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Tesis > TEMA

Biología [ 2301 tesis ]

Embriología Animal [ 19 tesis ]

Paz, Dante Agustín. "Análisis descriptivo y experimental de los procesos de diferenciación del área cardíaca de Bufo arenarum" (1987) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La diferenciación tisular, la constitución de la forma y la aparición de la función de los distintos órganos embrionarios, dependen de complicados procesos que involucran interacciones específicas entre las varias células y entre grupos celulares de distinto significado. No escapa de esta vasta problemática, la diferenciación del área cardíaca para la que intervienen interacciones celulares y más específicamente mecanismos de inducción embrionaria. Por lo tanto hemos considerado de interes realizar un estudio tanto descriptivo como experimental en la tentativa de reconocer los episodios morfológicos y, por lo menos parcialmente, bioquímicos, que se verifican durante el desarrollo del corazón de Bufo arenarum, anfibio de amplia distribución en el país y muy usado para ensayos de carácter experimental. Cabe señalar que en esta especie, salvo dos someras comunicaciones en Congresos, el Tema que nos hemos propuesto desarrollar no había sido todavía tratado. La primera parte comprende un estudio descriptivo tanto de los procesos de diferenciación del área cardíaca como así también de la formación del corazón embrionario; las observaciones han sido realizadas con el empleo de microscopio óptico y en ocasiones con microscopía electrónica de barrido. Además el análisis en algunos casos ha sido completado con técnicas histoquímicas específicas. Se puso de manifiesto que si bien los procesos de diferenciación del área cardíaca de Bufo arenarum siguen el esquema descripto para otras especies anfibias, demuestran ciertas diferencias no sólo en los tiempos de aparición de los episodios, sino también en las expresiones morfológicas descriptas especialmente para Anfibios Urodelos. El análisis histológico e histoquímico, demuestra por primera vez en Anfibio, la presencia de una "gelatina cardíaca" que si bien puede homologarse a la observada en Aves, parece poseer diferente composición química. En la segunda parte del trabajo, se ha encarado, de manera experimental, el análisis de los procesos inductores que se verifican durante la diferenciación cardíaca. El estudio, realizado tanto con técnicas de explantes y transplantes, como así también el cultivo organotípico, ha puesto en evidencia la importancia del endodermo en función del inductor para que se verifique el desarrollo del corazón. Más específicamente y según resulta de los ensayos esta capacidad estaría limitada al area más anterior del endodermo, es decir a la que corresponde al endodermo faringeo. Además se ha demostrado fehacientemente que la capacidad inductora se encuentra limitada a estadíos embrionarios tempranos; los resultados de ensayos que han utilizado el endodermo anterior de embriones en estadío de respuesta muscular o más avanzados, no le asignan más capacidad inductora. Resulta sumamente interesante haber constatado, mediante el empleo de distintas metodologías de cultivo, que la inducción del endodermo anterior sobre el área presuntiva cardíaca, se verificaría sin un íntimo contacto entre las dos hojas embrionarias, dado que un factor o factores liberados en el medio parecerían actuar sobre el área presuntiva cardíaca e inducir su diferenciación. El explante del mesodermo del área cardíaca de embriones en distintos estadíos de desarrollo por lo menos hasta el de botón caudal ha comprobado que se verifican procesos de regeneración. Estos últimos resultados demostrarían que también en Bufo arenarum, el corazón se diferencia dentro de un "campo cardíaco", situación morfológica adecuada para que el mesodermo adyacente al explante del esbozo del corazón, se diferencie en estructuras cardíacas.

Elola, María Teresa. "Detección, cuantificación y caracterización de Lectinas ß-Galactosídicas de Bufo arenarum" (1995) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Alonso, Diana Graciela. "Desarrollo y diferenciación de las branquias externas e internas en embriones y larvas de Bufo arenarum : análisis descriptivo y experimental" (2003) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las branquias externas de anuros son estructuras respiratorias embrionarias que desaparecen en las larvas, mientras que las branquias internas permanecen hasta la metamorfosis. La morfología branquial fue estudiada con microscopio óptico en embriones y larvas de Bufo arenarum. Los filamentos branquiales externos se originan a partir de los arcos vicerales 3 a 5 embrionarios; estos filamentos presentan una doble capa epidérmica, células mesenquimáticas y algunos capilares. Las branquias son recubiertas por completo por el opérculo en el estadio 25 y finalmente desaparecen. Los cuatro pares de braquias internas se encuentran ubicadas en dos cámaras branquiales a cada lado del corazón; cada branquia esta formada por un arco branquial en el cual se insertan ventralmente los filamentos respiratorios y dorsalmente los filtros branquiales. Cada filamento esta compuesto por un eje y numerosas ramificaciones, que presentan una cobertura epitelial, tejido conectivo, vasos sanguíneos y capilares mesodérmicos. El sistema branquial es sostenido por el cartílago del arco branquial; por debajo se encuentran las arterias branquiales aferentes y eferentes y el músculo constrictor. Si bien el proceso de regresión de las branquias internas de anuros ha sido bastante dilucidado, la desaparición de las branquias externas ha sido poco estudiada hasta el momento. La apoptosis es un tipo de muerte celular presente durante el desarrollo embrionario, caracterizada por la fragmentación de ADN. En el presente trabajo, células apoptóticas fueron estudiadas en el epitelio de las branquias externas con el microscopio óptico, y fueron detectados in situ fragmentos de ADN a través de la técnica TUNEL. La presencia y distribución de núcleos marcados fue mayor en los estadios 24 y 25, aunque tambien se encontraron en los restantes estadios embrionarios analizados. Un ensayo inmunohistoquímico para detectar PCNA (proliferating cell nuclear antigen) identifica células en todas las fases activas del ciclo celular. En este estudio, esta metodología permitió marcar las células proliferativas en tejidos embrionarios del sistema branquial, durante la regresión de las branquias externas. La presencia de apoptosis en el epitelio de las branquias externas progresa simultaneamente con una activa proliferación en las branquias internas. Los resultados obtenidos muestran la importancia de la apoptosis en la regresión de las branquias externas, ya que este tipo de muerte celular parece ser el proceso principal para reajustar el número celular del epitelio branquial, preparandolo para el nuevo sistema respiratorio de las larvas No existe información previa acerca de la distribución de componentes del citoesqueleto en las branquias de anuros. Con el objeto de conocer la distribución de algunos de las principales proteínas citoesqueletales en las branquias de Bufo arenarum; se efectuó una ensayo inmunocitoquímico en las branquias externas e internas. Se observó inmunorreacción para actina en el epitelio y tejido conectivo; la inmunodetección a miosina estuvo restringida al tejido conectivo de las branquias internas. Se encontró expresión de a y b tubulinas en el epitelio y las células ciliadas. La inmunocoloración para la vimentina fue débil en las células epiteliales e intensa en el tejido conectivo. La inmunorreacción positiva para las citoqueratinas de bajo peso molecular se encontró en los epitelios branquiales y en otros tejidos que en vertebrados superiores expresan vimentina, como el endotelio de los vasos y células musculares. Los resultados obtenidos demuestran que existe una gran diversidad de elementos en el citoesqueleto de las branquias larvales de anuros. El desarrollo de las branquias de anfibios es un excelente modelo de estudio de las interacciones entre las capas germinales de los embriones. Con el objeto de analizar la capacidad de diferenciación, especificación y determinación del esbozo branquial en el estadio de botón caudal, se llevaron a cabo explantes y transplantes en embriones de Bufo arenarum. Los esbozos transplantados desarrollaron filamentos análogos a los observados en las branquias externas e internas, incluso funcionalmente. Los explantes de endo-mesodermo fueron capaces de diferenciar tejidos branquiales típicos, en presencia de distintos ectodermos; el ectodermo presuntivo branquial en forma aislada no diferenció ninguna estructura. En los embriones explantados, el desarrollo de las branquias externas fue impedido tanto por la ausencia del ectodermo como del endo-mesodermo branquial. La diferenciación de las branquias internas solo fue afectada por la pérdidad del endo-mesodermo del esbozo. Estos resultados sugieren que el ectodermo branquial presuntivo se encuentra definido en el estadio de botón caudal, pero es incapaz de diferenciar estructuras branquiales en ausencia del end- mesodermo. Los Factores Natriuréticos Atriales son una familia de péptidos vasodilatadores, diuréticos y natriuréticos, cuya presencia ha sido demostrada en el corazón de larvas y adultos de Bufo arenarum. En el presente estudio, se efectuó un análisis ultraestructural e inmunhistoquímico acerca de la presencia de FNAs en las branquias internas de larvas premetamórficas. Los resultados del estudio inmunocitoquímico indican que en el estadio II larval y subsiguientes, se encuentran células inmunorreactivas en las branquias internas. A nivel ultraestructural, se encontraron en las células claras de los filtros branquiales gránulos secretorios similares a los gránulos FNA-inmunorreactivos de las células mioendócrinas de la misma especie. Estas observaciones permiten suponer que las hormonas cardíacas podrían jugar un rol paracrino y/o autocrino en el balance osmótico y electrolítico a nivel de las branquias internas.

Abstract:
In anuran larvae external gills are embryonic structures that regress at hatching or shortly thereafter; but internal gills are retained much longer, until metamorphosis. The morphology of gills was studied under light microscopy in Bufo arenarum embryos and tadpoles. The extenal gills filaments originate on visceral arches 3 to 5 just before the heartbeat stage; they have a two-layered epidermis, mesenchymal cells and some capillary loops are present. These gills are covered by the operculum at the 25 stage and they finally disappear. The four pair internal gills are located in two branchial baskets on either side of the heart; each gill consist of a branchial arch with gill tufts projecting ventrally and gill filters running dorsally. Each gill tuft is composed of a stem and numerous ramifications; it consists of an epithelial covering, connective tissue, the blood vessels and mesodermal capillaries. The gill system is supported by cartilage of the branchial arch; the afferent and efferent branchial arteries and the musculus constrictor branchialis extend beside the arches. Although the regression of internal gills of anurans is well understood, the loss of the external gills was poorly studied. Apoptosis is a form of naturally occurring cell death during development and it is characterised by extensive DNA fragmentation. In the present work, apoptosis was detected in the epithelium of external gills by light microscopy and using in situ nick end-labelling of DNA breaks. The presence and distribution of stained nuclei were frequent at 24-25 stages, but it were also present during the other embrionic stages. An immunohistochemical assay for proliferating cell nuclear antigen (PCNA) identifies cells in all active phases of the cell cycle. In this study, PCNA methodology marked cells in embryonic proliferating tissues of branchial system, during the involution of external gills. . Epithelial apoptosis of the external gills progresses simultaneously with active proliferation of the internal gills. These results show the relevance of apoptosis at regression of external gills, when this kind of death seems to be the unique process by wich cell numbers in the gill epithelium are adjusted, in order to prepare for the new respiratory system of tadpoles. There is no information about the distribution of cytoskeletal components in the anuran gills. The aim of this work was to know the distribution of some major cytoskeletal proteins in Bufo arenarum gills; an immunocytochemical study was performed in external and internal gills. Actin immunoreaction was observed in epitelia and connective tissue;.immunodetection to myosin was restricted to connective tissue of the internal gills. Expression of a and b tubulins was found in epithelia and cilliated cells. Vimentin immunostaining was weak in the epithelial cells and intense in the connective tissue. Immunoreaction to some small cytokeratins was observed in epithelia and other tissues that in higher vertebrates express primarily vimentin; such tissues were endothelia and certain muscle cells. It is concluded that the diversity of cyotskeleton has already been established in gills of lower vertebrates such as anuran larvae. The development of amphibian gills is an excellent model for studying the interactions between the germ layers of embryos. In order to analyze the differentiation capacity, specification and determination stage of the branchial rudiment at tail bud stage, explants and transplants were performed in Bufo arenarum embryos. Rudiments transplanted developed filaments analogous to the ones observed in external and internal gills, even functionally. Endo-mesoderm explants were able to differentiate typical branchial tissues, in presence of diferent ectoderm; the isolated pressumptive gill ectoderm did not differentiate any structure. In the explanted embryos, development of external gills was prevented by either the absence of branchial ectoderm or the meso-endoderm. Differentiation of the internal gills was only affected by the lack of the intenal layers of the rudiment. These results suggest that the presumptive branchial ectoderm is defined by the tail bud stage, but is unable to differentiate branchial structures in the absence of meso and endoderm. Atrial Natriuretic Factors are a family of vasodilatadory, diuretic and natriuretic peptides, whose existence has been demonstrated in the heart of larval and adult amphibians, including Bufo arenarum. In this study, an ultrastructural and immunohistochemical analysis was carried out on the presence of ANF-like substance in the internal gills of premetamorphic larval stages. The results of immunohistochemical study indicate that, at larval II and following stages, ANF-like immunoreactive cells are seen in internal gills. At electron-microscopy level secretory granules similar to those ANF-immunoreactive granules of myoendocrine cells of the same species are seen only in clear cells of gill rakers. These observations support the hypothesis that cardiac hormones might play a paracrine and/or autocrine role in the water and electrolyte balance at internal gills level.

Lavista Llanos, Sofía. "Control de la respuesta transcripcional a hipoxia en Drosophila melanogaster, por las proteínas de la familia bHLH-PAS: Similar y Tango" (2004) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En mamíferos, se ha demostrado que el factor de transcripción hetero-dimérico bHLH-PAS - Hypoxia Inducible Factor (HIF) - es un regulador clave de la respuesta a hipoxia induciendo la expresión de genes regulada por oxígeno. En esta tesis demostramos la existencia de un sistema homólogo en Drosophila, y caracterizams su actividad in vivo durante el desarrollo. Usando reporteros transcripcionales en moscas transgénicas mostramos que la actividad trancripcional inducible por hipoxia aumenta a lo largo del desarrollo resultando máxima hacia el final de la embriogénesis. Mostramos que los diferentes tipos celulares tienen distintos niveles de sensibilidad a hipoxia y que las células traqueales son más sensibles respondiendo a hipoxia suaves. Mostramos que las proteínas bHLH-PAS Similiar (Sima) y Tango funcionan como los homólogos de HIF-α y β respectivamente, y demostramos un modo conservado de regulación por oxígeno para Sima. La proteína Sima se indujo en hipoxia, mientras el nivel de su ARN mensajero no varió con la concentración de oxígeno. En experimentos de un pulso de expresión ectópica de Sima seguidos de una curva de tiempo vimos que Sima se estabiliza en hipoxia y que su degradación depende de oxígeno. La expresión ectópica continua de Sima superó su tasa de degradación permitiéndonos estudiar el control de su localización subcelular. Sima es mayormente citoplasmática en normoxia y la proteína transloca al núcleo únicamente en hipoxia, revelando una segunda etapa de activación regulada por oxígeno. Describimos que la localización subcelular de Sima se encuentra modulada por parámetros del desarrollo. Caracterizamos el mecanismo que gobierna la localización subcelular dependiente de oxígeno de Sima. Mostramos que Sima entra y sale continuamente del núcleo al citoplasma y caracterizamos la exportación nuclear de Sima, cuyo mecanismo involucra al receptor de exportación nuclear CRM-1/Embargoed y es dependiente de oxígeno. Mostramos que el factor supresor de tumores deVon Hippel Lindau (VHL) modula la exportación nuclear de Sima, la cual requiere la hidroxilación de un residuo de prolina específico (Pro850). Proponemos que la localización núcleo-citoplasmática de HIFα/Sima resulta de un quilibrio dinámico entre la importación y la exportación nuclear, siendo este último un proceso modulado por oxígeno.

Abstract:
In mammalian systems, the heterodimeric bHLH-PAS transcription factor - Hypoxia Inducible Factor (HIF) - has emerged as the key regulator of responses to hipoxia. In this thesis we defined a homologous system in Drosophila, and characterise its activity in vivo during development flies we show that hypoxia inducible activity rises to peak levels in late embryogenesis, and is most pronounced in tracheal cells. We show that the bHLH-PAS protein Similar (Sima) and Tango function as HIF-α and β homologues respectively, and demonstrate a conserved mode of regulation for Sima by oxygen. Sima protein, but not its mRNA, was upregulated in hypoxia. Time course experiments following pulsed ectopic expression demonstrated that Sima is degraded in normoxia. Continuous ectopic expression over-rode Sima degradation which remained cytoplasmic in normoxia, and translocated to the nucleus only in hypoxia, revealing a second oxygen regulated activation step. We also show that Sima shuttles continuously between the nucleus and the cytoplasm. We characterized nuclear export of Sima which occurs through a mechanism that involves the nuclear export receptor CRM1/Embargoed and is oxygen-dependent. The Von Hippel Lindau (VHL) tumor suppressor factor modulates nuclear export of Sima, which requires hydroxylation of a specific prolyl residue (Pro850). We propose that HIFα/Sima nucleo-cytoplasmic localization is the result of a dynamic equilibrium between nuclear import and nuclear export, being the latter process modulated by oxygen tension.

Pandolfi, Matías. "Caracterización de las variantes de GnRH y las gonadotrofinas en Cichlasoma dimerus (Teleostei, Perciformes) y su relación con la diferenciación sexual" (2005) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El presente trabajo se basa en el estudio de las múltiples formas de GnRH (hormona liberadora de gonadotrofinas) en un pez teleósteo de agua dulce del Orden Perciformes mediante técnicas histológicas, inmunohistoquímicas, de hibridación in situ y Western blot. Aunque el objetivo inicial fue localizar anatómicamente las diferentes poblaciones de GnRH y analizar la distribución de sus axones desde un punto de vista morfológico- funcional, también se caracterizaron las gonadotrofinas a lo largo del desarrollo y en adultos, encontrandose expresión de las mismas en cerebro y ovario. A la luz de los resultados obtenidos sobre el origen y la ontogenia de las variantes moleculares de GnRH, se propone una correlación entre la diferenciación de una de estas poblaciones y la diferenciación sexual gonadal. Se discute el uso de una nueva metodología para el estudio de las múltiples formas de GnRH dentro de una misma especie que evita las reacciones cruzadas, comúnmente observadas entre anticuerpos y sondas. Finalmente se propone un nuevo patrón de distribución de dichas poblaciones y un origen diferente para una de ellas que contradice el patrón descripto para el resto de las especies de Perciformes, pero que es consistente con lo observado en el resto de los vertebrados.

Abstract:
The present study examined different GnRH (gonadotrophin-releasing hormone) expressing neuronal populations in a Teleost Perciform fish, using histological, immunohistochemical, in situ hibridization, and Western blot techniques. The main purpose was to localize the different GnRH-expressing populations (salmon, seabream and chicken II GnRH) and to analyze their axons pathways from a morphophysiological point of view. Gonadotrophins (FSH and LH) in this species during different developmental stages and in adults were also characterized, finding expression of them not only in pituitary but in brain (hypothalamic Nucleus lateralis tuberis) and ovary (previtellogenic and early vitellogenic oocytes). The origin and ontogeny of GnRH variants was also examined, and a correlation between the differentiation of one of them (sbGnRH) and the sexual differentiation process was proposed. A new methodological approach using the GnRH associated peptides (GAPs) for the study of multiple GnRH variants in a single species, avoiding cross reactivity was also discussed. Taken together, the results demonstrate the existence of a novel distribution GnRH neurons and an olfactory origin for sbGnRH that was not in accordance with other studies in Perciforms, but that was consistent with results obtained in other vertebrates groups.

Desbats, María Andrea. "Estudio de la dinámica y función de la ¨Proteína Heterocromática 1 gama¨ durante el proceso de diferenciación celular" (2010) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La diferenciación celular es un proceso complejo en el cuál un grupo específico de genes se activa y el resto permanece silenciado. HP1γ se asocia a genes activos, pero se desconoce su rol durante la diferenciación celular. En los preadipocitos HP1γ localiza tanto en heterocomo eucromatina, pero cuando se induce la diferenciación HP1γ rápidamente se concentra en un polo del núcleo excluyéndose de regiones heterocromáticas. La polarización de HP1γ no se observa en células que no se diferencian. La fosforilación de HP1γ en Ser93 se induce durante la adipogénesis y también se localiza polarizadamente. La polarización de HP1γ depende de la transcripción, de la integridad del RNA y DNA, y de la señalización por PKA. Interesantemente, marcas epigenéticas que marcan activa transcripción y la RNA pol II colocalizan con HP1γ en dicho polo nuclear. Este dominio muestra altos niveles de incorporación de BrUTP y de acumulación de mRNAs. La inhibición de HP1γ con siRNAs disminuye la incorporación de BrUTP y la expresión de marcadores de diferenciación adipocítica. Este dinámico patrón nuclear polarizado no se ha descripto antes, y proponemos que podría constituir un nuevo mecanismo para regular la expresión de genes requeridos durante el inicio de la diferenciación celular.

Abstract:
Cell differentiation is a complex process in which a specific subset of genes is activated while the rest of genes are silenced. HP1γ is associated to actively transcribed genes, however little is known about its role during cell differentiation. In preadipocytes HP1γ localizes in heterochromatic and euchromatic domains, but when preadipocytes are induced to differentiate HP1γ rapidly concentrates in one pole of the nucleus being transiently excluded from heterochromatin. HP1γ polarization is not observed in cells that do not differentiate. HP1γ PSer93 is induced upon adipogenesis and also concentrates in a polarized manner. HP1γ polarization depends on transcription, RNA and DNA integrity, and on PKA signalling. Noteworthy, epigenetic marks that correlate with active transcription and RNA polymerase II co-localizes with HP1γ in the nuclear pole. This domain shows high level of BrUTP incorporation and mRNAs accumulation. Knock down of HP1γ by siRNAs causes a decrease in BrUTP incorporation and a decrease in the expression of markers of adipocyte differentiation. Importantly, to our knowledge this dynamic nuclear polarization has not been described before, and we propose that it may constitute a novel mechanism for regulating the expression of a determined subset of genes required during the initial steps of cell differentiation.

Sztrum, Abelardo Andrés. "Susceptibilidad diferencial al níquel en distintos estadios del desarrollo embrio-larval de Rhinella (Bufo) arenarum" (2010) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La evaluación de la susceptibilidad estadio-dependiente al níquel (Ni) en embriones de Rhinella arenarum permitió reconocer al estadio de Gástrula como el más resistente y al de Circulación en la Aleta como el más susceptible. Los estadios larvales resultaron notablemente más resistentes que los embrionarios. Los efectos teratogénicos producidos por el Ni fueron máximos en los estadios de Blástula y Gástrula, siguiendo un patrón de dosis-respuesta, con importantes efectos en la morfogénesis y en la diferenciación celular. Se verificó una relación directa entre la susceptibilidad estadio-dependiente al Ni y la bioconcentración de este metal. Los parámetros asociados al metabolismo aeróbico y las defensas antioxidantes aumentaron en función del desarrollo embrionario, aunque el estrés oxidativo no sería un mecanismo principal en la toxicidad producida por Ni. A partir del estadio de Botón Caudal el Ni afectó el consumo de oxígeno, pudiendo éste parámetro ser utilizado como un biomarcador temprano y persistente de toxicidad al Ni. La metodología utilizada en la evaluación de la toxicidad producida por el Ni resultó también de utilidad para verificar las importantes variaciones en la susceptibilidad tanto de larvas provenientes de distintos sitios como de diferentes especies de la cuenca baja del Río Reconquista. Los bioensayos in situ y en laboratorio confirmaron el grave deterioro de la calidad de agua en el Canal Aliviador del Río Reconquista (Prov. de Buenos Aires), resultando los primeros más adecuados para evaluar la situación ambiental real

Abstract:
A stage-dependent susceptibility study on nickel (Ni) toxicity in Rhinella arenarum embryos identified Gastrulae stage as the most resistant and the Fin Circulation stage as the most susceptible. Larval stages were markedly more resistant than embryos. Within a dose-response relationship, the most adverse teratogenic effects were obtained at Blastulae and Gastrulae stages, with significant effects on both morphogenesis and cellular differentiation. The stage- dependent susceptibility was found to be directly related to the bioconcentration factor of the metal. Antioxidant defenses and aerobic metabolism parameters increased with the embryonic development, while no direct relation between oxidative stress and Ni toxicity was obtained. Ni affected the oxygen consumption resulting, form Tail Bud stage onwards, in a biomarker of its toxicity, anticipating lethal effects exerted by this heavy metal. The methodology employed for the evaluation of Ni toxicity was applied in order to study eventual adaptations to environmental pollution, as well as for a comparative assessment of the susceptibilities of different anurans larvae from different sites of the low Reconquista River basin. Both, in situ and bioassays conducted in laboratory conditions, confirmed the severe deterioration in the water quality of the Aliviador Channel of Reconquista River (Buenos Aires Province), resulting in the in situ bioassays as a more relevant method for toxicity assessment purposes

Sotomayor, Verónica. "Efectos de los plaguicidas organofosforados sobre la expresión génica de embriones de Rhinella arenarum. Mecanismos de acción y vías de señalización" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Nuestro laboratorio ha demostrado previamente los efectos adversos de plaguicidas organofosforados (OF) en estadios embrionarios y larvales de Rhinella arenarum . Estudiamos aquí los efectos de la exposición a distintas concentraciones del OF clorpirifos (Clp), focalizándonos a nivel molecular. Se determinó una CL50 mayor para brote caudal (BC) respecto de la CL50 obtenida para opérculo completo, causando malformaciones de manera dosis- dependiente. En concentraciones subletales tendió a disminuir las actividades de catalasa y glutatión S-transferasa, incrementar el contenido endógeno de GSH y la actividad específica de acetilcolinesterasa en embriones en BC. La ornitina descarboxilasa disminuyeron pero los niveles de poliaminas (PAs) endógenas se mantuvieron constantes. La unión de AP-1 al ADN también se encontró disminuida en embriones en BC expuestos y se observaron alteraciones en los patrones de fosforilación de proteínas nucleares, demostrándose posteriormente que c-Fos disminuye en embriones en BC expuestos a 2 mg/l, a diferencia de lo que observamos en GT. Por su parte c-Jun también se vio disminuida en embriones expuestos en BC, así como su forma fosforilada. Los niveles de ERK 1/2 disminuyeron frente a la exposición subletal al OF pero JNK2 aumentó, lo que indicaría que la regulación de c-Jun se estaría dando por la vía de ERK. Esto sugiere que AP-1, actuando al menos como heterodímero (c-Fos-c-Jun), estaría viendo afectada su unión al sitio TRE del ADN debido al OF. El estrés oxidativo es sugerido por los niveles de GSH endógeno y las actividades de catalasa y GST luego de la exposición al OF, mientras que una respuesta aún más temprana se observa en la regulación negativa de la unión de AP-1 al ADN y en la biosíntesis de PAs, reflejando otros mecanismos, probablemente relacionados a retraso del desarrollo y a teratogénesis.

Abstract:
Our laboratory has previously showed the adverse effects of organophosphorus pesticides (OP) in several embryonic stages and larvae of Rhinella arenarum. We study here the effects caused by the exposure to several concentrations of chlorpyrifos, analyzing specifically the molecular level. We obtained an LC50 much higher in embryos at tailbud stage (TB) in respect with the LC50 obtained for embryos at complete operculum, observing malformations in a time-dose dependent manner. The pesticide, at sublethal concentrations, tended to diminish catalase and glutathion S-transferase ́s specific activities, increase the levels of endogenous GSH and acetylcholinesterase ́s specific activity in embryos at TB stage. The ornithine decarboxilase ́s specific activity was decreased and the levels of endogenous polyamines remained stable. AP-1 binding to the DNA, in treated embryos at TB stage, were diminished and we observed altered patterns in the phosphorylation status of total proteins, showing later that c-Fos protein is decreased in exposed embryos at TB but increased in late gastrula. The c-Jun protein and its phosphorilated form, p-c-Jun, was found to be decreased after exposure to the OP. The level of ERK 1/2 diminished in exposed embryos but JNK2 increased, thus indicating that c-Jun regulation would be due to the ERK 1/2 pathway. This suggests that AP-1 (acting at least as an heterodimer c- Jun-c-Fos) binding to the TRE site of the DNA would be affected by the OP. The oxidative stress is suggested by the levels of endogenous GSH and the activities of catalase and GST, after the exposure to the OP; while an even earlier response is observed with the negative regulation of the AP-1 binding to the DNA and the biosynthetic pathway of polyamines, thus reflecting other mechanism of action, probably related to a delayed development and theratogenesis.

La Rosa, Isabel. "Rol del factor morfogenético del hueso 4 (BMP4) en la maduración ovocitaria y el desarrollo embrionario de bovinos" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El factor morfogenético del hueso 4 (BMP4, por sus siglas en inglés Bone Morphogenic Protein) cumple funciones en distintos aspectos del desarrollo como diferenciación, morfogénesis, apoptosis y crecimiento celular en diversos tipos celulares. Nogina es un potente inhibidor de BMP4 que actúa evitando la unión de BMP4 con sus receptores. El objetivo de este trabajo fue investigar el rol de BMP4 en la maduración ovocitaria y en el desarrollo embrionario in vitro de bovinos. Se maduraron in vitro ovocitos bovinos en presencia de BMP4 o de Nogina. A partir de estos ovocitos, se produjeron embriones por activación partenogénica (AP) y por fecundación in vitro (FIV). Por otro lado, se produjeron embriones por AP y por FIV y fueron cultivados en presencia de BMP4 o de Nogina. BMP4 está implicado en la maduración ovocitaria en bovinos con efectos en las tasas de clivaje y el estado pluripotente de los blastocistos; Y Nogina modifica la expresión de ciertos genes en ovocitos. Más aún se demuestra por primera vez que un balance equilibrado del sistema de señalización de BMP es necesario para el correcto desarrollo embrionario preimplantatorio en bovinos.

Abstract:
BMP4 acts on many aspects of development such as differentiation, morphogenesis, apoptosis and cell growth in different cell types. Noggin is a potent BMP inhibitor that exerts its function by binding to BMPs preventing interactions with its receptors. The aim of this work was to investigate the role of BMP4 on oocytes in vitro maturation and embryos in vitro development of bovine. For this, oocytes were in Vitro matured in the presence of BMP4 or Noggin and these oocytes were used to produce embryos by parthenogenic activation (PA) or in Vitro fertilization (IVF). On the other hand, embryos were produced by PA or IVF and cultured in the presence of BMP4 or Noggin. We found that BMP4 is implicated in oocyte maturation with effects on cleavage rates and pluripotency state of the cells. Noggin supplementation up-regulated the expression of certain genes in matured oocytes. Our results show that BMP4 is implicated in bovine oocytes maturation and embryo development. Moreover, our findings demonstrate, for the first time, that a correct balance of BMP signaling is needed for proper preimplantation development of bovine embryos.

Crocco, Melisa Candela de los Angeles. "Suero en el medio de cultivo: actividad celular de embriones mantenidos in vitro en estadios iniciales de clivaje" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El cultivo de embriones en medio suplementado con suero se utiliza durante el desarrollo parcial o total de embriones producidos in vitro (PIV). Este suplemento de composición compleja y variable se ha asociado con un alto grado de alteraciones de la estructura mitocondrial que provocaría una deficiente utilización y posterior acumulación de lípidos, respecto del medio sin suero. En esta tesis, se evaluó esta asociación y se determinó el día de desarrollo en que la adición de suero al medio produce menores daños mitocondriales en embriones bovinos. El estudio de la ultraestructura mitocondrial en estadios iniciales de clivaje de embriones bovinos in vitro permitió completar la información disponible sobre la estructura de la organela, e interpretar el efecto del medio de cultivo sobre la organela. No se encontraron indicios que atribuyan al suero el daño mitocondrial morfológico in vitro, en embriones bovinos de 2 a 16 células. Se encontraron en cambio, modificaciones que podrían ser ventajosas para el desarrollo embrionario cuando la adición del suero al medio de cultivo se produce en el día 3 de desarrollo. Como alternativa procedimental al cultivo de embriones en medio con suero, en esta tesis se estudiaron el crecimiento y la adhesión de embriones y ovocitos humanos, en condiciones libres de suero y de productos animales. El cultivo de embriones en medio definido sin suero es de enorme interés en humanos, pues de él depende el desarrollo de líneas de células troncales embrionarias humanas (CTEh) con grado clínico. En este sentido, se emplearon condiciones de mínima complejidad durante el proceso de derivación de células troncales de grado clínico, utilizando una matriz de fibronectina como sustrato y medio de cultivo sin suero.

Abstract:
Serum-supplemented medium are used during the partial or complete development of in vitro produced (IVP) embryos. This supplement of complex and variable composition has been associated with a high degree of alterations of mitochondrial structure that would cause a poor use and accumulation of lipids, compared with the non-serum medium. The main objective of this thesis is to study this association and to state the day in which serum should be added in order to cause the minimum amount of mitochondrial damages in bovine embryos. The study on mitochondrial ultra-structure in early cleavage stages of in vitro bovine embryos, allowed us to complete the already available information about the organelles´ structure, understanding the effect that the culture medium has on the organelle. No evidence has been found to support the hypothesis that the serum damaged in vitro mitochondrial morphology in 2 to 16 cells stages bovine embryos. However, we have found changes that might be advantageous for the embryonic development when the addition of serum to the culture medium occurs in day 3 of this process. As an alternative to the embryo cultured in a serum-supplemented medium, in this thesis we studied human embryos and oocytes growth and adhesion free of animal products and serum. Embryos cultured in a serum free media are of great interest, because of it depends the human embryonic stem cells (hESC) development, with clinical grade. Therefore, minimum complexity conditions were used during the derivation process of clinical grade stem cells, using a fibronectin matrix as substrate and serum-free culture medium.

González Pisani, Ximena. "Biología reproductiva de los cangrejos ¨Araña¨Leurocyclus tuberculosus y Libinia spinosa (Brachyura, majoidea) del norte de Patagonia" (2011) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La presente tesis tiene por objetivo el estudio de la biología reproductiva de dos especies de Majoidea presentes en los golfos norpatagónicos (41°- 43°S, 64°-65° W), Leurocyclus tuberculosus y Libinia spinosa. Se describió la estrutura del sistema reproductor femenino y masculino mediante observaciones macroscópicas y bajo microscopía óptica y electrónica de barrido. En las hembras se observó la inserción oviducto-receptáculo seminal del tipo “intermedia” y los receptáculos presentaron diferencias en la zona de transicion mesodermica-ectodermica entre especies. En los machos se observaron diferencias en la formación de los espermatóforos y en la morfología de los gonopodios. Posteriormente se estableció la talla de madurez sexual y se determinaron los estadios de crecimiento. La talla a la cual el 50% de las hembras está madura gonadal, morfométrica y funcionalmente podría corresponder al mismo estadio de crecimiento. En los machos de Leurocyclus tuberculosus se determinó que la madurez gonadal podría ocurrir en un estadio de crecimiento previo a la talla de madurez morfométrica y funcional mientras que en Libinia spinosa la madurez gonadal y morfométrica ocurrirían en el mismo estadio y la madurez funcional en un estadio posterior. Se propone que la muda puberal no sería la muda terminal. La frecuencia de tallas mostró un patrón de crecimiento similar entre sexos en Leurocyclus tuberculosus y diferencias en Libinia spinosa. La proporción de sexos en Leurocyclus tuberculosus fue de 2:1 (hembras: machos) y en Libinia spinosa la proporción varió entre estaciones. La fecundidad estimada fue mayor en Leurocyclus tuberculosus con menor tamaño de huevos. El esfuerzo reproductivo fue menor al de otras especies de Eubrachyura, siendo en Leurocyclus tuberculosus significativamente menor que en Libinia spinosa. Las especies no mostraron una buena correlación entre la fecundidad y la talla lo que sugiere que otros factores modulan la fecundidad. Finalmente se caracterizó el desarrollo embrionario y el efecto de la temperatura sobre el tiempo de desarrollo. Se describieron 5 etapas de desarrollo. El crecimiento embrionario fue mayor en Leurocyclus tuberculosus y la temperatura de incubación tuvo un efecto significativo sobre el tiempo de desarrollo embrionario total en ambas especies.

Abstract:
This thesis is aimed at investigating the reproductive biology of two Majoidea species occurring in the gulfs of northern Patagonia (41°-43°S, 64°-65° W), Leurocyclus tuberculosus and Libinia spinosa. The female and male reproductive systems were described based on macroscopic study, light microscopy and scanning electron microscopy. The oviducts connect with the seminal receptacles at the midlength of the mesoderm-derived region, and there are different structures in the transition zone of the seminal receptacles. Males of both species show differences in spermatophore formation and gonopod morphology. In addition, the size at sexual maturity was estimated by combining the concepts of gonadal, morphometric and functional maturity, and growth stages were determined. The size at which 50% of females reach gonad, morphometric and functional maturity would be attained at the same growth stage. Males of Leurocyclus tuberculosus may reach gonad maturity before morphometric and functional maturity, while males of Libinia spinosa may reach gonad and morphometric maturity at the same stage and functional maturity at the next stage. For both species, the pubertal moult may not coincide with the terminal moult. Size frequency distribution of males and females showed a similar and different growth pattern for Leurocyclus tuberculosus and Libinia spinosa, respectively. The sex ratio in Leurocyclus tuberculosus was 2:1 (females: males), while in Libinia spinosa it depended on the season. The fecundity and the reproductive effort were also estimated. Leurocyclus tuberculosus females had higher fecundity and smaller eggs. The reproductive effort of both species was lower than those reported for other Eubrachyura, with the value for Leurocyclus tuberculosus being significantly lower than that for Libinia spinosa. The fecundity did not show a good correlation with size, suggesting that other factors modulate fecundity. Finally, the embryonic development was characterised and the effect of temperature on development was evaluated. Five developmental stages were determined. Embryo volume was greater in Leurocyclus tuberculosus. The effect of incubation temperature on total developmental time was significant for both species.

Pozo Devoto, Victorio Martín. "Estudio bioquímico y estructural de la muerte celular propia del desarrollo y la inducida por un evento hipóxico en el SNC durante el desarrollo" (2012) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los eventos de hipoxia tienen consecuencias nocivas que se manifiestan de múltiples formas en el SNC durante el desarrollo. El presente estudio analiza los daños generados en el tectum óptico por una hipoxia aguda normobárica sobre embriones de aves. Encontramos que tanto la vulnerabilidad diferencial como el retraso temporal de la muerte celular son dos fenómenos producto del evento hipóxico. Dicho daño se caracteriza por ser independiente de aferencias de la retina y por presentar una muerte celular mediada por la vía apoptótica intrínseca. Esto fue determinado ultraestructuralmente y bioquimicamente mediante la inmunomarcación de proteínas involucradas en la cascada apoptótica. Por otro lado, se determinó que la muerte celular propia del desarrollo presenta un perfil morfológico y bioquímico apoptótico similar al observado en condiciones de hipoxia. Frente a la evidente semejanza entre estos dos procesos de muerte postulamos que la hipoxia en nuestro modelo genera un desequilibrio transitorio en la homeostasis del tectum óptico, incrementando la muerte celular propia del desarrollo. Además, observamos una disminución transitoria en la actividad de la vía de supervivencia PI3K/Akt durante el evento hipóxico. Los resultados preliminares derivados de la administración de drogas que logran estimular esta vía de supervivencia en cultivos de embriones ex ovo, sugieren un rol ejecutor de esta vía en la muerte hipóxica. Por último, hemos determinado que la administración de estradiol posterior al evento hipóxico presenta efectos neuroprotectores a través de la unión a receptores y posiblemente mediante acciones no genómicas a través de PI3K/Akt.

Abstract:
Hypoxic insults during CNS development have multiple deleterious outcomes. In the present thesis, we analize the cell death evolution in the chick optic tectum layers after an acute normobaric hypoxia, showing two important features: differential vulnerability of optic tectum layers and delayed neuronal death. Our results show that hypoxic cell death is independent of retinal inputs and we found that this cell death is mediated by the apoptotic intrinsic pathway. This was determined by ultrastructural analysis and immunofluorescence against apoptotic pathway proteins. With minor differences, developmental cell death itself presents a morphological and biochemical apoptotic profile. The similarity between these two cell death processes lead us to postulate that hypoxia generates a temporary imbalance in the homeostasis of the optic tectum, increasing developmental cell death. In addition, we observed a transient decrease in the activity of the PI3K/Akt survival pathway during the hypoxic event, suggesting an important role as executor of hypoxic cell death. This is supported by the results obtained from the administration of drugs in a model of cultured ex ovo embryos, where the stimulation of pAkt levels reverts the hipoxic cell death. Finally, we have determined that administration of estradiol after the hypoxic event exerts neuroprotective effects through estrogen-estrogen receptor interaction and possibly through nongenomic actions via PI3K/Akt pathway.

Saez, Trinidad María de los Milagros. "Efectos de la exposición prenatal al agonista cannabinoide WIN55,212-2 sobre la proliferación, la migración y el citoesqueleto neuronal de la rata" (2012) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El sistema endocannabinoide (eCB), compuesto por los receptores cannabinoides (rCB1 y rCB2), ligandos endógenos (endocannabinoides), y enzimas de síntesis y degradación, está presente en el cerebro desde etapas muy tempranas de su desarrollo. En este periodo, el sistema eCB está involucrado en la regulación de la proliferación de progenitores neuronales, en la especificación, la migración y la diferenciación de neuronas piramidales e interneuronas y también en la sinaptogénesis. El consumo de marihuana durante la gestación representa un gran riesgo para el desarrollo del sistema nervioso central de los fetos, dado que el Δ9‐ tetrahidrocannabinol, el principal compuesto activo del cannabis, atraviesa la placenta y la barrera hemato‐encefálica. Estudios realizados en niños y adolescentes cuyas madres consumieron marihuana durante el embarazo, documentaron anormalidades cognitivas y comportamentales. En este trabajo se demostró la expresión del rCB1 durante la corticogénesis en neuronas postmitóticas en migración, así como en diversas poblaciones neuronales. Además, el presente trabajo aporta evidencias sobre los efectos que produce la exposición materna a un agonista cannabinoide sobre las neuronas postmitóticas en migración y la diferenciación de neuronas del linaje glutamatérgico. Estos resultados contribuyen al conocimiento sobre los sustratos neurobiológicos que determinarían los cambios neuro‐comportamentales que persistentes en las funciones cerebrales durante la vida postnatal. Asimismo, se demostró que ratones CB1 knockout mostraron una disminución en el número de progenitores intermedios y un aumento en el número de neuronas postmitóticas glutamatérgicas. Durante la vida postnatal, la deleción del rCB1 indujo una distribución de interneuronas anormal. En suma, los resultados obtenidos en este trabajo constituyen avances originales sobre el papel del sistema endocannabinoide en el desarrollo de la corteza cerebral.

Abstract:
The endocannabinoid system (eCB), formed by the cannabinoid receptors (rCB1 and rCB2), endogenous ligands (endocannabinoids) and synthesis and degradation enzymes, is present since early stages of brain development. During this period, the eCB is involved in the regulation of proliferation of neural progenitors and in specification, migration and differentiation of pyramidal neurons and interneurons as well as in synaptogenesis. Marihuana consumption during pregnancy represents a serious risk for the proper development of the fetus´s brain since Δ9‐ tetrahidrocannabinol, main active compound of cannabis, can reach the fetus through placenta and hemato‐encephalic barrier. Cohort studies performed on children and adolescents of mothers who consumed marihuana during pregnancy, reported cognitive and comportamental abnormalities in these subjects. In the present study, we demonstrated the expression of the rCB1 during corticigenesis in migrating postmitotic neurons as well as in other neuronal populations. Moreover, this Thesis work provides evidence on the effects accounted by prenatal exposure to a cannabinois agonist on migrating post‐mitotic neurons and the differentiation of glutamatergic neurons. The present results contribute to the knowledge on neurobiologic substrates that determine neuro‐comportamental changes that will persist through post‐natal life. Finally, it was also proved that CB1 knockout mice showed a diminished number of intermediate progenitors and a higher number of glutamatergic post‐mitotic neurons. During post‐natal life, the deletion of rCB1 induced an abnormal distribution of interneurons. In summary, the results presented in this Thesis work represent an original advance in the understanding of the role played by the eCB system in the development of the cerebral cortex.

Aronzon, Carolina Mariel. "Evaluación de la toxicidad de los contaminantes Cobre, Nonilfenol y Diazinón sobre embriones y larvas de Rhinella (Bufo) arenarum" (2013-03-18) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La exposición de Rhinella arenarum a Cobre, Nonilfenol y Diazinón causó importantes efectos tóxicos letales y subletales sobre las etapas tempranas de su ciclo de vida. El Cobre resultó el más tóxico: la CL50-168h para los embriones y larvas fue de 19,5 μg Cu2+/L y 51 μg Cu2+/L, respectivamente, y el Potencial Teratogénico fue de 2. En la evaluación de la susceptibilidad estadio-dependiente al Cobre los embriones en los estadios de blástula y gástrula mostraron la más alta resistencia al Cobre, mientras que los estadios organogénicos fueron los más susceptibles. La toxicidad del Cobre por exposición continua de larvas tempranas alcanzó su valor máximo durante las primeras 24 h. Se confirmó el carácter pro-oxidante del metal. En larvas tempranas la primera vía de defensa antioxidante es la Superóxido Dismutasa. Se encontraron diferencias en la susceptibilidad al Cobre en camadas provenientes de sitios con diverso grado de contaminación, lo que fue relacionado con los mecanismos de defensa antioxidantes. El Nonilfenol resultó la segunda sustancia más tóxica. La susceptibilidad de los organismos expuestos al Nonilfenol a partir del inicio del desarrollo embrionario y larval fue tiempo-dependiente, aunque el período larval resultó significativamente más sensible, así la CL50-168h para embriones y larvas fue de 0,96 mg Nonilfenol/L y 0,37 mg Nonilfenol/L, respectivamente. El Diazinón resultó el menos tóxico, sin embargo, el Potencial Teratogénico fue mayor a 2 y el plaguicida causó severos efectos neurotóxicos. La susceptibilidad de los organismos expuestos al Diazinón a partir del inicio del desarrollo embrionario y larval fue tiempo-dependiente, aunque el período larval resultó significativamente más sensible, así la CL50-168h para embriones y larvas fue de 20 mg Diazinón/L y 6,7 mg Diazinón/L, respectivamente. La incorporación del Diazinón resultó concentración-dependiente, disminuyendo con el tiempo de exposición, y estadiodependiente, con un Factor de Bioconcentración de 107 en los estadios embrionarios. La toxicidad conjunta de las diferentes mezclas Cobre-Diazinón y Cobre-Nonilfenol tanto para los embriones como para las larvas resultaron en un patrón general de antagonismo. Las diferentes mezclas de Diazinón y Nonilfenol presentaron un comportamiento entre aditivo y sinérgico principalmente durante el período agudo.

Abstract:
The exposure to Copper, Nonylphenol and Diazinon on Rhinella arenarum caused important lethal and sublethal toxic effects on early life stages of the development. Copper was the most toxic, with a LC50-168h for embryos and larvae of 19.5 μgCu2+/L and 51 μgCu2+/L, respectively and the Teratogenic Potential was 2. In the stagedependent evaluation to copper, embryos at blastula and gastrula stages were the most resistant to copper, whereas the organogenic period were the most susceptible. Toxicity of continuous exposure from larvae reached the maximal value at the first 24h. It was confirmed the pro-oxidant character of the metal. The fisrt antioxidant defense pathway in larvae was the Superoxide Dismutase. There were differences in the susceptibility to Copper in litters captured in sites with different degrees of pollution, this were related with antioxidant defenses. Nonylphenol was the second most toxic compound evaluated. The susceptibility of organisms exposed to Nonylphenol from the beginning of the embryonic development was time-dependent, although the larval period was significantly more sensitive, so the LC50-168h for embryos and larvae was 0.96 mg Nonilfenol/L and 0.37 mg Nonilfenol/L, respectively. Diazinon was the less toxic compound. However, the teratogenic potential was more than 2 and the pesticide caused severe neurotoxic effects. The susceptibility of organisms exposed to Diazinón from the beginning of the embryonic development was time-dependent, although the larval period was significantly more sensitive, so the LC50-168h for embryos and larvae of 20 mg Diazinón/L and 6.7 mg Diazinón/L, respectively. Diazinón uptake was concentration-dependent, decreasing with time of exposure, and stage-dependent, with a Bioconcentration Factor of 107 in embryonic stages. The joint toxicity of copperdiazinon and copper-nonylphenol both for embryos and larvae was a general pattern of antagonist. In the case of diazinon - nonylphenol mixture the behavior was between additive and synergistic, especially in the acute period.

Svartz, Gabriela Verónica. "Evaluación de la toxicidad del endosulfán, la cipermetrina y un fungicida de uso comercial, solos y en mezclas sobre el desarrollo temprano de Rhinella arenarum (Amphibia: Anura: Bufonidae)" (2014-06-26) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se evaluó la toxicidad aguda y crónica de dos insecticidas, endosulfán (ES) y cipermetrina (CY), y del fungicida Maxim® XL (2,5% fludioxonil, 1,0% metalaxil- M), sobre el desarrollo embrio-larval de Rhinella arenarum, un anfibio autóctono de Argentina. Los resultados mostraron que los insecticidas fueron más tóxicos (el ES en el período agudo y la CY en el periodo crónico) en relación al fungicida. La susceptibilidad a estos agroquímicos fue estadio-dependiente encontrándose un patrón diferente para las tres sustancias de acuerdo al modo de acción de cada una de ellas. La toxicidad de los insecticidas aumentó significativamente en los estadios tardíos, siendo el periodo larval el más sensible y causando severas alteraciones en el comportamiento en concordancia con su acción neurotóxica. Por el contrario, la mayor toxicidad del Maxim® XL fue observada en los estadios embrionarios tempranos (blástula el más sensible), con severos efectos teratogénicos. La interacción de ES y CY en mezclas, mostraron tanto un efecto antagónico como aditivo durante los periodos agudo y crónico corto, así como sinergismo durante el periodo crónico. La toxicidad de un formulado comercial con CY resultó hasta 7 veces mayor que la del ingrediente activo, hecho muy relevante considerando que es el producto comercial el que efectivamente se aplica en los cultivos. Teniendo en cuenta los resultados de toxicidad y el análisis de peligrosidad, estos tres agroquímicos utilizados a nivel mundial, y en particular en nuestro país, podrían poner en riesgo la continuidad de las poblaciones de esta especie representativa de la herpetofauna regional asociada a los agroecosistemas de nuestro país.

Abstract:
The acute and chronic toxicity of two insecticides, endosulfan (ES) and cypermethrin (CY), and of the Maxim® XL fungicide (2.5% fludioxonil, 1.0% metalaxyl- M) was assessed on the embryo-larval development of Rhinella arenarum, a native amphibian of Argentina. The results showed that the insecticides were more toxic (ES during the acute exposure period and CY during the chronic exposure period) than the fungicide. The sensitivity to these agrochemicals was stage-dependent establishing a different pattern for the three substances according to their mode of action. The toxicity of the insecticides was significantly increased in later stages, the larval period being the most sensitive, and causing severe alterations in behaviour consistent with its neurotoxic action. In contrast, the greater toxicity of Maxim® XL was observed at early embryonic stages (blastula stage being the most sensitive), with severe teratogenic effects. The interaction of ES and CY in mixtures showed antagonistic and additive effects during the acute and short term chronic periods, and synergism during the chronic period. The toxicity of a CY commercial formulation was 7 times greater than the active ingredient, a very relevant fact considering that the commercial product is actually applied on crops. Taking into account the results of toxicity and hazard assessment, these three agrochemicals worldwide used, and particularly in our country, could threaten the continuity of populations of this species, representative of the regional herpetofauna associated to agroecosystems of our country.

Pérez Tito, Leticia Gabriela. "Consumo materno de alcohol: impacto en el desarrollo embrio-trofoblástico temprano y en la gestación a término" (2014-12-22) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El consumo de alcohol durante la gestación produce el Síndrome de Alcoholismo Fetal. Postulamos que el consumo perigestacional de alcohol hasta períodos periimplantatorios, en el ratón, induce alteraciones embrio-trofoblásticas que resultan en defectos feto-placentarios a largo plazo. Utilizando modelos murinos (CF-1 y CD-1) y la administración oral de etanol (10%) previo a la fecundación y hasta los días 4, 5 u 8 de gestación (dg), los objetivos fueron: 1) analizar parámetros biométricos y el ciclo estral frente a la exposición pregestacional (17 días previos a la gestación); 2) evaluar la diferenciación, crecimiento embrionario y capacidad invasiva trofoblástica luego del consumo de alcohol hasta la etapa periimplantatoria (días 4 y 5 dg) y postimplantatoria temprana (día 8 dg); 3) analizar la incidencia de malformaciones fetales y anomalías placentarias en la gestación a término (día 18 dg). La exposición pregestacional a alcohol en CF-1 indujo interrupción del ciclo estral, resultados que determinaron la inducción de la ovulación. Al día 4 dg (preimplantación) en CF-1 y CD-1 se evidenció retraso en la diferenciación y crecimiento embrionario, alteración de la expresión y localización de moléculas de adhesión (ZO-1, E-cadherina) y aumento de apoptosis. Al día 5 dg (implantación), además de retraso de diferenciación, se halló desregulación en la dinámica de crecimiento y expansión trofoblástica durante la implantación in vitro. Al día 8 dg, se evidenció menor grado de diferenciación embrionaria, alteraciones histológicas junto a una alta tasa de apoptosis. La reducida expresión de E-cadherina en ectodermo embrionario e incremento de metaloproteasas -2 y -9 posiblemente se relaciona con la expansión trofoblástica anómala observada en cultivos de conos ectoplacentarios. Al día 18 dg, luego del consumo de alcohol hasta el día 4, 8 o 10 dg, se encontró aumento de reabsorciones embrionarias, alta incidencia de malformaciones craneofaciales, osificación fetal incompleta y alteraciones histológicas placentarias. La ingesta perigestacional de alcohol hasta la preñez temprana altera la dinámica de diferenciación y crecimiento del embrión periimplantatorio, las uniones celulares y la expresión de metaloproteasas en los tejidos embrionarios conduciendo a malformaciones fetales y posible restricción del crecimiento intrauterino al día 18 dg. La desregulación de la invasividad trofoblástica al día 5 y 8 dg podría vincularse con pérdida temprana de la gestación y con alteraciones placentarias observadas en la gestación a término.

Abstract:
Alcohol consumption during pregnancy causes Fetal Alcohol Syndrome. We postulate that perigestational consumption of alcohol to periimplantational periods in mouse, induces embryonic and trophoblast changes that result in fetal-placental defects at long term. Using murine models (CF-1 and CD-1) and oral administration of ethanol (10%) previously to fertilization and up to days 4, 5 or 8 of gestation (g), the objectives were: 1) to analyze biometric parameters and the estrous cycle upon pre-gestational exposure (17 days prior to gestation), 2) to evaluate the differentiation, the embryo growth and trophoblast invasiveness after alcohol drinking up to stages of peri-implantation (days 4 and 5 g) and early post-implantation (day 8 g), 3) to analyze the incidence of fetal malformations and placental abnormalities in pregnancy to term (day 18 g). The pregestational exposure to alcohol in CF-1 induced disruption of the estrous cycle, results that determined the induction of ovulation. By day 4 g (preimplantation) in CF- 1 and CD-1 delayed embryo differentiation and growth, disruption of expression and localization of adhesion molecules (ZO-1, Ecadherin) and increased apoptosis were evidenced. By day 5 g (implantation), besides the delayed differentiation, deregulation of trophoblast growth and expansion dynamics was found during in vitro implantation. At 8th gd, it were evidenced lower degree of embryonic differentiation, and histological anomalies with a high rate of apoptosis. The reduced E-cadherin expression in embryonic ectoderm and metalloproteases -2 and -9 increase possibly is related to abnormal trophoblast expansion observed in cultures of ectoplacental cones. At day 18 g, after alcohol consumption up to 4, 8 or 10 g, increased embryo resorptions, high incidence of craniofacial malformations, incomplete fetal ossification and placental histological abnormalities were found. The perigestational alcohol intake up to early pregnancy alters the dynamics of differentiation and growth of periimplantational embryo, the cell junctions and the expression of metalloproteinases in embryonic tissues leading to fetal malformations and possible intrauterine growth restriction day 18 g. Deregulation of trophoblast invasiveness on day 5 and 8 g could be linked to early pregnancy loss and placental alterations observed in the pregnancy to term.

Mardirosian, Mariana Noelia. "Ecotoxicología del arsénico y mecanismos de acción en el desarrollo del anfibio Rhinella arenarum" (2015-03-10) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El arsénico (As) es un elemento natural de relevancia ecológica que se encuentra en fuentes naturales de agua en toda la Argentina en concentraciones entre 0,001 y 15 mg/L. La especie autóctona de sapo Rhinella arenarum fue seleccionada para estudiar la toxicidad sub-crónica y crónica del arsénico y las respuestas bioquímicas y moleculares provocadas por la exposición a este tóxico durante su desarrollo embrionario y larval, con el objetivo de identificar biomarcadores moleculares y bioquímicos. El valor promedio de la CL50 fue de 24,27 mg As/L y se mantuvo constante a lo largo del desarrollo embrionario. Sin embargo, cuando los embriones fueron expuestos a partir del estadio de “latido cardíaco” (5 días de desarrollo), la toxicidad del arsénico disminuyó drásticamente, lo que sugiere la activación de mecanismos de desintoxicación. El valor de NOEC arrojó un resultado de 10 mg As/L y el de LOEC (efecto: mortalidad) un valor de 20 mg As/L para los distintos experimentos. Dadas las concentraciones ambientales de arsénico en Argentina, hay una probabilidad de exceder los niveles letales en un 1 por ciento de los sitios. El valor de LOEC sería superado en el 1,3 por ciento de los sitios, mientras que el de NOEC en el 3,5 por ciento de los sitios en términos probabilísticos. El arsénico en concentraciones de 10 y 20 mg/L causó una disminución significativa en la capacidad antioxidante total (TRAP), pero generó un aumento en el contenido de glutatión reducido (GSH) endógeno y en la actividad de glutatión S-transferasa (GST) cuando la exposición se realizó en forma subcrónica hasta el final del desarrollo embrionario. Esta respuesta protectora podría estar impidiendo un descenso más profundo en el sistema antioxidante y un mayor daño oxidativo, o estar vinculado a la conjugación del arsénico con GSH para su excreción. Cuando la exposición a arsénico se realizó en forma crónica durante 23 días a concentraciones por debajo de 10 mg/L, se observó la inducción de las actividades de GST y glutatión reductasa (GR). Por su parte, el arsénico disminuyó la actividad de catalasa (CAT) en los estadios embrionarios, mientras que la actividad de la glutatión peroxidasa Sedependiente no se vio afectada con la presencia del tóxico. Si bien se observó una disminución de TRAP durante toda la exposición a 1 y 10 mg/L, no se observó alteración en el contenido de GSH ni en los niveles de peroxidación de lípidos. La actividad de superóxido dismutasa (SOD) se vio inducida a los 9 y 16 días e inhibida al final de la exposición, sugiriendo la inactivación de la enzima. Se detectó la misma tendencia en la expresión de las proteínas CAT, SOD y GST, analizadas por Western blot, que la observada en sus actividades enzimáticas. Se estudiaron los efectos del arsénico sobre vías de transducción de señales y factores de transcripción que podrían estar relacionados a su toxicidad crónica. Las quinasas de la vía MAPK, MEK y ERK y los factores de transcripción c-FOS y c-JUN fueron inducidos por la exposición a arsénico, pudiendo estar modulando la respuesta antioxidante. Además, se evaluó la acumulación de arsénico y la concentración de hierro, zinc y cobre en embriones y larvas expuestos a arsénico. Los resultados mostraron que los embriones expuestos crónicamente a 1 y 10 mg/L acumularon arsénico a partir del día 5, mientras que los embriones expuestos a 0,01 y 0,1 mg/L lo hicieron entre el día 5 y el día 9 de desarrollo. Luego de 23 días de exposición, se determinó una bioacumulación de arsénico de 27 veces en el grupo expuesto a 0,01 mg/L, de 11 veces en el grupo expuesto a 0,1 mg/L, de 44 veces en el grupo expuesto a 1 mg/L, y de solamente 5 veces en el grupo expuesto a 10 mg/L, tomando como referencia el arsénico presente en el medio. La bioacumulación se comportó de manera lineal en el tiempo de la exposición excepto para el valor más alto de 10 mg/L, concentración que podría provocar la saturación de los sistemas de transporte. El arsénico utilizaría el sistema de excreción de transportadores ABC según los estudios ex vivo que realizamos sobre la actividad de proteínas de resistencia a múltiples xenobióticos, MRP, las cuales transportan en forma fisiológica compuestos conjugados con GSH. Asimismo, se observó un aumento en las concentraciones de hierro, zinc y cobre en las larvas expuestas a arsénico, sugiriendo que el arsénico podría estar modulando la retención o acumulación de estos elementos dentro de las larvas expuestas. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que los embriones de R. arenarum son más sensibles al arsénico durante las etapas tempranas del desarrollo, probablemente debido a que se requiere la evolución de mecanismos detoxificantes ligados a GSH; asimismo, altas concentraciones de este elemento son necesarias para provocar la mortalidad cuando la exposición se realiza hasta el final del desarrollo embrionario. El arsénico es capaz de alterar el estado oxidativo en embriones y larvas de R. arenarum, afectando el estado redox celular a concentraciones subletales tanto en la exposición subcrónica como crónica, modulando la respuesta antioxidante a través de la vía de MAPK por MEK y ERK y la acción de los factores de trascripción muy tempranos c-FOS y c-JUN. El arsénico en concentraciones de hasta el orden de mg/L se bioacumularía en forma continua desde el medio, probablemente debido a su transformación enzimática a compuestos organoarsenicales, entre ellos la conjugación con GSH para su excreción por MRP. Además, debido a que la actividad de las enzimas GR y GST, los niveles de proteínas de la vía de MAPK MEK y ERK y de los factores de transcripción c-FOS y c-JUN se vieron alterados a bajas concentraciones de arsénico, su respuesta puede ser utilizada como marcador de exposición temprana a dicho tóxico.

Abstract:
Arsenic (As) is a natural element of ecological relevance that is found in natural water sources throughout Argentina in concentrations ranging between 0.001 and 15 mg/L. The autochthonous toad Rhinella arenarum was selected to study the sub-chronic and chronic toxicity of arsenic and the biochemical responses elicited by the exposure to this toxic in water during its embryonic and larval development, with the aim of identifying molecular and biochemical biomarkers. The LC50 value averaged 24.27 mg/L As, and remained constant along the embryonic development. However, arsenic toxicity drastically decreased when embryos were exposed from “heartbeat” stage on (5 days of development), suggesting the onset of detoxification mechanisms. The NOEC yielded a value of 10 mg/L As, while the LOEC (effect: mortality) yielded a value of 20 mg/L As for the different experiments. Given the environmental concentrations of arsenic in Argentina, there is a probability of exceeding lethal levels at one percent of the sites. The LOEC and NOEC values would be exceeded at 1.3 percent and 3.5 percent of the sites, respectively. Arsenic concentrations of 10 and 20 mg/L caused a significant decrease in the total antioxidant potential (TRAP), but generated an increase in endogenous GSH content and glutathione S-transferase (GST) activity when the exposure was performed sub-chronically until the end of the embryonic development. This protective response might prevent a deeper decline in the antioxidant system and further oxidative damage or it might be linked to arsenic conjugation with GSH for its excretion. When the exposure was performed chronically for 23 days at sublethal concentrations (below 10 mg/L), the toxicant caused an induction of GST and glutathione reductase (GR) activities. However, catalase (CAT) activity was reduced by arsenic in embryonic stages and glutathione peroxidase Se-dependent activity was not affected by the presence of the toxicant. While a decrease in the total antioxidant potential was observed throughout the exposure at 1 and 10 mg/L, GSH content and lipid peroxidation levels did not differ from control. SOD activity was induced after 9 and 16 days of exposure and inhibited at the end of exposure (23 days), suggesting the inactivation of the enzyme. Through Western blot analysis, the same trend was found in the expression of the CAT, SOD and GST proteins when compared to their enzymatic activities. MEK and ERK pathway proteins and signal transduction transcription factors c-JUN and c-FOS were studied, showing that arsenic induces the expression of these proteins suggesting that they might be modulating the antioxidant response due to arsenic exposure. It was observed that embryos exposed chronically to arsenic concentrations between 1 and 10 mg/L accumulate arsenic from day 5 on, and embryos exposed to 0.01 and 0.1 mg/L start accumulating arsenic between day 5 and day 9. After 23 days of exposure, bioaccumulation of arsenic was about 27-fold in the group exposed to 0.01 mg/L, 11-fold in the group exposed to 0.1 mg/L, 44-fold in the group exposed to 1 mg/L, and only 5-fold in the group exposed to 10 mg/L, when compared to the arsenic concentration present in the medium. Bioaccumulation of arsenic was linear along time of exposure except for the highest value of 10 mg/L, suggesting that this concentration could lead to saturation of transport systems. Arsenic would use the ABC transporter excretion system according to our ex vivo studies on the activity of the multidrug resistance proteins, MRP, which transport compounds conjugated with GSH. Furthermore, an increase in the concentrations of iron, zinc and copper in larvae exposed to arsenic was observed, suggesting that arsenic could be modulating the retention or accumulation of these elements in the exposed larvae. We conclude that R. arenarum embryos are more sensitive to arsenic during early stages of development, probably because the development of detoxification mechanisms linked to GSH are necessary and that high concentrations of this toxic element are required to cause mortality when the exposure is performed until the end of the embryonic development. Arsenic can alter the oxidative status in R. arenarum embryos and larvae, affecting the cellular redox state at sublethal concentrations in both sub-chronic and chronic exposures, modulating the antioxidant response via the MAPK pathway, by means of MEK and ERK, and through the action of very early transcription factors, c-FOS and c-JUN. Arsenic at concentrations up to the order of mg/L would continuously be bioaccumulated from the medium, probably due to its enzymatic conversion to organoarsenical compounds, including its conjugation with GSH for excretion via MRP. Furthermore, due to the alteration of GR and GST enzymatic activities, and MEK, ERK, c-JUN and c-FOS levels at low arsenic concentrations, their response can be used as an early marker of exposure to this toxic.

Coll, Tamara Anahí. "Mecanismos vasoactivos, metaloproteásicos y oxidantes embrio-placentarios ante la ingesta periconcepcional de alcohol" (2015-04-29) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La formación placentaria normal influencia el desarrollo embrionario a término. Alteraciones en factores que regulan la interacción materno-fetal temprana, tales como la disrupción de los niveles de óxido nítrico (NO), las metaloproteasas (MMPs) y desbalances en el estado oxidativo, son causa de placentopatía y anomalías embrionarias tempranas. Con la hipótesis que la exposición materna a alcohol desde antes de la preñez (17 días previos a la preñez) y hasta la organogénesis (día 10 de gestación (D10) genera cambios en la expresión y actividad de MMPs y de moléculas de la matriz extracelular, afecta la regulación del sistema nitridérgico, incrementa las especies reactivas del oxígeno en la interfase trofoblásticodecidual y en el embrión, y conduce a anomalías de la placentación temprana y disrupción del desarrollo embrionario durante la organogénesis, se plantearon los siguientes objetivos, luego de la administración perigestacional de 10% de alcohol a hembras murinas: 1) determinar los efectos materno en variables biométricas y reproductivas; 2) en el embrión: a) analizar la morfogénesis embrionaria, la calidad histológica y la adhesión celular, b) evaluar la expresión de moléculas de la MEC y MMPs, c) evaluar la expresión y actividad de las óxido nítrico sintasas (NOS), d) analizar los cambios en el sistema oxidativo y sus consecuencias en macromoléculas embrionarias. 3) En el tejido trofoblástico-decidual (T-D): a) analizar cambios histológicos y nucleares; b) evaluar la expresión de colágenos, proteoglicanos, ácido hialurónico y MMPs; c) analizar las alteraciones en el sistema nitridérgico; d) determinar el estado oxidativo y efectos lipídicos, proteicos y nucleares. La ingesta perigestacional de alcohol induce, al D10, pérdida de los sitios de implantación, aumento de las reabsorciones, retraso del desarrollo embrionario, disminución del crecimiento y anomalías morfológicas e histológicas embrionarias por disrupción de la expresión de cadherinas y de MMPs, colágenos y proteoglicanos, efectos posiblemente relacionados con alteraciones del sistema nitridérgico, aumento de estrés oxidativo y efectos nitrosativos y apoptóticos. El tejido trofoblástico y decidual de las hembras tratadas presentó cambios en la morfología nuclear, alteraciones del lecho vascular, disminución de los colágenos fibrilares en la MEC y alteraciones en la expresión y actividad de MMP-2. El sistema nitridérgico también fue afectado por la exposición a alcohol, evidenciado por alta concentración de nitritos, aumento de estrés oxidativo y lipoperoxidación. En conclusión, el daño histomorfológico embrio-placentario temprano por exposición perigestacional a alcohol, vinculado a alteraciones en las moléculas de la MEC, podrían ser producto, al menos en parte, de desbalances en la producción de agentes moduladores como las especies reactivas de oxígeno y el óxido nítrico en la interfase materno-embrionaria temprana.

Abstract:
Normal placental formation influences embryonic development to term. Changes in early regulating factors of maternal-fetal interaction, such as the disruption of nitric oxide levels, of metalloproteases (MMPs) and imbalances in oxidative status, cause placentophaties and early embryonic abnormalities. With the hypothesis that maternal exposure to alcohol before pregnancy (17 days prior to pregnancy) and through organogenesis (up to day 10 of gestation) causes changes in the expression and activity of MMPs and extracellular matrix (ECM) molecules, affect the regulation of the nitric oxide system, increases the reactive oxygen species in the trophoblast - decidual interface and in the embryo, leading to abnormal placentation and early disruption of embryonic development during organogenesis, it was planed the following objectives after the perigestationally administration of 10% alcohol to murine females: 1) to determine the maternal and reproductive effects in biometric variables, 2) in the embryo: a) to analyze the embryonic morphogenesis, the histological quality and cell adhesion, b) to evaluate the expression of ECM molecules and MMPs, c) to evaluate the expression and activity of nitric oxide synthases, d) to analyze changes in the oxidative system and its consequences on embryonic macromolecules. 3) In the trophoblastic - decidual tissue: a) to analyze histological and nuclear changes, b) to evaluate the expression of collagens, proteoglycans, hyaluronic acid and MMPs, c) to analyze the changes in the nitric oxide system, d) to determine the oxidative status and lipid, protein and nuclear effects. The perigestational alcohol intake induces, at D10, loss of the implantation sites, increased resorption, embryonic development retardation, decreased growth and morphological and histological embryonic abnormalities by disrupting cadherin expression and MMPs, collagen and proteoglycan defects possibly related to alterations of nitric oxide system, increased oxidative, nitrosative stress and apoptosis. The trophoblast and decidual tissue from treated females showed changes in nuclear morphology, abnormal vascular bed, fibrillar collagens decrease and altered expression and activity of MMP-2. The nitridergic system was also affected by exposure to alcohol, by showing high concentrations of nitrite, increased oxidative stress and lipid peroxidation. In conclusion, the histomorphological placental and embryo damage after perigestational early exposure to alcohol was linked to alterations in the ECM molecules, and could be due to, at least in part, imbalances in the modulating agents such as reactive oxygen species and nitric oxide in the early maternal-embryonic interface.

Petracca, Yanina Luján. "Neuronas espinales que contactan el canal central: identificación de neurogénesis tardía en la médula espinal embrionaria" (2015-07-17) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Uno de los problemas fundamentales en la neurobiología del desarrollo es cómo el neuroepitelio embrionario da lugar a la llamativa diversidad celular. Mi tesis de doctorado tiene por objetivo identificar la contribución de eventos neurogénicos embrionarios tardíos a la diversidad neuronal. Descubrimos que el canal central de la médula espinal del ratón contiene células que se originan en estadios embrionarios avanzados y determinamos su identidad como las Neuronas que contactan el líquido cerebroespinal (CSF-cNs). Las CSF-cNs expresan los factores de transcripción Gata2/3, y no pertenecen a las poblaciones neuronales embrionarias previamente descriptas. Se distinguen por la expresión del canal iónico PKD2L1 y tienen propiedades activas de membrana, aunque inmaduras. Las CSF-cNs comienzan su diferenciación en estadio E14 en el ratón, momento en el cual en la médula espinal predomina la producción de oligodendrocitos y astrocitos. Mediante un análisis de marcadores moleculares, encontramos que la mayoría de las CSF-cNs derivan de progenitores ventrales “p2”, especificación controlada por mecanismos genéticos distintos de aquellos que gobiernan la neurogénesis temprana en este dominio. Identificamos asimismo, un segundo grupo de progenitores de CSF-cNs que se origina y ubica en el polo ventral del neuroepitelio espinal. El estudio de este grupo demostró que existen al menos dos sub-poblaciones de CSF-cNs que se diferencian en su ontogenia, propiedades electrofisiológicas y ubicación. En resumen, mi tesis demuestra que en el cordón espinal existe neurogénesis concomitantemente con la gliogénesis, se determinó la identidad de las neuronas producidas y algunos reguladores diferenciales de su especificación. Palabras claves: Desarrollo, Neurogénesis, Tubo Neural, Médula Espinal, Canal Central.

Abstract:
One of most important questions in developmental neurobiology is how the embryonic progenitors of the neural tube give rise to the wide variety of specialized cells that make up the central nervous system. The general aim of my Ph.D. thesis is to analyze the contribution of late-embryonic neurogenic events to neuronal diversity. We found late-born cells surrounding the central canal of the mouse spinal cord and we identified them as Cerebrospinal Fluid-contacting Neurons (CSF-cNs). The CSF-cNs express the transcription factors Gata2/3 and are a novel population of cells, which do not belong to previously characterized embryonic neuronal classes. They selectively express the ionic channel PKD2L1 and display active membrane properties although, with immature characteristics. In the mice, the differentiation of CSF‐cNs begins at stage E14 when oligo/astrogliogenesis is predominant. Our molecular analyses revealed that most CSF-cNs originate from ventral "p2" progenitors and that their specification is controlled by genetic mechanisms different from those involved in early neurogenesis from the same domain. In addition, we identified a second pool of CSF-cNs progenitors on the ventral pole of the spinal neuroepithelium. The analysis of this group demonstrates the existence of at least two subpopulations that are distinct in their ontogeny, electrophysiological properties and location. In summary, this work found that neurogenesis in the spinal cord during the gliogenic period give rise to CSFcNs and also identified key regulators of their specification. Key Words: Development, Neurogenesis, Neural Tube, Spinal Cord, Central Canal

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