Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación :
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI) Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas (INIFTA) Universidad de Massachusetts. Amherst. EEUU
Resumen: El alga verde cenocítica Codium vermilara desarrolla paredes celulares complejas, con una fase fibrilar compuesta por β-(1→4)-D-mananos que se ubican en una capa exterior y una interior de similar espesor, y una matriz central de polisacáridos sulfatados, incluyendo un arabinano y un galactano como componentes principales, y en menor medida un β-(1→4)-D-manano sulfatado que podría actuar como interfase con la parte neutra de la pared). El galactano es similar a los sintetizados por otras especies del género. Tienen enlaces β-D-(1→3), grupos sulfato en C-4 y C-6 y acetales de ácido pirúvico en C-3 y C-4. El arabinano, altamente sulfatado y con uniones β-L-(1→3), constituye el primer reporte de un polisacárido compuesto por una cadena lineal de unidades de arabinopiranosa. Estos resultados permiten proponer un modelo completo de pared celular para esta macroalga verde. El arabinano sulfatado presentó una importante actividad anticoagulante a través de al menos cuatro mecanismos: potenciación de antitrombina y de cofactor II de la heparina e inhibición directa de Factor Xa y de trombina. La inhibición directa de trombina involucra un mecanismo novedoso, donde la unión del polisacárido al exositio 2 de la enzima provoca cambios en la geometría de su tríada catalítica.
Abstract: Coencocytic green seaweed Codium vermilara develops complex cell walls, with a fibrillar phase composed by β-(1→4)-D-mannans that form an outer and an inner layer of similar thickness, and a central matrix of sulfated polysaccharides, including arabinans and galactans as major components, and in minor quantities, a sulfated β- (1→4)-D-mannan that could act as an interphase with the neutral part of the wall). Galactans are similar to those synthetized by other Codium species. They present β-D- (1→3) linkages, sulfate groups on C-4 and C-6 and pyruvic acetals on C-3 and C-4. The highly sulfated arabinan, with β-L-(1→3) linkages, constitutes the first report of a polysaccharide built up by a linear chain of arabinopyranose units. These results allow us to postulate a complete model of cell wall arrangement for this green macroalga. The sulfated arabinan showed important anticoagulant activity by at least four mechanisms of action: potentiation of antithrombin and heparin cofactor II and direct inhibition of Factor Xa and thrombin. Direct inhibition of thrombin takes place by an original mechanism involving binding of the polysaccharide to exosite 2 of the enzyme that promotes changes in the geometry of its catalytic triad.
Título :
Polisacáridos del alga verde Codium vermilara: estructura fina, su ensamble en la pared celular. Actividad anticoagulante de un arabinano piranósico sulfatado = Polysaccharides from green seaweed Codium vermilara: Fine structure, its arrangement in the cell wall. Anticoagulant activity of a pyranosic sulfated arabinan
Autor :
Fernández, Paula Virginia
Director :
Ciancia, Marina Estevez, José Manuel
Consejero de estudios :
Confalonieri, Viviana
Jurados :
Quartino, María L. ; Maldonado, Sara ; Flores, María L.
Año :
2012
Editor :
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación :
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Departamento de Química Orgánica. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono (CIHIDECAR) Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Biología Aplicada y Alimentos. Cátedra de Biomoléculas
Grado obtenido :
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas
Cita tipo APA: Fernández, Paula Virginia . (2012). Polisacáridos del alga verde Codium vermilara: estructura fina, su ensamble en la pared celular. Actividad anticoagulante de un arabinano piranósico sulfatado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5100_Fernandez.pdf
Cita tipo Chicago: Fernández, Paula Virginia. "Polisacáridos del alga verde Codium vermilara: estructura fina, su ensamble en la pared celular. Actividad anticoagulante de un arabinano piranósico sulfatado". Tesis de Doctorado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2012. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5100_Fernandez.pdf
Resumen: Los trifenilenos hexasustituidos (TF) tienen tendencia a auto-ensamblarse dando origen, en general, a mesofases columnares. A su vez, los polímeros basados en cristales líquidos han presentado gran interés dentro del área de los materiales ya que combinan la tendencia a auto-ensamblarse de los cristales líquidos, la facilidad de procesamiento y estabilidad térmica con las propiedades intrínsecas de los polímeros convencionales. Teniendo en cuenta estas propiedades, en el presente trabajo de tesis se desarrolló la síntesis, caracterización y estudio de las propiedades térmicas y estructurales de diversos sistemas poliméricos en los que se incorporó la unidad trifenileno como fragmento organizador. Para ello se sintetizaron los trifenilenos monoméricos que fueron introducidos tanto en polímeros de cadena lateral como principal, en sistemas híbridos como en puramente orgánicos, y en polímeros lineales como en sistemas entrecruzados. En primer lugar, se prepararon y estudiaron los trifenilenos monoméricos precursores. Para ello se sintetizaron trifenilenos mono, di y trifuncionalizados con grupos carboxílicos terminales para dos longitudes de espaciadores diferentes. Se evaluó la dependencia de las propiedades mesomorfas con la cantidad de grupos terminales presentes y con la distancia centro aromático-grupo terminal. También se sintetizó un trifenileno monofuncionalizado con un grupo amino y sus propiedades cristal líquido se compararon con las de los trifenilenos mono-ácidos. En segundo lugar, se incorporaron los trifenilenos mono-carboxílicos como unidades “colgantes” en polímeros de coordinación espinales basados en carboxilatos bimetálicos de rutenio. Los dos sistemas estudiados presentaron polimorfismo y se observó una importante dependencia de la estructura de la mesofase obtenida con la distancia del espaciador TF-esqueleto polimérico. En tercer lugar, el trifenileno con un grupo amino terminal también se incorporó como grupo “colgante” en silsesquioxanos puenteados. Las condiciones de síntesis de estos materiales entrecruzados se eligieron de forma tal de favorecer la organización del material por la presencia del grupo colgante, empleando en la puesta a punto dos aminas aromáticas comerciales. Se logró obtener una estructuración 2-D, aunque de mediano alcance, para el material con el grupo TF. Por último, se prepararon dos tipos de polímeros de cadena principal basados en trifenilenos: poliésteres y poliéteres. Se obtuvieron los polímeros lineales, a partir de los trifenilenos difuncionalizados, y los sistemas entrecruzados al introducir trifenilenos trifuncionalizados. Los poliéteres presentaron mejores grados de polimerización y sistemas con una mayor organización.
Abstract: Hexasubsituted triphenylenes (TF) tend to self-assembly, usually giving rise to columnar mesophases. Also, liquid crystal (LC) polymers received considerable attention in the materials chemistry field since they combine the self-assembling properties of monomeric liquid crystals with the easy processing and thermal stability of classical polymers. Based on these qualities, in this work we studied the synthesis, characterization, thermal and structural properties of various polymeric systems containing a triphenylene group aimed to act as a structural organizer. We first synthesized monomeric TF that were then incorporated in main chain as well as side chain polymers, in hybrid as well as purely organic polymers, and in linear polymers as well as in networks. The monomeric TF used in this work were terminally functionalized hexaalkoxytriphenylenes. We synthesized mono-, bi- and tri-functionalized TF bearing carboxylic groups as terminal subsituents of the corresponding alkoxy chain, for two different spacers lengths. We studied the influence of the number of terminal groups in the mesomophic properties, as well as the influence of the core-terminal group distance. We also synthesized a mono-functionalized triphenylene bearing an amine group as a terminal substituent, and we compared its LC properties with those of the mono-acidic triphenylenes. Mono-carboxylic triphenylenes were employed as pendant units in diruthenium carboxylate-based spinal coordination polymers. Both systems showed polymorphism and a significant influence of the spacer length on the mesophase structure. A mono-amine triphenylene was introduced in bridged silsesquioxanes. Synthesis conditions were chosen to favor the influence of the pendant group in the network organization. Two commercial aromatic amines were employed for setting up the “ideal” synthesis conditions. A 2-D medium-range organization was observed for the material bearing the TF group. Two types of triphenylene-based main chain polymers, polyesters and polyethers, were obtained by polymerization of bi-functionalized triphenylenes. Crosslinking of these systems was achieved by introducing tri-functionalized triphenylenes during the synthesis of the polymer main-chain. Polyethers showed a higher degree of polymerization and more organized systems.
Título :
Trifenilenos mesogénicos funcionalizados: organizadores estructurales de materiales poliméricos = Functionalized mesogenic triphenylenes: structural organizers of polymeric materials
Autor :
Cecchi, Florencia
Director :
Cukiernik, Fabio D.
Consejero de estudios :
Baraldo, Luis M.
Jurados :
Jobbagy, Matías ; Strumia, Miriam ; Varela, Oscar José
Año :
2012-03-15
Editor :
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación :
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Instituto de Química Física de los Materiales, Medio Ambiente y Energía (INQUIMAE)
Grado obtenido :
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Inorgánica, Analítica y Química Física
Cita tipo APA: Cecchi, Florencia . (2012-03-15). Trifenilenos mesogénicos funcionalizados: organizadores estructurales de materiales poliméricos. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5046_Cecchi.pdf
Cita tipo Chicago: Cecchi, Florencia. "Trifenilenos mesogénicos funcionalizados: organizadores estructurales de materiales poliméricos". Tesis de Doctorado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2012-03-15. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5046_Cecchi.pdf
Resumen: La formación de complejos biomoleculares (receptor-ligando), es un proceso que comprende numerosos aspectos físico-químicos, como la formación de diferentes tipos de interacciones entre la proteína y su ligando y el cambio en la estructura de solvatación en las superficies de contacto de ambas moléculas. Un importante desafío consiste en comprender el papel de las moléculas de agua en el proceso de unión, dado que muchas de estas pueden ser desplazadas desde el sitio de unión hacia el seno del solvente, mientras que otras pueden permanecer fuertemente unidas en el mismo, puenteando la interacción entre la proteína y el ligando. Por otra parte, el desplazamiento de aguas juega también un rol clave en la determinación del resultado termodinámico del proceso de unión. El rol de la estructura de solvente en las lectinas, que comprenden todas las proteínas de unión/reconocimiento de carbohidratos sin actividad enzimática, es particularmente relevante en el proceso de reconocimiento, debido a la naturaleza hidrofílica del ligando y el sitio de unión. En este contexto, el presente trabajo de tesis doctoral, pone a prueba la hipótesis de que la estructura del solvente en el sitio de unión a carbohidratos (CBS) de lectinas, guarda una relación con la forma y las interacciones del complejo lectinacarbohidrato resultante, y por lo tanto, se puede utilizar para predecir su modo de unión. Para ponerla a prueba, se plantean los siguientes objetivos: (I) Empleando simulaciones de Dinámica Molecular en solvente explícito, en combinación con un análisis termodinámico estadístico, desarrollar y contribuir a la hipótesis de trabajo de que la estructura formada por las moléculas de agua presentes en el sitio de reconocimiento de carbohidratos en el receptor libre, emulan la posición de los grupos funcionales polares del ligando (en particular los hidroxilos u OHs) cuando se forma el complejo. (II) Combinando el análisis mencionado en el ítem I) con métodos de punto final para el cálculo de la energía libre proteína-ligando, se estudió la base estructural subyacente a la selectividad epimérica mostrada por lectina del hongo Agaricus bisporus (ABL), la cual muestra dos sitios de unión a carbohidratos bien diferenciados (CBS-A y CBSB ) que se encuentran en el mismo dominio, en donde la evidencia experimental muestra que cada uno de ellos es capaz de discriminar entre los epímeros, N-Acetil-DGalactosamina y N-Acetil-D-Glucosamina. (III) Finalmente, utilizando la información de la estructura de solvente, se ha desarrollado un esquema de Docking Molecular modificado que proporciona una mejora significativa en términos de exactitud (la relación entre el complejo predicho y la estructura de referencia cristalográfica) y precisión (discriminación entre el resultado verdadero de los falsos positivos) en la predicción de la estructura de complejos lectina-carbohidratos.
Abstract: The formation of biomolecular complexes (receptor-ligand), is a process that involves many physicochemical aspects, like the formation of different types of interactions between the protein and its ligand, and the change in the solvation structure between the contact surfaces of both molecules. Understanding the role of water molecules in the binding process is particularly challenging, since while some water molecules are displaced to the bulk solvent, others remain tightly bound in the binding site, bridging protein ligand interactions. Moreover, water displacement is also a key player in determining the thermodynamic outcome of the binding process. Lectins, comprise all carbohydrate binding/recognition proteins that do not have enzymatic activity, and given the hydrophilic nature of these ligands and these binding site, the role of the solvent structure in these protein-ligand recognition process is particularly relevant. In this context, the present PhD thesis, seeks to test and analyze the hypothesis that the solvent structure in the carbohydrate binding site (CBS) of lectins, mimics the shape and interactions of the resulting lectin-carbohydrate complex, and could thus be used to predict their binding mode. To achieve this task, we have pursued the following specific aims: (I) Using explicit solvent molecular dynamics simulations (MD) combined with a statistical thermodynamic analysis, we have analyzed the structure adopted by the water molecules in the CBS of several lectins, and related this information with the position of the polar functional groups of the carbohydrate ligands in the resulting complexes. (II) We have combined the above mentioned analysis with protein-ligand end-point free energy calculations to analyze the underlying structural basis of the epimeric selectivity showed by Agaricus bisporus Lectin (ABL), where two carbohydrate binding site (CBS-A and CBS-B) have found in the same carbohydrate recognition domain (CRD), show that each of them is capable to discriminate between the epimers, N-acetyl-D- Galactosamine and N-acetyl-D-Glucosamine. (III) Finally, and using the information of the solvent structure, we have devised a modified molecular docking scheme that provides significant improvement in terms of accuracy (the relationship between the predicted and crystallographic complex of reference) and precision (discrimination between the true from false positives results) in the prediction of lectin-carbohydrate complex structures.
Título :
Fisicoquímica del agua en la superficie proteica y su protagonismo en la unión de carbohidratos = Protein’s surface water molecules and their role in the carbohydrate recognition process
Autor :
Gauto, Diego F.
Director :
Martí, Marcelo
Consejero de estudios :
Slep, Leonardo
Jurados :
Cavasotto, Caludio Norberto ; Santos, Javier ; Marceca, Ernesto Daniel
Año :
2013
Editor :
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación :
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Instituto de Química Física de los Materiales, Medio Ambiente y Energía (INQUIMAE) Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química Física (DQIAyQF)
Grado obtenido :
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Inorgánica, Analítica y Química Física
Cita tipo APA: Gauto, Diego F. . (2013). Fisicoquímica del agua en la superficie proteica y su protagonismo en la unión de carbohidratos. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5431_Gauto.pdf
Cita tipo Chicago: Gauto, Diego F.. "Fisicoquímica del agua en la superficie proteica y su protagonismo en la unión de carbohidratos". Tesis de Doctorado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2013. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5431_Gauto.pdf
Resumen: El objetivo de este trabajo de tesis es estudiar la dinámica de los entornos sonda-caja de polímero en películas nanométricas de polímeros amorfos. Para ello se utilizaron sondas fluorescentes, altamente sensibles a las propiedades fisicoquímicas de su entorno (Rojo Nilo) embebidas en polimetacrilatos de alquilo. La emisión de la sonda se estudió a escala macroscópica (ensamble de moléculas de colorante) y a nivel de moléculas individuales. En ambos casos se analizaron las propiedades espectrales y rotacionales de la sonda en la caja de polímero. La espectroscopía de emisión de fluorescencia de moléculas individuales de Rojo Nilo mostró fluctuaciones espectrales cuya frecuencia y amplitud son independientes del espesor y tipo de polímero, mientras que las reorientaciones de la sonda dependen del espesor de la película, que esta asociado a cambios en el valor de la temperatura de transición vítrea por efecto del confinamiento. El fotoblanqueo se encuentra siempre presente en experimentos de este tipo, y con esta motivación, se propuso una solución al estudio de la dinámica rotacional del ensamble en presencia de fotoblanqueo bajo excitación linealmente polarizada. Se obtuvo así el coeficiente de difusión rotacional de la sonda en los polímeros, que explica la tendencia observada para la movilidad de moléculas individuales. Las medidas se realizaron con dos configuraciones de microscopio de fluorescencia: confocal con detección espectrográfica y de campo amplio con detección polarizada. Este último, se montó íntegramente en uno de los laboratorios de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.
Abstract: In this Thesis, we study the dynamics of probe-polymer cage environments in thin polymer films. For this purpose, we employed fluorescent probes with a high sensitivity to the physicochemical properties of its environment, as Nile Red. The selected polymer matrixes were the polyalkylmethacrylates. The distance and interactions between the probe and its near environment (polymer cage) affect some emission features of the dye. Examples of these features are: the emission spectrum and probe reorientation. Probe emission was studied at macroscopic (ensemble of dye molecules) and single molecule level. Spectral and reorientational properties of the emission were studied. At the single molecule level, fluorescence spectroscopy of individual Nile Red molecules shows spectral fluctuations whose frequency and amplitude are independent of the thickness and the polymer type. The rotational dynamics of single molecule in the ground state, followed by polarized emission measurements, showed a dependence of amplitude and frequency of reorientation events on polymer film thickness. A new method to study probe rotational diffusion, which combines anisotropy and photobleaching with linearly polarized excitation is presented. It is based on 1-photon photobleaching and isotropic rotation of the dye. The diffusion coefficient of Nile Red in the polymer matrix of different thickness was obtained and it was correlated to single molecule reorientations results. Two fluorescence microscopy configurations were used: confocal microscopy with spectrographic detection, and wide-field microscopy with polarized emission detection. The last setup was built up in the Faculty of Exact and Natural Sciences.
Título :
Movimientos locales en películas delgadas de polímeros amorfos = Local movements in amorphous polymer thin films
Cita tipo Chicago: Araoz, Beatriz. "Movimientos locales en películas delgadas de polímeros amorfos". Tesis de Doctorado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2013-03-04. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5251_Araoz.pdf
Resumen: El objetivo de este trabajo fue caracterizar el efecto de la aplicación de ultrasonidos de alta intensidad (USAI) en las propiedades moleculares y funcionales de un aislado de proteínas de albúmina de huevo comercial (EW) y desarrollar nanopartículas por agregación controlada mediante USAI, sólo o en combinación con altas temperaturas (termosonicación), con la finalidad de emplearlas como nanovehículos (nanocarriers) para ácido fólico (AF). Luego de la aplicación de USAI, la hidrofobicidad superficial aumentó, mientras que se produjo un leve descenso del contenido de grupos SH totales. La viscosidad aparente disminuyó con el tratamiento con USAI, lo que pudo ejercer una influencia negativa en la capacidad de espumado y la estabilidad de las espumas. Sin embargo, la estabilidad al colapso no se vio afectada. Las emulsiones preparadas a partir de soluciones sonicadas resultaron ser más estables al cremado y a la floculación. No hubo diferencias significativas en los parámetros reológicos de los geles estudiados. La velocidad de formación de agregados por efecto del calentamiento fue mayor para las soluciones sonicadas, lo cual puede atribuirse al aumento en la hidrofobicidad de la proteína luego de la sonicación. Luego, se realizaron tratamientos con USAI y termosonicación a pH 7 y 3, para determinar las condiciones óptimas para la formación de las nanopartículas. Se seleccionaron dos tipos de nanopartículas, ambas a pH 3: las obtenidas por USAI, que presentaron una población monomodal de 220,2 nm de diámetro y las obtenidas por termosonicación, porque contenían partículas de 37,8 nm en su mayoría. Luego de la unión con AF, el tamaño de partícula permaneció igual. El porcentaje de AF unido fue de alrededor de 80% para ambos nanovehículos. Luego de la liofilización, se observó una leve agregación de las nanopartículas reconstituidas. Finalmente, se determinó que, luego de la digestión gastrointestinal in vitro de los complejos, la biodisponibilidad del AF para Lactobacillus rhamnosus fue mayor en comparación con la de la vitamina libre.
Abstract: The objective of this work was to characterize the effect of the application of high intensity ultrasound (USAI) on the molecular and functional properties of a commercial egg white protein isolate (EW) and to develop nanoparticles by means of controlled aggregation using USAI, alone or combined with high temperatures (thermosonication), with the aim of using them as nanocarriers for folic acid (AF). After the application of USAI, the surface hidrophobicity increased; while a slight decrease in the total SH groups content was observed. The apparent viscosity was lowered by USAI treatment, which could exert a negative influence on the foaming capacity and foam stability. However, the stability to collapse remained unaffected. The emulsions prepared from sonicated solutions turned out to be more stable to creaming and flocculation processes. There were no significant differences among the studied rheological parameters of the gels. The rate of aggregates formation by heating was higher for sonicated solutions, which can be attributed to the increase in surface hydrophobicity of the protein after USAI treatment. Then, USAI and thermosonication treatments were applied at pH 3 and 7 to determine the optimal conditions for the formation of nanoparticles. Two types of nanoparticles were selected, both at pH 3: one obtained by USAI, which presented a monomodal population of 220.2 nm of diameter and another produced by thermosonication, because it contained particles of 37.8 nm mostly. When binding the AF to the nanoparticles, the particle size was unaffected. The percentage of bound AF was approximately 80% for both nanocarriers. After freeze-drying the samples, a slight aggregation of the rehydrated nanoparticles was observed. Finally, it was determined that, after in vitro gastrointestinal digestion of the complexes, the bioavailability of AF for Lactobacillus rhamnosus was higher in comparison with the free vitamin.
Título :
Modificación molecular y funcional de proteínas de clara de huevo mediante ultrasonidos de alta intensidad: aplicación de esta tecnología al diseño de nanovehículos para ácido fólico = Molecular and functional modification of egg white proteins by high intensity ultrasound: aplication of this technology for the design of folic acid nanocarriers
Autor :
Arzeni, Carolina
Director :
Pilosof, Ana M.R.
Consejero de estudios :
Pilosof, Ana M.R.
Jurados :
Scilingo, Adriana ; Campos, Carmen ; Martino, Miriam
Año :
2014
Editor :
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación :
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Departamento de Industrias
Grado obtenido :
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Industrial
Cita tipo APA: Arzeni, Carolina . (2014). Modificación molecular y funcional de proteínas de clara de huevo mediante ultrasonidos de alta intensidad: aplicación de esta tecnología al diseño de nanovehículos para ácido fólico. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5480_Arzeni.pdf
Cita tipo Chicago: Arzeni, Carolina. "Modificación molecular y funcional de proteínas de clara de huevo mediante ultrasonidos de alta intensidad: aplicación de esta tecnología al diseño de nanovehículos para ácido fólico". Tesis de Doctorado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2014. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5480_Arzeni.pdf
Resumen: Las proteínas repetitivas están compuestas por repeticiones en tándem de motivos estructurales. Estas unidades interaccionan entre sí de forma tal que coalescen en arquitecturas del tipo solenoidal o toroidal. Por su simplicidad topológica constituyen modelos útiles para el estudio del plegado de proteínas. Esta tesis se centra en el estudio de los miembros de la familia de proteínas con repeticiones de Ankirina (ANKs) que contienen entre 3 y 34 copias de un motivo de 33 residuos de largo. Siendo principalmente descriptas como mediadoras de interacciones proteína-proteína, las ANKs poseen una versatilidad para el reconocimiento de otras moléculas comparable a la de los anticuerpos. A pesar de su simplicidad estructural, las proteínas repetitivas presentan varios desafíos inherentes a su no globularidad. Las repeticiones pueden ser muy degeneradas en sus secuencias dificultando la deteccióon y definición de límites entre ellas, siendo este un problema aún no resuelto en este campo de estudio. Dado que las estructuras están mucho más conservadas que las secuencias, hemos desarrollado un método, llamado Teselado proteico" capaz de detectar repeticiones estructurales de forma objetiva, rigurosa y eficiente. Dicho algoritmo es independiente de la secuencia de las moléculas analizadas y es además generalizable a todos los tipos de proteínas repetitivas. Su aplicación a distintas clases de proteínas nos permitió caracterizar sus periodicidades y espectro de simetrías. Hemos aplicado nuestro algoritmo a todos los miembros de la familia ANK. Haciendo uso de nociones de la teoría de paisajes energéticos y con la hipótesis de que las repeticiones constituyen unidades de plegado, fuimos capaces de definir el largo y la fase de las repeticiones en todos los casos. Este estudio representa el primer caso reportado en que una estrategia de anotación de las unidades repetitivas consistente es aplicada a lo largo de toda una familia, lo cual permite realizar análisis comparativos al nivel de las repeticiones individuales. Los análisis subsiguientes muestran que las repeticiones ANKs pueden clasificarse en 3 tipos diferentes que corresponden a las repeticiones ubicadas en la región N-terminal, interna o C-terminal. Cada tipo de repetición muestra patrones de conservación en secuencia y en su energía de plegado específicos de su tipo. Pudimos observar además que los niveles de conservación de la secuencia y de la energía de plegado se encuentran correlacionados de forma lineal y positiva, lo cual indica que aquellas secuencias parecidas al consenso que se obtiene a partir del alineamiento múltiple de secuencias son más plegables que aquellas que se alejan del mismo. Existe una red de interacciones conservadas y energéticamente favorables en todas las repeticiones internas de las ANKs que conectan aquellos residuos más conservados en secuencia y que por tanto constituyen un núcleo de estabilidad estructural de las mismas. Al analizar en cambio todos los elementos que no forman parte de la estructura canónica de las repeticiones (inserciones y deleciones), las regiones cercanas a las mismas, se encuentran enriquecidas en interacciones frustradas, es decir, son desfavorables para el plegado de las mismas. Lo anterior sugiere que la presencia de inserciones y deleciones indica adaptaciones funcionales de las proteínas en que se encuentran. Este enriquecimiento de interacciones frustradas se observa también en los sitios de interacción con otras proteínas. Finalmente hemos estudiado la dinámica de plegado de estas moléculas usando métodos basados en estructura. Hemos caracterizado los mecanismos de plegado de varios miembros de la familia ANK y relacionando los mismos con los patrones energéticos previamente descriptos a partir de los estados nativos. Nuestros resultados ofrecen nuevas perspectivas acerca del funcionamiento de las proteínas de la familia ANK y pueden ser de gran utilidad para aquellos interesados en el dise~no de este tipo de moléculas para diferentes fines y el entendimiento biofísico de estas moléculas en forma general.
Abstract: Repeat proteins are composed of specific structural motifs that are tandemly repeated. These units interact between each other leading to solenoidal or toroidal architectures. Given their topological simplicity these molecules constitute useful models to study the protein folding problem. This thesis is focused in studying the Ankyrin Repeat Protein Familiy (ANKs). Proteins from this family contain between 2 and 34 copies of a structural motif of 33 residues long. Being mainly described as protein-protein interactors, the ANKs have a high versatility to recognize other molecules, comparable to that of antibodies. Despite their structural simplicity, repeat proteins present several challenges that are inherent to their non-globularity. Repeats can be highly degenerated in their sequences difficulting their detection and the definition of limits in between them. Given that the structure is more conserved than the sequence, we have developed a method called Protein tiling" that is able to detect structural repetitions in an objective, rigorous and efficient manner. This algorithm is independent from the sequences of the proteins being analyzed and also it is generalizable to other repeat protein families and types. Its application to different protein classes allowed us to characterize their periodicities and symmetry spectra. We have applied the Protein Tiling algorithm to all the members in the ANK family. Using notions from the energy landscapes theory and the hypothesis of repeats as protein folding units, we were able to define the length and phase for the repeating units in all the ANKs. This study represents the first reported case in which a consistent repeats annotation strategy is applied to a whole family which allows to perform comparative analysis of repeats as individual units. Subsequent analysis showed that ANK repeats can be classified into 3 different types that correspond to repetitions localized at the N-terminal, internal or C-terminal regions. Each repeat type shows specific sequence and energy conservation patterns. We observed that the conservation degree at the sequences and the energy patterns are linearly and positively correlated, indicating that those sequences that are similar to the consensus obtained from the multiple sequence alignment are more foldable than those that have more differences with it. There exists a network of conserved interactions along all internal ANK repeats that connect those residues that are highly conserved in sequence and hence constitute a structural stability core for the overall structure. On the contrary, when analyzing those elements that do not belong to the canonical repeats structure (insertions and deletions), those regions that are close to them are enriched in frustrated interactions, i.e. where local folding is unfavorable. The latter suggests that the presence of insertions and deletions indicate functional adaptations of the proteins in which they are contained. This enrichment of frustrated interactions is also observed at the interaction sites of ANKs with other proteins. Finally we have studied the folding dynamics of several ANK members using state of the art computational methods. We have characterized the folding mechanisms of several members in the ANK family and related those with the energetic patterns previously described from the native states. Our results offer new insights into how ANK proteins function and can be of great value to those researchers that are interested in using these type of molecules for protein design with different aims and for the biophysical understanding of these molecules in general.
Título :
Estructuras, simetrías y paisajes energéticos en la familia de proteínas con repeticiones de Ankirina = Structures, symmetries and energy landscapes in the Ankyrin repeat protein family
Autor :
Parra, Rodrigo Gonzalo
Director :
Ferreiro, Diego U.
Consejero de estudios :
Martí, Marcelo A.
Jurados :
Parisi, Gustavo D. ; Marino, Cristina E. ; Chemes, Lucía
Año :
2016-03-23
Editor :
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación :
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Departamento de Química Biológica. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN). Laboratorio de Fisiología de Proteínas
Grado obtenido :
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Cita tipo APA: Parra, Rodrigo Gonzalo . (2016-03-23). Estructuras, simetrías y paisajes energéticos en la familia de proteínas con repeticiones de Ankirina. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5914_Parra.pdf
Cita tipo Chicago: Parra, Rodrigo Gonzalo. "Estructuras, simetrías y paisajes energéticos en la familia de proteínas con repeticiones de Ankirina". Tesis de Doctorado. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2016-03-23. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_5914_Parra.pdf
http://digital.bl.fcen.uba.ar
Biblioteca Central Dr. Luis Federico Leloir - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Universidad de Buenos Aires
Intendente Güiraldes 2160 - Ciudad Universitaria - Pabellón II - C1428EGA - Tel. (54 11) 4789-9293 int 34