fronts and a greater (smaller) permanence of the warm air advected from the north in subtropical Argentina. During the spring, there is a direct relation between the equatorial Pacific temperature and the temperature in subtropical Argentina, confirming that warm (cold) events are associate to an intensification (weakening) of the warm and humid air advection over Southeastern South America. The subtropical Pacific shows an inverse relation with the temperature in subtropical Argentina, with differences between the different months from the spring but that in general is significant in the east region. A model of estimation of the monthly mean temperature for three subregions of subtropical Argentina (the West, Northeast and Southeast) on the cloudiness, soil humidity, position of maximum winds in 200 hPa, number of passage of disturbances and Atlantic and Pacific sea surface temperature is formulated. The results obtained from the application of a multiple regression method show disparity in the goodness of the adjustment between the different subregions. In general, the West zone is the one that presents the smaller proportion of explained variance. With respect to the variables that are included into the models, the results are, in general quite different and none of the variables explain individually the interannual variability of the mean monthly temperature.

Bauleo, Pablo M.. "TANGO ARRAY : un experimento de rayos cósmicos en el rango de energía entre 10" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los rayos cósmicos inciden sobre la Tierra desde todas las direcciones y con un flujo medio que es extremadamente constante en el tiempo. Su espectro de energía cubre desde los ~ 100 keV hasta ~ 10(20) eV. Si la energía del rayo cósmico es lo suficientemente elevada, al incidir sobre la atmósfera terrestre genera una cascada de partículas secundarias. Estas partículas pueden ser registradas por un conjunto de detectores ubicados en el nivel del suelo. para medir la cascada y obtener información sobre la dirección del rayo cósmico y su energia. Por otra parte, estas partículas secundarias al desplazarse por la atmósfera inducen la omisión de fotones de fluorescencia en el nitrógeno atmosférico. Estos fotones pueden ser colectados también ser usados para la detección de la cascada. Actualmente se encuentra en construcción el Observatorio Pierre Auger, cuyo objetivo es el estudio de rayos cósmicos con energías mayores a ~ 5 x 1018 eV. El método de detección propuesto incluye detectores de superficie (detectores de Efecto Cerenkov en agua) para el registro de las partículas secundarias y telescopios para la detección de los fotones de fluorescencia. Este trabajo presenta el diseño y los resultados obtenidos mediante dos sistemas de monitoreo de la transparencia atmosférica para el Observatorio Auger, así como diversos estudios realizados sobre un detector de superficie prototipo, el estudio del lóbulo de reflexión difusa del recubrimiento interno de los detectores, la propuesta de un método de calibración para todos los detectores del Observatorio, una configuración alternativa para el recubrimiento interno, etc. El principal esfuerzo de este trabajo estuvo dirigido al montaje, en Buenos Aires, de un mnjunto de 4 detectores de partículas para la detección de cascadas generadas por rayos cósmicos con energías del orden de ~ 10 15 eV. En este trabajo se describen las detalladas simulaciones numéricas realizadas para caracterizar la respuesta del conjunto de detectores frente al arribo de una cascada de partículas. Estas simulaciones incluyen el desarrollo de la cascada cn la atmósfera, la detección por parte de los detectores de la misma y la digitalización de la señal. Se describen los códigos que se desarrollaron para la reconstrucción de la dirección de arriba y estimación de la energia del rayo cósmico primario, los cuales fueron comparados con los datos simulados y empleados en el analisis de los resultados obtenidos con el conjunto de detectores. También se incluyo una descripción del diseño, construcción y operación del conjunto de detectores, incluyendo el sistema de toma de datos especialmente desarrollado para el mismo evaluando la estabilidad de funcionamiento del sistema lo largo del tiempo de operación. Finalmente, el análisis de los datos obtenidos con el arreglo de detectores incluye la asignación dc energías para los rayos cósmicos registrados, el estudio de anisotropías en la dirección dc arribo de los mismos y la determinación del flujo de rayos cósmicos en el rango de energias entre 10 14 eV y 7 x 10 15 eV.

Abstract:
The cosmic rays hit the Earth from all directions with a mean flux that is extremely constant in the time. Its energy spectrum range from ~ 100 keV to ~ 10 20 eV; If energy of the cosmic ray is high enough, its interaction with the Earth’s atmosphere originates a cascade of secondary particles. If these particles are recorded by an array of detectors located at ground level, the information can be used to obtain the cosmic ray’s arrival direction and energy. On the other hand, those particles moving trough the atmosphere, induce fluorescence photons in the atmospheric nitrogen. These photons also, can be used to detect and reconstruct the cascade Currently the Pierre Anger Observatory is under construction. Its objective is the study of cosmic rays with energies higher than ~ 5 x 10 18 eV by by measuring the secondary particles cascades produced by the cosmic ray. The proposed detection method includes surface detectors (water Cerenkov detectors) and telescopes for detection of the fluorescence photons. This work describes the design and characteristics results of two atmospheric monitoring systems for the Auger Observatory as well as several studies performed with a surface detector prototype, such as characterization of the difuse reflectivity lobe of the internal liner, the develpment and proposal of an an absolute calibration method for all detectors of the Observatory, an alternative configuration of the internal liner, etc. The main effort of this work was focused on an array of 4 detectors, installed in Buenos Aires for detection of the secondary particles of the cascades generated by cosmic rays with energies ~ 10 15 eV. The results of the detailed numerical simulations performed to characterize the performance of the array are presented. These simulations include the development of the cascade through the atmosphere, the response of the detectors to the secondary particles and the digitalization of their signals. Reconstruction codes to obtain the energy and arrival direction of the cosmic rays have been developed and are described in this report. They were tested with the simulated data and later used in the analysis of the cosmic ray data obtained with the array. A description of the design, construction and operation of the array is reported, including the data adquisition system which has been developed for the present work. The time stability of the array is discussed. Finally. the data analysis includes the energy asignement of the detected cosmic ray, the study of anistropies in the arrival directions of the cosmic rays and their energy spectrum.

Barquero, Andrea A.. "Actividad antiviral presente en hojas de Melia azedarach L.: modelo de acción contra el virus de la estomatitis vesicular" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Meliacina (MA), un principio antiviral presente en las hojas de la planta Melia azedarach L., es capaz de inhibir in-vitro la multiplicación de un amplio espectro de virus, algunos patógenos para el hombre como HSV-1 y el virus Junín (agente de la fiebre hemorrágica argentina), entre otros. El tratamiento con MA de células en cultivo antes de la infección (pretratamiento) también desencadena un estado antiviral que afecta la multiplicación de diferentes virus. En el presente trabajo de tesis los objetivos planteados fueron, caracterizar el establecimiento del estado refractario a la infección viral en células Vero y determinar el mecanismo de acción de MA sobre el virus de la estomatitis vesicular (VSV), elegido como modelo de estudio. Los resultados obtenidos al utilizar inhibidores de diferentes funciones o procesos celulares permiten concluir que para inducir el estado antiviral MA no requiere de los mecanismos de transcripción y traducción celulares activos; ni de la paiticipación de la PKR ni the ninguna otra quinasa o fosfatasa de Ser/Thr, mientras que, tanto la actinomicina D como el vanadato y la tirfostina B46 potenciaron su establecimiento. Al estudiar el efecto de MA sobre distintos pasos del ciclo de multiplicación de VSV se logró identificar al desnudamiento y al transporte de la glicoproteína G cómo los blancos de acción del pre y del post-tramiento, respectivamente. Considerando que, ambos procesos tienen lugar en compartimentos celulares ácidos (endosomas y sistema de Golgi) y que hay una correlación entre la acción antiviral y la basificación que MA provoca en los endosomas, se plantea la hipótesis de que la acción antiviral de MA es una consecuencia directa de su efecto sobre la ATPasa vacuolar responsable de la acidificación de dichas organelas.

Abstract:
Meliacine (MA), an antiviral compound present in purified leaf extracts of Melia azedarach L., exhibits a broad range of virus inhibition in-vitro. Besides, the pretreatment of cells with MA induces an antiviral state refractory to viral infection. The objectives of the present thesis work was to characterize the antiviral state triggers in cells by MA and to reveal the stage of VSV virus replication in Vero cells, used as a model system, affected by the antiviral. Using several inhibitors to characterize the induction of the antiviral state, we have found that transcription and translation protein processes are not necessary. The enzymatic activity of PKR, Ser/Thr kinases or phosphatases are not required for the stablishment of the anviral state. Whereas. actinomycin D, sodium vanadate and tyrphostin B46 used in combination with MA during pre-treatment significantly enhance the antiviral activity against VSV. The antiviral effect of MA in Vero or BHK-21 cells pre or post-treated prevents virus uncoating and blocks the transport of VSV-G protein to the plasma membrane. It was found that MA raised the pH within the endosomes, this effect was in correlation with the antiviral state duration. Taking into account that vacuolar type ATPase is responsible for maintaining the lower intraluminal pH in endosomes and Golgi complex we propose here that the inhibition of VSV uncoating and the block in the transport of G protein may be related to the effect of MA on the V-ATPase-mediated acidification

Baigun, Claudio Rafael Mariano. "Ecología pesquera de lagos y embalses patagónicos (Argentina)" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta tesis presenta un análisis de las características ecológico-pesqueras en 54 lagos y embalses patagónicos de Argentina. Mediante Análisis de Componentes Principales se realizó un ordenamiento de los ambientes basado en diferentes características limnológicas, definiéndose tres tipologías básicas de lagos y embalses que definieron ambientes de ecotono, andinos y de meseta, estos dos últimos grupos conteniendo, a su vez, subcategorías. Los lagos y embalses patagónicos exhibieron diferencias a lo largo de un gradiente ambiental definido por las caracteristicas tróficas y edáficas, principalmente y secundariamente por factores morfométricosy climáticos. La composición y abundancia relativa de especies se obtuvieron mediante muestreos intensivos y extensivos, utilizando una batería experimental de enmalladoras. Se analizó el comportamiento de las redes en función de la longitud y peso de los ejemplares capturados y se corrigieron por selectividad, las estructuras de tallas de las especies en aquellos ambientes con muestreos estacionales. Se identificó un total de 10 especies a saber. Odontesthes microlepidotus (pejerrey patagónico), O. bonariensis (pejerrey bonaerense), Percichthys trucha (perca boca chica), P. colhuapiensis (perca bocona), Oncorhynchus mykiss (trucha arco iris), Salmo trutta (trucha marrón), Salvetinus fontinalis (trucha de arroyo), S. namaycush (trucha de lago), Salmo salar sebago (salmón encerrado), Galaxias platei (puyen grande) y Aplochiton sp. (peladila) Los saimónidos, que son especies exóticas en la Patagonia, representaron el 53 % de las capturas experimentales. Los percíctidos, a su vez, constituyeron el 22 % de la captura, mientras el pejerrey patagónico representó el 19 % de las capturas. Dado la importancia que poseen los salmónidos en Patagonia, se analizó el proceso de su introducción y las caracteristicas de sus siembras por tipo de ambiente (lagos, laguna, río y arroyo), provincia y año. Mediante Análisis de Correspondencia se determinó que la trucha de lago y el salmón encerrado estuvieron muy asociados a los ambientes lénticos de grandes dimensiones, mientras la trucha de arroyo resultó caracteristica de los ambientes lóticos de bajo órden y la trucha marrón de ambientes tipo laguna o lénticos someros. La trucha arco iris fue la mas ubicua de las especies. En todos lo ambientes se determinó la longitud y peso medio de las especies y en ambientes con muestreos intensivos se estimaron los factores de condición relativa. Utilizando estructuras de tallas se establecieron los parámetros de crecimiento, tasas de mortalidad natural, edades y longitudes críticas. Tanto la longitud media como infinita estuvieron relacionadas con los niveles de nitrógeno y fósforo total, transparencia y profundidad media, si bien no siempre de manera lineal, sugiriendo la existencia de óptimos ambientales. Para una misma especie, se encontró además, que estos parámetros variaron entre ambientes. El Análisis de Correspondencia mostró la existencia de ambientes con comunidades dominadas por salmónidos y perclctidos-atherínidos respectivamente y también de carácter mixto. La riqueza de especies estuvo correlacionada con el área de los ambientes y se determinó que la abundancia de peces correlacionó positivamente con nitrógeno orgánico total, fósforo total y clorofila y negativamente con la profundidad media y transparencia. Al aplicarse Análisis Discriminante se estableció que la conductividad, temperatura media anual del aire, transparencia del agua, fósforo total y profunddad media resultaron ser las variables que contribuyeron a expficar un 81 % de la variación entre las medas de las abundancias de las especies de las comunidades tipo, siendo el porcentaje de ambientes correctamente clasificado por la función discriminante del 74 %. Los rendimientos pesqueros se obtuvieron mediante el empleo de modelos empíricos derivados de pesquerias deportivas y comerciales de lagos y embalses del hemisferio norte y utizando modelos de producción en aquellos ambientes con mayor información poblacional para estimar el máximo rendimiento sostenible. Se consideró que los ambientes cordileranos generan un rendimiento anual de hasta 5 kg/ha, los de ecotono entre 20-40 kg/ha y los de la meseta de 20a30 kg/ha. Sobre la base de la tipología lacustre desarrollada y de las comunidades definidas se proponen pautas para una gestión que contemple asignar distintas estrategias de uso y aprovechamiento de los recursos, mantener un uso sustentable de aquellas pesquerías con mayor demanda y conservar y mejorar las poblaciones de peces nativos. Se concluyó que la gestión y manejo de los recursos pesqueros patagónicos, a escala regional, debe apoyarse en criterios ambientales y utilizar, a escala local, la información derivada del análisis de poblaciones y de las pesquerías existentes. Asimismo, es necesario modificar los paradigmas de manejo tradicionales que existen en Patagonia, incorporando la conservación dela biodiversidadcomo eje central del uso sustentable de los recursos, así como para desarrollar estrategias de manejo adecuadas.

Abstract:
This thesis presents an analysis of fisheries ecology on 54 Argentine patagonian lakes and reservoirs. An ordination of lakes and reservoirs based on different limnological characteristics was performed using Principal Component Analysis. Three basic types of environments: located on the ecotone, Andean mountains and plateau were defined, having the last two types subcategories. Patagonian lakes and reservoirs exhibited differences across a gradient defined mainly by trophic and edaphic characteristics, and secondarily by morphometry and climatic factors. Species composition and relative abundance were obtained by extensive and intensive sampling designs using experimental gill net gangs. Gill net captures were analyzed as function of length and weight and for those lakes with seasonal information, length structures were corrected by selectivity for the different species. A total 10 species were identified: Odontesthes hatcheri (pejerrey patagónico), O. bonariensis (pejerrey bonaerense), Percichthys trucha (perca boca chica), P. colhuapiensis (perra bocona), Oncorhynchus mykiss (trucha arco iris), Salmo trutta (trucha marrón), Salvelinus fontinalis (trucha de arroyo), S. namaycush (trucha de lago), Salmo salar sebago (salmón encerrado), Galaxias platei (puyen grande) and Aplochiton sp. (peladilla). Salmonids are exotic species in Patagonia and represented 53 % of experimenta capturas. In turn, percictids comprised 22 %, whereas 19 % corresponded to Patagonian pejerrey. Due to the importance of salmonids in Patagonia, the introduction process and stocking characteristics in dfferent waterbodies types (large and small lakes, rivers and creeks) were analyzed. Using Corrrespondence Analysis it was found that S. namaycush and S. salar sebago were strongly associated with large lakes, whereas S. trutta was mostly related to small lakes size. In turn. S. fontinalis appeared mostly associated with creeks, while O. mykiss was the most ubiquitous of the salmonid species. Species mean length and mean weight were estimated for all lakes and reservoirs where extensive information was available and relative condition was determined in those environments with intensive samplings. Using length structure analysis growth parameters, natural mortality rates and critical age and length were estimated. Both mean and infinite length were related to total nitrogen, total phosphorous, transparency and mean depth, although not linearly in all cases, suggesting the existence of ecological optima. It was noted that for same species, natural mortality and critical length varied among environments. Community patterns were analyzed using Correspondence Analysis and showed that several communities were dominated by only salmonids and atherinopsids-percicitids respectively, but other were mixed. Species richness was related to surface lakes and fish abundance was correlated with total organic nitrogen, total phosphorous and clorophyil and negativer with mean depth and transparency. Use of Discriminant Analysis showed that conductivity, mean annual air temperature, transparency and mean depth were the variables that accounted by for 81 % of differences between mean species abundance at each community type. Discriminant function correctly classified 74 % of environments Fish yield were estimated applying empirical models derived from sport and commercial fisheries from Northern Hemisphere lakes and reservoirs. Also production models were used and maximum sustainable yield was estimated for those environments with suitable fishery information. Such estimations allowed to predict that Andean lakes yield up to 5 kg/ha, ecotone lakes may range between 20 and 40 kg/ha and plateau lakes and reservoirs will yield between 20 to 30 kg/ha on annual basis. Based on lake typology and community types, several guidelines were proposed to develop strategies for resource exploitalion, to maintain sustainable use of those fisheries with high fishing pressure and to preserve and enhance natives pecies populations. It was concluded that management of Patagonian fisheries resources requires the application of environmental criteria at a regional scale and use of population parameters and fishery information at a local scale. It is also necessary to modify traditional management paradigms, encompassing the conservation of biodiversity as a main goal for a sustainable resource use and for developing sound management strategies.

Bachrach, Estanislao. "Targeting celular utilizando retrovirus recombinantes : Un estudio "fundamental" y un modelo "aplicado" (O...de como usar el mal para hacer el bien)" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La entrada de los retrovirus a la célula es mediada por interacciones específicas entre la glicoproteina retroviral Env y moléculas de superficie celular expresadas en la membrana. A la hora actual, muy pocos datos concernientes a la cuantificación de este proceso son disponibles. En una primera serie de experimentos, utilizando un sistema de expresión inductible, hemos expresado diferentes cantidades de Env en la superficie de vectores retrovirales derivados del Virus Moloney de la Leucemia Murina (MoMLV) y de vectores lentivirales derivados de HIV-I. Estos vectores han sido utilizados para determinar su capacidad de infección. Los resultados muestran que pocas moléculas Env son suficientes para infectar una célula. Sin embargo, incrementando la densidad de Env se acelera claramente el proceso de infección. Además, a bajas concentraciones de Env expresadas en la superficie viral los datos sugieren que estas moléculas podrian actuar en forma cooperativa. Estas observaciones tienen importantes consecuencias con respecto a la mejor comprensión del proceso natural de infección retroviral, pero también a la hora de diseñar vectores retrovirales aplicados a la transferencia de genes o terapia génica. Por otro lado, con la idea de poner a punto un sistema de targeting celular in vivo, hemos diseñado un vector retroviral competente para la replicación que permite infectar la mayoría de las células del bazo de ratones Swiss recién nacidos, durante la primera semana de infección. Estos vectores serán utilizados proximamente para una primera serie de experiencias de targeting. Estos resultados confirman un modelo de transducción eficaz de células del bazo de ratón en una ventana de tiempo determinada. No pudiendo todavia aplicar estos vectores en clínica, resultan al menos interesantes para análisis de diferenciación y proliferación de células hematopoyéticas en modelos animales, como asi también el estudio del desarrollo y la evaluación de diferentes moléculas que puedan interferir con este proceso.

Arbó, Diego Gabriel. "Colisiones de iones con sólidos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de este trabajo de tesis ha sido investigar algunos aspectos de la interacción de iones con sólidos. Para ello hemos analizado los formalismos colisional y dieléctrico para calcular la fuerza de frenamiento de un proyectil que viaja dentro de un sólido. Además hemos indagado sobre el problema de transporte de iones, haciendo hincapié en el estado electrónico de los mismos. El rango de velocidades con el que hemos trabajado es el de velocidades medias y altas. El desarrollo de la tesis se puede dividir en tres partes principales. En la primera parte se ha estudiado la fuerza de frenamiento de un ion pesado con carga Zp que viaja dentro de un sólido en la primera aproximación de Born. Dentro del formalismo colisional binario (BCF), hemos usado el potencial inducido por iones pesados en un gas de electrones libres (FEG) como el potencial de interacción. Presentamos resultados detallados de la fuerza de frenamiento (stopping power), distribuciones de pérdida de energía, libre camino medio y distribuciones angulares electrónicas de H+, H0, y H-, a través de blancos de Al y Ag. Hemos comparado los resultados con aquellos obtenidos con el potencial central de Yukawa y el formalismo dieléctrico (DF). Hemos establecido una relación entre los formalismos dieléctrico y colisional binario. Se ha encontrado que el BCF es muy sensible a la función dieléctrica usada en el potencial inducido. También se ha examinado el frenamiento de los proyectiles vestidos y se ha comparado sus distribuciones de pérdida de energía. De acuerdo con lo esperado, a velocidades de impacto altas el formalismo binario provee sólo el término colisional, no teniendo en cuenta la excitación del modo colectivo. En la segunda parte de esta tesis se ha ido más allá de la primera aproximación de Born incorporando la contribución que viene de la segunda aproximación de Born. Se ha estudiado la pérdida de energía de un proyectil ‘desnudo’ y pesado con carga Zp que se mueve en un gas de electrones libres. Dentro del marco del formalismo colisional binario (BCF), se ha desarrollado el elemento de matriz de transición (al cuadrado) en una serie perturbativa, conservando términos hasta Z(3p), (segunda aproximación de Born). Se emplea la función respuesta dieléctrica de Mermin-Lindhard para describir el potencial cilíndrico inducido por el proyectil. Se ha aplicado el formalismo al cálculo de las distribuciones de perdida de energía para cargas fijas (protones, hidrógeno neutro y antiprotones) chocando con aluminio. También hemos investigado cómo la corrección colisional Z(3p), afecta el frenamiento total para antiprotones en Aluminio y Silicio, y para hidrógeno en Aluminio. En este último caso se han considerado los diferentes estados de carga del proyectil. Los resultados tienen un buen acuerdo con los datos experimentales en la región de alta energía. También se ha investigado la energía perdida dentro del marco del formalismo dieléctrico (DF). En este modelo, se ha desarrollado el potencial inducido por el proyectil en una serie perturbativa, y se han conservado los términos hasta segundo orden en Zp. El potencial cuadrático obtenido se ha expresado en función de la respuesta dieléctrica a primer orden o función dieléctrica de Lindhard. Hemos aplicado el formalismo al cálculo del frenamiento de diferentes cargas determinadas (protones, hidrógeno neutro y antiprotones) moviéndose en Aluminio. Se ha investigado las distribuciones de pérdida de energía, y en el caso de antiprotones se ha modificado el término de segundo orden para evitar probabilidades negativas. Se ha comparado la fuerza de frenamiento total, calculada teniendo en cuenta la contribución de las capas internas y los diferentes estados de carga en el equilibrio, con datos experimentales. Se ha estudiado también la densidad electrónica inducida, y los resultados guardan un buen acuerdo con aquellos calculados con la teoría de la funcional densidad (DFT). En la tercera parte centramos nuestra atención en el estado electrónico del proyectil, y cómo el proceso de transporte influye sobre el mismo. Presentamos una descripción cuántica para la evolución de estados atómicos de proyectiles viajando a través de la materia. Nuestra aproximación se basa en la solución de la ecuación cuántica de Langevin -una ecuación de Schródinger estocástica dependiente del tiempo- que describe las excitaciones electrónicas de los átomos durante su transporte a través de los sólidos. Se puede considerar nuestra descripción presente como la versión cuantizada de una teoría de transporte clásica. Hemos presentado aplicaciones a la pérdida de electrones (shipping) de H- y H relativistas, y a la dinámica de la población de los subestados electrónicos de Ar17+ con 13.6 MeV/ u a causa de la transmisión a través de láminas de carbono. Hemos analizado la correspondencia entre las simulaciones de transporte cuántico y clásico y hemos mostrado que la naturaleza estocástica de la interacción destruye la mayoría de los efectos cuánticos.

Abstract:
The aim of this thesis work has been to investigate some aspects of the interaction of ions with solids. To that end, we have analyzed the different formalisms used to calculate the stopping power of a projectile traveling inside a solid. We have also investigated the problem of transport of ions in solids, focalizing our attention on their electronic states. We deal with the range of medium and high velocities. The body of the thesis can be divided in three main parts. In the first one, the stopping power of a heavy ion with charge Zp traveling inside a solid has been studied in the first Born approximation. Within the binary collisional formalism (BCF), we have used the potential induced by heavy ions in a free-electron gas (FEG) as the interaction potential. We present detailed results of the stopping power, distributions of energy-loss, mean free path and electronic angular distributions of H+, H0, and H-, through targets of Al and Ag. We have compared the results with those obtained with the Yukawa central potential and the dielectric formalism (DF). We have established a link between the dielectric and binary collisional formalisms. The BCF has been found to be very sensitive to the dielectric function used in the induced potential. We have also examined dressed projectiles and have compared their energy-loss distributions. As expected, at high impact velocities the binary formalism only provides the collisional term, neglecting the excitation of the collective mode. In the second part of this thesis we have gone beyond the first Born approximation, incorporating the contribution coming from the second Born approximation. The energy-loss of a ‘naked’ and heavy projectile with charge Zp moving in a free electron gas has been studied. Within the binary collisional formalism (BCF), the squared-transition-matrix element has been expanded in a perturbative series, conserving terms up to Z(3p) (second Born approximation). The Mermin-Lindhard dielectric response function is used to describe the cylindrical potential induced by the projectile. The formalism has been applied to the calculation of the energy loss distributions of fixed charges (protons, neutral hydrogen and antiprotons) colliding with aluminum. We have also investigated how the collisional correction Z(3p) affects the total stopping power for antiprotons in Aluminum and Silicon, and for hydrogen in Aluminum. In the latter case the different states of charge of the projectile have been considered. The results are in good agreement with the experimental data in the high energy region. The energy-loss has also been investigated into the frame of the dielectric formalism (DF). In this model, the potential induced by the projectile has been expanded in a perturbative series, and the terms up to second order in Zp have been conserved. The obtained quadratic potential has been expressed in function of the first-order dielectric response or Lindhard dielectric function. We have applied the formalism to the calculation of the stopping of different charges (protons, neutral hydrogen and antiprotons) moving in Aluminum. Distributions of energy-loss has been investigated, and in the case of antiprotons the second-order term has been modified to avoid negative probabilities. The total stopping power (calculated considering inner-shell contributions and the different charge states in equilibrium) has been compared with experimental data. The induced electronic density has also been studied, and the results keep a good agreement with those deduced from the density functional theory. In the third part we center our attention in the electronic state of the projectile, and how the process of transport influences on it. We present a quantum description for the evolution of atomic states of projectiles traveling through matter. Our approach is based on the solution of the quantum equation of Langevin -a stochastic time-dependent Schrôdinger equation- that describes the electronic excitations of atoms during transport through solids. Our present description can be considered as the quantized version of a classic theory of transport. Applications to the electron-loss (stripping) of relativistic H- and H, and to the dynamics of the population of the electronic substates of 13.6 MeV/u Ar17+ due to the transmission through carbon foils have been presented. We have analyzed the correspondence between the quantum and classical transport simulations and we have shown that the stochastic nature of the interaction destroys most of the quantum effects.

Ansaldo, Martín. "Niveles de antioxidantes en peces Antárticos pertenecientes a las familias nototheniidae y channichthydae" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Por miles de años, los peces antárticos han estado aislados en un ambiente con temperaturas muy bajas (con poca fluctuación estacional) y con un alto contenido de oxígeno. En tales condiciones, el estrés oxidativo pudo ser uno de los factores más importantes que afectaron sus estrategias adaptativas metabólicas. Se tomaron muestras de tejidos de especies pertenecientes a dos familias de peces antárticos Nototheniidae (nototénidos) y Channichthyidae (caníctidos o peces de hielo). En homogenatos de hígado, branquias, corazón y músculo, fue medida la actividad de las enzimas antioxidantes: superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GPx); los niveles de vitamina E y la capacidad antioxidante total (TRAP). También se analizó Ia actividad de SOD en muestras de sangre. La actividad de SOD branquial es 3 veces mayor en caníctidos comparada con la de los nototénidos, mientras que la actividad de CAT y GPx es significativamente mas alta en las branquias de los nototénidos. El aumento de la actividad de SOD branquial podría ser reflejo del importante gradiente de P02 que ocurre a través del epitelio branquial de los caníctidos. La baja actividad de CAT y GPx hallada en las branquias de estas especies sugeriría que la H2O2 producida sería eliminada preferentemente por difusión. Por el contrario, la actividad de SOD sanguínea es 5 veces más alta en los nototénidos, los cuales poseen eritrocitos en sangre que aumentan la capacidad de transporte de oxígeno. En estos peces, la actividad de CAT es más alta en todos los tejidos estudiados excepto en músculo. Comparando los niveles de vitamina E entre ambas familias no se observan claras diferencias salvo para aquellos valores que corresponden a músculo. El alto contenido de vitamina E medido podría estar correlacionado con la alta densidad del volumen de mitocondrias por volumen de fibra muscular de los caníctidos, dado que la vitamina E es responsable de la protección de los lípidos de membrana frente a su peroxidación. De manera coincidente el valor de TRAP (que representa la capacidad antioxidante total asociada a moléculas hidrosolubles) es también alto en el músculo de los caníctidos. Esto está probablemente relacionado con la función del ácido ascórbico (un compuesto hidrosoluble), que regenera la capacidad antioxidante dela vitamina E. La característica más saliente del epitelio que recubre las laminillas secundarias en las branquias de los peces de hielo es su borde externo ondeado, característica ausente en el epitelio branquial de los nototénidos. Los valores de las distancias de difusión sangre-agua, medidas en las branquias de las especies de los peces estudiados, se correlacionan positivamente con el hábito descripto para cada especie, sin importar a que familia pertenecen.

Abstract:
Antarctic fishes have been isolated for over several million years in an environment with very low and constant temperature and high oxygen concentration. In such conditions the oxidative stress might have been an important factor affecting their metabolic adaptive strategies. Activity of the antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT)and glutathione peroxidase (GPx), vitamin E levels and total antioxidant capacity (TRAP) were measured on liver, gill, heart and muscle homogenates of red-blooded (Nototheniidae) and white-blooded (Channichthyidae) Antarctic fishes. SOD activity was also measured in blood samples. Gili SOD activity was 3-fold higher in channichthyids than in nototheniids while CAT and GPx were significantly higher in the gills of nototheniids. The increased SOD activity of channichthyids probably reflects the large P02 gradient across their gills. The H202 produced seems to be preferentially eliminated by diffusion according to the low levels of CAT and GPx found in the gills of these species. On the contrary blood SOD was about 5-fold higher in the nototheniids, which possesses erythrocytes and thus a much higher oxygen carrying capacity. CAT activitywas always higher in nototheniids except in muscle. On the other hand, vitamin E did not show clear differences between families excepting for the pattern observed in muscle. The higher content of vitamin E in this tissue shown by channichthyids is related to the higher volume density of mitochondria reported for this group, since vitamin E is responsible for avoiding membrane lipid peroxidation. Accordingly, TRAP (representative of hydrosoluble antioxidant capacity) was also higher in muscle of channichthyids. This is probably related to the role of the ascorbic acid (a hydrosoluble compound) in regenerating vitamin E. In icefish. the epithelium of the gill secondary lamellae shows a wavy appearance, this characteristic is absent in nototheniids. The diffusion distances of the gills of the studied fish showed a marked relationship with the fish’s eootypes regardless the family they belong to.

Almeida, Marcela Silvia. "Aspectos algorítmicos para el cálculo de bases de módulos sobre anillos de polinomios" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Alice, Alejandro Fabián. "Sistema de fosfotransferasa dependiente del fosfoenolpiruvato (PTS) y represión catabólica en Bacillus Sphaericus" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
B. sphaericus es una bacteria entomopatógena utilizada en el control biológico de diversas especies de mosquitos transmisores de enfermedades que afectan a millones de personas. Se había descripto que esta especie carecía de un sistema de transporte de hexosas y de las enzimas de las principales vías para su utilización. Por este motivo comenzamos el análisis del metabolismo de B. sphaericus haciendo hincapié en esta incapacidad de utilizar hidratos de carbono como única fuente de carbono (hexosas y pentosas). En este trabajo se describe el clonado y secuenciación de los genes ptsH y ptsI que codifican las proteínas generales del sistema PTS (HPr y Enzima I). Este sistema PTS sería específico para transportar N-acetilglucosamina puesto que una cepa mutante del gen ptsH únicamente se ve afectada en la utilización de este compuesto. Los genes que codifican las enzimas involucradas en el metabolismo de dicho aminoazúcar han sido secuenciados y se encuentran río arriba de los genes pts, esta ubicación es novedosa respecto a lo descripto para otros microorganismos. Las actividades enzimáticas correspondientes también han sido determinadas. Asimismo, se describen las características del transportador y la secuencia parcial de su probable gen codificante (nagE). Previamente,otros autores habían descripto que la enzima 6-fosfofructoquinasa estaba ausente en esta especie. Sin embargo, hemos clonado y secuenciado el gen que codifica esta enzima y, además, detectamos la actividad enzimática correspondiente. La presencia de dicha enzima permite que la N-acetilglucosamina sea metabolizada a través de la glucólisis. Finalmente, demostramos la presencia de curvas diáuxicas cuando esta bacteria crece en presencia de N-acetilglucosamina y gluconato. La inactivación el gen ccpA, que codifica la proteína CcpA, nos permitió confirmar que la N-acetilglucosamina ejerce represión catabólica sobre la gluconato quinasa y que esta proteína se encuentra involucrada en este fenómeno. En este aspecto, también determinamos la presencia de actividad quinasa de HPr activada por fructosa 1,6-difosfato. En conjunto estos resultados demuestran que los mecanismos involucrados en la represión catabólica, descriptos para otras bacterias relacionadas filogenéticamente a B. sphaericus, se encuentran presentes en esta especie que no utiliza ninguna hexosa ni pentosa como fuente de carbono. La profundización del conocimiento del metabolismo de esta especie permitirá explorar fuentes de carbono y energía alternativos para la producción de toxinas entomopatógenas.

Abstract:
B. sphaericus is an entomopathogenic bacterium used as biological control of several species of mosquitoes which transmit diseases affecting millions of people worldwide. Some authors had described the lack of an hexoses-transport-system as well as the enzymes for their catabolic pathways in B. sphaericus. For this reason we started the analysis of B. sphaerícus metabolism focusing on its inability to use carbohydrates as unique carbon sources (hexoses and pentoses). In this work we describe the cloning and sequencing of ptsH and ptsI genes, codifying for the general PTS system proteins, HPr and Enzyme L This PTS system would be specific to N-acetylglucosamine transport, since a ptsH mutant strain can not grow on this compound. The genes codifying the enzymes involved in the metabolism of the aminosugar were sequenced. They were found to be localized upstream from the pts genes, a novel organization with respect to the one usually found in other microorganisms. The corresponding enzymatic activities have been determined as well. Furthermore, we have characterized the transporter and sequenced partially its putative gene (nagE). Other authors had previously described that B. sphaericus lacked the 6-phosphofructokinase enzyme. However, we have cloned and sequenced the codifying gene. Moreover we have detected the corresponding enzymatic activity, suggesting that N-acetylglucosamine metabolization might take place through the glycolisis pathway. Finally, we have observed diauxic growth curves when this bacterium grows in the presence of N-acetylglucosamine and gluconate. Inactivation of the ccpA gene, encoding CcpA, allowed us to confirm that N-acetylglucosamine exerted catabolic repression of the gluconate kinase, implying a role for CcpA protein in this phenomenon. Regarding this matter, we have also detected an HPr kinase activity which is modulated by fructose 1,6-biphosphate. Altogether our results demonstrate that the several elements involved in catabolic repression in bacteria phylogenúcally related to B. sphaericus are present as well in this species, which is unable to use hexoses or pentoses as unique carbon sources. A deeper understanding of B. sphaericus metabolism would facilitate the search for alternative carbon sources for large scale production of entomopathogenic toxins.

Aguirre, María Alejandra. "Estabilidad y dinámica en materiales granulares : comportamiento aislado y colectivo de granos" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudia el comportamiento de un flujo de granos sobre la pendiente de un apilamiento. El trabajo se divide en dos partes: 1) Movimiento de una esfera sobre un lecho granular Se analiza el movimiento individual de un grano aislado sobre un lecho rugoso fijo. Dicha interacción se modeló experimentalmente a través del movimiento de una esfera de diametro D sobre un lecho inclinado constituido por granos dc diametro medio (d < D). Según el valor del angulo de inclinación de la superficie respecto de la horizontal, se pueden observar tres regímenes de movimiento diferentes: dcsacelerado. con velocidad constante y acelerado. Los resultados experimentales permitieron comprender en mayor detalle los mecanismos involucrados en la disipación de la energía que una esfera gana en su descenso por un plano inclinado. Estos mecanismos permiten a su vez comprender el regimen dcsacelerado que se observa a ángulos de inclinación pequeños. En la región de velocidad constante donde la fuerza que actúa sobre la partícula es de tipo viscosa, se determinan mediante técnicas de sonido y video, la frecuencia de choque de la esféra móvil con las bolitas de vidrio de la superficie a fin de comprender la forma en que dicha esfera disipa energía por colisiones. Se observa como varía esta fuente de disipación en función del ángulo de inclinación. 2) Estabilidad y dinámica en empaquetamientos granulares Se estudia el proceso de avalancha donde existe una interacción colectiva entre los granos. Un empaquetamiento de esferas monodispersas colocadas en una caja cerrada con humedad controlada se inclina suavemente hasta que el sistema se desestabiliza dando lugar a una avalancha. Dicho proceso se caracteriza mediante la masa desalojada y dos ángulos característicos: maximo angulo de estabilidad: es el que forma la superficie libre del empaquetamiento con la horizontal cuando el sistema se desestabiliza y comienza la avalancha. - ángulo de reposo: es el que forma la superficie libre del empaquetamiento con la horizontal cuando la avalancha concluye. Se analizó la influencia de la cantidad de capas granulares (N), la humedad relativa ambiente, la fracción de compactación inicial y el tamaño del empaquetamiento en la variación de estos ángulos críticos y de la masa de la avalancha. Se encuentra que para empaquetamientos con un número dc capas mayor que un cierto valor crítico Nc,el proceso de avalanchas sólo afecta a las Nc,capas superficiales y tanto los ángulos críticos como la masa desplazada, son independientes de N. Finalmente se verifica la relación que para sistemas abiertos existe entre el angulo de reposo y el denominado angqu neutro donde un flujo de granos (avalancha) no produce erosión ni sedimentación sobre la superficie de un empaquetamiento granular.

Abstract:
The behavior of a flow of grains over the slope of a granular packing is studied. This work is presented in two parts: l) Motion of a sphere over a granular bed. Individual motion of an isolated grain over a granular bed is studied. This interaction is experimentally modeled by means of the motion of a sphere of diameter D over an inclined bed constituted of grains with mean diameter d < D. According to the slope of the granular surface, three different regimes are observed: decelerated, constant velocity and accelerated motions. Experimental results lead to understand in detail the energy dissipation mechanisms involved when a sphere gains energy rolling down an inclined rough plane. This mechanisms also allow us to understand the decelerated motion that occurs at low inclination angles. In the constant velocity regime where there is a viscous dissipative force acting over the sphere its collision frequency with the grains that constitute the bed is determined using acoustic and video techniques. This helps to understand the way in which the sphere dissipates energy by collisions. The variation of this dissipative source with the inclination angle of the granular bed is studied. 2) Stability and dynamics in granular packings. The avalanche process where there is collective interaction between grains is studied. A monodisperse glass sphere packing under controlled humidity is slowly inclined until the system loose its stability and an avalanche takes place. This process is characterized by the avalanche mass and two characteristics angles: - Maximum angle of stability: the angle between the packing free surface and the horizontal at which the system looses its stability and when the avalanche begins. - Angle of repose: the angle between the packing free surface and the horizontal when the avalanche ends. The influence of the number of granular layers (N), relative humidity, initial packing fraction and packing size on the critical angles and the avalanche mass is analyzed. It is found that for packing with more than a certain critical number of layers Nc. the avalanche process only involves the Nc superficial layers and both the critical angles and the avalanche mass are independent on N. Finally, for open systems, the relation between the angle of repose and the neutral angle where a granular flow (avalanche) produces no erosion nor sedimentation over the granular packing surface is verified.

Agüero, Fernán Gonzalo. "Purificación, caracterización, clonado y expresión de malato dehidrogenasas del helminto parásito Echinococcus granulosus" (2001). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las isoformas de malato dehidrogenasa presentes en protoescólices de E. granalosus fueron purificadas a homogeneidad, mediante un protocolo que incluye un fraccionamiento con sulfato de amonio y la separación de las isoformas citosólica y mitocondrial mediante cromatografía de afinidad en 5'-AMP-Sefarosa. La mMDH es llevada a homogeneidad mediante la adición de una cromatografía de afinidad en Blue Sepharose. La cMDH en cambio es purificada siguiendo un protocolo ya descripto que incluye cromatografía de intercambio iónico en DEAE-celulosa, filtración molecular en columna de Superosa 12 y cromatografía de afinidad en Blue Sepharose. la identidad de las isoformas fue confirmada mediante i) el estudio del comportamiento cinético de ambas en presencia de exceso del sustrato oxaloacetato, ii) el comportamiento diferencial que muestran las dos isoformas frente al detergente catiónico CTAB y iii) la secuenciación de péptidos a partir de ambas. En el caso de la mMDH, cuyo gen no se encontraba clonado, la información peptídica obtenida permitió comenzar el clonado del mismo, por amplificación de dos fragmentos del ADNc codificante de la enzima. Con ellos, se rastreó una biblioteca de ADNc de protoescólices que permitió extender la secuencia del ADNc hacia el extremo 3'. Finalmente, la secuencia del ADNc se completó utilizando la técnica de amplificación rápida de extremos de ADNc (5' RACE), que permitió amplificar y secuencia: el extremo 5’ faltante. El ADNc completo fue utilizado para expresar, en forma recombinante, a la mMDH, en forma de fusión con la glutation-S-transferasa de S. japonicum. La proteína recombinante resultó activa y los parámetros cinéticos de la misma fueron comparados con los obtenidos para la enzima obtenida de la fuente natural. La cMDH recombinante, clonada y expresada por el grupo del Dr. Arnaldo Zaha también fue comparada cinéticamente con la enzima natural purificada en esta Tesis.

Abstract:
The isoforms of malate dehydrogenase present in protoscolices of E. granulosus were purified to homogeneity using a protocol that includes an ammonium sulfate precipitation step and an afinity chromatogmphy step on 5’-AMP Sepharose to separate cMDH from mMDH. The mMDH is obtained in apparently homogeneous form by an additional affinity chromatography step on Blue Sepharose. The cMDH is purified following a previously described protocol that includes ion exchange chromatography on DEAE-cellulose, gel filtration on Superose 12 columns and affinity chromatography on Blue Sepharose. The identity of the purified isoforms was confirmed based on i) the kinetic behaviour of the enzymes in the presence of an excess of oxaloacetate, ii) the differential behaviour shown in the presence of the cationic detergent CTAB, and iii) by sequencing of internal peptides from both isoforms. Peptide information from mMDH was used to start the cloning of its gene. This information allowed us to amplify two fragments from the cDNA that were then used to screen a protoscolex cDNA library and obtain a positive phage which contained sequence information corresponding to the 3’ end of the cDNA. The remaining 5' end was amplified using the 5' RACE technique. The full-length CDNA was then used to produce recombinant mMDH as a fusion protein with the S. japonicum glutathione-S-transferase. The recombinant protein was active and its kinetic parameters were compared with those of the natural enzyme. The recombinant cMDH, cloned and expressed by Dr. Zaha’s group was also compared kinetically with the natural enzyme purified in this Thesis.

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