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Tesis > TEMA

Biología [ 2301 tesis ]

Fisiología Humana [ 19 tesis ]

Zeni, Susana Noemí. "Necesidades de calcio : Estudio experimental en relación al estado nutricional y a la velocidad de crecimiento" (1985) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Golombek, Diego Andrés. "La actividad cronobiológica de la melatonina : Relación con el sistema gabaérgico central" (1992) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Páez Pereda, Marcelo. "Regulación del sistema de interleuquina-1 por las hormonas del eje hipotálamo-pituitario-adrenal" (1995) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Ballaré, Cecilia J.. "Heterogeneidad celular en carcinomas mamarios humanos" (1997) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Dos objetivos principales fueron planteados en este trabajo: 1) investigar la heterogeneidad celular en carcinomas mamarios humanos, caracterizando distintas subpoblaciones celulares respecto a proliferación y expresión de diversos marcadores tumorales; 2) obtener anticuerpos monoclonales (AMC) contra estos tumores, con propiedades citotóxicas, que reconozcan células indiferenciadas, de alto potencial proliferativo. Los estudios de heterogeneidad celular fueron realizados utilizando muestras tumorales humanas, la proliferación evaluada mediante incorporación de Timidina y marcadores por inmunohistoquímica. Los resultados permitieron establecer una secuencia de expresión de marcadores a medida que progresa la diferenciación celular y disminuye la capacidad proliferativa. Pudieron identificarse marcadores asociados a distintas etapas de la diferenciación (NCA90, receptor estroncio, receptor de progesterona, TAG72, CaMBr1, CEA) y otros que comienzan a expresarse en células indiferenciadas, altamente proliferativas, y continuarían durante todo el proceso de diferenciación (Ag2.15, PEM). Se investigaron también las propiedades del AMC FC-2.15 (anti-Ag2.15) desarrollado utilizando como inmunogeno un carcinoma mamario humano indiferenciado. FC-2.15 presento una potente citotoxicidad contra células Ag2.15+ mediando lisis por complemento humano, reconocio un antígeno presente en membrana plasmática en alta densidad (2,8x10 6 /célula) y fue lentamente internalizado. Los resultados presentados en este trabajo sugieren que FC-2.15 podría ser útil en inmunoterapia de pacientes con neoplasias Ag2.15+.

Abstract:
The main purposes of this study were: 1) to investigate the cell heterogeneity in human breast cancer and characterize the different cell subpopulations with regard to proliferation and expression of tumor markers; 2) to obtain monoclonal antibodies (MAb) against these tumors which recognize highly undifferentiated (stem) cells, and mediate specific cytotoxicity. Cell heterogeneity was studied in human tumor samples, proliferation was evaluated by thymidine incorporation and markers by immunohistochemistry. According to the results, it could be defined a regular sequence of marker expression as cell differentiation proceeds and proliferation decreases. Some markers were identified which are expressed in different stages of the differentiation pathway (NCA90, estrogen receptor, progesterone receptor, TAG72, CaMBr1, CEA). Conversely, the expression of other markers (Ag2.15, PEM) would start in undifferentiated-highly proliferative cells and remain throughout the whole differentiation process. It was also investigated the properties of MAb FC-2.15 (anti-Ag2.15) generated using an undifferentiated human breast carcinoma as immunogen. Results showed that FC-2.15 exhibits strong human complement-mediated cytotoxicity against Ag2.15+ cells. It recognizes a high-density antigen (2.8x10 6/cell) in the cell membrane and is slowly internalized. The results obtained in this study suggest that FC-2.15 could be a useful agent for passive immuntherapy.

Veaute, Carolina M. I.. "Modelos de inmunidad natural y adquirida para el estudio del sistema proacrosina/acrosina en el proceso de fecundación" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Ouviña, Susana María. "Disfunción endotelial en angiopatías : angiopatía diabética tipo 2" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La Diabetes Mellitus es un transtomo sistémico con alteraciones del metabolismo de los hidratos de carbono, lípidos y proteínas. La forma clínica predominante es la diabetes tipo 2 o no-insulino dependiente, siendo la enfermedad cardiovascular, la principal causa de muerte en estos pacientes. El desarrolllo de la diabetes está precedido por un período de resistencia a la insulina y de hiperinsulinemia. La incidencia de hipertensión arterial y el stress oxidativo están aumentados en los pacientes diabéticos y asociados a alteraciones vasculares. Se evaluó la disfunción endotelial en la diabetes tipo 2 mediante diferentes estudios clínicos en pacientes y se realizaron estudios experimentales con células endoteliales humanas, ratones y macrófagos. Se propusieron como objetivos: - Determinar la presencia de activación plaquetaria y la expresión de proteínas adhesivas. - Evaluar el metabolismo del óxido nítrico y la expresión de NOS. - Estudiar la liberación de citoquinas y FvW. - Determinar los niveles plasmáticos de ET-l en los pacientes diabéticos y su interacción con el NO. - Relación entre los niveles plasmáticos de insulina, PAI-l y Péptído C. - Evaluación de la función endotelial a través de la medición de la respuesta vasodilatadora a la isquemia hiperémica. - Seguimiento secuencial de los parámetros metabólicos, vasoactivos y marcadores de disfunción endotelial en una población de individuos hipertensos bajo tratamiento con una droga antihipertensiva y en otra población sin tratamiento farmacológico. - Estudiar la acción de los AGEs en células endoteliales obtenidas a partir de cordón umbilical humano. Determinar la migración de las CE en presencia de AGEs. Realizar co-cultivos de células endoteliales con eritrocitos provenientes de pacientes diabéticos tipo 2. - Determinar la respuesta en un modelo experimental animal (ratones Balb/c) expuesto a distintas concentraciones de albúmina glicosilada. - Estudio comparativo entre macrófagos murinos y la línea celular U-937, monoblastos de origen humano, diferenciada a macrófagos. La acción de los AGEs observada en los experimentos in vitro e in vivo reprodujo, en parte, los resultados obtenidos en los pacientes estudiados. Los pacientes diabéticos expresaron marcadores de activación plaquetaria y presentaron alteraciones en el metabolismo del NO y su interrelación con la ET-l. Las proteínas reactantes de fase aguda tales como FvW, Fibrinógeno y PAI-1 estuvieron elevadas y asociadas a la condición de insulino-resistencia. Las drogas antihipertensivas tipo IECA mejoraron significativamente la función endotelial, disminuyendo el riesgo de eventos trombóticos.

Abstract:
Diabetes Mellitus is a sistemic disorder with alterated carbohydrates, lipids and proteins metabolisms. The most frecuent type is the non-insulin dependent diabetes or type 2 diabetes. The cardiovascular disease is the main cause of death in these patients. A period of insulin-resistance or hyperinsulinaemia may preced the onset of diabetes. Arterial hypertension incidence and oxidative stress are increased in diabetic type 2 patients and associated to vascular alterations. Endothelial dysfunction was evaluated through different kind of clinical studies in patients. Experiments were also performed in human endothelial cells. mice and macrophages. The objetives of this Thesis were: - To evaluate the platelet activation and the adhesive proteins expression. - To analyse the nitric oxide metabolism and nitric oxide synthases expression. - To study the cytokines and von Willebrand Factor release. - To analyse the relatioship among insulin, PAI-l and C Peptide plasmatic levels. - To evaluate the endothelial function by the measure of the vasodilator response to the hyperemic ischemia. - Time followed metabolic and vasoactive parameters and endothelial dysfunction markers in a hypertensive patients group under anti-hypertensive drug treatment and in another hypertensive patients group without pharrnacologic treatment. - To study AGES action on the endothelial cells obtained from human umbilical cord and on their migration. To evaluate the endothelial cells and red blood cells from diabetic type 2 patients co-culture. - To propose the response of an experimental animal model (Balb/c mice) at different concentration of glycated albumin. - To compare murin macrophages and human monoblastic cellular line U-937, diferentiated to macrophage. The results obtained from the clinical studies were reproduced at least in pan. for in vivo and in vitro experiments done under the action of AGEs. Platelet activation markers were expressed in diabetic and they also showed NO metabolism and an altered relationship with ET-l. Plasmatic levels of acute reactant phase proteins such as von Willebrand Factor, Fibrinogen and PAI-l were increased and associated with the insulin-resistance condition. Anti-hypertensive drugs such as angiotensin-converting enzyme inhibitor significantly improved the endothelial function and in consequence, may decrease the thrombotic events risk.

Morgenstern, Nicolás A.. "Efectos del envejecimiento y la neurodegeneración sobre la plasticidad neuronal en el hipocampo" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A medida que envejece, el cerebro de los mamíferos sufre modificaciones bioquímicas, estructurales y funcionales que disminuyen la plasticidad de sus circuitos. Estos cambios han sido propuestos como responsables del déficit cognitivo y del aumento en la incidencia de las enfermedades neurodegenerativas que se presentan con la edad. El giro dentado del hipocampo cuenta con una forma de plasticidad singular dada por la producción de nuevas neuronas granulares a lo largo de toda la vida. Mediante transducción retroviral con proteínas reporteras y/o transgenes relacionados con la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer se logró utilizar a estas neuronas como vehículo para monitorear los efectos del envejecimiento normal y patológico sobre la plasticidad neuronal. Utilizando inmunofluorescencia y microscopía confocal en ratones wild type envejecidos y en transgénicos modelando la enfermedad de Alzheimer pudimos observar que, aunque el número de neuronas generadas disminuye a lo largo de la vida, estas no se ven afectadas en su migración ni en la densidad de los contactos sinápticos aferentes que desarrollan durante el envejecimiento normal o patológico. Por otro lado, combinando registros electrofisiológicos con análisis morfológico encontramos que la expresión autónoma de célula de diferentes variedades de la proteína precursora de amiloide (APP) altera transitoriamente la forma en que estas neuronas se conectan al circuito del giro dentado. Llamativamente, este efecto parecería no estar mediado por el péptido β amiloide, sino por algún dominio contenido en el extremo C-terminal de APP. En conjunto estos resultados estarían indicando que a pesar de la diversidad de los cambios que se presentan en el cerebro durante el envejecimiento y la neurodegeneración, las neuronas granulares que se desarrollan en el giro dentado bajo tales circunstancias pueden incorporarse anatómica y funcionalmente al circuito. Sin embargo, la dinámica con que se da esta integración se ve afectada por la sobreexpresión de APP en forma autónoma de célula. Alteraciones sutiles como esta podrían subyacer a las manifestaciones cognitivas iniciales encontradas en la enfermedad de Alzheimer.

Abstract:
Biochemical, structural and functional changes occurs to the mammalian brain as it ages. These modifications are thought to contribute to the decrease in the plasticity of neuronal circuits. This latter situation has been proposed to underlie the cognitive decline and the increase of neurodegenerative disorders found during ageing. A particular form of plasticity is found in the dentate gyrus of the hippocampus where the continuous addition of new granular neurons takes place through all life. Using retroviral transduction of fluorescent proteins and/or transgenes related to Alzheimer’s disease these neurons were experimentally used as probes to study the effects of normal and pathological ageing on neuronal plasticity. Immunofluoresce labeling and confocal microscopy of wild type aged mice and transgenic models of Alzheimer´s disease showed a strong reduction in the number of newly generated neurons during life. However, nor migration neither afferent synaptic connectivity was affected during ageing or neurodegeneration. Electrophysiological recordings and morphological analyses revealed that cell autonomous expression of different forms of amyloid precursor protein (APP) affect the way that these neurons integrate to the circuit of the dentate gyrus. Notably, this effect seems to be mediated by a domain in the C-terminal region of APP rather than by Aβ peptide itself. Altogether these observations should be indicating that despite the diversity in the changes found in the brain during ageing and neurodegeneration, newlyborn neurons are able to functionally and anatomically incorporate to the circuit. However, the timing of this integration was found to be affected by the cell autonomous overexpression of APP. This kind of subtle alterations would be underlying the early cognitive decline found in Alzheimer’s disease.

Marino, Gabriela Inés. "Transporte iónico en una línea celular derivada de trofoblasto humano (BeWo) y en placenta humana" (2012) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Estudiamos los canales aniónicos ORCC y CFTR y el canal de sodio ENaC en la línea BeWo derivada de trofoblasto humano. La actividad iónica fue estudiada con la técnica de patch clamp en las configuraciones de canal único (inside out y cellattached) y célula entera (whole cell). La expresión de las proteínas fue analizada con técnicas corrientes de biología molecular. Los tres objetivos fueron: 1) identificar y caracterizar la actividad de esos canales con la ayuda de agentes farmacológicos, 2) estudiar la expresión de las proteínas de los canales clonados; 3) analizar la participación de esos canales en la proliferación, y la migración celular por medio del modelo de cierre de la herida. Los principales resultados fueron: Las células BeWo tienen canales aniónicos y catiónicos funcionales que se expresan en la membrana. Las corrientes de Na+ por el canal ENaC sensible al amiloride y las corrientes transportadas por el ORCC y CFTR participan en la migración o proliferación celular. La aldosterona que estimula la metilación de ENaC juega un papel importante en el mecanismo por el cual el ENaC participa en la migración celular. En conclusión, fuimos capaces de aislar y caracterizar canales aniónicos y catiónicos en las células BeWo y establecer su papel en la migración y proliferación celular.

Abstract:
Anion channels such as ORCC and CFTR and the sodium channel ENaC were studied in the human trophoblastic cell line BeWo. Ion channel activity was recorded in the cell attached and inside out and in the whole cell configurations with patch-clamp technology and the expression of the proteins were studied with current techniques of molecular biology. Three main objectives were planned: 1) to identify and characterize the activity of these channels with pharmacological tools; 2) to study the expression of the cloned channels in the cell membranes; 3) to analyze the participation of these channels in the cellular processes and migration with the aid of a wound healing model. The main results were: BeWo cells have functional anionic and cationic channels and they are expressed in the membranes. Na+ currents mediated by the amiloride sensitive ENaC and currents transported by CFTR and ORCC are involved in either cell migration or cell proliferation. Aldosterone which stimulates protein methylation of ENaC seems to play an important role in the mechanism of action of ENaC in the migration process. In conclusion we were able to identify clearly anionic and cationic channels in BeWo cells and to establish their participation in the migration and proliferation processes.

Wenker, Shirley Denise. "Investigación de la acción neuroprotectora de la eritropoyetina en modelos in vitro" (2012) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La supervivencia de las células neuronales depende de un estricto balance entre diversos factores pro y antiapoptóticos. La pérdida de este delicado equilibrio puede conducir a la muerte celular por apoptosis como se manifiesta en accidentes cerebro-vasculares y en enfermedades neurodegenerativas. La muerte neuronal puede ocurrir en forma directa, donde el daño per sé induce la disminución del número de células viables o bien indirectamente, involucrando la activación de células de la glía, las cuales liberan citoquinas proinflamatorias, nitritos y especies reactivas del oxigeno, agentes causantes de la degeneración neuronal. La deficiencia de oxígeno (hipoxia) en el sistema nervioso central es un factor de estrés que induce múltiples respuestas. A nivel celular, la exposición a hipoxia puede inducir una desregulación metabólica con pérdida de la homeostasis y muerte celular. Además, durante dicho proceso se desarrolla un microambiente proinflamatorio generado por la activación de la glía, lo cual afecta indirectamente a las células neuronales. Dado el impacto de las secuelas que pueden originarse, se desarrollaron diferentes líneas de investigación con el fin de prevenir el daño neuronal y sus consecuencias. La eritropoyetina (Epo) es una citoquina pleiotrópica, originalmente definida por su rol en la eritropoyesis. Sin embargo, el hallazgo de receptores específicos en tejidos no hematopoyéticos, expandió su acción biológica y farmacológica. La utilización potencial de los efectos no hematopoyéticos de la eritropoyetina recombinante es uno de los aspectos más promisorios en la investigación de la acción farmacológica de esta hormona. De hecho, la Epo ha sido asociada a la prevención de apoptosis de células neuronales sometidas a agresiones tales como privación de nutrientes o factores de crecimiento. Si bien se propone a la Epo como factor de protección celular frente a estímulos apoptóticos, poco se sabe acerca de la modulación de su acción en diferentes estadios de diferenciación neuronal. Por otro lado, resultados de investigaciones utilizando diversos modelos experimentales le han adjudicado a la Epo una acción antiinflamatoria, aunque aún se desconoce el rol que puede presentar este factor sobre la microglía ante un daño tisular. En este trabajo se planteó, como objetivo general, el estudio del efecto modulador y/o neuroprotector de la Epo frente a daños inducidos por hipoxia y por otros estímulos. Para el estudio de la acción antiapoptótica de Epo frente al daño por hipoxia se utilizó un modelo in vitro de cultivos de la línea de origen neuronal SH-SY5Y. Además de disminución de la viabilidad celular y aumento significativo de la apoptosis, la exposición a hipoxia indujo alteraciones morfológicas tales como disminución del área celular y pérdida de la adhesión celular en cultivos indiferenciados. Como resultado del pretratamiento de estos cultivos con Epo, fueron prevenidos los efectos de la posterior exposición a hipoxia. En esta acción antiapoptótica de la Epo se encontraron involucrados la vía mediada por PI3K y el incremento de los niveles de los factores antiapoptóticos Bcl- 2 y Bcl-xL. Actualmente, se reconoce que los mecanismos de muerte celular son marcadamente diferentes en el cerebro inmaduro y en desarrollo por lo que, en el siguiente paso de este trabajo se realizó una comparación de la acción de Epo entre estadios inmaduro y maduro de células de origen neuronal. Los resultados obtenidos sugieren que la diferenciación celular, mediada por el agente diferenciador ácido retinoico (atRA), aumenta el umbral de resistencia celular ante diferentes agentes proapoptóticos, como staurosporina (STP), TNF-α o hipoxia. Este hallazgo se encontró asociado a la activación de la vía de supervivencia celular PI3K y a una regulación positiva del factor antiapoptótico Bcl-2, lo que explicaría, al menos parcialmente, la disminución de la susceptibilidad celular. En los cultivos de células neuronales diferenciadas con atRA no se pudo detectar un efecto protector de la Epo frente a la exposición a STP. Esta observación coincidió, a su vez, con la ausencia de modulación de los factores Bcl-2 y Bcl-xL por Epo. Además, la acción de Epo fue afectada por la modulación negativa de la expresión de su receptor observada en los cultivos diferenciados por atRA. Como se mencionó anteriormente, la inflamación se encuentra involucrada de manera crónica en enfermedades neurodegenerativas como también en procesos de isquemia cerebral y es una de las principales causas de muerte neuronal. En base a trabajos previos en los que se reportó un efecto antiinflamatorio de la Epo en distintos tejidos, se investigó si la Epo podía presentar un efecto modulador en cultivos de células de microglía murina EOC-2 activados por hipoxia química y se estudió el comportamiento de la hormona frente a estímulos proinflamatorios. No se observó un efecto antiinflamatorio clásico de Epo frente al estímulo de hipoxia química. Sin embargo, los resultados mostraron una acción directa de la Epo sobre la microglía incrementando los niveles de iNOS, enzima responsable de la síntesis de óxido nítrico. Además, la Epo mostró acción antioxidante previniendo la formación de especies reactivas de oxígeno e impidió la proliferación de las células de microglía inducida por hipoxia química en ausencia de Epo. Estos hallazgos sugieren que si bien la Epo no impide la activación de la microglía, podría reducir el daño potencial implicado, contrarrestando la inflamación a largo plazo mediante una acción antioxidante y antiproliferativa. En base a los resultados obtenidos, resultó interesante investigar la acción de la Epo en modelos de interacción microglía-neurona. Se observó el efecto neuroprotector de Epo ante la exposición de cultivos de células neuronales SH-SY5Y a medios condicionados obtenidos en cultivos de microglia estimulados por hipoxia. Esta acción citoprotectora de Epo también fue observada en cultivos de las células neuronales expuestas a medios condicionados de cultivos de macrófagos (células RAW) estimulados con LPS-IFNγ. Los resultados obtenidos en este trabajo aportan nuevos conocimientos sobre la acción de la Epo sobre células neuronales y de microglia. Por un lado, la Epo presenta acción neuroprotectora ante el daño directo inducido en células indiferenciadas por diversos agentes proapoptóticos como también ante un ambiente proinflamatorio inducido por la activación, tanto de células de microglía como de macrófagos. Si bien la Epo no presentó una acción antiinflamatoria clásica sobre la microglia, sí mostró un efecto antioxidante y antiproliferativo. De esta manera, se podría sugerir que la acción de la Epo atenuaría la activación de la microglía y, de esta forma, contribuiría a prevenir el desarrollo de un cuadro proinflamatorio mayor, disminuyendo el riesgo de la aparición de efectos perjudiciales para el sistema nervioso. Dada la búsqueda constante de nuevos fármacos para el tratamiento de enfermedades neurodegerativas y la existencia de la eritropoyetina recombinante humana, el conocimiento de la acción antiapoptótica y moduladora de dicha hormona sobre células del sistema nervioso puede constituir un aporte importante a sus características terapéuticas ya conocidas.

Abstract:
Among the factors that support cell survival, erythropoietin (Epo) is well known as a growth factor that maintains the number of circulating erythrocytes primarily by preventing apoptosis of erythroid progenitors. However, its biological role has been expanded by the finding of specific receptors in non-hematopoietic tissues, such as endothelial and neuronal tissues. Evidence has shown that Epo exhibits neuroprotective effects in vitro against proapoptotic agents. In addition, in vivo studies in adult and neonatal animal models have revealed a neuroprotective action of exogenous Epo administration. In this work, we compared the protective action of Epo between immature and mature cultures of neuroblastoma cells. We found a neuroprotective action of Epo upon undifferentiated neuronal SH-SY5Y cells against cytotoxicity induced by staurosporine (STP), TNF-alpha or hypoxia. Our results suggest that Epo might repress neuronal apoptosis by activation of PI3K and JAK-2 signaling pathways upregulating the expression of the antiapoptotic factors Bcl-2 and Bcl-xL. On the other hand, SH-SY5Y cell differentiation by retinoic acid (atRA) caused cell resistance to the Epo action. Together, the results describing modulation of the signaling pathways activated by Epo and those observed in cultures with atRA suggest that differentiated cell resistance to Epo protection can be coupled to an altered response at the EpoR level. During cerebral ischemia, hypoxia may not only cause neuronal cell injury in a direct way, since neuron-microglia interactions are important for neuronal viability. In vitro and in vivo studies have shown that hypoxia can activate microglia cells, leading to proinflammatory reactions that contribute to create a stressing environment upon neighboring neurons. Because of the role of hypoxia in proinflammatory mechanisms in the nervous system, and the protective effect of Epo against a proinflammatory condition resembled by TNF-α, we investigated the role of the hormone in the dialogue between neuron and microglial cells. As the first line of defense, microglia play a critical role in the innate immune response of the central nervous system (CNS) but an excessive response to CNS injury induces microglial activation. Thus, it is likely that toxic inflammatory mediators produced by activated microglial cells under hypoxic conditions may exacerbate neuronal injury following cerebral ischemia. The next step in the current research was the characterization of microglia activation. The murine EOC-2 cell line activated by chemical hypoxia induced by CoCl2 showed increased proinflammatory mediators (nitrites and TNF-α), reactive oxygen species (ROS), iNOS and Cox-2 modulation while cell proliferation data and PCNA stain demonstrated the mitogenic effect of chemical hypoxia. Pretreatment with Epo prevented the CoCl2 effect on cell proliferation and oxidative stress without changing nitrite production, iNOS protein expression or TNF-α secretion. Finally and taking into consideration the results obtained, it was interesting to investigate the effect of hypoxia upon the dialogue microglia-neuron. Conditioned media from activated microglial cells induced apoptosis of SH-SY5Y neuronal cells, effect that was abolished by Epo. Neuroprotection by this cytokine was also demonstrated against the cytotoxic effect of conditioned media obtained from activated macrophages (RAW 264.7 cell line). These results show that even though Epo did not exert a direct antiinflammatory effect upon microglial activation it did increase the resistance of neurons to subsequent damage derived from a proinflammatory environment. In conclusion, our results suggest that Epo protects neuronal cells from direct injuries as well as from the indirect damage caused by cytotoxic agents produced from microglia activation. The demonstrated antioxidant and antiapoptotic ability of Epo could contribute to consider this agent as a neuroprotective factor.

Petroni, Agustín. "Procesamiento cortical rápido de estímulos emocionales y toma de decisiones en humanos" (2012-03-30) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La percepción de rostros depende de mecanismos complejos que involucran procesamiento paralelo y masivo, a un costo computacional alto. Existe un área cerebral principalmente implicada en el procesamiento esctructural de rostros, el área fusiforme, localizada en la región ventral de los lóbulos occipitales. El área fusiforme está funcionalmente conectada con la amígdala, lo que sugiere la existencia de un circuito involucrado en la extracción rápida de rasgos emocionales. Bajo el postulado teórico de que este circuito estaría embebido en una red extensa, sustrato de cognición compleja necesaria para la interacción social, incluyendo teoría de la mente, testeamos la hipótesis que establece que potenciales corticales modulados por contenido emocional de caras predicen habilidades sociales de los individuos. Nuestros resultados sugieren una asociación directa entre potenciales cerebrales modulados por emociones faciales y cognición social, medida con tres tareas. Testeamos el mismo paradigma experimental en dos grupos de pacientes psiquiátricos que presentan déficits emocionales y ejecutivos: Trastorno por déficit de atención con hiperactividad – y síndrome bipolar. Ambos desórdenes mostraron una ausencia de modulación cortical emocional, y los pacientes bipolares mostraron que la variabilidad en la modulación de componentes en respuesta a emociones faciales es explicada por el estado emocional del paciente (para índices de manía y depresión). Finalmente, mostramos que estos pacientes presentan deficiencias en el procesamiento cortical de recompensas monetarias en una tarea de toma de decisión. La modulación de los componentes electroencefalográficos en respuesta a recompensas mostró una asociación con tareas de cognición compleja.

Abstract:
Face perception relies on a complex mechanism that involves massive parallel processing with high computational cost. The brain region implicated in the structural processing of faces in humans is the fusiform face area, located in the ventral part of the occipital lobes. The fusiform face area is functionally connected with the amygdala, which suggests a circuit involved in the rapid extraction of emotional features. Under the theoretical postulate that this circuit is embedded in a more extensive network that supports complex cognition necessary for social interaction including theory of mind, we tested the hypothesis that early cortical potentials modulated by emotional facial stimuli will predict individual social skills. Our results suggest a direct association between brain potentials modulated by facial emotions and social cognition, measured by three different tasks. We tested the same paradigm in two psychiatric disorders that present emotional and executive deficits: bipolar disorder and Attention-Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD). Both disorders showed an absence of cortical emotional modulation, and bipolars showed that the variability in the emotional modulation is explained by the emotional state of the patient (for both maniac and depression scores). Finally, we showed that these patients have deficiencies in the processing of monetary reward under a decision making task. Importantly, the feedback modulation is associated to complex cognition.

Almejún, María Belén. "Evaluación de defectos intrínsecos de linfocito B en imunodeficiencia común variable pediátrica (IDCV)" (2013) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La inmunodeficiencia común variable (IDCV) es un síndrome heterogéneo que se caracteriza por producción defectuosa de inmunoglobulinas. Un defecto molecular en los estadios de diferenciación tardía de los linfocitos B, hasta el momento poco explorados en pacientes con IDCV, podría ser causal del desarrollo de la enfermedad dado que estas células pueden producirse normalmente en estos pacientes. Además, al ser la inmunodeficiencia primaria más frecuente, resulta un buen modelo experimental para el estudio de la biología del desarrollo terminal del linfocito B humano. Los resultados obtenidos en los ensayos funcionales que permiten evaluar los procesos fundamentales en la diferenciación tardía del linfocito B, SHM y CSR, así como el estudio de subpoblaciones B en sangre periférica de pacientes argentinos con IDCV de presentación pediátrica, nos permitieron definir subgrupos acotando los probables defectos genéticos a determinadas etapas de la regulación terminal del linfocito B. Por otro lado, el análisis en nuestros pacientes de la secuencia de TNFRSF13B, el gen que codifica para TACI, permitió la identificación de dos nuevas mutaciones. Entre ellas, S231R, la primera mutación descripta en el dominio citoplasmático altamente conservado del receptor (THC) específicamente en el sitio de unión a MyD88. Los experimentos llevados a cabo para evaluar funcionalmente la variante TACI-S231R demostraron que las células portadoras no logran desencadenar los eventos moleculares del CSR cuando se las estimula vía TACI y/o TLR9, incluyendo la secreción de inmunoglobulinas. Además, se observó que la cooperación entre TACI y el receptor CD40 estimulado en condiciones subóptimas se encuentra deteriorada. Por último, tras la estimulación con su ligando, el receptor TACI-S231R no logra colocalizar con MyD88 ni con TRAF2, proteínas esenciales para activar la cascada del CSR. Colectivamente estos resultados ponen de relieve la necesidad de un sitio de unión a MyD88 intacto para desencadenar el CSR mediado por TACI. En suma, este trabajo realiza un aporte al conocimiento de los eventos moleculares que suceden en el desarrollo y activación de los linfocitos B humanos y abre las puertas para la búsqueda de nuevos blancos genéticos implicados en el desarrollo de la enfermedad.

Abstract:
Common variable immunodeficiency (CVID) is a heterogeneous syndrome characterized by an impaired immunoglobulin production with usually normal B cell numbers in peripheral blood. The latter suggests that the molecular defect may be found in the late stages of B cell differentiation (SHM, CSR), so far unexplored in patients with CVID. Moreover, being the most prevalent primary immunodeficiency, it could be a good experimental model to study the terminal steps of the human B cell development. Actually, the results obtained in functional assays of SHM and CSR, and the study of B cell subpopulations in peripheral blood of pediatric Argentinean patients with CVID, allowed to discriminate different subgroups and approached possible genetic defects in their B lymphocytes. Furthermore, the sequence analysis of TNFRSF13B, the gene encoding TACI, led the identification of two novel mutations. Among them, S231R, the first mutation described in the highly conserved cytoplasmic domain of the receptor (THC) at the MyD88-specific binding site. The results obtained in the evaluation of the functional relevance of TACI-S231R variant, showed that the B cells failed to trigger the CSR related events (including the immunoglobulin secretion) when stimulated via TACI and/or TLR9. It was also noted an impaired APRIL-mediated enhancement of CD40 activation in suboptimal conditions. Finally, after stimulation with its ligand, the receptor TACI-S231R failed to colocalize with MyD88 nor with TRAF2, essential proteins to activate the CSR cascade. Collectively, these results highlight the requirement of an intact MyD88-binding site in TACI to trigger CSR. In summary, this work makes a contribution to the knowledge of the molecular events that occur in the differentiation and activation of human B lymphocytes and it provides a glimpse of possible pathways that lead to the discovery of new genetic factors involved in the onset of the disease.

Tarelli, Rodolfo. "Estudio de efectos de estímulos inflamatorios periféricos sobre un modelo de enfermedad de Parkinson" (2013) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La Enfermedad de Parkinson (EP) es una de las enfermedades neurodegenerativas de mayor incidencia en personas mayores de 65 años. Es de progresión lenta y su rasgo distintivo es la degeneración neuronal en la región de la sustancia nigra pars compacta (SN). Un hallazgo pato-fisiológico uniformemente observado tanto en modelos animales como en pacientes con EP es que la muerte de las neuronas de la SN se encuentra acompañada por activación de la microglía. Numerosa evidencia apunta a un efecto neurodegenerativo de la microglía activada, sin embargo, también se ha observado que la microglía podría tener efectos neuroprotectores, por ejemplo a través de la secreción de factores neurotróficos. Por lo tanto, el rol funcional de esta activación es aún un tema de amplio debate. En publicaciones previas de nuestro laboratorio hemos descripto una activación microglial atípica en la que la misma se encuentra parcialmente activada o “cebada” como consecuencia de la degeneración neuronal (Depino, Earl et al. 2003). En este estadío de activación atípica, las células son capaces de transcribir citoquinas proinflamatorias pero no de sintetizar la proteína en sí. Este concepto sugiere que una célula en estado cebado requeriría de un segundo estímulo menor al que requeriría una célula en reposo hasta quedar clásicamente activada. En esta tesis, hemos evaluado la hipótesis de que la inflamación pueda exacerbar la neurodegeneración en un modelo animal de EP (inyección de 6OHDA en el cuerpo estriado) con la consiguiente progresión de la enfermedad. Para ello, se procedió a la inyección endovenosa de un estímulo pro-inflamatorio periférico (Adenovector productor de interleuquina 1) a animales previamente denervados con la neurotoxina 6OHDA. El estímulo pro-inflamatorio fue capaz de exacerbar la neurodegeneración en progreso en la SN. Los efectos exacerbantes del estímulo inflamatorio fueron asociados con un aumento en la activación morfológica microglial y expresión de MHC clase II en superficie. Debido a que la patología se presenta en pacientes añosos y a que los cerebros de personas ancianas presentan microglía cebada (Cunningham, Konsman et al. 2002) realizamos el mismo diseño experimental en ratas ancianas. En este modelo, también, el estímulo pro-inflamatorio fue capaz de exacerbar la neurodegeneración presentando la microglía activación morfológica aumentada. Por otro lado, se estudiaron los mecanismos moleculares de la exacerbación de la neurodegeneración sobre un modelo de aumento de la inflamación con un estímulo pro inflamatorio en SN. Mediante la técnica de microarrays buscamos los genes candidatos a ser los responsables de estar participando en la exacerbación de muerte neuronal. Se encontraron genes diferencialmente expresados, cuatro de los cuales fueron validados técnicamente por RT-PCR en tiempo real. Esta tesis provee evidencia de los efectos perjudiciales de la inflamación en la progresión de la EP. Además, propone que las infecciones o inflamaciones podrían ser consideradas como un factor de riesgo en la exacerbación de la neurodegeneración en la EP. Así también, sugiere una asociación entre la activación de la microglía y los efectos neurotóxicos observados en la SN. Finalmente, propone candidatos a mediar estos efectos.

Abstract:
Parkinson's disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease in people over 65. It´s progression is slow and one of its distinctive features is the degeneration of neurons in the substantia nigra pars compacta (SN). A pathophysiological finding uniformly observed in both animal models and in patients with PD is that the death of SN neurons is accompanied by activation of microglia. Numerous evidence suggests a neurodegenerative role for activated microglia; however, microglia has also been shown to have neuroprotective effects. This may be through the secretion of neurotrophic factors. Therefore, the functional role of this activation is still a matter of intense debate. Previous publications from our laboratory have described an atypical microglial activation in which it is partially activated or "primed" as a result of neuronal degeneration (Depino, Earl et al. 2003). At this stage of atypical activation atypical cells are capable of pro-inflammatory cytokine transcription but not synthesis of the protein itself. This concept suggests that a primed microglial cell would require a smaller second stimulus to become classically activated when compared to the stimulus required for a resting microglial cell to achieve this same state. In this thesis, we evaluated the hypothesis that inflammation might exacerbate neurodegeneration in an animal model of PD (6OHDA injection into the striatum) with subsequent disease progression. To achieve this, we proceeded to the intravenous injection of a peripheral pro-inflammatory stimulus (interleukin 1 producing adenoviral vector) to previously denervated animals (with 6OHDA neurotoxin). The proinflammatory stimulus was able to exacerbate ongoing neurodegeneration in the SN. The inflammatory stimulus exacerbating effects were associated with an increased morphological microglial activation and surface expression of MHC class II. As PD is a disease in aging patients, and primed microglia is known to be an present in the elderly brain (Cunningham, Konsman et al. 2002), the same experimental design was carried out in aged rats. In this model, the pro-inflammatory stimulus was able to exacerbate neurodegeneration and morphological microglia activation also increased. In addition, we studied the molecular mechanisms of exacerbation of neurodegeneration on a model of augmented inflammation with a pro-inflammatory stimuli in the SN. Using microarray technology we looked for genes that might be candidates for being involved in the exacerbation of neuronal death. Differentially expressed genes were found, four of which were validated technically by RT-PCR in real time. This thesis provides evidence of the harmful effects of inflammation in the progression of PD. It also proposes that infections or inflammations could be considered as a risk factor in the exacerbation of neurodegeneration in PD. It also, suggests an association between the activation of microglia and the neurotoxic effects observed in the SN. Finally, it proposes candidates to mediate these effects.

Faut, Mónica. "Rol de los receptores nucleares activados por proliferadores peroxisomales gamma frente al exceso de andrógenos durante la foliculogénesis temprana" (2014) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La reproducción es uno de los procesos fisiológicos con mayor costo energético, tal es así que los mecanismos fisiológicos que controlan el balance energético se hallan ligados a la fertilidad. Existen múltiples endocrinopatías asociadas a desbalances metabólicos, entre ellas el Síndrome de Ovario Poliquístico (SOP). Esta es una de las patologías más frecuentes en mujeres en edad reproductiva y cuya alteración principal es el hiperandrogenismo. Estas pacientes presentan alteraciones en la foliculogénesis temprana dado que, por mecanismos aun no conocidos, no ocurre la selección de folículos dominantes. Con el propósito de dilucidar estos mecanismos, en el laboratorio se ha generado un modelo murino de hiperandrogenización con dehidroepiandrosterona (DHEA) para el estudio del desarrollo folicular temprano. El objetivo principal de este trabajo es evaluar si “es el exceso de andrógenos durante la vida peripuberal el que genera alteraciones en la funcionalidad ovárica” y “cuál es el rol de los receptores nucleares activados por proliferadores peroxisomales de tipo γ (PPARγ) en esta alteración”. En el presente trabajo encontramos que el estímulo con eCG indujo un aumento en el número de folículos, disminuyendo la atresia folicular de manera controlada, sin alterar los procesos apoptóticos. Por otro lado, el aumento en los niveles de progesterona sérica (P4), indica la capacidad esteroidogénica de estos ovarios, permitiéndonos estudiar los efectos del hiperandrogenismo sobre las primeras etapas de la foliculogénesis y la regulación de la esteroidogénesis. En ovarios provenientes de animales hiperandrogenizados, encontramos un aumento en la expresión de proteínas fundamentales, como StAR, mientras que otras enzimas reguladoras, como P450scc, se encuentran disminuídas. Esta alteración provocó una disminución en la producción de P4, generando un efecto deletéreo en estos folículos. Los PPARγ actuarían como factores de transcripción, regulando la expresión de estas enzimas y estimulando la producción de P4 en las primeras etapas de la foliculogénesis, pero no siendo capaz de hacerlo en un ambiente hiperandrogénico. En estas condiciones, se produce un desbalance oxidativo en donde el GSHt es consumido rápidamente generándose daño a lípidos, lo cual alteraría la estructura de las membranas, provocando que las células no respondan correctamente al ambiente que las rodea, y entrando en un estado proapoptótico. De esta manera, el folículo entra en atresia.

Abstract:
Reproduction is one of the physiological processes with higher energy costs, that is so the physiological mechanisms that control energy balance are linked to fertility. There are multiple metabolic imbalances associated endocrinopathies, including Polycystic Ovary Syndrome (PCOS). This is one of the most frecuent pathology in women of childbearing age and whose main alteration is hyperandrogenism. Women with PCOS have many troubles during early folliculogenesis given that, by unknown mechanisms, the dominant follicles can´t be selected. To try to elucidate this phenomenon, in the laboratory we have generated a rat model of early follicular development with dehydroepiandrosterone (DHEA). The main objective of this work is to evaluate if "it´s the excess of androgens during peripubertal life that generates alterations in ovarian function" and "Which is the role of peroxisome proliferator-activeted receptors γ (PPARγ) in this condition". In this work, we found that ECG stimulation induces an increase in the number of follicles, decreasing the follicular atresia in a controlled manner, without exacerbating apoptotic processes. In the other hand, an increase in the serum progesterone (P4) indicates the steroidogenic capacity of these follicles, allowing us to study the effects of hyperandrogenism on the early stages of folliculogenesis and the regulation of the steroidogenic pathway. Ovaries from animals treated with DHEA, we found an increase in the expression of key proteins such as StAR, while others regulatory enzymes are diminished, such as P450scc. This alteration causes a decrease of P4, producing a deleterious effect on these follicles. PPARγ act as transcription factor of these enzymes by stimulating the production of P4 in the early stages of folliculogenesis, but not being able to do so in a hyperandrogenic environment. In these conditions, GSHt is rapidly consumed which increases the damage to lipids, altering the membrane structure and causing the cells do not respond to the surrounding environment, and entering into a proapoptotic state. In this manner, the follicle is leading to atresia.

Sganga, Leonardo. "Identificación de ejes quimiotácticos que guían células madre mesenquimales al estroma tumoral en adenocarcinomas mamarios" (2014-03-31) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El crecimiento tumoral depende en gran medida en la interacción de las células tumorales con el microambiente que las circunda. Entre otras células que componen el estroma tumoral se encuentran precursores locales y precursores estromales o células madre mesenquimales (MSCs) que se alojan en el tumor tras ser reclutadas desde la médula ósea. En base a esto surge la pregunta: ¿cuáles de los factores del microambiente tumoral son los responsables de la migración de MSCs provenientes de médula ósea? Utilizando un modelo in vitro del microambiente tumoral representado por medios condicionados (MC) por muestras humanas de adenocarcinomas mamarios realizamos un estudio proteómico de citoquinas y quimioquinas sobre 8 muestras tumorales, destacándose IL-6, GRO, IL-8 y MCP-1 como los factores más representados de los medios condicionados por tumores, siendo el perfil muy similar entre todas las muestras tumorales. En busca de un modelo que remede el aporte de factores quimiotácticos por parte de los tumores humanos, se crecieron tumores ortotópicos en ratones nude combinando una línea tumoral mamaria humana con fibroblastos humanos adultos. Utilizando este modelo, se logró cuantificar las MSCs llegadas tras migración local luego de ser inyectadas de modo peritumoral. En una validación técnica y funcional in vitro, IL-6 resultó ser quimiotáctico para MSCs pero en concentraciones mucho mayores a las encontradas en los tumores; sin embargo no se descarta un rol de IL-6 directo o indirecto. Por otra parte los ejes quimiotácticos de GRO, IL-8 y MCP-1 no revelaron un aporte significativo sobre la migración de MSCs. Por otro lado, de un análisis estadístico y funcional comparando los MC provenientes de tumores y tejidos adyacentes libres de patología, resultó una lista de factores diferencialmente representados de los cuales MIP-3α o proteína inflamatoria de macrófagos 3 alfa surge como el factor más relevante como posible mediador del reclutamiento de las MSCs hacia el tumor. La validación funcional del eje quimiotáctico MIP-3α / CCR6 sugiere que este eje estaría involucrado, al menos en parte, en la migración de MSCs hacia tumores. En suma, hemos logrado identificar un factor relevante para la modulación de la migración de las MSCs hacia el tumor, factible de ser utilizado en estudios posteriores para el diseño de terapias celulares contra el cáncer.

Abstract:
Tumor growth depends greatly on the interaction of tumor cells with the surrounding microenvironment. Among other cells comprising the tumor stroma, there are local precursors and stromal precursors or mesenchymal stem cells (MSCs) that home into the tumor after being recruited from the bone marrow. Based on this, the question arises: which of the factors from the tumor microenvironment are responsible for the migration of bone marrow-derived MSCs? Using an in vitro model for the tumor microenvironment represented by conditioned media (CM) from human samples of breast adenocarcinomas, we performed a proteomic study of cytokines and chemokines in 8 tumor samples, highlighting IL-6, GRO, IL-8 and MCP-1 as the most represented factors in tumor -conditioned media, with a very similar profile among all tumor samples. Looking for a model that represents the contribution of chemotactic factors from human tumors, orthotopic tumors were grown in nude mice by combining a human mammary tumor cell line with human adult fibroblasts. Using this model, we were able to quantify MSCs arriving after local migration after being injected in a peritumoral way. In a technical and functional in vitro validation, IL-6 was found to be chemotactic for MSCs but at much higher concentrations than those found in tumors; however, we cannot disregard a direct or indirect role for IL-6. Moreover, chemotactic axis involving GRO, IL-8 and MCP-1 did not reveal a significant contribution on MSCs migration. Furthermore, a statistical and functional analysis comparing MC from tumors and adjacent tissues free of pathology, resulted in a list of factors differentially represented where MIP-3α or macrophage inflammatory protein- 3 alpha emerges as the most relevant factor as possible mediator for the recruitment of MSCs to the tumor. Functional validation of the chemotactic axis MIP-3α / CCR6 suggested that this axis would be involved, at least in part, on MSCs migration to tumors. In summary, we could identify a factor relevant for the modulation of MSCs migration into the tumor, likely to be used in subsequent studies to design cell therapies against cancer.

Mestre Citrinovitz, Ana Cecilia. "Regulación de la proliferación y diferenciación de células de endometrio por hormonas esteroideas ováricas" (2014-04-28) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El estroma uterino experimenta cambios morfológicos y funcionales que dan lugar a la decidua, un tejido compacto cuya función es el correcto progreso de la preñez. El receptor de progesterona (RP) y el receptor de estradiol (RE) participan en el crecimiento y la diferenciación de las distintas áreas deciduales del endometrio de la rata. En esta tesis se estudia el papel de estos receptores, sus vías de señalización y la participación de nuevas moléculas involucradas en las etapas iniciales de la decidualización. Caracterizamos, mediante el uso de ARN pequeño de interferencia específico, el papel de una nueva proteína regulada en la decidualización, la proteína de unión a ARN CSD-C2. Encontramos que el bloqueo del RP, mediante su antagonista onapristona, produjo la reabsorción de los sitios de implantación (SIs) y la disminución en la expresión proteica del RP, RE, PCNA, DESMINA y CCND3, en los niveles de ARNm de Prl8a2, y de Hand2 y Bmp2, y en la activación de ERK. El efecto deletéreo de onapristona fue parcialmente contrarrestado por el antagonista del RE faslodex, restituyendo los niveles de los receptores de hormonas, de los marcadores de proliferación y diferenciación analizados, y aumentando compensatoriamente los niveles de Hand2 y Bmp2, y pERK. El tratamiento de ratas preñadas con el inhibidor de pERK, evidenció su importancia en la formación de la decidua, manteniendo la capacidad proliferativa de las células estromales y limitando su diferenciación en las distintas áreas deciduales. Estos hallazgos muestran la importancia del balance de señalización de los receptores hormonales, a la vez que describen nuevas moléculas responsables de la decidualización endometrial durante la preñez temprana.

Abstract:
The uterine stroma undergoes complex morphological and functional shifts that build the decidua, a specialized compact tissue leading to successful pregnancy. Progesterone receptor (PR) and estrogen receptor (ER) participate in growth and differentiation of several rat decidual regions. This thesis studies the role of these receptors, related signalling pathways and novel molecules during the initial steps of pregnancy. We characterized the role of the RNA binding protein, CSD-C2, during decidualization by specific siRNA in vivo administration. Early suppression of progesterone receptor activity by treatment with the progesterone antagonist (onapristone) resulted in resorption of the implantation sites (ISs) with concomitant decrease in the expression of PR, ER, PCNA, DESMIN, CCND3, Prl8a2, and signalling players such as Hand2, Bmp2 and ERK activation. The deleterious effect of onapristone was partially counteracted by the ER antagonist (Faslodex) with rescue of hormone steroid receptors, markers of proliferation and differentiation and the probably compensatory increase of Hand2, Bmp2 and ERK activation compared to oil treated controls. The treatment of pregnant rats with MEK inhibitor showed ERK activation relevance during the late stage of decidua development, keeping the proliferation capacity of stromal cells and limiting the differentiation process in specified regions of decidual tissues. These findings highlight the balance of ovarian steroid hormone receptors during early pregnancy, and describe new players in the decidualization process.

Coccoz, Verónica. "Estudio de la modulación de la fase de reconsolidación de la memoria declarativa en humanos" (2014-11-28) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El redescubrimiento de la reconsolidación de la memoria desafió la clásica visión de las memorias fijas al mostrar que una memoria ya consolidada puede volverse lábil y susceptible a interferencia por agentes amnésicos. La teoría de la modulación endógena de la memoria propone que sistemas moduladores extrínsecos a los procesos de memoria actuarían sobre estos determinando el almacenamiento de la información. La administración de un estresor leve o de una bebida con alta concentración de azúcar permitió facilitar una memoria declarativa (una lista de 5 pares de sílaba clave-sílaba respuesta) luego de que esta fuera olvidada, durante la fase de reconsolidación. Puesto que ni el recordatorio ni los estímulos facilitadores empleados implican un re-entrenamiento de los sujetos, se descarta que el olvido se haya producido como consecuencia de la pérdida de la información. Controles específicos del proceso de reconsolidación permitieron probar que el acceso a la información olvidada es necesario para que el efecto facilitador ocurra, lo que descarta la falta de acceso a la información como un mecanismo para el olvido. Se propone un modelo alternativo a la clásica dicotomía "almacenamiento/acceso" para explicar este fenómeno.

Abstract:
The rediscovery of memory reconsolidation challenged the classical concept of fixed memories by showing that a consolidated memory can become labile again and susceptible to interference by amnesic agents. The theory of endogenous modulation of memory proposes that extrinsic modulatory systems would act on memory systems, determining the storage of information. The administration of a mild stressor or a sweet drink can enhance declarative memory (association between five cue-syllables and their respective responsesyllables) during reconsolidation, after forgetting had occurred. Since neither the reminder nor the facilitatory stimuli used involve retraining of the subjects, it is discarded that forgetting is the result of a loss of information. Specific controls over the reconsolidation process allowed proving that access to forgotten information is necessary for the occurrence of the facilitatory effect. That discards a deficit in access to information as a mechanism of forgetting. A new model, alternative to the classical "storage/access" dichotomy, is proposed to explain this phenomenon.

Goitia, Belén. "Estudio de los mecanismos subyacentes a las alteraciones mediadas por cocaína y metilfenidato en el sistema tálamo-cortical de ratón. Rol de la serotonina en la modulación de la transmisión GABAérgica talámica" (2015-03-17) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los efectos de la cocaína sobre la transmisión GABAérgica del sistema tálamocortical son similares a los previamente descritos para un conjunto de patologías psiquiátricas y neurológicas englobadas bajo el nombre de síndrome de disritmia tálamocortical, que presenta coherencia anormal entre bajas y altas frecuencias a nivel tálamocortical. Se cree que la presencia de bajas frecuencias en individuos despiertos puede subyacer un procesamiento sensorial anormal. La cocaína ejerce sus propiedades en parte por el aumento en los niveles sinápticos de dopamina (DA) en los circuitos tálamocorticales somatosensoriales, seguido por el aumento de norepinefrina (NE) y serotonina (5-HT), debido a la inhibición de los transportadores encargados de la recaptación de DA (DAT), NE (NET) y 5-HT (SERT). El metilfenidato (Ritalina ®, estimulante legal para tratar el Trastorno por Déficit de Atención con Hiperactividad) bloquea DAT y NET, pero no afecta el SERT. En este trabajo de tesis se plantea un estudio comparativo de ambos psicoestimulantes a fines de dilucidar los mecanismos responsables del fenómeno de disritmia tálamocortical asociado al consumo de cocaína. En primera instancia se vio que la administración de cocaína, ya sea aguda o sub-crónica, medió incrementos en la densidad de corriente a través de canales de calcio de tipo T en las neuronas del núcleo Ventrobasal del tálamo y aumentó la frecuencia de miniaturas de GABA desde las terminales del núcleo reticular talámico, lo que sugiere anormalidades en la transmisión GABAérgica talámica. En comparación, el metilfenidato mostró efectos mucho más sutiles, lo que lleva a asociar las diferencias con la modulación serotoninérgica de la sinapsis inhibitoria entre el núcleo reticular del tálamo y el núcleo Ventrobasal, mediada por cocaína pero no por metilfenidato. A continuación, para poner a prueba dicha hipótesis, se realizaron experimentos de electrofisiología con rodajas obtenidas de animales naïve y se intentó emular los resultados de cocaína mediante la aplicación de 5-HT. Si bien este objetivo se logró, se encontró que los efectos de esta monoamina sobre la sinapsis GABAérgica en estudio siguen un curso temporal que indica que los receptores de 5-HT pueden sufrir un proceso de internalización. En conjunto los resultados obtenidos podrían contribuir a explicar la dinámica aberrante en la actividad tálamocortical de ratones tratados con cocaína, similar al síndrome de disritmia tálamocortical descrito en humanos. Las diferencias entre la cocaína y el metilfenidato a nivel tálamocortical parecen sugerir la existencia de mecanismos de homeostasis sináptica por los cuales la neurotransmisión GABAérgica desde el núcleo reticular del tálamo y las conductancias de calcio de las neuronas postsinápticas del núcleo Ventrobasal responderían aumentando la liberación espontánea de GABA y la densidad de corriente de calcio tipo T postsináptica tras el aumento transitorio de la 5-HT mediado por cocaína.

Abstract:
The effects of cocaine on thalamic GABAergic transmission resemble those described in several psychiatric and neurological pathologies included in the thalamocortical dysrhythmia syndrome, characterized by an anomalous coherence between high and low EEG frequencies. The presence of low frequencies in awake individuals is thought to cause aberrant processing of sensitive inputs. The known effects of cocaine are mainly achieved through the increase in synaptic levels of dopamine (DA), norepinephrine (NE) and serotonin (5-HT), caused by the inhibition of the uptake by their respective transporters (DAT, NET and SERT). Methylphenidate (Ritalin ®, a drug widely prescribed for the treatment of Attention Deficit and Hyperactivity Disorder) blocks DAT and NET, but not SERT. These studies compare the two psychostimulants with a view to unraveling the mechanisms that underlie the thalamocortical dysrythmia syndrome associated with cocaine use. Firstly, we found that cocaine administration, either acute or sub-chronic, led to an increase in the calcium current through T-type calcium channels in thalamic Ventrobasal neurons and to an increase in the frequency of GABAergic miniature inhibitory postsynaptic currents (mIPSCs), revealing an alteration in thalamic GABAergic transmission. Comparatively, the effects of methylphenidate are subtle, suggesting the existence of a cocaine-mediated serotonergic modulation of the inhibitory synapse between the thalamic reticular nucleus and the Ventrobasal nucleus. To test this hypothesis we tried to reproduce the results obtained previously with cocaine-treated animals in brain slices from naïve mice through the incubation and puffaplication of 5-HT. Our results show that even though 5-HT can mimic the effects of cocaine in the thalamus, it follows a time course consistent with an internalization process of 5-HT receptors. Taken together, the results here presented might help explain the aberrant dynamics in the thalamocortical activity seen in mice treated with cocaine, similar to the thalamocortical dysrhythmia syndrome described in humans. The differences found between cocaine and methylphenidate suggest the existence of homeostatic mechanisms through which GABAergic transmission from the thalamic reticular nucleus and T-type calcium currents in postsynaptic Ventrobasal neurons are enhanced due to the transient increase in 5-HT levels induced by cocaine.

Expósito, Verónica. "Estudio de las redes neuronales asociadas a procesos cerebrales espontáneos, atencionales y de planeamiento motor en sujetos sanos y en pacientes neurológicos mediante técnicas de RMN funcional" (2015-04-16) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La resonancia magnética funcional (RMf) es una técnica indirecta de medición de la actividad neuronal. La investigación por RMf de la función cerebral tanto de forma modular como integrada en redes tiene repercusión en el estudio de la actividad cognitiva normal así como de los desórdenes neurológicos. En el presente trabajo utilizamos la técnica de RMf para dilucidar aspectos de la función cognitiva en personas sanas y dos poblaciones de pacientes con síndromes de desconexión. En el primer estudio evaluamos la representación cerebral del planeamiento de gestos de uso de herramientas con distintos componentes motores: involucrando principalmente articulaciones del brazo y codo -gestos proximaleso de mano y dedos -gestos distales-. Hallamos una representación topográfica distinta para cada tipo de gesto, lo cual es importante para entender el patrón de errores en la pantomima e imitación de gestos que se observa en pacientes con apraxia. En el segundo estudio investigamos la actividad de las redes cerebrales involucradas en atención interna y externa y la conectividad dentro y entre esas redes, en pacientes con desórdenes de conciencia. Encontramos una estructura colectiva de regiones que aumenta su respuesta con el nivel de conciencia y una indiferenciación en la estructura de redes antagónicas como la red de modo por defecto y la red atencional, cuya especialización mejora en forma no lineal conforme el paciente progresa.

Abstract:
Functional magnetic resonance imaging (fMRI) is a technique that allows for indirect measurement of neuronal activity. The research of brain function with fMRI both as modular and as integrated into networks has impact in the study of normal cognitive activity as well as of neurological disorders. In the present work we used fMRI to elucidate aspects of cognitive function in healthy people and in two populations of patients with disconnection syndromes. In the first study we evaluated the brain representation of planning tool-use gestures with different motor components: involving mainly arm and elbow joints (proximal gestures) or hand and finger joints (distal gestures). We found a different topographic representation for each gesture, which is important to understand the error pattern in pantomime and imitation of gestures observed in patients with apraxia. In the second study we investigated the activity in the brain networks involved in internal and external attention, and the connectivity within and between that networks, in patients with disorders of consciousness. We found a collective structure of regions that increase their responsiveness with the level of consciousness and a de-differentiation in the structure of antagonic networks such as default-mode network and attentional network, whose specialization recovers non-linearly as the patients progresses.

Velez, Leandro Martin. "Rol del receptor activado por proliferadores peroxisomales gama sobre la alteración folicular temprana inducida por exceso de andrógenos. Acción de la pioglitazona como tratamiento" (2017-03-30) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El exceso de andrógenos es uno de los desórdenes endocrinos más frecuentes en mujeres en edad reproductiva y está fuertemente asociada a una reducción en la fertilidad o a infertilidad. En mujeres con esta condición, la administración de glitazonas (como la pioglitazona o rosiglitazona) mejora el perfil androgénico y la función ovárica. La pioglitazona ejerce su acción actuando como ligando del receptor nuclear activado por proliferadores peroxisomales gama (PPARG). Sin embargo, se desconoce el mecanismo por el cual el sistema PPARG regula la función ovárica. En este trabajo, en una primera etapa nos planteamos investigar cómo el exceso de andrógenos altera la función ovárica temprana. Encontramos que el hiperandrogenismo indujo una regulación negativa sobre el sistema PPARG y alteró el desarrollo folicular temprano, la vía de la esteroidogénesis folicular estableció un ambiente pro inflamatorio en ovario e incrementó el estrés oxídativo (EO) sistémico. En una segunda etapa nos propusimos investigar si la administración de un ligando de PPARG, la pioglitazona (PGZ,) modificaba o prevenía las alteraciones inducidas por el estado hiperandrogénico. Encontramos que la PGZ activó al sistema PPARG, evitando así la regulación negativa del hiperandrogenismo sobre el sistema PPARG. La activación de PPARG también previno las alteraciones del hiperandrogenismo sobre el desarrollo folicular temprano y la vía de esteroidogénesis folicular, sobre el estado proinflamatorio y sobre el EO sistémico. Colectivamente, nuestros resultados indican que la activación del sistema PPARG en ovario de animales expuestos al exceso de andrógenos mejora la función ovárica temprana, ya que previno las alteraciones sobre la esteroidogénesis folicular, el estatus inflamatorio del ovario y el balance oxídativo sistémico.

Abstract:
Androgen excess is one of the most common endocrine disorders in women in the reproductive age and is strongly associated with a reduction in fertility or infertility. In women with this condition, the administration of glitazones (such as pioglitazone or rosiglitazone) improves the androgenic profile and ovarian function. Pioglitazone (PGZ) exerts its action by acting as a exogenous ligand of the peroxisome proliferator –activated receptor gamma (PPARG). However, the precise mechanism by which the PPARG system regulates ovarian function is unknown. We first investigated how androgen excess alters early ovarian function. We found that hyperandrogenism induced a downregulation of the PPARG system along with alterations on early follicular development, the follicular steroidogenesis pathway, and established a pro-inflammatory environment in ovary and a systemic oxidative stress state. Then, we investigated whether administration of a PPARG ligand, pioglitazone (PGZ), modified or avoided the alterations induced by the hyperandrogenic state. We found that PGZ activated the PPARG system, avoiding the hyperandrogenism-induced downregulation of the PPARG system. Activation of PPARG also prevented the hyperandrogenic alterations on early follicular development and the follicular steroidogenesis pathway, on the pro-inflammatory state and on systemic oxidative stress. Collectively, our results indicate that the activation of the PPARG transcriptional system in the ovary of animals exposed to an excess of androgens improves the early ovarian function, since PGZ avoided alterations on follicular steroidogenesis, ovarian inflammatory status and systemic oxidative balance.

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