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Zanella Béguelin, Juan Francisco. "Grupo de renormalización fuera del equilibrio" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis aplicamos las técnicas del grupo de renormalización para tratar teorías de campos fuera del equilibrio. Dos elementos se combinan en este trabajo: i) la formulación wilsoniana del grupo de renormalización, es decir, la eliminación recursiva de grados de libertad en cierto intervalo de escalas; y ii) el análisis de sistemas cuánticos abiertos mediante las técnicas del funcional de influencia y de las integrales de camino temporal cerrado. El sistema que analizamos es el de un campo escalar con un corte ultravioleta en el impulso. Usamos para describirlo una funcional generadora de camino temporal cerrado, adecuada para calcular la evolución causal y real de los valores de expectación. Integrando explícitamente sobre los modos con impulsos que se encuentran en una capa infinitesimal alrededor del corte, obtenemos una descripción efectiva para el resto de los modos. Iterando el procedimiento, deducimos las ecuaciones de grupo de renormalización, cuyo flujo genera de manera natural términos de ruido y disipación. Este método es usado para estudiar un campo con interacciones de tipo λΦ4 , y los resultados son aplicados a un modelo para calcular el espectro del campo del inflatón en el universo temprano. Mostramos también que las mismas ideas, desarrolladas en principio para una teoría cuántica de campos, pueden emplearse para tratar ecuaciones diferenciales estocásticas. El método es ilustrado deduciendo varios resultados conocidos acerca de la ecuación de Kardar−Parisi−Zhang.

Abstract:
In this thesis we investigate the renormalization group approach to nonequilibrium field theory. To this end, we combine the Wilsonian momentum-space renormalization group (where an effective theory for the long wavelength modes is obtained through the coarse graining of shorter wavelengths) with the closed-time path and influence functional techniques used to describe open quantum systems. The system we deal with in this thesis is a scalar field with a sharp ultraviolet cutoff. Infinitesimal momentum shells are coarse-grained one at a time on a generating functional suitable to cope with systems out of equilibrium. By iterating this operation, we obtain a set of renormalization group equations, which intrinsically generate noise and dissipation. We use these methods to study a scalar field theory with λΦ4 -type interaction terms. In its turn, the results thus obtained are applied to compute the power spectrum of an interacting field in a toy model of inflation. Finally, we show that essentially the same ideas, derived in the context of quantum field theory, can be used to define a convenient nonequilibrium action for stochastic differential equations. We illustrate this point by deducing a number of results related with the Kardar−Parisi−Zhang equation.

Yokobori, Noemí. "Evaluación de la respuesta inmune frente a cepas locales de Mycobacterium tuberculosis multirresistentes a drogas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La tuberculosis multirresistente a drogas (MDR-TB) representa un gran desafío sanitario. En el presente trabajo evaluamos en monocitos (Mo) y macrófagos (MΦ), las estrategias de evasión de la respuesta inmune de dos aislados clínicos MDR de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) relacionados genéticamente: la cepa M causante de un extenso brote y la cepa 410 de baja virulencia. Nuestros resultados muestran que: 1) la inducción de citoquinas (CK) y respuesta linfoproliferativa Mtb-específica dependen tanto del status inmunológico del huésped como del genotipo de Mtb, 2) estas diferencias podrían deberse en parte al aumento en el subset de Mo-CD16+ en sangre periférica, 3) la cepa M es pobre inductora de TNF-α tanto en Mo como en MΦ, 4) ambas cepas MDR indujeron una cinética retardada de expresión de IL-1β en Mo, 5) algunos mecanismos de evasión, como la down-regulación del receptor de IFN-γ serían comunes a las cepas estudiadas, 6) la replicación intracelular de la cepa M fue lenta, mientras que 410 se multiplicó rápidamente dentro del MΦ, 7) la infección del MΦ con la cepa 410 induce tempranamente una fuerte secreción de TNF-α e IL-10, 8) la cepa M es capaz de interferir con señales proapoptóticas de la vía intrínseca y probablemente de la vía extrínseca, 9) la cepa 410 indujo predominantemente muerte por necrosis. En base a estos resultados, y a diferencia de lo reportado para otros genotipos virulentos de Mtb, proponemos que el éxito de M se debería a su capacidad de mantenerse en un estado de quiescencia, preservando su nicho y minimizando la respuesta inflamatoria en las etapas tempranas de la infección.

Abstract:
Multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) is a major challenge to public health. We tested in monocytes (Mo) and macrophages (MΦ), the immune evasion strategies of two MDR clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis (Mtb) genetically related: strain M, responsible for a large outbreak and the low virulence strain 410. Our results show that: 1) induction of cytokines (CK) and Mtb-specific T-cell proliferation are dependent on both the host's immune status and the genotype of Mtb, 2) these differences could be, in part, due to the increase in CD16+Mo-subset in peripheral blood, 3) strain M is poor inducer of TNF-α in both Mo and MΦ, 4) both MDR strains induced a delayed kinetics of IL-1β expression in Mo, 5) some immune evasion mechanisms such as the down-regulation IFN-γ receptor would be common to the strains tested, 6) intracellular replication of strain M was slow, while 410 multiplied rapidly within the MΦ, 7) infection of MΦ with strain 410 induces an early and strong secretion of TNF-α and IL-10, 8) strain M is capable of interfering with proapoptotic signaling of the intrinsic and, probably, also the extrinsic pathways, 9) 410-induced cell death was predominantly by necrosis. Our results suggest that, in contrast with previous reports with other virulent genotypes Mtb, the success of M is due to its ability to stay in a state of quiescence, preserving its niche and minimizing the inflammatory response in the early stages of infection.

Yánez Heras, Jorge Eduardo. "Síntesis de copolímeros de anilina y sus derivados. Aplicaciones en análisis biológicos y medio ambientales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los polímeros conductores han sido ampliamente utilizados en diversas aplicaciones, entre ellas su uso como herramienta analítica en la fabricación de sensores. La polianilina es uno de los polímeros conductores más utilizados, ya que presenta ventajas como su fácil y económica síntesis, adecuada estabilidad y propiedades fisicoquímicas bien definidas. En base a estas propiedades se han logrado desarrollar sensores de polianilina capaces de detectar bajas concentraciones de distintas moléculas (NADH, H2O2, glucosa, entre otras). Por otro lado, estos sensores también presentan ciertas limitaciones como la dificultad de derivatizar la polianilina para diseñar sistemas integrados en los que todos los reactivos necesarios estén unidos covalentemente a la superficie del electrodo. Otra limitación muy importante de la polianilina es el hecho de que ésta necesita de un pH ácido para experimentar cambios en su estado de oxidación, con los consiguientes cambios en conductividad y en velocidad de los procesos de transferencia electrónica (electroactividad). Esto limita el uso de sensores en base a polianilina a trabajar a pH menores que 5. Este trabajo de investigación apunta a resolver los problemas inherentes a la química de la polianilina, y de esta manera desarrollar sensores que puedan superar las limitaciones de este material, pero que a su vez aproveche las ventajas del mismo. De acuerdo con esto se logró obtener una metodología de trabajo que permitió desarrollar recubrimientos basados en polianilina que presentan electroactividad a pH 7. Esta meta fue lograda combinando la polimerización de anilina con derivados de la misma, los cuales presentan distintos grupos funcionales en su estructura. La electroactividad a pH neutro y la existencia de diversos grupos funcionales en la película generada permitió extender la aplicación analítica de estos electrodos modificados, ya que además de cubrir un gran intervalo de pH, se puede realizar una fácil modificación, incorporando diversas moléculas para el reconocimiento de analitos específicos. Gracias a las ventajas que presentan estas nuevas superficies, se logró desarrollar sensores capaces de detectar una amplia gama de sustancias: ácido ascórbico y dopamina a pH de interés biológico, trazas de distintos iones metálicos en distinto tipo de matrices acuosas; y sustancias de interés clínico-sanitario como los productos provenientes de la lisis bacteriana: LPS, ADN, BSA y fosfolípidos.

Abstract:
Conducting polymers have been widely used in several applications, among them its use as an analytical tool in sensor construction. Polyaniline is one of the most used conducting polymers, since it presents several advantages as: its easy and economical synthesis, adequate stability and well defined physicochemical properties. On this basis, it was possible to develop polyaniline sensors capable of detecting low concentrations of different molecules (NADH, H2O2, glucose, among others). On the other hand, these sensors present certain limitations, as the difficulty of polyaniline derivatization to design integrated systems in which all necessary reagents are covalently bound to the electrode surface. Another very important limitation is the fact that it needs an acid pH to change its oxidation state, with the subsequently conductivity and electron transfer process rates changes (electroactivity). This constrains the use of polyaniline-based sensors to work at pH values below 5. This research work aims to solve the inherent problems regarding polyaniline chemistry, and afterwards to develop sensors that overcome this material’s limitations, but keeping its advantages. According to this, it has been possible to obtain a methodology which allowed developing polyaniline-based films that present electroactivity at pH 7. This goal was achieved by combining the electropolymerization of aniline with some of its derivatives. These products present different functional groups on their structure. The electroactivity at neutral pH and the presence of different functional groups on the generated film allow extending the analytical application of these surfaces, since, besides of covering a wide pH range, an easy modification can be carried out, incorporating recognition molecules in order to detect specific analytes. Thanks to the advantages presented by these new surfaces, it has been possible to develop sensors capable of detecting a wide spectra of substances: ascorbic acid and dopamine at pH of biological relevance, traces of different metal ions in a varied type of aqueous matrix, and substances with clinical-sanitary interest such as products of bacterial lysis: LPS, ADN, BSA and phospholipids.

Werenkraut, Victoria. "Patrones altitudinales en la diversidad de coleópteros y hormigas epígeos del noroeste de la Patagonia argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió la influencia de factores metodológicos y biológicos sobre los patrones altitudinales en la diversidad de artrópodos, con énfasis en coleópteros y hormigas. A escala global, un meta-análisis de 109 gradientes publicados mostró que el patrón altitudinal en la riqueza de especies de artrópodos tiene múltiples formas, aunque la percepción del patrón puede estar influida por el método empleado para identificar la forma y la calidad de los datos. A escala local, un estudio de campo realizado en cinco montañas, en el noroeste de la Patagonia argentina, mostró cambios altitudinales en la composición de ensambles de especies de coleópteros y hormigas asociados a distintas variables ambientales y una subdivisión fina de los ambientes. Los patrones altitudinales en la riqueza de especies y abundancia de individuos difirieron sustancialmente entre coleópteros y hormigas. Se confirmó la alta diversidad de coleópteros, y la baja diversidad de hormigas. Ambos taxa mostraron la dominancia de pocas especies muy abundantes y muchas especies raras. Distintos factores ambientales explicaron variaciones locales en la diversidad en distintos ambientes del gradiente altitudinal, y afectaron de manera diferencial a coleópteros y hormigas.

Abstract:
This study analysed the influence of methodological and biological factors on the altitudinal diversity patterns in arthropods, with emphasis in beetles and ants. At global scale, a meta-analysis of 109 published gradients showed that the altitudinal pattern in arthropod richness has multiple forms, although the perception of the pattern can be influenced by the method used to identify the form and the quality of basic data. At local scale, a field-study developed in five mountains, in north-western Patagonia, Argentina, showed altitudinal changes in the composition of beetle’s and ant’s species assemblages, associated with different environmental variables, and a fine subdivision of environments. The altitudinal patterns in the species richness and abundance of individuals differed substantially between beetles and ants. The high diversity of beetles and the low diversity of ants were confirmed. Both taxa showed the dominance of a few, very abundant species, and a lot of rare species. Different environmental factors accounted for local variations in diversity in different environments along the altitudinal gradient, and differentially affected beetles and ants.

Wargon, Victoria. "Resistencia constitutiva y adquirida al tratamiento hormonal de carcinomas mamarios murinos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los mecanismos por los cuales los estrógenos y los progestágenos, a través de sus respectivos receptores (RE y RP), participan en el desarrollo y crecimiento del cáncer de mama es un tema de gran interés ya que su detección se utiliza como factor pronóstico y orienta la terapéutica hacia una de tipo hormonal. En nuestro laboratorio se ha desarrollado un modelo experimental de adenocarcinomas mamarios murinos inducidos por acetato de medroxiprogesterona (MPA) en ratones hembras vírgenes de la cepa BALB/c. Se establecieron líneas tumorales hormono-dependientes (HD) y hormono-independientes (HI) que expresan RE, alfa (REα) y beta (REβ), y las dos isoformas del RP (RPA y RPB). Los tumores HI se clasifican en respondedores (sensibles) y resistentes a la terapia con antiprogestágenos. Hemos generado a su vez por presión selectiva variantes tumorales con resistencia adquirida a los mismos. Utilizando tres familias tumorales de este modelo, demostramos que los tumores sensibles expresan mayor nivel de RPA que de RPB, mientras que lo opuesto se observa en los resistentes. Esta diferencia sería un posible marcador para discriminar un tumor sensible de uno resistente. Pudimos determinar que la resistencia adquirida puede revertir ya sea por tratamiento hormonal, o por cultivo y en todos los casos esta reversión se ve acompañada de la reexpresión de RPA. Demostramos que el silenciamiento de RPA en los tumores con resistencia adquirida se debe a metilación del promotor de PRA y que el tratamiento con el agente desmetilante 5azadC desensibiliza los tumores al antiprogestágeno. No hemos podido hasta el momento dilucidar cuál es el mecanismo que silencia la expresión de RPA en los tumores con resistencia adquirida, sin embargo la plasticidad que observamos en la expresión de esta isoforma nos hace pensar que se trataría de algún otro mecanismo epigenético. La fuerte correlación que hemos observado a lo largo de este trabajo de investigación entre la expresión de RPA y la sensibilidad a los antiprogestágenos sugieren que la terapia con antiprogestágenos debería ser considerada como posible tratamiento para tumores de mama con alta expresión de RPA.

Abstract:
The mechanisms by which estrogens and progestins activate estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) respectively are still a main and controversial area in breast cancer research. The detection of these receptors is used as a prognostic factor and patients with high levels of ER and PR will be treated with a hormone therapy aimed to block estrogen synthesis or to inhibit ER activation. There is however compelling evidence that points out that PR is also involved in the development and progression of breast carcinomas. In our Laboratory we have developed an experimental model of mammary carcinomas induced by the continuous administration of medroxyprogesterone acetate (MPA) into BALB/c female mice. MPA-dependent tumors (HD) are maintained by syngeneic transplantations in MPA-treated mice. Spontaneously, tumors which are able to grow without exogenous hormone supply may arise, and these are referred to as hormone independent tumors (HI). Both tumor types express ER alpha (ERα) and beta (ERβ), and both isoforms of PR (PRA and PRB). HI tumors are classified as antiprogestin responsive or antiprogestins resistant tumors. We have already demonstrated that PR play a key role mediating tumor growth in both tumor types since antisense oligonucleotides of PR and different antiprogestins inhibit their growth. In this study we analyzed 3 responsive, 3 acquired resistant and 2 constitutive resistant tumors from three different tumor families from the MPA breast cancer model. We demonstrated that the difference between these responsive and resistant tumors relies in the PRA/PRB ratio, being PRA higher than PRB in responsive tumors. Interestingly the acquired resistant phenotype was possible to be reverted and this reversion was significantly associated with an increase in PRA expression. We demonstrated that only in the constitutive-resistant tumors, PRA expression was silenced by DNA methylation. This prompted us to investigate whether the treatment of constitutive resistant tumors with a demethylating agent could restore PRA expression and antiprogestins responsiveness. We found that 5-aza- 2 ́-deoxycytidine treatment induced PRA expression and RU-486 responsiveness in vitro and in vivo experiments. Furthermore, high levels of DNA methyltransferase (Dnmts) were detected in these tumors. In conclusion, our results suggest that methyltransferase inhibitors in combination with antiprogestins may be effective in the treatment of constitutive-resistant carcinomas with a high DNA methyltransferase level. The correlation between PRA expression and antiprogestins responsiveness supports the hypothesis that antiprogestin should be used for the treatment of breast cancer patients showing high expression of PRA.

Wagner, Federico. "Producción de hadrones y jets en colisiones de hadrones polarizados" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo se aborda el estudio de la sección eficaz de producción de hadrones y jets en colisionadores hadrónicos. Los cálculos disponibles para estos observables corresponden a cómputos a orden fijo en teoría de perturbaciones y resultan ser, en muchos casos, poco satisfactorios. Con el objeto de obtener predicciones más precisas, se aplican las técnicas de resumación umbral a fin de incluir el aporte de la radiación de gluones soft o colineales al cálculo de orden fijo. En esta tesis consideraremos a los hadrones colisionantes con todos los posibles estados de polarización: no polarizados, polarizados longitudinalmente y, por último, polarizados transversalmente. El incluir el estado de polarización nos permitirá estudiar la estructura de spin de dichos hadrones. Existe actualmente una gran actividad experimental en busca de develar la estructura de spin que presentan los nucleones. En particular, la determinación de la distribución dependiente de spin de los gluones, ∆g, dentro del nucleón es uno de los desafíos mas importantes en el ́área. El colisionador relativista de iones pesados (RHIC), el primer colisionador de protones polarizados, presenta grandes posibilidades de determinar ∆g(x, Q^2 ) sobre un amplio rango de fracciones de momento x y escala Q. Las asimetrías de spin en colisiones pp a altas energía son particularmente sensibles a ∆g, y por lo tanto al contenido gluónico del spin del protón. Los procesos más relevantes para ese propósito son la producción de un hadrón con alto momento transverso pp → hX y la producción de jet pp → jetX. En esta tesis obtenemos las predicciones más precisas posibles para ambos procesos. Presentamos, además, resultados fenomenológicos teniendo en cuenta tanto las facilidades experimentales actuales (RHIC) como las que se espera contar en un futuro cercano (GSI-FAIR y J-PARC).

Abstract:
In this thesis we study the jet and hadron production cross sections in hadronic colliders. These observables are usually computed to fixed order in perturbation theory, approximation that turns out to be not very accurate in some kinematical regimes. In order to obtain more precise predictions, we apply the soft-gluon-treshold- resummation techniques. We consider the colliding hadrons with different states of polarization: unpolarized, longitudinally polarized and transverselly polarized. Through polarization we are able to study the spin structure of these hadrons. There is currently much experimental activity aiming at further unraveling the nucleon’s spin structure. One emphasis is on the determination of the spin-dependent gluon distribution, ∆g, of the nucleon, which ultimately would give the gluon spin contribution to the nucleon spin. Particularly good prospects for determining ∆g(x, Q^2 ) over a wide range of momentum fractions x and scales Q are offered at the Relativistic Heavy-Ion Collider (RHIC), which is the first polarized proton-proton collider. Spin asymmetries in high-energy pp scattering can be particularly sensitive to ∆g. The single-inclusive production of large transverse- momentum (pT ) hadrons, pp → hX and the single-inclusive jet production pp → jetX are good examples of that. We study in this thesis these processes and compute their spin asimetries with the most accurate prediction at present. We present our phenomenological results relevant for planned experiments at the GSI-FAIR, RHIC-PHENIX and J-PARC facilities.

Vigh, Carlos Donato. "Modelado numérico de flujos astrofísicos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los flujos astrofísicos juegan un rol esencial en muchos de los fenómenos observados en el Universo. Para una comprensión detallada de estos fenómenos, es necesario combinar adecuadamente los enfoques observacional y teórico. En este contexto, el modelado numérico aparece como una herramienta muy poderosa y complementaria entre las dos primeras. En esta tesis, se estudió la dinámica asociada a la explosión de supernovas y de sus remanentes. En particular, se llevó a cabo un estudio de la dinámica de remanentes de supernova jóvenes desde un punto de vista hidrodinámico. Más específicamente, se analizaron posibles causas de asimetría en estas explosiones y en las primeras fases de evolución de sus remanentes. En condiciones ideales, se espera que la evolución inicial de un remanente de supernova sea un proceso esféricamente simétrico. Sin embargo, muchos remanentes jóvenes muestran diversas asimetrías que no pueden ser explicadas por ejemplo, en términos de inhomogeneidades del medio interestelar. En este contexto, se propuso investigar posibles causas alternativas de ruptura de la isotropía las cuales han sido divididas para su mejor estudio en causas cinemáticas y dinámicas. En el estudio general de causas de asimetría en remanentes jóvenes se consideraron la presencia de obstáculos, gradientes de densidad en el medio interestelar y el movimiento propio de las estrellas progenitoras. Se tomaron como casos testigos los llamados remanentes históricoso de Kepler y Tycho. En el caso particular del remanente de Kepler, se encontró que la causa principal de asimetría se debió al movimiento propio que el progenitor poseé respecto al medio circundante. Se supuso que la progenitora se trataba de una estrella evolucionada, con un viento denso y lento. Debido al alto movimiento propio de la progenitora, la burbuja generada por la acción de este viento adquiere la forma de un choque a proa. Cuando la estrella explota como supernova, su remanente evoluciona en este medio perturbado, el que tiene una fuerte asimetría en su distribución de densidad. De acuerdo a los resultados obtenidos, la colisión entre el choque principal del remanente y la estructura cometaria producida por el viento de la progenitora, puede explicar las características morfológicas y distribución de brillo que este objeto exhibe en imágenes en radio y rayos X. En el caso particular del remanente de Tycho, se encontró que la causa principal de asimetría se debió a que en el momento de la explosión incorporó material de las capas externas de la atmósfera de su estrella compañera. Este exceso de masa, que está en el rango de 0.3 y 0.6 masas solares ocasiona una evolución más lenta que la región donde no la incorporó ́dando así lugar a un frente de choque que puede describirse aproximadamente como dos semi-esferas de distinto radio. Dentro del margen de error y suponiendo una distancia de 3 kpc, se observa un buen grado de coincidencia morfológica. Además, los mapas sintéticos en rayos X son cualitativamente similares a lo observado por distintos instrumentos. Estos resultados son tendientes a un escenario de una supernova tipo Ia, aportando evidencia sobre el origen de Tycho y de su posible compañera.

Abstract:
Astrophysical flows play an esential role in many observed phenomena in the Universe. For a detailed understanding of these phenomena, it is important to combine observational and theoretical viewpoints. In this context, the numerical modelling is a powerful tool which complements the aforementioned points of view. In the present thesis, we study the dynamic evolution associated to supernova explosions and their corresponding supernova remnants. In particular, we carried out a dynamical study of young supernova remnants within the framework of hydrodynamics. More specifically, we analyzed possible source of asymmetry in these explosions and during the first stages of evolution of their remnants. Under ideal conditions, the initial stages of a supernova remnant are expected to be spherically symmetric. However, many of the observed young supernova remnants show different types of asymmetries which cannot be explained in terms of inhomogeneities of the interstellar medium. In this context, we decided to address the study of possible causes of departure from isotropy which, to organize our analysis, we separated into kinematic and dynamic causes. For a general overview of causes of asymmetry in young supernova remnants, we considered the presence of obstacles, density gradients in the interstellar medium and the proper motions of the progenitor starts. For the particular case of Kepler’s supernova remnant, we found that the main cause of asymmetry is the proper motion of the progenitor star with respect of the surrounding interstellar medium. We assumed the progenitor to be an evolved star with a dense and slow stellar wind. Because of the fast proper motion of the progenitor, the expanding bubble generated by this wind adopts the form of a bow shock. When the star explodes as a supernova, its remnant evolves in this highly perturbed environment, with a strong asymmetry in its density distribution. According to the results obtained in our numerical simulations, the impact of the main shock on the pre-existing cometary structure gene- rated by the stellar wind, can explain the overall morphology as well as the emissivity observed in radio and X-ray images. For the particular case of Tycho’s supernova remnant, we found that the main cause of asymmetry is due to the interaction between the explosion and the atmosphere of a companion star. The outer layers of the companion are swept by the expanding shock, thus producing an excess of mass on one of its sides and breaking the isotropy. Mass excesses within 0.3 and 0.6 solar masses can cause a slower expansion in the heavier side, giving rise to an expanding shock that can be approximately described by two semi-spheres with different radii. Assuming a distance of 3 kpc, our simulations show a good morphological resemblance with the observed images. Moreover, our synthetic X-ray maps are qualitatively similar to those observed with different instruments. Our results support the scenario of a type Ia supernova, and providing valuable evidence on the origin of Tycho and its possible companion.

Viale, Maximiliano. "Características de las precipitaciones orográficas de invierno sobre los Andes Subtropicales Centrales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las precipitaciones sobre las montañas son en gran parte originadas o incrementadas cuando el flujo horizontal de aire húmedo es forzado a ascender por la topografía. Esta situación se produce mayormente en el invierno sobre los Andes Centrales (30º -37ºS), cuando el flujo del oeste intenso de un ciclón extratropical llega hasta latitudes subtropicales. Debido a la escasa información disponible en la cordillera, las variaciones de la precipitación son documentadas en una escala transversal a la misma que no tiene en cuenta variaciones entre valles y picos. A partir de 7 años (1970-1976) de datos de precipitación de invierno (Abr-Sep) disponible, la máxima cantidad de precipitación se observó sobre zonas pendiente arriba de la cordillera antes de alcanzar la cresta, siendo aproximadamente el doble de la cantidad de precipitación observada en zonas bajas a barlovento. Inmediatamente a sotavento de los picos más altos, la cantidad de precita- ción cae drásticamente generando un notorio gradiente transversal a la cordillera, con precipitaciones largamente disminuidas en zonas bajas a sotavento. Esta disminución fue mayor en zonas bajas del norte de Mendoza (31.5º-34.5ºS) que del sur (35º -36.5ºS), probablemente debido a la mayor actividad baroclinica y un decaimiento de la altura de la cordillera hacia el sur, permitiendo que una mayor cantidad de precipitación logre atravesar la cordillera. El efecto de bloqueo de los Andes es tan marcado que altera los regimenes de precipitación de las zonas bajas aledañas, siendo de invierno a barlovento y de verano a sotavento al norte de 35º. Las series de precipitaciones diarias revelaron, además, que las tres cuartas partes de la precipitación acumulada en el invierno sobre la cordillera, representativa a su vez de la total anual, es producto de solo 4 o 5 eventos significativos en promedio durante el invierno. Las condiciones sinópticas típicas de los eventos significativos exhibieron un ciclón extratropical intenso sobre las costas sudamericanas del océano Pacifico, con un fuerte flujo concentrado de humedad paralelo al frente frío, el cual ha sido denominado “río atmosférico” en estudios previos en las costas norteamericanas del Pacifico. Dicho flujo de humedad dispuesto mayormente perpendicular a la cordillera impacta y descarga grandes cantidades de vapor de agua en forma de precipitación sobre los Andes Centrales. A barlovento de los Andes, una corriente en chorro paralela a la cordillera es frecuentemente observada en niveles bajos, consistentemente con el predominio de condiciones de estabilidad que favorecerían un bloqueo orográfico y un desvío del flujo hacia el polo; mientras que a sotavento de los Andes, un flujo descendente intenso usualmente alcanza la superficie produciendo tormentas de viento Zonda. Simulaciones numéricas con alta resolución (i.e., ≤ 15 km) confirmaron durante dos casos de estudio que el flujo del oeste es bloqueado y desviado hacia el polo en ni- veles bajos, originando una corriente en chorro paralela a la cordillera. Por otro lado, el flujo de humedad que logró atravesar el sector de los Andes más altos (33º-34ºS) des- cargó el 49% de su contenido de vapor de agua de la atmósfera en forma de precipita- ción a través de mecanismos de ascenso orográfico, mientras que el flujo que atravesó los Andes más bajos (35º - 36ºS) descargó el 25% de su contenido de vapor. Este resulta- do explicaría la mayor precipitación observada en el sur que en el norte de Mendoza, a sotavento de la cordillera. Las observaciones y simulaciones numéricas indican que rol de la topografía de los Andes Centrales es dominante sobre las precipitaciones de invierno en la cordillera misma y en las regiones bajas adyacentes. En las simulaciones sin topografía, la precipi- tación queda limitada exclusivamente al forzante sinóptico, y por lo tanto la cantidad de precipitación cae abruptamente al desaparecer el patrón de precipitación orográfico do- minante. Además, las simulaciones sin la cordillera de los Andes sugieren, por un lado, que las zonas bajas de Cuyo recibirían una mayor cantidad de precipitación y las condi- ciones atmosféricas serían más húmedas a la real durante el invierno. Y por otro lado, cantidades mucho menores de vapor de agua serían removidas de la atmósfera en forma de precipitación, sin la acción de mecanismos de ascensos orográficos adicionales al sinóptico, lo cual implicaría una disponibilidad de agua dulce bastante menor para las regiones de Chile y Cuyo en un escenario sin cordillera de los Andes.

Abstract:
The precipitations over the mountains are mostly originated or incremented when the moisture air flow is forced to rise by the high terrain. This situation typically occurs in winter over the Central Andes (30º-37ºS), when the strong cross-barrier flow from an extratropical cyclone reach subtropical latitudes. Due to the few precipitation gauges available, large-scale variation in cross-barrier precipitation is focuses on this thesis, not taking account the fine ridge-valley scale. The maximum amount of precipitation was observed on upslope of the mountain range before the crest, and was about twice larger than that observed on windward lowlands between 33º-34ºS. To immediately leeward of the crest, the precipitation amount sharply drops generating a strong cross-barrier gradient. The rain shadow effect is greater in the north (32º-34.5ºS) than in the south (35º-36.5ºS) of the lee side, probably due to more baroclinic activity to southernmost latitudes and a southward decrease in the height of the Andes enabling more spillover precipitation. The blocking effect of the Andes on winter precipitation is so marked, that it modifies the precipitation regimes in the low adjacent areas at windward and lee side north of 35ºS. The daily precipitation series also revealed that 4 or 5 cool-season heavy events account for almost the winter total precipitation, which is almost equal to the annual total. The heavy orographic precipitation events are strongly related to strong and concentrated water vapor transport from Pacific ocean in the pre-cold-frontal environment of extratropical cyclones, which has been named “atmospheric rivers” in previous studies on the western coast of North America. The strong cross-barrier moisture flux impinging on the high Andes leads to heavy orographic precipitation episodes. In addition, local air flow characteristics suggested that the low-level flow is typically blocked and diverted poleward in the form of an along-barrier jet. In the lee side, the downward flow dominate during heavy events producing a prominent rain shadow effects, as denoted the domain of downslope winds extending to low-laying areas. Simulation with high resolution models (i.e., ≤ 15 km) confirmed during two case studies that low-level cross-barrier moisture flow is blocked and diverted southward, in the form of a barrier-jet at low-levels. At same the time, the cross-barrier mois-ture flow that crossed the higher Andes between 33º-34ºS discharged 49% of their water vapor content by orographic lifting, while the cross-barrier flow that crossed the lower Andes between 35º-36ºS discharged 25% of their water vapor content. This result would explain the higher precipitation on low lands at southern (35º-36ºS) than northern (33º-34ºS) lee side. The observation and simulations indicate that the role of the Andes cordillera is dominant on the winter precipitation over the region. The simulation without topography produced much less precipitation as the orographic lifting disappears. The experiment with flat terrain suggests, on the one hand, the lowlands of the Cuyo region would receive higher winter precipitation amounts and the atmospheric environment would be wetter than current time. On the other hand, with no terrain forcing additional ascent to frontal lifting, significant less amount of water vapour content would be removed from the atmosphere as precipitation, which would imply a much less water availability for the region in a flat scenario.

Viale, Diego Luis. "Caracterización y desarrollo de promotores quimera que permitan la replicación viral específica en el entorno tumoral" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los tumores están compuestos de una masa heterogénea de células tumorales que incluyen células estromales asociadas que pueden convertirse en una barrera para la lograr una terapia exitosa contra la enfermedad. En los últimos años, los Adenovirus Replicativos Condicionales (CRAds) regulados por promotores recombinantes surgieron como una nueva modalidad de terapia para el cáncer. SPARC se encuentra expresada en forma muy elevada tanto en células tumorales como en endotelio y en los fibroblastos activados de tumores. A partir de estos datos, decidimos utilizar al promotor de SPARC para dirigir la replicación de los virus tanto en las células tumorales como en las células que forman parte del tumor. Logramos clonar un promotor que demostró mayor actividad en las células que expresan SPARC (F512) que se utilizó para dirigir la replicación de un CRAd (Ad-F512). Ad-F512 tiene efecto oncolítico en diferentes líneas celulares de melanoma y en ensayos in vivo se observó la eliminación de tumores SB2. Por el contrario, los tumores de melanoma A375N, Mel J y el tumor SB2/WI-38, que combina células de melanoma con fibroblastos, su efecto oncolítico es muy reducido. Para aumentar su eficacia adicionamos secuencias de ADN conteniendo elementos de respuesta a diferentes condiciones pato‐fisiológicas que caracterizan al tejido tumoral para aumentar la replicación. A partir de los resultados obtenidos, seleccionamos el promotor kBF512HRE conteniendo elementos de respuesta a hipoxia (HRE) y elementos de respuesta a NFkB (kB). Construimos el CRAd Ad-kBF512HRE que eliminó el tumor SB2/WI-38 en todos los ratones pero no se observa el mismo efecto sobre tumores Mel-Les y A375N. A partir de estos resultados se cambió la fibra adenoviral involucrada en el pegado al receptor celular y el virus resultante, Ad-5/3-kBF512HRE tiene efecto anti-tumoral sobre los tumores Mel-Les. Estos resultados indican que la adición de elementos de respuesta a condiciones que caracterizan al tejido tumoral y el cambio de la proteína involucrada en la unión al receptor celular aumentan el efecto terapéutico de un CRAd en las líneas celulares resistentes y, además, pueden sobrepasar la restricción en la replicación que implica la presencia de células estromales.

Abstract:
Human tumors are composed of a heterogeneous mass of malignant cells that also include tumor‐associated stromal cells that might become a barrier for successful therapies. In the last years, Conditionally Replicative Adenoviruses (CRAds) regulated by recombinant promoters appear as a new modality for cancer therapy. SPARC is over‐expressed in tumor cells and associated-endothelial and –fibroblast cells. Due to these results we utilized SPARC promoter for transcriptional regulation due to its overexpression on tumor melanoma cells and tumor associated stromal cells. We cloned a promoter that shows higher transcriptional activity in SPARC-expressing cells (F512) and we used to drive adenoviral replication (Ad-F512). This CRAd shows oncolytic activity in different melanoma cell lines and stromal cells and eliminated SB2 tumors in vivo, however, in A375N, Mel J and mixed tumor cell /fibroblast SB2/WI-38, its oncolytic effect was strongly reduced. In order to improve its efficacy we added DNA sequences containing responsive elements to different patho‐physiological conditions that characterize tumor tissue to increase its replication. Based on their activity/ specificity ratio we selected kBF512HRE, containing Hypoxia Response Elements (HRE) and NFkB response elements (kB). We constructed Ad-kBF512HRE and eliminated SB2/WI-38 tumor in all mice, on the other side, this effect was not observed on A375N and Mel-Les tumors. After this, we changed the adenoviral fiber, protein responsible of cellular receptor attachment. Ad-5/3-kBF512HRE eliminates 2/4 tumors of AdkBF512HRE-resistant Mel-Les tumors. These results indicate that addition of enhancer elements responsive to tumor-environmental conditions and fiber change improved the therapeutic effect of a CRAd over resistant cells and might overcome the restriction imposed by the presence of stromal cells.

Vercelli, Claudia Alejandra. "Participación de la anandamida en la reabsorción embrionaria murina inducida por lipopolisacárido" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La anandamida (AEA), el endocannabinoide más abundante en el tracto reproductivo, es un importante mediador de los procesos de implantación y desarrollo embrionario pero niveles elevados de esta molécula en el útero son perjudiciales. A su vez, el óxido nítrico (NO) y las prostaglandinas (PGs) están involucrados en la reabsorción embrionaria (RE) inducida por lipopolisacárido (LPS). En varios trabajos se ha descripto que el LPS modula la producción de AEA y que ésta interacciona con el NO y las PGs. Por ello, estudiamos si este endocannabinoide estaba implicado en la RE inducida por LPS en el útero y la decidua de ratón durante la preñez temprana, evaluando su participación en un modelo in vitro. Observamos que tanto en el útero como en la decidua, el LPS tiene importantes efectos sobre el sistema endocannabinoide (SEC) modulando la síntesis y la degradación de AEA y la expresión de los receptores de estos compuestos (receptores de cannabinoides, CB). Demostramos también que la AEA induce su propio catabolismo en la decidua. Por otro lado, encontramos que la AEA media el efecto estimulatorio del LPS sobre la síntesis de NO y la expresión de la NO sintasa inducible (NOSi), a través de sus receptores específicos. También hallamos que la AEA participa en la modulación que ejerce el LPS sobre el camino biosintético de las PGs, hecho que puede contribuir a la contracción miometrial que favorece la expulsión de los fetos en un proceso de sepsis. Se estudiaron distintas enzimas del camino biosintético y del metabolismo de las PGs, y se observó que la AEA aumenta la expresión de la Ciclooxigenasa-2 (COX-2) mientras que inhibe la de la PGE sintasa microsomal 1 (PGESm-1) e incrementa la síntesis del metabolito de PGE2 (PGEM). Por otro lado, el efecto deletéreo de la endotoxina sobre los tejidos estudiados pudo ser bloqueado en parte cuando se co-incuba con antagonistas de los receptores de cannabinoides, sugiriendo que estos compuestos son parte del mecanismo de acción del LPS.

Abstract:
Mouse uterus contains the highest levels of anandamida (AEA), one of the major endocannabinoids studied so far, suggesting an important role for this substance in reproduction. AEA levels fluctuate with the state of pregnancy: down-regulation is associated with uterine receptivity, while up-regulation has been shown to impair pregnancy and embryo development in mice. In addition, nitric oxide (NO) and prostaglandins (PGs) are involved in lipopolysaccharide (LPS)-induced embryonic resorption. Numerous studies have examined the relationship between LPS and AEA and the interaction of this endocannabinoid with NO and PGs. In this sense, we studied whether AEA is involved in LPS- induced embryonic resorption in murine uterus and decidua during early pregnancy, evaluating its participation in an in vitro model. We found that LPS had a profound effect on the endocannabinoid system (ECS) modulating AEA synthesis and its degradation, and affected the expression of cannabinoid receptors (CB) both in the uterus and in the decidua. We also observed that AEA induced its own catabolism in the decidua. On the other hand, AEA mediated LPS-induced NO production and increased the expression of the inducible form of the Nitric Oxide Synthase (iNOS), through cannabinoid receptors (CB). In addition, AEA mediated LPS-induced PG production and this fact may contribute to myometrial contraction which, in turn, favors the expulsion of the fetus during sepsis. We studied several enzymes that participate in PG synthesis and metabolism and we found that AEA increased Ciclooxygenase-2 (COX-2) expression, down-regulated microsomal PGE synthase 1 (mPGES-1) levels and augmented PGE2 metabolite (PGEM) synthesis. We also showed that LPS induced tissue damage and this effect is abrogated, in part, when tissues are co-incubated with CB antagonists, suggesting that AEA is involved in the deleterious effect of LPS.

Vera, Ezequiel Ignacio. "Estudios anatómicos en paleofloras del aptiano de Antártida y Patagonia y su comparación" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo principal de la presente Tesis Doctoral ha sido el estudio de plantas fósiles de edad aptiana procedentes de Antártida y Patagonia, con énfasis en especímenes con anatomía preservada. Las muestras estudiadas proceden de la Formación Cerro Negro, aflorante en Isla Livingston (Antártida), y del Grupo Baqueró (Formaciones Anfiteatro de Ticó, Bajo Tigre y Punta del Barco), localizado en Patagonia. Los ejemplares permineralizados procedentes de la Formación Cerro Negro han permitido identificar nuevos taxones para la ciencia. En particular, se destacan cuatro nuevos géneros y especies del Orden Cyatheales, dos nuevas especies del género Millerocaulis (Familia Osmundaceae), y un nuevo género y especie de briofita. Además, se estudiaron los primeros restos permineralizados de Marattiaceae y Cycadales. Esta Tesis incluye también el primer análisis exhaustivo de restos permineralizados de criptógamas para la unidad. Como complemento, se estudiaron ejemplares preservados como impresiones y palinomorfos dispersos procedentes de la misma unidad, entre los cuales se identificaron representantes de las Osmundaceae, Dicksoniaceae, Cyatheaceae, pteridospermas, cycadofitas, Araucariaceae, Podocarpaceae, Pentoxylales y esfenopterídeas. Entre los ejemplares procedentes del Grupo Baqueró, se identificaron y estudiaron por primera vez maderas gimnospérmicas, las que permitieron identificar una nueva especie del morfogénero Agathoxylon y una nueva especie de Brachyoxylon. Además, se estudiaron pecíolos y rizomas anatómicamente preservados de gleicheniáceas, los que permitieron definir un nuevo género y especie de esta familia de helechos tan abundante en la unidad. Los restos fósiles preservados como improntas permitieron identificar taxones previamente reportados para la unidad (Gleichenites san‐martinii,Hausmannia papilio, Araucaria grandifolia). En particular, se describen por primera vez las esporas de Gleichenites san‐martinii Halle emend. Herbst. Si bien estudios previos han sugerido que el estrato arborescente de la comunidad registrada en la unidad antártica habría estado compuesto exclusivamente por gimnospermas, las estimaciones de alturas realizadas en esta investigación sugieren que algunos helechos arborescentes habrían rivalizado en altura con las gimnospermas más altas de la región. La existencia de algunos grupos de helechos en la Formación Cerro Negro (ej. Marattiaceae, Dicksoniaceae, Cyatheaceae), muchos de ellos presentando una importante abundancia y diversidad, sugerirían condiciones climáticas cálidas y húmedas durante el Aptiano en la Antártida. La comparación realizada entre ambas paleofloras estudiadas muestra que la proporción de representación de los grandes grupos de plantas (plantas terrestres no vasculares, licofitas, equisetáceas, pteridofitas, gimnospermas y angiospermas) es comparable en ambas unidades. Ambas asociaciones muestran a los helechos y a las gimnospermas como grupos dominantes (aproximadamente 80 % de la diversidad total). Entre las pteridofitas, se ha observado que el Orden Cyatheales es el grupo más diverso en la Formación Cerro Negro, mientras que en el Grupo Baqueró la mayor diversidad la presentan las Gleicheniaceae. Las gimnospermas presentan en ambas unidades una gran proporción de especies de Bennettitales, mientras que las Gnetales, Cupressaceae, Ginkgoales y Angiospermas se registran únicamente en las unidades patagónicas.

Abstract:
The aim of this Doctoral Thesis was the study of Aptian fossil plants from Antarctica and Patagonia, with focus on specimens with preserved anatomy. The studied samples were collected in the Cerro Negro Formation, which crops out in Livingston Island (Antarctica), and the Baqueró Group (Anfiteatro de Ticó, Bajo Tigre and Punta del Barco formations), located in Patagonia. The permineralized specimens recovered from the Cerro Negro Formation allowed the identification of new taxa, such as four new genera and species of the Order Cyatheales, two new species of the genus Millerocaulis (Family Osmundaceae), and a new genus and species of moss. Furthermore, the first permineralized remains of Marattiaceae and Cycadales were studied. This Thesis also includes the first exhaustive analysis of cryptogamic permineralized remains for the unit. As a complement, specimens preserved as impressions and disperse palynomorphs, contained in the same stratigraphic unit, were studied. Among them, several groups of plants were identifided, such as representatives of the Osmundaceae, Dicksoniaceae, Cyatheaceae, pteridosperms, cycadophytes, Araucariaceae, Podocarpaceae, Pentoxylales, and sphenopteridean foliage. Among the specimens from the Baqueró Group, gymnospermous wood was identified and studied for the first time, allowing the recognition of a new species of Agathoxylon, and a new species of Brachyoxylon. Furthermore, anatomically preserved petioles and rhizomes of gleicheniaceous ferns were studied, allowing the definition of a new genus and species of this fern Family, highly abundant in the unit. Fossil remains preserved as impressions consist in previously reported taxa (Gleichenites san‐martinii, Hausmannia papilio, Araucaria grandifolia). In particular, the spores of Gleichenites san‐martinii Halle emend. Herbst are described for the first time. Although previous studies have suggested that the arborescent stratum of the palaeocomunity recorded in the Antarctic unit would have been exclusively composed by gymnosperms, the height estimations made in this research suggest that some of the tree ferns would have rivalize in height with the tallest gymnosperms of the region. The existence of some groups of ferns in the Cerro Negro Formation (e.g. Marattiaceae, Dicksoniaceae, Cyatheaceae), many of them presenting an important abundance and diversity, would suggest warm and humid climatic conditions during the Aptian in Antarctica. The comparison made between both studied palaeofloras shows that the percent of representation of major groups of plants (non‐vascular terrestrial plants, licopsids, equisetaleans, ferns, gymnosperms and angiosperms) is comparable between the units. In both associations, ferns and gimnosperms are the dominant groups (approximately 80 % of the total diversity). Among the pteridophytes, the Order Cyatheles is the most diverse in the Cerro Negro Formation, whereas in the Baquero Group the greatest diversity is attained by the Gleicheniaceae. Bennettitales are, among the gymnosperms, the most diverse group in both units, while the Gnetales, Cupressaceae, Ginkgoales and angiosperms are exclusively recorded in the Baqueró Group.

Vendramin, Leandro. "Algebras de Nichols sobre grupos no abelianos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis se estudian álgebras de Nichols sobre grupos no abelianos. Un álgebra de Nichols viene dada por un par (X, q), donde X es un rack y q es un 2-cociclo en una teoría de cohomología no abeliana de racks. En este trabajo definimos racks de tipo D y demostramos que los racks simples y finitos de tipo D dan álgebras de Nichols de dimensión infinita para todo 2-cocyclo q. Muchas de las clases de conjugación de los grupos esporádicos, o de An, o de Sn son racks de tipo D. Con estos resultados y las técnicas que desarrollamos a partir de la clasificación de álgebras de Nichols de tipo diagonal de dimensión finita hecha por Heckenberger demostramos que no existen álgebras de Nichols de dimensión finita sobre G, donde G = An o G = Sn o G es un grupo simple esporádico distinto de Fi22, B o M. Como corolario, el método del levante nos da la clasificación de álgebras de Hopf punteadas de dimensión finita sobre estos grupos. En un apéndice presentamos brevemente un software que desarrollamos para poder realizar cálculos relacionados con racks y álgebras de Nichols. Este software resultó ser una poderosa herramienta para crear, entender y aplicar las técnicas que dan condiciones que garantizan que un par (X, q) (o una clase de conjugación de un grupo finito dado) dé solamente álgebras de Nichols de dimensión finita.

Abstract:
In this thesis Nichols algebras over non-abelian groups are studied. A Nichols algebra is given by a pair (X, q), where X is a rack and q is a 2-cocycle in a non-abelian rack cohomology theory for racks. We define the notion of racks of type D and we prove that finite simple racks of type D give infinite-dimensional Nichols algebras for every 2-cocyle q. Most of the conjugacy classes of the sporadic simple groups, or An, or Sn are racks of type D. These results combined with techniques that we developed from Heckenberger's classification of Nichols algebras of diagonal type lead us to to prove that there are no finite-dimensinal Nichols algebras over G, where G = An or G is a sporadic simple group different from Fi22, B and M. As a corollary, the lifting method allows us to complete the classification of pointed Hopf algebras over these groups. In an appendix we present a computer package that we developed for computations related with racks and Nichols algebras. This package turns out to be a powerful tool, very useful for creating, understanding and applying the techniques that give conditions that guarantee that a pair (X, q) (or a conjugacy class in a given finite group) gives only infinite-dimensional Nichols algebras.

Vanni, Leonardo. "Historias contextuales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la mecánica clásica y en la mecánica cuántica, mediante la noción habitual de traslación temporal, definimos una relación de equivalencia entre propiedades a distintos tiempos, de modo que propiedades temporalmente equivalentes queden reunidas en una unica clase de equivalencia. Estas clases forman nuevas propiedades, y como tales es posible definir entre ellas una relación de orden y las operaciones de conjunción disyunción y negación, lo cual permite organizarlas dentro de un retículo ortocomplementado, pero no necesariamente distributivo en el caso cuántico. Cuando la dinámica es tenida en cuenta, indagamos como este lenguaje de clases habilita una comparación de las descripciones clásicas y cuánticas. En el caso cuántico, la posibilidad de establecer clases de propiedades temporalmente equivalentes, conduce a definir el concepto de historia como una conjunción de clases de propiedades a distintos tiempos, la cual se traduce a la clase obtenida de la conjunción de las propiedades cuando estas son trasladadas a un tiempo común. No obstante, dada una particular evolución temporal, no todas las posibles conjunciones así construidas, permiten una descripción válida en términos de historias. Solo bajo determinada condición sobre las propiedades elegidas a distintos tiempos, las conjunciones entre ellas establecen historias, que como nuevas propiedades, forman los ́tomos de un retículo distributivo, es decir un conjunto de propiedades compatibles con las cuales es posible una descripción legítima que involucre al tiempo. Este retículo forma un contexto, un contexto de historias, o historias contextuales, y determina que es lo está permitido decir sobre propiedades elegidas, para la particular evolución temporal presente. Se analiza y compara este formalismo con el ya conocido de historias consistentes. El nuevo formalismo es aplicado para analizar el experimento de la doble rendija, el interfer ́metro de Mach-Zender, y el proceso de medición.

Abstract:
Both in classical and quantum mechanics, using the notion of time translation, we defined an equivalence relation between properties at different times, either in the classic or quantum case, such that time equivalent properties are included in an single class of equivalence. These classes form new properties, and as such it is possible to define an order relation among them and the operations of conjunction, disjunction and negation. These classes are organized in an orthocomplemented lattice, which is not necessarily distributive in the quantum case. We investigated if this language of classes allows a comparison of the classical and quantum descriptions, when dynamics is considered. In the quantum case, the possibility of establishing classes of temporarily equiv- alent properties, leads to define the concept of history as a conjunction of classes of properties at different times, which is the class of the conjunction of the properties when they are translated at the same common time. However, given a particular temporal evolution, not all the possible con- junctions obtained in this way, allow a valid description in terms of histories. Only under certain condition on the properties chosen at different times, the conjunctions among them establish histories, which like new properties, form atoms of a distributive and orthocomplemented lattice, that is to say, a set of compatible properties through which it is possible a legitimate description of the system at different times. This lattice forms a context, a context of histories, or contextual histories, and determines what is allowed to say about the chosen properties, for the particular temporal evolution generated by the Hamiltonian of the system. This formalism is analyzed and compared with the well known of consis- tent histories. The new formalism is also applied to analyse the double slit experiment, the Mach-Zender interferometer, and the measurement process.

Tuero, Diego Tomás. "Flexibilidad comportamental del Tordo Renegrido (Molothrus bonariensis) al parasitar diferentes hospedadores" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió la flexibilidad comportamental de un parásito de cría generalista, el Tordo Renegrido (Molothrus bonariensis), mediante experimentos a campo y en laboratorio. Se utilizaron dos hospedadores frecuentes de esta especie, la Calandria Grande (Mimus saturninus) de mayor tamaño corporal que el parásito, y la Ratona Común (Troglodytes aedon) de menor tamaño que éste. Las características estudiadas fueron: 1) la inversión maternal medida como el tamaño y peso de los huevos, la concentración de testosterona en yema, y la proporción primaria de sexos; 2) el comportamiento de pedido de alimento de los pichones; y 3) el comportamiento de picadura de huevos de las hembras adultas. Las hembras de tordo pusieron huevos más grandes cuando parasitaron nidos de calandria que cuando parasitaron nidos de ratona. Sin embargo, no ajustaron la inversión de testosterona en yema ni la ni proporción primaria de sexos según el hospedador utilizado. Los experimentos a campo realizados para estudiar el comportamiento de pedido de alimento de los pichones mostraron que éstos tienen un comportamiento más intenso y de mayor duración cuando son criados en nidos de calandria que cuando lo son en nidos de ratona. Este comportamiento no dependió de otros factores como edad, peso o estado nutricional del pichón. Además, experimentos de translocación de huevos entre hospedadores mostraron que este comportamiento es plástico y depende del hospedador donde es criado el pichón. Los resultados obtenidos en experimentos con hembras adultas durante la época reproductiva mostraron que una misma hembra puede modificar su comportamiento de picadura de huevos dependiendo del contenido del nido. Las hembras mostraron un comportamiento de picaduras más intenso ante nidos que tenían un huevo del hospedador de mayor tamaño corporal (calandria) y un huevo de tordo que ante nidos con un huevo de un hospedador de menor tamaño corporal (ratona) y un huevo de tordo. Además, en el experimento con un huevo de calandria y uno de tordo las hembras picaron (y perforaron) preferencialmente los huevos de calandria. Los resultados obtenidos indican que el Tordo Renegrido presenta diferencias en su comportamiento parasitario según las características del hospedador utilizado. Para algunos de los caracteres estudiados estas diferencias parecerían tener una base genética mientras que para otros se trataría de plasticidad fenotípica.

Abstract:
I studied the behavioral flexibility of a generalist brood parasite, the Shiny Cowbird (Molothrus bonariensis) by carrying out field and laboratory experiments. I used two common hosts of this parasite, the Chalk-browed Mockingbird (Mimus saturninus) a host larger than the cowbird and the House Wren (Troglodytes aedon) a host smaller than the cowbird. The characters analyzed were: 1) maternal investment measured as size and weight of the egg, concentration of testosterone in the yolk, and primary sex ratio; 2) begging of cowbird chicks and 3) puncture egg behavior of cowbird females. I found that cowbird females laid bigger eggs in mockingbird than in wren nests. However, they did not adjust the concentration of testosterone in the yolk or the primary sex ratio depending on the host used. Field experiments performed to study begging behaviour showed that cowbird nestlings raised in mockingbird nests had a shorter latency, a higher begging intensity and longer begging bouts than cowbird nestlings raised in wren nests. This behaviour did not depend on age, weight or condition of the chick. Besides, experiments of egg translocation between hosts showed that begging was plastic and depended on the host where the parasite chick was raised. The results of the experiments conducted with adult females during the reproductive season showed that they change her egg puncture behaviour depending on nest content. Females showed more intense puncture behaviour in nests with one host egg larger than that of the parasite (mockingbird) and one cowbird egg than in nests with one host egg smaller than that of the parasite (wren) and one cowbird egg. Also, in the experiment with one mockingbird and one cowbird egg females pecked (and punctured) preferentially mockingbird eggs. These results show that Shiny Cowbirds present differences in their parasitic behaviors depending on the host they use. For some of the characters studied these differences appear to have a genetic basis while for others they would be the result of behavioral flexibility.

Tomasini, Eugenia Paula. "Caracterización espectroscópica y fotofísica del estado triplete de colorantes en sistemas heterogéneos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio de los procesos fotofísicos primarios de colorantes en medios heterogéneos tiene gran importancia en el desarrollo de materiales fotoactivos de utilidad en diversos campos de aplicación. El creciente interés en este tipo de sistemas, en particular aquellos compuestos por colorantes incorporados a soportes sólidos, fue acompañado por el desarrollo de métodos y técnicas específicos para su caracterización. Sin embargo, debido a dificultades experimentales, no existen métodos confiables para la determinación de rendimientos cuánticos de formación de estados triplete en medios sólidos dispersores de luz. En este trabajo de Tesis se presenta un método para la determinación de dichos rendimientos basado en la aplicación de la espectroscopia optoacústica inducida por láser (LIOAS). El estudio incluye la aplicación de técnicas resueltas en el tiempo que complementan la caracterización de los estados excitados. De esta manera, la Tesis avanza sobre el conocimiento de los procesos fotofísicos primarios de colorantes adsorbidos sobre celulosa, en particular las propiedades del estado triplete de colorantes xanténicos como la Eritrosina B y el Rosa de Bengala. Los resultados obtenidos se interpretan en términos de las interacciones entre las moléculas de colorante y entre éstas y la matriz sólida.

Abstract:
The study of primary photophysical processes of dyes in heterogeneous media is relevant to the development of photoactive materials useful in various application fields. The growing interest in such systems, particularly those composed of dyes incorporated into a solid matrix, was accompanied by the development of specific methods and techniques for their characterization. However, due to experimental difficulties, there are no reliable methods for the determination of triplet quantum yields in solid light-scattering media. In this Thesis a method for the determination of such yields based on the application of laser induced optoacoustic spectroscopy (LIOAS) is presented. The study includes the application of time-resolved techniques as a complement for the characterization of the excited states. Thus, this Thesis advances in the knowledge of primary photophysical processes for dyes adsorbed on cellulose, in particular those related to the triplet state of xanthene dyes such as Erythrosin B and Rose Bengal. Results are interpreted in terms of the interaction among dye molecules and among them and the solid matrix.

Toloza, Ariel Ceferino. "Bioactividad y toxicidad de componentes de aceites esenciales vegetales, en Pediculus humanus capitis (Phthiraptera: Pediculidae) resistentes a insecticidas piretroides" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los piojos de la cabeza, Pediculus humanus capitis De Geer (Phthiraptera: Pediculidae) son ectoparásitos obligados de humanos. La infestación con piojos produce irritación de la piel, prurito y riesgo de infecciones secundarias como consecuencia del rascado. El control químico de esta plaga ha sido mediante el uso de insecticidas clorados (DDT y lindano), organofosforados (malatión), carbamatos (carbaril), piretrinas naturales y piretroides (deltametrina, permetrina, d-fenotrina). Actualmente el uso de estos insecticidas está limitado por el desarrollo de poblaciones de piojos resistentes. Una alternativa a los insecticidas convencionales son los compuestos botánicos tales como los aceites esenciales (AE) de plantas aromáticas y sus componentes, los cuales han despertado alto interés por su actividad adulticida, ovicida y repelente en varios insectos plaga. Los objetivos planteados en esta tesis fueron: a) establecer la actividad biológica de los vapores de aceites esenciales y de sus componentes provenientes de plantas autóctonas y exóticas que crecen en Argentina sobre poblaciones de huevos y adultos de piojos resistentes a piretroides; b) analizar el efecto repelente de los mencionados aceites; y c) estudiar los mecanismos involucrados en el modo de acción y el rol de las enzimas monooxigenasas en la toxicidad de los monoterpenoides sobre piojos de la cabeza. Los piojos utilizados se recolectaron mediante el uso de peine fino de cabezas de niños de entre 3 y 13 años provenientes de escuelas primarias de Buenos Aires. Los 49 aceites esenciales fueron colectados en diversas regiones de Argentina durante la primavera de los años 2003-2004 y 2006-2007. Los 26 monoterpenoides estudiados en esta tesis fueron de origen comercial. Previo al estudio del efecto insecticida de los AEs, se determinó el grado de pediculosis (presencia de al menos una forma viable de piojo) y los niveles de resistencia a permetrina de las poblaciones a estudiar. Para el estudio de la fase vapor de los AEs y de los monoterpenoides sobre las liendres y sobre los adultos, se empleó una cámara cerrada que permitió la liberación progresiva del aceite o componente puro. En el caso de las formas eclosionadas, se midió el volteo de los piojos cada 5 min durante 1 h, y luego se calculó el tiempo de volteo necesario para afectar el 50% de los piojos (TV50). Con respecto a las liendres, las mismas fueron expuestas durante 24 hs al vapor de las sustancias en estudio y se registró el porcentaje de mortalidad (%). La actividad repelente de los AEs y de los monoterpenoides fue medida sobre una arena experimental concéntrica diseñada para este estudio. Se midió el porcentaje de insectos que estaban en el área tratada y control, y se calculó el índice de repelencia (IR). Con respecto a la medición enzimática de la actividad de acetilcolinesterasa (AChE), la misma fue determinada por un método espectrofotométrico y cinético. En primer lugar se estudió el efecto de los monoterpenoides sobre la inhibición de la AChE de anguila eléctrica. Luego se calculó la concentración de inhibición al 50% (CI50) del compuesto más efectivo usando las enzimas de AChEs de anguila eléctrica y la extraída a partir de homogenatos de piojos. Posteriormente, se expusieron piojos a los vapores del compuesto más efectivo y a los de un compuesto organofosforado volátil (diclorvos-DDVP-) del que se conoce su gran poder inhibitotio sobre la actividad de acetilcolinestarasa. Para analizar el posible rol de las enzimas monooxigenasas en la degradación de monoterpenoides, se topicaron las formas post-embrionarias de piojos con diferentes concentraciones del butóxido de piperonilo (PBO)- un conocido inhibidor de oxidasas-, y luego los piojos fueron expuestos a los vapores del monoterpenoide más efectivo y del compuesto organofosforado diclorvos-DDVP-. Los resultados demostraron un promedio de 29,7% de los chicos analizados tenían piojos, siendo encontrados más frecuentemente en las nenas que en los varones. Los grados de resistencia (GRs) de las poblaciones estudiadas de P.h.capitis variaron desde un 28,57 hasta un 71,42 (en comparación con la cepa de referencia susceptible de P.h.humanus). No se encontraron diferencias significativas en los valores de TV50 de las poblaciones con grados de resistencia diferentes. Esto sugiere que los mecanismos de resistencia a piretroides no afectan de manera prioritaria o directa a la toxicidad a los vapores de AEs y a sus componentes. En relación a al efecto fumígeno de los AEs sobre formas eclosionadas hay que mencionar que 24 de los 49 aceites estudiados (49%) produjeron un efecto tóxico sobre los piojos resistentes a permetrina. De estos aceites los más efectivos fueron aquellos obtenidos de plantas aromáticas autóctonas tales como Cinnamomun porphyrium, Myrcianthes cisplatensis, Aloysia citriodora (quimiotipo 2), Myrcianthes pseudomato, con valores respectivos de TV50 de 1,12; 1,29; 3,02 y 4,09 m. Estos aceites fueron entre 9 y 20 veces más tóxicos que los aceites que los precedieron. En relación a los compuestos monoterpenoides con mayor actividad fumígena sobre piojos, tenemos que destacar que el 1,8-cineol y el anisol fueron los más efectivos, con TV50s de 11,1 y 12,7m. Luego estuvieron los compuestos limoneno, 1S-(-)-α- pineno, β-pineno, (+)-α-pineno, linalol, mentona, α-pineno, pulegona, β- mirceno y alcohol bencílico. El TV50 del control positivo DDVP (un conocido fumigante) fue de 40,15 m y fue menos efectivo significativamente que los compuestos más efectivos, tales como el 1,8-cineol, el anisol y el limoneno. Se halló una correlación significativa entre los valores de TV50 y la presión de vapor de estos monoterpenoides, indicando que las sustancias más efectivas son las que poseen mayor presión de vapor. Cuando se profundizó en el estudio de aceites esenciales modificados genéticamente (híbridos de Eucaliptos), se halló que los híbridos Eucalyptus grandis X Eucalyptus camaldulensis y Eucalyptus grandis X Eucalyptus tereticornis produjeron mayor volteo (TV50= 13,6 y 12,9m) que sus formas parentales con TV50s de 25,6; 31,3 y 35m. Además, se halló una correlación significativa entre el porcentaje de 1,8-cineol y el TV50 de los mismos. Con respecto a la toxicidad de los monoterpenoides sobre los embriones hay que destacar que los compuestos más efectivos y de manera similar fueron el 1,8- cineol, anisol, el α-pineno, el β-pineno, el (+)-α-pineno, el 1S-(-)- α-pineno, el anetol, la carvona, el limoneno y el linalol. Esto es similar a lo observado para formas eclosionadas. En relación con la repelencia, el aceite esencial que produjo mayor repelencia sobre piojos de la cabeza fue el obtenido de la planta exótica Mentha pulegium y no difirió significativamente del control positivo piperonal. El compuesto con mayor efectividad repelente fue el alcohol bencílico con un índice de repelencia promedio de 57,74%, seguido de (-)-mentol, mentona y (+)-mentol con valores de IR respectivos de 53,56; 39,23 y 36,45%. Las lactonas estudiadas tuvieron efecto repelente en valores similares al control positivo. Con respecto a la actividad enzimática de acetilcolinestarasa medida sobre anguila eléctrica, se encontró diferencias significativas entre los 20 monoterpenoides, siendo el 1,8-cineol el que mayor inhibición produjo con un valor de CI50=6x10־³M. EL 1,8-cineol produjo inhibición de AChE obtenida de piojos, con una CI50=7,7x10־²M. Cuando se estudio la actividad sintomatológica de intoxicación del 1,8-cineol y del organofosforado DDVP, y se procedió a medir la inhibición de la AChE de piojos, se encontró que el 13% de la AChE estaba inhibida por el 1,8-cineol, mientras que el 80% de la enzima fue inhibida por el DDVP. Estos resultados demostraron relación entre la toxicidad del monoterpeno 1,8-cineol y la inhibición de la actividad AChE de piojos, y sugieren que habría otros mecanismos asociados a la sintomatología de volteo de piojos. El análisis del rol de las oxidasas de función mixta mostró una relación creciente entre la dosis subletal topicada con butóxido de piperonilo (PBO) y el TV50 de los piojos expuestos a los vapores del 1,8-cineol y del DDVP. Esto indica la importancia de este complejo enzimático en la degradación del monoterpeno 1,8-cineol. Para finalizar, hay que resaltar que es la primera vez que se realiza un estudio de toxicidad y repelencia de aceites esenciales obtenidos de plantas aromáticas de Argentina (y de sus componentes), sobre piojos resistentes a permetrina. Adicionalmente estos resultados aportan información para avanzar en el conocimiento del efecto de los monoterpenoides sobre la actividad de la enzima acetilcolinesterasa, y del rol de las enzimas monooxigenasas en la degradación de dichos compuestos.

Abstract:
The human head louse, Pediculus humanus capitis De Geer (Phthiraptera: Pediculidae) is an obligate ectoparasite of humans. The infestation with head lice is unpleasant and may cause itching, prurito and secondary skin infections due to scratching of irritated scalp. Chemical control of head lice has been based on a variety of insecticides, such as organoclorides (DDT and lindane), organophosphates (malathion), carbamaes (carbaryl), natural pyrethrins and pyrethroids (deltamethrin, permethrin, d-phenothrin). The overuse of these insecticides is limited due to the development of resistant head lice populations. Alternatives to conventional insecticides might be found in aromatic plants such as essential oils (EOs) and their monoterpenoids. Some of these natural products are repellents, adulticides and ovicidal against a wide variety of pests. The aims of the present thesis were: a) to establish the biological activity of the vapour phase of the essential oils and their main compounds obtained from aromatic plants of Argentina against eggs and adults of permethrin-resistant head lice; b) to analyzed the repellent activity of the essential oils; and c) to study the mechanisms involved in the mode of action and the role of the monooxygenases in the toxicity of the monoterpenoids against head lice. Head lice were collected from from heads of infested children 3-13 yr old, using a fine toothed antilouse comb. Fourty nine essential oils were collected from in the spring season of 2003-2004 and 2006-2007 from different regions of Argentina. Twenty six monoterpenoids were purchased from Aldrich. Prior to the study of the insecticide effect of the essential oils, pediculosis percentage (evidence of at least one living head lice) was calculated, and the permethrin resistance levels of the studied populations. An enclosed chamber was employed to study the fumigant activity of EOs and their components against eggs and adults of head lice. This method allowed creating a saturated micro-atmosphere as a result of the evaporation of the essential or component. Adults and nymphs III were observed for evidence of knockdown every 5 min for 60 min. Then, time in minutes to knockdown of 50% of each unit’s subjects (KT50). With respect to the eggs, each set was exposed to the substances for 24 h and mortalitity data was recorded. Repellency of EOs and components was estimated in an experimental arena with two areas. The number of lice was recorded every 5 min and each experiment was completed within 1 h. Then, a repellency index (RI) was calculated. The inhibition of the acetylcholinesterase activity (AChE) was calculated by a spectrofotometric and kinetic method. First, the inhibition of the monoterpenoids against AChE from electric eel was measured. Then, the inhibition concentration at 50% (IC50) of the most effective monoterpenoid was recorded from either AChE from electric eel or homogenate of lice. Finally, head lice were exposed to the vapours of the most effective compound and to the organophosphate dichlorvos-DDVP-, a well known AChE inhibitor. To study the role of the monooxygenases in monoterpenoide degradation, adult insects were topicated at different piperonil butoxide (PBO) concentrations and then exposed to the vapours of the most effective monoterpenoide and DDVP. The results showed that, in average, 29.7% of the anayzed children had lice, and with the girls being more infected than boys. The resistant ratios (RRs) of the studied populations of P.h.capitis varied from 28.57% to 71.42% (in comparison with the laboratory susceptible strain of P.h.humanus). There were no significant differences among the KT50 values of the different permethrin-resistant populations. These indicate that pyrethroid-resistance mechanisms were no affected by the toxicity of the EOs and monoterpenoids. About the fumigant activity of the EOs against postembryonic insects, 24 of the 49 studied (49%) oils were effective against permetrhin-resistant head lice. Of these EOs, the most effective were from the native aromatic plants like Cinnamomun porphyrium, Myrcianthes cisplatensis, Aloysia citriodora (chemotype 2), Myrcianthes pseudomato, KT50 values of 1.12, 1.29, 3.02 and 4.09 min; respectively. The mentioned oils were 9- to 20-fold more toxic than the studied EOs. The most effective monoterpenoids were 1,8-cineole and anisole, with values of 11.1 and 12.7m; respectively. They were followed by limonene, 1S-(-)-α-pinene, β-pinene, (+)-α-pinene, linalool, mentone, α-pinene, pulegone, β-myrcene and benzyl alcohol. The KT50 value of the positive control DDVP was 40.15 min, and was less effective than the three more toxic compounds like 1,8-cineole, anisole and limonene. A positive relationship was found between the KT50 values of the effective compounds and corresponding vapour pressures, suggesting that the more volatile the compounds, the more effective it was as a fumigant. With respect to the study of the genetically modified oils (eucalypt hybrids), it is important to show that fumigant activity of the hybrids Eucalyptus grandis X Eucalyptus camaldulensis and Eucalyptus grandis X Eucalyptus tereticornis was higher (KT50= 13.6 and 12.9 min; respectively) than that for pure species (KT50= 25.6, 31.3 and 35 min). Moreover, a significant correlation was found between KT50 data and % of 1,8-cineole in the essential oils. The toxicity of the eggs revealed that the most effective monoterpenoids were anisole, α-pinene, β- pinene, (+)-α-pinene, 1S-(-)- α-pinene, anethole, carvone, limonene, linalool and 1,8-cineole. It was in accordance with the pattern found in adult head lice. The most repellent essential oil was from the exotic Mentha pulegium and it was not significantly more repellent than the positive control piperonal. The most repellent monoterpenoid was benzyl alcohol with a RI= 57.74%, followed by (-) menthol, mentone y (+)-menthol with RI values of 53.56, 39.23 and 36.45%; respectively. The studied lactones possessed similar repellent activity than the positive control. Concerning the enzymatic activity of acetylcholinesterase from electric eel, there were significant differences among the 20 studied monoterpenoids, with the 1,8-cineole as the most inhibitor with a IC50=6x10־³M. Moreover, 1,8-cineole was an inhibitor of the AChE obtained from homogenate of head lice with a IC=7.7x10־²M. The study of the sintomatology of intoxication of the 1,8-cineole and DDVP, followed by the analyses of the inhibitory activity of AChE of lice revealed that 1,8-cineole inhibited 13% of the AChE while DDVP inhibited 80%. The analysis of OFM showed a relationship between the sublethal dose of PBO and the KT50 of the exposed head lice to the vapours of 1,8-cineole and DDVP. Finally, it is important to note that it is the first study of toxicity and repellency of essential oils and their compounds obtained from aromatic plants of Argentina against permethrin-resistant head lice. Additionally, the results obtained in the present thesis bring new insight into the knowledge of the mode of action of the monoterpenoids over the acetylcholinesterase activity and the role of the monooxigenases in the degradation of the mentioned components.

Terrizzano, Carla Marina. "Neotectónica del extremo noroccidental del cinturón barreal- Las Peñas, precordillera Sur" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se presenta un estudio neotectónico del extremo noroccidental del cinturón Barreal – Las Peñas, Precordillera Sur, provincias de San Juan y Mendoza. La estratigrafía está caracterizada por un sustrato paleozoico, sucesiones permotriásicas, cuerpos intrusivos neógenos y una cobertura sedimentaria cenozoica. Se ha puesto especial énfasis en la estratigrafía cenozoica, especialmente cuaternaria, habiéndose reconocido cuatro niveles de agradación que fueron asignados al Pleistoceno medio-inferior, al Pleistoceno medio, al Pleistoceno superior y al Holoceno. A partir del análisis estratigráfico, estructural y de la geomorfología tectónica del área y sobre la base de tomografías eléctricas resistivas y datos de anisotropía de susceptibilidad magnética (AMS), se ha caracterizado la deformación neógena y cuaternaria de la región. Las principales unidades morfotectónicas que integran el área de estudio corresponden a los bloques Barreal y Ansilta. Entre ambos se extiende un amplio sector pedemontano que integra parte de la depresión de Barreal - Uspallata. La estructura neógena y cuaternaria del conjunto de esos bloques montañosos está definida por corrimientos de vergencias opuestas, hacia el oeste en el bloque Barreal y hacia el este en el bloque Ansilta. Asimismo, se ha definido un cinturón de deformación cuaternario de ligazón débil a lo largo del valle de Barreal - Uspallata, el cinturón Yalguaraz. El mismo, de dirección NNO y carácter transpresivo sinestral, conecta mecánicamente el sector precordillerano correspondiente al cinturón Barreal – Las Peñas con la región central de la Precordillera Sur y la Cordillera Frontal. En tiempos cuaternarios, el cinturón Yalguaraz muestra tres etapas de deformación. El estilo tectónico es el producto de la interferencia de elementos estructurales en distintas direcciones como consecuencia de la reactivación de estructuras previas, de edad paleozoica y triásica, oblicuas y transversales al orógeno andino.

Abstract:
This work presents a neotectonic study of the northwestern edge of the Barreal – Las Peñas belt, Precordillera Sur, San Juan and Mendoza provinces. At the study area, the stratigraphy is characterized by a Paleozoic basement, Permian-Triassic sequences, Neogene intrusive bodies and a Cenozoic sedimentary cover. It was placed a special emphasis on the Cenozoic stratigraphy, especially on the Quaternary one. Four Quaternary aggradation levels were recognized. They were assigned to the Middle to Lower Pleistocene, Middle Pleistocene, Late Pleistocene and Holocene. The Neogene and the Quaternary deformation were characterized by means of stratigraphical and structural analyses, studies of tectonic geomorphology and geophysical methods, such as tomographies of electrical resistivity and anisotropy of magnetic susceptibility (AMS). The Barreal and the Ansilta blocks, and a wide piedmont area between them (Barreal – Uspallata depression), represent the main morphotectonic units of the study area. The Neogene and Quaternary structure of these blocks is defined by oppositevergence thrusts, to the west in the Barreal block and to the east in the Ansilta block. Along the Barreal – Uspallata depression, a Quaternary soft-linked deformation belt, the Yalguaraz belt, was defined. It corresponds to a NNW-trending sinistral transpressive zone which links the Barreal – Las Peñas belt with the central region of the Precordillera Sur and the Cordillera Frontal. During the Quaternary, this belt shows three different deformation stages. The tectonic style of the area is the consequence of the Andean reactivation and interference of transverse and oblique older structures, Paleozoic and Triassic in age.

Tencer, Bárbara. "Variabilidad de los eventos extremos de temperatura observados y modelados en el sudeste de Sudamérica, y sus proyecciones ante un escenario de cambio climático" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se estudia la variabilidad de los eventos extremos de temperatura observados y modelados en el Sudeste de Sudamérica, y sus proyecciones ante un escenario de cambio climático. Los eventos extremos del tiempo y del clima afectan severamente los ecosistemas y la sociedad. La existencia de un cambio climático que produzca una pequeña variación en los valores medios de temperatura puede ocasionar grandes cambios en las temperaturas extremas. El objetivo general que se desea alcanzar en este trabajo es el de encontrar una aproximación que permita estimar los valores extremos de temperatura que ocurrirán en los próximos años en el Sudeste de Sudamérica ante la presencia de un cambio climático, reduciendo la incertidumbre propia de este tipo de proyecciones. Para ello, se exploran distintas metodologías que permiten estudiar la intensidad y la frecuencia de los eventos extremos de temperatura observados y simulados en el pasado, como así también proyectados para el clima futuro. En particular, se aplica la Teoría de Valores Extremos para estudiar la variabilidad observada en los eventos extremos de temperatura durante el siglo XX en estaciones que pertenecen a distintas regiones climáticas de Argentina. Además, se estudian distintas metodologías de downscaling (estadístico y dinámico) que permiten evaluar el impacto del cambio climático en las distribuciones de los extremos de temperatura a escala regional.

Abstract:
In this study variability of observed and simulated temperature extreme events are analysed in Southeastern South America, as well as their projections in a climate change scenario. Climate and weather extreme events severely affect the ecosystems and society. The existence of a climate change that induces small variations in mean temperature values can produce big changes in temperature extremes. The general objective of this study is to found an appropriate estimation of the temperature extreme values that will happen in the near future in Southeastern South America under the assumption of a climate change, reducing the typical uncertainty of this kind of projections. Therefore, different methodologies are explored in order to study the intensity and frequency of observed and simulated temperature extreme events in the past, as well as their projections for the future. In particular, the Extreme Value Theory is applied to study the observed variability of temperature extreme events during the XX century in meteorological stations belonging to different climate regimes in Argentina. Different downscaling techniques (statistical and dynamical) that allow to evaluate the impact of a climate change in extreme value distributions on a regional scale are also analysed.

Taverna Porro, Marisa Lía. "Síntesis quimio-enzimática de nucleósidos naturales y modificados" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo de tesis presenta una estrategia versátil y económica para la síntesis de nucleósidos tanto naturales como modificados partiendo de azúcares naturales. La aproximación quimio-enzimática de la síntesis de nucleósidos que se exploró, se encuentra resumida en la Figura 1. En primer lugar, se desarrolló una estrategia general de obtención de furanosas-5- fosfato utilizando un esquema de protección química y desprotección selectiva con lipasas, cornbinado con una fosforilación quimica. De esta forrna se sintetizaron D-ribosa 5-fosfato, 2- desoxi-D-ribosa 5-fosfato y D-arabinosa 5-fosfato. Luego se exploró la reacción de glicosidación enzimática de nucleósidos mediante el acoplamiento de nucleósido fosforilasas (NPs) con la fosfopentomutasa (PPM). Esta última, al no ser una enzima comercial, debió ser sobreexpresada y purificada, y su actividad debió ser optimizada para ser utilizada en las reacciones de síntesis de nucleósidos. De esta forrna se han obtenido con altos rendimientos (70-100%) los nucleósidos: adenosina, inosina, 6- metcaptopurín ribonucleósido, 1,2,4-triazol-3-carboxamida ribonucleósido (Rivabirina), timidina, 2'-desoxiuridina, 5-fluoro-2'-desoxiuridina y 5-bromo-2'-desoxiuridina. Asimismo se han obtenido diversos nucleósidos con moderados rendimientos (30-50%), tales como la guanosina, 2-amino-6-cloro-purin ribonucleósido, 2-fluoroadenosina e hipoxantín arabinonucleósido. Finalrnente se han obtenido con escaso rendimiento (10-30%) los siguientes nucleósidos: adenín arabinonucleósido, 6-mercaptopurin arabinonucleósido, 1,2,4-triazol-3-carboxamida arabinonucleósido, 2'-desoxiinosina y 2-amino-6-cloro-purín 2'-desoxirribonucleósido. Luego se llevó a cabo la inrnovilización de la enzima sobreexpresada PPM, y la coinmovilización del sistema enzimático acoplado (PPM-NP). Por último, se realizó un estudio computacional para desarrollar una propuesta estructural de la PPM de E. coli y deterrninar aproximadarnente el sitio activo de la misma y el modo de unión de los ligandos.

Abstract:
This thesis presents a versatile and economic strategy for the synthesis of natural and modified nucleosides, using natural sugars as starting materials. The used chemoenzymatic approach is summarized in Figure 1. In first place, a general strategy for the preparation of furanoses 5-phosphate was developed by means of a selective protection-deprotection scheme using lipases, combined with chemical phosphorylation. Thus, D-ribose 5-phosphate, 2-deoxy-D-ribose 5-phosphate and D-arabinose 5-phosphate were synthesized. Then, the enzymatic synthesis of nucleosides was explored by coupling nucleoside phosphorylases (NPs) and phosphopentomutase (PPM). The latter, not being commercially available, had to be overexpressed and purified, and its activity optimized, in order to be used in nucleoside synthesis reactions. In this way, the following nucleosides were obtained in high yields (70-100 %): adenosine, inosine, 6-mercaptopurine ribonucleoside, 1,2,4-triazol-3-carboxamide ribonucleoside, thymidine, 2'-deoxyuridine, 5-fluoro-2'-deoxyuridine and 5-bromo-2'- deoxyuridine. Also, several nucleosides were obtained with moderate yields (30-SO%), such as: guanosine, 2-amino-6-chloropurine ribonucleoside, 2-fluoroadenosine and hypoxanthine arabinonucleoside. Finally, adenine arabinonucleoside, dmercaptopurine arabinonucleoside, 1- 1,2,4-triazol-3-carboxamide arabinonucleoside, 2'deoxyinosine and 2-amino-6-chloropurine 2'- deoxyribonucleoside, were obtained with low yields (10-30%). Then, the immobilization of the overexpressed PPM, and the co-immobilization of the coupled enzyme system (PPM-NP) was achieved. Finally, a computational study directed to explore PPM's structure, the approximate determination of its active site and binding mode of the ligands was accomplished.

Tanasijczuk, Andrés Jorge. "Medición de la sección eficaz de producción de single top en colisiones protón-antiprotón a 1.96 TeV" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presente tesis describe la búsqueda de quarks top producidos de manera simple (a diferencia de la producción en pares top-antitop) a través de un vértice de la interacción electrodébil en colisiones protón-antiprotón a una energía de centro de masa de raiz cuadrada de s=1:96 TeV. El análisis utiliza un total de 2.3 fb*-1 de datos colectados con el detector DØ en Fermilab, correspondientes a dos períodos diferentes de corrida del colisionador Tevatron. En el Tevatron son dos los canales que contribuyen a la producción simple de quarks top, el canal s y el canal t. En el canal s, la aniquilación de un quark y un antiquark produce un bosón W virtual, el cual luego decae en un quark top y un quark bottom. El quark top decae casi de manera exclusiva en un bosón W y un quark bottom. Aquí se consideran los estados finales en los que el bosón W decae leptónicamente en un electrón o un muón más un neutrino. Así, a nivel del detector, el estado final que caracteriza al canal s contiene un leptón, energía faltante que da cuenta del neutrino, y dos jets correspondientes a los dos quarks bottom. En el canal t, el estado final contiene un jet adicional proveniente de un quark liviano. Claramente, una reconstrucción precisa de los eventos requiere una medición precisa de la energía de los jets. Dado que la cantidad de eventos de fondo es enorme aún después de aplicar una selección de eventos, se utiliza una técnica de multivariables, redes neuronales bayesianas, para separar la señal del fondo. Para medir la sección eficaz de quarks top simples se computa una probabilidad bayesiana. Asumiendo que el exceso observado se debe a eventos de quarks top simples, la sección eficaz de producción de quarks top simples medida es sigma(p p -> tb + X, tqb + X) = 4:70*(+1,18) pb. (-0,93) El exceso observado se asocia con un valor-p de (3.2 +/- 2.3)x10*(-8), asumiendo la hipótesis de la presencia de únicamente eventos de fondo. Dicho valor-p corresponde a un exceso sobre el fondo de 5.4 desviaciones estándar para una densidad gaussiana. El valor-p computado usando la sección eficaz del modelo estándar de 3.46 pb para la señal es (22.7 +/- 0.6)x10*(-6), correspondiente a una significancia esperada de 4.08 desviaciones estándar.

Abstract:
This thesis describes a search for singly produced top quarks via an electroweak vertex in head-on proton-antiproton collisions at a center of mass energy of square root s = 1:96 TeV. The analysis uses a total of 2.3 fb*(-1) of data collected with the DØ detector at Fermilab, corresponding to two different run periods of the Tevatron collider. Two channels contribute to single top quark production at the Tevatron, the s-channel and the tchannel. In the s-channel, a virtual W boson is produced from the aniquilation of a quark and an antiquark and a top and a bottom quarks are produced from the W decay. The top quark decays almost exclusively into a W boson and a bottom quark. Final states are considered in which the W boson decays leptonically into an electron or a muon plus a neutrino. Thus, at the detector level, the final state characterizing the s-channel contains one lepton, missing energy accounting for the neutrino, and two jets from the two bottom quarks. In the t-channel, the final state has an additional jet coming from a light quark. Clearly, a precise reconstruction of the events requires a precise measurement of the energy of the jets. A multivariate technique, Bayesian neural networks, is used to extract the single top signal from the overwhelming background still left after event selection. A Bayesian likelihood probability is then computed to measure the single top cross section. Assuming the observed excess is due to single top events, the measured single top quark production cross section is sigma(p p -> tb + X, tqb + X) = 4:70*(+1,18) pb. (-0,93) The observed excess is associated with a p-value of (3.2 +/- 2.3)x10*(-8), assuming the background-only hypothesis. This p-value corresponds to an excess over background of 5.4 standard deviations for a Gaussian density. The p-value computed using the standard model signal cross section of 3.46 pb is (22.7 +/- 0.6)x10(-6), corresponding to an expected significance of 4.08 standard deviations.

Taminelli, Guillermo Luis. "Estudio de la expresión del gen CISD1 mediada por la actividad del CFTR" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva producida por mutaciones en el gen que codifica el canal de cloruro CFTR. Muy poco se sabe sobre los mecanismos moleculares involucrados en el daño celular producido por la falla del canal CFTR. Mediante la metodología de “Display Diferencial” o “Differential Display” (DD) observamos que la expresión del gen de origen nuclear CISD1 (CDGSH Iron Sulfur Domain 1) estaba disminuída en un modelo celular de FQ. Dado que el DD es una técnica que aporta evidencias pero es susceptible a falsos positivos y negativos, se decidió que el primer enfoque de esta Tesis fuera corroborar los resultados del DD. Para ello se utilizaron técnicas como RT-PCR semi cuantitativas y RT seguida de PCR en tiempo real para medir los niveles de expresión de CISD1 en distintos modelos celulares de FQ o con células que expresasen CFTR wt en presencia de inhibidores o activadores del CFTR. Ya que CISD1 es un gen que se encuentra en el genoma nuclear, el siguiente enfoque de esta Tesis fue determinar la localización subcelular de su producto. En este caso, se utilizó la expresión de una quimera unida a EGFP y mediante microscopía confocal pudimos demostrar que CISD1 codifica una proteína de localización mitocondrial. La localización mitocondrial fue confirmada por Wiley y col. Ellos además reportaron que CISD1 posee un grupo prostético del tipo 2Fe-2S en lugar de Zinc, como postulamos en un principio debido a su estructura primaria. La función de esta proteína es desconocida, pero estudios hechos en mitocondrias aisladas de células cardíacas de un ratón nulo (-/-) para mitoNEET (CISD1 en humanos) presentaban disminuída en un 30 % la capacidad máxima de la fosforilación oxidativa medida en estado 3. Además, en un trabajo anterior de Colca y colaboradores, se reportó que la proteína Minner-1 de ratón (producto de splicing alternativo de CISD1) co-inmuno precipitó con proteínas pertenecientes al complejo l de la cadena de transporte de electrones. Luego de que comprobamos su localización mitocondrial mediante la quimera GFP-CISD1, nuestro siguiente objetivo fue determinar si la actividad del complejo I mitocondrial se encontraba afectada por la expresión diferencial de CISD1 (un efecto observado en FQ por Grabriel Valdivieso en su Tesis, aún no publicado). Para tal fin medimos la actividad in gel del CIm mediante la técnica “Blue Native-PAGE” (BN-PAGE), en mitocondrias extraídas desde diferentes modelos experimentales de células FQ transfectadas con CISD1 salvaje y células Caco-2 (no FQ) transfectadas con un variante mutada de CISD1 obtenida por mutagénesis dirigida en las cisteínas 72 y 74 que fueron reemplazadas por serinas en un plásmido de expresión para eucariotas pcDNA 3.1(-). Así, observamos que la disminución significativa de la actividad del CIm reportada por Valdivieso y col. en distintos modelos FQ era restaurada por la expresión ectópica de CISD1, mientras que la variante mutada de CISD1 moduló negativamente la actividad normal del Clm en células Caco-2 (no FQ).

Abstract:
Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive disease caused by mutations in the gene encoding the CFTR chloride channel. Very little is known about the molecular mechanisms involved in the disease. Using the methodology of "Differential Display" (DD), we observed that the expression of the nuclear gene CISD1 (CDGSH Iron Sulfur Domain 1) was decreased in a cell model of CF. Since DD is a technique that might provide false positive or negative results, the results has to be validated by using other methods. Thus, the first objetive of this Thesis was to corroborate the DD results. For this purpose, we used semi-quantitative RT-PCR and RT followed by real-time PCR to measure the expression levels of CISD1 in different CF cell models. We also used non-CF cells in presence of CFTR inhibitors or activators. Since CISD1 is a gene found in the nuclear genome, the following focus of this thesis was to determine the subcellular location of the CISD1 product. We used the expression of a chimera containing CISD1 linked to EGFP and by using confocal microscopy we could show that CISD1 indeed encodes for a protein of mitochondrial localization, as the program PSORT previosuly predicted. The mitochondrial location was also confirmed by Wiley et al. They reported that CISD1 has a 2Fe-2S type prosthetic group instead of zinc as we originally thought. The function of this protein is unknown yet, but studies done in isolated mitochondria of cardiac cells from a null (-/-) mouse for mitoNEET (CISD1 in humans) had decreased by 30% the maximal capacity of oxidative phosphorylation measured in state 3. Furthermore, in a previous work, Colca et al. reported that the mouse protein Minner-1 co-immune precipitated with proteins belonging to the mCl of the electron transport chain (ETC). We also showed previously (Valdivieso et al), that the mitochondrial protein ND4, which belong to the mitocondrial complex I, was reducen in FQ. Therefore, our next goal was to determine whether mitochondrial complex I activity was affected by the differential expression of CISD1. To this end, we measured the in gel mCl activity using the "Blue Native-PAGE (BN-PAGE) technique, in mitochondria extracted from different experimental models of CF cells, transfected with CISD1 wt, and non- CF cells transfected with a mutated variant of CISD1. We observed that the significant decrease in the mCl activity reported by Valdivieso et al. in different CF models, can be partially restored by the CISD1 ectopic expression, while the mutated variant of CISD1 down modulated the normal mCl activity in non-CF Caco-2 cells.

Tamashiro, Alejandro Andrés. "Espectro y composición de los rayos cósmicos en el rango de energía de la transición galáctica-extragaláctica" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La atmósfera terrestre está siendo continuamente bombardeada por partículas que viajan a gran velocidad, las cuales contribuyen a la radiactividad observada en la superficie terrestre. A principios del siglo pasado, se pensó que esta radiación era originada por rayos gamma, ya que éstos constituían la radiación extraterrestre más energética y penetrante conocida en aquella época. Es por ello que los entes responsables de generar esta radiación fueron bautizados como “Rayos Cósmicos”. Hoy en día se sabe que la mayoría de estos rayos, son núcleos de átomos y sólo una pequeña porción son rayos gamma y electrones. Su espectro de energía se extiende a lo largo de once décadas desde 10 E9 eV hasta energías del orden de 10 E20 eV, energías mucho mayores a las alcanzadas por partículas en cualquier acelerador creado por el hombre. La zona de los rayos cósmicos con energías mayores a ~ 10 E 17 eV es objeto de estudio en la actualidad, debido a que todavía existen muchas preguntas sin responder acerca de su naturaleza, su composición química y espectro, los mecanismos que les permiten alcanzar energías macroscópicas, la ubicación y característica de los objetos astrofísicos donde se generan, su propagación a través del espacio, e inclusive cuestiones más trascendentales para la física, como su sección eficaz con nucléolos y fotones, temas aún cuestionados para estas energías tan elevadas. El Observatorio Pierre Auger es un experimento actualmente activo dedicado al estudio de los rayos cósmicos altamente energéticos, cuyo objetivo es brindar información destinada a responder los enigmas aún vigentes para estas energías. El observatorio fue originalmente diseñado para detectar rayos cósmicos aproximadamente mayores a 10 E18 eV. El flujo de los rayos cósmicos en este rango de energías es muy bajo (aproximadamente menor a una partícula/Km2 /sr/año). Es por ello que se planificó que el área de colección del Observatorio Pierre Auger alcance los 6000 Km2, para poder disponer de una cantidad de eventos con una estadística sin precedentes en este rango de energías. La característica distintiva de este observatorio es la de ser híbrido, disponiendo de dos tipos de detectores: el detector de telescopios de Fluorescencia y el arreglo de estaciones Cherenkov de Superficie, que le permite registrar el desarrollo longitudinal y las partículas al nivel de la superficie terrestre respectivamente, pertenecientes a la lluvia de partículas generadas por los rayos cósmicos en la atmósfera terrestre. El Observatorio Pierre Auger consta de un sitio en el hemisferio sur y otro en el norte. El Observatorio norte está en la fase de investigación y desarrollo y será construido en Larmar en el estado de Colorado en Estados Unidos. El observatorio sur se ubica en el departamento de Malargüe en la provincia de Mendoza y está formado por un arreglo triangular de 1600 estaciones Cherenkov de superficies espaciadas a 1500 metros, cubriendo un área de 3000 Km2, y por 24 telescopios de fluorescencia apuntando hacia el interior del arreglo de superficie distribuidos en cuatro emplazamientos en su perisferia. La etapa de construcción del Observatorio sur ha finalizado y ahora se encuentra en una etapa de incorporación de extensiones para bajar el umbral de detección a energías del orden del ~ 10 E17 eV, con el fin de poder estudiar la zona del espectro de energía donde existe una gran riqueza física, ya que se supone se encuentra la transición galáctica-extragaláctica del origen de los rayos cósmicos. Las extensiones mencionadas son dos, AMIGA y HEAT. La primera consiste en agregar dos nuevos arreglos más pequeños de estaciones de superficie con espaciamientos de 433 metros y 750 metros. La segunda de las extensiones ya está en funcionamiento y consiste en el agregado de tres telescopios de fluorescencia apuntando a la parte más alta del desarrollo de las lluvias atmosféricas. Las estaciones Cherenkov de los nuevos arreglos estarán acompañadas por contadores de muones que serán enterrados a sus lados. Esto permitirá medir directamente la componente muónica de las lluvias, información que será destinada a realizar estudios de composición del rayo cósmico primario. La calibración del Observatorio es fundamental para obtener el espectro de energía de los rayos cósmicos detectados. Durante mi tesis doctoral he trabajado en la calibración tanto de los detectores de fluorescencia como así también de las estaciones Cherenkov de superficie. La calibración absoluta del detector de fluorescencia consiste en excitar cada uno de los telescopios mediante una fuente de luz artificial extensa que se coloca sobre su apertura. He caracterizado esta fuente determinando el grado de uniformidad de su emisión de luz. Mediante el desarrollo de una simulación de trazado de rayos he estudiado los efectos de la desviación respecto de la emisión perfectamente uniforme y he desarrollado un método para corregir estos efectos. La calibración del detector de superficie se realiza utilizando la información de las señales generadas por los muones atmosféricos de fondo. Para ello he participado en estudios que utilizan cálculos de Monte Carlo y semi-analíticos para reproducir y entender estas señales. Explotando la característica híbrida del Observatorio Pierre Auger he desarrollado un método para obtener la aceptancia del detector de superficie a través de la utilización de datos reales del detector de fluorescencia, como alternativa a los métodos tradicionales que se basan en resultados obtenidos a través de simulaciones numéricas, las cuales dependen de los modelos de interacción hadrónica adoptados. Las simulaciones del proceso de adquisición y reconstrucción de los eventos producidos por los rayos cósmicos involucran: la generación de la lluvia, la respuesta de los instrumentos del observatorio, y la reconstrucción de los parámetros del evento. Disponer de una cadena de simulación y reconstrucción de los eventos es fundamental para entender y evaluar el comportamiento del Observatorio. Por ello implementé una simulación completa del Observatorio, que contempla los telescopios de HEAT, las estaciones del nuevo arreglo AMIGA, y la propagación de las partículas a través de la tierra hasta llegar a la profundidad de los contadores de muones. Los estudios realizados con este programa de simulación han contribuido con la etapa de investigación y desarrollo de los contadores de muones de la extensión AMIGA, proporcionando información para la determinación del lugar óptimo para la instalación de los nuevos arreglos de superficie, como así también para determinar a que profundidad deben ser enterrados los contadores de muones. Finalmente he realizado un estudio para determinar los observables más relevantes para la discriminación de la composición de los rayos cósmicos, basados en técnicas del análisis estadístico multivariado y del ámbito de la inteligencia artificial, hasta ahora no muy difundidos en el campo de la astrofísica. Con este análisis pude evaluar la importancia de los observables aportados por distintos tipos de detectores, el de fluorescencia, el de superficie y los contadores de muones, a la hora de distinguir la composición química del rayo cósmico primario.

Sánchez, Verónica Muriel. "Simulación atomística de procesos heterogéneos en superficies" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El propósito de esta tesis puede dividirse en dos incisos. Por un lado está enfocada en la caracterización de la adsorción y la reactividad sobre superficies de óxidos, tanto en interfases sólido-gas como sólido-líquido, a partir de un tratamiento computacional de primeros principios, basado en la teoría del funcional de la densidad (DFT) en el contexto de ondas planas y pseudopotenciales. Por otro lado, nuestro objetivo es desarrollar herramientas metodológicas en el marco de DFT, apropiadas para la descripción de materiales en en- tornos complejos, a fin de abordar una variedad de problemas en química y en ciencia de los materiales, tales como los considerados en esta tesis. Primeramente, hemos explorado diferencias de energía libre y barreras cinéticas involucradas en la disociación de agua y metanol sobre superficies de TiO_2 en fase gaseosa. Esto se ha llevado a cabo mediante la combinación de los métodos de Umbrella Sampling y de dinámica molecular de Car- Parrinello. En otra línea, hemos examinado la ionización de funciones aminopropilo en su- perficies de SiO_2 sustituidas, en el marco de una colaboración computacional-experimental para determinar el comportamiento ácido-base de materiales híbridos mesoporosos. Este análisis fue realizado tanto en fase gaseosa como en presencia de una bicapa de agua, para evaluar el efecto de una capa de hidratación en los resultados. Seguidamente, introduci- mos un modelo de solvente continuo diseñado para la realización de simulaciones de DFT en superficies de sólidos en contacto con una solución. Tal esquema—ideado en condi- ciones periódicas de contorno dentro del método de Car-Parrinello— es el primero que permite realizar dinámica molecular de primeros principios en la interfaz sólido-líquido. Esta metodología es utilizada a continuación para caracterizar los procesos de adsorción de moléculas pequeñas en la interfase TiO_2 -agua. Una via alternativa para la descrip- ción del entorno en las simulaciones de estructura electrónica es la metodología híbrida de Mecánica Cuántica-Mecánica Clásica (conocida por las siglas QM-MM), en la cual un número limitado de átomos (el soluto) es tratado mediante mecánica cuántica, mientras que el resto del sistema (el solvente) se describe usando un campo de fuerzas clásico. Esta técnica está ampliamente difundida en aplicaciones en química relacionadas con molécu- las o sistemas finitos. En esta tesis introducimos una formulación híbrida QM-MM en condiciones periódicas de contorno, concebida para la simulación de sistemas extendidos.

Abstract:
The purpose of this thesis is twofold: on one hand, it is aimed to characterize adsorption and reactivity on oxide surfaces both at the solid-gas and solid-liquid interfaces, from a first-principles computational standpoint, based in density functional theory (DFT) in a plane waves-pseudopotential setting. On the other hand, our objective is to develop methodological tools in a DFT framework, appropriate to describe materials in complex environments, to address a variety of problems in chemistry and materials science, such as those considered in this thesis. Firstly, we explore the free energy differences and kinetic barriers involved in the dissociation of water and methanol at TiO_2 surfaces in the gas phase. This is achieved through the combination of the Umbrella Sampling tech- nique and the Car-Parrinello molecular dynamics method. In a different line, we examine the ionization of aminopropyl functions in substituted SiO_2 surfaces, in the context of an experimental-computational collaboration to determine the acid-base behavior of hybrid mesoporous materials. This is done both in the gas phase and in the presence of a water bilayer, to assess the effect of an hydration shell in the results. Next, we present a contin- uum solvent model designed to perform DFT simulations at solid surfaces in contact with a solution. Such scheme—devised in periodic boundary conditions within the Car-Parrinello method—is the first one to allow for ab-initio molecular dynamics at solid-liquid inter- faces. This methodology is then applied to characterize the adsorption processes of small molecules at the TiO_2 -water interface. An alternative pathway to describe the environment in electronic structure calculations is the hybrid Quantum Mechanics-Molecular Mechan- ics (QM-MM) methodology, in which a limited number of atoms (the solute) are treated quantum-mechanically, whereas the rest of the system (the solvent) is described using clas- sical force-fields. This technique is widespread in chemistry applications for molecules or finite systems: in this thesis we introduce a QM-MM formulation in periodic boundary conditions, conceived for the simulation of extended systems.

Sztrum, Abelardo Andrés. "Susceptibilidad diferencial al níquel en distintos estadios del desarrollo embrio-larval de Rhinella (Bufo) arenarum" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La evaluación de la susceptibilidad estadio-dependiente al níquel (Ni) en embriones de Rhinella arenarum permitió reconocer al estadio de Gástrula como el más resistente y al de Circulación en la Aleta como el más susceptible. Los estadios larvales resultaron notablemente más resistentes que los embrionarios. Los efectos teratogénicos producidos por el Ni fueron máximos en los estadios de Blástula y Gástrula, siguiendo un patrón de dosis-respuesta, con importantes efectos en la morfogénesis y en la diferenciación celular. Se verificó una relación directa entre la susceptibilidad estadio-dependiente al Ni y la bioconcentración de este metal. Los parámetros asociados al metabolismo aeróbico y las defensas antioxidantes aumentaron en función del desarrollo embrionario, aunque el estrés oxidativo no sería un mecanismo principal en la toxicidad producida por Ni. A partir del estadio de Botón Caudal el Ni afectó el consumo de oxígeno, pudiendo éste parámetro ser utilizado como un biomarcador temprano y persistente de toxicidad al Ni. La metodología utilizada en la evaluación de la toxicidad producida por el Ni resultó también de utilidad para verificar las importantes variaciones en la susceptibilidad tanto de larvas provenientes de distintos sitios como de diferentes especies de la cuenca baja del Río Reconquista. Los bioensayos in situ y en laboratorio confirmaron el grave deterioro de la calidad de agua en el Canal Aliviador del Río Reconquista (Prov. de Buenos Aires), resultando los primeros más adecuados para evaluar la situación ambiental real

Abstract:
A stage-dependent susceptibility study on nickel (Ni) toxicity in Rhinella arenarum embryos identified Gastrulae stage as the most resistant and the Fin Circulation stage as the most susceptible. Larval stages were markedly more resistant than embryos. Within a dose-response relationship, the most adverse teratogenic effects were obtained at Blastulae and Gastrulae stages, with significant effects on both morphogenesis and cellular differentiation. The stage- dependent susceptibility was found to be directly related to the bioconcentration factor of the metal. Antioxidant defenses and aerobic metabolism parameters increased with the embryonic development, while no direct relation between oxidative stress and Ni toxicity was obtained. Ni affected the oxygen consumption resulting, form Tail Bud stage onwards, in a biomarker of its toxicity, anticipating lethal effects exerted by this heavy metal. The methodology employed for the evaluation of Ni toxicity was applied in order to study eventual adaptations to environmental pollution, as well as for a comparative assessment of the susceptibilities of different anurans larvae from different sites of the low Reconquista River basin. Both, in situ and bioassays conducted in laboratory conditions, confirmed the severe deterioration in the water quality of the Aliviador Channel of Reconquista River (Buenos Aires Province), resulting in the in situ bioassays as a more relevant method for toxicity assessment purposes

Soulignac, Francisco Juan. "Sobre grafos arco-circulares propios y helly" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Un modelo arco-circular es un par M=(C,A) donde C es un círculo y A es una familia de arcos de C. Si ningún arco se encuentra contenido en otro arco entonces decimos que M es propio, mientras que si A satisface la propiedad de Helly entonces decimos que M es Helly. Un grafo G es arco-circular si es el grafo de intersección de los arcos de un modelo arco-circular M. Si además M es propio (resp. Helly) entonces decimos que G es un grafo arco-circular propio (resp. Helly). Los grafos arco-circulares y sus subclases son estudiados con especial atención desde fines de la década de 1960, y al día de hoy la literatura al respecto es muy vasta. Esto se debe a la gran cantidad de aplicaciones que poseen en áreas tan diversas como las bases de datos, la genética, la arqueología, la psicología, la economía, etc., y a las propiedades de su estructura combinatoria. El problema de reconocimiento de grafos arco-circulares, y de varias de sus subclases, puede ser resuelto en tiempo lineal. Más aún, un modelo arco-circular puede ser generado en tiempo lineal. En esta tesis estudiamos la clase de grafos arco-circulares desde una perspectiva estructural y algorítmica, concentrándonos principalmente en las subclases de grafos arco-circulares propios y Helly.

Abstract:
A circular-arc model M=(C,A) is a circle C together with a collection A of arcs of C. If no arc is contained in any other, then M is a proper circular-arc model, and if A satisfies the Helly Property, then M is a Helly circular-arc model. A graph G is a circular-arc graph if it is the intersection graph of the arcs of a circular-arc model M. If in addition M is a proper (resp. Helly) circular-arc model then G is a proper (resp. Helly) circular-arc graph. Circular-arc graphs and their subclasses have been the object of a great deal of attention in the literature since the late 1960's. This is because of their applications in areas as diverse as databases, genetics, archeology, psychology, economics, among others, and because of their nice combinatorial structure. Linear time recognition algorithms have been described both for the general class and for some of its subclasses. Moreover, a circular-arc model can be obtained within the same amount of time. In this thesis we study circular-arc graphs from a structural and algorithmic point of view, with our focus on the proper and Helly subclasses.

Sorensson, Anna Amelia. "Análisis de retroalimentaciones suelo-atmósfera en América del Sur empleando un nuevo modelo climático regional" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo principal de la presente tesis es contribuir al entendimiento de la interacción entre la humedad del suelo y la atmósfera durante las fases de desarrollo y madurez del monzón Sudamericano. Con este propósito, se desarrolló y analizó un conjunto de experimentos de regionalización dinámica utilizando el modelo atmosférico regional de Rossby Centre (RCA). Este objetivo principal lleva asociado un segundo objetivo relacionado con la herramienta empleada para los experimentos, el modelo regional RCA. RCA fue desarrollado por el Rossby Centre de Suecia con el propósito de estudiar el clima europeo y nórdico, y para su implementación sobre Sudamérica la versión RCA3-E fue desarrollada y evaluada. El tercer objetivo de esta tesis es cuantificar la importancia de las parametrizaciones del clima simulado de Sudamérica. La implementación del modelo regional sobre Sudamérica es uno de los resultados más importantes de esta tesis. Muchos de los errores de la versión original empleada sobre Europa fueron corregidas cambiando la base de datos de superficie y las parametrizaciones de convección, microfísica y cobertura de nubes. La presente tesis contribuye además al entendimiento de la interacción entre la humedad del suelo y la atmósfera durante el monzón Sudamericano. Un invierno seco o húmedo puede tener influencias sobre el desarrollo del monzón tanto en la Amazonia como en los subtrópicos como resultado de alteraciones en los vientos continentales, así como también en el reciclaje de evapotranspiración. El acoplamiento entre la humedad del suelo y la precipitación está conectado al acoplamiento entre la humedad del suelo y la evapotranspiración durante la fase madura del mozón. La Cuenca de la Plata, el Noreste de Brasil y parte de la región del SACZ fueron identificadas como regiones de fuerte acoplamiento entre humedad de suelo y precipitación. La sensibilidad del modelo a parametrizaciones de superficie es máxima durante la primavera.

Abstract:
The primary objective of the present thesis is to contribute to the understanding of the soil moisture atmosphere interaction during the development and mature phases of the South American monsoon system. A set of dynamical downscaling experiments over the continent are developed and analyzed for this purpose, using the Rossby Centre Atmospheric regional model (RCA). The primary objective leads directly to secondary objectives related to the tool employed for these experiments, the regional model RCA. RCA was developed at Rossby Centre in Sweden to study European and Nordic climate, and for the implementation of the model over South America the model version employed for the thesis work, RCA3-E, was developed and evaluated. A third objective is to quantify the importance of the land surface parameterizations for the simulated climate of South America. The development of the regional model is one of the most important results of this thesis. Many of the biases in the original version employed over Europe (RCA3) could be corrected by changing the surface database and the parameterizatios of convection, microphysics and cloud cover. This thesis also contributed to the understanding of the interactions between soil moisture and atmosphere during the South American monsoon. The influence of a dry winter on the SAMS can have implications for the development of the monsoon both in the Amazon region and in the subtropics through alternations in the continental winds and by direct evapotranspiration recycling. The coupling between soil moisture and precipitation is connected to the coupling between soil moisture and evapotranspiration during the mature SAMS. The La Plata Basin, North Eastern Brazil and parts of the SACZ region were identified as regions with strong soil moisture precipitation coupling. The sensitivity of the model to land surface parameterizations was found to have a maximum during spring.

Soler Bistué, Alfonso Juan de la Cruz. "Dispersión del gen de resistencia a amikacina aac (6´)-Ib y estrategias para su inhibición por tecnología antisentido" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los antibióticos fueron uno de los grandes logros de la medicina del siglo pasado. Sin embargo, el (ab)uso intensivo de los mismos en los últimos 50 años ha generado la emergencia de bacterias de fenotipo resistente a varios antibióticos conocidas como cepas multirresistentes. Su aparición es causa de complicaciones y muertes de otra manera evitables y const ituye un problema de salud gravísimo a nivel nacional y global debido a que las pocas opciones de tratamiento existentes se están agotando. Por otro lado, los escasos antibióticos nuevos que se desarrollan al poco tiempo generan la emergencia de resistencias preexistentes en el metagenoma. En particular, es preocupante la creciente frecuencia de aparición en la clínica del gen aac(6')-Ib que genera resistencia a aminoglicósidos, entre ellos la amikacina. Una opción a explorar es el silenciamiento de genes de resistencia mediante tecnologías antisentido con el fin de prolongar la vida útil de los antibióticos existentes. En esta Tesis por un lado se exploran las plataformas genéticas en las que este gen se ha dispersado a nivel molecular y celular. Por otro lado se muestra que la expresión de pequeños ARNs antisentido, llamados secuencias guiadas externamente (EGS), es capaz de inhibir la expresión del gen de resistencia a aminoglucósidos aac(6')-Ib. Sin embargo, estas moléculas de ARN son sumamente susceptibles a las nucleasas. Se explora entonces también el uso de análogos de acidos nucleicos no hidrolizables como EGSs. Se muestra cómo la administración exógena de EGSs de cooligómeros de ácidos nucleicos cerrados (LNA) y ADN es también capaz de convertir un fenotipo resistente a un antibiótico a uno susceptible por un mecanismo mediado por ARNasa P. Estos resultados sugieren que el silenciamiento de genes de resistencia con cooligómeros de ADN y LNA podría servir para prolongar la utilidad de los antibióticos existentes.

Abstract:
Antibiotic discovery was one of the main achievements in medicine in the last century. However, their intensive (ab)use in the last 50 years has lead to the emergence of bacteria resistant to multiple drugs known as multiresistant strains. These strains cause treatment complications and avoidable deaths constituting a serious health issue at national and global level as the scarce treatment options are getting exhausted. On the other hand, the few new antibiotics generate resistance shortly after released as they act as selecting agents of the preexistent resistance genes present on the metagenome. Notably, the increasing prevalence of aac(6')-Ib in the clinical setting is a serious concern as it generatesresistance to several aminoglycosides including amikacin. Silencing of antimicrobial resistance genesusing antisense techniques is a good alternative for the rational design of drugs that may permit to prolong the usefulness of the currently employed antibiotics. In this Thesis work, the genetic platforms that allow aac(6')-Ib dispersion at the cellular and molecular level are explored. On the other hand, it is shown that expression of small antisense RNAs called external guide sequences (EGS) is capable of inhibiting the expression of this gene, rendering resistant strains, susceptible to amikacin. However, small RNA molecules such as EGSs are rapidly degraded by cellular nucleases. Hence, the use of non-hydrolysable nucleic acid analogs cooligomers as EGS is explored. The exogenous administration of a Locked Nucleic Acid (LNA)/DNA cooligomer as EGS is capable of converting an amikacin resistant phenotype to a susceptible one by an RNAse P mediated mechanism. These results suggest that gene silencing using LNA/DNA cooligomers might be useful to prolong the use of amikacin.

Solano, María Emilia. "Mecanismos moleculares involucrados en la activación de linfocitos T y su relación con procesos de androgenización incrementada" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El síndrome del ovario poliquístico (SOP) es un desorden endocrino que afecta a mujeres en edad reproductiva, constituyendo una de las primeras causas de infertilidad por anovulación. Asimismo, los andrógenos promueven la acumulación abdominal de la adiposidad que se relaciona a insulino-resistencia e inflamación crónica sistémica. Tanto a nivel ovárico como sistémico existen evidencias de que el sistema inmune contribuiría a la patogénesis del SOP. Por ello en este trabajo se estudiaron alteraciones inmunes, metabólicas y endocrinas en un modelo murino de SOP por androgenización con dehidroepiandrosterona (DHEA). A nivel sistémico, se observó mayor peso corporal, insulino-resistencia y parámetros de inflamación crónica incrementados Los quistes ováricos mostraron una expresión alterada de moléculas de adhesión que coincidió con infiltración leucocitaria, daño tisular, incremento en el estrés oxidativo y disminución de la prostaglandina E2 ovárica. In vitro, DHEA incrementó la expresión de moléculas de adhesión y marcadores de activación en leucocitos pero falló en estimular su proliferación y secreción de citoquinas. Estos resultados muestran que el sistema inmune colabora en los desórdenes ováricos y sistémicos inducidos en este modelo de SOP. DHEA promueve la activación leucocitaria in vitro pero no puede inducir por si misma una respuesta inflamatoria completa, resaltando la importancia del ambiente endócrino y metabólico en las alteraciones inmunes asociadas a SOP in vivo.

Abstract:
Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is an endocrine disease that affects women in their reproductive age. It is one of the main causes of anovulatory sterility and is associated to abdominal fat distribution, which often leads to insulin resistance and chronic inflammation. Increasing evidence points that immune system could contribute to PCOS symptoms both at systemic and ovarian levels. Therefore, the aim of this study was to study the alterations on immune, metabolic and endocrine features induced by dehydroepiandrosterone (DHEA) administration as a murine model of PCOS. The ovarian cysts showed an altered expression of adhesion molecules, that lead to increased leucocyte infiltration, tissue damage, oxidative stress and reduced levels of prostaglandin E2 in the ovary. Furthermore, the animals showed increased weight gain, insulin resistence and chronic inflammation markers. In vitro assays showed that DHEA per se stimulates the adhesion molecules and activation markers expression but fails to induce proliferation and cytokine production. Therefore, we conclude that immune system is involved both in the ovary and the systemic DHEA-induced alterations. DHEA itself promotes leucocytes activation but fails to elicit a complete inflammatory response, highlighting the role of the endocrine and metabolic environment in PCOS.

Smal, Clara. "Oligomerización de la oncoproteína E7 del papilomavirus humano y su interacción con el regulador de transcripción y replicación viral E2" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
E7 es una proteína de expresión temprana del papilomavirus humano. Es una proteína pequeña de aproximadamente 100 aa, que consta de dos dominios estructurales. El dominio C-terminal, globular y de plegamiento independiente, cuya estructura fue descrita recientemente y el dominio N-terminal, intrínsecamente desordenado. Se han descrito hasta el momento más de 40 blancos celulares que interaccionan con E7, siendo su blanco principal la proteína supresora de tumores Retinoblastoma (pRB) y hasta el momento no se ha reportado ninguna actividad enzimática. E7 se la denomina oncoproteína ya que posee la capacidad de transformar la célula que la expresa. En nuestro laboratorio se observó que esta proteína posee la capacidad de formar oligómeros de alto peso molecular, E7SOs, al desplazar el Zn que coordina el dominio C-terminal. Este oligómero comparte características con las fibras amiloides ya que posee una estructura del tipo beta repetitiva. E7SOs posee actividad chaperona tipo holdasa y se observó que este oligómero se localiza en el citosol de líneas celulares transformadas, en células transfectadas y en biopsias de tejidos cancerosos infectados con HPV. Los estudios realizados in vivo propusieron que esta partícula tiene la funcionalidad de almacenamiento de la oncoproteína. En el presente trabajo de tesis se estudió la ruta de formación de E7SOs. Se analizó la cinética de formación de los mismos monitoreando diferentes sondas que reportaron distintos arreglos estructurales en la reacción. Debido a que E7SOs posee una geometría esférica, se aplicó un modelo elaborado para estudiar el ensamblado de cápsides virales, que puede ser aplicado a la formación de oligómeros esféricos. Los resultados demostraron que E7SOs posee un ensamblado novedoso, ya que requiere de la formación previa del monómero desplegado de E7, como sucede en el ensamblado de fibras amiloides, pero no posee un oligómero de menor tamaño como núcleo de la reacción. Se definió a la ruta de formación de E7SOs como un ensamblado truncado hacía la formación de fibras amiloides. Muchos blancos celulares se han descrito para E7, no obstante en la mayoría de estas interacciones se desconoce su consecuencia biológica y poco se sabe de las características de estas interacciones, como regiones de unión, competencia por otros ligandos, etc. Por otro lado, la única interacción analizada en detalle es la que E7 realiza con su principal blanco pRB. En este trabajo de tesis se halló y se caracterizó in vitro, bajo diferentes técnicas biofísicas, la interacción de E7 con un nuevo blanco, la proteína E2. E2 es codificada por el genoma viral y es el factor de transcripción negativo de E7. En consecuencia con los resultados obtenidos de este estudio, se propuso que la interacción de estas proteínas presenta un mecanismo de ajuste en la concentración de las mismas dentro de las células. Esto propiciaría la modificación del ambiente celular dando lugar a diferentes estadios de la infección viral y su consecuencia con la proliferación celular y la cancerogénesis carcinogénesis relacionada con el virus.

Abstract:
E7 is a papillomavirus early protein. It is a small protein of approximately 100 aa consisting of two structural domains. The C-terminal domain, which structure has been recently described, is globular and with independent folding and the N-terminal domain which is intrinsically disordered. Until present more than 40 cellular targets have been described to interact with E7. The main target is the tumor supresor protein Retinoblastoma (pRB) and up to present no enzymatic activity has been reported. E7 is considered an oncoprotein because it has the ability to transform the cells where it is expressed. In our laboratory we observed that this protein is able to form high molecular weight oligomers, E7SOs, when it displaces the Zn atom that coordinates the C- terminal domain. These oligomers share characteristics with amyloid fibers because they have the beta repetitive kind of structure. E7SOs show holdase chaperone activity and it was observed that these oligomers are found in the cytosol of transformed cellular lines, in transfected cells and in biopsies of cancerous tissues infected with HPV. In vivo studies suggest that these particles have the function of storing the oncoprotein. In the present Thesis the formation pathway of E7SOs has been studied. The kinetics of formation of these oligomers was analyzed monitoring different probes which reported different structural arrangements in the reaction. Due to the fact that E7SOs have a spherical geometry, an elaborated model was applied to study the assembly of viral capsids that can also be applied to the formation of spherical oligomers. The results showed that E7SOs have a novel assembly They require the previous formation of E7 displayed monomer, as it happens in the assembly of amyloid fibers, but they lack a smaller oligomer as core of the reaction. It has been defined that the E7SOs pathway formation is a truncated assembly toward the formation of amyloid fibers. Many cellular targets have been reported for E7. However, in most of these interactions the biological consequence is unknown and very little is known about the characteristics of these interactions, like binding regions, competition for other ligands, etc. On the other hand, the only interaction analyzed in detail is that of E7 with its main target pRB. In this Thesis the interaction of E7 with a new target, the E2 protein was found and characterized in vitro, using different biophysics techniques. E2 is codified by the viral genome and is E7 negative transcription factor. In consequence with the results obtained in this study, we propose that the interaction of these two proteins shows a mechanism of adjustment of their concentrations in the cells. This might favor the modification of the cellular environment giving place to different stages in the viral infection and its consequences with the cellular proliferation and the carcinogenesis related to the virus.

Schenk, Marcela Liliana. "Preservación de productos frutales mínimamente procesados mediante la aplicación de luz UV y su combinación con otras tecnologías emergentes" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En los últimos años se ha explorado el uso de tecnologías de preservación innovadoras que involucran procesos no-térmicos con el objeto de reemplazar la severidad de los tratamientos térmicos. El objetivo general de este trabajo fue evaluar la eficiencia de la aplicación única de luz ultravioleta ó combinada con la utilización de peróxido de hidrógeno (H2O2) en tratamientos multifactoriales para inhibir y/o inactivar microorganismos patógenos y deteriorativos de derivados frutales. Se estudió la cinética de inactivación de inóculos simples y mixtos de diversos microorganismos en rodajas de pera y manzana con y sin piel, en función de la dosis de luz UV-C. Las curvas de inactivación se modelaron aplicando un modelo primario tipo Weibull. Para algunos casos se analizaron los efectos fisiológicos y estructurales mediante citometría de flujo y microscopía electrónica de transmisión. Además se evaluó la flora nativa, se realizaron estudios sensoriales con consumidores y se midió la evolución del color de las rodajas de pera procesadas según el tratamiento combinado propuesto: inmersión en H2O2 (3%; pH 3,0; 5 min) y posterior irradiación con luz UV-C (3,7 kJ/m2), y luz UV-C sólo, durante 7 días de almacenamiento en refrigeración (4°C). El tipo de matriz influyó en la inactivación microbiana observada, así como también el tipo de inóculo aplicado, siendo más efectiva la inactivación en pera sin piel. Los estudios de citometría de flujo mostraron que en inóculos tratados en medio líquido se observó pérdida de actividad metabólica y de integridad de membrana celular. Además, las observaciones en TEM evidenciaron cambios en la pared celular y en la granulometría citoplasmática. Los estudios realizados sobre flora nativa, color y sensorial demostraron que las modificaciones introducidas en las rodajas de pera por el tratamiento propuesto fueron leves, obteniendo un producto microbiológicamente seguro y de buena calidad organoléptica.

Abstract:
In the past decade the use of innovative preservation technologies involving non-thermal processes has been studied in order to replace the severity of heat treatment. The overall objective of this study was to evaluate the efficiency of ultraviolet light applied alone or in combination with the use of hydrogen peroxide in multifactor treatments to inhibit and/or inactivate pathogenic and spoilage microorganisms in fruit derivatives. The inactivation kinetics of single and mixed inocula of microorganisms in apple and pear slices with and without skin at different doses of UV-C was studied. Inactivation curves were modelled using a primary type Weibull model. The analysis of the structural and physiological cell effects for some process conditions were performed by flow cytometry and transmission electron microscopy. Native flora was also evaluated and sensory studies with consumers were conducted. Colour changes in processed pear slices were measured according to the proposed combined treatments: immersion in H2O2 (3%; pH 3,0; 5 min) followed by UV-C light (3,7 kJ/m2), and UV-C light alone, stored for 7 days at refrigeration temperature (4ºC). Inactivation of microorganisms was influenced by the type of fruit and microorganism, being more effective in skinned pears. Loss of metabolic activity and membrane integrity were observed in UV-C treated cells by flow cytometry. Microscopic observations also showed changes in cell wall and cytoplasmic granulometry. Analysis of native flora, colour and sensory properties of pear slices processed by the combined UV-C/hydrogen peroxide treatment ratified a product microbiologically safe and with good organoleptic quality.

Sarnacki, Sebastián Hernán. "Mutantes de Salmonella enterica en el gen de ADN adenina metil transferasa (dam). ¿Cepas ideales para la construccion de vacunas?" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La enzima ADN adenina metiltransferasa (Dam) es un regulador global de la expresión de genes en bacterias. En estudios previos, las mutantes dam de Salmonella Typhimurium han sido postuladas como excelentes cepas vacunales por su atenuación y su capacidad protectiva. Por extensión, la mutación en el gen dam se ha propuesto como método de atenuación para una gran variedad de especies bacterianas. Dado nuestro interés en el estudio y prevención de las infecciones por Salmonella Enteritidis (serovariedad que con mayor frecuencia causa enterocolitis en humanos) generamos mutantes dam de dicha serovariedad, mediante mutagénesis por transposición y por mutagénesis dirigida por reemplazo. Curiosamente, los estudios en ratones Balb/c mostraron que las mutantes dam de S. Enteritidis, son sólo moderadas en su atenuación, ya que un 30 % de los animales inoculados por la vía intragástrica con la mutante muere dentro de las 3 semanas. Por otro lado, la protección de los animales inmunizados, contra el desafío con la cepa virulenta de Salmonella Enteritidis #5694, no alcanzó niveles aceptables. Dado el papel crítico que los macrófagos desempeñan en la inmunidad innata contra Salmonella, analizamos la interacción entre la mutante SEΔdam y la línea celular de macrófagos RAW 264.7. Mediante ensayos de Western blot pudo determinarse que la expresión de moléculas proinflamatorias en los macrófagos infectados con SEΔdam está atenuada. Como en parte, la activación de la respuesta inflamatoria del macrófago se genera a través de antígenos bacterianos, nos preguntamos si la carencia de Dam podría estar afectando la estructura o función de ciertas proteínas efectoras o del lipopolisacárido (LPS) de Salmonella Enteritidis. Estudiamos entonces la participación de la proteína Dam sobre la síntesis y secreción de dos proteínas efectoras dependientes del Sistema de Secreción Tipo Tres (SSTT-1). A este fin debieron construirse y caracterizarse mutantes dam de Salmonella portadoras de genes sopA y sopB marcados con el epítope FLAG. Los resultados obtenidos mostraron que la mutante dam posee una reducida expresión y secreción de las proteínas de invasión SopA y SopB, dependientes de la isla de patogenicidad 1 de Salmonella (SPI- 1). Este hallazgo indica que la metilación por Dam participa en la regulación de la síntesis y secreción de SopA y SopB en Salmonella como un activador de estos genes. Investigamos también la participación de la enzima Dam en la síntesis del LPS de S. Enteritidis. Encontramos que la mutante SEΔdam sintetiza LPS con un antígeno polisacárido O de cadenas más cortas que el de la cepa parental. Dado que Wzz es responsable en la distribución del largo de cadena del antígeno O, analizamos si la metilación por Dam está involucrada en la regulación de la expresión del gen wzz. El análisis densitométrico de Western Blot con muestras de extractos proteicos mostró que la cantidad relativa de proteína Wzz producida por SEΔdam, es tres veces menor que la producida por la cepa parental. Concomitantemente, la actividad del promotor de wzz en SEΔdam medida con fusión transcripcional cromosómica con un gen reportero y la cantidad de ARNm medido por RT-PCR cuantitativa a tiempo real se vieron reducidas. También se redujo la expresión de los genes pmrA y rcsB (dos reguladores de wzz) en la mutante dam. Sin embargo, el defecto de SEΔdam en la distribución del largo de cadena del antígeno O, sólo se asoció con RcsB. Nuestros resultados demuestran que la metilación por Dam regula la síntesis del LPS en Salmonella. En conjunto, los resultados obtenidos indican que la metilación por Dam en Salmonella regula funciones relacionadas íntimamente con la interacción huésped-bacteria. Por lo tanto, la deleción del gen dam como método de atenuación en cepas vacunales debe ser analizada críticamente.

Abstract:
DNA adenine methyltransferase (Dam) enzyme is a global regulator of bacterial gene expression. In previous studies, Salmonella Typhimurium dam mutants have been proposed as excellent vaccines strains because of their characteristic of attenuation and protective capabilities. By extension, dam gene mutation has been proposed as a method for attenuating a variety of bacterial species. Given our interest in the study and prevention of infections with Salmonella Enteritidis, a serotype that most commonly causes enterocolitis in humans, we generate S. Enteritidis dam mutants by transposition and site-directed mutagenesis by replacement. Interestingly, studies in Balb/c mice showed that the S. Enteritidis dam mutants, are only moderate in their attenuation. Thirty percent (30%) of animals inoculated by the intragastric route with the mutant died within 3 weeks. Moreover, the protection of immunized animals challenge with the virulent strain of Salmonella Enteritidis # 5694, did not reach acceptable levels. Given the critical role that macrophages play in innate immunity against Salmonella, we analyzed the interaction between SEΔdam mutant and macrophage cell line RAW 264.7. By Western blot, we found that the expression of inflammatory molecules in macrophages infected with SEΔdam is attenuated. As activation of the inflammatory response of macrophages is generated in part by bacterial antigens, we wondered whether the lack of Dam might be affecting the structure or function of certain effector proteins or lipopolysaccharide (LPS) of Salmonella Enteritidis. Therefore, we studied the involvement of Dam on protein synthesis and secretion of two effector proteins both dependent on type 3 secretion systems. To this purpose, we constructed and characterized Salmonella dam mutants carrying sopA and sopB genes tagged with the FLAG epitope. The results showed that the dam mutant has a reduced expression and secretion of SopA and SopB invasion proteins, which are Salmonella pathogenicity island (SPI-1)-dependent. This finding indicates that Dam methylation is involved in the regulation of the synthesis and secretion of SopA and SopB proteins in Salmonella as an upregulator of these genes. We also investigated the involvement of the Dam enzyme in S. Enteritidis LPS synthesis. We found that compared to the parental strain, a SEΔdam mutant synthesized LPS with shorter O-antigen polysaccharide chain lengths. Since Wzz is responsible for the chain length distribution of O-antigen, we investigated whether Dam methylation is involved in regulating wzz gene expression. Densitometric analysis of Western blot with samples of protein extracts showed that the relative amount of Wzz protein produced by SEΔdam is three-fold lower than that of the parental strain. Concomitantly, wzz gene promoter activity in SEΔdam was reduced, as measured by chromosomal transcriptional fusion with a reporter gene, and this result was further confirmed by the amount of mRNA as measured by RT-PCR quantitative real-time analysis. Also, the expression of pmrA and rcsB genes (two wzz gene regulators) in the dam mutant was reduced. However, the defect in the chain length distribution of O-antigen of the SEΔdam, was associated only with RcsB. Our results show that Dam methylation regulates the LPS synthesis of Salmonella. Overall, these results indicate that Dam methylation in Salmonella regulates functions related intimately to the host-bacteria interaction. Therefore, the dam gene deletion as a method of attenuation of vaccine strains must be analyzed critically.

Santagapita, Patricio Román. "Estabilidad de enzimas en medios de distinta movilidad molecular. Impacto de interacciones con azúcares y biopolímeros y de la encapsulación" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo del presente trabajo fue analizar la estabilidad enzimática en medios de distinta movilidad molecular y las interacciones intermoleculares específicas que la favorecen. Se estudió el efecto de azúcares (trehalosa), sales y biopolímeros modificados con β-ciclodextrinas (CD) sobre las propiedades fisicoquímicas de la matriz y sobre la actividad enzimática. Se analizó también el uso de un dendrímero basado en polietilenglicol funcionalizado con CD como excipiente de matrices continuas, y se estudió la influencia de la confinación en cápsulas de polielectrolitos sobre la estabilidad enzimática y su liberación. Las enzimas utilizadas como sistemas modelo (lactasa, catalasa e invertasa) son de importancia biotecnológica. La estabilidad enzimática se analizó en distintas condiciones de humedad y temperatura de almacenamiento, en relación con la temperatura de transición vítrea y el estado físicoquímico de la matriz. La presencia de electrolitos afectó la cinética de varios fenómenos de relajación en los sistemas de trehalosa. El retraso de la cristalización de trehalosa con sales debe realizarse con mucha precaución ya que una vez que ésta cristaliza, la enzima permanece en un medio amorfo enriquecido en sales, lo que lleva a la pérdida de su actividad. Los estudios realizados mostraron cómo combinaciones covalentes relativamente simples de biopolímeros con CD pueden afectar significativamente sus propiedades y permitieron profundizar acerca del papel que juegan interacciones específicas biopolímero-enzima sobre la estabilidad enzimática en modelos deshidratados. Estas interacciones involucrarían uniones tanto de tipo electrostáticas como hidrofóbicas, siendo el efecto sobre la estabilización influenciado también por el estado físico de la matriz. Las cápsulas de polielectrolitos representaron una alternativa interesante para la conservación enzimática, especialmente mediante su deshidratación con la adición de trehalosa. Además, mediante cambios en el pH, en la composición, y el grado de hidratación es posible controlar la liberación de la enzima. Los resultados de esta tesis pueden contribuir a la selección de excipientes para la formulación de medios de preservación, que son valiosos para varias aplicaciones tecnológicas, y además para recomendar condiciones propicias para obtener comportamientos óptimos en sistemas complejos.

Abstract:
The objective of present work was to analyze the stability of enzymes as a function of the molecular mobility and specific intermolecular interaction. The effect of sugars (trehalose), salts and biopolymers modified with β-cyclodextrins (CD) was analyzed over the enzymatic activity and over the physico-chemical properties of the medium in which they are immersed. A dendrimer based on polyethylenglycol and later functionalized with CD was tested as excipient in continuos matrices. The influence of the enzyme encapsulation in polyelectrolyte capsules was studied over the enzyme stability and its release. Enzymes of biotechnological interest were used as model systems (lactase, catalase and invertase). Enzyme stability was analyzed under different conditions of humidity and temperature of storage, in relation to the glass transition temperature and the physico-chemical state of the matrix. The kinetics of relaxation phenomena of trehalose systems were affected by the presence of electrolytes. The delay of trehalose crystallization must be carefully conducted, since when trehalose crystallizes, a concentration of the salt in the amorphous matrix unstabilized the enzyme. The results showed how a relatively simple covalent combination of biopolymers with CD can significantly affect their properties and provide further insights about the role played by specific interactions biopolymer-enzyme on enzyme stability in dehydrated models. These interactions would involve both electrostatic and hydrophobic bonds, being the effect on the stabilization also influenced by the physical state of the matrix. Polyelectrolyte capsules also represented an interesting alternative to enzyme conservation, especially through its dehydration with trehalose. Besides, it is possible to control enzyme release changing pH of the release medium, capsule composition and its hydration degree. The results of the present thesis contribute to select adequate materials to generate preservation media, which are valuable for many technological applications and for recommending adequate conditions to obtain optimum behaviour in complex systems.

Sander, Valeria Analía. "Rol de la hiperandrogenización en la presentación antigénica y su consecuencia en la funcionalidad lútea y activación de linfocitos T. Acción de la metformina como tratamiento. Mecanismos moleculares involucrados" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Síndrome del Ovario Poliquístico (SOP) es la endocrinopatía más frecuente en las mujeres en edad reproductiva y constituye la causa más común de esterilidad femenina. Su característica principal es el hiperandrogenismo, una condición que ha sido asociada a la insuficiencia lútea y a un incrementado riesgo de pérdida de la preñez temprana. A pesar de la relevancia del cuerpo lúteo (CL) en la reproducción, prácticamente no existen investigaciones abocadas al estudio de esta glándula en SOP. Por ello, en este trabajo evaluamos los mecanismos por los cuales el exceso de andrógenos modula la funcionalidad e involución del CL, en un modelo murino de androgenización con dehidroepiandrosterona (DHEA). También determinamos la capacidad de metformina de revertir dichas alteraciones. Durante la etapa funcional del CL, el hiperandrogenismo indujo la disminución de la progesterona sérica mediante la modulación de las enzimas esteroidogénicas. Por el contrario, la administración de DHEA durante la regresión funcional provocó el “rescate” del CL, incrementando los niveles de progesterona mediante la regulación de su biosíntesis y degradación, su acción anti-oxidante y la modulación de las prostaglandinas. El hiperandrogenismo durante la regresión estructural incrementó la apoptosis y reguló la expresión de moléculas involucradas en la presentación antigénica en las células del CL. La metformina previno muchos de los efectos del hiperandrogenismo en la luteólisis, pero no evitó la disfuncionalidad lútea en su etapa funcional. Concluimos que el hiperandrogenismo posee un efecto dual sobre el CL, dependiendo del estado de desarrollo lúteo en el cuál actúe, generando estados patológicos y disfuncionales, la mayoría de los cuales pueden ser evitados por la metformina.

Abstract:
Polycystic ovary syndrome (PCOS), the most frequent endocrine disease that affects women of childbearing age, constitutes the major cause of female infertility. The main characteristic of PCOS is hyperandrogenism, a condition that has been associated to luteal insuficience and high rates of early pregnancy loss. In spite of the relevance of corpus luteum (CL) in reproduction, research about the influence of PCOS on luteal function is scarce. Therefore, the aim of the present study was to assess the mechanisms by which hyperandrogenization affects the lifespan of CL in a dehydroepiandrosterone (DHEA)-androgenized murine model. We also investigate the action of metformin in preventing ovarian dysfunctions produced by DHEA. During the functional stage of CL, hyperandrogenism induced a decline in serum progesterone levels, mainly due to the modulation of steroidogenic enzymes. On the contrary, treatment with DHEA during functional regression “rescued” CL from luteolysis, increased progesterone levels by regulating its biosyntheses and degradation, modulating prostaglandins and acting as an anti-oxidant agent. Hyperandrogenization during structural regression increased apoptosis and regulated molecules envolved in antigen presentation. Metformin prevented most of the effects of hyperandrogenization at both stages of luteal regression, but did not prevent luteal dysfunction at functional stage. Therefore, we conclude that hyperandrogenism has a dual effect on CL, depending on the stage of its development, leading to pathological and dysfunctional conditions, most of which metformin is able to restore.

Salvia, María Mercedes. "Aporte de la teledetección al estudio del funcionamiento del macrosistema Delta del Paraná: análisis de series de tiempo y eventos extremos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Delta del río Paraná es un macrosistema de humedal, uno de los más importantes en la República Argentina. Los problemas de relevamiento en grandes humedales condicionan la obtención de información sobre las condiciones ambientales que definen la biodiversidad y ecología de estos ecosistemas. En consecuencia, resultan de particular interés los relevamientos a partir de datos de sensores remotos. En este marco esta tesis analiza el aporte de la teledetección al estudio funcional de humedales en general, y del Delta del río Paraná en particular, haciendo hincapié en cómo y en qué condiciones el análisis de datos de sistemas de observación terrestre de escala regional permite monitorear los procesos en un área dada. Con este objetivo, se estudia la potencialidad de los sensores ópticos y de radar para el estudio y evaluación de eventos extremos, y la utilidad de series de tiempo de índices verdes para el monitoreo de los patrones de productividad presentes en el área de estudio. Como resultado de esta tesis se obtuvo un enfoque metodológico para el estudio de macrosistemas de humedal por medio de teledetección óptica y de radar. Además, se produjo el primer mapa regional de tipos fisonómicos de vegetación, mapas de inundación del evento ENOS 2006-2007, mapas de áreas afectadas por los incendios masivos de 2008, y de la recuperación de la vegetación luego del evento.

Abstract:
Paraná River Delta is one of the most important wetland macrosystems of Argentina. There is a well known set of logistic problems related to large wetlands survey that limits the capacity to monitor the environmental conditions that define their ecology and biodiversity. Therefore, remote sensing monitoring is a particularly important tool to assess ecosystem state and functions. This thesis analyses the contribution of remote sensing data to functional studies of wetland in general, and of Paraná River Delta in particular. To this aim, we evaluate the use of optical and SAR data for extreme events assessment, and the usefulness of vegetation index temporal series for the estimation of productivity patterns. As a result, a methodological approach for wetland macrosystem monitoring is proposed. Furthermore, the first map of vegetation physiognomic types, two flooded area maps for 2006-2007 ENSO events, a map of the burnt areas related to the massive fire of 2008, and a vegetation recovery map were obtained.

Salvatierra Colussi, Edgardo Enrique. "Rol de la proteína SPARC en los mecanismos de angiogénesis" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Proteína Secretada Acídica y Rica en Cisteínas (SPARC en Ingles) ha sido asociada con efectos pro- y anti-angiogénicos. En esta tesis inicialmente se ensayó la actividad de la proteína SPARC de diferentes fuentes y todas fueron capaces de inhibir la proliferación, adhesión y migración de células endoteliales. SPARC obtenida de melanoma produjo un efecto bifásico en la proliferación de fibroblastos, aunque sobre las células tumorales no demostró efectos detectables. Por otro lado, SPARC fue capaz de modular la migración de células endoteliales inducida por factores angiogénicos como VEGF y PDGF. A bajas concentraciones SPARC estimulo la migración de las células endoteliales y a altas la inhibió. En esta última condición dicho efecto estuvo acompañado por el incremento en la capacidad de inducir la diferenciación de las células endoteliales, independientemente de los factores presentes en el medio. Además, encontramos que los niveles de SPARC disminuyen en hipoxia sugiriendo que la modulación de los niveles de SPARC por la tensión de oxigeno sería responsable de los efectos moduladores de la angiogénesis tumoral. Nuestros datos demuestran que SPARC puede actuar como un factor proangiogénico o anti-angiogénico en función de su concentración y los factores con los que interactúa. Hemos demostrado que tiene un rol único en la modulación de la angiogénesis tumoral actuando sobre la diferenciación, migración y proliferación de las células endoteliales.

Abstract:
The Secreted protein acidic and rich in cysteine (SPARC in English) has been associated with pro- and anti-angiogenic effects. Here we evaluated the activity of SPARC obtained from different sources and established that each one of them was able to inhibit the proliferation, adhesion and migration of endothelial cells. SPARC obtained from melanoma cells exhibited a biphasic effect on fibroblasts proliferation but has no detectable effects on tumor cells. However, it was able to modulate endothelial cell migration induced by different angiogenic factors such as VEGF and PDGF. At low concentrations SPARC stimulates the migration of endothelial cells but while at higher concentrations SPARC inhibited endothelial cell migration induced by the proangiogenic factors. High SPARC concentrations induced endothelial cell differentiation, regardless of the factors in the environment. Interestingly, SPARC production is down regulated under hypoxia which in turns promotes endothelial migration. Thus, it appears that the modulation of SPARC levels by oxygen tension could be responsible for the pro or anti-angiogenic effects of SPARC. Our data show that SPARC may act as a pro-angiogenic factor or anti-angiogenic depending on the tumor oxygen levels and factors encountered in tumor environment. We have shown that it has a unique role in the modulation of tumor angiogenesis by acting on the differentiation, migration and proliferation of endothelial cells.

Salibe, Mariano César. "Modificación de perfiles de expresión en el sistema nervioso central, en respuesta a enfermedades en la periferia" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Una de las principales funciones del sistema nervioso es el mantenimiento de la homeostasis, detectando y reaccionado frente a señales que superan un determinado umbral. El cerebro es capaz de detectar eventos inmunes en la periferia ya sea a través de compuestos solubles o a través del nervio vago y de reaccionar mediante la activación del eje hipotálamo-pituitaria- adrenal, modulando la respuesta inmune. La progresión tumoral se caracteriza por una interacción con el sistema inmune y por poseer una alta tasa de mutaciones. El período comprendido entre el inicio y de un tumor, y la detección clínica, puede ser de entre 10 y 15 años. Durante este tiempo cada una de las mutaciones podría convertirse en una señal de alarma. En la actualidad ha sido demostrado que la presencia de un tumor en la periferia induce cambios en el metabolismo de neurotransmisores en el cerebro, sin embargo se desconoce si a su vez existen cambios a nivel transcripcional. En esta Tesis se demostró mediante la utilización de la tecnología de microarreglos en tres modelos tumorales, que la presencia de células tumorales en crecimiento en la periferia induce cambios en los niveles de expresión de determinados grupos de genes en el cerebro, pero no en un órgano periférico como el hígado. A su vez se demostró la existencia de cambios en niveles de expresión en el cerebro como consecuencia del desarrollo de artritis reumatoide. Estos cambios fueron específicos para cada tipo de tumor y para cada enfermedad. Estos resultados demuestran que señales periféricas derivadas del desarrollo de un tumor o de una enfermedad como artritis son capaces de inducir cambios en el perfil de expresión del cerebro.

Abstract:
The main function of the nervous system is to maintain homeostasis by sensing and reacting to signals that reach a certain threshold. For example, the brain can sense immune peripheral events through soluble compounds or the vagus nerve and can react through activation of the hypothalamus-pituitary-adrenal axis, resulting in the modulation of an ongoing immune response. Cancer progression is characterized by interaction with the immune system and by high mutation rates, with each mutation potentially promoting alarm signals during the 10 to 15 years of cancer development before clinical detection. A peripheral tumor is able to alter the metabolism rate of certain neurotransmitters; however, it is not known whether this can also promote changes in the central nervous system transcriptome. Using genome-wide expression analysis in three mouse tumour models, we showed that a tumor growing at the periphery can indeed promote changes in the expression levels of defined sets of genes in the brain, but not in the liver. An other peripheral disease such as Arthritis also promoted transcriptional changes in the brain. These changes were cancer type and disease type specific, and involved specific signalling pathways. These findings prove that cancer and arthritis-derived signals are effective in eliciting specific changes in gene expression in discrete brain regions.

Salariato, Diego Leonel. "Filogenia y evolución de la subtribu Melinidinae (Paniceae: panicoideae: poaceae)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La subtribu Melinidinae (Poaceae: Panicoideae: Paniceae) incluye 13 géneros y aproximadamente 190 especies, las cuales se hallan caracterizadas por presentar la vía fotosintética C4 PCK y una anatomía foliar distintiva. El objetivo de este trabajo es estudiar las relaciones filogenéticas y la historia evolutiva de este grupo. Para esto se propone analizar a la subtribu desde tres diferentes niveles taxonómicos. En una primera parte se estudia la relación de Melinidinae con los demás integrantes de la tribu Paniceae, poniendo a prueba su monofilia, resolviendo la relación entre la subtribu y su grupo hermano y reconstruyendo la vía fotosintética ancestral. En una segunda parte se estudian las relaciones filogenéticas entre los distintos géneros incluidos en Melinidinae y se reconstruye la tendencia evolutiva que presenta la subtribu en cuanto al grado de homogenización de sus inflorescencias. Finalmente, se analiza en la tercera parte del trabajo las relaciones existentes entre las especies de Urochloa, género con mayor número de especies dentro de la subtribu, con el objetivo de definir grupos infragenéricos naturales y caracteres morfológicos de valor taxonómico. En cada sección se utilizan métodos de análisis y caracteres adecuados para el nivel taxonómico que se estudia. Los resultados obtenidos muestran que la subtribu Melinidinae resulta monofilética cuando Urochloa venosa es excluida de ésta, mientras que la asignación del grupo y del tipo fotosintético ancestral son ambiguas. Los géneros Urochloa y Eriochloa resultan parafileticos y/o polifiléticos, mientras que géneros como Megathyrsus, Melinis y Moorochloa son monofiléticos. La homogenización de las inflorescencias en la subtribu parece ser la tendencia evolutiva favorecida por sobre el proceso inverso. Finalmente, el género Urochloa es, en su actual circunscripción, un grupo artificial carente de sinapomorfías morfológicas. No obstante, los análisis recuperan dentro de Urochloa varios grupos infragénericos definidos por diferentes caracteres morfológicos. Sobre la base de estos resultados se establece para las especies Urochloa acuminata, U. decidua y U. megastachya el nuevo género Rupichloa.

Abstract:
The subtribe Melinidinae (Poaceae: Panicoideae: Paniceae) includes 13 genera and approximately 190 species, which are characterized by having the C4 PCK photosynthetic pathway and a distinctive foliar anatomy. The aim of this work is to study the phylogenetic relationships and the evolutionary history of this group. For this purpose, the subtribe is analyzed through three different taxonomic levels. First, the relations of Melinidinae with other taxa included in the tribe Paniceae are studied, in order to test its monophyly, resolving the relation between the subtribe with its sister group and reconstructing the ancestral photosynthetic pathway. Secondly, the phylogenetic relationships between the genera included in Melinidinae and the evolutionary trend in the homogenization of the inflorescences are analyzed. Finally, the relations among the species of Urochloa, the largest genus in the subtribe, are analyzed in order to define natural infrageneric groups and morphological characters with taxonomic value. In each section, different analyses and characters are used, depending of the studied taxonomic level. The results obtained showed the monophyly of the subtribe Melinidinae when Urochloa venosa is excluded, while the assignation of the sister group and the ancestral photosynthetic pathway are ambiguous. Urochloa and Eriochloa are paraphyletic and/or polyphyletic genera, whereas Megathyrsus, Melinis and Moorochloa are monophyletic. The homogenization of the inflorescences in the subtribe seems to be the favored evolutionary trend over the inverse process. Finally, the genus Urochloa appears as an artificial group without morphological synapomorphies. Nevertheless, the analyses recovered several infrageneric groups defined by different morphological characters. Based in these results, Urochloa acuminata, U. decidua and U. megastachya, are included within the new genera Rupichloa.

Sagario, María Cecilia. "Limitación poblacional de las aves granívoras en la porción central del Desierto del Monte" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se evaluó la limitación de las poblaciones de aves granívoras en el Monte central. Se encontró que estas aves no estarían normalmente limitadas por la abundancia de semillas durante la estación no reproductiva, sino sólo ocasionalmente, ya que sus abundancias sólo se vieron afectadas en años de muy baja producción de semillas. Durante la estación reproductiva, la falta de asociación entre la abundancia de adultos y la producción de semillas, la ausencia de defensa territorial interespecífica y la alta supervivencia y fidelidad al sitio sugieren que el recurso semillas no sería comúnmente limitante tampoco en esta época. La influencia del alimento sólo se evidenciaría en que las aves granívoras aumentarían su productividad en años superabundantes, algo más asociado con sus características de historia de vida y el oportunismo que con la limitación. En cambio, las evidencias sugieren que el comportamiento territorial de estas aves estaría involucrado en la limitación de estas poblaciones durante la estación reproductiva. Las tasas de movimiento serían el factor próximo más importante al determinar las abundancias locales de estas poblaciones, y no así la productividad o la mortalidad, aunque esta última podría estar involucrada en aquellos años esporádicos de baja producción de semillas. Además, los resultados refuerzan la idea de que la competencia interespecífica no sería un factor preponderante en la estructuración comunitaria de este ensamble de aves.

Abstract:
Limitation of granivorous birds in central Monte desert was evaluated in this work. Evidence showed that these birds would not usually be limited by the abundance of seeds during the non-breeding season, but only in occasional years given that their abundances were only affected during years of extremely low seed production. During the breeding season, lack of association between the abundance of adults and the production of seed, the absence of interspecific territorial defense and high survival and site-fidelity suggest that seeds would neither be limiting birds at this time of the year. The influence of food would be only translated in granivorous birds increasing their productivity in superabundant years, something more associated with life history traits and opportunism than with food limitation. Evidence suggests that the territorial behavior of these birds would be involved in the limitation of these populations during the breeding season instead. Movement rates would be the proximate most important factor influencing local abundances, and not so productivity or mortality, although the latter could be involved in those occasional low seed production years. In addition, results reinforce the idea that the interspecific competition would not be a dominant factor in structuring the community of this ensemble of birds.

Rosa, Silvina Mariana. "Las thraustochytriales (labyrinthulomycetes, heterokonta): caracterización de su biodiversidad en humedales salinos de la Argentina mediante un enfoque multidisciplinario y diseño de un bioproceso para la producción de ácidos grasos omega 3" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se obtuvieron más de 140 cepas de traustoquitriales de muestras recolectadas en una amplia variedad de humedales salinos argentinos a partir del mejoramiento de la metodología de aislamiento, que incluyó la formulación de dos nuevos medios de cultivo. Se estudiaron los caracteres taxonómicos tradicionales (rasgos morfológicos observados en cultivos en agua y cebos) de las cepas así como la morfología de las colonias, los requerimientos para su cultivo, el perfil de ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs) y la secuencia del gen ARNr 18S. El reconocimiento de grupos monofiléticos que incluyeron a los aislamientos y a otras traustoquitriales previamente estudiadas permitió la identificación en el nivel genérico de la mayoría de las nuevas cepas en base a los criterios recientemente propuestos y dio elementos para proponer que algunas de ellas serían nuevas especies. Se observó también la morfología a nivel ultraestructural en cepas identificadas como representantes de los taxones más abundantes (Ulkenia visurgensis, Schizochytrium sp., Thraustochytrium striatum, T. kinnei y T. aureum); esto permitió obtener mayor detalle sobre la formación de estructuras reproductivas. Los estudios de producción de PUFAs omega 3 se realizaron con la cepa modelo Aurantochytrium limacinum SR21. Se diseño un bioproceso en dos etapas, optimizándose las condiciones para la obtención de biomasa (primera fase) mediante una combinación de métodos estadísticos (Diseños Experimentales Estadísticos y Redes Neuronales Artificiales, entre otros). La utilización de esta biomasa en una segunda fase de producción permitió alcanzar una productividad máxima de 3.7 g de ácido docosahexaenoico l-1 d-1 en un biorreactor de 3,5 l.

Abstract:
More than 140 thraustochytrid strains were obtained from samples collected in Argentinean saline wetlands, once isolation methodologies were improved, including the formulation of two new culture media. Traditional taxonomic characteristics (morphological features in pollen seawater cultures) of strains were studied as well as other alternative characters (colony morphology, culture requirements, polyunsaturated fatty acids composition and 18SrRNA gene sequence). The finding of monophyletic groups including local isolates and other previously studied thraustochytrids allowed to identify most of new strains at genus level (according to new taxonomical rearrangements) and supported the proposal that several of them would be new species. Morphology at ultrastructural level of isolates recognized as representatives of the most abundant taxons (Ulkenia visurgensis, Schizochytrium sp., Thraustochytrium striatum, T. kinnei and T. aureum) gave more details about reproductive structures development. Omega 3 fatty acids production studies were carried out with the model strain Aurantiochytrium limacinum SR21. A two-stage bioprocess was designed, and conditions for biomass propagation (first stage) were optimized by a combination of statistical methods (Statistical Experimental Designs and Artificial Neural Networks, among others). Obtained biomass was used in a second production stage, reaching a maximal productivity of 3.7 g docosahexaenoic acid l-1 d-1 in a 3.5 l biorreactor.

Romero, José Luis. "Descomposiciones atómicas. Algunos problemas de localidad en el espacio de fases" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Rojas Molina, Florencia Mercedes. "Efectos del molusco invasor Limnoperna fortunei (Dunker) sobre el zooplancton del Paraná Medio" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es analizar el efecto del molusco asiático invasor Limnoperna fortunei sobre el zooplancton del Paraná Medio, a través de estudios de campo y de laboratorio. Se analizaron y compararon parámetros ambientales, concentraciones de clorofila‐ a y densidades del zooplancton de los ríos Santa Fe y Colastiné, cauces secundarios del río Paraná, en períodos anteriores a la invasión (río Colastiné: 21/09/1971 a 19/01/1973 y 03/03/1981 a 12/01/1982; río Santa Fe: 03/06/1974 a 12/11/1975) con un período posterior a la invasión (20/09/2004 a 26/09/2005). Se analizó la dieta natural de L. fortunei y la oferta disponible en siete ambientes leníticos del área del Paraná Medio. Para evaluar el impacto de L. fortunei sobre el zooplancton se realizaron experiencias en mesocosmos con dos concentraciones de moluscos y un control (sin moluscos). Mediante experimentos en microcosmos se analizó la vulnerabilidad de microcrustáceos de diferentes tallas, frecuentes en ambientes lóticos y leníticos del valle aluvial del río Paraná, a la depredación por adultos de L. fortunei. Los resultados mostraron que los adultos de L. fortunei son activos consumidores de zooplancton. Los pláncteres de 50 a 1200 μm de longitud constituyen el mayor aporte de biomasa a la dieta del molusco. L. fortunei ejerce una depredación selectiva sobre el zooplancton forzando cambios en la composición de especies y en la estructura de tallas de la comunidad. Se observaron importantes disminuciones en la concentración de clorofila y en las densidades de rotíferos en los cauces estudiados durante el período de post‐invasión, en comparación con la pre‐invasión, que podrían atribuirse a la presencia del bivalvo invasor

Abstract:
The aim of this dissertation is to analyze the effects of invasive Asian mollusk Limnoperna fortunei on the zooplankton of the Middle Paraná river system with the aid of field and laboratory studies. We describe and compare the environmental parameters, concentrations of chlorophyll‐a and zooplankton densities of two secondary channels of the Middle Paraná River in periods before the invasion (Colastiné River: 21/09/1971 to 19/01/1973 and 03/03/1981 to 12/01/1982; Santa Fe River: 03/06/1974 to 12/11/1975) with a post‐invasion period (20/09/2004 to 26/09/2005). The diet of L. fortunei and available planktonic food sources from seven lentic environments of the Paraná River floodplain, were analyzed. In order to assess the impact of L. fortunei on the zooplankton, mesocosm experiments were conducted with two bivalve concentrations and a control (no mollusks). Vulnerability of microcrustaceans, common in lotic and lentic environments of the Paraná River flooplain, to predation by adult Limnoperna fortunei was assessed in microcosms experiments. The results show that adults of L. fortunei are active consumers of zooplankton. Plankters 50 to 1200 μm in length are the primary biomass contributors to the diet of the mussel. Limnoperna fortunei is a selective grazer, forcing changes in species composition and size structure of the community. During the post‐invasion period, significant decreases in the concentration of chlorophyll‐a and rotifer densities were observed in both rivers compared to the pre‐invasion periods, which could be attributed to the presence of the invasive bivalve.

Rojas, Federico. "El complejo de ubiquitinación SCF en Trypanosoma brucei y su función en la regulación del ciclo celular" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El sistema ubiquitina-proteasoma es una vía reguladora fundamental para controlar la estabilidad de las proteínas dentro de varios procesos celulares, como la señalización y el ciclo celular. En respuesta a señales particulares, proteínas reguladoras específicas son marcadas con una cadena de moléculas de ubiquitina a través de la acción de una cascada enzimática compuesta por una enzima activadora de la ubi- quitina (E1), una enzima conjugadora de la ubiquitina (E2), y una ubiquitina ligasa (E3). Las E3 son responsables de unir los sustratos y acercarlos a la E2 cargada con ubiquitina, la cual luego transfiere la ubiquitina al sustrato y a la siguiente ubiqui- tina de la cadena en una reacción secuencial. Una de las ubiquitina ligasa E3 res- ponsables en el control directo de proteínas involucradas en el ciclo celular es el complejo SCF (SKP1-CUL1-F-box). En esta tesis se estudió cuál es la función de las proteínas que forman parte del complejo SCF en la regulación del ciclo celular de Trypanosoma brucei. El análisis de los genomas de Tripanosomátidos mostró que las cuatro proteínas que forman parte del complejo se encuentran conservadas, a excepción de las proteínas F-box. Utilizando la técnica de ARN de interferencia en los dos estadios del ciclo de vida de Trypanosoma brucei, se determinó en que fase del ciclo celular estas proteínas tienen una función preponderante. Los resultados obtenidos muestran que las subunidades del complejo actúan en diferentes momen- tos del ciclo celular. No solo se demostró que la actividad del complejo SCF es im- portante para el crecimiento de los parásitos in vitro, sino que la enzima conjugadora de ubiquitina es necesaria para que los parásitos establezcan una infección en un hospedador mamífero. A su vez, se utilizó la técnica de Electroforesis bidimensional diferencial en gel (2D-DIGE) con el objetivo de identificar posibles sustratos del complejo de ubiquitinación. Este trabajo describe por primera vez la actividad de las subunidades homólogas del complejo SCF en el parásito Trypanosoma brucei.

Abstract:
The ubiquitin–proteasome system (UPS) is a fundamental regulatory pathway for controlling protein stability that underlies many cellular processes, such as signaling and cell cycle progression. In response to particular signals, specific regulatory pro- teins are tagged with a chain of ubiquitin molecules through the action of an enzyma- tic cascade composed of an E1 ubiquitin activating enzyme, an E2 ubiquitin conjuga- ting enzyme (Ubc), and an E3 ubiquitin ligase. E3s are responsible for binding subs- trates and for bringing substrates into the proximity of a ubiquitin-charged E2, which then transfers ubiquitin to the substrate and to the ensuing ubiquitin chain in a pro- cessive reaction. One of the E3 responsible for the ubiquitination of cell cycle regula- tors is the SCF complex (SKP1-CUL1-F-box). In this thesis, we have studied the function of the proteins that form the core of the SCF complex in the Trypanosoma brucei cell cycle. The analysis of the Trypanosome genomes showed us that the four core subunit homologs are conserved, with the exception of the F-box proteins. Using RNA interference in both life cycle stages of Trypanosoma brucei, we were able to determine the cell cycle stages in which these proteins have important roles. The obtained results show that the subunits of the complex act at diferent points in the cell cycle. Not only we demonstrated that the activity of the complex is important for the parasites growth in vitro, but we showed that the ubiquitin conjugating enzyme is indispensable for establishing an infection in a mammalian host. At the same time, we utilized the Two-dimensional gel electrophoresis (2D-PAGE) technique for the purpose of identifiying possible substrates of the ubiquitination complex. This work analizes for the first time the activity of the subunits of the SCF complex in a lower eukaryote organism.

Rodríguez, Ana María. "Relevancia de la inmunidad celular subtipo específica en el desarrollo de estrategias de vacunación frente a VIH-1" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Han pasado casi 30 años de la detección de los primeros casos de VIH-1 y aún no se ha conseguido desarrollar una vacuna efectiva y segura. La epidemia de VIH en Argentina está caracterizada por una alta prevalencia de infecciones causadas por virus pertenecientes al subtipo B y formas recombinantes circulantes BF (CRF12_BF). A pesar de la amplia gama de trabajos dedicados a la caracterización de la respuesta inmune y al desarrollo de vacunas frente a VIH, no queda claro cuál es el impacto de la variabilidad en la elección del antígeno. Nef es una de las proteínas virales elegida como antígeno en los ensayos clínicos y pre- clínicos para vacunas. En este trabajo de Tesis, Nef fue usada como una herramienta para evaluar la importancia de las variantes recombinantes BF de VIH en el diseño de futuras vacunas. Vectores de ADN, MVA y VV que expresan NefBF y NefB fueron generados y caracterizados. Luego de la inmunización en ratones Balb/c con una dosis simple de ADN seguida por otra de MVA, se encontró que NefBF generó una respuesta altamente específica sin detectarse reactividad cruzada frente a Nef del subtipo B. Sin embargo, luego de aplicar un esquema de inmunización más extenso (tres dosis de ADN más una dosis de MVA) se indujo una respuesta específica mayor, acompañada con el aumento de la reactividad cruzada frente a B, aunque de menor magnitud que frente al antígeno homólogo NefBF. Por otro lado, al aplicar el vector VVnefBF se obtuvo una respuesta específica cerca de tres veces mayor que con MVA, pero con el mismo grado de reactividad cruzada; mientras que la inmunización con VVnefB generó una respuesta de menor magnitud, pero con mayor grado de reactividad cruzada contra NefBF. La aplicación de IL-12 y GM-CSF desde vectores de ADN (como moléculas adyuvantes) aumentó la respuesta hasta seis veces, al aplicarse por separado, y 14 veces al aplicarse juntas. Este nivel de respuesta permitió caracterizar los epítopes de mayor inmunogenicidad. Estos resultados son de crucial importancia para el desarrollo de una futura vacuna para nuestra región, indicando que antígenos de estas variantes virales BF deberían ser considerados en el diseño de las mismas.

Abstract:
It has been almost 30 years since the detection of the first HIV-1 cases and yet an effective and safe vaccine has not been developed. The HIV epidemic in Argentina is characterized by the high prevalence of infections caused by subtype B and BF variants. Despite the wide range of publications on the immune response against HIV and the vaccine development effort, the impact of variability on vaccine antigen selection is still unclear. Nef is a viral protein that has been selected as antigen in clinical and pre-clinical vaccine trials. In this thesis, Nef protein was used as a tool to study the impact of HIV-1 BF variants on the design of future vaccines. DNA, MVA and VV vectors expressing Nef from the CRF12_BF recombinant form or from subtype B of HIV-1 were generated and characterized. After the administration of single DNAprime/MVAboost immunization schedules in Balb/c mice, it was found that NefBF delivered from these vectors generated a response of high specificity without cross-reactivity against subtype B. But, when a more potent response was induced after 3 priming DNA doses and a booster with MVA recombinant virus, cross-reactivity against NefB was detected, although of lower magnitude than the NefBF specific response. Furthermore, the application of VVnefBF vector generated a nearly three-fold enhanced immune response than the schedule using MVA, but with the same level of low cross-reactivity, whereas immunization with VVnefB generated a slightly lower response, but with a greater cross-reactivity against NefBF. The application of IL-12 or GM-CSF as molecular adjuvants increased the specific response by six-fold, and 14-fold when they were applied together. This level of response allowed the characterization of the most immunogenic epitopes. These results will be pivotal for HIV vaccine design in our region, indicating that antigens from these viral variants should be considered for a future vaccine.

Rivas, Martín Alfredo. "Participación del factor de necrosis tumoral alfa en la proliferación de carcinomas mamarios" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) es una citoquina pro-inflamatoria implicada en promover el crecimiento de ciertos tipos de cánceres. En el presente trabajo de Tesis se exploraron los caminos de señalización intracelulares que llevan al crecimiento de las células de cáncer de mama inducido por TNFα y su interacción con el receptor tirosina quinasa tipo I, ErbB-2. Nuestros resultados indicaron que el TNFα, actuando a través del receptor de TNFα tipo 1 (TNFR1), indujo la activación de las quinasas activadas por mitógenos p42 y p44 (p42/p44 MAPK), la quinasa del amino terminal de c-jun (JNK) y la fosfatidilinositol 3-fosfato quinasa / Akt (PI3-K/Akt), la activación del factor de transcripción Factor Nuclear κB (NF-κB) y la proliferación celular. También comprobamos que la administración de TNFα in vivo indujo el crecimiento del tumor C4HD en ratones Balb/c y que el tratamiento con un inhibidor selectivo de NF-κB, Bay 11-7082, resultó en la regresión parcial de dicho tumor de mama. Asimismo, el Bay 11-7082 bloqueó la capacidad del TNFα de inducir el aumento de la proteína promotora del ciclo celular ciclina D1 y de la proteína antiapoptótica Bcl-XL. Un importante hallazgo fue demostrar que el TNFα indujo la transactivación de ErbB-2 en células de cáncer de mama que sobreexpresan ErbB-2. En estas células, el TNFα activa a la tirosina quinasa c-Src, promueve la fosforilación de ErbB-2 en el residuo Tyr877, y favorece la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3. Este último proceso lleva a la fosforilación de Akt, a la activación del factor de transcripción NF-κB, y al aumento en la expresión de ciclina D1. La presencia del inhibidor de ErbB-2, AG825, o de ARN cortos de interferencia (siRNA) contra ErbB-2, pero no la del anticuerpo monoclonal humanizado trastuzumab (HerceptinMR) abolió la fosforilación de ErbB-2, la activación de NF-κB y la proliferación inducidas por TNFα. Nuestro trabajo revela que el TNFα es capaz de transactivar a ErbB-2 y utilizarlo como un intermediario en la generación de señales mitogénicas. Dado que el TNFα se encuentra presente en un alto porcentaje de cánceres de mama, nuestros hallazgos tendrían una gran importancia en la comprensión de la biología de tumores de mama que sobreexpresan ErbB-2 como así también en la elección del tratamiento al cual los pacientes son sometidos.

Abstract:
Tumor necrosis factor alpha (TNFα) is a pro-inflammatory cytokine that promotes the growth of certain cancer types. In the present Thesis we explored signaling pathways involved in TNFα-induced breast cancer growth and its interaction with the tyrosine kinase receptor I, ErbB-2. Our results indicate that TNFα, acting through TNFR1, induces activation of p42/p44 MAPK, JNK and PI3-K/Akt, NF-κB activation and cell proliferation. TNFα, when administered in vivo, induced C4HD tumor growth on Balb/c mice and treatment with a specific inhibitor of NF-κB, Bay 11-7082, induced a partial regression of said breast tumor. Bay 11-7082 blocked TNFα ability of inducing the cell cycle promoter protein cyclin D1 and the antiapoptotic protein Bcl-XL. In addition we showed that TNFα induces ErbB-2 transactivation on breast cancer cells with ErbB-2 overexpression. We found that TNFα activates the tyrosine kinase c-Src, promotes ErbB-2 phosphorylation on Tyr877, and favors heterodimer formation between ErbB-2 and ErbB-3. This last event leads to Akt phosphorylation, NF-kB activation and to the increase in cyclin D1 protein expression. The presence of AG825, an ErbB-2 inhibitor, or small interference RNA (siRNA) to ErbB-2, but not the humanized monoclonal antibody trastuzumab (HerceptinTM) abolished ErbB-2 phosphorylation, NF-κB activation and TNFα-induced proliferation. Our findings reveal that TNFα is able to transactivate ErbB-2 and using it as an obligatory downstream signaling molecule in the generation of mitogenic signals. Given the fact that TNFα is present in a high percentage of invasive breast cancers, our work would be of importance for the understanding of breast cancer which overexpresses ErbB-2 and also for choosing the most appropriate treatment for patients.

Ricci, Alejandra Marcela. "Modificación redox de superficies para electrónica molecular y electrocatálisis" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La comprensión y control del transporte de carga a través de películas orgánicas de un espesor nanométrico es de fundamental importancia en diferentes áreas de investigación aplicada como ser la electrónica molecular, el desarrollo de sensores y biosensores, la protección contra la corrosión, la electrocatálisis y la fotoconversión solar, entre otras. El conocimiento de cómo la composición y la estructura química pueden afectar la transferencia electrónica entre un sustrato sólido y una molécula electroactiva es central en el desarrollo de las mismas. En esta tesis el objetivo principal consistió en el estudio de fenómenos de transferencia electrónica (TE) y para ello se prepararon una serie de sistemas modelo basados en electrodos modificados con monocapas electroactivas. Éstos se obtuvieron por unión del complejo + a monocapas previamente depositadas sobre electrodos de oro, que se formaron por adsorción de tioles alifáticos de diferentes longitudes de cadena, un tiol aromático y por electro‐reducción de sales de diazonio. De esta manera se obtuvieron dos formas de unión a la superficie: Au‐S y Au‐C, respectivamente. Además, en todos los casos, las moléculas depositadas presentaron grupos ácidos que reaccionaron con el grupo amino del complejo en una reacción de post‐funcionalización. Así se obtuvieron sistemas en los que el par Os(II)/Os(III) se encuentra unido a la superficie de un electrodo de oro a través de puentes moleculares de diferentes longitudes y naturaleza. Todos ellos se caracterizaron superficialmente empleando espectroscopías infrarrojas (PM‐IRRAS y FT‐IRRAS), espectroscopía Raman resonante, espectroscopía fotoelectrónica de rayos X y microscopía de efecto túnel y se observó que el complejo se une a la superficie sin perder su integridad química, formando efectivamente monocapas electroactivas. La caracterización electroquímica se llevó a cabo por voltametría cíclica y, en particular, en los estudios de cinética de transferencia electrónica, se empleó principalmente espectroscopía de impedancia electroquímica. Los sistemas obtenidos con tioles alifáticos de diferentes longitudes mostraron un mecanismo de TE consistente con tuneleo a través del enlace. Los sistemas obtenidos a partir de la reducción de sales de diazonio y con el tiol aromático presentaron velocidades de TE comparables. Finalmente, se analizaron por espectroscopía de efecto túnel con control electroquímico dos de los sistemas aromáticos que se diferencian únicamente en el tipo de unión al sustrato de oro (Au‐C y Au‐S) observándose, en ambos casos, un mecanismo de TE en dos pasos, entre la molécula y los contactos, con relajación vibracional parcial del centro redox.

Abstract:
The understanding and control of charge transport through organic films of nanometric thickness is of fundamental importance in different areas of applied research such as molecular electronics, the development of sensors and biosensors, protection against corrosion, electrocatalysis and solar photoconversion, among others. The knowledge of how the composition and chemical structure can affect the electron transfer between a solid substrate and an electroactive molecule is central to their development. In this thesis the main objective consisted in the study of electron transfer (ET) phenomena, so a series of model systems, based on modified gold electrodes with electroactive monolayers, were prepared. These were obtained by binding the complex + to previously formed monolayers by adsorption of aliphatic thiols of different chain lengths, an aromatic thiol and by electro‐reduction of diazonium salts. As a consequence, two types of tethers to the surface were obtained: Au‐S and Au‐C, respectively. Furthermore, in all cases, the deposited monolayers ended in acid groups in order to react with the amino terminal group in the osmium complex in a post‐functionalization reaction. As a result, systems were obtained in which the Os(II)/Os(III) couple was bound to the surface of a gold electrode through molecular bridges of different lengths and natures. All of them were characterized using surface infrared spectroscopy (PM‐IRRAS and FT‐IRRAS), resonant Raman spectroscopy, X‐ray photoelectron spectroscopy and scanning tunneling microscopy. It was found that the complex binds to the surface without losing its chemical integrity and actually forming electroactive monolayers. The electrochemical characterization was carried out by cyclic voltammetry and the studies of electron transfer kinetics were carried on with electrochemical impedance spectroscopy. Systems obtained with aliphatic thiols of different lengths showed an ET mechanism consistent with through‐bond tunneling. Systems obtained from the diazonium salts reduction and with the aromatic thiol showed comparable ET rates. Finally, two aromatic systems that differ only in the type of bond to the gold substrate (Au‐C and Au‐S) were analyzed by scanning tunneling spectroscopy with electrochemical control and a two‐step ET mechanism with partial vibrational relaxation at the redox center was observed in both cases.

Ricart, Karina Claudia. "Mecanismos moleculares de la degeneración de las motoneuronas en el contexto de la esclerosis lateral amiotrófica" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa que se caracteriza por la degeneración gradual y muerte de las neuronas motoras de la médula espinal. Aunque en estos últimos años se han producido muchos adelantos sobre las posibles causas de la ELA, todavía no se conoce la fisiopatología de la enfermedad. El objetivo de este trabajo fue profundizar el conocimiento sobre los mecanismos celulares y moleculares que contribuyen a la muerte celular de las motoneuronas, para así entender su muerte selectiva en la ELA. Para el estudio de las características específicas a nivel de células individuales, utilizamos cultivos puros de motoneuronas espinales de rata. En esta tesis doctoral demostramos que, a pesar de que las motoneuronas exhiben una alta dependencia de los factores tróficos para su sobrevida, ciertas combinaciones de factores tróficos desencadenan una muerte apoptótica similar a la descrita para las motoneuronas crecidas en ausencia total de factores tróficos. Dicha muerte celular apoptótica es mediada por el receptor de neurotrofinas p75NTR y depende de la inhibición de la vía de PI3K/Akt y de la activación de la vía JNK, seguidas de la producción de especies reactivas del nitrógeno y la posterior formación de nitrotirosina. Asimismo, demostramos que la formación de nitritirosina en proteínas de las motoneuronas desencadena la muerte celular apoptótica observada en ausencia total de factores tróficos, ya que la presencia de péptidos que contienen tirosina en su secuencia disminuye la nitración endógena y previene la apoptosis, siendo los derivados radicales de la descomposición del peroxinitrito los agentes causantes de esta nitración. Nuestros estudios también demuestran que una de las proteínas nitradas en estas condiciones es la proteína de choque térmico 90 (HSP90), siendo las motoneuronas particularmente sensibles a la inhibición de la actividad ATPasa de la HSP90. La HSP90 también esta nitrada en médulas espinales de pacientes de ELA y en ratones transgénicos usados como modelo experimental de la enfermedad. De estos resultados podemos concluir que la decisión de la motoneuronas en vivir o morir está altamente regulada y que un mismo factor trófico puede producir efectos tan opuestos como activar la apoptosis o inhibirla, dependiendo de su entorno celular.

Abstract:
Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disorder characterized by the gradual degeneration and death of motor neurons of the spinal cord. Despite many recent advances regarding the potential causes of ALS, the pathophysiology of the disease is not yet known. The aim of this Doctoral Thesis work was to extend our basic knowledge of the cellular and molecular mechanisms that contribute to motor neuron cell death and to better understand their selective degeneration and loss in ALS. The use of pure spinal motor neurons culture allows for the study of specific characteristics at the single cell level. In this Doctoral Thesis dissertation, we demonstrate that despite the strong dependency of motor neuron survival on trophic factors, certain combinations of those same trophic factors trigger apoptotic cell death, which is similar to that observed in motor neurons grown in the absence of trophic factors. This apoptotic motor neuron death is mediated by the neurotrophin p75NTR receptor, being dependent on the inhibition of the PI3K/Akt signaling cascade and on the activation of the JNK signaling cascade, followed by the production of reactive nitrogen species and the subsequent formation of nitrotyrosine in motor neuron proteins. In addition, we demonstrated that nitrotyrosine formation in motor neuron proteins triggers the apoptotic cell death observed in motor neurons grown in the total absence of trophic factors, since introducing peptides rich in tyrosine prevents apoptotic cell death. We also showed that the derivatives of peroxynitrite decomposition are responsible for nitration of tyrosine residues in motor neuron proteins during apoptotic cell death induced by the absence of trophic factors. Furthermore, our studies indicate that HSP90 is one of the nitrated proteins in motor neurons cultured under these conditions, an intriguing observation considering that motor neurons are particularly sensitive to the inhibition of the ATPase activity of HSP90. Consistently, HSP90 is also nitrated in the spinal cord of ALS patients and in transgenic mice used as experimental models of this disorder. From our results, we conclude that motor neuron survival and apoptotic cell death is a highly regulated process, during which the same trophic factor could have opposite effects depending on the cellular context of intracellular signaling.

Rey, Andrés. "Efectos del manejo sobre la dinámica de poblaciones de guanacos silvestres (Lama guanicoe) y mortalidad por enganches en alambrados en campos ganaderos de Patagonia Norte, Argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La esquila en vivo de guanacos silvestres se vislumbra como una actividad complementaria a la ganadería que podría contribuir a conservar sus poblaciones. El objetivo de esta tesis fue evaluar los efectos de la esquila de guanacos silvestres. Para ello se trabajó en forma sucesiva en dos campos ganaderos del norte de la Patagonia, que realizaron esquilas de guanacos silvestres, mediante relevamientos de abundancia y estructura social por medio de transectas de línea, estimación de supervivencia mediante marcado y recaptura de los guanacos esquilados, seguimiento de ejemplares por telemetría y registros conductuales desde puntos fijos de observación. En el sur de Neuquén (Estancia Alicura), se comparó la abundancia y estructura social de una población, dentro y fuera del área manejada, y se analizaron las actividades individuales antes y después de un evento de manejo, entre agosto de 2004 y diciembre de 2005. La abundancia de guanacos no varió luego de los eventos de manejo. La estructura social no difirió de la descripta para otras poblaciones. Los grupos familiares fueron la estructura social más frecuente y el tamaño de los grupos de machos fue menor en primavera que en invierno. La alimentación fue la principal actividad desarrollada durante el día y el reposo se asoció positivamente con la temperatura en verano. En el centro de Río Negro (Estancia Cabeza de Vaca), se estimó la abundancia y supervivencia de una población manejada en forma reiterada (7 eventos) durante 5 años, y se comparó su reproducción y tendencia poblacional con la de una población que convive con ganado, entre enero de 2003 y enero de 2009, durante un período climático normal y uno de sequía (a partir de diciembre de 2006). No se observaron desplazamientos de guanacos hacia fuera del área manejada y solo en un evento la abundancia de guanacos mostró una disminución temporaria inmediatamente posterior al manejo, atribuible al diseño de muestreo y un comportamiento de evasión. La supervivencia en la población manejada no difirió entre sexos y edades, fue constante durante el estudio y resultó menor a la reportada en poblaciones sin manejo. La tasa de reproducción de la población bajo manejo no difirió de la estimada en la población que convive con el ganado y otras poblaciones sin uso. La tendencia de la población bajo manejo no difirió de la estimada para la población que convive con el ganado en el mismo campo y resultó estable durante un período climático normal y negativa durante el período de sequía. Adicionalmente, en este campo, se estudió la mortalidad de guanacos por enganches en alambrados mediante el registro de carcasas y características del alambrado en el sitio de enganche. El impacto de la mortalidad por enganches resultó mayor en crías que en adultos. Las crías murieron principalmente por enganches en alambrados tipo ovino (93 cm), mientras que los adultos murieron enganchados fundamentalmente en alambrados tipo bovino (113 cm). Los resultados sugieren que el manejo reiterado no produjo desplazamientos de guanacos fuera del área manejada, aumento de la mortalidad ni reducción de la reproducción que produzcan tendencias poblacionales declinantes durante un período climático normal. No obstante, se desaconseja la realización de eventos post-parto (verano) y en momentos de condiciones ambientales adversas (como sequías), y la utilización de estructuras de manejo no desmontables. La continuidad de estos estudios es esencial para evaluar la sustentabilidad de esta actividad y su valor como herramienta de conservación del guanaco.

Abstract:
Live-shearing effects of wild guanacos could work as a complementary activity to livestock ranching and contribute to conserve their populations. The objective of this thesis was to evaluate the effects of live-shearing wild guanacos. The study was conducted successively in two ranches of Northern Patagonia, where live-shearing of wild guanacos was conducted, through line transects to estimate abundance and social structure, capture-recapture data to estimate survival, radio-tracking of captured guanacos, and behavioural observations. In Southern Neuquén (Alicura ranch), abundance and social structure was compared between areas with and without shearing, and individual activities were analysed before and after a shearing event, between August 2004 and December 2005. Abundance of guanacos remained similar after the shearing event. Social structure did not differ from other populations. Family groups were the most frequent social structure and the size of male groups was smaller in spring than in winter. Foraging was the main activity throughout the day and resting was positively associated with temperature in summer. In the centre of Rio Negro (Cabeza de Vaca ranch), abundance and survival was estimated in a repetitively managed population (7 events) throughout 5 years, and its reproduction and population trend was compared with a guanaco population coexisting with livestock, between January 2003 and January 2009, during normal climatic conditions and a drought (since December 2006). No movements of guanacos outside the managed area were observed and in only one occasion abundance decreased immediately after shearing, related to sampling design and evasive behaviour. Survival of the managed population was similar between sexes and ages, was constant throughout the study, and was lower than survival in non-managed populations. Reproduction in the managed population did not differ with reproduction in the population coexisting with livestock, and other non-managed populations. Population trend was similar between the managed population and the one coexisting with livestock, being stable during normal climatic conditions but declining during a drought. Additionally, in this ranch, mortality associated with wire fences was estimated by registering all carcasses found on fences and its characteristics. Mortality due to fences had a higher impact on juveniles than on adults. Juveniles died mainly on sheep fences (93 cm) while adults mainly died when trying to jump on cattle fences (113 cm). Results suggest that repeated management caused no movements outside the area, nor higher mortality or reduction in reproduction that could generate declining population trends during normal climatic conditions. However, shearing events should be avoided during post-partum periods (summer) and adverse climatic conditions (e.g. drought). Further studies are necessary to evaluate sustainability of live-shearing and its value as a conservation tool for guanaco populations.

Repetto, Evangelina. "Tiooligosacáridos con unidades furanósicas. Síntesis diasteroselectiva y estudios de inhibición de una furanosil hidrolasa" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el área de la glicobiología la búsqueda de nuevos inhibidores enzimáticos ha conducido al desarrollo de glicomiméticos como, por ejemplo, los tiooligosacáridos. Éstos son análogos de oligosacáridos naturales en los cuales el átomo de oxígeno interglicosídico se ha sustituido por azufre y suelen ser reconocidos por enzimas e inhibir su actividad biológica. Dado que prácticamente no se encuentran ejemplos de tiodisacáridos y tiooligosacáridos de azúcares furanósicos, se planteó como objetivo general de esta Tesis el diseño y síntesis de tiodisacáridos constituidos por al menos una unidad pento o hexofuranosa y su evaluación como inhibidores de una β‐galactofuranosidasa de Penicillium fellutanum. La galactofuranosa es constituyente de polisacáridos de micobacterias como el Mycobacterium tuberculosis, causante de la tuberculosis. La Galf es esencial para la sobrevida o virulencia de varios microorganismos patogénicos, pero por el momento no se ha encontrado en mamíferos. Dado que la degradación de glicoconjugados de Galf en algunos microorganismos es resultado de la acción de una β‐galactofuranosidasa, ésta es un blanco adecuado para la acción de inhibidores. Por las razones enunciadas precedentemente, en este trabajo se desarrollaron metodologías generales de síntesis de tiooligosacáridos de azúcares furanósicos, en particular de Galf. Como paso clave para la construcción diastereoselectiva del enlace tioglicosídico se emplearon: i Adiciones conjugadas de 1‐tioaldosas a azúcares aceptores de Michael; ii Reacciones de trans‐tioglicosilación; iii Reacciones de sustitución nucleofílica y iv Reacciones de apertura de tiiranos de azúcares. Así, se han obtenido tiodisacáridos con unidades furanósicas localizadas tanto en el extremo reductor como el no reductor. También se presenta una síntesis satisfactoria de un tiodisacárido formado por dos azúcares furanósicos. Asimismo, se ha descrito una nueva metodología, basada en la apertura de tiiranos de azúcares por una 1‐tioaldosa, para la construcción de ditiotrisacáridos ramificados con unidades furanósicas.

Abstract:
In the area of the Glycobiology the search for new enzyme inhibitors has led to the development of glycomimetics that resemble the global structure of a related sugar, but exhibit improved drug‐like properties. For example, the replacement of the oxygen atom of the interglycosidic linkage by a sulfur atom leads to thiooligosaccharides, which may act as inhibitors of the enzymes that participate in the metabolism of the natural analogues. As practically no examples are found of thiodisaccharides and thiooligosaccharides of furanose sugars, we propose as a main goal of this Thesis the design and synthesis of thiodisaccharides formed at least by one penta or hexafuranose unit. The resulting glycomimetics have been evaluated as inhibitors of a β‐galactofuranosidase from Penicillum fellutanum. Galactofuranose is a sugar component of polysaccharides from many microorganisms. They include mycobacterium, such as M. tuberculosis, the agent of tuberculosis. This sugar is essential for the survival or virulence of pathogenic microorganisms, but it has not yet been found in mammals. As the degradation of Galf containing polysaccharides is the result of the activity of a β‐galactofuranosidase, this enzyme is a convenient target for inhibition. In view of the previous considerations, in this work we have developed general methodologies for the synthesis of thiooligosaccharides constituted by furanose sugars, in particular by Galf. As key step for the diasteroselective construction of the thioglycosidic linkage were employed: i Conjugate addition of 1‐thioaldoses to sugar enones as Michael acceptors; ii Trans‐thioglycosylation reactions; iii Nucleophilic substitution reactions, and iv Sugar thiirane ring‐opening. The procedures employed led to thiodisaccharides having a furanose unit as a reducing or non‐reducing end. A convenient synthesis of a thiodisaccahride formed by two furanose units is reported. Furthermore, branched‐chain dithiotrisaccharides have been prepared through a new synthetic route, based on the ring‐opening of a thiirane group of a sugar derivative by a 1‐thioaldose

Rela, Ezequiel. "Estimaciones de dimensión para conjuntos de tipo Furstenberg y teoremas de restricción para medidas de Hausdorff" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis se estudian dos problemas del Análisis Armónico clásico desde el punto de vista de las medidas de Hausdorff. El primero es el problema de Furstenberg, que en su versión clásica se refiere a la determinación de la dimensión de Hausdorff (dim_H ) de los conjuntos de la clase F_α : dado α ∈ (0, 1], un conjunto E ⊆ R^2 está en la clase Fα si para cada e ∈ S existe un segmento unitario l_e en la dirección de e tal que dim_H (l ∩ E) ≥ α. En el caso α = 1, este problema resulta equivalente al problema de Kakeya. Si notamos γ(α) = inf {dim_H (E) : E ∈ Fα }, entonces vale que max {1/2 + α; 2α} ≤ γ(α) ≤ (1 + 3α)/2. (1) En este trabajo se estudia este problema desde una perspectiva más general, en términos de las medidas de Hausdorff h-dimensionales H^h asociadas a funciones de dimensión. Definimos los conjuntos de la clase de Furstenberg F_h asociados a una función h. La hipótesis natural para cada dirección es que H^h (l_e ∩ E) > 0. Generalizamos los resultados conocidos en términos de “saltos logarítmicos” y obtenemos resultados análogos a las cotas clásicas que permiten, además, extender la desigualdad (1) al caso extremo α = 0. Precisamente, se prueba que la función de dimensión apropiada para los conjuntos de la clase F_h no puede ser mucho más chica que h^2 o que la raiz cuadrada de h. Para las cotas superiores exhibimos explícitamente conjuntos en la clase F_h suficientemente chicos. Usamos para eso algunos resultados sobre Aproximación Diofántica,acerca de la dimensión de conjuntos de números “bien aproximables”. Obtenemos resultados acerca de la dimensión de conjuntos en la clase Fαβ, definida como Fα pero sólo para un conjunto L ⊂ S tal que dim_H (L) ≥ β. Probamos una versión de (1) que refleja la interacción entre los parámetros α y β. Este problema fue estudiado también en el conexto general. En segundo lugar se estudió con el mismo enfoque el problema de la Restricción de la Trasformada de Fourier, que se refiere a la posibilidad de darle sentido a la restricción de f a un subconjunto E de R^n . La respuesta depende de la existencia de una medida μ en E con ciertas propiedades de dimensiona- lidad y de decaimiento para su transformada μ. En este contexto se reformuló el teorema de restricción de Stein-Tomas en términos de medidas de Hausdorff.

Abstract:
In this thesis we study two problems in classical Harmonic Analysis. The first is the Furstenberg problem, which in its classical form concerns the de termination of the Hausdorff dimension (dim_H) of the sets in the F_α -class: for a given α ∈ (0, 1], a set E ⊆ R^2 is in the Fα-class if for each e ∈ S there exists a unit line segment l_ e in the direction of e such that dim_H (l ∩ E) ≥ α. For α = 1, this problem is essentially equivalent to the “Kakeya needle problem”. If we define γ(α) = inf {dim_H (E) : E ∈ F_α }, then max {1/2 + α; 2α} ≤ γ(α) ≤ (1 + 3α)/2. (1) In this work we approach this problem from a more general point of view, in terms of h-dimensional Hausdorff measures H^h associated to dimension functions. We define the class F_h of Furstenberg sets associated to a given dimension function h. The natural requirement for a set E to belong to F_h , is that H^h (l_e ∩ E) > 0 for each direction. We generalize the known results in terms of ‘logarithmic gaps” and obtain analogues to the estimates given in (1). Moreover, these analogues allow us to extend our results to the endpoint α = 0. Precisely, we prove that the correct dimension function for the class F_h can not be much smaller than h^2 or square root of h. For the upper bounds we exhibit an explicit construction of F_h-sets which are small enough. To that end we prove some results from Diophantine Approximation about the the dimension of the set of “well approximable numbers”. We obtain results about the dimension of Furstenberg sets in the class F_αβ , defined analogously to the class Fα but only for a fractal set L ⊂ S such that dim_H (L) ≥ β. We prove an inequality like (1) which reflects the interplay between α and β. This problem is also studied in the general scenario of Hausdorff measures. The second problem studied in this work, in the same general scenario as before, is the Restriction Problem for the Fourier transform. Here the problem is to give a meaningful sense to the restriction of f to a subset E of R^n . The answer depends on the existence of a measure μ supported on E with precise conditions on the dimensionality of μ and decay properties of μ. In this context we reformulate the Stein-Tomas restriction theorem for Hausdorff measures.

Radonic, Laura Mabel. "Nuevas estrategias para la transformación y expresión de genes de interés en girasol" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El girasol es una especie de la familia Asteraceae (Compositae) de gran importancia económica, considerada hasta hace una década recalcitrante al cultivo in vitro y la transformación genética. En un trabajo previo (Radonic, 2005) se logró establecer el protocolo de selección por enraizamiento en kanamicina con una eficiencia del 0,7 %. En esta tesis se mejoró este protocolo utilizando una construcción portadora de los genes antifúngicos glucanasa y quitinasa, ambos bajo el control del promotor CaMV35S y el enhancer Ω del TMV, obteniéndose una eficiencia de 1,26 %, al aumentar gradualmente la concentración del antibiótico kanamicina en los sucesivos medios de regeneración. También se evaluó la especificidad y estabilidad de dos vectores conteniendo la construcción CaMV35S-secuencia codificante para la β-glucuronidasa (GUS)-interrumpida por un intrón. Las plantas T1 derivadas de los eventos de transformación presentaron un patrón de expresión de tipo no constitutivo, con expresión de GUS localizada exclusivamente en los tricomas de las nervaduras de la cara abaxial de las hojas, siendo necesario la utilización de lupa para su visualización. En las plantas T2 no se pudo detectar la presencia de los transgenes. El nivel bajo de expresión es similar al descripto en crisantemo y la inestabilidad génica obtenida con este mismo promotor fue también descripta en lechuga, ambas de la familia Asteraceae. Estos datos llevaron a la búsqueda de nuevos promotores para la transformación de girasol. Los promotores ensayados fueron CaMV35S-Ω TMV, PPC, nos, 2X35S y rbcS1. Estos promotores fueron incorporados en el vector Gateway pKGWFS7,0, diseñado para el análisis de promotores regulando, en todos los casos, la expresión del gen reportero GUS. Este vector, además posee el gen nptII de resistencia a kanamicina bajo la regulación del promotor nos. Para analizar la funcionalidad de las construcciones obtenidas se realizaron ensayos de agroinfiltración de Nicotiana benthamiana. La actividad de los promotores en girasol fue evaluada mediante ensayos de agroinfiltración en hojas de plantas en invernáculo y la evaluación temprana de los explantos blanco de transformación, por determinación histoquímica de GUS y cuantificación fluorométrica de MUG. Para los ensayos de agroinfiltración de girasol se logró establecer un protocolo, considerado hasta este momento como no factible, determinando el estadio de desarrollo de la planta, la cepa bacteriana a utilizar y el tiempo de análisis. Estos análisis permitieron seleccionar al promotor rbcS1 como el más adecuado, ya que presentó buenos niveles de actividad enzimática y, a diferencia del promotor CaMV35S-Ω TMV, se expresó mayoritariamente en la zona meristemática de los explantos blanco de transformación, región a partir de la cual se regeneran los brotes. Los resultados obtenidos en los ensayos de transformación estable mostraron que el uso del promotor rbcS1, en comparación al CaMV35S-Ω TMV, no solo aumentó los niveles de expresión de GUS (donde grandes regiones del mesófilo mostraron expresión) sino que modificó la expresión del gen nptII, mejorando notoriamente la eficiencia de transformación (aumentando de 1,26 % a 7,06 %). Además, mejoró la respuesta y el aspecto de las plantas obtenidas (T0) al ser transferidas al invernáculo (tanto por pasaje a tierra directo como por injerto), siendo éstas de gran porte y con capítulos florales más grandes, que resultaron en un aumento del número y tamaño de los aquenios obtenidos. Resultados similares fueron publicados en Arabidopsis donde el promotor CaMV35S afectaba y alteraba en trans el patrón de expresión de transgenes y cambiaba el fenotipo de las plantas transgénicas. El análisis de las plantas T1 permitió observar altos niveles de expresión del gen reportero, comparable al de otras especies vegetales. Los resultados expuestos muestran que es posible transformar girasol con buenos niveles de eficiencia y expresión.

Abstract:
The sunflower is a species from the Asteraceae family of great economic importance, considered recalcitrant to in vitro culture and genetic transformation until a decade ago. In a previous work (Radonic, 2005) it was possible to establish a selection protocol by rooting in kanamycin with an efficiency of 0,7 %. In this thesis this protocol was improved using a construct carrying glucanase and chitinase antifungal genes, both under the CaMV35S promoter and TMV enhancer Ω, obtaining an efficiency of 1,26 % by gradually increasing kanamycin concentration in the successive regeneration media. The specificity and stability of two vectors containing the construct CaMV35S- β- glucuronidase codifying sequence (GUS)-interrumpted by an intron was also evaluated. The T1 plants derived from the transformation events showed a non-constitutive expression pattern, with GUS expression located only in the trichomes of the leaf veins on the abaxial surface of leaves, for its visualization it was necessary to use a magnifying glass. Detection of transgenes was not possible in T2 plants. This low expression level is similar to that described in chrysanthemum and the genetic instability achieved with the same promoter was also described in lettuce, both of the Asteraceae family. These data led to the search for new promoters for sunflower transformation. CaMV35S-Ω TMV, PPC, nos, rbcS1 and 2X35S promoters were assayed. These promoters were incorporated in pKGWFS7,0 Gateway vector, which is designed for promoter analysis regulating, in all cases, GUS reporter gene expression. This vector, also has the nptII kanamycin resistance gene under the regulation of nos promoter. Agroinfiltration assays in Nicotiana benthamiana in order to analyze de functionality of the obtained constructs were performed. Promoter activity in sunflower was evaluated in leaf agroinfiltration assays in greenhouse plants and early evaluation of the transformation target explants, by GUS histochemical determination and MUG fluorometric cuantification. A sunflower agroinfiltration protocol was established, until this moment considered not feasible, by determining the developmental plant stage, the bacterial strain used and the time of analysis. These analysis allowed to select rbcS1 promoter as the most suitable, as it showed good enzymatic activity levels and, unlike the CaMV35S-Ω TMV promoter, it is mostly expressed in the meristematic zone from the transformation target explants, region from which shoots regenerate. Results obtained in stable transformation assays showed that the use of rbcS1 promoter, compared with CaMV35S-Ω TMV promoter, not only increased GUS expression levels (where large regions of the mesophyll showed expression) but modified nptII gene expression, greatly improving transformation efficiency (which increased from 1,26 % to 7,06 %). Moreover, response and aspect of the obtained plants (T0) was improved when they were transferred to the greenhouse (both by direct passage to earth or grafting), they were large- sized and with larger floral chapters, resulting in an increase in the number and size of the obtained achenes. Similar results were published in Arabidopsis where the CaMV35S promoter affected and altered in trans transgene pattern expression and changed transgenic plants phenotype. T1 plants analysis allowed to observe high levels of reporter gene expression, comparable to that of other plant species. The above results show that it is possible to transform sunflower with good levels of efficiency and expression.

Radic, Claudia Pamela. "Genética molecular de hemofilia: caracterización de mutaciones en hemofilia B, expresión de hemofilia en mujeres y desarrollo de nuevos métodos de análisis de inversiones" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las hemofilias A (HA) y B (HB) son coagulopatías hereditarias, ligadas al cromosoma X (X), sufridas por varones (1:5000) y raramente por mujeres, causada por defectos génicos del factor VIII (F8) y IX (F9), respectivamente. Para caracterizar el espectro de mutaciones causales de HB en Argentina se aplicó un esquema original de 12 amplímeros para el F9, incluyendo un screening por CSGE (conformation sensitive gel electrophoresis), en 49 familias, y se identificaron 29 cambios missense (60%), 7 nonsense (14%), 4 defectos de splicing (8%), 2 pequeñas inserciones‐deleciones (4%), 6 grandes deleciones (12%) y un cambio en región promotora del F9. Dos cambios missense no reportados mostraron, uno la disrupción de un puente disulfuro y otro la destrucción de un sitio de γ‐carboxilación condicionando el fenotipo de HB severa. Para mejorar la estrategia de detección de grandes rearreglos que involucran int22h e int1h en el F8, causales del 50% de las HA severas, se desarrolló un abordaje nuevo, inverse‐shifting‐PCR (IS‐PCR). Mediante el uso de un test diagnóstico para la inversión del intron 22 (Inv22), los resultados de IS‐PCR fueron validados por perfecta concordancia en 32 y 43 casos previamente estudiados por Southern blot y PCR inversa, y en 34 casos nuevos. El uso conjunto del test diagnóstico y complementario sobre las series de nuestra población, no mostró las variantes estructurales, i.e., deleciones y duplicaciones hipotetizadas en la literatura. El test para la inversión del intrón 1 fue validado por perfecta concordancia en 21 casos estudiados por doble PCR y en 13 casos nuevos. Para investigar la utilidad de IS‐PCR en diagnóstico prenatal, muestras de vellosidades coriónicas de una madre portadora de la Inv22 y su feto nonato fueron diagnosticadas. Para estudiar la causa de la expresión de HA severa en mujeres portadoras heterocigotas se ajustó y validó el sistema del gen HUMARA para estimar el patrón de inactivación del X (XIP). Se estudiaron 6 mujeres con HA severa: una mostró la mutación c.3633delA en hemi‐homocigosis, 4, mostraron la mutación en heterocigosis y sesgo extremo en el XIP, y un caso, heterocigota para c.4388_4391delCTTT, mostró XIP no sesgado en leucocitos de sangre periférica (hipotetizando una inactivación hepática distinta). En una serie de 37 portadoras heterocigotas, y un grupo control de 20 no portadoras, se estudió la correlación XIP‐FVIII:C mediante análisis de contingencia y de errores respecto a un modelo teórico original (Obs.‐Esp.), obteniéndose modestas diferencias significativas (p menor a 0,05) asociadas a una gran dispersión de FVIII:C. Este trabajo presentó la primera serie molecular de mutaciones causales de HB en Argentina, el desarrollo de una nueva estrategia para el estudio de las grandes invers.

Abstract:
Hemophilia A (HA) and B (HB) are X‐chromosome (X) linked inherited coagulation disorders suffered by men (1:5000) and rarely by women, which are caused by gene defects of factor VIII (F8) and IX (F9), respectively. To characterize the spectrum of HB causative mutations in Argentina, an original scheme of 12 amplicons for F9 including a screening by CSGE (conformation sensitive gel electrophoresis) was applied in 49 families identifying 29 missense mutations (60%), 7 nonsense (14%), 4 splicing defects (8%), 2 small insertions‐deletions (4%), 6 large deletions (12%) and one change in the F9 promoter region. Two previously unreported missense changes showed a disruption of a disulfide bridge, and the destruction of a site for γ‐ carboxylation by analysis in silico, both conditioning the severe HB phenotype. To improve the genotyping strategy for large rearrangements involving int22h and int1h in the F8 that cause 50% of severe HAs worldwide, we design and developed a new approach, inverse‐shifting‐PCR (IS‐PCR). Using a diagnostic test for analysis of the intron 22 inversion (Inv22), IS‐PCR results were validated by obtaining perfect agreement, in 32 and 43 cases previously studied by Southern blot and a former inverse PCR approach; and in 34 new cases. The combined use of a complementary and a diagnostic test over our population series showed no structural variants, i.e., deletions and duplications hypothesized in the literature. The test for genotyping F8 intron 1 inversion was validated by perfect result agreement in 21 cases previously studied by double PCR, and 13 new cases. To investigate the usefulness of IS‐PCR in prenatal diagnosis, chorionic villus samples from an Inv22 carrier mother and her fetus were diagnosed. To study the cause of severe HA expression in heterozygous female carriers a system of the gene HUMARA for estimating X‐inactivation patterns (XIP) was adjusted and validated. We studied 6 women with severe HA: one showed an hemi‐homozygous mutation, c.3633delA, 4 showed heterozygous mutations with extremely skewed XIP; and one case, heterozygous for c.4388_4391delCTTT, showed a non skewed XIP in peripheral blood leukocytes (hypothesizing a different hepatic inactivation). A series of 37 heterozygous carriers and a control group of 20 non‐carriers were studied for XIP‐FVIII: C correlation. We analyzed contingency tables and relative errors (Obs.‐ Esp.) applying an original theoretical model and found modest significant differences (p minor than 0.05) associated with a wide variation of FVIII:C. This work presented the first molecular series of HB causative mutations in Argentina, the development of a new strategy for characterization of large DNA inversions causing severe HA and investigate the causes of a full expression of severe HA phenotype in women.

Pérez Millán, María Inés. "Estudio de la participación del receptor de dopamina D2 en la regulación de lactotropodos hipofisarios y su influencia en el desarrollo de prolactinomas mediante la generación de un ratón transgénico tejido específico" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Con el objetivo de estudiar la participación del receptor dopaminérgico D2 (RD2) en células hipofisarias productoras de prolactina hemos desarrollado ratones mutantes incapaces de expresar el gen de RD2 (Drd2) selectivamente en lactotropos. Para producir estos ratones con mutaciones nulas de Drd2 restringidas a lactrotropos generamos ratones transgénicos que expresan la recombinasa Cre bajo el control transcripcional del promotor de prolactina de ratón (Prl-Cre) y luego los cruzamos con ratones mutantes condicionales para el gen del RD2 (Drd2^flox/flox) para producir ratones mutantes y transgénicos compuestos (Drd2^flox/flox.Tg Prl-Cre). La caracterización molecular y bioquímica mostró que los ratones Drd2^flox/flox.Tg Prl-Cre no expresan Drd2 en el lóbulo anterior de la hipófisis pero sí en el lóbulo intermedio y en todas las áreas del cerebro donde Drd2 se expresa normalmente. En consecuencia, esta nueva cepa de ratones con mutaciones nulas de Drd2 restringidas a lactotropos fue denominada pitD2RKO. Los ratones pitD2RKO presentan niveles elevados de prolactina que resultan extremadamente altos en hembras adultas que desarrollan prolactinomas hipofisarios. Como consecuencia de la falta de receptores RD2 lactotrópicos, los niveles de prolactina de los ratones pitD2RKO no aumentan luego de la administración aguda del antagonista de RD2s, haloperidol. Las curvas de crecimiento corporal de los ratones pitD2RKO resultaron normales así como los distintos parámetros asociados al eje de la hormona de crecimiento (GH), en marcado contraste con lo estudiado en ratones mutantes totales del RD2 (Drd2^+) que son enanos. Esta observación indica que la ausencia de RD2s de los lactotropos hipofisarios no es responsable del déficit severo presente en el eje de GH de los ratones Drd2^+. Sorprendentemente, las hembras pitD2RKO presentan un aumento considerable de la ingesta de alimento y del peso corporal a partir de los 90 días de edad, probablemente como consecuencia de los elevados niveles crónicos de prolactina. Finalmente, analizamos los prolactinomas experimentales resultantes en nuestro nuevo modelo y ampliamos el estudio a adenomas hipofisarios humanos; en ambos casos, de manera interesante, observamos un aumento en la proliferación celular y en la angiogénesis de los adenomas respecto a las hipófisis controles, contrariamente a lo publicado.

Abstract:
To study the participation of the dopamine D2 receptor (D2R) on pituitary lactotropes we have generated mutant mice that are unable to express the D2R gene (Drd2) selectively in lactotropes. We first generated transgenic mice expressing Cre recombinase under the transcriptional control of the mouse prolactin promoter (Prl-Cre). Prl-Cre transgenic mice were mated with mutant mice carrying conditional null mutations of Drd2 (Drd2^flox/flox) to produce compound mutant/transgenic mice (Drd2^flox/flox.Tg Prl-Cre). Molecular and biochemical characterization of these mice showed they lack Drd2 expression in the anterior lobe of the pituitary while normally expressing Drd2 in the pituitary intermediate lobe and in all brain areas. Thus, we designated this novel lactotrope-specific Drd2 mutant mouse strain pitDrd2^+ o pitD2RKO. PitD2RKO mice had elevated serum prolactin levels that were extremely high in adult females which eventually developed pituitary prolactinomas. As a result of lactototrope D2R disruption, the acute administration of the D2R antagonist haloperidol failed to raise prolactin levels in pitD2RKO mice. Body growth curves in pitD2RKO mice were normal as well as several parameters related to the growth hormone (GH) axis, in clear contrast to what had been shown in null Drd2 mutant mice (Drd2^+ or D2RKO). This observation indicates that the absence of D2Rs in pituitary lactotropes is not responsible for the severe GH axis deficit found in D2RKO mice. Strikingly, pitD2RKO female mice developed a considerable increase in food intake and body weight starting at 90 days old, probably as a consequence of their chronically elevated prolactin levels. Finally, we analyzed the resulting experimental prolactinomas in our new model and extended the study to human pituitary adenomas. In both cases we observed a rise in cell proliferation and angiogenesis in the pituitary adenomas respect to the normal pituitary.

Pérez-Cuesta, Luis María. "Dinámica e interrelación entre reconsolidación y extinción de la memoria en el cangrejo Chasmagnathus" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La reconsolidación y la extinción de la memoria son dos procesos mnésicos funcionalmente relacionados, ya que ambos están involucrados en el procesamiento y almacenamiento de nueva información relacionada con un aprendizaje anterior. Sin embargo, ambos procesos están basados en mecanismos muy distintos. Mientras que la reconsolidación involucra una desestabilización y reestabilización de la traza del aprendizaje original, la extinción genera una nueva traza que compite con la anterior. Trabajos previos de nuestro laboratorio revelaron por primera vez una relación mecanística entre reconsolidación y extinción, mostrando que la presentación de un estímulo condicionado (CS) puede inducir uno u otro proceso dependiendo de su duración. En este trabajo revelamos nuevas características paramétricas que determinan la inducción de la reconsolidación y la extinción, la cinética con la que estos procesos ocurren, y un hipotético mecanismo que los vincula, que tiene lugar tras el fin del CS. Encontramos que (a) durante toda la presentación del CS la memoria original permanece intacta y consolidada, mostrando que ni reconsolidación ni extinción son inducidas hasta la terminación del CS, independientemente de su duración, (b) la presentación de un único refuerzo (US) durante la exposición al CS tiene la capacidad de prevenir la inducción tanto de la extinción como de la reconsolidación, (c) la extinción de la memoria ocurre pocos segundos después del fin del CS, y (d) reconsolidación y extinción son inducidos de forma mutuamente excluyente tras un único CS, pero ambos procesos pueden dispararse por sendos CSs y desarrollarse simultáneamente. Como resultado, presentamos un modelo que integra estos hallazgos, reflejando la dinámica e interrelación entre los procesos de reconsolidación y extinción de la memoria.

Abstract:
Memory reconsolidation and extinction are two functionally related memory processes, since they are both involved in the processing and storage of new information related to a previous learning. However, both processes are based on very different mechanisms. Reconsolidation involves a destabilization and a restabilization of the original memory trace, whereas extinction generates a new memory trace that competes with the former. Previous work from our laboratory showed for the first time that there is a mechanistic relationship between reconsolidation and extinction, since a single conditioned stimulus (CS) exposure could trigger one or the other process depending on its duration. Here we disclose new parametric conditions for the triggering of reconsolidation and extinction, the kinetics of these processes, and an hypothetic mechanism operating after CS offset that links both mnesic process. We have found that (a) during the entire CS presentation the original memory remains intact and consolidated, showing that neither reconsolidation nor extinction are triggered before CS termination, regardless of its duration, (b) a single reinforcement (US) presentation during CS exposure is able to prevent both reconsolidation and extinction triggering, (c) memory extinction is triggered a few seconds after CS offset, and (d) triggering of reconsolidation and extinction is mutually exclusive when a single CS is presented, but both processes can be serially triggered by respective CS presentations, and develop simultaneously. As result, we present a model integrating these findings, showing the dynamics and interrelationship of memory reconsolidation and extinction.

Presman, Diego Martín. "Mecanismos moleculares involucrados en la modulación de la actividad del receptor de glucocorticoides" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
A lo largo de esta tesis se investigaron algunos de los mecanismos moleculares que modulan la actividad del receptor de glucocorticoides (GR), un factor de transcripción regulado por ligando. En primer lugar, utilizando cuatro esteroides con diferentes actividades se estudió cómo la estructura del ligando afecta la actividad transcripcional del GR. Además, mediante la técnica de Número y Brillo se demostró por primera vez, en forma directa, que el receptor es capaz de homodimerizar in vivo. Los resultados sugieren que este proceso sería independiente de la unión al ADN y a coactivadores como TIF2. En segundo lugar, se investigaron los mecanismos responsables de la inducción dependiente de glucocorticoides del gen pro‐apoptótico Bax, en células derivadas de timoma de ratón S49. Los resultados indican que el aumento transcripcional de bax no es causado por la estabilización de su ARNm, y que las primeras 6.5 kb del promotor del gen no estarían involucradas en el efecto inductor mediado por el GR. A través del uso de un glucocorticoide disociado, sugerimos que el GR induce la expresión de Bax mediante un mecanismo de transactivación. Más aún, no se descarta la posibilidad que el efecto del GR sea indirecto, es decir, induciendo la expresión de otro gen, necesario para aumentar los niveles totales de Bax. Por último, se investigaron los mecanismos involucrados en el efecto antagónico entre la melatonina (MEL) y los glucocorticoides. Nuestros hallazgos muestran que MEL no inhibe al GR en forma generalizada, sino que sólo lo hace en ciertos tipos celulares, y mediante mecanismos diferentes. Mientras que en timocitos de ratón MEL inhibe la disociación del complejo GR‐Hsp90, en células BHK inhibe la interacción del GR con el coactivador TIF2. Finalmente, presentamos evidencias que sugieren que el inhibidor farmacológico de los receptores de melatonina, el Luzindole, sería también un antagonista del receptor de glucocorticoides.

Abstract:
The glucocorticoid receptor (GR) is a transcription factor that regulates gene expression in a ligand‐dependent fashion. This thesis explores some of the molecular mechanisms involved on GR’s activity modulation. By using four different steroid ligands with distinct glucocorticoid and antiglucocorticoid properties, we analyzed ligand structure effects on GR transcriptional modulation. In this sense, by performing Number and Brightness assays we presented for the first time direct evidence of GR homodimerization process in vivo. Results also show that this event can occur without TIF2 coactivator interaction and most likely in a ligand structure and DNA independent manner. On the other hand, we investigated the mechanisms underlying glucocorticoid‐dependent bax induction in S49 cells. Results show that glucocorticoids do not have any effect on bax mRNA stability, suggesting that GR enhances bax’s transcription rate. Moreover, at least 6.5 kb upstream of bax’s start translation site would not be involved on the glucocorticoid‐dependent induction. Results derived from the use of a selective glucocorticoid suggest that GR induces bax expression through a transactivation mechanism. Moreover, we can’t rule out that GR could regulate bax levels through an indirect mechanism involving the expression of another factor. Finally, we studied the molecular mechanisms underlying melatonin (MEL) modulation on the glucocorticoid pathway. Our results show that MEL is not a generalized‐cell type glucocorticoid antagonist. We found that MEL modulates GR response only in a subset of cells, in a cell‐type specific molecular mode of action. In thymocytes, it inhibits GR action by blocking the dissociation of the 90‐kDa heat shock protein; while in BHK cells MEL reduces GR‐TIF2 interaction. Lastly, we also present evidences suggesting that melatonin receptor inhibitor Luzindole is also an antagonist of the glucocorticoid receptor pathway.

Prado, Héctor Juan. "Estudio de los polisacáridos del alga roja Polysiphonia nigrescens, cationización de agarosa, formación de complejos interpolielectrolito. Aplicaciones en floculación de coloides y liberación controlada de drogas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este Trabajo de Tesis se estudiaron los polisacáridos del alga roja Polysiphonia nigrescens, recolectada en las costas de Cabo Corrientes (Mar del Plata). Este alga biosintetiza agaranos sulfatados parcialmente ciclados y altamente sustituidos en C-6, principalmente con sulfato, aunque también se han encontrado éteres metílicos y ramificaciones simples de β-D-xilosa. Las dos díadas presentes en los galactanos de esta especie son: G6S→L6S (precursora) y G6S→LA. También se aisló una fracción compuesta por agarosa sulfatada. Además se sintetizaron agarosas cationizadas de distinto grado de sustitución (0,04-0,77), empleando cloruro de 3-cloro-2-hidroxipropil trimetilamonio. Se evaluaron diferentes parámetros de la reacción sobre el grado de sustitución y el peso molecular: concentración de reactivos, temperatura, tiempo y el agregado de NaBH4. Los productos se caracterizaron mediante microscopía electrónica de barrido, FT-IR, viscosimetría y RMN. Productos de metanólisis se estudiaron por espectrometría de masa ESI. Algunas agarosas cationizadas, se desempeñaron en la floculación de coloides de manera comparable a poliacrilamidas comerciales. Finalmente, se prepararon los siguientes complejos interpolielectrolito (IPECs) estequimétricos: eudragit E - carragenano kappa, almidón cationizado - carragenano kappa, eudragit E - agaranos de P. nigrescens y agarosa cationizada - agaranos de P. nigrescens. Se estudiaron dichos IPECs: turbidimetría, análisis elemental, FT-IR, microscopía electrónica de barrido y óptica, área superficial, ángulo de reposo, perfil de compactabilidad e hinchamiento. Se prepararon comprimidos por compresión directa, constituidos por los IPECs e ibuprofeno como droga modelo. Los perfiles de liberación de la droga ajustaron adecuadamente a dos modelos matemáticos, presentando cinéticas cercanas a orden cero.

Abstract:
In this Thesis the red seaweed Polysiphonia nigrescens polysaccharides, collected in Cabo Corrientes shores (Mar del Plata) were studied. This seaweed biosynthesizes sulphated agarans partially ciclyzed and highly substituted on C-6, mainly with sulphate, however methyl ethers and β-D-xylose single stubs were found. The two diads present in the agarans of this species are: G6S→L6S (precursor) and G6S→LA. A fraction composed by sulphated agarose was also isolated. Besides, cationized agaroses with different degrees of substitution were synthesized (0.04-0.77), employing 3-chloro-2-hydroxypropyl trimethylammonium chloride. Different reaction parameters were evaluated on the substitution degree and molecular weight: reactives concentration, temperature, time and addition of NaBH4. The products were characterized by means of scanning electronic microscopy, FT-IR, viscosimetry and NMR. Products of methanolysis were studied by ESI mass spectrometry. Some cationized agaroses presented a similar performance to commercial polyacrylamides, in colloid flocculation. Finally, the following stoichiometric interpolyelectrolyte complexes (IPECs) were prepared: eudragit E - kappa carrageenan, cationized starch - kappa carrageenan, eudragit E - agarans from P. nigrescens and cationized agarose - agarans from P. nigrescens. Those IPECs were studied: turbidimetry, elemental analysis, FT-IR, scanning electronic and optical microscopy, surface area, angle of repose, compactibillity profile and swelling. Tablets composed by the IPECs and ibuprofen as model drug, were prepared by direct compression. The release profiles were adequately fitted to two mathematical models, and presented near zero order kinetics.

Prado Acosta, Mariano. "S-layer de Lactobacillus acidophilus: caracterización y análisis funcional" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las S-layers son estructuras externas de una sola especie de (glico) proteína, Se calcula que aproximadamente 5×105 monómeros de la proteína S-layers son necesarios cubrir una célula bacilar procariótica. Las funciones biológicas que se han sugerido para las S-layer son aún hipotéticas y requieren de mayor comprobación experimental. Se las asocia con roles de protección contra enzimas hidrolíticas, cambios de pH y estrés, la captación de moléculas y iones. Otra posible función que cumplirían sería la de adhesina, facilitando que la bacteria se adhiera a distintas superficies y ayudar a mantener la forma y rigidez de la célula. Durante el transcurso de mi tesis de Doctorado, he elegido a la proteína S-layer de Lactobacillus acidophilus, la opción de este microorganismo se debió a las características probióticas y la importancia del mismo en la industria alimentaria. Se caracterizó una nueva función biológica para la proteína S-layer de Lactobacillus acidophilus ATCC4356 que no había sido descripta previamente. La capacidad de murein-hidrolasa es una característica nueva que cumpliría un rol adaptativo en esta bacteria. La actividad lítica de la proteína S-layer de demostró sobre la pared celular y células enteras de Salmonella entérica serovar Newport el cual fue usada como patógeno modelo. Esta actividad respaldaría la característica probiótica de la cepa de Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 (Prado Acosta et al. 2008). También se utilizó a la S-layer como compuesto sinérgico con el antibiótico nisina, esto sirvió para disminuir la concentración inhibitoria minima casi un 50 % en organismos patógenos del tracto intestinal como Bacillus cereus y Staphylococcus aureus (Prado Acosta et al. 2009). Nuestros resultados también mostraron una variación de la expresión de S-layer en Lactobacillus acidophilus creciendo en condiciones de alta salinidad y se mostró que son de gran importancia para la supervivencia de la célula en estas condiciones.

Abstract:
Lactobacillus acidophilus is one of the major species found in human intestines. Some strains of lactobacilli are believed to be probiotic and are extremely used in food industry Many species of the genus Lactobacillus possess S-layers, this proteins are arrays composed of a single protein that constitute the outermost cell envelope in numerous Bacteria, they have been considered to function as protective coats, cell shape determinants, and be involved in cell adhesion. To date several studies focus on the structure of S-layers, but their biological functions remain poorly understood. Zymogram analysis with cell-wall extracted from Salmonella enterica serovar Newport as substrate revealed a true uncharacterized lytic activity coincident with that identified by western blot. This activity was also observed with both cell wall and whole cells. The analysis of the peptidoglycan breakage products showed an increase of free amino- acids suggesting that this S-layer acts as an endopeptidase. This gene was sequenced and showed 99% homology with other slpA from Lb. acidophilus strains and in silico analysis of the deduced protein showed a C-terminal motif which aligned with murein hydrolases of several Lactobacillus strains. The C-terminal motif was cloned and expressed in Bacillus subtilis where it conserved the murein hydrolase activity. Due to this enzymatic activity we show that in combination with nisin they act synergistically to inhibit the growth of Salmonella, Staphylococcus and Bacillus. We postulate that S-layer enhanced nisin incorporation into the cell membrane enabling it to penetrate the cell wall resulting in increased inhibitory activity. We also proved the S-layer protein is essential in the adaptation of the Lactobacillus during osmotic stress. We analyzed the role of the S-layer by exposing cells to osmotic stress, we found an over expression in this condition demonstrate by Western blot and real time PCR to quantify mRNA. We also tested the growth aptitude of Lactobacillus acidophilus in high osmotic conditions with and without S-layer protein showing its importance in the adaptation to this kind of stress.

Posadas, Diana M.. "Transporte y adhesión en Brucella suis: caracterización de una proteína de la familia TolC en el eflujo de compuestos tóxicos y de tres posibles adhesinas en la colonización del hospedador" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Brucella es un patógeno intracelular facultativo, responsable de una infección zoonótica llamada brucelosis. Un aspecto clave en la virulencia de este género es su habilidad para invadir y proliferar dentro de células fagocíticas y no fagocíticas, en las que se establece. En esta tesis se identificaron y caracterizaron factores imprescindibles para la interacción de este patógeno con su hospedador. Uno de estos factores fue la proteína BepC, que pertenece a la familia TolC de proteínas de membrana externa. BepC resultó crucial en la detoxificación de la bacteria tanto in vivo como in vitro, probablemente formando parte de sistemas tripartitos de eflujo. Los otros factores fueron tres adhesinas que pertenecen a la familia de autotransportadores de tipo I. Estas proteínas, a las que denominamos BmaA, B y C (por Brucella monomeric autotransporter), participarían en: i) la adhesión de Brucella suis a las células del hospedador, ii) la interacción con otras superficies como la matriz extracelular y iii) las interacciones bacteria-bacteria, para ambas, BmaA y BmaB. Estos factores pueden ser base de estudios futuros más específicos y profundos que lleven al desarrollo de vacunas o terapias que mejoren el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de la brucelosis.

Abstract:
Brucella is an intracellular pathogen responsible of the zoonotic disease called brucellosis. A key feature of Brucella virulence is its ability to invade and proliferate inside professional and non-professional phagocytic cells, were it establishes. In this thesis, essential factors for the interaction of this pathogen with its host were identified and characterized. One such factor was the BepC protein, that belongs to the TolC family of outer membrane proteins. BepC was shown to be crucial for the detoxification of the bacteria both in vivo and in vitro, probably as part of tripartite efflux systems. The other factors were three adhesins belonging to the type I autotransporters family. These proteins that we called BmaA, B and C (Brucella monomeric autotransporter) were shown to be involved in: i) Brucella suis adhesion to host cells, ii) the interaction of B. suis with other surfaces such as the extracellular matrix and iii) for both BmaA and BmaB, in bacteria-bacteria interactions. These factors can be the basis of future studies, more specific and profound, that lead to the development of vaccines or therapies that improve the diagnosis, prevention and treatment of brucellosis.

Poncini, Carolina Verónica. "Funcionalidad de las células dendríticas en la infección por Trypanosoma cruzi" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Una de las características más relevantes de la infección por Trypanosoma cruzi es la presencia de desordenes inmunológicos. Previamente, nuestro grupo demostró que la infección aguda con la cepa virulenta RA regula negativamente la expresión de moléculas del CMHII en células presentadoras de antígeno (CPA) y altera la capacidad de células dendríticas (CD) esplénicas de estimular células T. Dado que las CD poseen un rol central en el inicio y desarrollo de la respuesta inmune, en el siguiente trabajo de tesis analizamos la capacidad del estadio de tripomastigote (Tp) de modular el estado de diferenciación y funcionalidad de CD derivadas de médula ósea in vitro. En dicho modelo, observamos que específicamente el estadio de Tp de T. cruzi fracasa a la hora de inducir activación de CD. Estas preservan la expresión basal de moléculas del CMHII y coestimulatorias, así como su capacidad endocítica. Asimismo, los Tp inducen secreción de TGF- β e incrementan la producción de interleuquina (IL)-10, observándose un aumento de la relación IL-10/IL-12p70 durante el tratamiento conjunto con LPS. Además, los Tp modulan la activación de CD inducida por LPS, regulando negativamente la expresión del CMHII y su capacidad de estimular linfoproliferación. La neutralización de IL-10 durante la diferenciación de las CD in vitro en presencia de Tp+LPS, revierte parcialmente la incapacidad de las CD de inducir alorespuesta durante una reacción linfocitaria mixta (RLM). Contrariamente, la neutralización simultánea de IL-10 y TGF-β durante la RLM no modifica la falta de alorespuesta observada. Ambas citoquinas, TGF-β e IL-10 son inmunomoduladoras y se encuentran asociadas a la inducción de tolerancia. Por lo tanto, estos resultados demuestran por primera vez que los Tp modulan la diferenciación de CD en presencia de LPS in vitro. Dichas CD presentan propiedades tolerogénicas (CDreg). Asimismo, Tp muertos por calor (Tpmc), pero no fijados con paraformaldehído o productos de excreción secreción parasitaria inducen CDreg. Las CD son responsables de modular la respuesta de células T, inclusive mediante la diferenciación de células T regulatorias (Tregs). Aquí se describe que tanto los Tp vivos como Tpmc alteran la capacidad de CD activadas con LPS de estimular linfocitos. En el cultivo de células T con CDreg se detectó producción de IL-10 y bajos niveles de IFN-γ. Asimismo, las CDreg alteran la respuesta ag-específica in vitro (OVA), utilizando células T CD4+ purificadas de ratones OT-II. Las células T CD4+ diferenciadas en presencia de CDreg (inducidas por Tp o Tpmc), muestran una menor expresión del marcador de activación temprana CD69 en comparación con las estimuladas con CD activadas con LPS. Además, estos CD4+ suprimen la alorespuesta en el marco de una RLM secundaria. Pese a no detectar diferencias respecto al número de Tregs CD4+CD25+FoxP3+, los resultados descriptos sugieren que las CD con propiedades tolerogénicas inducidas por T. cruzi, in vitro diferencian células T CD4+ potencialmente supresoras. La activación de la respuesta inmune depende del reconocimiento de señales de daño. El reconocimiento de patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs) por CD, juega un importante papel en el desarrollo de inmunidad. Numerosas moléculas de T. cruzi, capaces de activar CPA, han sido descriptas como ligandos de TLR2. Sin embargo, el modelo en CD se encuentra pobremente caracterizado. Las CDreg son inducidas por Tpmc, independientemente de infección. El fenotipo regulatorio se caracteriza por un estado particular de activación de CD: aumento en la activación de ERK 1/2 inducida por LPS y fosforilación de STAT3. Asimismo, los Tp no alteran la activación de p38, degradación de IκB-α o translocación a núcleo de NF-κB inducida por LPS. La vía de ERK es central en la inducción del fenotipo tolerogénico ya que su bloqueo regula negativamente la producción de IL-10 y restaura la capacidad de estimulación de las CD. La activación de NF-kB pero no la fosforilación de STAT3 está involucrada en la modulación de IL-10 por Tp. Un trabajo reciente demuestra que la señalización conjunta vía TLR2 y TLR4 induce sinergismo en la liberación de citoquinas anti-inflamatorias en CD murinas. El estímulo de TLR2 y TLR4 utilizando Pam3Cys o LPS y Tpmc en CD de ratones TLR2KO o mutantes para el TLR4, demuestra que los altos niveles de IL-10 son independientes del reconocimiento del parásito por TLR2 pero asociados a la señalización vía TLR4. En conclusión, estos resultados sugieren la importancia de la vía de ERK, la señalización por TLR4 y activación de NF-kB en la modulación de IL-10 inducida por T. cruzi y sugiere la existencia de interacciones parásito-CD aún no descriptas. La modulación de la diferenciación de CD por T. cruzi, puede explicarse como una estrategia de evasión desplegada por el parásito sobre una célula con potencial de desarrollar inmunidad con subsecuente control y erradicación de la infección. Sin embargo, muchos de los mecanismos inmunomoduladores que explican la persistencia parasitaria, favorecen el control de una respuesta proinflamatoria exacerbada, contrarrestándose el daño tisular concomitante. Futuros estudios permitirán descifrar el papel e impacto de los mecanismos inmunomoduladores en el balance entre tolerancia e inmunidad durante la infección experimental.

Abstract:
A main feature of acute infection with Trypanosoma cruzi is the presence of immunological disorders. Previously, our group demonstrated that acute infection with the virulent RA strain downregulates the expression of MHCII on antigen presenting cells (APC) and impairs the T-cell stimulatory capacity of splenic dendritic cells (DC). Since DC have a main role in the initiation and subsequent development of immune responses, here we assess the ability of trypomastigotes (Tp) to modulate the differentiation stage and functionality of bone marrow-derived DC in vitro. In this model, we observe that specifically Tp stage of T. cruzi fails to activate DC, which preserved low expression of MHCII and costimulatory molecules as well as endocytic activity. We also describe that Tp induce TGF-β secretion by DC, and enhance the gap between interleukin (IL)-10 and IL-12 p70 production, showing a higher IL-10/IL-12p70 ratio upon LPS-treatment. In addition, we observe that Tp modulate full activation induced by LPS, thereby downregulating their MHCII surface expression and inhibiting DC capacity to stimulate lymphocyte proliferation. In vitro IL-10 neutralization during DC-differentiation process with Tp+LPS, partially reverts poor aloresponse during mixed lymphocyte reaction (MLR). In contrast, simultaneous neutralization of both IL-10 and/or TGF-β during MLR does not restore linfoproliferation. Since both TGF-β and IL-10 are immunosuppressive cytokines related to the immunoregulation and tolerance induction, our results suggest for the first time that Tp modulate LPS-treated DC differentiation in vitro. DC described, display tolerogenic properties (DCreg). In addition, Tp heat-killed (Tphk), but not fixed with paraformaldehyde or parasite excretion-secretion products induce the DC-differentiation profile described for live-Tp. DC modulate T cells responses also by inducing differentiation of regulatory T cells. In the present work we describe that live or heat-killed Tp affect T-cell stimulatory capacity of LPS-treated DC. T cells cultured with DCreg show impaired aloresponse, produce IL-10 and low levels of IFN-γ. DCreg are unable to induce ag-specific responses to OVA using CD4+ T cells from OT-II mice in vitro. Alogenic CD4+ T cells primed with DCreg (induced by live or Tphk) show reduce expression of the early-activation marker CD69 compared with the ones cultured with activated DC (LPS). In addition, CD4+ T cells primed with DCreg suppress aloresponse in the context of a secondary MLR. Eventhough, we fail to find CD4+CD25+FoxP3+ Tregs, these results suggest DC with tolerogenic properties induced by T. cruzi prime potentially regulatory CD4+ T cells. Activation of immune responses depends on recognition of danger signal. Recognition of pathogens associated molecular pattern (PAMPs) by DC plays a key role in the first steps related to development of immunity. Several T. cruzi molecules that stimulate APC were described as Toll-like receptor 2 (TLR2) ligands. However, DC models are poorly characterized. Here, we show that DCreg are induced by Tphk stimulation, ruling out infection as a key mechanism involved in Tp-DC modulation. Regulatory phenotype is characterized by a particular DC activation state, with increased LPS-induced activation of extracellular regulated kinase (ERK) 1/2 and phosphorylation of signal transducer and activator of transcription (STAT) 3. We also observe that Tp does not affect p38 activation, IκB-α degradation or NF-κB translocation to the nucleus induced by LPS. ERK has a central role in DC differentiation since its blockade down-regulates IL-10 production and restores DC stimulatory capacity. NF-kB activation but not STAT3 phosphorylation is associated to IL-10 modulation by Tp. A recent work shows that signaling via TLR4 and TLR2 induces a synergism in anti-inflammatory cytokine production in murine DC. Upon TLR2 and TLR4 stimulation using Pam3Cys or LPS and Tphk in DC from TLR2 knock out (KO) or TLR4-mutant mice, we show that high levels of IL-10 are independent of TLR2 but associated to TLR4 signallization. In conclusion, all these findings demonstrate a key role of ERK and TLR4 in association to NF-kB in IL-10 modulation induced by T. cruzi and suggest that this regulatory effect involves parasite-DC interactions not described yet. Modulation of DC differentiation program by T. cruzi might be an evasion mechanism displayed by the parasite with immunosuppressive effects and consequences in the eradication of the parasite. However, immunoregulatory mechanisms in general associated with parasite persistence, may also control pro- inflammatory responses and counteract host tissue damage. Future goals will undercover the role and impact of immunomodulation in the balance between tolerance and immunity during the experimental infection in vivo

Pomata, Matías H.H.. "Efectos de solvatación en agregados supramoleculares" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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En la primera parte de esta tesis presentamos simulaciones de dinámica molecular sobre micelas inversas inmersas en ciclohexano. Consideramos tres interiores polares diferentes: agua (W), formamida (FM) y una mezcla equimolar de ambos solventes. En todos los casos, el surfactante utilizado fue bis(2-etilhexil)sulfoccinato de sodio (usualmente conocido como AOT). El radio inicial de las micelas fue deR ∼ 15 Å , mientras que los cocientes molares (w0=/) correspondientes fueronintermedios entre w0 = 4;3 para FM y w0 = 7 paraW. La forma global de las micelas se asemeja a elipsoidesdistorsionados, con una excentricidad media del orden de ∼ 0;75. Las correlaciones de densidadlocal dentro de las micelas muestran una solvatación preferencial de la especie iónica sodio por el agua,en contraposición con el comportamiento encontrado en mezclas equimolares en fase condensada. Comparadocon los resultados en fase condensada, los modos traslacionales y rotacionales de los solventesconfinados, exhiben una desaceleración importante, que se hace más notable en los movimientos rotacionales donde las escalas temporales características pueden ser hasta 50 veces más largas. también se discuten las modificaciones en la conectividad intramolecular, expresadas en términos del número medio de uniones hidrógeno y sus tiempos de vida media. En la segunda parte, presentamos resultados de simulaciones de dinámica molecular sobre sistemas de fructosa en solución, a concentraciones que llegan hasta 70 wt% (5 M). Encontramos que la red de uniones hidrógeno de las moléculas de fructosa se extiende con el aumento de la concentración de azúcar y forma un sistema estructuralmente heterogéneo alrededor y por arriba de una concentración 45 wt% (3 M), caracterizado por un dominio del soluto que se asemeja a un sistema percolado. La presencia de estos agregados en soluciones concentradas promueve la desaceleración de las dinámicas traslacionales, rotacionales y de las uniones hidrógeno, lo cual es típico en muchos ambientes biomoleculares. Como en el caso de la superficie de una proteína, los desórdenes topológico y energético de los agregados de azúcar contribuyen a la dinámica traslacional anómala. Sin embargo, a diferencia de lo observado en las cercanias de la superficie de una proteína, la relajación rotacional también se ve impedida por el desorden topológico creado por el conglomerado de azúcar en soluciones concentradas. Para completar el análisis de esta última parte de la tesis, obtuvimos resultados sobre el sistema ternario "electrolitos+fructosa+agua". Encontramos que para el caso de las solucines más concentradas de fructosa (4-5 M), el agregado de cloruro de sodio promueve una fragmentación del conglomerado de fructosas "percoladas" en otros de tamaño más pequeño. Asimismo, observamos que en todo el rango de concentraciones de fructosa investigado, los iones están solvatados preferencialmente por el agua. En cuanto a los aspectos dinámicos de estos sistemas observamos que, de manera general, la dinámica traslacional de todas las especies, disminuye en un orden de magnitud aprox. al aumentar la concentración de fructosa de 1 M a 5 M.

Abstract:
In the first part or this thesis we present results from molecular dynamics simulations performed on reverse micelles immersed in cyclohexane. Three different inner polar phases are considered: water (W), formamide (FM), and an equimolar mixture of the two solvents. In all cases, the surfactant was sodium bis (2-ethylhexyl) sulfosuccinate(AOT). The initial radii of the micelles were R ∼ 15 Å, while the corresponding polar solvent-to-surfactant molar ratios were intermediate between w0 = 4,3 for FM and w0 = 7 for W. The resulting overall shapes of the micelles resemble distorted ellipsoids, with average eccentricities of the order of ∼ 0,75. Local density correlations within the micelles indicate preferential solvation of sodium ionic species by water, in contrast to the behavior found in bulk equimolar mixtures. Compared to bulk results, translational and rotational modes of the confined solvents exhibit important retardations, most notably those operated in rotational motions where the characteristic timescales may be up to 50 times larger. Modifications of the intra-molecular connectivity expressed in terms of the average number of hydrogen bonds and their lifetimes are also discussed. In the second part molecular dynamics simulations have been carried out to investigate the dyna- mics of fructose aqueous solutions up to 70 wt % concentration. We find that the hydrogen(H)-bonded network of fructose molecules extends with increasing sugar content and forms a structurally heteroge- neous system around and above 45 wt % concentration, characterized as a percolated-like solute domain. The presence of such aggregates in concentrated solutions promotes the slowing down of water transla- tional, reorientational, and H-bonding dynamics, typical of many biomolecular environments. Analysis of the effects of the topological and energetic disorder of the sugar aggregates on vicinal water dynamics, similar to that recently carried out for the hydration layer of proteins by Pizzitutti et al. , reveals many similarities between the dynamical anomaly of the hydration layers of both systems. Like a protein surface, topological and energetic disorders of the sugar aggregates both contribute to the translational diffusion anomaly. However, unlike in the vicinity of a protein surface, the rotational relaxation is also hindered by the topological disorder created by the intertwined, percolating sugar clusters in concentrated solutions. To complete the analysis developed in the last part of this thesis, we obtained results on the three species sistem “electrolytes+fructose+water”. We found that for the most concentrated sistems (fructose 4-5 M), the adition of sodium chloride promotes the fragmentation of the “percolated” cluster of fructose, in smaller fragments. Besides, we observed that in the whole concentration range studied, the ionic species was mainly solvated by water. Regarding the translational dynamics of theese solutions, we noticed that de self-diffusion coefficients of all species decrease by roughly one order of magnitude in going from fructose 1 M to 5 M.

Petrigh, Romina Sandra. "Identificación y caracterización de antígenos de Babesia bigemina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los protozoarios intraeritrocitarios Babesia bovis y Babesia bigemina son los agentes causales de la babesiosis bovina, una enfermedad transmitida por la garrapata Rhipicephalus microplus que provoca importantes pérdidas económicas a la ganadería en áreas enzoóticas. En tal sentido resulta de gran relevancia la identificación de genes y la caracterización de proteínas para el desarrollo de pruebas diagnósticas de elevada sensibilidad y especificidad y el diseño racional de vacunas. En este trabajo, hemos desarrollado un método de detección molecular de B. bigemina, basado en la amplificación del gen rap-1a, útil para el estudio epidemiológico de la babesiosis bovina en áreas enzoóticas. La PCR en un solo paso, resultó altamente específica detectando 0,00002% de parasitemia. Por otra parte, para la identificación de nuevos antígenos de B. bigemina, se aplicaron dos estrategias: proteómica y herramientas de genómica comparativa. A través de la aproximación proteómica logramos extraer y separar en geles de dos dimensiones las proteínas solubles del estadio de merozoíto de B. bigemina que fueron reconocidas por sueros de bovinos infectados. A partir de las secuencias disponibles del proyecto genoma de B. bigemina y en base a la información proveniente de los genomas anotados de otros apicomplejos, pudimos identificar, anotar y caracterizar una familia de ocho genes que codifican para proteínas del tipo perforina (PLP) con el dominio de ataque a membrana MACPF en B. bigemina. Además se demostró que si bien todos los genes plp se transcriben en el estadio intraeritrocitario, particularmente los genes plpb y plpe presentan una tasa transcripcional significativamente mas alta indicando su importancia en este estadio. Asimismo, el reconocimiento de la proteína PLPA por los sueros bovinos infectados puede ser considerado como un indicio de la participación de esta proteína en la salida del parásito del eritrocito. Este trabajo de tesis contribuye al estudio de la babesiosis bovina a través del desarrollo de herramientas de diagnóstico y de la identificación de genes implicados en los mecanismos moleculares que median la interacción parásito-hospedador.

Abstract:
The intraerythrocytic Protozoan, Babesia bovis and Babesia bigemina, are causal agents of bovine babesiosis, a tick-borne disease trasmitted by Rhipicephalus microplus that cause important economic losses to livestock in areas where the disease is enzootic. In this regard is important the gene identification and protein characterization in order to develop highly sensitive and specific diagnostic methods and rational vaccines. In this work, we developed a molecular test, based on rap-1a gene amplification, for B. bigemina detection, a useful tool for epidemiological studies of babesiosis in enzootic areas. The one-step PCR assay was highly especific and sensitive detecting up to 0.00002% of parasitemia. Moreover, to identify relevant B. bigemina proteins to the development of methods of diagnosis and control of babesiosis, we applied two strategies: proteomic and comparative genomic tools. In the proteomic aproach we could purify and separate B. bigemina merozoites proteins using two dimensional gels and detecting immunodominant proteis using bovine sera. The bioinformatic tools applied to the available sequences of the B. bigemina genome project based on data from the annotated genomes of other apicomplexans, allowed us to identify, annotate and characterize a perforin-like proteins family (PLP) in B. bigemina containing a membrane-attack complex domain (MACPF). Transcriptional studies showed that while all plp genes are transcribed in the intraerythrocytic stage, particularly plpe and plpb genes have a significantly higher transcriptional rate, which may suggest its possible role in intraerythrocytic stage. Furthermore, PLPA recognition of bovine sera from animals infected can also be considered as an indication of the involvement of this protein in the exit of the parasite erythrocyte. This thesis work, contributes to the study of bovine babesiosis through the development of diagnostic tools and the identification of genes involved in the molecular mechanisms that mediate the parasite-host cell interaction.

Perissinotti, Paula Patricia. "Caracterización y modulación del reciclado vesicular en placa neuromuscular de ratón" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El proceso de reciclado de las vesículas sinápticas es una característica integral de la función presináptica y determina su habilidad para mantener la liberación del neurotransmisor durante una actividad repetitiva. En esta tesis, caracterizamos el reciclado de las vesículas sinápticas en el terminal neuromuscular de ratón y estudiamos su regulación por los canales de calcio dependiente de voltaje (CCDV), específicamente el canal de calcio tipo L, y por el neuromodulador adenosina. Para desarrollar este trabajo, utilizamos indicadores fluorescentes tipo FM para marcar la membrana de las vesículas sinápticas y técnicas electrofisiológicas para cuantificar la liberación de las vesículas sinápticas. En el terminal neuromuscular de ratón, determinamos que el reciclado vesicular es regulado por el nivel de actividad neuronal. La estimulación a alta frecuencia produce la movilización de dos pooles funcionales de vesículas sinápticas que difieren en su disponibilidad de liberación. En base a esta característica, definimos estos pooles como pooles vesiculares de liberación rápida o lenta. Por otro lado, evidenciamos que la duración de la estimulación a alta frecuencia determina un reciclado vesicular selectivo y secuencial hacia estos pooles vesiculares funcionales. El influjo de calcio a través de los CCDV tiene un papel clave en la señalización neuronal durante el proceso de la neurotransmisión, coordinando el reciclado de las vesículas sinápticas. En este trabajo presentamos evidencias directas que vinculan al CCDV tipo L con la regulación del reciclado vesicular. Hemos confirmado la funcionalidad de CCDV tipo L durante estadios plásticos del terminal neuromuscular. Es decir, observamos la participación de estos canales únicamente durante períodos de actividad neuronal sostenida e intensa. Se demostró que el influjo de calcio a través del CCDV tipo L promueve la endocitosis y la recuperación de las vesículas sinápticas hacia el pool vesicular de liberación rápida, regulando la eficiencia sináptica durante la actividad neuronal intensa. La adenosina es un neuromodulador bien establecido en la unión neuromuscular de ratón. En ausencia del efecto de la adenosina endógena sobre los receptores A1, evidenciamos un incremento en la exocitosis vesicular y en el tamaño del pool de reciclado vesicular, y un direccionamiento de reciclado vesicular hacia el pool de liberación rápida. Debido a que la adenosina y el bloqueo del CCDV tipo L presentaron un efecto similar sobre el reciclado vesicular, una hipótesis plausible fue que la adenosina a través de un efecto inhibitorio sobre el CCDV tipo L afectaría el reciclado vesicular. A través de evidencias experimentales esta hipótesis fue rechazada. En base a las similitudes observadas en el reciclado vesicular, es factible suponer que tanto la adenosina como el bloqueante del CCDV tipo L inhiben un mecanismo común.

Abstract:
The recycling of synaptic vesicles is an integral property of presynaptic function and it determines its ability to sustain neurotransmitter release during repetitive activity. In this thesis, we characterized vesicular recycling at mouse neuromuscular terminal and studied its regulation by voltage dependent calcium channels (VDCC), in particular the L-type calcium channel, and by the neuromodulator adenosine. We used FM fluorescent dyes in order to label synaptic vesicle membrane and electrophysiological techniques to quantify vesicle release. We found that vesicle recycling at mouse neuromuscular terminal is regulated by the level of neuronal activity. High frequency stimulation mobilizes two functional synaptic vesicle pools that differ in their release availabilities. Based on this characteristic, we defined these pools as the fast release pool and the slow release pool. On the other hand, we found that the duration of the high frequency stimulation produces selective and sequential vesicle recycling to these functional vesicle pools. Calcium influx through VDCC plays a key role in neuronal signaling during neurotransmission since it coordinates vesicle recycling. In this thesis, we show direct evidence that relate the L-type VDCC to vesicle recycling regulation. We have confirmed the L-type VDCC functionality during the plastic phase of the neuromuscular terminal. In other words, these channels participate only during intense and sustained neuronal activity. We demonstrate that calcium influx through L-type VDCC promotes endocytosis and vesicle retrieval towards the fast release vesicle pool, regulating synaptic efficiency during intense neuronal activity. Adenosine is a well known neuromodulator at the mouse neuromuscular junction. In the absence of the effect of endogenous adenosine on A1 receptors, we found an increase of the amount of vesicle exocytosis and the size of the vesicle recycling pool. In addition, we found out that vesicles are preferentially recycled under this condition to the fast release pool. Since both the addition of adenosine and an L-type VDCC blocker give rise to a similar effect on vesicle recycling, we hypothesized that adenosine produce an inhibitory effect on the L-type VDCC, affecting vesicle recycling. However, our experimental evidence allows rejecting this hypothesis and suggests that both adenosine and the L-type VDCC blocker inhibit the same mechanism.

Penna, Ivanna Marina. "Procesos de remoción en masa en el retroarco norneuquino (37°-38°S): factores condicionantes y sus implicancias en el modelado del paisaje" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la zona de transición entre los Andes Centrales y los Andes Patagónicos, se reconocen estructuras tectónicas que han deformado depósitos oligo-miocenos de la Fm. Cura Mallín y cuaternarios de la Fm. Cola de Zorro (5-1 Ma), constituyendo un frente montañoso de 400 metros. Esta actividad tectónica cuaternaria, ha dejado su impronta en la red de drenaje, que en algunos casos no ha logrado ajustarse al equilibrio perdido tras el desplazamiento de las estructuras. Sin embargo, uno de los principales indicadores de tectonismo activo son los movimientos en masa. En el área se identifican numerosos movimientos en masa, desprendidos principalmente de secuencias subhorizontales volcánicas, con volúmenes que alcanzan los 4 km3. Los movimientos en masa pueden ser divididos en dos grupos: 1) con zonas de arranque asociadas al trazo de estructuras tectónicas, y 2) con zonas de arranques ubicadas en áreas carentes de deformación. Los movimientos relacionados a estructuras presentan zonas de arranque con coronas que se extienden varios kilómetros aguas arriba desde el eje del valle, son generalmente los que involucran mayor volumen de roca, y en general son del tipo avalancha de rocas. Presentan alto grado de trituración de los materiales, pese a que en algunos casos se desarrollan en zonas con relieve local menor a 200 m. Los movimientos en masa con zonas de arranque ubicadas en secciones carentes de deformación, involucran volúmenes menores, alcanzando como máximo los 0,17 km3, y generalmente son deslizamientos rotacionales o volcamientos. Presentan bajo grado de trituración de los materiales, pese a que en ocasiones se dan en zonas con contraste de relieve de hasta 400 metros. Por lo tanto, el fracturamiento de los materiales en zonas de deformación tectónica es el principal control en las diferencias de ambos grupos. La datación de seis depósitos a partir del análisis de núcleos cosmogénicos (3He y 21Ne) y la asignación de edades relativas a partir de criterios estratigráficos y morfológicos, permite observar que los movimientos se distribuyen en un amplio rango temporal entre el holoceno y tiempos previos al Último Máximo Glacial. Tres movimientos presentan edades de alrededor de 6,6 Ka. Uno de ellos se sitúa sobre el trazo de la falla Chacayco y dos a 1 km de distancia de la misma. Esto podría sugerir que fueron disparados por un mismo evento sugiriendo que podrían haber sido disparados por un mismo evento sísmico relacionado con la falla mencionada. Por lo tanto la actividad tectónica sería detonante de los movimientos. Del contraste entre las tasas de incisión y las tasas de exhumación, se concluye que en el área de estudio el levantamiento orogénico desde el Plioceno superior, está siendo compensado por procesos erosivos. Los colapsos de ladera son importantes promotores de la degradación orogénica, y los glaciares y sus correspondientes corrientes glacifluviales son los principales agentes de transporte y exportadores de los materiales hacia el antepaís.

Abstract:
Tectonic structures can be recognized in the transition zone between the Central and Patagonian Andes. This structures deformed Oligo-Miocene deposits from Fm. Cura Mallín and Quaternary deposits from Fm. Cola de Zorro (5-1 Ma), constituting a mountainous front 400 meters high. This Quaternary tectonic activity has left its imprint on the drainage network, which in some cases could not adjust to the equilibrium lost after the displacement of the structures. However, mass movements are one of the main indicators of active tectonism. Numerous mass movements can be identified in the area, detached mainly from subhorizontal volcanic sequences, with volumes up to 4 km3. Mass movements can be divides into two groups: 1) with headscarps associated to the path of tectonic structures, and 2) with headscarps located in areas without deformation. Movements related to structures have headscarps extending several kilometers upstream the valley axis. They usually involve the largest rock volumes, and are mostly of the rock avalanche type. They present a high degree of material crushing, despite that in some cases they develop in zones with local relief lower than 200 m. Mass movements with headscarps located in zones without deformation involve smaller volumes, reaching at most 0.17 km3, and are mostly rotational slides and topples. They present a low degree of material crushing, despite that on occasions they occurred in zones with local relief up to 400 m. Therefore, the material crushing in zones with tectonic deformation is the main control for the differences between both groups. Ages of six rockslides were determined by 3He and 21Ne surface exposure dating, and other deposits were assigned relative ages based on stratigraphic and morphologic criteria. The movements spanned a long temporal range between the Holocene and the Last Glacial Maximum. Three movements have ages around 6.6 ka. One of them is situated on the path of Chacayco fault, and the other two 1 km from the fault. This may suggest that they were triggered by a single seismic event related to the aforementioned fault. Therefore, tectonic activity would be the detonator of the movements. Based on the comparison between incision and exhumation rates, this study concludes that the orogenic uplift since the late Pliocene is being compensated by erosive processes in the study area. Slope collapses are important promoters of orogenic degradation, while glaciers and their related glaciofluvial currents, are the main agents of transport to the foreland.

Peluffo, Lucila. "Caracterización de los mecanismos de defensa a sclerotinia sclerotiorum, agente causal de la podredumbre del estudio de perfiles metabólicos y transcripcionales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En Argentina, la podredumbre húmeda del capítulo, causada por el patógeno necrotrófico Sclerotinia sclerotiorum, es una enfermedad que provoca serias mermas en la producción y tiene una incidencia anual promedio sobre la producción de la pampa húmeda del 10-20%. Los síntomas de la enfermedad se manifiestan al final de la etapa de floración o durante el llenado de granos por lesiones en el receptáculo que pueden extenderse y afectar todo el capítulo, produciendo la caída del mismo. En estados avanzados de podredumbre, se forman esclerocios, estructuras de resistencia del hongo, que pueden permanecer en los tejidos o en suelo y mantenerse viables por más de 8 años constituyendo el inóculo para futuras infecciones. La resistencia a Sclerotinia sclerotiorum en girasol es compleja, habiéndose detectado varios loci de carácter cuantitativo (QTL) específicos de línea, órganos y condiciones ambientales de crecimiento. Dicha complejidad ha limitado el desarrollo de germoplasma resistente por medio del mejoramiento clásico, reforzando la necesidad de la utilización de herramientas genómicas que incluyan tanto marcadores neutros para el mapeo de QTL como el desarrollo de marcadores funcionales desarrollados sobre genes candidatos para la resistencia al patógeno. El conocimiento de los factores determinantes de la patogénesis y las respuestas de defensa del hospedante constituyen factores claves para la identificación de dichos genes candidatos. Uno de los aspectos más destacados del mecanismo de invasión de S. sclerotiorum es la degradación de la pared celular, siendo el ácido oxálico producido por el patógeno uno de los determinantes de la patogénesis, a través de la acidificación y el secuestro de Ca^2+ de la pared celular del tejido hospedante. Asimismo, el ácido oxálico ejerce una regulación dual de la producción de especies reactivas de oxigeno (ROS). Por un lado, en los primeros estadios de la infección el ácido oxálico induce la generación de ROS y la inducción de una muerte celular programada (PCD) en una marera dependiente del pH generando un ambiente favorable para el desarrollo del patógeno, la adquisición de nutrientes y el establecimiento de la relación necrotrófica. Por el otro lado a medida que la infección progresa y al ácido oxálico se acumula en los tejidos del hospedante, el pH disminuye acompañado de la inhibición del estallido oxidativo y la PDC provocando así la muerte celular pero de una manera necrotrófica. En el presente trabajo se abordó el análisis del perfil metabólico primario, el perfil transcripcional de genes candidatos y los perfiles hormonales de dos líneas de girasol con comportamiento contrastante frente a la infección producida por S. sclerotiorum (HA 89 susceptible y RHA801 moderadamente resistente). Aplicando un método de estudio de perfiles metabólicos basado en la técnica de GC/MS, fue posible detectar diferentes patrones involucrando 63 metabolitos entre ellos azucares, aminoácidos, ácidos orgánicos, ácidos grasos y algunos metabolitos secundarios en flores de girasol que constituyen el órgano principal de infección de este patógeno. Los análisis estadísticos paramétricos y multivariados mostraron diferencias metabólicas entre estos dos líneas, así como también efectos de interacción entre línea y los días post inoculación. Los análisis de correlación de redes sugieren que estos cambios metabólicos están sincronizados en una manera dependiente del tiempo en respuesta al patógeno. Se detectaron mayor cantidad de cambios metabólicos diferenciales en la línea susceptible que en la resistente, esto se evidencia en el mayor número de interconexiones que presenta la línea susceptible entre los módulos de metabolitos formados por compuestos pertenecientes a las mismas vías. Por otro lado, la línea resistente muestra mayor interconexión entre metabolitos pertenecientes a las mismas vías. La evaluación de estos datos también demuestra una regulación línea específica de las distintas vías metabólicas, sugiriendo la importancia de detección de patrones metabólicos, en lugar de cambios específicos de metabolitos individuales, cuando se buscan marcadores metabólicos que responden diferencialmente a la infección der patógenos. Por otra parte el análisis de patrones de actividad de enzimas claves del metabolismo primario del carbono (sacarosa sintasa y las invertasas de pared celular, citológica y vacuolar), foto-respiración (catalasa) y del metabolismo de los fenilpropanoides (fenilalanina-amonio-liasa-PAL), mostró también diferencias entre líneas a tiempos tempranos del proceso de infección. La actividad catalasa presentó un aumento significativo en la línea resistente, que indicaría una regulación diferencial de la fotorespiración frente a la infección del patógeno, disminuyendo el nivel de ROS. Para la identificación de nuevos genes candidatos involucrados en la resistencia a este patógeno se construyeron colecciones de ADNc basadas en la técnica SSH de flores de girasol inoculadas y no inoculadas a partir de una línea resistente a los 2 y 4 días post inoculación. Esta estrategia dio como resultado la obtención de secuencias diferencialmente expresadas entre las flores inoculadas y no inoculadas. La mayoría de estos genes están involucrados en los procesos de traducción de proteínas, en los procesos de óxido reducción entre los cuales se encuentra un gran número de genes de respuesta a estreses biótico y abiótico, numerosos genes involucrados en el metabolismo primario. Del mismo modo, también se detectó un alto porcentaje de secuencias sin similitud con secuencias disponibles en bases de datos, sugiriendo que podrían codificar para genes no descriptos previamente, involucrados en la respuesta del girasol frente a este patógeno. De las clonotecas generadas se seleccionó un conjunto de genes para validar su comportamiento por qRT-PCR. De este conjunto, los genes quitinasa, un elemento de respuesta a etileno y el factor de transcripción WRKY7 mostraron patrones de expresión diferenciales entre las muestras inoculadas y controles a los distintos días post inoculación, sugiriendo que estos genes se encuentran involucrados en la respuesta del girasol frente a S. sclerotiorum. Asimismo se identificó un número importante de genes asociados a defensa a patógenos que se expresan en altos niveles en flores de girasol de la línea resistente aún en condiciones control, sin inoculación con el patógeno. Se estudiaron los perfiles hormonales para el ácido salicílico y para el ácido jasmónico por medio de la técnica LC-ESI-MS/MS. Estos estudios corroboraron que el ácido salicílico no contribuye a la resistencia contra S. sclerotiorum y que además se acumula en los tejidos infectados por este hongo, particularmente en la línea susceptible. A su vez, estos estudios demostraron que el jasmónico estaría asociado a la resistencia frente a este patógeno en las flores de girasol de la línea resistente. La integración del análisis de perfiles metabólicos, transcripcionales y perfiles hormonales contribuyó a una mejor comprensión de los cambios en el metabolismo en los capítulos de girasol durante los primeros estadios de la infección facilitando la identificación de genes y vías metabólicas involucradas en la respuesta al patógeno necrotrófico S. sclerotiorum. Asimismo la identificación de cambios en perfiles metabólicos y transcripcionales de genes candidatos, entre líneas resistentes y susceptibles, posibilita el desarrollo de biomarcadores metabólicos y marcadores funcionales para su aplicación en el mejoramiento asistido del cultivo de girasol.

Abstract:
Sclerotinia sclerotiorum, the causal agent of sunflower head rot, represents one of the main constrains in sunflower production in Argentina, with an average annual incidence of 10-20% of total yield of the main growing area, especially when flowering takes place during periods ofexcessive rainfall. The symptoms appeared at the end of the flowering stage or during grain filling, as water-soaked lesions on the receptacles. The fungus can decay the entire receptacle leaving only a bleached, shredded skeleton with large sclerotia. These sclerotia are resistance structures that can remain viable for more than 8 years in the soil and are main sources of inoculum for future infection. S. sclerotiorum resistance in sunflower is complex; several underlying QTLs were found to be specific for genotype, organ and environmental conditions. This complexity has limited the development of resistant genotypes by classical breeding, thus strengthening the need of using genomic tools such as neutral markers for QTL mapping and the development of functional markers based on candidate genes for resistance to this pathogen, for association mapping.. Insights into pathogenesis determinant factors and host defense responses are key factors for the identification of candidate genes. Degradation of plant cell wall is of major importance in the S. sclerotiorum invasion. Oxalic acid (OA) secreted by this pathogen induced pathogenesis by lowering the pH and chelating host cell-wall-Ca^2+ In the early stages of the infection process, low levels of OA elicits reactive oxygen species production (ROS) in host plant tissues, triggering programmed cell death and thus, creating a favorable environment for its development. As OA accumulates, the pH is lowered and the interaction becomes necrotrophic in nature, with the concomitant suppression of ROS and PCD, enabling further pathogen invasion of plant tissue. In the present work primary metabolic profiling, transcriptional profiling of candidate genes and phytohormone profiling was conducted in two sunflower inbred lines with contrasting behavior to S.sclerotiorum infection (HA89 susceptible, RHA801 resistant) Applying a metabolic profiling approach based on GC/MS, different patterns were identified, involving 63 metabolites including major and minor sugars and sugar alcohols, organic acids, amino acids, fatty acids and few soluble secondary metabolites in the sunflower capitulum, the main target organ of pathogen attack. Both point-by-point and non-parametric statistical analyses showed metabolic differences between genotypes as well as interaction effects between genotype and time after inoculation. Network correlation analyses suggested that these metabolic changes were synchronized in a time-dependent manner in response to the pathogen. Differential metabolic changes were detected to a higher extent in the susceptible line rather than in the moderate resistant line, this is in the susceptible line a higher number of interconnection are observed between modules composed by intermediates of the same pathway. Instead, in the resistant one, larger connections of metabolites within modules were detected. Evaluation of these data also demonstrated a genotype specific regulation of distinct metabolic pathways, suggesting the importance of detection of metabolic patterns rather than specific metabolite changes when looking for metabolic markers differentially responding to pathogen infection. The enzymatic activity analysis of key enzymes of the primary carbon (sucrose synthase and cell wall, cytosolic and vacuolar invertases), photorespiratory (catalase) and phenylpropanoid metabolism (phenylalanine ammonia-lyase -PAL-) showed differences between genotypes at early time point of the infection progress. A significant threefold increase in the catalase activity of the resistant genotype was observed, indicating a differential regulation in photorespiration in response to pathogen infection by lowering ROS levels. Subtractive cDNA libraries of inoculated and mock inoculated flowers at 2 y 4 DPI were constructed for identification of candidate genes involved in S. sclerotiorum resistance using a PCR-based suppression subtractive hybridization (SSH) method. Differentially expressed sequences between inoculated and mock inoculated flowers were obtained, including sequences coding for genes involved in protein transduction process, oxidorreduction process, genes involved in abiotic and biotic stress responses, genes involved in primary metabolism and a high number of sequences with no homology to sequences deposited in data bases, suggesting that they could be coding for new genes involved in sunflower response to S. Sclerotiorum. A group of 16 genes was selected for validating these libraries by qRT-PCR, genes coding for chitinase (AN: ABJ74186), Ethylene responsive element (AN: XP_002275892) and the transcription factor WRKY7 showed differential expression patterns between inoculated and mock inoculated flowers, suggesting that these genes are involved in sunflower response to S. sclerotiorum. Besides, a large number of defense-related genes were identified as constitutively expressed in mock inoculated flowers of the resistant genotype. Hormonal profiling analysis of Salicylic and jasmonic acid levels were determined by LC-ESI- MS/MS at different time points after inoculation in inoculated and mock inoculated sunflower flowers. These studies support the findings that SA does not contribute to resistance against S. sclerotiorum, moreover SA accumulation was induced in diseased tissues particularly in the susceptible genotype. Furthermore this work showed that JA was associated to resistance against this pathogen in sunflower capitula. The integration of metabolic, transcription and hormone profiling analysis contributed towards a better understanding of sunflower capitulum metabolism changes during the early stages of infection, greatly facilitate the selection of candidate genes for this plant-pathogen interaction, thus allowing the development of metabolic biomarkers and functional markers based on candidate genes, for application in sunflower breeding programs.

Peluffo, Guillermo D.. "Rol de la ciclooxigenasa-2 en la progresión de tumores de pulmón y mama" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Diversos tipos de tumores poseen elevados niveles de expresión de la ciclooxigenasa-2 y de producción de prostaglandinas. El uso de los antiinflamatorios no esteroides resultó beneficioso en el tratamiento de distintos modelos tumorales, a veces independientemente de la expresión de las ciclooxigenasas, sus blancos primarios. Nuestro objetivo en este trabajo de tesis fue estudiar el papel de la COX-2 en la progresión de distintos modelos tumorales. Utilizamos el adenocarcinoma de pulmón murino LP07 y hallamos que la COX-2 es un componente importante del comportamiento maligno de estas células. En este modelo, la inhibición de la COX-2 redujo el crecimiento del tumor primario y el desarrollo metastásico así como también los síndromes paraneoplásicos provocados por el tumor. La COX-2 y la PGE2 tienen un papel clave en la modulación de la supervivencia de las células LP07, que ejerce modulando las actividades de las quinasas Akt y p38, así como también la actividad del factor de transcripción NF-κB. En los adenocarcinomas de mama murinos LM3 y LMM3 la importancia de la COX-2 es menos relevante, ya que si bien el uso de un inhibidor selectivo de esta enzima, el celecoxib, produjo esencialmente los mismos resultados que en las células LP07, un análogo carente de actividad inhibitoria se comportó de manera similar. La PGE2 exógena no revirtió ninguno de los efectos del celecoxib. En estas células, la modulación de la biología tumoral involucró también un aumento de la apoptosis y el arresto del ciclo celular posiblemente mediado por p21 y p27. Finalmente, utilizamos un modelo más complejo, con el cocultivo de células de un carcinoma ductal in situ de mama humano y fibroblastos inflamatorios de artritis reumática. Las células del CDIS MCF10DCIS.com no expresan COX-2, la cual es inducida cuando son cocultivadas con los fibroblastos de AR. Encontramos que los fibroblastos inducen la progresión hacia el carcinoma invasivo, en parte modulada por la COX-2, cuya inhibición disminuyó los niveles de la MMP-14 y la actividad de la MMP-9. La inhibición de la COX-2, el NF-κB y la MMP-9 redujo la capacidad invasiva de las células MCF10DCIS.com inducida por las interacciones con los fibroblastos inflamatorios. En conjunto, este trabajo sugiere la utilidad de los inhibidores de la COX-2 para el tratamiento de la progresión tumoral y la participación de esta enzima en la modulación del comportamiento de algunos tumores ya sea mediante su expresión constitutiva o inducida por un microambiente inflamatorio.

Abstract:
COX-2 expression is increased in a number of tumors along with elevated PG production. NSAID treatment was found to have antitumor properties in different types of cancers, although the dependency of COX-2 inhibition remains controversial, in spite of being their primary target. We aimed to study the role of COX-2 in tumor progression using different cancer models. We found that COX-2 is a key player for the malignant behavior of the LP07 murine lung adenocarcinoma. COX-2 inhibition delayed not only tumor growth but also the metastatic outcome and the development of paraneoplastic syndromes. COX-2 and PGE2 were found to have an important role for LP07 cell survival by modulating the Akt and p38 kinase activities and the transcription factor NF-κB. The relevance of COX-2 activity in the murine mammary adenocarcinomas LM3 and LMM3 was somewhat less important. The COX-2 specific inhibitor celecoxib renders nearly the same outcome in these cells than in LP07 cells. However the closely related analogue dimethyl-celecoxib, devoid of COX-2 inhibitory activity, was found to be equally effective. Moreover, exogenously added PGE2 did not revert the effect of celecoxib. The antitumor properties also involved an increased apoptosis and the cell cycle arrest possibly modulated by p21 and p27. Finally, we studied the role of COX-2 in mediating the interaction between breast cancer epithelial cells and inflammatory fibroblasts leading to the transition between DCIS and invasive carcinoma. The MCF10DCIS.com cells express COX-2 upon coculture with rheumatoid arthritis synovial fibroblasts. We found that RASF-induced progression to invasive carcinoma involved in part the induction of COX-2 expression, and that MMP-14 levels and MMP-9 activity were reduced by COX-2 inhibition. The increased invasiveness of MCF10DCIS.com cells acquired though the interaction with the inflammatory fibroblasts were lowered by COX-2, MMP-9 or NF-κB inhibition. Taken together, these results suggest COX-2 inhibitors are useful antitumor drugs and the key role for COX-2 in modulating the behavior of some tumors by being either constitutively expressed or induced by an inflammatory stroma.

Pelisch, Federico. "La proteína rica en serinas y argininas SF2/ASF regula la conjugación de sumo" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La modificación post‐traduccional de proteínas por la conjugación de SUMO (del inglés, Small Ubiquitinrelated Modifier) está involucrada en diversas funciones biológicas tales como regulación de la transcripción, localización sub‐celular, respuesta a estrés, reparación del daño al DNA y remodelado de la cromatina. En el presente trabajo, mostramos que la proteína rica en serinas y argininas (SR), SF2/ASF, un factor involucrado en la regulación del splicing y otros procesos relacionados con el metabolismo del ARN, es un regulador de la vía de SUMOilación. Su sobre‐expresión estimula, mientras que la disminución de su expresión inhibe la conjugación de SUMO. SF2/ASF actúa en dos niveles en la cascada de SUMOilación. Primero, interacciona con Ubc9 y aumenta la SUMOilación de sustratos específicos, funcionando como una E3 ligasa de la vía de SUMO. Por otro lado, SF2/ASF interacciona con la conocida E3 ligasa de SUMO, PIAS1, regulando su función en los patrones globales de SUMOilación. Todos estos efectos dependen de la presencia del motivo de reconocimiento al ARN 2 (RRM2) de SF2/ASF. Más aún, SF2/ASF juega un papel importante en la SUMOilación estimulada por el estrés térmico. Estos resultados agregan un nuevo componente a la vía de SUMOilación y también un nuevo rol a la proteína SR multifuncional SF2/ASF.

Abstract:
Post‐translational protein modification by conjugation of small ubiquitin‐related modifier (SUMO) is involved in diverse biological functions such as transcription regulation, sub‐cellular partitioning, stress response, DNA damage repair and chromatin remodeling. In the present work, we show that the serine/arginine‐rich (SR) protein SF2/ASF, a factor involved in splicing regulation and other RNA metabolism‐related processes, is a regulator of the SUMOylation pathway. Its over‐ expression stimulates while its knockdown inhibits SUMO conjugation. SF2/ASF acts at two different levels in the SUMO pathway. First, it interacts with Ubc9 and enhances SUMOylation of specific substrates, functioning as a SUMO E3 ligase. Second, SF2/ASF interacts with the SUMO E3 ligase PIAS1, regulating PIAS1‐ induced overall protein SUMOylation. All these effects are dependent on SF2/ASF RNA recognition motif 2 (RRM2). Moreover, SF2/ASF has an important role in heat shock‐induced SUMOylation. These results add a new component to the SUMOylation pathway and also a new role for the multifunctional SR protein SF2/ASF.

Patitucci, Luciano Damián. "Muscidae (Insecta: Diptera) de la provincia de Buenos Aires. Composición específica y estacionalidad" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Muscidae es una de las familias más diversas dentro de los dípteros caliptrados y presenta hábitos extremadamente variados. La mayoría de sus larvas son carroñeras y tienen un profundo impacto en los ecosistemas ya que contribuyen a la descomposición de la materia orgánica. Este trabajo estable el inventario de especies para la provincia de Buenos Aires listando 40 especies distribuidas en 24 géneros. Paralelamente se aumenta la distribución de las especies presentes en la provincia en todo el país. Se proporciona la redescripción de cuatro especies y se aporta un clave con carácteres diagnósticos. Se describe la dinámica de fl uctuación anual, preferencia por cebos y microhábitats de las especies más abundantes presentes en un gradiente de urbanización del Partido de Almirante Brown, asi como las características de sinantropía en un período de dos años. Se caracteriza a las familias de dípteros caliptrados respecto de su elenco específi co, abundancia y riqueza en distintos espacios verdes de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, estableciendo patrones de abundancia y riqueza del ensamble respecto de los tipos de cebos utilizados y de los microambientes en un período de un año. Se obtiene el inventario preliminar de las especies de dípteros caliptrados en la Reserva Natural Estricta Otamendi y se caracteriza a las comunidades de dípteros en términos de composición y riqueza de taxa en dos ambientes con distinta composición vegetal. Se observó una tendencia general en la preferencia de las especies de Muscidae por los ambientes de sombra, ya sea proporcionado de manera artifi cial en los espacios urbanizados o en las áreas boscosas de los ambientes naturales y se observó una mayor riqueza sobre los cebos de heces respecto de los animales en descomposición (hígado y vísceras de pollo).

Abstract:
Muscidae is one of the most diverse families within of the calytrate Diptera and present extremely diverse habits. Most larvae are scavengers and have a profound impact on ecosystems because contributing to the decomposition of organic matter. This work show the inventory of species for the province of Buenos Aires listing 40 species in 24 genera. At the same time increases the distribution of species of the province throughout the country. It provides the redescription of four species and a key with diagnostic characters. It describe the dynamics of annual fl uctuation, baits and microenvironments preference of the most abundant species present in a gradient of urbanization of the Partido de Almirante Brown, as well as the characteristics of sinantropía over a period of two years. It characterizes families of calyptrate Diptera about their specifi c list, abundance and richness in different green spaces in the City of Buenos Aires, establishing patterns of abundance and richness of the assembly on the types of bait used and the microenvironments in a period of one year. Obtained a preliminary survey of calyptrate Diptera in Otamendi Strict Nature Reserve and is characterized Dipteran communities in terms of composition and richness of taxa in two environments with different plant composition. There was a general trend in the preference of Muscidae species by the environments of shade, either artifi cially provided in the urbanized areas or forest areas in natural environments and there was greater wealth on the baits of feces on decaying animal (chicken liver and viscera).

Pardo, Romina Paola. "Estudio del rol de la proteína VMP1 en los procesos de autofagia, muerte y sobrevida celular en la fisiopatología pancreática" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La autofagia es un proceso de degradación de componentes citoplasmáticos que en algunos casos puede jugar un rol citoprotectivo, mientras que en otros puede llevar a la muerte celular. En trabajos previos hemos descripto a la proteína transmembrana VMP1, la cual se encuentra inducida en la pancreatitis experimental. Con el objetivo de determinar su función, se estudió su participación en el proceso de autofagia. Los resultados obtenidos en esta tesis demostraron que la sobreexpresión de VMP1 induce autofagia en células cultivadas en un medio rico en nutrientes. Además, VMP1 está involucrada en la autofagia inducida por ayuno y rapamicina. Más aún, el silenciamiento de VMP1 inhibe la formación de autofagosomas por el tratamiento con ayuno o rapamicina sugiriendo que VMP1 es necesaria para la autofagia. Aún no ha sido esclarecido el rol de la autofagia en el cáncer de páncreas. Los estudios desarrollados en este trabajo sobre la autofagia y VMP1 en el cáncer de páncreas, indican que el tratamiento con gemcitabina induce autofagia en las líneas celulares de cáncer de páncreas PANC-1 y MIAPaCa-2, y que este proceso promueve la muerte celular por apoptosis. La inhibición de la autofagia con 3-metiladenina redujo significativamente el porcentaje de células apoptóticas en respuesta a la gemcitabina. También se observó que la gemcitabina induce la expresión temprana de VMP1, que el silenciamiento de VMP1 disminuye la apoptosis inducida por este agente quimioterapéutico y que la sobreexpresión de VMP1 aumenta significativamente el porcentaje de células apoptóticas. Estos resultados demuestran que la vía de autofagia mediada por VMP1 participa en la muerte celular por apoptosis inducida por gemcitabina. Con el objetivo de profundizar el estudio de los mecanismos moleculares mediante los cuales VMP1 interviene en la sobrevida o muerte celular, se buscaron interactores de esta proteína utilizando la estrategia de doble híbrido. Se demostró que VMP1 interacciona con S100A10, un miembro de la familia de proteinas S100 que se encontró sobreexpresado en adenocarcinomas pancreáticos. También se observó que la expresión basal del mRNA de S100A10 en las células MIAPaCa-2 es mayor que en las células HeLa. S100A10 se induce bajo estímulos autofágicos, como el tratamiento de ayuno y la gemcitabina, en células HeLa, pero no en las células tumorales MIAPaCa-2, sugiriendo que en estas su expresión se encuentra desregulada. El análisis del rol de la interacción VMP1-S100A10 en las células tumorales mostró que la sobreexpresión de VMP1 induce la expresión del mRNA de S100A10, sugiriendo que S100A10 forma parte de la respuesta celular mediada por VMP1. Cuando la proteína sobreexpresada es S100A10, se modifica la distribución intracelular de VMP1, disminuyendo su patrón punteado característico y aumentando la distribución en una estructura reticulada semejante al retículo endoplásmico. Finalmente se investigó la participación de S100A10 en el proceso de autofagia mediado por VMP1. Se observó que la sobreexpresión de S100A10 disminuye la formación de autofagosomas tanto en respuesta al tratamiento con gemcitabina como ante la inducción directa por la sobreexpresión de VMP1. Se determinó también que S100A10 reduce la apoptosis inducida por gemcitabina, ya que su silenciamiento aumentó la apoptosis causada por este agente quimioterapéutico. Por lo tanto, la expresión de S100A10 disminuye la autofagia y la apoptosis mediadas por VMP1, favoreciendo la resistencia a la muerte de las células de cáncer de páncreas. Los resultados de este trabajo contribuyen a elucidar el rol de la autofagia en el cáncer de páncreas, señalando a la autofagia mediada por VMP1 como un mecanismo molecular que conduce a la muerte por apoptosis de las células neoplásicas de origen pancreático, y a la proteína S100A10 como un mecanismo posible de supervivencia de las células de cáncer de páncreas, que actúa disminuyendo la capacidad de desarrollar autofagia y apoptosis. En base a los resultados obtenidos, proponemos a la vía de autofagia mediada por VMP1 como posible blanco para el estudio de nuevas estrategias terapéuticas para el cáncer de páncreas.

Abstract:
Autophagy is a process of degradation of cytoplasmic components, in some cases can play a cytoprotective role, while in other cases can lead to cell death. In previous works we have described the transmembrane protein VMP1, which is induced in experimental pancreatitis. In order to determine its function, its participation in the process of autophagy was studied. The results obtained in this thesis showed that overexpression of VMP1 triggers autophagy in cells grown in a culture media rich in nutrients. VMP1 is also involved in starvation or rapamycin-induced autophagy. Moreover, the silencing of VMP1 gene inhibits the formation of autophagosomes by starvation or rapamycin treatments, suggesting that VMP1 is necessary for autophagy. The role of autophagy in pancreatic cancer has not been clarified yet. Studies developed in this work on autophagy and VMP1 in pancreatic cancer indicate that treatment with gemcitabine induces autophagy in PANC-1 and MIAPaCa-2 pancreatic cancer cell lines, and this process promotes cell death by apoptosis. Inhibition of autophagy with 3-methyladenine significantly reduced the percentage of apoptotic cells in response to gemcitabine. It was also observed that gemcitabine induces early expression of VMP1. Furthermore, the silencing of VMP1 reduces this chemotherapeutic agent-induced apoptosis and VMP1 overexpression significantly increases the percentage of apoptotic cells. These results demonstrate that the pathway of VMP1-mediated autophagy participates in apoptotic cell death induced by gemcitabine. With the aim of study the molecular mechanisms by which VMP1 participates in cell death or survival, interactors of this protein were searched using the two-hybrid strategy. It was shown that VMP1 interacts with S100A10, a member of the family of proteins S100 found to be overeexpressed in pancreatic adenocarcinoma. It was also noted that the basal expression of the S100A10 mRNA in MIAPaCa-2 cells is higher than in HeLa cells. S100A10 is induced under autophagic stimuli such as starvation or treatment with gemcitabine in HeLa cells, but not in MIAPaCa-2 tumor cells, suggesting that in these cells its expression is unregulated. The analysis of the role of VMP1-S100A10 interaction in tumor cells showed that the overexpression of VMP1 induces S100A10 mRNA expression, suggesting that S100A10 is part of the VMP1-mediated cell response. When S100A10 protein is overexpressed, VMP1 intracellular distribution is modified, lowering its characteristic dotted pattern and increasing distribution in a reticulated structure similar to the endoplasmic reticulum. Finally the involvement of S100A10 in the process of autophagy mediated by VMP1 was investigated. It was found that S100A10 overexpression reduces the formation of autophagosomes induced by gemcitabine treatment or by VMP1 overexpression. It was also determined that S100A10 reduces gemcitabine –induced apoptosis, since its silencing increased apoptosis caused by this chemotherapeutic agent. Therefore, the expression of S100A10 reduces the autophagy and apoptosis mediated by VMP1, increasing death resistance of pancreatic cancer cells. The results of this work contribute to elucidate the role of autophagy in pancreatic cancer, pointing out VMP1- mediated autophagy as a molecular mechanism leading to death by apoptosis of neoplastic pancreatic cells, and protein S100A10 as a possible survival mechanism of pancreatic cancer cells, which acts decreasing the ability to develop autophagy and apoptosis. Based on these results, we postulate the pathway of VMP1-mediated autophagy as a possible target for the study of new therapeutic strategies for pancreatic cancer.

Paolucci, Esteban Marcelo. "Impacto del molusco invasor Limnoperma fortunei sobre el ecosistema: interacción trófica y efectos sobre las larvas de peces nativos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es estudiar el impacto de las velígeras del bivalvo invasor Limnoperna fortunei en dieta de las más abundantes larvas de peces de los ríos y ambientes marginales de la cuenca del Río de la Plata. De los 25 taxones de peces registrados, 18 tenían velígeras de L. fortunei en su tracto digestivo, incluyendo los Characiformes y Siluriformes más abundantes de la cuenca. De las 825 larvas con contenido estomacal, 135 (16%) consumieron exclusivamente larvas de L. fortunei, y el 20% (169 peces) tuvieron L. fortunei y algunas otra presa. La frecuencia y biomasa relativas de velígeras de L. fortunei difirió fuertemente durante el desarrollo larval. En protolarvas y mesolarvas, las velígeras representaron el 30-35% del contenido del intestino, mientras que en metalarvas representaron sólo el 3%. Experimentalmente se observó que las protolarvas y mesolarvas de P. lineatus consumieron velígeras casi exclusivamente (88-90% en términos numéricos y de biomasa, respectivamente) cuando este ítem fue ofrecido en alta concentración, mientras que en metalarvas las velígeras solo representaron el 16% del alimento consumido. Las proporciones de velígeras en el contenido estomacal fueron siempre superiores a las suministradas en la dieta. Las larvas alimentadas con una dieta enriquecida en velígeras crecieron significativamente más (tanto en peso como en largo) que las alimentadas con las otras dietas. Concluimos que este nuevo y abundante recurso alimenticio tiene un impacto importante en la supervivencia y el crecimiento de P. lineatus y probablemente en otras especies de peces.

Abstract:
The aim of this work is to study the impact of veligers of the exotic bivalve Limnoperna fortunei on the diets of the more abundant larval fish in the Río de la Plata basin and associated lentic environments. Of the 25 fish taxa collected, 18 had veligers of L. fortunei in their guts incluiding the more abundant Characiformes and Siluriformes. Of the 825 feeding larvae recorded, 135 (16%) fed exclusively on L. fortunei, and 20% (169 fishes) had L. fortunei and some other prey. The relative frequency and biomass contribution of L. fortunei larvae differed strongly in fishes of different developmental stage. In protolarvae and mesolarvae, veligers accounted for 30–35% of the gut contents. In metalarvae, veligers accounted for only 3%. Experiments show that protolarvae and mesolarvae of Prochilodus lineatus consumed veligers almost exclusively (88-90%, both in numbers and in biomass) when offered prey enriched in veligers, whereas for metalarvae veligers represented only 16.0% of the food consumed. Proportions of veligers in gut contents were always higher than those in the experimental diet. Larvae fed a veliger-enriched diet grew to a significantly larger size than larvae fed the other two diets. We anticipate that this new and abundant food resource has an important impact on the survival and growth of P. lineatus and probably othes fish species.

Pais, Silvia Marina. "Caracterización de fosfatasas de proteínas 2 A en Solanum tuberosum L. y su participación en vías de señalización asociadas a tuberización y estrés" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La fosforilación reversible de proteínas tiene un rol importante en la señalización asociada al desarrollo y al estrés en plantas. Algunos estudios sugieren que las fosfatasas de proteínas 2A (PP2A) están involucradas en estos procesos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las subunidades catalíticas de PP2A (PP2Ac) en Solanum tuberosum L. y estudiar su participación en la señalización asociada a la tuberización y el estrés. Búsquedas bioinformáticas en bases de datos de ESTs revelaron la presencia de seis isoformas de PP2Ac en S. tuberosum. Estas isoformas muestran patrones de expresión diferentes en distintos órganos de la planta y sus niveles cambian durante la formación del tubérculo. Se ha propuesto que las señales hormonales y ambientales que modulan la tuberización son integradas en las hojas. Para estudiar el rol de las PP2As en respuesta a condiciones que afectan la tuberización, se analizó la expresión en hojas de los genes “específicos de tubérculo” Patatina y Pin2, en presencia o ausencia de inhibidores de estas fosfatasas. Se encontró que una alta relación sacarosa/nitrógeno en el medio (condición promotora de la tuberización) estimula la expresión de Patatina y Pin2 posiblemente mediante el aumento de la actividad de PP2A, sin afectar los niveles de ARNm y proteínas de PP2Ac. Por otro lado, el ácido giberélico (GA, regulador negativo de la tuberización), disminuye el nivel de ARNm de algunas de las subunidades catalíticas, lo que se correlaciona con una menor cantidad de proteínas PP2Ac. Esta disminución causada por el GA inhibiría las señales de tuberización río abajo de los efectos inductores de una alta relación sacarosa/nitrógeno. Por otro lado, para estudiar la participación de las PP2As en la señalización asociada al estrés, se estudió la expresión de genes de respuesta a estrés en presencia o ausencia de un inhibidor de estas fosfatasas y se determinaron los patrones de expresión de las subunidades catalíticas en dichas condiciones. Se observó que las isoformas de PP2Ac son diferencialmente reguladas en respuesta a estrés y que estas fosfatasas tendrían un rol positivo en la señalización asociada a salinidad, mientras que regularían negativamente la transducción del estrés biótico.

Abstract:
Protein phosphorylation/dephosphorylation plays critical roles in development and stress signaling in plants, and some studies have suggested that protein phosphatases 2A (PP2A) are involved in these processes. The aim of this work was to characterize PP2A catalytic subunits (PP2Ac) in Solanum tuberosum L. and to study their involvement in tuberization and stress signaling. Bioinformatic searches of EST databases revealed the presence of six PP2Ac isoforms in S. tuberosum. PP2Ac isoforms show distinct expression patterns in different organs and are developmentally regulated during tuber formation. The hormonal and environmental signals that modulate potato tuberization are thought to be integrated in the leaves. To study the roles of PP2A in the leaf responses to conditions that affect tuberization, the expression of the “tuber-specific” genes Patatin and Pin2 was analyzed in the presence or absence of PP2A inhibitors. It was found that a high sucrose/nitrogen ratio, which promotes tuber formation, increases the transcript levels of Patatin and Pin2 possibly by increasing the activity of PP2As, without affecting PP2Ac mRNA or protein levels. In addition, gibberellic acid (GA), a negative regulator of tuberization, down-regulates the transcription of some of the PP2Ac isoforms, decreasing their protein levels. PP2Ac downregulation by GA may inhibit tuberization signaling downstream of the inductive effects of a high sucrose/nitrogen ratio. These results suggest that PP2As may act as molecular switches that can be regulated by signals that affect tuberization to activate or inhibit the response. In addition, to determine if PP2As are involved in stress signaling in potato plants, the expression of stress-responsive genes was analyzed in the presence or absence of a PP2A inhibitor. PP2Ac expression profiles in response to different environmental stresses were also determined. The results obtained show that the expression of different PP2Ac isoforms is modified in response to stress, and that these phosphatases may positively regulate salt stress signaling while having a negative role in biotic stress signal transduction.

La Padula, Pablo Hugo. "Adaptación del miocardio de rata a la hipoxia hipobárica crónica. Actividad mecánica y mecanismos celulares" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La actividad mecánica y su respuesta a la hipoxia/reoxigenación fue estudiada en músculos papilares de ventrículo izquierdo de ratas sometidas a hipoxia hipobárica (53.8 kPa) durante varios períodos y en sus controles (101.3 kPa). Un retardo en la declinación de la contractilidad asociada a la edad y una mayor recuperación post-hipoxia se desarrollaron durante la aclimatización. Entre las enzimas mitocondriales analizadas en ventrículo izquierdo, se encontró una regulación específica de la mtNOS por la hipoxia. Para evaluar la regresión de estos efectos durante el retorno a la normoxia, se investigó la contractilidad en respuesta al calcio y a la hipoxia/reoxigenación y la actividad y expresión de mtNOS al cabo de tres períodos de desaclimatización. La actividad mecánica basal, la recuperación post-hipoxia, y la actividad de mtNOS declinaron linealmente, con un tiempo medio de 5.9, 5.3 y 5.0 meses, respectivamente. La expresión de mtNOS, la cual reaccionó con anticuerpos iNOS y nNOS, mostró un comportamiento similar. Se halló una correlación bifásica entre la actividad de mtNOS y la contractilidad, resultando ésta máxima a 0.70-0.74 nmol NO.min^-1.mg proteina^-1. Este modelo experimental proveería el efecto más persistente conocido actualmente sobre la preservación de la función miocárdica y la tolerancia a la hipoxia. Los resultados sugieren la participación de la mtNOS en el mecanismo involucrado.

Abstract:
Parameters of contractile function and their response to hypoxia/reoxygenation were measured in papillary muscles isolated from left ventricle of rats submitted to hypobaric hypoxia (53.8 kPa) for several periods and of their controls (101.3 kPa). Retardation of age-associated decline in mechanical activity and improved post-hypoxic recovery developed during acclimatization. Among left ventricle mitochondrial enzymes analyzed, specific upregulation of nitric oxide synthase (mtNOS) by hypoxia was found. To evaluate the time course of regression of these effects upon deacclimatization, a group of 5 mo- acclimatized rats were returned to normoxic conditions similar to controls. After three time-periods, contractile function in response to calcium and to hypoxia/reoxygenation and mtNOS activity and expression were determined. All measured parameters showed linear decline during deacclimatization, with mean half-time of 5.9, 5.3, and 5.0 mo, for basal mechanical activity, post- hypoxic recovery, and mtNOS activity, respectively. The expression of mtNOS, which reacted with iNOS and nNOS antibodies, showed similar behavior. The correlation of mtNOS activity with muscle contractility sustained a biphasic modulation, showing optimal performance at 0.70-0.74 nmol NO.min^-1.mg protein^-1. This experimental model would provide the most persistent effect known at present on preservation of myocardial function and improved tolerance to O2 deprivation. Results strongly support the putative role of mtNOS in the mechanism involved.

Ortega, Martín Eduardo. "Supernovas y estrellas de alta masa: sus efectos sobre el medio interestelar" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El presente trabajo analiza la interacción de los remanentes de supernova (RSNs) y de las estrellas de alta masa con el medio interestelar circundante. En particular, se tratan dos de los principales fenómenos asociados con dicha interacción: la formación estelar inducida en la periferia de los RSNs y de las regiones HII y los procesos radiativos que dan origen a la emisión a altas energías en los RSNs. En primer lugar, se presenta un estudio multifrecuencia, en el infrarrojo y en numerosas líneas moleculares, de los mecanismos de formación estelar inducida en los alrededores de cuatro fuentes: el RSN W44, y las regiones HII G034.8-07, G45L y Sh2-173. Los cuatro objetos poseen evidencia de interacción con el gas circundante, condición indispensable para que ocurra la formación estelar inducida. En la segunda parte de esta Tesis, se presenta un estudio en la banda de radio del RSN TeV RX J1713.7-3946, el RSN más brillante en rayos γ hasta el presente y candidato como productor de rayos cósmicos. Este estudio forma parte de un trabajo en colaboración con investigadores del Service d’Astrophysique, DAPNIA, CEA, Saclay (Francia) realizado con el propósito de discernir el origen de la emisión a altas energías observada en dicho remanente. Finalmente, se presenta un estudio del medio interestelar en torno a la fuente HESS J1837-069 y se analiza la posibilidad de que la emisión o TeV de dicha fuente esté originada en mecanismos hadrónicos. Para llevar a cabo estos estudios, se analizaron observaciones en ondas milimétricas (transiciones moleculares) con alta resolución angular llevadas a cabo con el telescopio de disco simple ASTE, así como observaciones interferométricas de la emisión en el continuo de radio a 327 MHz realizadas con el interferómetro indio GMRT. Estas observaciones fueron complementadas con datos de archivo de alta calidad en radio, infrarrojo, óptico y rayos X, provenientes de bases públicas.

Abstract:
The present work analyzes the interaction of supernova remnants (SNRs) and high mass stars with the surrounding interstellar medium. In particular, two phenomena related to this interaction are considered: the triggered star formation in the periphery of SNRs and HII regions, and the origin of the high energy emission associated with SNRs. This Thesis presents a multiwavelength study, based on infrared data and several molecular lines, of triggered star formation in the neighborhood of four sources: the SNR W44, and the HII regions G034.8-07, G45L and Sh2-173. All objects show evidence of interaction with the surrounding gas. The second part of this Thesis presents a radio continuum study of the SNR RX J1713.7-3946, the brightest one in γ rays emission until now, and candidate for producing cosmic rays. This study is part of an international collaboration with researchers of the Service d’Astrophysique, DAPNIA, CEA, Saclay (France) carried out with the purpose of determine the origin of the high energy emission observed towards this SNR. Finally, a molecular study of the interstellar gas around the γ rays source HESS J1837-069 is presented. The possibility that TeV emission of this source is originated in hadronic mechanisms is analyzed. These studies were based on a detailed analysis of high resolution milimetric observations (molecu- lar transitions) obtained with the single dish telescope ASTE and interferometric observations of the radio continuum emission at 327 MHz carried out with the GMRT interferometer. These observations were supplemented with high quality archive data in radio, infrared, optical and X rays, obtained from public databases.

Orsetti, Silvia. "Estudio de la heterogeneidad de ácidos húmicos en el enlace de cationes" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las sustancias húmicas son componentes fundamentales del suelo y aguas naturales, siendo mezclas complejas y heterogéneas de materiales polidispersos formados por reacciones químicas y bioquímicas durante la descomposición y transformación de restos de plantas y microorganismos. En este trabajo de Tesis se estudia el fenómeno de enlace de cationes (protones y metales) a dichas sustancias, en particular ácidos húmicos, dado que el mismo es fundamental en cuanto a la biodisponibilidad y transporte de xenobióticos en ambientes naturales. En las reacciones de enlace a otras especies como cationes se manifiesta claramente la heterogeneidad de las sustancias húmicas, por lo tanto el estudio de la naturaleza de estos enlaces es un paso fundamental para comprender la heterogeneidad de dichas sustancias. Para ello, se comenzó utilizando un método numérico de regularización para obtener distribuciones de constantes de enlace condicionales para el enlace de protones y metales pesados. Luego, se desarrolló un modelo para describir el enlace inespecífico, denominado Modelo de Red Polielectrolítica Elástica (EPN), que describe las sustancias húmicas como geles polielectrolíticos, en el marco de la teoría de redes poliméricas de Flory. Este modelo fue combinado con el modelo NICA para describir las uniones específicas, ajustando con el resultante modelo NICA-EPN datos de titulaciones ácido-base y con Pb(II). De esta manera se obtuvieron las distribuciones “verdaderas” que describen el enlace de estos cationes a los ácidos húmicos estudiados, y que luego fueron comparadas con las distribuciones condicionales obtenidas a partir de medidas de fluorescencia. Así, se observa que por fluorescencia solamente se detecta un tipo de sitio de enlace para el metal, mientras que la distribución “verdadera” es bimodal. Se complementaron estos estudios con el análisis por métodos quimiométricos de matrices de emisión-excitación fluorescente de los ácidos húmicos en ausencia y presencia de Pb(II). Se obtuvieron así los espectros de emisión y excitación de los 3 componentes que contribuyen al comportamiento fluorescente, coincidiendo con lo reportado en literatura. Por otro lado, se obtuvo la concentración relativa de cada componente en muestras con distinta cantidad de Pb(II) agregado, mostrando que la desactivación fluorescente es más marcada cuanto mayor es el grado de aromaticidad de la sustancia. La complementación con estudios de espectroscopía IR-ATR mostró un aumento en la dimerización de grupos –COOH en presencia del metal. En base a estos resultados se plantea la formación de un enlace AH-Pb en el cual el metal está puenteando dos moléculas de ácido húmico, lo cual favorece la agregación intermolecular.

Abstract:
Humic substances are major components of soils and groundwaters, being complex and heterogeneous mixtures of polydisperse materials formed by chemical and biochemical reactions during decomposition and transformation of plants and microorganism remains. In this Thesis, the binding of cations (protons and metals) to such substances is studied, particularly to humic acids, since it is fundamental regarding bioavailability and transport of xenobiotics in natural environments. It is in these binding reactions to other species as cations that the heterogeneity of humic substances is clearly manifested, therefore the study of the nature of these bonds is a crucial step to understand the heterogeneity of these substances. To do so, in a first step a numerical constrained method was used to obtain conditional binding constant distributions for binding of protons and heavy metals. Then, a model to describe the unspecific binding was developed, named Elastic Polyelectrolyte Network model (EPN), which describes humic substances as polyeletrolitical gels in the framework of the Flory polymer network theory. This model was combined with the NICA model to describe the specific binding, adjusting acid-base and Pb(II) tritation data to the resulting NICA-EPN model. By doing so, “true” distributions were obtained, which describe the binding of these cations with the studied humic acids, and then they were compared to the conditional distributions obtained from fluorescence measurements. It was observed that by fluorescence techniques only one type of binding site is detected, while the “true” distribution is bimodal. These studies were complemented with the analysis by chemometric tools of emission-excitation fluorecence maps of the humic acids in the presence and absence of Pb(II). Emission and excitation spectra of 3 distinct components that contribute to fluorescence behavior were obtained, in good agreement to the results reported in literature. On the other hand, the relative concentration of those components in samples with different amounts of Pb(II) was also obtained, showing that the fluorescence quenching is more marked as the aromaticity degree of the component increases. The complementation with IR-ATR spectroscopic studies showed an increase in the dimerization of –COOH groups in the presence of the metal. Based on these results, the formation of a AH-Pb bond where the metal is acting as a bridge between two humic acid molecules, which promotes intermolecular aggregation, is proposed. Thus, the binding of Pb(II) to humic acids has two contributions: one due to single humic-Pb binding and another one due to humic-Pb- humic binding.

Oliva, Damián Ernesto. "Mecanismos de detección visual y evitación de colisiones en un nuevo modelo experimental, el cangrejo Chasmagnathus granulatus" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los artrópodos, en especial los insectos y crustáceos, son animales muy activos que poseen repertorios comportamentales altamente complejos, la mayoría de los cuales se encuentran guiados por la información visual. Así, la interacción entre el sistema visual y motor es fundamental en una variedad de funciones como por ejemplo: tener buenos sistemas de navegación, escape, detección e identificación de predadores, presas y coespecíficos, etc. Dentro de esta gama de comportamientos, esta tesis estudia el funcionamiento del sistema de escape del cangrejo Chasmagnathus granulatus frente a los estímulos de colisión. Para esto, desarrollamos un dispositivo que mide la respuesta locomotora del animal cuando se aplican estímulos visuales generados por computadora. Con este dispositivo caracterizamos la respuesta de escape de Chasmagnathus a estímulos que simulan colisiones de objetos que se acercan al cangrejo a velocidad constante. Medimos la respuesta motora del animal variando distintos parámetros del estímulo como ser: la velocidad de aproximación, el tamaño del objeto, la dirección de acercamiento y el contraste respecto al fondo. Encontramos que la respuesta de escape es compleja y está compuesta por una secuencia de fases encadenadas, es altamente direccional y la velocidad del animal es controlada instantáneamente por la entrada visual. Analizamos el comienzo del escape y encontramos una variable que lo predice. Luego de la caracterización comportamental, pasamos a describir la respuesta de las Neuronas Gigantes de la Lóbula (neuronas LG). Mostramos que las neuronas MLG1 y MLG2 (Monostratified Lóbula Giant Neuron 1 y 2) y BLG1 (Biestratified Lóbula Giant Neuron 1) responden preferencialmente a estímulos que representan colisiones de objetos y codifican la dinámica de expansión temporal de los estímulos. Mostramos que la tasa de disparo de las neuronas MLG1 y BLG1 codifican la velocidad angular del estímulo y que las neuronas MLG2 codifican la aceleración angular. Por otro lado, las neuronas BLG2 (Biestratified Lóbula Giant Neuron 2), codifican una información cualitativamente distinta a las tres neuronas anteriores respondiendo principalmente el comienzo y la finalización de la expansión. Una vez medidas las respuestas comportamentales y neuronales, analizamos la posibilidad de predecir el comienzo del escape en función de la actividad de las neuronas LG y encontramos un criterio que usa información de dos neuronas que correlaciona con el mismo. Finalmente, desarrollamos un modelo simple que usando la tasa de disparo de las neuronas LG, predice la velocidad de los animales durante el escape.

Ocampo, Josefina. "Estudio bioquímico de las isoformas de las subunidades R y C de la proteína quinasa A de Mucor circinelloides y sus efectos en el desarrollo y la diferenciación" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La vía de señalización por cAMP-proteína quinasa A (PKA) juega un rol importante en la regulación del desarrollo, crecimiento y virulencia en un variado número de hongos. La PKA está compuesta por un dímero de subunidades regulatorias (R) y dos subunidades catalíticas (C). La subunidad R posee una estructura modular con un dominio de dimerización y anclaje (D/D) en el extremo Nterminal y dos dominios de unión de cAMP en el extremo C-terminal, entre ambos se encuentra una zona bisagra que incluye el sitio inhibitorio (IS). A ambos lados del IS se definen el linker I y linker II. Nuestro modelo de estudio es el hongo Mucor circinelloides cuya holoenzima PKA se diferencia de las de otras especies por su mayor fuerza de interacción R-C. En esta tesis demostramos la participación del linker I en la interacción R-C y la importancia de su naturaleza química, dada por la presencia de un grupo residuos ácidos, para establecer la alta fuerza de interacción entre las subunidades. Definimos por primera vez en hongos la existencia de cuatro isoformas de subunidad R, PKAR1, PKAR2, PKAR3 Y PKAR4, las cuales se expresan en forma diferencial a lo largo del desarrollo de M. circinelloides. Mediante la construcción de dos cepas que poseen anulados los genes de pkaR1 y pkaR2 demostramos que cada una de las isoformas posee roles diferentes en la diferenciación y morfología del hongo. M. circinelloides también presenta múltiples isoformas de subunidad C, de las cuales hemos ahondado en el estudio de una en particular denominada PKAC. Caracterizamos la isoforma como una posible pseudoquinasa por las características de su secuencia aminoácidica y por la falta de actividad catalítica. Finalmente demostramos la existencia de variantes de R modificadas posttraduccionalmente por ubiquitinación, en particular se definieron isoformas multiubiquitinadas de alto PM y la monoubiquitinación de PKAR2.

Abstract:
The PKA signal transduction pathway plays an important role in growth, development, morphology and virulence of many fungi. PKA is composed of a dimer of regulatory subunits (R) and two catalytic subunits (C). The R subunits has a modular structure: a dimerization docking domain (D/D) at the N-terminus; two tandem cAMP binding domains at the C-terminal region (CNB) and a hinge variable region that includes an inhibitory sequence (IS). At both sides of the IS the regions linker I and linker II are defined. Our experimental model is the fungus Mucor circinelloides with a PKA holoenzyme that differs from other species for its high affinity interaction between R and C subunits. In this work we show the importance of linker I region in the R-C interaction and also the importance of its chemical nature in determining the high affinity interaction between its subunits. The existence of four R subunits isoforms, PKAR1, PKAR2, PKAR3 and PKAR4 is reported. These isoforms show a differential expression through M. circinelloides development. The construction of two strains with deletions in pkaR1 and pkaR2 genes, allowed to demonstrate the role of PKA in the regulation of morphological and cellular development.in M. circinelloides. This fungus also has multiple genes coding for C subunits; we have particularly studied the characteristics and the role of PKAC. This isoform has been characterized as a putative pseudokinase since it is catalytically inactive and has unusual aminoacidic sequence. Finally, we show that some R isoforms are modified post-translationally by ubiquitination, particularly the multiubiquitinated high molecular weight isoforms and the monoubiquitinated PKAR2.

Noetinger, María Sol. "Estudios de asociaciones micro y megaflorísticas del devónico en la porción sur de la Cuenca Tarija, noroeste argentino y sur de Bolivia: edad, correlación y ambiente de sedimentación" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo comprende el estudio de asociaciones fósiles, tanto de palino como megaflora, obtenidas de 6 localidades del noroeste argentino y sur de Bolivia, emplazadas en tres Provincias Geológicas: Cordillera Oriental, Sierras Subandinas y Llanura Chacosalteña. Se realizó el análisis morfotaxonómico de las especies presentes en 130 niveles palinológicos fértiles provenientes tanto de secciones aflorantes como de subsuelo, como también su caracterización palinofacial. Se reconocieron 231 especies de las cuales 116 comprenden especies de esporas y criptosporas, 31 quitinozoos y 84 taxones del microplancton incluyendo acritarcas, prasinofitas, clorofitas e incertae sedis. Se reconocieron 4 especies nuevas, una criptospora, Cymbohilates rubinsteinae, y tres esporas trilete, Acinosporites macgregorii di Pasquo y Noetinger 2008a, Retusotriletes albarinii di Pasquo y Noetinger 2008a y Retusotriletes ottonei Noetinger y di Pasquo 2011. A su vez, se estudiaron dos niveles con ejemplares fértiles y estériles de plantas fósiles del sur de Bolivia que permanecen en asignación específica abierta al igual que varias especies de palinomorfos. El análisis cuali-cuantitativo y la distribución vertical de las especies reconocidas en las localidades estudiadas permitió la definición de 14 asociaciones que abarcan un lapso desde el Devónico Temprano al Devónico Tardío (Lochkoviano s.l. al Frasniano temprano). Debido a la baja frecuencia o ausencia de especies clave, en las asociaciones estudiadas, ha sido dificultoso establecer una confiable correlación de muchas de las asociaciones con las biozonas conocidas para este período. A su vez, la comparación detallada a nivel taxonómico y palinofacial de las distintas asociaciones permitió establecer correlaciones entre las localidades estudiadas. Esto indica que hubo un importante endemismo en las floras de esta región principalmente durante el Devónico Temprano, extendiéndose hacia el Devónico Medio. La baja proporción de asociaciones coetáneas recuperadas, sumado a la pobre preservación de los palinomorfos, la ausencia de “especies guía” representadas en más de una asociación y el carácter longevo de un gran número de especies que aparecen en más de una localidad no ha permitido sustentar la propuesta de una biozonación local. La recuperación de sedimentitas que abarcan casi la totalidad de la columna devónica permitió el estudio de la evolución paleoambiental de puntos específicos de la cuenca y contribuir al mejoramiento de la configuración paleogeográfica regional más aceptada. Los resultados alcanzados aquí demuestran que las floras del sudoeste de Gondwana habrían estado representadas por especies endémicas tanto de plantas como especies de palinomorfos, las cuales sustentan la creación del Subreino Afro- Sudamericano (ASA), para el lapso Devónico Medio – Tardío temprano. La aparición de especies euramericanas en este Subreino, apoya una configuración paleogeográfica con un Océano Rheico casi cerrado o al menos no muy extenso, que permitió la conexión de ambos supercontinentes.

Abstract:
This work includes the study of fossil assemblages of both palyno and megaflora obtained from 6 localities in three different geographical provinces of northwestern Argentina and southern Bolivia: Cordillera Oriental, Sierras Subandinas and the Chacosalteña Plain. A morphotaxonomical analysis was performed on the species present in 130 fertile levels from both outcrop and subsurface sections, as well as their palynofacial characterization. 231 species were recognized, of which 116 species were spores and cryptospores, 31 chitinozoans, and 84 microplankton taxa, including acritarchs, prasinophytes chlorophytes and incertae sedis. Four new species were recognized: a cryptospore, Cymbohilates rubinsteinae, and three trilete spores: Acinosporites macgregorii di Pasquo and Noetinger 2008a, Retusotriletes albarinii di Pasquo and Noetinger 2008a, and Retusotriletes ottonei Noetinger and di Pasquo 2011. From southern Bolivia, two levels with fertile and sterile specimens of fossil plants that remain in open nomenclature were analyzed, as well as several species of palynomorphs. The qualitative and quantitative analysis and vertical distribution of the species recognized in this study allowed the definition of 14 associations covering a period from the Early Devonian to Late Devonian (Lochkovian s.l. to early Frasnian). It was difficult to establish a reliable correlation of many of the associations with known biozones for this period due to the low frequency or absence of key species in the associations. Nevertheless, the detailed comparison of palynofacial and taxonomical features in the recognized associations allowed for the establishment of correlations between the studied sites. This indicated a significant endemism in the flora of this region, mainly during the Early Devonian extending to the Middle Devonian. The low proportion of recovered contemporary associations, combined with poor preservation, lack of key species represented in more than one association, and the long-range nature of a number of species that appear in more than one location does not support the proposal of a local biozonation. The recovery of sediments that cover almost the entire Devonian column allowed the study of the paleoenvironmental evolution of specific points of the basin and contributed to the improvement of the more acceptable regional palaeogeographical settings. The results obtained here demonstrate that the floras of southwestern Gondwana would have been represented by endemic species of both plants and palynomorphs, which support the creation of the Afro- Southamerican Subrealm (ASA) for the Middle to early Late Devonian. The appearance of euramerican species in this Subrealm supports a palaeogeographical setting with a Rheic Ocean, nearly closed or at least not very extensive, allowing the connection of two supercontinents.

Nicolás, Lorena. "Dualidades en teorías de campos conformes no-racionales y sus aplicaciones en teorías de cuerdas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo de tesis estudiamos las dualidades que conectan distintas teorías de campos conformes no-racionales bidimensionales, poniendo especial atención a la dualidad que existe entre la teoría de Liouville y el modelo Wess-Zumino-Novikov-Witten formulado sobre la variedad SL(2,R). Estudiamos varias aplicaciones de esto: Como primera aplicación, analizamos la auto-dualidad de la teoría de Liouville y mostramos, a partir de esta, una realización física de la dualidad de Langlands en funciones de correlación o del modelo Wess-Zumino-Novikov-Witten. Estudiamos luego una familia de teorías conformes biparamétricas, de las cuales tanto la teoría de Liouville cuanto el modelo Wess-Zumino-Novikov-Witten son casos particulares. Calculamos explícitamente funciones de correlación de 2 y 3-puntos de estas teoría ́Basándonos en nuestra observación sobre la dualidad de Langlands, mostramos que el modelo WZNW aparece doblemente repre- sentado en la familia biparamétrica de CFTs, lo cual se relaciona con la existencia de un segundo operador de apantallamiento en la teoría Como otra aplicación comparamos las contribuciones a las amplitudes de 3-puntos de los distintos sectores de la geometría AdS_3 × S^3 × T^4 , analizamos con detalle cómo la relación entre Liouville y Wess-Zumino-Novikov-Witten permite entender el acuerdo exacto entre observables del borde y del bulk en este ejemplo particular de la conjetura de Maldacena. Nuestro enfoque pone de manifiesto el importante papel que desempeñs la supersimetría para el cálculo, lo que se desprende de nuestro análisis detallado de cómo el modelo SU(2) y el modelo SL(2,R) se relacionan mediante una extensión analítica

Abstract:
In the present thesis we study the dualities which connect different non-rational two-dimensional conformal field theories, paying special attention to the duality that exists between Liouville and the Wess-Zumino-Novikov-Witten model formulated on a SL(2,R) manifold. We study several applications of this relation: As a first application, we analyze the Liouville self-duality and show, from this one, a physical realization of the Langlands duality in correlation functions of the Wess-Zumino-Novikov-Witten model. We study then a family of biparametric conformal theories, from which so much Liouville theory as the Wess-Zumino-Novikov-Witten model are particular cases. We explicitly compute 2 and 3-points correlation functions in these theories. Based on our observation on Lang- lands duality, we show that the WZNW model appears represented twice in the bipara- metric family of CFTs, which is related to the existence of a second operator screening in the theory. As another application, we compare the contributions to the 3-point scattering amplitudes from different sectors of AdS_3 × S^3 × T^4 , analizing closely how the relation between Liouville theory and the Wess-Zumino-Novikov-Witten model enables us to un- derstand the exact agreement between bulk and boundary obsevables in this particular example of the Maldacena’s conjecture. Our approach reveals the important role that supersymmetry plays on the computation; this comes as a result of our detailed analysis about how the SU(2) model and the SL(2,R) model are related by an analytic extension.

Muro, Santiago. "Funciones holomorfas de tipo acotado e ideales de polinomios homogéneos en espacios de Banach" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Definimos el concepto de sucesión coherente de ideales de polinomios en espacios de Banach, que nos permite relacionar ideales de polinomios homogéneos de diferentes grados. A cada sucesión coherente A, podemos asociarle un espacio de Fréchet de funciones enteras de tipo acotado, HbA. Extendemos a HbA un resultado de Godefroy y Shapiro sobre hiperciclicidad de operadores de convolución. También estudiamos el concepto de sucesión multiplicativa de ideales de polinomios a valores escalares. Esto nos permite asociar un álgebra de funciones enteras de tipo acotado HbA a cada sucesión coherente y multiplicativa de ideales de polinomios, A. Probamos que, bajo ciertas condiciones naturales, el espectro del álgebra asociada, MbA, puede ser dotado de una estructura de dominio de Riemann sobre el bidual del espacio de Banach. Además la extensión de cada función de HbA al espectro es una función A-holomorfa de tipo acotado en cada componente conexa. Investigamos cómo definir álgebras de funciones holomorfas asociadas a sucesiones de ideales de polinomios en abiertos arbitrarios de un espacio de Banach. Como aplicación probamos que el álgebra de funciones holomorfas nucleares de tipo acotado en un conjunto abierto es un álgebra de Fréchet localmente m-convexa. Para el álgebra de funciones de tipo acotado, caracterizamos la envoltura holomorfa en término del espectro. Las evaluaciones en puntos de la envoltura son siempre continuas, pero mostramos un ejemplo de un abierto balanceado de c0 en el que las extensiones a la envoltura no son necesariamente de tipo acotado, respondiendo una pregunta hecha por Hirschowitz. Probamos que para abiertos balanceados y acotados, las extensiones a la envoltura son de tipo acotado.

Abstract:
We define the concept of coherent sequence of polynomial ideals on Banach spaces, which allows to relate ideals of homogeneous polynomials of different degrees. To each coherent sequence A, we can associate a FrŽechet space of entire mappings of bounded type, HbA. We extend to HbA a result of Godefroy and Shapiro about hypercyclicity of convolution operators. We also consider the concept of multiplicative sequence of scalar valued polynomial ideals. This allows us to associate an algebra of entire functions of bounded type HbA to each coherent and multiplicative sequence of polynomial ideals A. We prove that, under some natural conditions, the spectrum of the associated algebra, MbA, can be endowed with a structure of Riemann domain over the bidual of the Banach space. Moreover, the extension of each function in HbA to the spectrum is an A-holomorphic function of bounded type in each connected component. We investigate how to define algebras of holomorphic functions associated to sequences of polynomial ideals on arbitrary open sets of a Banach space. As an application we show that the algebra of nuclearly holomorphic functions of bounded type on an open set is a locally m-convex FrŽechet algebra. For the algebra of all bounded type functions, we characterize the envelope of holomorphy in terms of the spectrum of the algebra. The evaluations at points of the envelope are always continuous, but we show an example of a balanced open subset of c0 where the extensions to the envelope are not necessarily of bounded type, answering a question posed by Hirschowitz in 1972. We show that for bounded balanced sets, the extensions to the envelope are of bounded type.

Murgida, Gustavo Ezequiel. "Control cuántico coherente mediante transiciones de Landau-Zener" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo proponemos un método para controlar de una manera extremadamente simple el estado de un sistema cuántico. La estrategia de control está basada en el modelo de Landau-Zener y consiste esencialmente en emplear los cruces evitados para alcanzar diferentes niveles de energía y en recorrer lentamente las curvas adiabáticas del espectro,hasta arribar al estado deseado. La simpleza del método proviene de suponer que el sistema se comporta localmente, cerca de cada anticruce, como un sistema de dos niveles de Landau-Zener. Sin embargo, mediante simulaciones numéricas en diferentes sistemas realistas comprobamos que nuestra estrategia de control posee una eficiencia sorprendente. Las primeras aplicaciones numéricas fueron realizadas en un sistema de dos puntos cuánticos acoplados con dos electrones intearactuantes en su interior. Empleando un campo eléctrico externo como parámetro de control y partiendo del estado fundamental a campo E /0, logramos localizar ambos electrones en un mismo punto cuántico, construir estados entrelazados, recorrer en forma eficiente caminos complejos en el espectro para conectar niveles de energía lejanos y construir superposiciones coherentes de varios autoestados. El método tambié fue aplicado en otro sistema muy diferente al anterior, la molécula de LiCN. Nuevamente pudimos controlar exitosamente el estado del sistema y además encontramos una solución al problema de isomerizar la molécula. Para ello también empleamos como parámetro de control un campo eléctrico externo. De esta manera mostramos que nuestro método puede ser aplicado eficientemente en diferentes sistemas complejos y creemos que posee un importante potencial en el campo del control coherente.

Abstract:
In this work we propose a method to control the state of a quantum system in a extremely simple way. The control strategy is based on the Landau-Zener model and consist essentially in using the avoided crossings to reach different energy levels and walking slo- wly the adiabatic curves of the spectrum, in order to reach the target state. The simplicity of the method came from the hypothesis that the system evolves locally, near each avoided crossing, as a two levels Landau-Zener system. However, through numerical simulations in different systems we prove that our control strategy has a surprising efficiency. The first numerical applications were realized on a double quantum with two inter- acting electrons inside. Using an external electric field as control parameter and starting from the ground state at field E / 0, we were able to localize both electrons in the same dot, to construct entangled states, to connect distant energy levels by following complex paths on the spectrum in a efficient way, and to construct coherent superposition of several eigenstates. The method was also applied to a very different system, the LiCN molecule. Again we were able to control successfully the state of the system, and moreover we found a solution for the problem of isomerizing the molecule. Also in this case we used an electric field as control parameter. In this way we have shown that our method can be successfully applied to different complex systems, and we believe that it has a great potential in the field of coherent control

Mosca Torres, María Eugenia. "Selección de alimento y hábitat por vicuñas silvestres de la reserva provincial Los Andes (Salta, Argentina)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta tesis analiza la selección de alimento y hábitat por la vicuña (Vicugna vicugna, Molina 1782) en el marco de la teoría de forrajeo óptimo. Esta predice que los individuos reducirán su amplitud dietaria en la época de mayor disponibilidad de recursos, y expandirán su dieta durante la estación desfavorable por la disminución en la disponibilidad de los items de alta calidad. En relación al hábitat, predice que los animales seleccionarán aquellos parches que presenten mayor abundancia de items alimentarios nutritivos. Sin embargo, la estructura social puede afectar fuertemente esta estrategia de selección. El objetivo de esta tesis fue identificar los patrones de selección de alimento y hábitat por vicuñas durante las épocas de máxima y mínima disponibilidad de recursos, e interpretar dichos patrones bajo el marco conceptual mencionado. La selección de ambos recursos estuvo condicionada por variables ambientales (época del año y disponibilidad de alimento), y por la marcada estructura social característica de esta especie. La disponibilidad vegetal varió entre estaciones y entre años, lo que influyó sobre la selección de los items alimentarios y en consecuencia sobre la selección de microhábitats. Estas variaciones en la selección fueron detectadas tanto en las vicuñas territoriales como en las que carecen de territorio.

Abstract:
This thesis examines food and habitat selection by vicuñas (Vicugna vicugna, Molina 1782) within the framework of the optimal foraging theory. This theory predicts that individuals will narrow their dietary range in the season of highest resource availability and expand their diet during the unfavourable season due to decline in availability of high-quality items. With regard to habitat, it predicts that animals will select those patches exhibiting greater abundance of nutritional food items. However, social structure can strongly affect this selection strategy. The goal of this thesis was to identify food and habitat selection patterns of vicuñas during seasons of maximum and minimum resource availability, and interpret such patterns within the above conceptual framework. The selection of both resources was restricted by environmental variables (season of the year and food availability), and by the pronounced social structure typical of this species. Plant availability varied between seasons and between years, which influenced selection of dietary items and, accordingly, microhabitat selection. These variations in selection were detected for both territorial and non-territorial vicuñas.

Moreno, María Valeria. "Diversidad genética en girasol cultivado: análisis de una colección de germoplasma local para su aplicación en programas de mejoramiento" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los bancos de semillas ofrecen una valiosa fuente de diversidad para el mejoramiento genético de los cultivos. Para un aprovechamiento óptimo de los recursos genéticos, la caracterización fenotípica de los materiales conservados (resistencia a estreses bióticos y abióticos, índices de calidad química, nutricional y rendimiento, entre otros) debe ser acompañada por la caracterización genética de los mismos. De este modo, la diversidad alélica evaluada a través de marcadores moleculares es uno de los mejores indicadores del potencial genético de las entradas (accessions) de un banco. Los objetivos de este trabajo fueron: a) estudiar la diversidad genética en un conjunto de entradas de girasol cultivado preservadas en el Banco Activo de Germoplasma de INTA Manfredi (BAG-IM), b) estudiar la distribución de los polimorfismos detectados y la estructura poblacional, c) evaluar la consistencia entre metodologías de fenotipificación para el carácter de tolerancia a sequía, comparando ensayos de campo con ensayos en condiciones controladas, y d) analizar los patrones de variación nucleotídica en regiones candidatas asociadas al carácter tolerancia a déficit hídrico en líneas endocriadas pertenecientes al programa de mejoramiento de tolerancia a sequía del BAGIM. A fin de cuantificar los niveles de variabilidad se genotipificaron 337 individuos pertenecientes a 21 entradas representativas de las distintas categorías conservadas en el banco (líneas, poblaciones y compuestos) utilizando 16 marcadores microsatélites de localización genómica conocida. Esta elección fue respaldada mediante un análisis de diversidad basado en caracteres morfológicos y agronómicos en base a 309 entradas conservadas en el banco. Se obtuvo un número total de 108 alelos, mientras que el número promedio de alelos por locus (A) fue de 6,75. El locus con mayor valor de A para todas las entradas fue HA2077 (3,66), mientras que los que mostraron menor valor fueron HA3582 y HA4239 (1,57 y 1,52, respectivamente). La heterocigosis esperada promedio fue de 0,29, con valores extremos de 0,476 para la población Prao-Co y de 0,054 para la línea F-164. El número promedio de alelos por locus varió entre 3 y 16. El 100% de las poblaciones (8) y el 83,3% de los compuestos analizados (5 de 6) mostraron desvío a las proporciones de Hardy-Weinberg, con exceso de homocigotas en la mayoría de los loci. La estima global de FST permitió detectar niveles de diferenciación altos y estadísticamente significativos entre entradas (FST=0,413, p<0,05). La estructura poblacional inferida mediante métodos bayesianos mostró la existencia de 14 entidades panmícticas. Individuos de todas las entradas evidenciaron patrones de mezcla con diferentes proporciones de los acervos génicos detectados contribuyendo a sus constituciones genéticas. Los mayores niveles de mezcla se detectaron para la población Prao-co. El ensayo bajo condiciones controladas en déficit hídrico moderado resultó eficiente para la fenotipificación rápida de líneas pertenecientes al programa de mejoramiento para tolerancia a sequía. El análisis de los patrones de variación en 7 regiones candidatas para tolerancia a déficit hídrico (Hahb4- p, Hahb4, Suntip, FB, HaL1L, HaDhn1 y CK) reveló una frecuencia promedio de SNP de 1/48,3 pb y una diversidad nucleotídica promedio (Өw) de 0,00501. Se obtuvo un elevado nivel de desequilibrio de ligamiento (DL) (r2=0,88 a las 900 pb), decayendo sólo en Suntip (r2=0,325 a las 207 pb) y en HaDhn1 (r2=0,249 a las 78 pb). Las regiones Suntip y HaDhn1 serían las más apropiadas como candidatas para mapeo por asociación por la multiplicidad de variantes alélicas en frecuencias similares, mientras que las regiones Hahb4, Hahb4-p, FB y HaL1L resultan interesantes debido a la posible incidencia de procesos selectivos y podrían emplearse en un futuro, complementando el análisis con un mayor número de entradas en la población de mapeo. Este trabajo constituye el primer aporte en la evaluación de la variabilidad genética contenida en el BAG-IM mediante marcadores moleculares. Los resultados aquí presentados permitirán diseñar estrategias para la caracterización genética exhaustiva del banco y sentar las bases para el desarrollo de estudios de mapeo por asociación para el carácter de tolerancia a déficit hídrico.

Abstract:
Seed banks offer a valuable source of alelic diversity for crop genetic improvement. For genetic resources to reach their maximum utilty, the phenotypic characterization of the conserved materials (abiotic and biotic stress resistance, chemical indices, nutritional quality and yield, among others), must be accompanied by their genetic characterization. The genetic composition at the molecular level is the best indicator of the genetic potential of the bank´s accessions. The aims of this study were: a) to asses the genetic diversity of a set sunflower accessions preserved at the Active Germplasm Bank of INTA Manfredi (AGB-IM), b) to assess the polymorphisms distribution and population structure, c) to study the consistence between two methods for the evaluation of drought tolerance, and d) to study the nucleotide diversity of candidates regions for drought tolerance in a set of lines from the corresponding breeding program. For the first goal, a total of 337 individuals corresponding to 21 accessions encompassing a wide range of geographic origins and breeding programmes were selected for analysis. These accessions include inbreed lines, cultivated populations and compounds used in sunflower breeding programs of INTA and they are representative of the morphological diversity spectrum conserved at the AGB-IM, as confirmed by cluster analysis of a more comprehensive set of accessions. Molecular characterization was conducted using 16 microsatellite markers of known genomic location representing different linkage groups. The 16 loci used in the analysis were polymorphic and revealed a total of 108 alleles. The average gene diversity was 0,29 and the average number of alleles per locus was 6,75. Gene diversity indices varied from 0,476 to 0,054, with population Prao-co and line F-164 showing the highest and lowest values, respectively. The mean number of allele per locus ranged from 3 to 16. As expected for breeding materials, departures from Hardy-Weinberg proportions were observed in 100% of populations (8) and 83,3% of composites (5 of 6) studied, with most loci exhibiting an excess of 6 homozygotes. Global estimates of FST revealed very high and statistically significant levels of differentiation among accessions (FST=0,413, p< 0,05). Inference of population structure was also performed using a bayesian model based approach. The number of gene pools showing the highest likelihood was 14. Individuals from all accessions were admixed, with different proportions of the inferred gene pools contributing to their genomic constitution. Prao-co cultivated population exhibited the highest levels of admixture and showed evidence of several gene pools contributing to their genomes. The mannitol test proved to be a reliable and potentially useful method for the screening of drought tolerance in sunflower. Analysis of nucleotide diversity in seven candidate genes (Hahb4-p, Hahb4, Suntip, FB, HaL1L, HaDhn1 and CK) revealed an average SNP frequency of 1/48,3 bp and an average nucleotide diversity (Өw) of 0,00501. A high level of LD was obtained for all the regions (r2=0,88 at 900 pb) except for Suntip where LD decays to r2=0,325 at 207 pb and HaDhn1 where LD decays to r2=0,249 at 78 pb. Suntip and HaDhn1 are the most promising regions for association mapping, while Hahb4, Hahb4-p, FB y HaL1L are interesting for future studies of association mapping with a larger set of lines, because they showed possible incidence of selective process. This work allowed characterizing a set of AGB-IM accessions at the molecular level based on neutral and functional markers. This information will also be useful for genetic resources management, germplasm selection, association mapping studies and plant breeding programs.

Montti, Lía Fernanda. "Ecología y fisiología de Chusquea ramosissima, una especie de bambú monocárpico y los efectos de su floración sobre la dinámica y funcionamiento del Bosque Atlántico semideciduo" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Chusquea ramosissima es un bambú monocárpico muy abundante en el Bosque Atlántico semideciduo. Su presencia ocasiona cambios en la estructura y funcionamiento del ecosistema, al inhibir la regeneración de los árboles del dosel y disminuir la capacidad de cicatrización de los claros. La floración de los bambúes monocárpicos puede afectar la dinámica de los ecosistemas debido a su masiva mortalidad. A partir del año 2001 C. ramosissima comenzó a florecer y morir en diversas zonas de la provincia de Misiones (Argentina). El objetivo general de este estudio fue determinar las características ecofisiológicas de C. ramosissima asociadas a su gran capacidad de colonización y analizar si su floración y muerte constituye una oportunidad para la regeneración de las especies arbóreas. Para ello se realizaron estudios que incluyeron descripciones anatómicas y experimentos ecofisiológicos donde se realizaron comparaciones con otra especie de bambú congenérico presente en el área de estudio (Chusquea tenella) y trabajo de campo en parcelas permanentes. Chusquea ramosissima presentó características anatómicas que complementan la fisiología de la especie y le otorgan ventajas a la hora de competir en ambientes dinámicos. La floración ocurrió de forma asincrónica lo cual permitió mantener cierta cobertura de bambú vivo en extensas áreas durante el período de estudio. Luego de este evento, y en las áreas donde el bambú floreció se produjo un aumento en la radiación solar, se establecieron nuevas plántulas de bambú, se incrementó la abundancia de otras especies del sotobosque y se favoreció el crecimiento de los renovales establecidos. Los cambios ocasionados por la muerte de C. ramosissima, no obstante, estuvieron restringidos a un período de pocos años luego de su muerte. En síntesis, la floración y muerte de C. ramosissima no sería un determinante por si solo de la regeneración de árboles del dosel en el Bosque Atlántico semideciduo de Argentina.

Abstract:
Chusquea ramosissima is a monocarpic woody bamboo very abundant in the semideciduous Atlantic Forest, which colonizes gaps and open areas and affects the structure and function of this ecosystem by inhibiting the regeneration of canopy trees. The flowering of monocarpic bamboos can affect the dynamics of ecosystems due to gregarious mortality. During the year 2001 C. ramosissima started flowering in different areas of Misiones province. The general objective of this study was to determine the ecophysiological traits of C. ramosissima that confer to this species a high colonization capacity, and evaluate if the bamboo died-back promotes tree species regeneration. These studies included anatomical descriptions, ecophysiological experiments and comparative analysis of C. ramosissima and C. tenella and field work in permanent plots. Chusquea ramosissima presented anatomical features that complement the physiology of the species and give advantages when competing in dynamic environments. The flowering occurred asynchronously which allowed the persistence of live bamboo coverage over wide areas during the study period. Bamboo died-back resulted in higher levels of solar radiation in the forest understory, the emergence of new bamboo seedlings, increased abundance of other understory species, and higher growth of tree saplings. The changes brought about by the death of C. ramosissima, however, were limited to a period of a few years after the death of the bamboo. Flowering of C. ramosissima, followed by died-back, does not necessarily facilitate the recovery of the structure and function of the forest ecosystem.

Monserrat, Ana Laura. "Evaluación del estado de conservación de dunas costeras: dos escalas de análisis de la costa pampeana" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se propone un modelo regional de las comunidades vegetales de la costa de dunas pampeanas, y se aplica para evaluar el estatus de conservación de sus diferentes paisajes. Para ello se desarrolla una regionalización de la costa bonaerense en función del patrón geomorfológico, que luego se confirma mediante el análisis de imágenes satelitales y relevamiento en campo de las comunidades vegetales. Se relevaron 256 parcelas en 6 sitios de la costa. Se determinaron 130 especies vegetales en total. La distribución de la vegetación se analizó con métodos multivariados permitiendo definir un patrón asociado a la geomorfología en escala regional y local. Se definieron 2 regiones dentro de las costas de dunas pampeanas, las cuales se corresponden con las Barreras Medanosas Oriental y Austral. La mayor riqueza y diversidad se encontró en el centro de la región austral. Se elaboró un modelo de sucesión espacial de comunidades vegetales en el gradiente mar-tierra en función de los aspectos estructurales y florísticos con diez ambientes que se distinguen tanto por las comunidades que contienen como por su geomorfología típica. Los valores de riqueza de bordes y de índice de conectividad indican un estado de conservación variable a lo largo de la costa, pero también que el gradiente de ambientes, propuesto como modelo, se mantendría en buen estado en la costa pampeana, en los seis sitios estudiados.

Abstract:
In this work a regional model of the vegetal communities from the Pampas dune coast is developed, and it is applied to assess the conservation state of its different landscapes. In order to achieve it, a regionalization of the coast based on the geomorphologic pattern is carried out, by the use of remote sensing tools and field survey on the vegetal communities. 256 plots in 6 different sites of the coast were sampled. 130 vegetal species were determined all through the study area. The vegetation distribution was analyzed by means of multivariate methods, which allowed defining a pattern associated to the geomorphology in the regional as much as in the local scale. 2 regions were defined within the Pampas dune coasts, which correspond with Eastern and Austral Sandy Barriers. The greater wealth and diversity were in the central section of the austral region. A spatial succession model of vegetal communities in the land-to-shore gradient was elaborated; the model were based on the structural and floristic aspects, and it resulted in ten zones distinguished by the communities that contain and the landform where are settled down. The number of edges and the connectivity index indicate a state of variable conservation throughout the coast, but also that the zonal gradient proposed as model would be on in good state in the Pampas coast, in the six studied sites.

Mongelli, Vanesa Claudia. "Estudio funcional de las proteínas codificadas por el virus del Mal de Río Cuarto en hospedantes vegetales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus del Mal de Río Cuarto (MRCV, Fijivirus, Reoviridae) causa la principal enfermedad del maíz en la Argentina. Este virus es capaz de replicar de manera persistente y no citopática en delfácidos (chicharritas) y en el floema de varias especies de gramíneas donde provoca síntomas severos y económicamente importantes. Nuestro trabajo anterior demostró que el MRCV es una especie viral independiente de las conocidas hasta el momento cuyo genoma está formado por 10 segmentos de RNA de doble cadena que codifican para 13 proteínas (PMRCVs) e identificó aquellas proteínas estructurales. Sin embargo, aún se desconoce la función de la mayoría de las proteínas virales (en particular de aquellas no estructurales) y los mecanismos moleculares que determinan el establecimiento y desarrollo de la infección. El objetivo general de esta Tesis fue estudiar, definir y caracterizar la función de distintas proteínas codificadas por el MRCV a nivel molecular en hospedantes vegetales. En particular se propuso identificar las proteínas virales implicadas en el movimiento intercelular del virus dentro de la planta, en la producción de los síntomas del MRCV en plantas (determinantes de patogenicidad) y la(s) posible(s) proteina(s) con actividad supresora del silenciamiento de RNA. Este trabajo de Tesis representa el primer avance en la caracterización a nivel molecular de la función de 10 las 13 PMRCVs (P4, P5-1, P5-2, P6, P7-1, P7-2, P8, P9-1, P9-2 y P10) en sistemas vegetales. Para identificar proteínas del MRCV responsables del movimiento viral en plantas, se ensayó la capacidad de las distintas proteínas en estudio de complementar el movimiento de un Potato virus X (PVX) mutante, defectivo en esta función en Nicotiana benthamiana (Nb). Mediante este sistema, no fue posible identificar proteínas de movimiento entre las codificadas por el MRCV. A continuación se analizaron las características de la infección de plantas de Nb con recombinantes de PVX portando distintas secuencias codificantes para las PMRCVs. Se encontró que la expresión temprana de la proteína no estructural P7-2 produce un drástico aumento en la severidad sintomática que no es acompañado por un aumento en la acumulación viral, mientras que la expresión de P7-1 a partir del mismo vector retrasa la infección viral y reduce la severidad sintomática. Por otra parte, la presencia de los secuencias codificantes para las proteínas P9-1 (mayoritaria del viroplasma) y P10 (mayoritaria de cápside externa) en el mismo vector viral impidió el establecimiento de la infección, sugieriendo que estas proteínas podrían desencadenar una respuesta de resistencia a la infección viral en Nb. Con el objetivo de identificar proteínas del MRCV con actividad supresora del silenciamiento del RNA se utilizó un sistema modelo que se basa en la inducción del silenciamiento en plantas transgénicas que expresan GFP mediante la agroinfiltración con una cepa capaz de expresar un inductor de silenciamiento (GFP o dsGFP). Ninguna de las proteínas del MRCV evaluadas logró interferir con el silenciamiento tanto local como sistémico en este sistema. Sin embargo, mediante el uso de este sistema modelo se logró demostrar que la expresión de las proteínas no estructurales P7-1 y P7-2 codificadas por el segmento 7 del MRCV da lugar a reducciones en la acumulación del mRNA de transgenes expresados de manera transitoria o estable en un proceso que probablemente sea de origen postranscripcional. Esta actividad no había sido descripta hasta el momento para otras proteínas virales y es muy novedosa e interesante, en particular cuando se considera que la proteína P7-2 no está presente en el virus Nilaparvata lugens reovirus (NLRV) que pertenece al mismo género que el MRCV pero que es incapaz de infectar plantas. En conjunto los resultados sugieren que las proteínas P7-1 y P7-2 podrían estar implicadas en la regulación de la expresión tanto de genes virales como del hospedante durante el desarrollo de la infección del MRCV. Finalmente, al estudiar la expresión transitoria de las PMRCVs en Nb se encontró que sus niveles de expresión son bajos y que la utilización de dicotiledóneas como sistemas modelo para el estudio funcional de estas proteínas podría no ser conveniente en ciertos casos. Al analizar comparativamente el uso de codones de las PMRCVs en Nb, maíz y Nilaparvata lugens (delfácido en el que replica el NLRV), no se encontraron diferecias en el uso de codones que pudieran explicar los bajos niveles de expresión en Nb. La información y herramientas biológicas aquí generadas constituyen un gran progreso en el estudio de la actividad de las proteínas coficadas por el MRCV lo cual contribuirá al diseño de futuras estrategias efectivas de control de esta enfermedad en plantas.

Abstract:
Mal de Río Cuarto virus (MRCV, Fijivirus, Reoviridae) causes the most important maize disease in Argentina. This virus is able to replicate both in delphacid vectors (planthoppers) where it replicates in a persistent and non-cytopathic manner and in the phloem tissue of several grass species where it produces severe and economically important symptoms. Our previous work showed that MRCV is a new viral species and that its genome consists of 10 segments of double-stranded RNA that encode for 13 proteins (PMRCVs). The identity of the viral structural proteins was also defined. However, the biological function of the different PMRCVs (particularly in the case of non-structural proteins) and the mechanisms that determine the establishment and development of MRCV infection in both hosts are still unknown. The aim of this Thesis was to study, define and characterize the role of different MRCV-encoded proteins in plant hosts at a molecular level. Our particular goals were to identify those viral proteins involved in the virus spread within the plant, those involved in the development of MRCV symptoms in plants (pathogenicity determinants) and the possible viral RNA silencing suppressors. This Thesis represents the first general survey of the biological function at a molecular level of 10 of the 13 PMRCVs (P4, P5-1, P5-2, P6, P7-1, P7-2, P8, P9-1, P9-2 y P10) using plant model system. In order to identify those PMRCVs involved in plant intercellular movement, the capacity of different viral-encoded proteins to complement movement of a mutant Potato Virus X (PVX) in Nicotiana benthamiana (Nb) was assessed. Using this model system no movement protein was found amongst PMRCVs. Next, general features of infections caused by recombinant PVX viruses carrying PMRCVs-coding sequences in Nb were analyzed. It was found that the early expression of P7-2 causes a drastic increase in symptom severity without producing a concomitant increase in recombinant PVX accumulation. Expression of P7-1 from the same PVX vector, on the other hand, lead to a delay in the progress of viral infection and reduced symptom severity. Inoculation of Nb with PVX recombinant vectors harboring P9-1 (major viroplasm protein) or P10 (major outher capsid protein) coding sequences produced no infection, suggesting that these proteins might trigger a resistance response. With the aim of identifying viral suppressors of RNA silencing among PMRCVs, a model system based on the induction of RNA silencing in transgenic plants expressing GFP by agroinfiltration with a strain capable of expressing an inducer of silencing (GFP or dsGFP) was used. None of the analyzed PMRCVs interfered with local or systemic RNA silencing. However using this same model system it was found that the expression of non-structural proteins P7-1 and P7-1, both encoded by MRCV genomic segment 7, caused reductions in the accumulation of mRNA from trangenes either transiently or stably expressed in a process that most probably is of postrancriptional origin. This activity has not been described so far for other viral protein and is very novel and interesting, especially considering that P7-2 is not present in Nilaparvata lugens reovirus (NLRV), a Fijivirus that is unable to infect plants. Overall, the results suggest that P7-1 and P7-2 may be involved in regulating the expression of both viral and host genes during MRCV infection. Finally, upon studying the transient expression of PMRCVs in Nb it was shown that their expression levels are low and that the use of dicots species as model systems for the functional study of these proteins may not be appropriate in certain cases. Comparative analysis of the codon usage of PMRCVs in Nb, maize and Nilaparvata lugens (delphacid in which NLRV replicates), showed that the low levels of expression of PMRCVs in Nb cannot be explained by differences in codon usage between these species. The information and tools generated here represent an important advancement in the study of MRCV-coded activities that will in turn contribute to the development of effective long-term strategies for disease control in plants.

Mc Cabe, Sofía I.. "Biología del comportamiento en abejas recolectoras de néctar: un estudio comparado entre abejas meliponas y melíferas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Dentro de la familia Apidae, la tribu meliponini engloba a más de 350 especies de abejas sin aguijón. Estas abejas presentan un amplio repertorio de comportamientos de recolección y comunicación. A pesar de estar cercanamente relacionadas con la abeja melífera, que es uno de los modelos de estudio en invertebrados por excelencia en aspectos cognitivas, hasta la fecha existen muy pocas descripciones de las habilidades de aprendizaje de las abejas sin aguijón. El objetivo central de esta tesis fue desarrollar estudios comparados de dichas habilidades cognitivas y correlacionarlas con sus estrategias de recolección y comunicación. Para ello utilizamos por primera vez en abejas sin aguijón el protocolo de condicionamiento clásico REP (Respuesta de Extensión de Probóscide) que permite evaluar el aprendizaje olfativo en condiciones controladas de laboratorio. Las especies de abejas con las que trabajamos mostraron diferencias en su capacidad para resolver una tarea de condicionamiento diferencial olfativo. A partir de su desempeño en este protocolo, discutimos la relevancia de la información olfativa durante la recolección para cada especie. Particularmente con las abejas de la especie Melipona quadrifasciata, estudiamos la transmisión de información olfativa en el contexto social de la colmena. Observamos que esta especie de abejas tiene la capacidad de efectuar un aprendizaje mediado por una congénere (aprendizaje social). También determinamos que la información que adquieren en la colmena en términos olfativos puede ser evocada en un paradigma artificial de aprendizaje, demostrando que son capaces de efectuar una transferencia de información entre contextos. La producción de vibraciones al retornar de recolectar alimento forma parte de las estrategias para obtener recursos de muchas especies de abejas sin aguijón. Evaluamos las vibraciones ocurridas durante la transferencia de alimento entre compañeras en Melipona quadrifasciata. Estas vibraciones parecieran afectar el establecimiento del vínculo olor-recompensa. La incorporación de las abejas sin aguijón como modelos de estudio abre un promisorio campo de investigación comparativa en aprendizaje olfativo en insectos sociales.

Abstract:
Within the Apidae family, the meliponini tribe includes more than 350 stingless bee species. These bees present a wide repertoire of foraging and communication behaviour. Even though they are closely related to the honeybee, which is the best studied invertebrate study model regarding cognition, so far there are little descriptions of stingless bees ́ learning abilities. The main goal of this thesis was to develop comparative studies of those abilities and correlate them with their foraging and communication strategies. To achieve that we used for the first time in stingless bees the classical PER (Proboscis Extension Response) conditioning protocol that allows the evaluation of olfactory learning in controlled laboratory conditions. The bee species we worked with showed differences in their ability to solve a differential conditioning olfactory task. Based on their performance in this protocol we discuss the relevance of olfactory information during foraging for each bee species. Particularly with Melipona quadrifasciata bees we studied the transmission of olfactory information in the social context inside the hive. We observed that this bee species is able to learn from a nestmate (social learning). We also determined that the olfactory information acquired inside the hive can be evoked later on in an artificial learning paradigm, showing that they are able to transfer information between different contexts. The production of vibrations when returning from a successful foraging trip is part of many stingless bees ́ foraging strategies. We assessed the vibrations that occurred during food transfer between nestmates in Melipona quadrifasciata. These vibrations appear to affect the establishment of the odor-reward association. The incorporation of stingless bees as study models opens a promising field of comparative research of olfactory learning in social insects.

Maymó, Julieta L.. "Regulación de la expresión de leptina y su acción en células placentarias" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Conocida inicialmente como la “hormona de la gordura” por su asociación con la saciedad y el balance energético del organismo, la leptina, una proteína de 16 kDa, también es reconocida actualmente por el papel fundamental que posee en la biología reproductiva. La expresión de la leptina y de sus receptores, descubierta originalmente en tejido adiposo, se ha evidenciado en otros tejidos tales como placenta, en donde la síntesis de leptina es altamente regulada. Los niveles de leptina aumentan tempranamente durante la gestación, aún antes de que se incremente el tejido adiposo, sugiriendo que existen otros factores que modulan su producción. Sin embargo, los mecanismos de acción de la leptina sobre la implantación y el crecimiento embrionario son aún desconocidos. El presente trabajo ha sido desarrollado con el objeto de estudiar las vías de transducción de señales activadas por leptina en placenta y para elucidar los mecanismos que median el efecto antiapoptótico de leptina. Más aún, dado que la leptina sería importante en la supervivencia celular y en el mantenimiento de la placenta, analizamos la regulación de la expresión de leptina en placenta por la hormona gonadotrofina coriónica y por AMPc. Se utilizaron como modelo las líneas celulares trofoblásticas JEG-3 y BeWo, y explantos de placenta humana a término. Demostramos que la unión de la leptina a su receptor causa la estimulación de las vías de señalización de JAK/STAT, MAPK, p38MAPK y PI3K. Asimismo, hallamos que la leptina cumple una función antiapoptótica en células trofoblásticas y que ejerce dicha función principalmente a través de la vía de MAPK. Cuando estudiamos la regulación de la expresión de leptina, los resultados mostraron que la hCG, una hormona esencial del embarazo, estimula la transcripción y la síntesis de leptina en placenta. Contrario a lo esperado, el AMPc inhibió la inducción de leptina por hCG. El efecto de hCG sobre leptina parece estar mediado por la vía de MAPK. Observamos que el AMPc estimula la expresión de leptina en placenta y que el nucleótido es capaz de activar no sólo la vía de señalización de PKA sino también la de MAPK. En este sentido, demostramos que la acción inductora del AMPc sobre leptina estaría mediada por un entrecruzamiento entre dichas vías. En síntesis, los resultados obtenidos contribuyen a esclarecer el modo de acción de la leptina en placenta así como los mecanismos de regulación de la expresión de la proteína, y sustentan la importancia de la leptina en la biología de la reproducción.

Abstract:
Leptin is a 16000 MW protein product of the obese gene, originally considered as an adipocyte-derived signaling molecule for the central control of metabolism. However, leptin has been suggested to be involved in other functions during pregnancy, particularly in placenta, where it was found to be expressed. Leptin levels rise early in pregnancy, even before the augmentation of adipose tissue, suggesting that others factors modulate its production. The mechanism of leptin action in implantation and fetal development remains unknown. In the present work we aimed to study the signal transduction pathways activated by leptin in placenta and to elucidate the mechanisms that mediate the antiapoptotic effect of leptin. Moreover, since leptin could be important in trophoblastic cell survival, and therefore in maintenance of the placenta, we attempted to study the regulation of leptin expression in placenta. BeWo and JEG-3 choriocarcinoma cell lines, as well as trophoblastic cells from human placenta explants were used. We determined that both models of work express leptin and leptin receptor. We have found that leptin stimulates JAK-STAT, MAPK and PI3K signaling pathways. We demonstrated that leptin has an antiapoptotic effect in placental cells and this effect is mediated mainly by the MAPK pathway. We have also found that hCG added to BeWo cells showed a stimulatory effect on leptin expression and transcription. Similar results were obtained with placental explants thus evidencing physiological relevance. We found that dbcAMP counteracted hCG effect on leptin expression. Moreover, hCG effect on leptin is mediated by the MAPK pathway. We showed that cAMP stimulates leptin expression in placental cells. More interestingly, we demonstrated that the cAMP effect on leptin expression probably involves both the PKA classic signaling pathway and the MAPK signal transduction pathway. A cross talk between these pathways would be responsible for the observed effects. In summary, our results will lead to a better understanding of the regulatory mechanisms of leptin expression by human placental trophoblasts and further support the importance of leptin in the biology of reproduction

Martínez, María Julia. "Impacto de la interacción entre ß-lactoglobulina, caseinoglicomacropéptido y polisacáridos en coloides alimentarios" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de este trabajo fue estudiar el impacto de las interacciones entre ß-lg y CMP y entre ellos y polisacaridos en coloides alimentarios. Previamente se caracterizo el comportamiento de los componentes solos. El CMP presento autoensamblaje reversible dependiente del pH a temperatura ambiente. A pesar de que a pH 7 el CMP no gelifica, todos los sistemas mixtos gelificaron indicando un efecto sinergico. Por el contrario, a pH 3,5 donde ambos componentes gelificaron por si solos, se observo un fuerte antagonismo. Este comportamiento fue atribuido a la formacion de estructuras CMP:ß-lg asociadas electrostaticamente. La agregacion y gelificacion termica de la ß-lg es promovida y acelerada en presencia de polisacaridos. Esto se puede explicar en terminos de un aumento de la concentracion efectiva de ß-lg debido a la limitada compatibilidad termodinamica entre ambos biopolimeros. Respecto al comportamiento interfacial de mezclas CMP:polisacaridos predomino el efecto competitivo ya que el CMP es muy pequeno y no se favorecerian tanto los fenomenos segregativos. Los resultados de este trabajo indican que la asociacion entre CMP y ß-lg en solucion es mas una regla que una excepcion y tiene un fuerte impacto sobre las propiedades funcionales. Probablemente debido a que la ß-lg domina el comportamiento de los sistemas mixtos CMP:ß-lg, no se ha dado importancia al estudio de la influencia de CMP en productos derivados del suero. Los resultados muestran que el sinergismo entre CMP y ß-lg en ciertas condiciones puede ser explotado para el diseno de alimentos con una textura deseada conteniendo CMP como ingrediente bioactivo. Tambien se demuestra que la utilizacion de mezclas de proteinas y polisacaridos puede promover una mejora de las propiedades funcionales.

Abstract:
The objective of this work was to study the impact of the interactions between CMP-ß-lg and with polysaccharides in food colloids. Previously the behaviour of the pure components was characterized. CMP undergoes a pH-dependent self-assembly at room temperature. At pH 7.0, where CMP did not gel, all the mixed systems gelled, but strong synergism was observed for 25:75 CMP:ß-lg ratio. Contrarily, at pH 3.5 where both components gelled on their own, a strong antagonism was observed. This behaviour is ascribed to the formation of electrostatically driven assembled CMP:ß-lg structures. The thermal aggregation and gelation of ß-lg is promoted and accelerated in the presence of polysaccharides. This was explained in terms of an increase of the effective ß-lg concentration because of a limited thermodynamic compatibility between both biopolymers. Respect to the interfacial behaviour of CMP:polysaccharides mixtures predominated the competitive effect due to CMP is very small so segregative phenomenon are not favorable. The present results point out that the assembly of CMP and ß-lg in aqueous solutions is more a rule than an exception and has a strong impact on functional properties. Probably, because ß-lg dominates the behaviour of mixed CMP:ß-lg systems it has been not highlighted the importance of studying the influence of CMP in whey products. The results show that the synergism between CMP and ß-lg in some conditions can be exploited for the design of foods with desired textures containing CMP as a bioactive ingredient. Additionally, it was demonstrated that the use of protein and polysaccharides mixtures can promote an improvement on functional properties.

Martínez, María Guadalupe. "Estudio de las etapas tempranas del ciclo de replicación del Virus Junín" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, es un miembro de la familia Arenaviridae. Es un virus envuelto de genoma ARN segmentado cuyo ciclo de replicación ha sido caracterizado en varios aspectos. La entrada a las células blanco se realiza vía endocitosis mediada por receptor y posterior fusión dependiente de pH. Una vez que la nucleocápside se encuentra dentro del citoplasma se expresan 5 proteínas estructurales, mediante una estrategia de codificación ambisentido. La proteína mayoritaria asociada a la nucleocápside es denominada NP. A partir de un único precursor glicoproteico (GPC), se obtienen dos glicoproteínas virales denominadas GP1 y GP2 y el péptido señal (SP). Estos conforman las estructuras claviformes encontradas en la envoltura viral. Se desconocen hasta el momento los mecanismos detallados y las estructuras celulares involucradas en los eventos tempranos del ciclo de replicación viral. En este trabajo se estudiaron aspectos de la interacción virus-célula huésped, caracterizando el rol de distintas proteínas celulares en los eventos tempranos del ciclo de multiplicación del JUNV. En primer lugar se analizó la vía de entrada utilizada por el JUNV para ser endocitado en las células, así como también se estudiaron las proteínas celulares esenciales para este proceso. Con este fin se utilizaron plásmidos que expresan proteínas dominantes negativas, encontrándose que es esencial la Eps-15 y dinamina en el proceso de endocitosis, mientras que las proteínas Rab5 y Rab7 juegan un rol esencial en el paso posterior a la internalización y previo a la fusión. Luego se estudio la interacción del virus con las principales redes del citoesqueleto: los microfilamentos y los microtúbulos. Se utilizaron compuestos capaces de despolimerizar o estabilizar específicamente cada una de estas redes. La internalización del virus disminuyó de manera dosisdependiente en presencia de compuestos que alteraban la integridad de los microfilamentos o estabilizaban los microtúbulos. El tropismo de los virus está regulado por la interacción entre factores celulares y virales durante la transmisión, diseminación y replicación en el huésped. La unión del virus a receptores de superficie específicos determina la susceptibilidad de las células a ser infectadas. La entrada y diseminación de diferentes familias virales puede ser mediada por lectinas de tipo C, como DC-sign o L-sign. Por este motivo se estudió si estas actúan en la infección con el JUNV. Para esto se utilizaron células relativamente no permisivas a la infección por JUNV como las células CHO, las cuales al expresar transientemente las lectinas DC-sign o L-sign fueron infectadas por el JUNV de forma altamente eficiente. Fue demostrado que las células 3T3, que en su forma salvaje no permiten la infección del JUNV, se vuelven permisivas al mismo al expresar de forma estable estas lectinas, y esta interacción es específica lo cual fue demostrado al bloquear la infección con anticuerpos específicos contra las lectinas o el compuesto mannan. Actualmente no hay tratamiento para las fiebres hemorrágicas, por lo que existe una necesidad crítica de desarrollar terapias efectivas para tratar los brotes anuales y contrarrestar su potencial uso como armas biológicas. Todos los virus causantes de fiebres hemorrágicas infectan preferencialmente monocitos, macrófagos y células dendríticas durante las etapas tempranas de la enfermedad. Es por este motivo que estas células representan un blanco potencial en el tratamiento de las fiebres hemorrágicas.

Abstract:
Junín virus (JUNV), the etiological agent of argentine hemorrhagic fever, is a member of the Arenaviridae family. The viral cycle multiplication of this RNA virus has been characterized in different aspects. The entrance in the target cells is performed by receptor-mediated endocytosis following pH dependant fusion step. Once the nucleocapsids are within the cytoplasm the ambisense strategy allows expression of five structural proteins. The major nucleocapsid associated protein is named NP. As a result of the glycoprotein precursor synthesis and after its maturation, two glycoproteins and a signal peptide are obtained. These components, named GP1, GP2 and SP, form the claviform structures found in the viral envelope. At this moment, the detailed mechanisms and cellular structures involved in the early steps of the virus replication cycle are not known although. In this work the interaction between virus and host cells was studied, characterizing the role of cellular proteins in early events of virus replication cycle. It was first evaluated the way of entry used by JUNV to entry host cells and the proteins involved in this process. With this end, plasmids that express dominant negative mutants were used, demonstrating that EPS-15 and dynamin were key proteins in this step, while Rab5 and Rab7 were essential in a step after entry prior to fusion. Then the interaction between JUNV and the main components of the cytoskeleton was evaluated. Compounds that specifically disrupt or stabilized microfilaments or microtubules were used. Virus entry was extremely reduced in a dose dependent way in the presence of compounds that depolimerized microfilaments or stabilized microtubules. Target cell tropism of enveloped viruses is regulated by interactions between viral and cellular factors during transmission, dissemination, and replication within the host. Binding of viral envelope glycoproteins to specific cellsurface receptors determines susceptibility to viral entry. The entry and dissemination of viruses in several families can be mediated by C-type lectins such as DC-sign and L-sign. Results from transduction with JUNV pseudovirus show that infection of relatively non-permissive CHO cells was markedly enhanced when we over expressed DC-sign or L-sign. Experiments using non-permissive mouse 3T3 cells showed that they become permissive to JUNV pseudovirus transduction when they stable express DC-sign, or its homologue L-sign, and that transduction of 3T3 stable expressing DC-sign or L-sign is blocked by anti–DC-sign and/or L-sign antibodies and mannan. Therefore hDC- and hL-sign can act as a novel attachment factors that mediate entry of JUNV. To the date there is no treatment for hemorrhagic fevers, so there is an important requirement to develop specific therapies against annual outbreaks and reduce its potential use as a bioterrorism agent. All hemorrhagic fever viruses infect preferentially monocytes, macrophages and dendritic cells during early stages of the disease. For this reason these cells represent a potential target in the treatment of hemorrhagic fevers.

Martinioni, Daniel Roberto. "Estratigrafía y sedimentología del mesozoico superior-paleógeno de la Sierra de Beauvoir y adyacencias, Isla Grande de Tierra del Fuego, Argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El interior de la isla Grande de Tierra del Fuego es un área montañosa con accesos limitados, está densamente cubierta de vegetación boscosa y cuenta con un importante relleno de sedimentos glaciarios y post-glaciarios jóvenes. Su geología preglaciaria está ensombrecida por estos últimos dos rasgos que la cubren y, en relación con la superficie total del área de estudio, las buenas exposiciones son exiguas y se reconocen como parches y/o franjas en el fondo de algunos valles fluviales y en algunas de las crestas de las más altas cumbres de los cordones situados al oeste del la laguna Chepelmut, entre el lago Fagnano y la margen sur del Río Grande. En las sierras de Beauvoir, de Apen, de las Pinturas y aledaños se reconocieron asomos de dos paquetes principales de roca: a) uno, más antiguo, del Jurásico Superior-Cretácico Inferior (s.l.) que comienza con volcanitas ácidas, pero está dominado por meta- sedimentitas fangolíticas plegadas, parcialmente deformadas internamente y atravesado por rocas ígneas, y b) otro más joven del Cretácico Superior-Paleógeno con unidades sedimentarias falladas y plegadas constituido por rocas fangolíticas en sus horizontes más bajos, que gradualmente pasan a unidades con interestratificación de fangolita y arenisca, hasta tener participación dominante de arenisca y abundancia de conglomerado en los niveles superiores. El conjunto de unidades del Jurásico Superior-Cretácico Inferior (s.l.) está compuesto por la siguiente sucesión de unidades: 1) Formación Lemaire, unidad dominantemente volcanógena (Jurásico Superior); 2) Pizarras del Lago Fagnano, unidad meta-sedimentaria dominada por arcilita (¿Jurásico Superior-Cretácico Inferior bajo?; 3) Formación Beauvoir, unidad meta-sedimentaria dominada por fangolitas, con inocerámidos y Aucellina spp. (Cretácico Inferior alto; Aptiano-Albiano, con una posible extensión hasta el Cenomaniano basal); 4) Formación Hito XIX, unidad meta-sedimentaria epiclástica, sutilmente más areniscosa que la Formación Beauvoir, con participación de areniscas margosas, con inocerámidos, Aucellina spp. y belemnites (Cretácico Inferior alto, Albiano); y 5) rocas ígneas, constituidas por un cuerpo plutónico y diversos diques leucocráticos y básicos (uno de los diques básicos arrojó una edad isotópica de 104 ± 4 Ma, Albiano superior bajo), intruyen a las Pizarras del Lago Fagnano y a la Formación Beauvoir, respectivamente. Las rocas sedimentarias del Cretácico Superior-Paleógeno comprenden a las siguientes unidades: 1) Capas del Arroyo Castorera, sedimentitas fangolíticas con escasos y delgados niveles de toba intercalados, con inocerámidos (Cretácico Superior, ¿Cenomaniano superior?-Turoniano); 2) Capas del Río Rodríguez, sucesiones grano- y estrato- crecientes de fangolita, limolita y arenisca muy fina limosa, con inocerámidos (Cretácico Superior, Coniaciano-¿Campaniano?); 3) Capas del Cerro Fumando, sedimentitas dominadas por fangolita arenosa en sus términos basales con mayor participación arenosa en los cuspidales, dividida en un miembro fangolítico y un miembro areniscoso, con amonites y dinoquistes diagnósticos, sin inocerámidos (Cretácico Superior-¿Paleoceno?; Maastrictiano-¿Daniano?); 4) Capas del Cerro Apen, sedimentitas areniscosas hasta conglomerádicas con participación de fangolita y ritmitas heterolíticas apoyadas en discordancia erosiva sobre las Capas del Cerro Fumando, integradas por un miembro inferior areniscoso y un miembro superior conglomerádico a areniscoso, con dinoquistes diagnósticos (Paleoceno; miembro inferior Daniano y miembro superior Daniano-Thanetiano); y 5) Formación Ballena, sedimentitas conglomerádicas con arenisca y fangolita intercalada, desconectadas de las anteriores, portadora de dinoquistes diagnósticos (Paleógeno, Eoceno medio). Cada uno de los paquetes registra una de las dos fases principales en la evolución de las cuencas del extremo austral de América del Sur para el Jurásico Superior-Paleógeno medio. Las rocas del Jurásico Superior-Cretácico Inferior -hasta Cenomaniano basal- corresponden a unidades acumuladas durante etapas iniciales de extensión y luego de relleno de la cuenca marginal de Rocas Verdes hasta su cierre definitivo en el Cretácico Tardío más temprano. Las sedimentitas del Cretácico Superior-Paleógeno medio son los depósitos que resultaron del desarrollo de la cuenca de antepaís (Austral o de Magallanes), que tuvo una etapa inicial de transición con sedimentación marina profunda y subsidencia térmica, luego del cierre e inversión tectónica de la cuenca marginal, seguida de la progresiva elevación del orógeno de los Andes Fueguinos a expensas de la faja plegada y corrida que se formó por el régimen compresivo instalado en el área. El ascenso orogénico y el avance de esta faja fueron produciendo sucesivas acumulaciones sedimentarias que en conjunto representan una sucesión compuesta grano-creciente, que pasó de unidades dominadas por fangolitas a intercalar progresivamente unidades areniscosas y conglomerádicas.

Abstract:
The inner part of Tierra del Fuego Island is a rugged mountainous area with only limited access, dense Nothofagus forests, and a profuse quaternary sedimentary cover, constituted mainly of glacial and post-glacial deposits. Thereafter, the pre-glacial geological composition remains obscured and somewhat hidden underneath. In relation to the whole surface of the study area, the good exposures are scanty and can be identified mainly as patches or stripes that show up along some of the fluvial valleys or follow the upper crests of the mountain chains located west of Chepelmut Lake, between the Fagnano Lake and the southern margin of the Grande River. In Sierra de Beauvoir, Sierra de Apen, Sierra de las Pinturas, and their neighboring areas the geological units can be grouped into two packages: a) an older Upper Jurassic-Lower Cretaceous (s.l.) set of units that starts with acidic volcanic rocks, but is largely mudstone dominated, forming a meta-sedimentary package, that is folded, internally deformed, and cut across by igneous rocks, and b) a younger Upper Cretaceous-Paleogene folded and faulted sedimentary succession constituted by an up-section mudstone-to-sandstone-to- conglomerate dominated set of units. The Upper Jurassic-Lower Cretaceous (s.l.) package comprises the following units: 1) Lemaire Formation, mainly volcanogenic rocks (Upper Jurassic); 2) Lago Fagnano Slates, clay-rich meta-sedimentary rocks (Upper Jurassic?- lower Lower Cretaceous?); 3) Beauvoir Formation, mudstone dominated meta-sedimentary unit, with inoceramids and Aucellina spp. (upper Lower Cretaceous; Aptian-Albian with a possible extension to the lowermost Cenomanian); 4) Hito XIX Formation, epiclastic meta-sedimentary unit, with sandy marls and a subtle sandier composition than Beauvoir Formation, and with inoceramids, Aucellina spp., and belemnites (upper Lower Cretaceous; Albian); and, 5) igneous rocks, a plutonic body and several leucocratic and basic dikes (one of the basic dikes gave an isotopic age of 104 ± 4 My, lower upper Albian), respectively, intrude and crosscut the Lago Fagnano Slates and the Beauvoir Formation. The Upper Cretaceous-Paleogene sedimentary rocks comprise the following units: 1) Arroyo Castorera Beds, mudstone dominated sedimentary rocks with interbedding of a few thin tuff layers, with inoceramids (Upper Cretaceous, upper Cenomanian?-Turonian); 2) Río Rodríguez Beds, coarsening- and thickening-upward successions consisting of mudstone, siltstone, and very fine silty sandstone, with inoceramids (Upper Cretaceous, Coniacian-Campanian?); 3) Cerro Fumando Beds, sedimentary unit dominated by sandy mudstone in the lower sections and increasingly sandier in the upper levels, divided into two members (miembros Fangolítico –i.e. muddy- and Areniscoso -i.e. sandy-), with diagnostic ammonites and dinocysts, with no inoceramids (Upper Cretaceous-Paleocene?; Maastrichtian-Danian?); 4) Cerro Apen Beds, sandy to conglomeratic sedimentary rocks with intercalated mudstone and heterolithic packages that rest on an erosive unconformity over the Cerro Fumando Beds, a lower (Inferior) member is sandstone dominated and an upper (Superior) member is conglomerate to sandstone dominated, with diagnostic dinocysts (Paleocene; lower member Danian, and upper member Danian-Thanetian); and 5) Ballena Formation, conglomeratic sedimentary rocks with intercalated sandstone and mudstone intervals, disconnected of the other units, with diagnostic dinocysts (Paleogene, mid Eocene). Each of the two packages records one of the two main phases in the evolution of the marine sedimentary basins in the southernmost part of South America from the Late Jurassic to the mid Paleogene. The Upper Jurassic-Lower Cretacosus -until lowermost Cenomanian- units where accumulated during the initial extensional period and subsequent fill of the Rocas Verdes Marginal Basin until its final closure during the earliest Late Cretaceous. The Upper Cretaceous-Paleogene sedimentary rocks are the deposits produced after the development of the Austral (or Magallanes) Foreland Basin that had an initial transitional period with deep marine sedimentation and thermal subsidence, right after the closure and tectonic inversion of the marginal basin, followed by the progressive orogenic elevation of the Fuegian Andes since the folded and thrusted belt started to evolve in the area under a regime of compression. The orogenic uplift and the advance of this belt produced successive sedimentary accumulations that respresent as a whole a coarsening upward succession that begun with the deposition of mudstone dominated units and continued with increasingly coarser, sandy to conglomeratic, sedimentary units.

Marazita, Mariela C.. "P19INK4D y su fosforilación secuencial son críticas para el mantenimiento de la integridad del genoma" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las proteínas INK4 (p16INK4a, p15INK4b, p18INK4c, y p19INK4d) componen una familia de inhibidores de quinasas dependientes de ciclinas (CDKs) que funcionan en la fase G1 bloqueando la actividad de las quinasas CDK4 y CDK6. Mientras que comparten similitudes en sus estructuras formadas por repeticiones de motivos ankirina, estas proteínas difieren en sus patrones de expresión durante el desarrollo y en el adulto. Más allá de la aparente redundancia de su función en el control del ciclo celular, algunos de sus miembros han sido involucrados en distintos procesos tales como diferenciación, senescencia y supresión tumoral. En este trabajo demostramos que p19INK4d es inducido por radiación UV en diferentes tipos celulares (células de Leydig MA-10, cultivos primarios de células de Leydig, BHK-21 y WI-38) y que la inducción es específica de este miembro de la familia. Planteamos que la inducción podría implicar una posible participación de p19INK4d en la reparación del ADN. Mediante diversas estrategias, establecimos que p19INK4d efectivamente tiene una función en este proceso. Además, frente a daño genotóxico la disminución en los niveles de p19INK4d aumentó el número de aberraciones cromosómicas, concluyendo que la actividad de p19INK4d afecta el mantenimiento de la integridad del genoma. Sumado a esto, las células con niveles reducidos de p19INK4d resultaron con menor capacidad de sobrevivir al tratamiento con radiación UV. En respuesta al daño al ADN se encienden una serie de cascadas de señales que involucran diversas proteínas quinasas. Estas quinasas activan a su vez diferentes sustratos efectores de la respuesta conduciendo a la reparación, o no, del daño. Habiendo descripto una función de p19 en este proceso el siguiente objetivo consistió en estudiar si p19 formaba parte de este grupo de proteínas efectoras fosforiladas frente al daño. Encontramos que p19 es fosforilada por agentes que inducen diferentes tipos de daño (radiación UV, péptido β-amiloide y cisplatino). Identificamos dos sitios de fosforilación, serina 76 y treonina 141, los cuales son fosforilados en forma secuencial. Los resultados señalan a CDK2 y CDK5 como responsables de la fosforilación en serina 76 y a PKA en treonina 141. La fosforilación de ambos sitios ocurre en el citoplasma y la serina 76 es necesaria para la translocación de p19 al núcleo en esta respuesta. Evaluamos luego la relevancia fisiológica de la fosforilación en estos sitios. Encontramos que tanto la serina 76 como la treonina 141 son estrictamente necesarias para la función de p19 en la reparación del ADN. Sin embargo, mutantes en estos sitios incapaces de ser fosforiladas, mantienen la misma capacidad de inhibir la proliferación del ciclo celular cuando son sobreexpresadas. Esto señala que existe una independencia en la función de reparación respecto de la función inhibitoria de CDK4/CDK6. Por último, iniciamos el estudio referido a las posibles proteínas que interactúan con p19INK4d relacionadas a la función de reparación del ADN. Describimos seis interactores encontrados por análisis de doble híbrido en levaduras que resultan de particular interés porque presentan funciones en procesos comunes a p19INK4d. Estos posibles interactores participan en la reparación del ADN, en la remodelación de la cromatina y en la regulación de factores de transcripción del ciclo celular y la apoptosis. En vista de la participación de p19INK4d en respuesta a diversos agentes genotóxicos, que activan distintos mecanismos de reparación, postulamos que p19INK4d actuaría en la reparación del ADN específicamente en una etapa temprana de la respuesta celular al daño al ADN. El análisis de los potenciales interactores de p19INK4d, luego de la injuria genotóxica, permite sugerir la participación de esta proteína en los complejos remodeladores de la cromatina necesarios para permitir el acceso de las maquinarias de reparación en los sitios de daño.

Abstract:
INK4 proteins are members of a family of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors that function in G1 to block the activity of CDK4 and CDK6. While they share clear structural similarities, numerous studies have shown that INK4 proteins differ in their expression patterns during development and in the adult, and have differing roles in differentiation, senescence and tumor suppression. We demonstrated that p19INK4d is induced in response to UV radiation in different cell types (Leydig MA-10 cell line, primary Leydig cell culture, BHK-21 y WI-38) and that this induction is specific of this family member. We hypothesized that this fact could be related to a role of p19INK4d in DNA repair. Taking advantage of diverse strategies, we found that p19INK4d effectively participates in this process. Adding to this, diminished p19INK4d levels when cells are exposed to genotoxics leads to an increase in the number of chromosomal aberrations. From these facts we concluded that p19INK4d influences the maintenance of genome integrity. Furthermore, cells with reduced p19 expression resulted in a significant decrease of the survival rate upon UV damage. In DNA damage response different pathways are triggered involving the activity of protein kinases. These kinases in turn activate diverse substrates that act as effectors of the response leading or not to DNA repair. Having described a function of p19INK4d in this process, the next aim leaded the study to analize whether p19INK4d is part of the effector proteins phosphorylated after DNA damage. We found out that p19 is phosphorylated by treatment with agents which induce different types of DNA damage (UV light, β-amyloid peptide and cisplatin). We identified two phosphorylation sites, serine 76 and threonine 141, which are sequentially phosphorylated. Our results pointed out CDK2 and CDK5 as responsible kinases to act on serine 76 and PKA as the one acting on threonine 141. Both sites are phosphorylated in the cytoplasmic space but only serine 76 is required for p19INK4d translocation to the nucleus in this response. We investigate the physiological relevance of the phosphorylation process in these sites. We showed that serine 76 and threonine 141 are strictly necessary for p19 function in DNA repair. However, those mutants of p19 not able to be phosphorylated have full capacity for inhibiting cell proliferation when they are overexpressed. This fact indicates the independence of p19INK4d functions. Lastly, we began the study related to potential proteins interacting with p19INK4d linked to DNA repair. We described six interactors found by a yeast two hybrid screening which appear particularly interesting because they have functions in common processes to p19INK4d. These interactors participate in processes such as: DNA repair, chromatin remodelling and regulation of transcription factors of the cell cycle and apoptosis. Taking into account p19INK4d participation in response to diverse genotoxic agents which activate different DNA repair mechanisms, we finally raised the hypothesis that p19 would be taking part in an early step in DNA damage response, specifically in DNA repair. The analysis of potential p19INK4d interactors, after genotoxic injury, suggests that this protein could play a role as a member of chromatin - remodeling complexes necessary for the accessibility of DNA repair machineries to DNA damaged sites.

López García, Fernando. "Una inversa a derecha para el operador divergencia en dominios con cúspides" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis estudiamos la existencia de soluciones del problema de la divergencia en dominios con cúspides exteriores. Es sabido que los resultados clásicos en espacios de Sobolev standard, los cuales son una herramienta básica para el análisis variacional de las ecuaciones de Stokes, no valen para este tipo de dominios. Una clase importante de dominios con cúspide exteriores es la de los Hölder-α, con 0 menor α menor 1. Primero, probamos que si Ω es un dominio Hölder-α plano simplemente conexo existen soluciones de div u = f en un espacio de Sobolev con peso apropiado. Los pesos considerados son potencias de la distancia al borde de dominio. Luego, para una clase particular de dominios Hölder-α acotados Ω ⊂ Rn , con cúspides exteriores de dimensión entera m ≤ n − 2, mostramos la existencia de soluciones en espacios de Sobolev con peso de la ecuación de divergencia. Los pesos considerados en este caso son potencias de la distancia a la cúspide. Este resultado es más fuerte que el que involucra la distancia a ∂Ω. También, obtenemos una versión de la desigualdad de Korn con peso para esta clase de dominios y pesos. Las potencias en los pesos de los resultados obtenidos en este trabajo resultan optimas. Como una aplicación de los resultados previos, probamos la existencia y unicidad de soluciones variacionales de las ecuaciones de Stokes en espacios de Sobolev con peso apropiados. Como consecuencia, obtenemos la existencia de una solución (u, p) ∈ H0^1 (Ω)^n × Lr (Ω), con r menor 2 dependiendo de la potencia de la cúspide, donde u denota la velocidad y p la presión. Por otro lado, damos condiciones suficientes para que una potencia de la distancia a un compacto esté en la clase de Muckenhoupt Ap . Este resultado es auxiliar en este trabajo aunque nos parece que tiene interés en sí mismo. Finalmente, definimos nuevos contraejemplos para el problema de la divergencia y la desigualdad de Korn en dominios cuspidales, donde las cúspides no son necesariamente

Abstract:
This thesis deals with solutions of the divergence equation on domains with external cusps. It is known that the classic results in standard Sobolev spaces, which are basic in the variational analysis of the Stokes equations, are not valid for this kind of domains. An important class of domains which could present external cusps is the Hölder-α, witho 0 minor than α minor than 1. First, we prove that if Ω is a planar simply connected Hölder-α domain there exist solutions of div u = f in appropriate weighted Sobolev spaces. The weights considered are powers of the distance to the boundary. Then, for particular bounded Hölder-α domains Ω ⊂ Rn which have cusps of integer dimension m ≤ n−2, we show existence of solutions of the divergence equation in weighted Sobolev spaces. The weights used in this case are powers of the distance to the cusp. It provides a result stronger that the one with the distance to ∂Ω. Also, we obtain weighted Korn type inequalities for this class of domains and weights. Moreover, we show that the powers of the distance in the results obtained in this thesis are optimal. As an application of the previous divergence results, we prove the well posedness of the Stokes equations in appropriate weighted Sobolev spaces. In consequence, we obtain the existence of a solution (u, p) ∈ H0^1 (Ω)^n × Lr (Ω) for some r minor than 2 depending on the power of the cusp, where u is the velocity and p the pressure. On the other hand, we give sufficient conditions in order to determinate when a power of the distance to a compact set belongs to the Muckenhoupt class Ap . In this thesis this is an auxiliary result, however, we consider it interesting in itself. Finally, we define new counterexamples for the divergence problem and Korn inequality on domains with external cusps arbitrarily narrow.

López, Sergio Gabriel. "Fotofísica de colorantes en medios heterogéneos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los sistemas compuestos por colorantes en medios restringidos poseen aplicaciones en los ámbitos de la ciencia, la tecnología y la salud. Por otro lado, el estudio de la fotofísica de estos sistemas es relevante para la comprensión de procesos biológicos tales como la fotosíntesis, en los que se requiere un alto grado de ordenamiento por parte de los cromóforos involucrados. Con el fin de incrementar la fracción de luz absorbida por el sistema es necesario utilizar altas concentraciones locales de colorante, lo que puede dar lugar a fenómenos de acoplamiento excitónico y a procesos de transferencia de energía. Por otra parte, la coadsorción de dos o más colorantes que presentan un importante solapamiento espectral puede extender el intervalo de longitudes de onda aprovechables por el sistema, canalizando la energía de excitación hacia un fotosensibilizador de tipo I o de tipo II, que actúe como colorante efector. En este trabajo se estudian sistemas de colorantes adsorbidos sobre celulosa microcristalina o incluidos en zeolitas. Se hace hincapié en el efecto de las interacciones colorante-colorante sobre la distribución espacial de los cromóforos, en la influencia de esta distribución sobre los procesos fotofísicos en los que éstos intervienen y en el efecto del microentorno provisto por el sólido sobre las propiedades fotofísicas de los colorantes. La posible presencia de agregados moleculares, la ocurrencia de procesos de transferencia de energía y la fuerte dispersión de luz por parte del sólido hacen indispensable la utilización de herramientas especiales a tal fin.

Abstract:
Systems composed by dyes in constrained media can be applied in the fields of science, technology, and health. Besides, the study of these systems is relevant for the understanding of biological processes such as photosynthesis, in which the chromophores are subjected to a high level of ordering. With the aim of enhancing the amount of light adsorbed by the system high dye local concentrations are required, giving place to exciton coupling and energy transfer processes. On the other hand, coadsorption of two or more dyes acting as donor- acceptor couples can extend the range of excitation wavelengths, canalizing the excitation energy towards a suitable effector, like a type I or type II photosensitizer. In this work dyes adsorbed onto microcrystalline cellulose or included into zeolites are studied. Emphasis is given to the effect of dye to dye interactions on the spatial distribution and the influence of this distribution and the microenvironment provided by the solid on the photophysics of the dye. The possibility of molecular aggregation, the occurrence of energy transfer processes and the strong light scattering that takes place within the solid make the use of special tools mandatory for this kind of studies.

López, María Gabriela. "Complementación de baculovirus que no forman cuerpos de oclusión mediante líneas celulares establemente transformadas con el gen poliedrina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los baculovirus son un grupo diverso de virus que infectan artrópodos. AcMNPV presenta un ciclo de vida bifásico, con dos fenotipos virales: los virus brotantes y los virus derivados de los cuerpos de oclusión (ODV). Los ODV, responsables de la infección primaria, se embeben en una matriz de poliedrina, proteína que no es esencial para la propagación de los virus en cultivos celulares. Este trabajo de tesis tuvo como objetivo desarrollar una línea transformada de insecto empaquetadora de baculovirus defectivos en poliedrina, bajo la hipótesis de que es posible complementar esta deficiencia en trans desde el genoma celular. Para ello, en primer lugar, se evaluaron diferentes secuencias regulatorias del promotor del gen poliedrina controlando el gen reportero CAT, en ensayos de transfección transitoria. Luego de la infección con un baculovirus occ-, los mayores niveles de actividad reportera se obtuvieron con una región regulatoria de 2.735 pb que incluye el promotor mínimo de poliedrina y secuencias con funciones de enhancer de la transcripción en baculovirus (hr1, AcSp). Esta región fue seleccionada para regular la transcripción de poliedrina en las líneas establemente transformadas. La infección de una de estas líneas, Sf9POL, demostró que la morfogénesis de poliedros ocurre de manera similar a la de la infección natural y los baculovirus resultantes mostraron además una infectividad similar a los salvajes, en larvas de Rachiplusia nu. Las larvas infectadas oralmente mostraron sólo una progenie viral de genotipo pol- y fenotipo occ-, incapaz de propagar la infección por vías naturales. Colateralmente, se describe una mutación en la posición 130 del gen poliedrina, responsable de alteraciones en tamaño, morfología y capacidad de oclusión de poliedros. En conjunto, los resultados y conclusiones de este trabajo contribuyen al conocimiento de los mecanismos de morfogénesis de los cuerpos de oclusión en el baculovirus AcMNPV, con importantes implicancias en el diseño de baculovirus recombinantes para el control de plagas y la producción de proteínas recombinantes en larvas de lepidópteros.

Abstract:
Baculovirus is a diverse family of virus infecting arthropoda. AcMNPV has a bifasic life cycle, with two viral phenotypes: budded virus and occlusion-derived virus (ODV). ODVs are responsible of primary infection and occlude into a polyhedrin matrix to form polyhedra. Polyhedrin is a non- essential protein for multiplication in cell cultures. The main goal of this work was to develop a transformed insect cell line for packaging polyhedrin defective virus, hypothesizing that it is possible to complement this deletion in trans from the cellular genome. In this way, different polh gene regulatory sequences driving CAT were evaluated by reporter gene assays. After infection of transiently transformed insect cells with pol- baculovirus, the highest CAT levels were obteined when a 2,735 bp regulatory region containing the minimum polyhedrin promoter preceded by hr1 and AcSp sequences with known enhancer activities, was positioned upstream CAT gene. This region was selected to regulate the transcription of polyhedrin in stably transformed cell lines. The infection of one line named Sf9POL demonstrated that morphogenesis of polyhedra occurred in a similar way to the natural infection and that rendered baculovirus also showed similar infectivity for Rachiplusia nu larvae. Oral infection of larvae with polyhedra from infection of Sf9POL line, generated a viral progeny genotypically pol- and phenotypically occ-, unable to propagate the infection by natural means. Colaterally, a mutation in the polyhedrin gene mapped in the position 130 and responsible for alterations in size, shape and capacity for virion occlusion, is described. Together, results and conclusions presented here contribute to the knowledge of the morphogenesis of occlusion bodies in AcMNPV, with important implicances in the design of recombinant baculovirus for plague control and production of heterologous proteins in lepidoptera larvae.

Lodillinsky, Catalina. "Rol de los receptores activadores de la proliferación de peroxisomas del subtipo gamma el el cáncer de vejiga" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
PPARg es miembro de la superfamilia de receptores nucleares que son factores de transcripción activados por su ligando. BCG es el tratamiento de elección para el cáncer devejiga (CaV) que no invade músculo. Nos propusimos estudiar el rol de éste receptor bajo el tratamiento de BCG en ésta patología. Encontramos que BCG es capaz de inducir la expresión de PPARg en células de CaV murinas, MB49 y los ligandos de PPARg potencian este efecto. La actividad transcripcional de PPARg también es aumentada por BCG y potenciada por 15-d-PGJ2, ligando de PPARg. Al mismo tiempo BCG induce en las líneas de CaV la expresión de iNOS y la consecuente producción de óxido nítrico (NO). Los ligandos de PPARg inhibirían la producción de NO inducida por BCG, por un mecanismo PPARg independiente pero dependiente de la vía de NF-kB. In vivo, BCG inhibe el crecimiento de tumores, efecto bloqueado por BADGE, antagonista de PPARg indicando que parte del mecanismo de acción de BCG es a través de PPARg. BCG induce la expresión de colágeno, SMA-alfa y FGF-2, al mismo tiempo induce la proliferación de los fibroblastos in vitro. RO revierte el efecto inhibitorio ejercido por BCG, inhibiendo diferentes funciones de macrófagos y fibroblastos. BCG media su mecanismo de acción antitumoral, en parte, a través de PPARg pero su activación in vivo con agonistas exógenos puede ser contraproducente dado su funcionalidad en el sistema inmune. Obtuvimos una nueva línea celular, MB49-I y desarrollamos un modelo murino ortotópico con distinto grado de invasión. Al evaluar la expresión de PPARg en éste modelo, observamos que PPARg está aumentado en tumores superficiales comparado con la vejiga normal, mientras que se pierde en vejigas portadoras de tumor invasor. En tumores vesicales de pacientes observamos que un mayor número de pacientes con tumores invasores expresa bajos niveles de PPARg comparado con aquellos pacientes con tumores no invasores, sugiriendo que PPARg podría estar involucrado en la progresión de tumores de vejiga.

Abstract:
Peroxisome proliferatoractivated receptor gamma (PPARg) is a member of the nuclear receptor superfamily of ligand-activated transcription factors that is involved in cell growth and differentiation as well as inflammatory processes. We found that BCG is able to induce PPARg expresión in bladder murine cell line MB49. Transcriptional activity of PPARg is also increased by BCG and it is enhanced by 15-d-PGJ2, a PPARg ligand. At the same time, PPARg ligands enhance BCG-induced cell death. BCG also induces iNOS expression and NO production. PPARg ligands inhibits NO production induced by BCG. In vivo, BCG inhibits tumor growth, but RO reverses that effect. RO inhibits different functions associated to activated macrophages induced by BCG. In vitro, BCG induces fibroblast proliferation and in vivo, induces collagen, FGF-2 and alpha-SMA expresión. RO decreases that induction. We have generated a new cell line, MB49-I and we developped a new murine ortothopic model with different levels of invasion. PPARg is increased in superficial tumors compared to normal bladder, meanwhile, this expression is reduced in invasive tumors. In patients, we observed that invasive tumors express low level of PPARg compared to those with non-invasive tumors. PPARg is involved in the mechanism of action of BCG, but his activation could be not recommended in vivo, since it has a relevant role in the inmune system. PPARg expression is decreased in invasive tumors, which suggests that this transcription factor plays a key role during progresion in bladder tumors.

Llorente, Briardo Ernesto. "Un rol biológico propuesto para las misteriosas polifenol oxidasas vegetales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las polifenol oxidasas son ciertamente enzimas muy intrigantes. A pesar de haber sido estudiadas durante décadas y ser sus reacciones catalíticas ampliamente conocidas, no ha sido posible asignarles una localización precisa dentro de ninguna ruta metabólica. Aún más notable es que, incluso luego de más de 110 años de investigación transcurridos desde su descripción inicial en 1896, su función biológica es todavía un misterio. Las PPO son enzimas plastídicas ubicuas en vegetales que catalizan la conversión oxígeno-dependiente de fenoles a quinonas. Los sustratos fenólicos de PPO se localizan en la vacuola y entran en contacto con la misma cuando se producen daños en la compartimentación intracelular. Las quinonas formadas por la actividad de PPO son especies altamente reactivas, capaces de reaccionar con virtualmente todos los componentes celulares. Estas conducen a la formación y precipitación de polímeros oscuros similares a la melanina, un fenómeno conocido con el nombre de pardeamiento enzimático. Este fenómeno es responsable de cuantiosas pérdidas económicas en el mercado de frutos y vegetales y, actualmente, sólo puede ser parcialmente controlado mediante el uso de aditivos potencialmente dañinos para la salud humana. Con el propósito de contribuir al entendimiento del rol biológico y la evolución de estas enzimas, y a su vez generar un cultivo exento del deterioro oxidativo mediado por PPO, diversas líneas transgénicas (-PPO) de papa (Solanum tuberosum) con reducida actividad PPO fueron obtenidas mediante ingeniería genética y caracterizadas tanto a nivel fisiológico como molecular. El cultivo de papa fue elegido como modelo para este trabajo por ser el tercer cultivo de mayor consumo en el mundo y una de las alternativas principales para suplir las próximas necesidades alimentarias de la creciente población mundial. Considerando la relevancia intelectual y económica de estas enzimas, esta tesis trata tanto con aspectos biológicos como prácticos del estudio de las PPO. Un exhaustivo análisis de seguridad reveló que las papas -PPO son seguras para el consumo, si bien son metabólicamente diferentes a sus parentales silvestres (WT, de sus siglas en ingles Wild Type). Este estudio instauró el debate sobre la relevancia de los conceptos actualmente utilizados para la evaluación de la seguridad de cultivos transgénicos. En esta línea, diversos estudios sensoriales realizados en ratones y humanos revelaron que, además de su vida útil más prolongada, los tubérculos -PPO poseen mejoras organolépticas. Esta serie de estudios representaron el primer ejemplo exitoso de la aplicación de un modelo animal y paradigmas neurobiológicos en el estudio de un cultivo genéticamente modificado. Paralelamente, experimentos con patógenos e insectos fueron llevados a cabo para explorar las potenciales implicancias de PPO en los procesos de resistencia a estrés biótico. El desarrollo de un nuevo método para estudiar la enfermedad más devastadora del cultivo de papa, el tizón tardío, causado por el oomiceto Phytophthora infestans, permitió identificar que las plantas -PPO son más resistentes a este patógeno mediante mecanismos que parecen involucrar la participación de compuestos fenólicos. Inversamente, experimentos realizados con el insecto plaga Cyclocephala signaticollis mostraron que los tubérculos -PPO eran consumidos en una mayor proporción que los tubérculos WT por este coleóptero. A su vez, los análisis filogenéticos sugieren que las PPO vegetales fueron adquiridas por transferencia génica horizontal a partir de bacterias como una adaptación de las plantas primitivas al ambiente terrestre. En conjunto, estos estudios añaden una pequeña pero importante contribución a la comprensión de la evolución y la función biológica de las enzimas PPO que podría ser útil para el futuro desarrollo de nuevos cultivos mejorados. Finalmente, y probablemente el aspecto más interesante de esta tesis, es que, de la síntesis de los experimentos realizados durante el transcurso de este estudio, ha emergido una hipótesis que propone por primera vez una sugestiva explicación sobre el rol biológico de las PPO vegetales como parte de un sistema de defensa contra la depredación. El modelo propuesto aporta una explicación para el mecanismo de acción de PPO que es coherente con las evidencias evolutivas y, a su vez, permite interpretar una serie de intrigantes resultados previamente reportados por otros grupos de investigación.

Abstract:
The polyphenol oxidases are certainly very intriguing enzymes. Despite having been studied for decades and their catalytic reactions are well known, no precise location has been assigned to this enzyme in any known metabolic pathway. Remarkably, even after over 110 years of research since its initial description in 1896, its biological function is still a mystery. The PPOs are ubiquitous plastid plant enzymes that catalyze the oxygen-dependent conversion of phenols to quinones. PPO phenolic substrates are located in the vacuole and come into contact with the enzyme when disruption of the intracellular compartmentalization takes place. The quinones formed by PPO activity are highly reactive species that can react with virtually all cellular components, leading to the formation and precipitation of dark melanin-like polymers, a phenomenon known as enzymatic browning. This phenomenon is responsible for enormous economic losses in the fruit and vegetable industry and is currently partially controlled through the use of additives which have some adverse effects on human health. In an attempt to contribute to the understanding of the biological function and evolution of these enzymes, and to generate a quality improved crop exempt from the PPO-mediated oxidative damage, several transgenic potato (Solanum tuberosum) lines (-PPO or nonbrowning) with reduced PPO activity were genetically engineered and characterized both at the physiological and molecular levels. Potato was chosen as a model for this study because it is currently the third most important food crop consumed worldwide and a critical alternative for feeding the world’s growing population. Considering the intellectual and economic relevance of these enzymes, this thesis deals with both biological and practical aspects of the study of PPO. A comprehensive evaluation of the safety assessment of the transgenic lines revealed that the nonbrowning potatoes present no risk for adverse health effects. Although, they are metabolically different from wild-type (WT) potatoes. An exhausted safety assessment analysis evidenced no adverce health effects, establishing a debate about the relevance of the concepts currently used to assess the safety of genetically modified crops. In line with these aspects, sensory studies in mice and humans revealed that, in addittion to their extended shelf life, nonbrowning potatos have organoleptic improvements over the WT potatos. This series of studies represented the first successful example of the implementation of an animal model and neurobiological paradigms in the study of a genetically modified crop. In parallel, studies with pathogens and insects were carried out to study the potential implications of PPO in biotic stress resistance processes. A new method to study the most devastating disease affecting potato, the “late blight”, caused by the oomycete Phytophthora infestans, was developed and applied to evaluate the disease resistance of -PPO plants. The transgenic plants presented an increased resistance to this pathogen through mechanisms that seem to involve the participation of phenolic compounds. Conversely, experiments performed with the insect pest Cyclocephala signaticollis showed that -PPO tubers were consumed in greater proportions than WT tubers by this coleopteran. In turn, phylogenetic analyses suggests that plant PPOs were acquired by horizontal gene transfer from bacteria as an adaptation of primitive plants to the terrestrial environment. In summary, these studies provide a small but important contribution to the understanding of the evolution and biological function of PPO enzymes that could be useful for the future development of new improved crops. Finally, and perhaps the most interesting and relevant aspect of this thesis, is that a new hypothesis that provides an suggestive explanation for the biological role of plant PPOs as part of a defense system against predation has emerged from the work done. The proposed model provides an explanation for the mechanism of action of PPO that, is consistent with the evolutionary evidence, and also allows to interpret a number of intriguing results previously reported by other research groups.

Liuzzi, María Gabriela. "Macroalgas bentónicas como sustrato y refugio de invertebrados marinos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las macroalgas constituyen un sustrato favorable para el asentamiento de epibiontes y forman matrices tridimensionales que facilitan la supervivencia de macroinvertebrados en ambientes de elevao estrés. En esta tesis se abordaron cuatro líneas de trabajo tendientes a dilucidar las interacciones producidas entre las macroalgas bentónicas y los invertebrados marinos. Se estudió la composición y biogeografía de briozoos epibionts de macroalgas a lo largo de 29 grados de latitud a partir de muestras depositadas en el herbario del Museo Argentino de Ciencias Naturales. Aunque los patrones hallados están influenciados por la distribución desigual del esfuerzo de muestreo, puede concluirse que la biodiversidad de los briozoos y macroalgas es mayor en la Patagonia austral que en el litoral bonaerense y rionegrino. Se describe una nueva especie de briozoo antártico (Osthimosia chaotica) y se identifican otras dos nuevas especies, aún no descriptas. También se amplía la distribución geográfica para cuatro taxones. Se analizó el recambio taxonómico y las variaciones en la estructura del ensamble de macroinvertebrados asociado a coralináceas intermareales o diferentes escalas espaciales. Los resultados muestran que los cambios observados entre provincias son los más marcados, reflejado im reemplazo casi completo entre biotas de aguas templado-cálidas y templado-frías en el Atlántica Sudoccidental. Se estudió la distribución de colonias del briozoo Antarctothoa bougainvillei sobre la rodofita Hymenena laciniata en ambientes someros de Bahía San Sebastián (Tierra del Fuego). Las ancéstrulas se asentaron principalmente en las áreas centralede los frondes, orientándose hacia las partes jóvenes del alga. Las colonias recubren una baja proporción de tejidos reproductivos algales sugiriendo que, en caso de existir, su efecto negativo sobre el alga sería mínimo.

Abstract:
Macroalgae are a suitable substrate for the settlement of epibionts and make up three dimensional matrices that allow the survival of macroinvertebrates in highly stressed habitats. The present work is divided in four lines of research and deals with the study of interactions between benthic macroalgae and marine invertebrates. The composition and biogeographic affinities of epiphytic bryozoans were analysed along 29 degrees of latitude based on material deposited in the phycological herbarium of the Meseo Argentino de Ciencias Naturales. Although the patterns that were foung are influenced by the unequal distribution od the sampling effort, it can be concluded that the biodiversity of bryozoans and macroalgae is higher in southem Patagonia than along the coasts of Buenos Aires and Río Negro provinces. A new species of Antartic bryozoan was described (Osthimosia chaotica) and the presence of other two new, but yet undescribed, species was recognized. The geographic range of four bryozoans was also extended. The taxonomic turnover and the changes in assemblage structure of macroinvertebrates associated with intertidal coralline turfs was analysed at different spatial scales. Clear-cut chages occur between provinces, mainly due to an almost complete replacement between warm-temperate and cold-temperate biotas in the Southwest Atlantic. The distribution of colonies of the bryozoan Antarctothoa bougainvillei on the rodophyte Hymenena laciniata was analysed in shallow habitants of Bahía San Sebastián (Tierra del Fuego). The ancestrulae settle mainly on the central areas of the fronds, facing towards the younger growing edges. A low proportion of reproductive algal tissues is covered by the colonies, suggesting that a negative effect, if present, would be minimal.

Lattanzi, Mariano L.. "Regulación de la maduración de ovocitos por factores paracrinos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis fue el estudio de factores regulatorios que controlan la maduración de los ovocitos. Para investigar el papel de las células de la granulosa se caracterizó la línea celular BGC-1, obtenida por inmortalización espontánea de cultivos primarios de células de la granulosa bovinas, como modelo para el mantenimiento del arresto meiótico de ovocitos bovinos in vitro. Se determinó que las células BGC-1 inhiben el reinicio de la meiosis y la expansión del cumulus de los complejos cumulus-ovocito de manera mas eficiente que cultivos primarios de células de la granulosa, y que este efecto es específico. Se estableció que las células BGC-1 producen factor/es de naturaleza soluble y lábil, que actúan a través de las células del cumulus para inhibir el reinicio espontáneo de la meiosis in vitro. Esta inhibición es completamente reversible y, bajo el efecto inhibitorio de las células BGC-1, el reinicio de la meiosis puede ser inducido por FSH. En la segunda parte de esta tesis se estudió el rol de los catecolestrógenos, metabolitos endógenos del estradiol, durante la maduración de los ovocitos. Se pudo comprobar que la presencia de 2-metoxiestradiol durante la maduración de los ovocitos afecta el subsecuente desarrollo embrionario temprano. Se estableció que el 2-metoxiestradiol interacciona con los microtúbulos induciendo alteraciones en el huso meiótico de los ovocitos que afectan la normal segregación de los cromosomas luego de la fecundación. Los desbalances cromosómicos generados llevan a la inhibición del desarrollo embrionario en el estadio de mórula. Debido a que el 2-metoxiestradiol puede incrementarse en el fluido folicular en respuesta a ligandos del AHR, concentraciones intraováricas anormalmente altas podrían estar involucradas en los síndromes de infertilidad asociados a algunos contaminantes ambientales que son conocidos activadores de AHR.

Abstract:
This thesis was aimed at studying the regulation of oocyte maturation by paracrine factors. In order to investigate the role of granulose cells, the BGC-1 cell line, obtained by spontaneous immortalization of bovine granulose cell primary cultures, was characterized as a model of meiotic arrest maintenance of in vitro matured bovine oocytes. BGC-1 cell line inhibits spontaneous meiotic resumption and cumulus expansion of cumulus-oocyte complexes more efficiently than primary granulose cell cultures, and this effect is specific. BGC-1 cells produce soluble, labile factor/s that inhibits spontaneous oocyte meiotic resumption in vitro, acting through cumulus cells. This effect is completely reversible and, under the inhibitory effect of BGC-1 cells, the meiotic resumption can be induced by FSH. In the second part of this thesis we studied the role of catecholestrogens, endogenous estradiol metabolites, during oocyte maturation. The presence of during oocyte maturation affects the subsequent early embryonic development. 2-methoxyestradiol interacts with microtubules and induces meiotic spindle aberrations that alter the normal chromosome segregation after fertilization. The ensuing chromosomal unbalances lead to developmental arrest at the morula stage. Because 2-methoxyestradiol could be increased in follicular fluid in response to AHR ligands, abnormally high intraovarian levels could be involved in infertility syndromes associated to some environmental contaminants known to activate AHR.

Larzábal, Mariano. "Identificación de péptidos bloqueantes del sistema de secreción de tipo III y de la adherencia a epitelios de Escherichia coli enterohemorrágico (EHEC) y Escherichia coli enteropatógeno (EPEC)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Escherichia coli Enteropatógeno (EPEC) y Escherichia coli Enterohemorrágico (EHEC) se encuentran asociadas con diarrea en seres humanos. EPEC es una de las principales causas de diarrea infantil en países desarrollados, mientras que EHEC es responsable de enfermedades cuyo espectro clínico incluye diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH), que es la principal causa de insuficiencia renal aguda de niños menores de 5 años en la Argentina. La expresión de la toxina Shiga (Stx) codificada por bacteriófagos integrados al cromosoma de cepas EHEC, es considerada la responsable de la colitis hemorrágica y el SUH. El principal reservorio de EHEC es ganado bovino sano a pesar de que un número limitado de serotipos se han asociado con diarrea en terneros jóvenes, mientras que el reservorio de EPEC son los niños sintomáticos y asintomáticos. Ambos patotipos de E. coli, al igual que Citrobacter rodentium, poseen un isla de patogenicidad conocida como Locus of enterocyte effacement (LEE). El LEE codifica para el sistema de secreción de tipo III (SSTT), cuya función es traslocar proteínas efectoras a los enterocitos, provocando la subversión celular. Este resulta en la formación de lesiones características de attaching and effacement (A/E) en el epitelio intestinal, que consisten en la destrucción de las microvellosidades y la formación de pedestales de actina polimerizada por debajo del sitio de contacto entre la bacteria y la célula. El SSTT es una estructura compleja con más de 20 proteínas que forman un sistema de 'aguja y jeringa' que permite inyectar proteínas efectoras directamente en la célula hospedadora. El LEE contiene cinco grandes operones que han sido completamente secuenciados: LEE1, LEE2, LEE3, LEE4 y LEE5. EspA, EspB y EspD son algunas de las proteínas codificadas por el LEE4 que componen la parte del traslocon del SSTT. EspA, es la proteína mayoritaria, y sus polímeros forman filamentos huecos (estructura aguja), que están presentes de manera transitoria. EspB y EspD, se asocian al extremo del filamento y están involucrados en la formación de poros en las membranas de las células infectadas. El extremo proximal del filamento de EspA se apoya sobre el cuerpo basal formado por polímeros de la proteína EscF, que también se encuentra codificado en el LEE4. La proteína de membrana externa intimina, se encuentra codificada en el LEE5, y es responsable de la adherencia íntima de la bacteria al enterocito, así como también su propio receptor Tir, que es traslocado a través de la SSTT al citoplasma para luego anclarse en la membrana celular. Con el fin de utilizar a los factores de virulencia responsables de la lesión A/E como blancos de terapias de intervención, se determinó la inmunogenicidad y la antigenicidad de las proteínas del sistema de secreción de tipo III y la adhesina intimina empleando calostro de bovinos naturalmente infectados o colonizados. Los resultados demostraron que el calostro de bovinos no vacunados, proveniente de ganado lechero y cárnico de la región Pampeana de la Argentina, contiene una alta frecuencia de anticuerpos contra las proteínas intimina-γ C280, EspA y EspB. Por otro lado, también se obtuvieron sueros policlonales a partir de conejos inmunizados con proteína EspA, EspB y N-EspD recombinantes, demostrando la capacidad por parte de estas proteínas de inducir elevados títulos de respuesta inmune humoral en anticuerpos IgG. En este trabajo, se observó que tanto el calostro bovino como anticuerpos policlonales específicos contra proteínas del SSTT, inhibieron la acción mediada por SSTT de EPEC 2348/69 sobre los GRs de manera dependiente de la dosis, demostrando que compuestos dirigidos contra el SSTT pueden inhibir su funcionalidad. Estos efectos protectores han sido parcialmente atribuidos a la presencia de anticuerpos contra componentes del SSTT, ya que una reducción significativa en la actividad inhibitoria fue obtenida cuando el calostro o los sueros policlonales fueron depletados de IgG total. La inmunogenicidad, antigenicidad y exposición en superficie de varios de los componentes responsables de la lesión A/E, los convierte en potenciales candidatos para vacunas, y moléculas blanco para péptidos y otros compuestos. Por lo tanto, resulta atractiva la estrategia de utilizar a los factores de virulencia como blanco de terapias de intervención. Con el objetivo de impedir el desencadenamiento de la acción del SSTT por parte de EHEC y EPEC, se utilizó la técnica de phage display para disponer de péptidos de 12 aminoácidos seleccionados específicamente contra proteínas estructurales y efectoras del SSTT, como EspA y EspB, susceptibles de ser bloqueadas. Si bien, los péptidos obtenidos por phage display tuvieron una alta afinidad hacia las proteínas blanco, no consiguieron neutralizar la patogénesis de EPEC in vitro, indicando que no necesariamente la interacción entre péptidos y proteínas blanco afecta la funcionalidad del SSTT. Teniendo en cuenta estos resultados, se trató de reducir el rango de especificidad de péptidos hacia regiones altamente conservadas y funcionalmente importantes de proteínas estructurales del inyectosoma, como son las regiones coiled-coil que consisten en α-hélices hidrofóbicas con repeticiones de siete aminoácidos, que participan de las interacciones proteína-proteína especialmente en la formación de complejos de multímeros. En este estudio, se examinaron los péptidos sintéticos, diseñados para bloquear la formación del SSTT. Los péptidos CoilA y CoilB, representan la región coiled-coil del C-terminal de la proteína traslocadora EspA y el péptido CoilD, correspondiente a la región coiled–coil del extremo N-terminal de la proteína EscF, fueron efectivos en la inhibición de la hemólisis de glóbulos rojos dependiente del SSTT de EPEC E2348/69 y EHEC O157:H7. Los péptidos de CoilA y CoilB también redujeron la formación de pedestales de actina cuando fueron pre-incubados con las bacterias EPEC E2348/69 y afectaron la traslocación por medio del SSTT a las células epiteliales de la proteína efectora Tir. A su vez, CoilA y CoilB fueron capaces de bloquear el ensamble del filamento de EspA, evitando la polimerización in vitro de la proteína EspA recombinante y por microscopía electrónica se observó una reducción en la longitud de los filamentos de EspA. Esto sugiere que los péptidos coiled-coil pueden prevenir el montaje y por lo tanto la funcionalidad del TTSS. A su vez, ensayos de western blot demostraron que los péptidos también inhibieron la correcta secreción de las proteínas EspB y EspD en EPEC E2348/69 y EspD en C. rodentium. Estos resultados motivaron a desarrollar un ensayo de protección contra C. rodentium in vivo, como modelo de infección para bacterias que contienen LEE. El tratamiento vía oral de ratones con una combinación de péptidos CoilA y CoilB, previa y durante la infección con C. rodentium, previno de la lesión A/E colónica. Estos resultados demostraron que el tratamiento preventivo y post inoculación con los péptidos coiled-coil inhibe la formación del SSTT de C. rodentium in vivo, actuando con un efecto protector contra la formación de la lesión A/E en ratones. En conclusión, el diseño de moléculas que perjudiquen la asociación íntima de los patógenos a la mucosa intestinal probablemente tendrán un efecto importante en las estrategias disponibles contra microorganismos patógenos, y existe la posibilidad de que los inhibidores específicos contra un mecanismos de virulencia sean efectivos por un largo tiempo antes que la resistencia se convierte en un problema, ya que habría poca o ninguna presión selectiva al no afectar la viabilidad, reduciéndose así el desarrollo de resistencia a estos agentes antimicrobianos. La investigación orientada a la búsqueda de inhibidores contra distintos mecanismos de virulencia puede tener un alto potencial terapéutico y preventivo como en este caso, a la vez que puede servir como herramienta para dilucidar los sistemas regulatorios intrínsecos que modulan la virulencia EPEC y EHEC o de cualquier otra bacteria que posea un SSTT. Los péptidos coiled-coil son moléculas pequeñas, más fáciles de sintetizar que moléculas orgánicas complejas, y podrían ser parte de formulaciones nutracéuticas contra patógenos diarreagénicos. Por lo tanto, la interferencia en la formación y/o funcionalidad del SSTT podría evitar la manifestación de lesiones A/E, impedir la colonización del epitelio intestinal y en última instancia podrían prevenir la enfermedad. Incluso, reducir la carga bacteriana de animales próximos a ingresar a frigorífico o mantenidos en feed-lot, disminuyendo la posibilidad de contaminación de la carne.

Abstract:
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) are associated with diarrhea in humans. EPEC is one of the leading causes of childhood diarrhea in developed countries, while EHEC is responsible for the clinical spectrum disease include diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS), which is the main cause of acute renal failure in children under 5 years in the Argentina. The expression of Shiga toxin (Stx) encoded by bacteriophages integrated in the chromosome strains EHEC is considered responsible for hemorrhagic colitis and HUS. The main reservoir of EHEC is healthy cattle while a limited number of serotypes have been associated with diarrhea in young calves while EPEC reservoir is symptomatic and asymptomatic children. Both diarrheagenic E. coli, as well as Citrobacter rodentium, possess a pathogenicity island known as the locus of enterocyte effacement (LEE). The LEE encodes type III secretion system (TTSS) whose function is to translocate effector proteins to the enterocytes, causing cellular subversion. This results in the formation of characteristic attaching and effacement lesions (A/E) in the intestinal epithelium, which consist of the microvilli destruction and formation of actin polymerized than contact between bacteria and the cell site pedestals. The TTSS is a complex structure with more than 20 proteins that forms a system of 'needle and syringe' which allows injecting effector proteins directly into the host cell. The LEE contains five major operons which have been fully sequenced: LEE1 LEE2, LEE3 LEE4 and LEE5. EspA, EspB and EspD are some of the proteins encoded by the LEE4 comprising part of the TTSS translocon. EspA, is the major protein and its polymers are hollow filaments (needle structure), which are present on a transitional basis. EspB and EspD, are associated with the end of the filament and are involved in the formation of pores in the membranes of the infected cells.The proximal end of the EspA filament relies on basal body formed by the EscF polymers, protein that is also encoded in the LEE4. The outer membrane protein, Intimin, is encoded in the LEE5 and is responsible for intimate adhesion to the enterocytes as well as its own receptor Tir, which is translocated through TTSS into the cytoplasm to then anchor into the cell membrane. In order to use the virulence factors responsible for the A/E lesion as targets of intervention therapies, the immunogenicity and antigenicity of TTSS proteins and intimin using naturally infected or colonized bovine colostrum. The results showed that bovine colostrum from unvaccinated dairy and meat cattle from Argentina contains a high frequency of antibodies against intimin-γ C280, EspA and EspB proteins. On the other hand polyclonal IgG antibodie from in rabbits immunized with EspA, EspB and N-EspD recombinant proteins, demonstrating the ability of these proteins to induce a strong humoral immune response. In this work, it was observed that both bovine colostrum and specific polyclonal antibodies against proteins of the TTSS inhibited the lysis on the red blood cells (RBCs) mediated by TTSS of EPEC 2348/69, demonstrating that directing substances against the TTSS can inhibit its functionality. These protective effects have been partially attributed to the presence of antibodies against the TTSS components because a significant reduction in inhibitory activity was obtained when colostrum or polyclonal sera were IgG totally depleted. Immunogenicity, antigenicity and exhibition surface of various proteins responsible for the A/E lesion, demonstrated that they can be potential candidates for vaccines, and target molecules for peptides and other molecules. The strategy used to intervention therapies target virulence factors is therefore attractive. In order to prevent the triggering action from EHEC and EPEC TTSS, the technique of phage display was used to obtain peptides of 12 aminoacids selected specifically against structural and effector TTSS protein such as EspA and EspB, likely to be blocked. Although peptides obtained by phage display had a high affinity towards target proteins, did not neutralize the pathogenesis of EPEC in vitro, indicating that not necessarily interaction between peptides and target proteins affects the functionality of the TTSS. Given these results, the range of specificity of peptides was reduce to functionally important and highly conserved regions of the inyectosome-structural proteins such as coiled-coil regions, consisting of hydrophobic α- helices with repetitions of seven amino acids involved in protein-protein interactions especially in the formation of multimers complexes. This study examined the synthetic peptides, designed to block the formation of the TTSS. Peptides CoilA and CoilB, represent the coiled-coil region at the C-terminus of the protein EspA and the peptide CoilD, corresponding to the coiled-coil region of N-terminal EscF protein, were effective in RBCs hemolysis mediated by TTSS of EPEC E2348/69 and EHEC O157:H7. Peptides CoilA and CoilB also reduced formation of actin pedestals when they were pre-incubated with EPEC E2348/69 bacteria and affected translocation by the TTSS epithelial cells of the Tir effector. In turn, CoilA and CoilB were able to block the ensemble the filament of EspA, avoiding the polymerization in vitro of EspA recombinant protein. By electron microscopy a reduction in the length of the filaments of EspA was observed. This suggests the coiled-coil peptides can prevent the ensemble and thus the TTSS functionality. In turn, western blot assays showed that peptides also inhibited the correct secretion of EspB and EspD proteins from EPEC E2348/69 and EspD protein from C. rodentium. These results led to develop a test for protection against C. rodentium in vivo, as model of infection by bacteria containing LEE. Treatment by oral route of mice with a combination of peptides CoilA and CoilB prior and during the infection with C. rodentium, prevented colonic A/E lesion. These results showed that preventive treatment and post inoculation with the coiled-coil peptides inhibits the formation in vivo of TTSS from C. rodentium, acting with a protective effect against the formation of A/E lesion in mice. In conclusion, design molecules which harm the intimate association of pathogens to the intestinal mucosa probably will be an important effect on strategies available against pathogenic microorganisms. The specific inhibitors against virulence mechanism are effective for a long time before resistance becomes a problem, since there would be little or no selective pressure to affect the viability, thus reducing the development of resistance to antimicrobial agents. Research aimed at finding inhibitors against different mechanisms of virulence can have a high therapeutic and preventive potential as in this case. Also, it can used as a tool for elucidating the regulatory mechanisms that modulate the EPEC and EHEC virulence, and also for any other bacteria possessing a TTSS. Coiled-coil peptides are small molecules, easierad to synthesize than complex organic molecules, and could be part of nutraceutic formulations against diarrheagenic E. coli. Therefore, training and/or functionality of the TTSS interference could avoid A/E lesion manifestation, the colonization of the gut epithelium and ultimately could prevent the disease. Even could reduce the bacterial load of animals going to slaugtherhouse or at the feed-lot, decreasing the possibility of contamination of meat.

Larocca, Luciana. "Perfil de activación de macrofagos de ratones nod: efecto de la preñez y modulación por el péptido intestinal vasoactivo (VIP)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Una de las consecuencias de una mala resolución de la inflamación aguda es el establecimiento de un proceso inflamatorio crónico con diversos eventos asociados como, por ejemplo, alteración de la homeostasis, falla funcional y la posibilidad de inducción de pérdida de la tolerancia inmunológica. El síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune que se caracteriza por una severa disfunción secretoria salival y lagrimal conocida como sintomatología sicca. Como la mayoría de las enfermedades reumáticas afecta en mayor medida a mujeres. Los ratones diabéticos no obesos (NOD) ofrecen un modelo interesante para estudiar procesos de mantenimiento y ruptura de la homeostasis tisular que conducen a pérdida de tolerancia y autoinmunidad. En este modelo a partir de las 12 semanas, en el estado prediabético desarrollan una sialadenitis espontánea a predominio Th1 con pérdida de la función secretoria, semejante en algunos aspectos a la enfermedad en humanos. Por otro lado, en el modelo NOD prediabético observamos una disminución de la tasa de natalidad a partir de la tercera preñez y en esos casos hemos observado procesos re reabsorción embrionaria a los 10 días de gestación. Los macrófagos son células del sistema inmune que están altamente especializadas y cumplen un papel destacado en la inmunidad anti-infecciosa ya que tienen alta capacidad fagocítica, microbiostática y microbicida. El VIP por su naturaleza como factor anti-inflamatorio que se lo ha propuesto como agente terapéutico para patologías autoinmunes, como la artritis reumatoide (AR) y la enfermedad de Crohn. En la primera y segunda parte de este trabajo quisimos ver como respondían los macrófagos NOD frente a LPS y presentamos evidencias que producen mayores niveles de mediadores pro-inflamatorios y menor cantidad de IL-10; VIP, por su parte, modula la respuesta inflamatoria actuando a través de al producción de IL-10 y metabolitos de COX, como por ejemplo la PGE2, que limitan la producción de nitritos. Asimismo los macrófagos NOD presentan una translocación basal de la subunidad p65 de NF-kB y VIP inhibe la translocación. La preñez normaliza todos los factores antes mencionados. En una tercera y cuarta parte quisimos determinar cómo respondían los macrófagos NOD frente a timocitos apoptóticos y como se modifica durante la preñez y observamos que producen mayores niveles de mediadores pro-inflamatorios y menor cantidad de IL-10, también observamos translocación basal en la subunidad p65; de NF-kB y el VIP prodría modular la respuesta inflamatoria como pasaba frente a LPS. Mientras que durante la preñez no se observa translocación a nivel basal de p65 y los macrófagos producen menores niveles de nitritos en presencia del estimulo apoptótico y se induce la producción de IL-10 por este estímulo, no requiriendo del VIP. Finalmente, en la quinta parte estudiamos cómo se comportan los macrófagos NOD frente a células acinares y pudimos ver que en presencia de ese estimulo tanto los nitriros como IL-10 se comportan a lo observado frente a LPS.

Abstract:
The establishment of a chronic inflammatory process is one of the various consequences of an impaired resolution of the acute inflammatory response. It involves several associated events such as homeostatic imbalance, functional failure and immunotolerance loss.Sjögren's syndrome (SS) is an autoimmune disease characterized by a severe secretory dysfunction known as sicca syndrome and, as most autoimmune diseases, it affects women with higher incidence. Non obese diabetic (NOD) mice offer an interesting model to study tissue homeostasis maintenance or disruption that might lead to tolerance loss and autoimmunity. At 12 weeks of age in the prediabetic stage mice develop a Th1 prodominant spontaneous sialoadenitis resembling SS. On the other hand, a reduced birthrate was observed in prediabetic NOD females that were 16 weeks of age at the time of mating with an increased resorption rate as determined at 10 days of gestation. Macrophages are immune cells highly specialized and with a major role in anti-infectious immunity due to their high phagocytic and anti-microbial activity. Vasoactive intestinal Peptide (VIP) has strong anti-inflammatory effects and it has been proposed as a therapeutic agent for autoimmune pathologies as Rheumatic Arthiritis and Crohn Disease. In the first and second parts of this work we analyzed the macrophage response upon LPS stimulus and we present evidence of their higher levels of pro-inflammatory mediators and lower of IL-10; and that VIP modulates the inflammatory response through the production of IL-10 and COX metabolites as PGE2 thus limiting nitrites production. Likewise, NOD macrophages present a basal translocation of p65 subunit of NF-kB and VIP inhibits this effect. Pregnancy, in turn, normalizes these parameters. The third part of this Thesis shows the response of macrophages upon a phagocytic stimulus as that of apoptotic thymocytes and how this may change during pregnancy. We observed that they produce higher levels of proinflammatory mediators and lower levels of IL-10; we have also seen p65 basal translocation to the nucleus in these cells. VIP could also modulate the inflammatory response as observed in LPS stimulated macrophages. Macrophages isolated from pregnant NOD mice do not show basal translocation of p65, they do not produce nitrites when faced with a phagocytic stimulus and they secrete IL-10 even in the absence of VIP. Finally, we determined the response of macrophages co-cultured with acinar cells and we found that acini induce a similar inflammatory response to the observed with LPS.

Landoni, Verónica Inés. "Relevancia de mecanismos inflamatorios en el daño celular inducido por toxina Shiga, agente causal del sindrome urémico hemolítico (SUH)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El síndrome urémico hemolítico (SUH) se caracteriza por anemia hemolítica, trombocitopenia y disfunción renal. La forma típica de SUH se asocia a infecciones por bacterias Gram negativas enterohemorrágicas del género Shigella y Escherichia productoras de toxina shiga (Stx). La disfunción endotelial inducida por la Stx es central, pero lipopolisacáridos bacterianos (LPS) y neutrófilos (PMN) contribuyen con la patofisiología. La falla renal es característica del SUH, aunque en casos severos, ocurren complicaciones neurológicas usualmente asociadas a casos fatales. Es clara la alteración de la barrera hemato-encefálica (BHE) asociado al daño de las células endoteliales (CEs) que la componen. Los astrocitos (ASTs) son células inflamatorias del cerebro y determinan el funcionamiento de la BHE. Los ASTs están en contacto con CEs, por lo que el estudio de los efectos de Stx y LPS sobre los ASTs, así como la influencia de esta respuesta sobre las ECs es fundamental. Stx1 y LPS indujeron la activación de ASTs y la liberación de TNF-α, óxido nítrico y quimioquinas atractantes de PMN. Factores liberados por ASTs estimulados con LPS y Stx1 disminuyeron la permeabilidad endotelial e indujeron la activación de CEs favoreciendo la adhesión de plaquetas y PMN. Los efectos evaluados fueron dependientes del TNF-α astrocitario. La respuesta de ASTs frente a Stx1 y LPS podría contribuir con la disfunción de la BHE y el desarrollo de la neuropatología observada en SUH.

Abstract:
The hemolytic uremic syndrome (HUS) is characterized by hemolytic anemia, thrombocytopenia and renal dysfunction. The typical form of HUS is generally associated with infections by Gram-negative Shiga toxin (Stx)- producing Escherichia coli organisms. Endothelial dysfunction induced by Stx is central, but bacterial lipopolysaccharide (LPS) and neutrophils (PMN) contribute to the pathophysiology. The renal failure is characteristic, although in severe cases, neurological complications occur and is usually associated with death. Impaired blood-brain barrier (BBB) is associated with damage to cerebral endothelial cells (ECs) that comprise the BBB. Astrocytes (ASTs) are inflammatory cells in the brain and determine BBB function. ASTs are in contact with ECs, hence the study of the effects of Stx1 and LPS on ASTs, and the influence of this response on ECs is essential. Stx1 and LPS induced activation of ASTs and the release of TNF-a, nitric oxide and PMN attractant chemokines. Factors released by Stx1 and LPS stimulated-ASTs decreased endothelial permeability. Furthermore, these factors induced ECs activation promoting platelet and PMN adhesion. Evaluated effects were dependent on ASTs secreted-TNF-α. Stx1 and LPS induced ASTs response could contribute to BBB dysfunction and to the development of the neuropathology observed in HUS.

Landoni, Malena. "Glicómica: la espectrometría de masa UV-Maldi-Tof como herramienta en la determinación de la vía biosintética de esfingolípidos de hemoparásitos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Un estudio de “glicómica” sobre un sistema biológico en particular, intenta determinar los hidratos de carbono que una célula u organismo en particular es capaz de sintetizar bajo condiciones fisiológicas específicas. Este tipo de estudio por lo tanto, refleja el perfil de expresión de genes que codifican glicosiltransferasas, glicosidasas y otros componentes dentro de un camino biosintético. La glicómica es un nuevo campo de investigación que permitirá determinar nuevos blancos para diseñar drogas que tendrán un impacto sobre problemas relevantes. La inherente complejidad de los hidratos de carbono exige la utilización de un gran número de técnicas para ese fin. En los últimos años, la espectrometría de masa de alta resolución UV-MALDI-TOF ha sido una de las herramientas más útiles. El presente trabajo presenta un estudio glicómico en la vía biosintética de glicoesfingolípidos de Plasmodium falciparum y Trypanosoma cruzi. Además de la caracterización estructural de los productos de dicha vía, se ha aislado y caracterizado la UDP-glucosa:ceramida glucosiltransferasa, enzima clave de este camino biosintético de ambos hemoparásitos y posible blanco quimioterapéutico. Por otra parte el presente trabajo ha contribuido con el desarrollo de dos metodologías de análisis por espectrometría de masa que trascienden el campo de la química de parásitos: 1- La utilización de esfingolípidos unidos covalentemente a un grupo fluorescente donde el mismo actúa como fotosensibilizador permitiendo el análisis directo por EM. 2- Siendo conocido que los hidratos de carbono pueden ser responsables de la antigenicidad de un glicoconjugado, se llevó a cabo la síntesis de diferentes conjugados carbohidrato-proteína y su caracterización por EM como herramienta para su utilización en ensayos biológicos.

Abstract:
A “Glycomic” study on a particular biological system, attempts to identify the carbohydrate in a particular cell or organism is able to produce under specific physiological conditions. This type of study therefore reflects the expression profile of genes that encode glycosyltransferases, glycosidases and other components in the biosynthetic pathway. The Glycomics is a new field of research that will identify new targets for designing drugs that may have an impact on relevant issues. The inherent complexity of the carbohydrate requires the use of a large number of techniques for this purpose. In recent years, high-resolution mass spectrometry, UV-MALDI-TOF has been one of the most useful tools. In this work we present a glycomic study on the biosynthetic pathway of glycosphingolipids of Plasmodium falciparum and Trypanosoma cruzi. In addition to the structural characterization of the products of this pathway, the UDP-glucose: ceramide glucosyltransferase has been isolated and characterized. This key enzyme of the biosynthetic pathway of both parasites arises as a putative chemotherapeutic target. Moreover this work has contributed to the development of two methods of analysis by mass spectrometry that exceeds the chemistry of parasites: 1 - The use of sphingolipids covalently bound to a fluorescent tag which acts as photosensitizer allowing direct analysis by MS. 2 - Being known that carbohydrates may be responsible for the antigenicity of a glycoconjugate, the synthesis of different carbohydrate-protein conjugates and their characterization by MS was carried out as a tool for use in biological assays.

Ladelfa, María Fátima. "Estudio de las propiedades replicativas in vitro de la cepa A663 de Herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) y de la función de la proteína Us3" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo de tesis contribuyo a la caracterizacion de la cepa argentina A663 de Herpesvirus Bovino tipo 5 (BoHV-5) mediante el estudio de sus propiedades replicativas in vitro y del rol de la proteina Us3. En el primer caso se realizaron cineticas de crecimiento y se evaluaron los tamanos de las placas de lisis y de infeccion de las cepas A663 y N569 de BoHV-5. La produccion total de particulas virales infectivas en funcion del tiempo fue similar entre ambas cepas, sin embargo la cepa A663 resulto menos eficiente en la liberacion de particulas virales al medio extracelular y en la dispersion celula a celula, observandose para la cepa A663 una reduccion del 90% y del 80% en el tamano de la placa de lisis y de infeccion, respectivamente. Por otro lado, se secuencio la region codificante para la proteina Us3 de la cepa A663 de BoHV-5 y se observo un alto porcentaje de homologia con las secuencias correspondientes a otras cepas de BoHV-5. Mediante las tecnicas de Northern y Western blot se demostro que el gen us3 se expresa tempranamente (desde los 30 minutos post infeccion) y de manera prolongada (hasta las 48 horas post infeccion). Los ensayos in vitro se realizaron utilizando construcciones que expresaban la proteina Us3 wt o una version mutante de esta proteina que carece de actividad de proteina quinasa, fusionadas a la proteina fluorescente ECFP (US3-ECFP y Us3K261D-ECFP). Se observo que la proteina Us3 de BoHV-5 induce el redondeamiento celular y provoca el desensamblado de las fibras de estres, siendo estos efectos independientes de su funcion de quinasa. Ademas, la proteina mutante Us3K261D disminuyo la formacion de proyecciones de celulares y modifico la localizacion subcelular de la proteina Us3 de BoHV-5. En conjunto, los resultados obtenidos permitieron conocer las propiedades replicativas in vitro de la cepa A663 de BoHV-5 y constituyeron el primer reporte sobre el estudio de la funcion de la proteina Us3 de BoHV-5.

Abstract:
This thesis contributed to the characterization of the Argentinean bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) A663 strain by studying its in vitro growth properties and the function of the Us3 protein. Firstly, growth kinetics, lysis and infection plaque size assays were performed for BoHV-5 A663 and N569 strains. The total amount of infection virus produced was similar between both strains at each time assayed; however, A663 strain was less efficient than N569 strain in releasing infective viral particles to the extracellular media and in cell-to-cell spread, as shown by a reduction of 90% and 80% in its lysis and infection plaque size, respectively. On the other hand, the region encoding the Us3 protein of BoHV-5 A663 strain was sequenced and high homology was observed between it and other sequences of BoHV-5 strains. Then, early (from 30 minutes post infection) and prolong (up to 48 hours post infection) expression of us3 gene was demonstrated by Northern and Western blots assays. Finally, in vitro studies were performed with genetic constructions to express wt Us3 protein or a mutated version of this protein lacking its kinase activity, fused to the fluorescent protein ECFP (Us3-ECFP and Us3K261D-ECFP). In transient transfection assays it was observed that Us3 BoHV-5 protein induced cell rounding and stress fiber breakdown independently of its kinase activity. Besides, the point mutation in the Us3K261D protein reduced cell projections formation and modified the subcellular localization of BoHV-5 Us3 protein. Taken together, these results allowed the assessment of the in vitro growth properties of BoHV-5 A663 strain and constituted the first report of the function of the BoHV-5 Us3 protein.

Laborde, Evangelina A.. "Caracterización de efectos mediados por complejos inmunes durante la diferenciación de células dedríticas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La interacción entre los complejos inmunes (CI) y los receptores para el fragmento Fc de las inmunoglobulinas G, induce respuestas inmunes regulatorias y efectoras. En este trabajo, nos propusimos investigar el efecto de los CI precipitantes sobre la diferenciación y las funciones biológicas de las células dendríticas (CD) derivadas de monocitos. Demostramos que el agregado de CI al inicio del cultivo altera la normal diferenciación de las CD. Así, las CD-CI diferenciadas durante 6 días en presencia de CI presentaron una baja expresión de los marcadores CD1a, CD1b, y una alta expresión de los marcadores CD14, MHC II y CD68, en comparación con las CD diferenciadas convencionalmente, sin embargo, no observamos diferencias en la expresión del marcador de células dendríticas CD11c. Estas alteraciones en el fenotipo correlacionaron con alteraciones en la morfología de las CD. Asimismo, evaluamos el efecto de CI solubles y observamos que sólo los CI solubles preparados con ligero exceso de antígeno, ejercieron un efecto sobre la diferenciación de las CD similar al observado con CI precipitantes. Demostramos además, que el efecto de los CI es tiempo y dosis dependiente e irreversible. Mediante el uso de anticuerpos bloqueantes específicos para los distintos FcγRs, determinamos que el efecto de los CI, es ejercido principalmente a través del FcγRI y en menor medida a través del FcγRII. Las CD-CI inmaduras mostraron altos niveles de CD83, CD86 y CD40, y el tratamiento con LPS no indujo un aumento en la expresión de las mismas. Esta alteración en la maduración de las CD se encontró asociada con una menor producción de IL-12 en respuesta al LPS, mientras que la producción de IL-10 no se vio alterada. Las CD-CI mostraron un perfil de producción de quimioquinas alterado, con un incremento en la producción de CXCL8, CCL2 y CCL3. Asimismo, las CD-CI mostraron una capacidad reducida para inducir una respuesta T alogénica y una menor capacidad endocítica. Demostramos que el efecto ejercido por los CI es independiente de IL-10 y prostaglandinas, mientras que la inhibición de la p38 MAP quinasa, abolió dicho efecto. Nuestros resultados demuestran que los CI afectan severamente la diferenciación, maduración y las funciones biológicas de las CD. Por esta razón, creemos que este estudio puede contribuir a un mejor entendimiento de los eventos involucrados en la patogénesis de las enfermedades autoinmunes y los desórdenes inflamatorios crónicos como el lupus eritematoso sistémico (LES), la granulomatosis de Wegener, la crioglobulinemia esencial y artritis reumatoidea (AR).

Abstract:
The interaction between immune complexes (IC) and the receptors for the Fc portion of IgG triggers regulatory and effector functions in the immune system. In this study, we investigated the effects of precipitating IC on differentiation and biological functions of human monocyte-derived dendritic cells. Herein, we demonstrated that IC added at the beginning of the culture altered the normal differentiation of DC. IC-DC obtained on day 6, had lower levels of CD1a, CD1b and increased expression of CD14, MHC class II, and the macrophage marker CD68, as compared with normally differentiated DC, however we did not observed any differences in the expression of CD11c, a dendritic cell marker. These alterations on DC phenotype were correlated with morphological alterations on IC-DC. In addition, we also evaluated the effects of soluble immune complexes, and we found that only soluble immune complexes prepared with antigen excess, had similar effects on DC differentiation. Additionally, these effects resulted time and dose dependent, and were irreversible. By using specific blocking FcγR antibodies we demonstrated that the effects of IC were exerted mainly through their interaction with FcγRI and to a lesser extend with FcγRII. Immature IC-DC also showed higher levels of CD83, CD86, and CD40 and the expression of these maturation markers was not further regulated by lipopolysacharide (LPS) treatment. The apparent lack of maturation following TLR stimulation was associated with a decreased production of IL-12, nevertheless, the production of IL-10 was normal. DC-CI showed an altered profile of chemokine production with an increased secretion of CXCL8, CCL2 and CCL3. Furthermore, IC-DC showed a reduced ability to induce allogeneic T cell proliferation, and a lower capacity to uptake dextran-FITC particles. We have found that neither IL-10 nor prostaglandins were involved in immune complexes-mediated inhibition of DC differentiation; however, these effects were abrogated by p38 MAPK inhibition. Take into account our findings reveal that IC strongly affects DC differentiation, maturation and biological functions of DC. Therefore, this study contributes to a better understanding of events involved in the pathogenesis of autoimmune diseases and chronic inflammatory disorders such as Systemic lupus erythematosus (SLE), Rheumatoid arthritis (RA) samples, Wegener's granulomatosis and essential cryoglobulinemia.

Krapovickas, Verónica. "El rol de las trazas fósiles de tetrápodos en los modelos de icnofacies continentales en ambientes de climas áridos-semiáridos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El modelo de icnofacies provee el marco conceptual principal sobre el que los datos icnológicos pueden ser interpretados ambientalmente. Tradicionalmente focalizado en el empleo de trazas fósiles de invertebrados, el modelo de icnofacies continentales se expandió sólo recientemente incluyendo a las huellas de tetrápodos. El objetivo de esta tesis es el de analizar el rol de las huellas de tetrápodos en la elaboración de modelos de icnofacies continentales así como en la reconstrucción de paleoambientes sedimentarios en ambientes de climas áridos-semiáridos. Para ello, se abordó la problemática desde una perspectiva integradora incorporando la información de los ambientes depositacionales, así como la proveniente del campo de la icnología de vertebrados y de invertebrados. Los distintos ejemplos particulares que constituyen la base empírica de este estudio representan una nueva contribución al conocimiento icnofaunístico de distintas unidades litoestratigráficas aflorantes en localidades argentinas (Formación Patquía, Paganzo, provincia de La Rioja; Formación Candeleros, área Villa El Chocón, provincia del Neuquén; Formación Anacleto, Sierra Barrosa, provincia del Neuquén; Formación Vinchina, Vinchina, provincia de la Rioja). La primera de las unidades estudiadas corresponde a la Formación Patquía (Pérmico inferior) en la provincia de la Rioja. Esta presenta una asociación de trazas fósiles presente en cuerpos de agua poco profundos de planicies de inundación caracterizada por trazas de locomoción, descanso y habitación asignados a Cruziana problematica, Rusophycus carbonarius y Palaeophycus tubularis. En los depósitos de mantos de arena de la misma formación se encuentran preservados trazas fósiles de tetrápodos asignados a Chelichnus duncani, trazas de habitación de invertebrados (Palaeophycus tubularis, Skolithos isp.) y locomoción de de artrópodos. El estudio de la Formación Candeleros (Cretácico Superior) incluye las localidades clásicas de Villa el Chocón y Balneario Villa el Chocón, así como una nueva localidad (Cañadón de las Campanas). La asociación icnológica está preservada en depósitos de interdunas húmedas y lagos de playa de bolsón y contiene trazas de invertebrados (Arenicolites isp., Arenicolites carbonarius, Diplocraterion parallelum, Palaeophycus tubularis, Scoyenia gracilis, Skolithos verticalis, Taenidium barretti), huellas de dinosaurios terópodos (Irenesauripus isp.) y saurópodos (cf. Brontopodus birdi). La asociación de trazas fósiles de la Formación Anacleto (Cretácico Superior) incluye huellas de terópodos avianos y no avianos (Ignotornis mcconnelli, Barrosopus slobodai, huella tridáctila mediana) y trazas de invertebrados (Arenicolites tipo1, tipo2, Palaeophycus tubularis, cf. Digitichnus laminatus, tubos horizontales grandes). Esta asociación se encuentra en cuerpos de agua efímeros desarrollados en zonas deprimidas de la planicie de inundación. Ciertas estructuras asociadas incluyen a megarizolitos, preservados en los depósitos de canales fluviales. La asociación de trazas fósiles de la Formación Toro Negro (Mioceno) en muy diversa. Los depósitos de lóbulos de desbordamiento presentan trazas de alimentación meniscadas y trazas de habitación (Taenidium barretti, Scoyenia gracilis y Palaeophycus tubularis). Los depósitos de barras arenosas emergidas incluyen huellas de aves y mamíferos (Fuscinapeda sirin, Macrauchenichnus rector, cf. Venatoripes riojanus, huellas heterópodas pequeñas, huella incumbente grande, huella anisodáctila delicada, impresiones ariñonadas e impresiones monodáctilas ovales) y escasos especímenes de Palaeophycus tubularis y Helminthopsis hieroglyphica. Finalmente, se evalúa el patrón de distribución de trazas fósiles de vertebrados e invertebrados en ambientes sedimentarios desarrollados bajo condiciones climáticas áridas-semiáridas. Este análisis se basa en las asociaciones de trazas fósiles estudiadas en esta tesis, en conjunto con otras asociaciones icnológicas clásicas de otras partes del mundo y de la columna estratigráfica. Los modelos de icnofacies de tetrápodos propuestos hasta el momento establecen una entre las asociaciones de huellas fósiles y los paleoambientes sedimentarios, pero carecen de una definición clara de los parámetros ambientales que explican la distribución de las huellas fósiles. Se sugiere que la distribución de huellas de tetrápodos y trazas de invertebrados no están controladas por los mismos parámetros paleoambientales. La distribución de trazas fósiles de tetrápodos en ambientes terrestres parecería estar más ligada a ciertos parámetros ambientales clave de escala regional como: el clima y la disponibilidad de recursos.

Abstract:
The ichnofacies model provides the main framework to understand the paleoenvironmental significance of trace fossils. Traditionally focused on invertebrate trace fossil, the ichnofacies model has only recently expanded to include tetrapod footprints. The purpose of this thesis is to study the role of tetrapod footprints in the development of continental ichnofacies models, as well as in the reconstruction of sedimentary paleoenvironments in arid and semiarid climate environments. An integrative perspective was employed to tackle this problem, taking into account depositional environments, as well as vertebrate and invertebrate trace fossil data. The various examples that constitute the empiric base of this study represent a new contribution to the ichnofaunistic knowledge of different lithostratigraphic units that outcrop in Argentinean localities -Patquía Formation, Paganzo, La Rioja province; Candeleros Formation, Villa El Chocón area, Neuquén province; Anacleto Formation, Sierra Barrosa, Neuquén province; Vinchina Formation, Vinchina, La Rioja province -. The trace-fossil assemblage of the Lower Permian Patquía Formation consists of locomotion, resting and dwelling traces assigned to Cruziana problematica, Rusophycus carbonarius and Paleophycus tubularis, and occurs in floodplains deposits. In sand sheet deposits of the same formation, tetrapod fossil footprints, dwelling traces of invertebrates and locomotion arthropod traces are preserved and assigned to Chelichnus duncani in the case of tetrapods and Palaephycus tubularis and Skolithos isp. for invertebrates. Study of the Upper Cretaceous Candeleros Formation includes the classic localities of Villa El Chocón and Balneario Villa El Chocón, as well as a new locality (Cañadón de las Campanas). The trace-fossil association consists of invertebrates trace fossils (Arenicolites isp., Arenicolites carbonarius, Diplocraterion parallelum, Paleophycus tubularis, Scoyenia gracilis, Skolithos verticalis, Taenidium barretti), theropod dinosaur footprints (Irenesauripus isp.), and sauropods footprints (cf. Brontopodus birdi). It occurs in damp interdune and playa-lake deposits. The trace-fossil assemblage from the Upper Cretaceous Anacleto Formation includes avian and non-avian theropod footprints (Inotornis mcconnelli, Barrosopus slobodai, medium tridactyl footprints) and invertebrate trace fossils (Arenicolites type 1, type 2, Palaeophycus tubularis, cf. Digitichnus laminatus, large horizontal tubes). This assemblage occurs in deposits interpreted as formed in ephemeral water bodies developed in floodplain depressions. Associated structures attributed to megarizoliths occur in river-channels deposit. The trace-fossil assemblage from the Miocene Toro Negro Formation is very rich. Crevasse-splay deposits mainly contain meniscate feeding and dwelling traces (Taenidium barretti, Scoyenia gracilis and Paleophycus tubularis). Emerged-sandbar deposits include avian and mammalian footprints (Fuscinapeda sirin, Macrauchenichnus rector, cf. Venatoripes riojanus, small heteropod footprints, large incumbent footprint, slender anisodactyl footprint, kidney-like impressions, and oval monodactyl impressions), and scarce Palaeophycus tubularis and Helminthopsis hieroglyphica specimens. Finally, the pattern of distribution of vertebrate and invertebrate trace fossils in sedimentary environments developed under arid-semiarid climate conditions is evaluated. This analysis is based on the trace-fossil associations studied for this thesis, together with other classic ichnologic associations reported elsewhere, which have been compiled in a database. Previous tetrapod ichnofacies models established a relationship between fossil footprint associations and sedimentary paleoenvironments, but no insight on the controlling environmental parameters was provided. It is suggested that the distribution of tetrapod footprints and invertebrate trace fossils are not controlled by the same paleoenvironmental factors. The distribution of tetrapod trace fossils in terrestrial environments seems to be more related to certain key environmental regional-scale parameters, such as climate and resources availability.

Jurado, Javier Oscar. "Estudio de las vías de señalización de CD31 y PD-1 en la regulación de la respuesta inmune contra Mycobacterium tuberculosis" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La respuesta de citoquinas Th1 es critica en la inmunidad contra Mycobacterium tuberculosis. Por ello, es crucial comprender el establecimiento y mantenimiento de las respuestas efectoras de los linfocitos T. En este trabajo de tesis, se investigo el rol de proteinas de senalización en la modulación de respuestas de citoquinas y citótoxicas de los linfocitos T durante la infección por M. tuberculosis. Los resultados obtenidos demostraron que la interacción entre las proteinas inhibitorias CD31 y SAP participa en la regulación de las vias que conducen a la producción de IFN-Y durante la tuberculosis pulmonar activa. Más aún, en individuos con una fuerte Inmunidad mediada por células contra el patogeno, la estimulación especifica con el antigeno induce en las células productoras de IFN-Y el fenotipo CD31-SLAM+. Asimismo, se demostró el rol inhibitorio de la via PD-1:PD-Ls sobre las funciónes efectoras de las células Th1 en la tuberculosis. Ademas, se comprobo que la via de PD-1:PD-Ls inhibe la expansion de las poblaciónes Th1 y Th17 durante la infección por M. tuberculosis. Por lo tanto, se concluye que PD-1 modularia la activación y la expansion de las células Th1 y Th17, impidiendo la exacerbación de cada una de estas respuestas. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que el uso de anticuerpos bloqueantes y agonistas podria tener importantes implicancias en potenciales terapias para combatir infecciónes bacterianas cronicas como la tuberculosis.

Abstract:
The cytokine Th1 response is crucial in the immunity against Mycobacterium tuberculosis. For that reason, its critical to understand the establishment and maintenance of T lymphocyte effector functions. In this work, the role of signaling proteins on the modulation of cytokine and cytotoxic responses of T lymphocytes during M. tuberculosis infection was investigated. The results demonstrated that the interaction of the inhibitory proteins CD31and y SAP participates in the regulation of the pathways that lead to IFN-Y production during active pulmonary tuberculosis. Moreover, in individuals with strong cell-mediated immunity against the pathogen, specific antigen stimulation induces the CD31-SLAM+ phenotype in IFN-Y producing cells. Furthermore, we demonstrated the inhibitory role of the PD-1:PD-Ls pathway on Th1 effector functions in pulmonary tuberculosis. Besides, we showed that the PD-1:PD-Ls pathway inhibits the expansion of the Th1 and Th17 subsets during M. tuberculosis infection. Thus, we conclude that PD-1 would modulate the activation and expansion of Th1 and Th17 cells, avoiding exacerbation of each of these responses. Together, the results of this work demonstrate that the use of blocking and agonistic antibodies might have significant implications in potential therapies to fight chronic bacterial infections like tuberculosis.

Holik, Federico Hernán. "Sistemas cuánticos compuestos: un enfoque algebraico" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Guzmán, Noelia Verónica. "Filogeografía comparada de dos especies de gorgojos plaga con distintos modos de reproducción" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo de tesis se realizó un estudio comparativo de los procesos evolutivos que dieron origen a la distribución geográfica de la variabilidad genética actual de dos especies de gorgojos, Naupactus leucoloma y Naupactus xanthographus (Coleoptera: Curculionidae). Ambas especies originarias de Sudamérica, son consideradas importantes plagas agrícolas. N. xanthographus presenta reproducción bisexual y N. leucoloma se reproduciría por partenogénesis telitóquica y apomíctica. Se realizó un estudio filogeográfico comparado a través de dos tipos de marcadores, mitocondrial y nuclear, de manera de abarcar tanto los procesos evolutivos históricos como los actuales, con el objeto de dilucidar los efectos del modo de reproducción sobre la potencialidad colonizadora de cada especie. Los resultados del presente trabajo permiten concluir que: 1) Todas las poblaciones de N. leucoloma presentaron ausencia de machos y se reproducen asexualmente. Estas poblaciones habrían atravesado por un cuello de botella severo o un barrido selectivo a raíz de la infección por Wolbachia, bacteria inductora de la partenogénesis, de manera que tan solo unos pocos haplotipos exitosos habrían llegado a colonizar diversas regiones del mundo; 2) Del análisis filogeográfico se desprende que N. xanthographus, de reproducción sexual, posee una mayor variabilidad genética en comparación con N. leucoloma, y su principal centro de diversidad y dispersión estaría ubicado hacia el norte de la provincia de Buenos Aires y sur de Santa Fe; 3) Ambas especies han sido exitosas en la colonización de nuevos ambientes, aunque siguiendo diferentes estrategias: a) Un modo de reproducción bisexual que mantiene la alta variabilidad genética confiriéndole una mayor capacidad de adaptación a nuevos ambientes y b) Un modo de reproducción asexual, que si bien trae como consecuencia una escasa variabilidad genética, confiere la capacidad de colonizar ambientes marginales y a larga distancia, con la presencia de tan solo un individuo.

Abstract:
In the present thesis was carried out a comparative study of the evolutive process that have given origin to the actual geographic distribution of the genetic variability from two weevils, Naupactus leucoloma and Naupactus xanthographus (Coleoptera: Curculionidae). Both species originated in South America, are considered important agricultural pests. Naupactus xanthographus present bisexual reproduction and N. leucoloma would reproduce by infectious theltoky apomictic parthenogenesis. We realized a comparative phylogeographic study based in mitochondrial and nuclear makers, so we can cover both historical and actual evolutive process with the objective to elucidate the effects from the reproductive mode over the colonizing potential of the species. Results from the present work allow conclude: 1) All populations from N. leucoloma present absence of males and reproduce asexually. These populations would have passed a severe bottleneck or a selective sweep consequence of the bacterial infection which apparently induce the parthenogenesis, Wolbachia, which induce parthenogenesis, so only a few successful haplotypes have colonized diverse regions of the world; 2) From phylogeographic analysis we conclude that N. xanthographus, with sexual reproduction, have a greater genetic variability compare with N. leucoloma, and its principal center of diversity and dispersion is locate in the north of Buenos Aires and south of Santa Fe provinces; 3) Both species have been successful in colonization of new environments, but with different strategies: a) a bisexual reproduction which maintains high genetic variability conferring a mayor adaptative capacity to new environments y b) an asexual reproduction, which bring a low genetic variability as a consequence, confer the capacity to colonized marginal habitats and to long distances, with the presence of an only individual.

Gutiérrez, Gerónimo. "Estudio de la dinámica de la infección perinatal con BLV en un rodeo de tambo de alta prevalencia" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se estudió la progresión de la infección natural con BLV en un rodeo con alta prevalencia, desde el nacimiento hasta el ingreso al ciclo productivo. El objetivo central fue proponer una alternativa para interrumpir el ciclo epidemiológico de transmisión, debido a que en la actualidad parece no haber soluciones factibles para el control de esta infección. Como objetivo complementario, se estandarizó un ensayo de ELISA que permitirá confirmar el estado de infección. Se expresó la proteína p24 de BLV en Escherichia coli, se purificó por columna de afinidad, y se la utilizó como antígeno en un ensayo de ELISA (rp24-ELISA). Se evaluó la performance del ensayo según recomendaciones internacionales, observándose evidencia de que el rp24-ELISA es una herramienta exacta y precisa en la detección de anticuerpos contra la p24 de BLV como para ser utilizada en el tamizaje de animales infectados en nuestro país. En el estudio de la progresión de la infección se observó que alrededor del 11% de los animales se encuentra infectado desde los primeros días de vida y que este porcentaje se mantiene constante durante el primer año. Se evidenciaron nuevas infecciones a partir de los 15 meses y se observó un salto brusco de la prevalencia, del 24 a más del 60% de animales infectados, durante la parición y entrada al tambo. Al analizar la carga proviral se encontró que alrededor del 30% de los animales tiene una carga proviral en sangre baja o indetectable. Se detectó provirus en el 50% de los calostros y 40% de las leches, siendo esta detección más frecuente en animales con carga proviral alta o media en sangre, y se observó que tanto los calostros como las leches poseen una bajo nivel de carga proviral. El hallazgo más importante de este trabajo fue que aún cuando se aplican prácticas de manejo que previenen la transmisión sanguínea de BLV, no se observaron cambios significativos en la prevalencia luego de 3 años. Por último, se propuso una estrategia alternativa de control, basada en la segregación selectiva de los animales de acuerdo a su carga proviral en sangre periférica; interpretándola como un marcador del riesgo de transmisión de la infección. Esta estrategia permitirá la segregación de animales jóvenes, seronegativos, y animales adultos, infectados, con carga proviral baja o indetectable, que en conjunto con la aplicación de prácticas que previenen el contacto iatrogénico de sangre y el testeo de BLV al nacimiento, podría reducir potencialmente la infectividad del BLV y prevenir futuras transmisiones del virus.

Abstract:
In this work, the progression of natural BLV infection from birth to the entry into the milking herd, in a highly infected dairy herd, was assessed. The main goal was to suggest alternative control measures to effectively break the BLV cycle of transmission, based in the fact that there is no current practical solution for the control of this infection. As a complementary objective of this work, an ELISA test that will confirm the sanitary status was standardized. The BLV-p24 protein was expressed in Escherichia coli, affinity purified and used as antigen in an ELISA test (rp24-ELISA). The performance of the assay was assessed following international recommendations, showing evidence that rp24-ELISA is an accurate and precise tool in the detection of anti-p24 antibodies and could be used in the screening of infected animals in Argentina. The progression of infection study showed that about 11% of the animals are already infected during the first days of life and that this rate remained constant during the first year. New infections were detected since 15 months old, but the higest increase in the rate of infection, from 24 to more than 60% of infected animals, was observed during parturition and entrance of the animals into the milking herd. Proviral load analysis showed that about 30% of the animals had either low or undetectable peripheral-blood proviral load. BLV provirus was detected in 50% of colostrum and 40% of milk samples, being more frequently detected in animals with high or medium peripheral-blood proviral load. All colostrum and milk samples showed low levels of provial load. The most important finding was that even when management procedures to prevent BLV iatrogenic transmission were followed, no significant change was observed in the prevalence after three years. Finally, an alternative control strategy was proposed, based on selective segregation of the animals according to their peripheral-blood proviral load as a potential indicator of risk transmission. This strategy will allow to segregate young non-infected animals and adult infected animals with low or undetectable levels of proviral load, that coupled with the application of management practices to prevent iatrogenic blood contact and BLV early testing from birth, could potentially reduce the infectivity of BLV and prevent further transmission of the virus.

Guerrieri, Diego. "Efecto inmunomodulador del inhibidor secretorio de proteasas leucocitarias (SLPI)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El SLPI es un inhibidor de serino proteasas de 11,7 kDa presente en mucosas y con actividad anti-inflamatoria. El objetivo de este trabajo fue esclarecer la función del SLPI en la respuesta inmune. Los resultados obtenidos in vitro muestran que SLPI disminuye la proliferación linfocitaria inducida por IL-2, anti-CD3 y cultivos mixtos linfocitarios en forma dosis dependiente. El SLPI inhibe la activación linfocitaria disminuyendo los niveles de CD25 e inhibiendo la traslocación al núcleo de NF-κB. La inhibición sobre la proliferación no se observa en ausencia células mononucleares de sangre periférica (CMSP) depletadas de monocitos, y fue restituida en presencia de medio condicionado de monocitos pre-tratados con SLPI. Los monocitos tratados con SLPI producen altos niveles de IL-4, IL-6 e IL-10. Además, el SLPI inhibe la producción de IFN-γ y T-bet inducidos por IL-2 y un lisado de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Por otro lado el SLPI disminuye la cantidad de células CD25+/Foxp3+ y la secreción de TGF-β inducida por la elastasa y aumenta los niveles de IL-17 e IL-6. Estos resultados sugieren que el SLPI modula la respuesta inmune adaptativa inhibiendo la diferenciación de las células hacia un patrón Th1, las Treg y favoreciendo el perfil Th2 y Th17. Sin embargo, en modelos murinos in vivo, la administración de SLPI parece tener un efecto anti-inflamatorio; dado que el SLPI fue capaz de limitar las lesiones en la orquitis autoinmune experimental. Este efecto modulador de la respuesta inmune también se pudo corroborar en pruebas de hipersensibilidad retardada y en trasplante de piel. Por otro lado, los niveles de SLPI plasmático y la capacidad linfoproliferativa fue examinada en donantes sanos, pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y pacientes con cáncer de pulmón. Se pudo probar la existencia de una correlación negativa entre la proliferación linfocitaria y los niveles plasmáticos de SLPI para pacientes con EPOC y cáncer de pulmón pero no así para los dadores sanos. Estos resultados muestran al SLPI como una molécula con capacidad inmunomoduladora y los niveles de SLPI plasmáticos podrían ser un índice indirecto de la capacidad linfoproliferativa en los pacientes con EPOC y cáncer de pulmón.

Abstract:
Human SLPI is an 11.7 kDa cationic non-glycosylated serine protease inhibitor constitutively produced in mucosal surfaces such as airway epithelium and human uterus, but can also be secreted by inflammatory cells. The aim of this work was to evaluate the function of SLPI in the immune response. Results obtained in vitro shows that SLPI decreased the lymphocyte proliferation induced by IL-2, anti-CD3 and mixed lymphocyte reaction (MLR) in a dose-dependent manner. SLPI inhibits lymphocyte activation by decreasing CD25 expression and avoiding IkB degradation. SLPI inhibition was not observed by depleting monocytes from PBMCs and it was restored by adding monocytes or culture supernatant. Monocytes treated with SLPI, produced IL-4, IL-6 and IL-10 and decreased the expression of IFN-γ. Furthermore SLPI decreased CD25+/Foxp3+ cells and TGF-β production but increased IL-17 expression on lymphocytes. To determine the relevance of this effect in vivo, we investigated the immunoregulatory role of SLPI in an experimental autoimmune orchitis (EAO), delayed-type hypersensitivity models and in a skin transplantation model. SLPI significant decreased the EAO incidence. Even more the delayed-type hypersensitivity was reduced by SLPI and the allograft rejection was decreased. Furthermore, we evaluated a putative correlation between SLPI plasma levels and proliferation in healthy donors (HD; n =15), chronic obstructive pulmonary disease (COPD, n =17) and lung cancer (n = 23) patients. Plasma SLPI concentration was correlated with PBMC proliferation in COPD and lung cancer patients but not in HD. Our results demonstrated that SLPI has an immunomodulator effect on lymphocytes and that plasma SLPI concentration might be used as a marker of lymphocyte proliferation to follow up the immune status.

Graciarena, Mariana. "Estudio de los efectos de inflamación prenatal sobre la neurogénesis adulta, sus comportamientos asociados y sus mecanismos de acción" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La exposición prenatal a estímulos pro-inflamatorios influye sobre diversas funciones del cerebro adulto. Además, estímulos pro-inflamatorios han mostrado efectos adversos sobre la neurogénesis adulta. En base a estos antecedentes, nuestra hipótesis de trabajo fue que un estímulo pro-inflamatorio durante el período prenatal provoca una disminución permanente de la neurogénesis adulta. Para testar esta hipótesis, ratas Wistar preñadas recibieron inyecciones subcutáneas de un estímulo pro-inflamatorio, el lipopolisacárido bacteriano (LPS), en sus días 14, 16, 18 y 20 de gestación. Las crías adultas prenatalmente tratadas con LPS mostraron una reducción en la cantidad total de células en proliferación y en la diferenciación neuronal en el giro dentado, que resultan en una menor neurogénesis total. Sin embargo la proliferación de progenitores neurales y la supervivencia celular se mantuvieron constantes. Además, el tratamiento prenatal con LPS provocó alteraciones en el desempeño de los animales en el test comportamental de Reconocimiento del Objeto Nuevo, un test que evalúa la memoria a corto plazo, y que ha sido previamente relacionado con la neurogénesis adulta. Evaluando cambios a nivel sistémico que expliquen la disminución de la neurogénesis adulta por el LPS prenatal, observamos que la exposición prenatal a LPS no afectó el funcionamiento basal del eje neuroendócrino Hipotalámico-Hipofisario-Adrenal. Por otra parte, el LPS administrado a las hembras en su preñez sí afectó los niveles de cuidado materno de las crías. Sin embargo, experimentos de adopción cruzada demostraron que los efectos del LPS prenatal sobre la neurogénesis adulta fueron independientes del cuidado materno recibido por las crías. El tratamiento prenatal con LPS provocó alteraciones permanentes en la composición del entorno o nicho neurogénico del GD adulto: a nivel celular, se observó una activación morfológica permanente de la microglía a estadíos intermedios. A nivel molecular, se observaron alteraciones agudas en la expresión de citoquinas en el cerebro fetal y una expresión disminuida del Factor Transformante de Crecimiento beta 1 (TGF-β1) específicamente en el GD de animales adultos. La sobreexpresión crónica de TGF-β1 en el GD adulto restauró los niveles disminuidos de neurogénesis a los niveles originales, equivalentes al grupo control, mientras que no aumentaron los niveles de neurogenesis en el grupo control. Además, la sobreexpresión bilateral de TGF-β1 restauró el desempeño en el test de Reconocimiento del Objeto Nuevo a los niveles del grupo control. La exposición adulta a LPS, al contrario de la exposición prenatal, provocó efectos transientes en la disminución de neurogénesis y la activación de microglía. Por otra parte, TGF-β1 mostró efectos pro-neurogénicos in vitro a través de la activación de su principal vía de señalización, la vía Smad 2/3. Estos resultados validan la hipótesis de trabajo. Además, destacan el período prenatal con una etapa de susceptibilidad a estímulos inflamatorios que ejercerán efectos a largo plazo sobre la neurogénesis adulta y comportamientos relacionados a través de alteraciones permanentes en la composición del nicho neurogénico, como la activación microglíal y la expresión disminuida de TGF-β1 en el GD. Por su parte, TGF-β1 resulta un modulador central de la disminución de los niveles de neurogénesis adulta y de comportamientos asociados a memoria por el LPS prenatal

Abstract:
Prenatal exposure to inflammatory stimuli is known to influence adult brain function. In addition, adult hippocampal neurogenesis is impaired by a local pro-inflammatory microenvironment. On this basis, we hypothesized that a pro-inflammatory insult during gestation would have negative effects on adult neurogenesis in the offspring. Pregnant Wistar rats received subcutaneous injections of lipopolysaccharide or saline every other day from gestational day 14 to 20. The adult offspring prenatally treated with LPS showed a decrease in the proliferating cells and the newborn neurons of the dentate gyrus, but no changes in progenitor cell proliferation and newborn neuron survival. Furthermore, prenatal LPS treatment impaired performance in the neurogenesis- dependent Novel Object Recognition test. Basal Hipothalamic-Pituitary-Adrenal functions were not altered by prenatal LPS exposure. Maternal care was impaired by prenatal LPS administration, but the effects on adult neurogenesis of the litter depended only on the prenatal treatment and not the amount of maternal care received, showing that maternal care did not contribute to the effects of prenatal LPS on adult neurogenesis. Prenatal LPS exposure caused permanent alterations in the neurogenic niche composition: rersistent microglíal activation and downregulated expression of transforming growth factor beta-1 (TGF-β1) occurred specifically in the adult hippocampus of animals treated prenatally with LPS. Importantly, chronic hippocampal TGF-β1 overexpression restored neurogenesis as well as recognition memory performance to control levels. TGF-β1 has shown to exert its pro-neurogenic effects through the canonical signaling pathway, Smad2/3. These findings validate our working hypothesis. In addition, they highlight the prenatal period as a temporal window of susceptibility to inflammatory stimuli that would cause long term alterations on adult neurogenesis and related behaviors through permanent alterations in the neurogenic niche composition, such as microglíal activation and reduced TGF-β1 expression in the dentate gyrus. TGF-β1, in turn, emerges as a central modulator in maintaining basal neurogenesis as well as memory-related behavior performance

González Trilla, Gabriela. "Patrones de biomasa de Spartina SPP. en dos marismas costeras de la provincia de Buenos Aires" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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González, Paula L. M.. "Dinámica asociada a la variabilidad intraestacional de la precipitación de verano en sudamérica" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta tesis presenta un estudio sobre la variabilidad intraestacional observada en la precipitación y la convección durante el verano en la región de Sudamérica. Se encontró que la variabilidad intraestacional, caracterizada como aquella con períodos de entre 10 y 90 días es significativa en la región, con máximos de varianza explicada en el sector este del continente. El principal modo de actividad en estas escalas temporales es el llamado en la literatu- ra patrón SASS (South American See-Saw), y está caracterizado por una estructura dipolar entre las anomalías de convección en la región de la Zona de Convergencia del Atlántico Sur (SACZ) y el sector comprendido por el noreste de Argentina, Sur de Paraguay y Uruguay y el extremo sur de Brasil (SESA). En esta tesis se confirmó que la actividad intraestacional del SASS, que se identifica a partir de un análisis de funciones ortogonales empíricas de la radiación de onda larga filtrada, es máxima en dos bandas específicas: una asociada a períodos de entre 10 y 30 días, que es la que explica mayor porcentaje de la varianza, y otra con períodos de entre 30 y 90 días. Asimismo, los resultados de esta tesis muestran que el SASS es también el patrón dominante para esas dos bandas de variabilidad. El ́índice temporal obtenido en cada caso reveló ́que en la banda 10-30 días, el SASS presenta picos de actividad significativos cercanos a períodos de 15 días y 22 días, mientras que en la banda 30-90 días el SASS presenta actividad con períodos cercanos a 44, 57 y 35 días. Se recurrió al cálculo de mapas de regresión y de indicadores energéticos para profundizar el entendimiento de la dinámica de gran escala asociada a cada una de las bandas de actividad. Estos cálculos permitieron confirmar que la banda asociada a períodos de entre 30 y 90 días parece estar asociada con la actividad de la oscilación de Madden-Julian (MJO), a través de trenes de onda de Rossby que conectan el Continente Marítimo con Sudamérica. La banda de per ́odos entre 10 y 30 días en cambio, no parece estar dominada por un modo convectivo tropical. Se observó que los trenes de onda que se obtienen en los mapas de regresión para el SASS de tal banda parecen tener un origen más subtropical, y podrían estar excitados por cambios en las zonas de divergencia/convergencia en la vecindad de la corriente en chorro de latitudes medias. Se estudió la ocurrencia de eventos intensos de actividad del SASS, tanto positivos (asociados a convecci ́ n intensa en SESA e inhibida en la zona de la SACZ), como nega tivos (asociados a la situación opuesta). Los eventos positivos tienen una duración media de 6.9 días y los negativos de 6.6 días, y no parecen tener meses preferenciales para su ocurrencia durante la estación cálida. Los resultados también confirmaron una predominancia de la variabilidad con períodos más cortos, con un promedio de duración de 5.6 días tanto para los eventos positivos como para los negativos. El estudio de la relación entre la ocurrencia de eventos extremos de precipitación diaria y la actividad del patrón SASS mostró que existe una tendencia muy clara a una mayor ocurrencia de extremos de precipitación en las estaciones ubicadas en la región SESA (SACZ) durante la fase positiva (negativa) del SASS e incluso mayor durante los eventos positivos (negativos) de actividad intensa del SASS. Se evaluó también la habilidad de los modelos climáticos del conjunto WCRP CMIP3 para representar las principales características de la variabilidad intraestacional sobre Sudamérica. Se observó que la mayoría de los modelos logra representar la predominancia de esta variabilidad sobre el sector este del continente. Asimismo se encontró que todos los modelos presentaron un patrón dominante con estructura dipolar, con varianzas explicadas similares a la observada. La mayoría de los modelos sin embargo representan en forma deficiente la variabilidad temporal asociada con el SASS. Se realizaron simulaciones idealizadas para estudiar la influencia de la convección en el Pacífico ecuatorial oeste sobre la variabilidad intraestacional en Sudamérica utilizando un modelo global y considerando diferentes forzantes en la región tropical. Las mismas revelaron que la elección de un forzante localizado sobre la región ecuatorial del Continente Marítimo con amplitud variable en la escala intraestacional es fundamental para reproducir la predominancia de un modo tropical, con estructura de onda 1 y una celda de Walker asociada, frente a la actividad de otros modos libres excitados en la banda tropical. Asimismo, la presencia de un forzante con un efecto promedio localizado sobre la región ecuatorial del Continente Marítimo genera las condiciones en el estado básico que favorecen la aparición de trenes de ondas de Rossby con propagación meridional que conectan esa región tropical con Sudamérica. Se concluye que para lograr reproducir un modo tropical con propagación zonal y estructura de onda 1 con máxima amplitud en las inmediaciones de 120 E, que se asemeje a la MJO, es necesario incluir un forzante con propagación hacia el este y con amplitud modulada en función de la longitud.

Abstract:
This thesis presents a study on the intraseasonal variability observed in precipitation and convection during summer over South America. It was found that intraseasonal vari- ability, which is characterized by periods between, is significant within the region, with maximum explained variance in the Eastern sector. The leading mode of activity on these timescales is known as SASS pattern (South American Seesaw) and its main feature is a dipolar structure of convective anomalies be- tween the South Atlantic Convergence Zone (SACZ) and the sector encompassing North- eastern Argentina, Southern Paraguay, Uruguay and Southernmost Brazil (SESA). This thesis confirmed that the intraseasonal variability related to the SASS, which is isolated through an empirical orthogonal function analysis of filtered outgoing longwave radia- tion, shows two distinctive activity bands: the first ranges between 10 and 30 days, and explains the highest percent of variance, while the second ranges between 30 and 90 days. Furthermore, this study shows that the SASS is also the leading pattern in both of the pre- viously mentioned variability periods. The temporal index obtained for the 10 to 30 days band exhibits significant peaks of around 15 and 22 days, whereas the index for the 30 to 90 days band presents peaks at periods close to 44, 57 and 35 days. With the aim of further understanding the large-scale dynamical processes related to each activity band, regression maps and energy indicators were examined. The analysis allowed verifying that the 30 to 90 days band is associated with the activity of the Madden-Julian oscillations (MJO) through the activity of Rossby wave trains that connect the Maritime Continent with South America. In contrast, the 10 to 30 days period band does not seem to be re- lated with the activity of a tropical convective mode. Furthermore, the analysis showed that the wave trains observed in the analysis for thees shorter timescales seem to have a subtropical origin, and they could be excited by changes in the divergence/convergence regions within the mid-latitude jet stream. The occurrence of extreme events of SASS activity, both positive (associated with intense convection in SESA and inhibited in the SACZ) and negative (associated with the opposite situation), were also studied. Positive and negative events showed a mean length of 6.9 and 6.6 days, respectively, and they do not appear to occur preferentially in any months long the warm season. Results also confirmed the dominance of the activity with shorter periods, with a mean length of 5.6 days for both positive and negative events. A study of the relationship between the occurrence of extreme daily precipitation events and the activity of the SASS showed a clear trend towards a higher frequency of precipitation extremes at stations within SESA (SACZ) during the positive (negative) phase of the SASS, and even a greater frequency during the positive (negative) events of intense SASS activity. Climate models from the WCRP CMIP3 ensemble were analyzed to assess their abili- ty to reproduce the main features of the intraseasonal variability of convection over South America. Results showed that most models represent correctly the region of maximum activity, in the Eastern portion of the continent. Moreover, all models depicted a dipo- lar structure as their leading pattern, with explained variances similar to those observed. Nevertheless, most models were unable to reproduce accurately the temporal variability associated with SASS. A set of idealized numerical experiments were simulated using an baroclinic global model, to assess the relevance of different tropical forcings at generating teleconnection patterns linking tropical convection with South America. The results showed that a lo- calized forcing over the Equatorial region of the Maritime Continent with a time-varying amplitude is required for reproducing the dominance of a tropical mode, with wave num- ber 1 and an associated Walker cell, over the activity of other active free modes in the tropical band. Furthermore, a source with a mean localized effect positioned in the vici- nity of 120◦ E is able to generate certain basic state features that promote the activity of Rossby wave trains with meridional propagation, linking that region with South America. Consequently, the presence an Eastward propagating forcing, with longitude-modulated amplitude is necessary to reproduce a tropical mode with zonal propagation, wave number 1 and maximum amplitude around 120◦ E, resembling the life-cycle of the MJO.

Gonzalez, Betina. "Caracterización de un modelo de ratones transgénicos hipersecretores de hCG que desarrolla tumores gonadales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta Tesis Doctoral se estudiaron distintos aspectos de la regulación del eje hipotálamo-hipófiso-gonadal (HHG) en un modelo de ratones transgénicos que produce niveles elevados de la hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG) y desarrolla tumores gonadales (ratones hCGDE+). Se partió de la hipótesis que los elevados niveles de esteroides sexuales inducidos por la hipersecreción de hCG desde edades tempranas del desarrollo, actuarían sobre el eje HHG alterando la síntesis y secreción de hormonas y factores claves en la función reproductiva, participando directa o indirectamente en el inicio y progresión de los tumores gonadales que presentan estos ratones. En una primera etapa se caracterizó en profundidad el fenotipo de machos y hembras hCGDE+, estudiando parámetros morfológicos, bioquímicos y moleculares de la función gonadal e hipotálamo- hipofisaria. Se observaron marcadas diferencias sexuales en el modelo, donde los machos transgénicos resultaron severamente comprometidos a nivel de la regulación de la unidad hipotálamo-hipofisaria desde edades tempranas del desarrollo, mientras que las hembras mostraron alteraciones gonadales que condujeron al desarrollo de teratomas ováricos al inicio de la edad reproductiva. En una segunda etapa se aplicaron tratamientos antihormonales y gonadectomía, siendo nuestro particular interés estudiar el rol de los esteroides sexuales en el fenotipo de los machos y hembras hCGDE+. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la hipersecreción de hCG, a través de la estimulación de la esteroidogénesis gonadal, altera la funcionalidad del eje reproductivo y participa en el desarrollo de patologías gonadales.

Abstract:
In the present Doctoral Thesis, several aspects of the hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis were evaluated in a transgenic mouse model that produces elevated levels of human chorionic gonadotropin (hCG) and develops gonadal tumours (hCGDE+ mice). We hypothesized that the elevated levels of sex steroids induced by hCG hypersecretion from early development, would act on the HPG axis by altering the synthesis and secretion of key hormones and factors involved in the reproductive function, thus participating either directly or indirectly in the onset and progression of the gonadal tumours. First, we characterized in deep the male and female phenotype of hCGDE+ mice, through morphological, biochemical and molecular studies of the gonadal and hypothalamic-pituitary function. Sex differences were observed in this model, where transgenic males were severely compromised at the hypothalamic- pituitary unit regulation, whereas transgenic females showed gonadal alterations that derived in the development of ovarian teratomas at the beginning of the reproductive age. Further in this study, we carried out antihormonal treatments and gonadectomy, being our particular interest to study the role of sex steroids in the hCGDE+ male and female phenotype. Our results demonstrate that hCG hypersecretion, through the stimulation of gonadal steroidogenesis, alters the reproductive axis function and participates in the development of gonadal pathologies.

Goenaga, Julieta. "Resistencia a la inanición en Drosophila melanogaster: variación genética natural y su relación con la longevidad y las reservas energéticas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la naturaleza los organismos están expuestos a un ambiente continuamente cambiante que los fuerza a desarrollar adaptaciones que alivian las consecuencias del estrés ambiental. La escasez de alimentos es un factor de estrés que afecta a todos los organismos en su hábitat natural, de modo que es esperable que desarrollen adaptaciones que maximicen la resistencia a la inanición (RI). El potencial evolutivo de cualquier carácter está determinado por su arquitectura genética. En el presente trabajo estudiamos la arquitectura genética de la RI en poblaciones naturales de Drosophila melanogaster. En primer lugar analizamos la variación genética a diferentes escalas geográficas en isolíneas derivadas de poblaciones naturales. A continuación, examinamos la contribución del cromosoma 2 (que representa cerca del 40% total del genoma) a la variación fenotípica de la RI, con el fin de establecer qué proporción de la variación está regulada por esta región del genoma. Posteriormente, mediante pruebas de complementación genética identificamos variación alélica natural en genes implicados en la RI. Además, estudiamos las asociaciones entre la RI y otros caracteres, la longevidad (L) y el contenido de lípidos (CL). Los principales resultados muestran que las poblaciones naturales de D. melanogaster cuentan con variación genética para la RI y que la variación interpoblacional es menor que la intrapoblacional. Asimismo, revelan que una fracción importante de la variación genética es dependiente del sexo. En general, la RI muestra un dimorfismo sexual (DS) a favor de las hembras, sin embargo la magnitud del DS varía entre los genotipos analizados. Además, demostramos que el cromosoma 2 explica una fracción importante de la variación fenotípica en la RI. Finalmente, los ensayos de complementación genética indicaron que 5 de los 6 genes implicados en la RI (Rya-44F, crol, l(2)rG270, l(2)k17002 y l(2)k00611) contribuyen a su variación natural. Los resultados de los estudios de asociación revelaron que la variación en el CL es un importante determinante de la RI. En conclusión, la RI mantiene un alto potencial evolutivo en poblaciones naturales y una fracción importante de su variación genética se atribuye a factores localizados en el cromosoma 2. Asimismo, genes que regulan el metabolismo, la reproducción y la asignación de los recursos energéticos son responsables de la variación natural en la RI.

Abstract:
In nature, organisms are often exposed to a wide range of fluctuating environmental conditions that force the evolution of specific adaptations to alleviate the consequences of environmental stress. Food shortage is a stress factor that affects all organisms in their natural habitat. Therefore, individuals need to develop adaptations to tolerate food shortage or starvation resistance (SR). The genetic architecture of a trait is essential because it describes and determines the variational properties of traits, and thus their potential to evolve. In this Thesis, we studied the genetic architecture of SR in natural populations of Drosophila melanogaster. First, we analyzed genetic variation at different geographic scales in sets of lines derived from natural populations. Then, we examined the contribution of chromosome 2 (which accounts for approximately 40% of the whole genome) to total phenotypic variation in SR. Finally, we performed genetic complementation tests to identify genes with natural variation for SR. In addition; we studied the relationship between SR and longevity (L) and lipid content (CL). Our results showed that natural populations of D. melanogaster harbor substantial amounts of genetic variation for SR and that the contribution of among population variation explains a smaller amount of total trait variation than within population variation. We also detected that an important fraction of genetic variation is sex-specific. Moreover, females tended to outlive males, though the SD magnitude varied among genotypes. An important fraction of genetic variation could be accounted by factors located in chromosome 2. Finally, complementation genetic tests indicated that 5 out of 6 genes that affect SR (Rya-44F, crol, l(2)rG270, l(2)k17002 y l(2)k00611) contribute to natural variation. In addition, a statistically significant relationship between SR and LC was found in both sexes. In conclusion, SR has evolutionary potential in nature, and some chromosome 2 loci can account for a relevant fraction of variation. The genes involved in natural variation of SR regulate essential pathways related to metabolism, reproduction and the mobilization of energy reserves.

Góngora, Adrián Daniel. "Supresión de la angiogénesis tumoral a través de anticuerpos monoclonales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La angiogénesis es el mecanismo por el cual se generan nuevos vasos sanguíneos a partir de los pre-existentes. En adultos, la angiogénesis es un evento raro excepto durante la reparación de heridas o en procesos asociados con el ciclo menstrual. Sin embargo, existen desórdenes patológicos dependientes de angiogénesis, como el desarrollo de tumores, la retinopatía diabética, la artritis reumatoidea, entre otras. Este proceso, es modulado en condiciones normales y patológicas por el balance entre factores positivos (pro-angiogénicos) y negativos (anti-angiogénicos), y ha sido propuesto como un factor limitante en el desarrollo tumoral, jugando también un papel importante en la metástasis. Los melanomas son tumores muy agresivos y resistentes a las terapias antineoplásicas que se caracterizan por expresar diversos factores de crecimiento. Estos pueden actuar en forma autocrina e intracrina sobre la proliferación y sobrevida, y en forma paracrina en la angiogénesis. Entre estos factores se destacan el VEGF y el FGF-2. Este trabajo tiene como objetivo principal el desarrollo de anticuerpos monoclonales (AMs), capaces de neutralizar los efectos biológicos del VEGF y del FGF-2 sobre las células endoteliales y evaluarlos terapéuticamente sobre el crecimiento tumoral en ratones atímicos, inducidos por distintas líneas de melanoma humanos. También, se caracterizó la expresión de estos factores en las líneas de melanoma para evaluar si existe una relación entre el efecto terapéutico de dichos AMs y el patrón de expresión de dichos factores en las líneas de melanoma. Concluimos que sólo el bloqueo del VEGF con AMs conduce a una reducción del crecimiento tumoral, mientras que el bloqueo del FGF-2 con AMs no mostró efectos terapéuticos en los modelos ensayados, incluso en las líneas que sobre-expresaban FGF-2, ni la combinación de ambos AMs sinergizó el efecto terapéutico del AM anti-VEGF. Por otro lado, si bien el efecto del bloqueo del VEGF con AMs se observó en todas las líneas neoplásicas ensayadas, evidenciaron una gran diferencia en la respuesta, dependiendo de los niveles de expresión de FGF-2. Las líneas de melanoma que sobreexpresan FGF-2 (A375 y 1205Lu) mostraron una mayor resistencia a esta terapia antiangiogénica, con una reducción del tamaño tumoral del orden del 50% respecto a los controles. Sin embargo, en la línea de melanoma que expresa bajos niveles de FGF-2 (IIB-Mel-J) esta reducción fue cercana al 90%. En conclusión, demostramos que solo el bloqueo del VEGF con AMs es efectivo en el tratamiento de melanomas experimentales y encontramos que este efecto terapéutico es en parte dependiente de los niveles de expresión de FGF-2, que actuaría en forma intracrina, generando una resistencia al tratamiento mencionado. De esta manera, contribuimos a definir al FGF-2 como un posible marcador de resistencia a esta terapia en melanoma. Finalmente, a partir del AM anti-VEGF, desarrollamos un anticuerpo recombinante de cadena simple (scFv-Fc) neutralizante de la actividad biológica del VEGF. Resultados preliminares indican que con solo un bajo porcentaje de células transfectadas con un plásmido que expresa el scFv-Fc anti-VEGF, xenotransplantadas en ratones atímicos, alcanza para disminuir significativamente la angiogénesis y el crecimiento tumoral.

Abstract:
Angiogenesis is the process by which new blood vessels sprout from pre-existing vasculature. In adults, angiogenesis is a rare event except during the wound healing or menstrual cycle. However there are pathological disorders like tumors, diabetic retinopathy, and rheumatoid arthritis, among others, that depends on angiogenesis. This process is controlled in normal and pathological conditions by a balance between positive (pro-angiogenic), and negative (anti-angiogenic) factors, and it has been proposed as a limiting process in tumor development, and metastasis. Melanoma is an aggressive tumor resistant to antineoplastic therapies and are known to express several growth factors that can act as an autocrine and intracrine way in proliferation and survival and as a paracrine way in angiogenesis. Among other factors, VEGF and FGF- 2, are the more important pro-angiogenic factors. The aim of this work was to develop two monoclonal antibodies (MAs) able to block the biological effects of VEGF and FGF-2 on endothelial cells growth, and to evaluate their therapeutic effect on human melanoma cells growing in athymic mice. Moreover, we have characterized the expression of these factors in three melanoma cell lines, to evaluate the possible relationship between the therapeutic effect of these MAs and the expression of these factors in those cells. We have concluded, that only the MA anti- VEGF induces a reduction on tumor growth, while MAs against FGF-2 showed no antitumor activity on the assayed models, even in cell lines that overexpress this factor, and the combination of both MAs did not show improvements in the MA anti-VEGF therapeutic effect. On the other hand, although the therapeutic effects of VEGF inhibition was observed in all cell lines studied, we have found a great response differences depending on FGF-2 expression levels. Cells that overexpressed FGF-2 (A375 y 1205Lu), showed a greater resistance to this anti-angiogenic therapy with only a 50% on tumor size reduction as compared with the untreated mice. Nevertheless, when the xenotransplanted mice carrying melanoma cell line (IIB-Mel-J), that express lower values of FGF-2, were treated with MA anti-VEGF, the tumor mass reduction was near 90%. In conclusion, we have demonstrated that only the use of MA anti-VEGF is responsible for the decrease of experimental melanoma progression and we found that this therapeutic effect is in part dependent on FGF-2 expression levels, acting as an intracrine factor given rise to anti- VEGF therapy resistance. In this way, we have defined FGF-2 as a possible melanoma resistance molecular marker to this therapy. Finally, from the MA anti-VEGF, we have developed a recombinant single chain version (scFv) that neutralizes VEGF activity. Preliminar results indicated that only few percentage of melanoma cells transfected with a plasmid codifing scFv-Fc anti-VEGF, and xenotransplanted in athymic mice, are enough to reduce both angiogenesis and tumor progression.

Gómez, Paula Luisina. "Procesamiento mínimo de manzana: efecto de la radiación UV-C y la luz pulsada de alta intensidad sobre la calidad" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo general de esta tesis fue evaluar el efecto de la aplicación de radiación UV-C y luz pulsada (LP) en combinación con otros factores de conservación microbianos y/o no microbianos (pretratamientos de escaldado e inmersión en soluciones antipardeamiento), sobre la calidad de rodajas de manzana (propiedades ópticas, características reológicas), con miras al desarrollo de nuevas tecnologías de conservación de frutas mínimamente procesadas que permitan conservar las características de calidad. La irradiación de rodajas de manzana con luz UV-C o LP produjo un incremento significativo del pardeamiento superficial, el cual fue función de la dosis aplicada y el tiempo de almacenamiento a 4-5 ºC. Los cambios provocados sobre el comportamiento reológico fueron menores y se asociaron con una leve pérdida de rigidez del tejido irradiado durante el almacenamiento, reflejado fundamentalmente en una disminución de los módulos de almacenamiento (G’) y de pérdida (G’’) y un aumento en las capacitancias J0, J1 y J2. Los pretratamientos de escaldado e inmersión en solución antipardeamiento de ácido ascórbico/cloruro de calcio fueron efectivos para inhibir el pardeamiento superficial provocado por la luz UV-C en todas las dosis evaluadas, siendo la solución antipardeamiento la que produjo mayor estabilidad en el color durante el almacenamiento y menores cambios en las propiedades mecánicas y viscoelásticas del tejido. En las rodajas irradiadas con LP la solución antipardeamiento fue menos efectiva para inhibir el pardeamiento en las muestras irradiadas a las dosis más altas. Los cambios observados en el color y en el comportamiento reológico de las muestras sometidas a los diferentes tratamientos pudieron ser correlacionados en parte con las observaciones micro y ultraestructurales de los tejidos. Por otro lado, a pesar de que la aplicación de la solución antipardeamiento redujo el efecto de la irradiación sobre la inactivación de microorganismos, los recuentos de microorganismos inoculados y de flora nativa al finalizar el almacenamiento fueron menores que en las rodajas no expuestas a la irradiación UV-C. Los resultados indican que tanto la radiación UV-C como la LP combinadas con un pretratamiento antipardeamiento adecuado podrían ser utilizadas en la industria de frutas minimamente procesadas para extender su vida útil/aumentar su inocuidad, como integrantes de un sistema multifactorial de conservación.

Abstract:
This thesis was aimed to evaluate the effect of UV-C radiation and pulsed light (PL) in combination with other microbial and/or non-microbial preservation factors (blanching and/or dipping into antibrowning solution pretreatments) on quality (mainly optical and rheological properties) of apple slices, in order to develop new technologies for obtaining minimally processed fruits that maintain quality characteristics. Irradiation of apple slices with UV-C or PL caused a significant increase in surface browning, which depended on the applied dose and time of refrigerated storage at 4-5 ºC. Changes on rheological behavior were minor and were associated with a slight loss of stiffness of irradiated tissue during storage, mainly reflected in lower values of storage (G´) and loss (G'') modules and to an increase in J0, J1 and J2 capacitances. Blanching and dipping in ascorbic acid / calcium chloride anti-browning solution were effective in inhibiting surface browning caused by UV-C at all doses tested, although the anti-browning solution produced higher color stability during storage and lesser changes in compression and viscoelastic properties of tissue. In apple slices irradiated with PL, anti-browning solution was less effective in inhibiting browning when fruit was irradiated at high doses. Changes in color and rheological properties were correlated with microstructure and ultrastructure features. Although the anti-browning solution reduced the effect of irradiation on the inactivation of microorganisms, inoculated microorganisms and natural microflora counts after storage were lower in UV-C irradiated that than in non-irradiated samples. Results indicated that both UV-C and PL irradiation combined with a suitable antibrowning pretreatment can be used in minimally processed fruit industry to extend shelf life.

Gómez, Federico Hernán. "QTL para estrés de alta temperatura y evolución experimental de hormesis en el modelo Drosophila" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Drosophila melanogaster se encuentra distribuida en amplias zonas geográficas, desde regiones tropicales a templadas en la mayoría de los continentes. Diversos fenotipos adaptativos han evolucionado en este organismo modelo cosmopolita, dependiendo los individuos y las poblaciones de conjuntos de mecanismos de resistencia al estrés ambiental, tanto basales como inducibles para la adaptación a las condiciones climáticas variantes. La resistencia al estrés por calor, hambre y radiación representan fenotipos ecológicamente relevantes de adaptación a los ambientes en la etapa adulta del ciclo de vida de Drosophila. Se ha hallado que los tratamientos de estrés térmico con frecuencia inducen hormesis en la longevidad en varios organismos. Hormesis es un concepto fundamental en la biología evolutiva de la respuesta al estrés, siendo utilizado ampliamente para definir un fenómeno de respuesta de dosis sobre diversos caracteres, incluyendo la longevidad. El efecto de hormesis sobre la longevidad ocurre cuando la exposición a un factor de estrés moderado (ej., estrés por calor) extiende la longevidad de un organismo o bien reduce su tasa de senescencia o envejecimiento. La radiación ultravioleta (UV) es otra forma de estrés ambiental que, como ocurre con la temperatura, puede afectar la distribución, abundancia y evolución de los organismos. Los niveles de radiación UV incrementan a mayores latitudes y altitudes. El presente escenario de calentamiento global está caracterizado por un gradual deterioro de la capa de ozono y mayores niveles de radiación ultravioleta que alcanzan la superficie del planeta. Debido a que los caracteres de historia de vida han evolucionado en un ambiente donde la radiación está presente, es de interés investigar la base genética de la resistencia a la radiación ultravioleta. Otro carácter de importancia adaptativa en insectos es la resistencia a la inanición. Este carácter es importante para la supervivencia cuando los recursos alimenticios son escasos. En los insectos es común que las poblaciones tengan que soportar inanición en forma periódica, y la evolución de caracteres de historia de vida puede haber ocurrido bajo condiciones ambientales que incluyan la falta de alimento. El tamaño corporal puede estar relacionado a la tolerancia a la inanición además de ser otro carácter de gran importancia adaptativa para la dispersión y la capacidad para encontrar recursos de alimento y cría en D. melanogaster. Este carácter se encuentra muy influenciado por la temperatura durante el desarrollo embrionario. Utilizando el mapeo de QTL (Quantitative Trait Loci) como herramienta y Drosophila melanogaster como organismo modelo, se investigó e identificó la ubicación de loci que son importantes para la variación en la resistencia a las altas temperaturas, al hambre y a la radiación UV. En este trabajo de tesis también se realizó un mapeo de QTL para el tamaño del ala (un índice del tamaño corporal) y la asimetría fluctuante como un indicador de la inestabilidad del desarrollo, tanto en benigna como en alta temperatura experimentada durante el desarrollo embrionario. En las regiones de QTL descubiertas se encuentran genes que desempeñan un rol importante en la evolución adaptativa de estos caracteres. Por otro lado, se investigaron e identificaron patrones adaptativos de hormesis en la longevidad en líneas de Drosophila buzzatii seleccionadas artificialmente para alta y baja resistencia a diferentes formas de estrés térmico. La tolerancia al estrés por inanición fue consistentemente más alta en las hembras que en los machos. El mapeo del intervalo compuesto identificó un QTL entre las bandas 64D-66E2 del cromosoma 3 en los machos y ningún QTL en las hembras. Se identificaron muchos genes candidatos dentro de dicha región de QTL. Los QTL para el tamaño del ala tampoco co-localizaron con el QTL para la tolerancia a la inanición. Los resultados se discuten con respecto a los múltiples genes candidatos y la falta de co-localización con QTL de termotolerancia previamente detectados en estudios recientes en Drosophila melanogaster. En el análisis de hormesis se utilizaron líneas de selección bi-direccional para mayor (K+) y menor (K-) resistencia al estrés por calor, así como también se utilizaron líneas seleccionadas para mayor (CCR+) o menor (CCR-) resistencia al estrés por frío. La hormesis inducida por estrés de calor fue sustancial en las hembras K- y CCR-, mientras que no se detectó ningún efecto de hormesis en las líneas K+, CCR+ y de control. Las diferencias en la longevidad entre las diversas líneas desaparecieron luego de un tratamiento por estrés de calor. Los efectos de hormesis sobre la tasa de senescencia demográfica fueron específicos de sexo y consistentemente más altos en las líneas menos longevas que en las líneas más longevas. Los resultados indicaron que la hormesis es una respuesta adaptativa, dado que su magnitud puede aumentar evolutivamente con la sensitividad térmica. Respecto de los QTL de termotolerancia se detectó un QTL de gran efecto sobre la resistencia al coma por calor en la región central (pericentromérica) del cromosoma 2 de Drosophila melanogaster. Los efectos de este QTL fueron mucho mayores en moscas no aclimatadas (resistencia basal) que en moscas aclimatadas (termotolerancia inducida). Este QTL explicó un 18% de la variación en fenotipos de resistencia al coma por calor, y no co-localizó con QTL de tolerancia a la inanición. Este QTL de termotolerancia colocalizó con un QTL del tamaño del ala y con un QTL de la resistencia a la radiación UV en el presente estudio. Se detectaron otros QTL para el tamaño del ala en los tres cromosomas mayores de la especie, que fueron específicos de la temperatura de desarrollo y del sexo. Respecto de los QTL para la asimetría fluctuante (AF), el resultado más interesante fue que ningún QTL para AF fue significativo en temperatura benigna y todos los QTL para AF fueron significativos en condiciones de estrés y parecieron ser específicos de cada sexo. El alelo del QTL que aumenta la tolerancia al calor fue el mismo que el que aumenta la tolerancia a la radiación UV-C, Este resultado es interesante porque indica que la tolerancia al calor y la resistencia a la radiación UV pueden tener QTLs en común. En la naturaleza, ambos caracteres podrían responder a la selección natural a través del mismo QTL, en ambientes con alta temperatura y elevada radiación UV. Por lo tanto, el QTL identificado será de gran interés para futuros análisis sobre termo-tolerancia y radiación ultravioleta, y el estudio presente discute posibles genes candidatos implicados en este QTL.

Abstract:
Drosophila melanogaster is distributed over wide geographic areas, ranging from tropical to temperate regions in most continents. A great number of adaptive stress resistance mechanisms have evolved in this cosmopolitan model organism, and individuals as well as populations depend on sets of basal and inducible traits to adapt to the changing climatic conditions. Resistance to heat stress, starvation and radiation represent ecologically relevant phenotypes of adaptation to environments in the adult stage of the Drosophila life cycle. Thermal stress is known to induce hormesis on longevity in several organisms. Hormesis is a fundamental concept in the evolutionary biology of stress resistance and is widely used to define a dose-response phenomenon on several traits, including longevity. Hormesis on longevity takes place when exposure to a mild stress factor, a mild heat stress for example, either extends the lifespan of an organism, or reduces its senescence or ageing rate. Another form of environmental stress that can affect the distribution, abundance and evolution of organisms is UV radiation. UV radiation levels increase at higher altitudes and latitudes. The present global warming scenario is characterized by a gradual ozone layer deterioration and higher levels of ultraviolet radiation reaching the planet surface. Because life history traits have evolved in an environment where radiation is present, it is of interest to further investigate the genetic architecture of ultraviolet radiation resistance. Another trait of adaptive importance is starvation resistance. This trait is crucial to survival when food resources are scarce. In insect populations periodic starvation is fairly common, and evolution of life history traits may have occurred under environmental conditions that included food shortage. Body size may be related to starvation resistance and is another adaptive trait under the influence of several environmental factors, including temperature, and of great importance for dispersion and resource finding. This trait is greatly influenced by temperature during the embryonary stage of development in D. melanogaster. Using QTL (Quantitative Trait Loci) mapping as a tool and Drosophila melanogaster as model organism, I investigated and identified the arrangement of loci relevant to variation in resistance to high temperature, starvation and UV radiation. Also, in this thesis we used QTL mapping to search for loci relevant for wing size (an index of body size) and fluctuating asymmetry, an indicator of developmental instability, at both benign and high developmental temperatures. Discovered QTL regions contain genes that play a significant role in the adaptive evolution of these traits. In addition, we investigated and identified adaptive patterns for hormesis in longevity in Drosophila buzzatii lines artificially selected for high and low resistance to different forms of thermal stress. Starvation stress tolerance was consistently higher in females than in males. Composite interval mapping revealed a QTL between bands 64D- 66E2 in chromosome 3 in males and none in females. Several candidate genes were identified within said QTL region. QTL for wing size did not co- localize with starvation resistance QTL. Results are discussed regarding the multiple candidate genes and lack of co-localization with QTL previously identified for thermotolerance in recent studies in D. melanogaster. For hormesis analysis, bidirectional selection lines for high (K+) and low (K-) resistance to heat stress were utilized, as were lines selected for high (CCR+) and low (CCR-) resistance to cold stress. Heat stress induced hormesis was significant in K- and CCR- females, whereas no hormetic effect was detected in control, K+ and CCR+ lines. Differences in longevity among the several lines disappeared following a heat stress treatment. The effects of hormesis on the demographic senescence rate were sex-specific and consistently higher in shorter-lived lines than in longer-lived lines. Results indicate that hormesis is an adaptive response, as its magnitude may evolutionarily increase with thermal sensitivity. Regarding thermotolerance, a QTL of great effect for heat-shock resistance was detected in the pericentromeric region of chromosome 2 in Drosophila melanogaster. The effects of this QTL were much higher in non- hardened flies (basal resistance) than in hardened flies (induced thermotolerance). This QTL explained 18% of the variation in heat-shock resistance phenotypes, and did not colocalize with starvation resistance QTL. Additionally, this QTL did colocalize with a QTL for wing size and a QTL for UV radiation resistance in the present study. Other QTL were detected for wing size in the three major chromosomes of the species, these QTL were sex specific and also development-temperature specific. In regards to fluctuating asymmetry (FA), the most interesting result was that all FA QTL were significant under stressful temperature development and seemed to be sex-specific, whereas no significant benign temperature QTL were detected for AF. The QTL allele increasing heat tolerance was the same as the one increasing UV-C radiation tolerance. This is an interesting result because it hints that heat tolerance and UV radiation resistance could have QTL in common. In nature, both traits may respond to natural selection through the same QTL in high-temperature and high-UV radiation level environments. Therefore, the identified QTL is of great interest for future analyses on thermotolerance and ultraviolet radiation, and the present study discusses possible candidate genes implicated in this QTL.

Girotti, María Romina. "Análisis proteómico de los mecanismos moleculares de progresión tumoral relacionados con la proteína Sparc" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
SPARC (proteína secretada acídica y rica en cisteínas) es una glicoproteína sobreexpresada en una gran variedad de tumores favoreciendo la progresión tumoral y metástasis. Su rol biológico ha sido demostrado además en remodelación de tejidos, migración celular endotelial, morfogénesis y angiogénesis. Nuestro laboratorio ha demostrado que la transfección estable de células tumorales de melanoma con una secuencia de ADN antisentido de SPARC, promovió la inhibición del crecimiento tumoral en un modelo murino in vivo. Sin embargo, se desconocen los mecanismos moleculares por los cuales SPARC ejerce su efecto protumoral. Esta tesis de doctorado se enfocó en la búsqueda de intermediarios moleculares por los cuales SPARC favorece la progresión tumoral. Mediante análisis proteómicos globales aplicados al modelo de melanoma humano con disminución forzada de la expresión de SPARC, pudimos dilucidar un mecanismo molecular por el cual SPARC actúa sobre la progresión tumoral. Esta vía se centra en el eje TGFbeta1/ colágeno tipo I/ integrinas alfa2beta1 a través del cual SPARC regula la invasividad celular mediada por catepsina B. Por otro lado, se demostró que SPARC induce el cambio de E‐ a N‐caderina de membrana permitiéndoles a las células de melanoma transmigrar a través de una monocapa de células endoteliales mediante un mecanismo molecular independiente al descripto para la inducción de catepsina B. Además, las células deficientes en SPARC presentaron una expresión disminuida de genes asociados con propiedades mesenquimales revelando que SPARC está involucrada activamente en la transición epitelio‐mesenquimal y en la progresión metastásica.

Abstract:
SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteins) is a secreted glycoprotein related to tumor progression and metastasis and overexpressed in different tumors. Its role has been described in several biological processes that include tissue remodelling, endothelial cell migration, morphogenesis and angiogenesis. Our laboratory showed that the stable transfection of tumor cells with antisense SPARC DNA abolished tumorigenicity in an in vivo melanoma murine model. However, little is known about the molecular mechanisms affected by SPARC during tumor growth. This thesis was focused in the search of molecular mediators of SPARC protumoral effect and to address this objective a proteomic strategy was applied. Global protein expression analysis of the melanoma proteome following enforced downregulation of SPARC expression led us to elucidate a molecular mechanism where SPARC makes use of TGFbeta1/collagen I and integrin alfa2beta1 to promote cathepsin B‐mediated melanoma invasiveness. SPARC also induces E‐ to N‐cadherin switch enabling melanoma cells to transmigrate across an endothelial layer through a mechanism that does not involve the molecular mediators showed for cathepsin B. In addition, SPARC‐deficient cells also exhibited decreased expression of genes associated with the acquisition of mesenchymal traits revealing that SPARC plays a key role in the promotion of epithelial to mesenchymal transition and melanoma aggressiveness.

Garófalo, Sofía Judith. "Análisis de obstáculos en el aprendizaje de metabolismo de hidratos de carbono : Un estudio transversal" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta Tesis Doctoral abordó una investigación con el fin de identificar obstáculos que podrían dificultar la comprensión en estudiantes universitarios del tema metabolismo de hidratos de carbono, en un contexto sistémico humano. Las asignaturas elegidas, todas pertenecientes a carreras de la Universidad de Buenos Aires, fueron aquellas en las que el tema seleccionado es parte del programa analítico: Biología y Biología e Introducción a la Biología Celular; del Ciclo Básico Común; Introducción a la Biología Molecular y Celular de la Licenciatura en Ciencias Biológicas, Química Biológica de las Licenciaturas en Ciencias Biológicas y en Ciencias Químicas, ambas de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; y, Bioquímica de la Nutrición de la carrera de Nutrición, de la Facultad de Medicina. Se utilizaron distintas técnicas de recolección de información empírica, tales como observaciones de clases, análisis los contenidos de la bibliografía recomendada, y entrevistas abiertas y cuestionarios semiestructurados tomados a estudiantes y docentes. Se elaboraron nuevas técnicas de análisis de la información empírica haciendo uso de redes conceptuales y redes semánticas, dentro de marcos teóricos como el Sistema de Procesamiento de la Información y la Teoría Matemática de la Comunicación. Como resultados de esta investigación se identificaron fallas en el aprendizaje de los estudiantes. Un análisis más profundo permitió reconceptualizarlas, transformándolas en evidencias empíricas de fallas en la construcción de modelos mentales por parte de los estudiantes. Dichos modelos fueron definidos ad hoc, y denominados y caracterizados como: “Modelo Fisiológico del Ciclo del Carbono en Heterótrofos”; “Modelo Fisiológico de “Disponibilidad de Metabolitos”, y “Modelo Fisiológico de Captación y Homeostasis de Glucosa en Sangre”. Este análisis nos permitió identificar y precisar que las evidencias empíricas provenían de obstáculos epistémicos de aprendizaje y, también, de obstáculos epistémicos asociados a la enseñanza. Dentro de los obstáculos epistémicos de aprendizaje, se definieron y caracterizaron tres subcategorías: del tipo “brecha”; del tipo “puente”, y “por heurísticos”. Dentro de los obstáculos epistémicos de enseñanza se definieron y caracterizaron dos subcategorías: de tipo “curricular” y de tipo “comunicacional”. Los aportes de la presente investigación consisten en reflexiones para una eventual optimización de los procesos de enseñanza del tema, en relación a las capacidades de aprendizaje de los estudiantes. Estas reflexiones permiten dar marcos interpretativos a las tensiones que actualmente existen en los docentes, que se enfrentan con la paradoja del gran desarrollo de conocimientos científicos, con mayor cantidad de información cada vez más especializada, y la creciente y más compleja meta de que los estudiantes aprendan contenidos específicos, desde miradas globales que les den sentido.

Abstract:
This doctoral thesis addressed a research to identify obstacles that may hinder understanding in university students of carbohydrate metabolism in a human systemic context. The chosen subjects, all of which belong to University of Buenos Aires, were those in which the selected topic is part of the analytical program: “Biology” and “Biology and Introduction to Cell Biology”, Ciclo Básico Común (the first year of University of Buenos Aires), “Introduction to Molecular and Cellular Biology” of the Bachelor in Biology, “Biological Chemistry” of the Bachelor in Biology and the Bachelor in Chemistry, both from the Faculty of Exact and Natural Sciences, and “Biochemistry of Nutrition”, of the Nutrition Career, from the Faculty of Medicine. Different techniques were used to collect empirical information, such as classroom observations, content analysis of the recommended bibliography, interviews and semi-open questionnaires taken to students and teachers. In addition, new techniques were developed to analyze the empirical data using conceptual networks and semantic networks, within theoretical frameworks such as the System of Information Processing and the Mathematical Theory of Communication. As a result of this investigation, failures in student learning were identified. Further analysis allowed reconceptualization of them, turning them into empirical evidence of flaws in the construction of mental models by students. These models were defined ad hoc, and named and characterized as "Physiological Model of the Carbon Cycle in heterotrophs", "Physiological Model of Availability of Metabolites ", and" Physiological Model of Uptake and Homeostasis of Blood Glucose". This analysis allowed us to identify and define that the empirical evidence is related to epistemic obstacles of learning and, also, of epistemic obstacles related to teaching. In learning epistemic obstacles, three subcategories were defined and characterized: "gap" type, "bridge" type, and "heuristic” type. In teaching epistemic obstacles, two subcategories were defined and characterized: "curricular" type and "communicational" type. The contributions of this research consist in reflections for an eventual optimization of the teaching processes of the subject, according to the learning capabilities of students. These considerations allow us to give interpretative frameworks to the tensions that currently exist in teachers. They face the paradox of a great development of scientific knowledge, filled with more specialized information, and the increasingly complex goal that students learn specific contents, from global perspectives that give meaning to them.

García, Víctor Hugo. "Modelado de las interacciones entre procesos de erosión y sedimentación fluvial y el crecimiento de estructuras neotectónicas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La evolución del paisaje es el resultado de las interacciones entre las fuerzas que participan en la construcción de los relieves (tectónicas) y los procesos que contribuyen a su destrucción (erosión). Durante esta tesis, se analizaron estas interacciones en ambientes pedemontanos, que son regiones muy activas tanto desde el punto de vista tectónico como del de los procesos de erosión-transporte- sedimentación. Esta actividad genera distintos tipos de marcadores (morfológicos, estructurales y estratigráficos), que pueden preservarse en el registro geológico y estudiarse in situ. Su análisis es primordial ya que proporciona información importante acerca de la evolución dinámica del paisaje y en particular de su historia tectónica y climática. Dado que resulta imposible estudiar directamente la evolución dinámica del paisaje (debido a constantes de tiempo que sobrepasan varias veces la escala humana), se desarrolló una plataforma de modelado numérico original para simular las interacciones entre los procesos involucrados. Esta metodología permite modelar simultáneamente los procesos de deformación tectónica (formación de fallas y pliegues) y los procesos de erosión-transporte-sedimentación (formación de ríos, cuencas de drenaje, abanicos aluviales, pedimentos). Los resultados obtenidos muestran que la herramienta desarrollada es útil para mejorar el entendimiento acerca de las interacciones que ocurren en los ambientes pedemontanos. Por otra parte, se considera que la plataforma de modelado puede ser el punto de partida de nuevas líneas de investigación en el ámbito de la geomorfología tectónica.

Abstract:
The evolution of the landscape is consequence of the interactions between the forces that construct the reliefs (tectonics) and processes contributing for the destruction of them (erosion). Piedmont environments are characterized by the interplay of active tectonics and fluvial processes. Many types of markers (morphologic, structural and stratigraphic) are produced by that interplay. These markers can be preserved as geological features and studied in the field. The analysis of this kind of features gives important information about the dynamics of landscape evolution, and its tectonic and climatic history. The direct study of the dynamics of landscape evolution is imposible (because time constants are many times major than human scale). In this thesis, an original numerical modeling platform was developed to simulate the interactions between the involved processes. This methodology allows to model simultaneously tectonic processes (faults and folds formation) and surficial processes (river incision and sedimentation). The results show that the developed tool is useful to improve the understanding about the interactions occurring in piedmont environments. It can be the starting point of new lines of research in tectonic geomorphology.

García Samartino, Clara. "Interacciones de Brucella abortus con la inmunidad innata del sistema nervioso central como determinante de patogénesis de la neurobrucelosis" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La invasión al sistema nervioso central (SNC) por bacterias del genero Brucella resulta en un desorden inflamatorio llamado neurobrucelosis. En este trabajo nosotros presentamos evidencia in vivo e in vitro mostrando que B. abortus y sus lipoproteínas activan la inmunidad innata del SNC, originando una respuesta inflamatoria que lleva a la astrogliosis, una característica típica de neurobrucelosis. Inyecciones intracraneales de B. abortus muerta por calor (HKBA) o de la proteína de la membrana externa 19 (Omp19), una lipoproteína de B. abortus utilizada como modelo, indujeron astrogliosis concomitantemente con un infiltrado neutrofilico en el cuerpo estriado de los ratones. La infección de astrocitos y microglia con B. abortus incitó la secreción de IL-6, IL-1beta, TNF-alfa, MCP-1 y KC (CXCL1). HKBA también estimuló la liberación de estos mediadores inflamatorios, sugiriendo la independencia de la viabilidad bacteriana en este fenómeno e implicando a un componente estructural de la bacteria. De acuerdo con esto, Omp19 indujo el mismo patrón de secreción de citoquinas y quimiocinas. La respuesta inflamatoria desencadenada por Omp19 estuvo mediada por TLR2, ya que cultivos de células gliales provenientes de ratones TLR2 KO no promovieron la secreción de mediadores proinflamatorios. Sin embargo este receptor no media la infección ni la replicación de la bacteria en astrocitos o en microglía. La infección con B. abortus promovio apoptosis de astrocitos pero no de microglia. HKBA y Omp19 indujeron, no solo la apoptosis de los astrocitos sino también su proliferación, dos de las caracteristicas que se observan durante la astrogliosis. La proliferación inducida por HKBA y Omp19 disminuyó en presencia de Ac anti-IL-6. Por otro lado, la apoptosis promovida por los 2 estímulos fue completamente suprimida en células provenientes de ratones deficientes del receptor p55 de TNF-alfa o cuando se agregó a los cultivos el inhibidor general de caspasas Z-VAD-FMK. Por lo tanto, IL-6 contribuye a la proliferación de astrocitos, y la senalización de TNF-alfa vía TNFR1 a través de caspasas determina la apoptosis, cuando son estimulados con B. abortus y sus lipopoproteínas. Los resultados de esta tesis son prueba de principio de que las lipoproteínas de Brucella podrían ser determinantes de patogenia claves en neurobrucelosis, y que la astrogliosis podria contribuir a la patogénesis de la misma.

Abstract:
Central nervous system (CNS) invasion by bacteria of the genus Brucella results in an inflammatory disorder called neurobrucellosis. In this study we present in vivo and in vitro evidence showing that B. abortus and its lipoproteins activate the innate immunity of the CNS, eliciting an inflammatory response that leads to astrogliosis, a characteristic feature of neurobrucellosis. Intracranial injection of heat killed B. abortus (HKBA) or outer membrane protein 19 (Omp19), a B. abortus lipoprotein used as a model, induced astrogliosis with concomitant neutrophil's infiltrate in mouse striatum. Infection of astrocyte and microglia with B. abortus induced the secretion of IL-6, IL-1beta, TNF-alpha, MCP-1 and KC (CXCL1). HKBA also induced these inflammatory mediators, suggesting independency of bacterial viability and involvement of a structural component of the bacterium. Accordingly, Omp19 induced the same cytokine and chemokine secretion pattern. TLR2 mediated the inflammatory response induced by Omp19 since cultures from TLR2 KO mice did not induced the secretion of proinflammatory mediators. However, this receptor is not envolved in the infection or replication of the bacteria inside astrocytes or microglia. B. abortus infection induced astrocyte, but not microglia, apoptosis. HKBA and Omp19 elicited not only astrocyte apoptosis but also proliferation, two features observed during astrogliosis. Proliferation induced by HKBA and Omp19 was diminished in the presence of anti-IL-6 antibody, and apoptosis induced by both stimuli was completely suppressed in cells of TNF-alpha receptor p55-/- mice or when the general caspase inhibitor Z-VAD-FMK was added to cultures. Hence, IL-6 contributes to astrocyte proliferation, and TNF-alpha signaling via TNFR1 through the coupling of caspases determines apoptosis, as elicited by B. abortus and its lipoproteins. Our results provide proof of the principle that Brucella lipoproteins could be key virulence factors in neurobrucellosis, and that astrogliosis might contribute to neurobrucellosis pathogenesis.

García Morabito, Ezequiel. "Tectónica y estructura del retroarco andino entre los 38°15’ y los 40°S" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio integrado de este segmento del retroarco andino, ha permitido definir y caracterizar las distintas etapas que llevaron a su configuración actual desde el mesozoico, permitiendo comprender los alcances y la importancia relativa de cada una de ellas y como estas se interrelacionan a lo largo de la historia del sector. El análisis y la distribución de las secuencias del ciclo precuyano, y la identificación de las estructuras que controlaron su depositación tanto en superficie como en subsuelo permitió caracterizar la arquitectura extensional de la región, como también identificar y definir temporalmente las distintas etapas que caracterizaron a la fase de rift. La integración de información disponible con observaciones de campo a lo largo del sector precordillerano del sur de Neuquén, permitió a su vez reconocer y caracterizar un primer estadio de deformación bien documentado en otros sectores de la cuenca a partir del Jurásico medio. El análisis estructural detallado de este segmento del retroarco andino, ha llevado a dividir al mismo en dos dominios estructurales. El límite entre estos coincide con el curso de los ríos Bio Bio y Aluminé, el cual separa dos sectores de la faja plegada y corrida con vergencia opuesta y estilos estructurales diferenciales. El estudio de los depósitos sinorogénicos terciarios, y su vinculación con los principales rasgos estructurales del área, sumado a las dataciones realizadas sobre las series volcánicas cretácicas-paleógenas y la identificación de un control estructural en su emplazamiento, permitieron definir los principales eventos contraccionales que afectaron a la zona de estudio y constreñir sus edades. El primero y más significativo tuvo lugar durante el Cretácico superior, asociado a una expansión del arco volcánico hacia el antepaís. El último de ellos, desarrollado entre el Mioceno superior y el Plioceno inferior, ha sido bien acotado temporalmente a lo largo de tres segmentos sobre la base de controles tectonoestratigráficos, permitiendo definir un modelo en el que el alzamiento final de los principales elementos topográficos de sector entre los 11 y los 4,3 Ma, origino una serie de depocentros intermontanos donde se depositaron las secuencias sinorogénicas y sintectónicas terciarias. La medición de unas 300 estrías asociados a los principales rasgos estructurales, permitió estimar un régimen de partición moderado a bajo durante esta etapa, caracterizado por ejes de acortamiento dispuestos mayoritariamente según una orientación ENE, factor que favoreció la reactivación selectiva de las principales estructuras extensionales NNO. Esta última etapa de deformación se produjo luego de una extensa fase extensional que afectó a amplios sectores del margen andino a lo largo del Paleógeno. Dentro de este marco se pudo establecer la génesis de la cuenca de Collón Cura como una cuenca extensional hacia finales del Eoceno, y su pasaje transicional a una cuenca de antepaís durante el mioceno. La delimitación espacial y temporal de las distintas fases de deformación en el área, permitió a su vez establecer una correlación entre estas y la historia de convergencia entre placas. La información generada a lo largo del presente estudio fue integrada en un modelo tectonoestructural para la región. Este consta de seis etapas diferenciales desarrolladas entre el Triásico superior y el Plioceno, las cuales han llevado a la configuración actual del segmento andino comprendido entre los 38º15’ y los 40º00’S, a través de una compleja historia de deformación de distintas magnitudes y alcances, y regímenes tectónicos alternantes.

Abstract:
The study of the retroarc area between 38º15’ and 40º00’S allowed us to define and characterize different stages that led to the present configuration of this segment, and to understand the real extent and relative importance of each phase, and how they interralate trough the history of the region. The analysis and distribution of the synrift sequences, and the recognition of the structures which controlled their accumulation, allowed us to characterize the extensional architecture of the region, and led us to define different stages during the mesozoic rift phase. The integration of information and field observations trough the precordilleran system of the south of Neuquén, allowed us to recognize and characterize a first stage of deformation well documented in other sectors of the Neuquen embayment since Jurassic times. Through the structural analysis of this segment, we divide this andean section into an internal and an external domain based on its distinctive structural evolution. The boundary between them coincides the Bio Bio and Alumine valleys, which separates sectors of the fold-and-thrustbelt with opposite vergence and different structural styles. The analysis of the tertiary sinorogenic deposits, and their relation with the main structural features of the area, together with the ages obtained for the cretaceous-paleogene volcanic sequences, and the determination of a structural control in their emplacement, allowed us to define the main contractional phases that affected this segment. The most significant event took place during upper Cretaceous times, related to an esatward expansion of Late Cretaceous to Eocene arc-related sequences. On the basis of tectonostratigraphic controls we define the last Andean contractional phase between upper Miocene – lower Pliocene times, more precisely between 11 and 5,6 Ma for a northern segment, between 10 and 6,2 Ma for a central segment, and between 8 and 4,3 Ma for a southern segment. The recognition and interpretation of the main structures and spatial and temporal distribution of the Tertiary sequences allowed us to establish a tectonic model in which the final uplift of the principal topographic features of the area originated a series of intermontane depocenters were synorogenic and syntectonic sequences were accumulated. The kinematic analysis of tectonic mesostructures allowed us to establish a regime of moderate to low strain partition for this time, with shortening axes orientated according to an ENE direction, which favored the selective reactivation along NNW orientated normal faults of the mesozoic rift phase. The last contractional phase took place after an extensional regime that affected extended segments of the andean margin during Paleogene times. Within this framework, we establish the genesis of the Collón Cura basin as the result of an extensional phase developed since late Eocene times, which later evolved into a foreland basin during the Miocene. The spatial and temporal definition of the different deformational phases across the area, alllowed the correlation with the history of convergence between plates along the South American margin. All these data and observations were integrated in a tectonic and structural model which can be divided into six different stages developed between mesozoic and cenozoic times, which lead to tha present configuration of this andean segment trough a complex history of deformation and alternation of different tectonic regimes.

Galizia, Luciano. "Estudio del rol de la AQP2 en la regulación del volumen celular" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La capacidad de las células para regular su volumen es esencial para el mantenimiento de la homeostasis celular en condiciones de anisotonia. Nosotros previamente informamos, en una línea celular que deriva de túbulo colector cortical de rata (RCCD_1), que la presencia de la acuaporina 2 (AQP2) en la membrana celular es crítica para la activación rápida de mecanismos de regulación de volumen luego de un shock hipotónico (RVD). El objetivo de este trabajo de tesis fue investigar la vía de señalización que relaciona la AQP2 con esta activación rápida de RVD. Probamos la hipótesis de que AQP2 podría tener un papel en la activación de la entrada de calcio por hipotonía e investigamos su importancia en la regulación del volumen celular. Para ello estudiamos la i y el volumen celular en respuesta a un shock hipotónico en células WT- RCCD1 (no expresan acuaporinas) y en células AQP2-RCCD_1 (transfectadas con AQP2). Encontramos, que luego de la exposición a un gradiente hipotónico, sólo en las células que expresan AQP2 se observa un sustancial aumento i. Este aumento de la i es fuertemente dependiente del calcio extracelular y de depósitos intracelulares. La exposición de las células AQP2-RCCD_11 a HgCl_2 (inhibidor de las acuaporinas), gadolinio y rojo de rutenio (inhibidores del TRPV4) redujeron el aumento i . Además, la exposición de las células a estos inhibidores disminuyó el rápido RVD. Estudios de inmunofluorescencia mostraron que, en condiciones de isotonía el TRPV4 se distribuye principalmente en el compartimento intracelular en ambas líneas celulares. Sin embargo en condiciones de hipotonía el TRPV4 es translocado a la membrana celular sólo en las células que expresan AQP2. En esta tesis proponemos la existencia de una asociación funcional entre la AQP2 y el TRPV4, esencial para la generación de señales de calcio inducidas por swelling y necesarias para la activación rápida de los mecanismos de regulación de volumen celular.

Abstract:
The ability of cells to regulate their volume is essential for maintenance of cellular homeostasis under anisotonic environmental conditions. We previously reported in a rat cortical collecting duct cell line (RCCD_1) that the presence of aquaporin 2 (AQP2) in the cell membrane is critical for the rapid activation of regulatory volume decrease mechanisms (RVD). The aim of our present work was to investigate the signalling pathway that links AQP2 to this rapid RVD activation. We tested the hypothesis that AQP2 could have a role in activation of calcium entry by hypotonicity and its implication in cell volume regulation. We studied i and cell volume changes in response to a hypotonic shock in WT-RCCD1 (not expressing aquaporins) and in AQP2-RCCD_1 (transfected with AQP2) cells. We found that after a hypotonic shock only AQP2-RCCD_1 cells exhibit a substantial increase in i. This i increase is strongly dependent on extracellular Ca^2+ and on intracellular stores. Exposure of AQP2- RCCD1 cells to HgCl_2 (aquaporin inhibitor), gadolinium and ruthenium red (TRPV4 inhibitors) reduced the increase in i. Furthermore, exposure of cells to all of the above described conditions impaired rapid RVD. Immunofluorescence studies show that under isotonic conditions TRPV4 is distributed mainly in intracellular compartment in both cell lines. However under hypotonic conditions TRPV4 is translocated to the cell membrane only in AQP2-RCCD1 cells. In this thesis we suggest the existence of a functional interaction between AQP2 and TRPV4, which is essential for the calcium signal generation induced by swelling and necessary for a rapid activation of the mechanisms of cell volume regulation.

Galiñanes, Gregorio. "Desarrollo funcional del sistema córticoestriatal: rol de las vías dopaminérgicas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los ganglios de la base (GB) son núcleos subcorticales involucrados en el control voluntario del movimiento y en procesos mnésicos, atencionales y motivacionales. En los animales adultos, la actividad de estos núcleos depende fuertemente de la dopamina, que regula el flujo de información cortical hacia el estriado, que es el núcleo de "entrada" de los GB. Sin embargo, el conocimiento de la maduración funcional de estos circuitos en el pasaje de la infancia a la adultez y si las vías dopaminérgicas ejercen un rol sobre este proceso, es escaso. Algunas alteraciones conductuales de condiciones neuropsiquiátricas asociadas al desarrollo, como el síndrome de Gilles de la Tourette, el Déficit de Atención con Hiperactividad (ADHD) o el Trastorno Obsesivo Compulsivo, han sido explicadas por alteraciones de la función dopaminérgica y de los circuitros frontoestriatales. Por lo tanto resulta de interés comprender los procesos madurativos normales y patológicos de estos circuitos en relación a las vías dopaminérgicas. La hipótesis general en la que se enmarca esta tesis es que los circuitos córticoestriatales son inmaduros al momento del nacimiento y que durante la infancia y adolescencia ocurren cambios sustanciales en el conexionado anatómico y funcional que les confieren las características del sistema adulto. En estos procesos madurativos la dopamina jugaría un papel central y la conectividad adquirida durante el desarrollo y moldeada por la experiencia condicionaría las conductas mediadas por los GB. Un corolario de esta hipótesis es que alteraciones postnatales que afecten la conectividad córticoestriatal podrían ser el sustrato de alteraciones conductuales asociadas a patologías de los GB que podrían manifestarse en distintas etapas de la vida. Para evalular esta hipótesis trabajamos con un modelo animal de lesión de neuronas dopaminérgicas neonatal y estudiamos las propiedades electrofisiológicas del sistema córticoestriatal en el pasaje de la infancia hacia la adultez. Los resultados obtenidos indican que, comparado con los ratones juveniles, en los ratones adultos la densidad de neuronas estriatales espontáneamente activas decae, la conectividad funcional córticoestriatal aumenta, la probabilidad de respuesta estriatal a estímulos focales en la corteza disminuye y la capacidad de sufrir depresión sináptica córticoestriatal disminuye. Encontramos que algunos de estos procesos madurativos parecen ser facilitados por las vías dopaminérgicas (densidad de sitios activos y resistencia a la LTD), mientras que otros, en apariencia, maduran normalmente en los ratones con lesión neonatal. Estos resultados apoyan la hipótesis de trabajo y sugieren que perturbaciones sobre la neurotransmisión dopaminérgica en etapas tempranas del desarrollo pueden producir efectos duraderos sobre algunas capacidades de los circuitos córticoestriatales mientras que otras pueden madurar gracias a mecanismos compensatorios.

Abstract:
Basal Ganglia (BG) are a group of subcortical nuclei involved in voluntary motor control and in some of the mnesic, attentional and motivational aspects of behaviour. BG activity in adult animals is highly dependent on dopamine which regulates cortical information flow through the striatum, which is the main input nucelus of the BG. However, the current knowledge of the functional development of these circuits during adolescence and whether dopamine pathways are involved in that process is scarce. Some of the behavioural alterations observed in neuropsychiatric disorders, such as Gilles de la Tourette syndrome, Attention/Deficit Hyperactivity Disorder (ADHD) or Obsesive Compulsive Disorder have been attributed to deficiencies in dopaminergic and frontostriatal circuits function. Thus, it is of interest to better understand normal and pathological developmental processes of these circuits in relation to dopamine pathways. The general hypothesis of this Thesis is that corticostriatal circuits are immature at the time of birth and substantial changes take place during infancy and adolescence at the functional and anatomical level. During this developmental period dopamine would play a key role and the final connectivity of the system acquiered through development and sculpted by experience would have an impact on the behaviour sustained by the BG. To assess whether the maturation of corticostriatal functional connectivity is altered by early dopamine depletion, we examined preadolescent and postadolescent urethane-anesthetized mice with or without dopamine-depleting lesions. We specifically studied (1) synchronization between striatal neuron discharges and oscillations in frontal cortex field potentials and (2) striatal neuron responses to frontal cortex stimulation. In adult control mice striatal neurons were less spontaneously active, less responsive to cortical stimulation, and more temporally tuned to cortical rhythms than in infants. Striatal neurons from hyperlocomotor mice required more current to respond to cortical input and were less phase locked to ongoing oscillations, resulting in fewer neurons responding to refined cortical commands. By adulthood some electrophysiological deficits waned other remained substantially elevated whereas other remained. These results are compatible with our working hypothesis and suggest that early disruption of dopaminergic neurotransmission during postnatal development might produce enduring effects over some capacities of the corticostriatal circuits while other might be subject to commpensatory mechanisms.

Galeotti, Juan Pablo. "Verificación de software usando Alloy" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La verificación acotada de software usando SAT consiste en la traducción del programa junto con las anotaciones provistas por el usuario a una fórmula proposicional. Luego de lo cual la fórmula es analizada en busca de violaciones a la especificación usando un SAT-solver. Si una violación es encontrada, una traza de ejecución exponiendo el error es exhibida al usuario. Alloy es un lenguaje formal relacional que nos permite automáticamente analizar especificiaciones buscando contraejemplos de aserciones con la ayuda de un SAT-solver off-the-shelf. Las contribuciones de la presente tesis son principalmente dos. Por un lado, se presenta una traducción desde software anotado en lenguaje JML al lenguaje Alloy. Para conseguir esto, se presenta: • DynAlloy, una extensión al lenguaje de especificación Alloy para describir propiedades dinámicas de los sistemas usando acciones. Extendemos la sintaxis de Alloy con una notación para escribir aserciones de correctitud parcial. La semántica de estas aserciones es una adaptación del precondición liberal más débil de Dijsktra. • DynJML, un lenguaje de especificación orientado a objetos que sirve de representación intermedia para facilitar la traducción de JML a DynAlloy. • TACO, un prototipo que implementa la traducción de JML a DynAlloy. En segundo lugar, introducimos una técnica novedosa, general y complementamente automatizable para analizar programas Java secuenciales anotados con JML usando SAT. Esta técnica es especialmente beneficiosa cuando el programa opera con estructuras de datos complejas. Para esto, se instrumenta el modelo Alloy con un predicado de ruptura de simetrías que nos permite el cómputo paralelo y automatizado de cotas ajustadas para los campos Java.

Abstract:
SAT-based bounded verification of annotated code consists of translating the code together with the annotations to a propositional formula, and an- alyzing the formula for specification violations using a SAT-solver. If a violation is found, an execution trace exposing the error is exhibited. Alloy is a formal specification language that allows us to automatically ana- lyze specifications by searching for counterexamples of assertions with the help of the off-the-shelf SAT solvers. The contributions of this dissertation are twofold. Firstly, we present a trans- lation from Java Modelling Language (a behavioural specification language for Java) to Alloy. In order to do so, we introduce: • DynAlloy, an extension to the Alloy specification language to describe dynamic properties of systems using actions. We extend Alloy’s syntax with a notation for partial correctness assertions, whose semantics relies on an adaptation of Dijkstra’s weakest liberal precondition. • DynJML, an intermediate object-oriented specification language to allevi- ate the burden of translating JML to DynAlloy. • TACO, a prototype tool which implements the entire tool-chain. Secondly, we introduce a novel, general and fully automated technique for the SAT-based analysis of JML-annotated Java sequential programs dealing with complex linked data structures. We instrument Alloy with a symmetry-breaking predicate that allows for the parallel, automated computation of tight bounds for Java fields. Experiments show that the translations to propositional formulas require significantly less propositional variables, leading to a speedup on the analysis of orders of magnitude compared to the non-instrumented SAT-based analysis.

Fuxman Bass, Juan Ignacio. "Reconocimiento del ADN bacteriano extracelular por neutrófilos humanos: su impacto en la respuesta a biofilms" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Previamente demostramos que el ADN bacteriano extracelular activa a los neutrófilos a través de un mecanismo diferente al canónico CpG-dependiente. El ADN extracelular es un componente central en la formación y estructura de los biofilms bacterianos, comunidades responsables de más del 60% de las infecciones ocasionadas por estos microorganismos. La presente tesis tuvo como objetivos centrales determinar el impacto del ADN de la matriz de los biofilms en la activación de los neutrófilos humanos y la identificaron del receptor involucrado en el reconocimiento de ADN. Los estudios realizados indicaron que la degradación con DNAsa I del ADN de la matriz extracelular de los biofilms de P. aeruginosa redujo marcadamente su capacidad de inducir la activación de los neutrófilos, determinada en función de su habilidad para producir citoquinas proinflamatorias, incrementar marcadores de activación fisiológicamente relevantes, de mediar la fagocitosis y de liberar trampas extracelulares de los neutrófilos (NET). La aplicación de técnicas de MALDI-TOF nos permitió identificar, en el neutrófilo, 16 proteínas con capacidad de unir ADN bacteriano. A pesar de que ninguna de ellas resultó ser el receptor de la superficie celular para ADN, es posible que dos de las proteínas encontradas constituyan sensores intracelulares de ADN, cuya relevancia queda por ser explorada. Los hallazgos realizados en la presente Tesis confirman la existencia de una proteína de la superficie del neutrófilo capaz de mediar el reconocimiento de ADN y la activación celular por esta molécula. Además, indican que el ADN de la matriz extracelular representa un componente proinflamatorio relevante de los biofilms de P. aeruginosa. Los mismos permiten especular que el reconocimiento del ADN de la matriz de biofilms podría representar un mecanismo seleccionado evolutivamente para permitir al huésped incrementar su capacidad de responder a este tipo de infecciones bacterianas persistentes

Abstract:
We have previously demonstrated that extracellular bacterial DNA activates neutrophils through a non-canonical mechanism. Extracelular DNA is a key component in the formation and composition of bacterial biofilms, that are communities responsible for more than 60% of the infections caused by these microorganisms. The aims of this Thesis were to determine the impact of DNA present in the biofilm matrix in triggering human neutrophil activation and to identify the receptor involved in DNA recognition. We found that extracelluar DNA degradation of P. aeruginosa biofilm matrix with DNase I markedly reduced its ability to induce neutrophil activation, determined by evaluating proinflammatoy cytokines production, the increase of physiologically relevant activation markers, phagocytosis and neutrophil extracelullar traps (NET) release. By application of MALDI-TOF techniques we identified 16 neutrophil proteins that bind bacterial DNA. Although none of them proved to be the DNA surface receptor, it is possible that two of these proteins correspond to intracellular DNA sensors whose relevance remains to be explored. The findings presented in this Thesis confirm the existence of a neutrophil surface protein capable of mediating DNA recognition and cell activation. Additionaly, they indicate that extracellular matrix DNA represents a relevant proinflammatory component of P. aeruginosa biofilms. Thus, it is possible to speculate that recognition of extracellular DNA of the biofilm matrix represents an evolutionary selected mechanism that increases the ability of the host to respond to these types of persistent bacterial infections.

Fusari, Corina Mariana. "Mapeo por asociación en girasol: diversidad nucleotídica, desequilibrio de ligamiento e identificación de genes involucrados en la resistencia a la podredumbre húmeda del capítulo" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El mapeo por asociación es una herramienta poderosa que permite la identificación de loci cuya contribución explica parte de la variación fenotípica observada. En general, los marcadores utilizados en estos estudios son los Polimorfismos de Nucleótido Simple (SNPs, Single Nucleotide Polymorphisms) y los indels (eventos de inserción, insertion/deletion). Los objetivos de este trabajo comprendieron el estudio de la diversidad nucleotídica y el alcance del desequilibrio de ligamiento (DL) en girasol cultivado, y el diseño de una estrategia de mapeo por asociación para la resistencia a la Podredumbre Húmeda del Capítulo (PHC), causada por Sclerotinia sclerotiorum. La frecuencia de SNPs (1/61) y la diversidad nucleotídica (θ=0,0067) se determinaron sobre un panel de 31 genes y 19 líneas endocriadas de girasol. La frecuencia de SNPs en conjunto con un alcance del DL hasta 100 kb (r2~0,1) permitieron diseñar un estudio de asociación a través de la estrategia de genotipificación de genes candidatos. Un total de 30 genes candidatos fueron seleccionados a partir de: (1) el análisis de los perfiles transcripcionales de un genotipo de Brassica napus resistente a S. sclerotiorum, (2) una colección de transcriptos de expresión diferencial de una línea de girasol moderadamente resistente desafiada con S. sclerotiorum y (3) genes descriptos en literatura como partícipes en los procesos de defensa frente a PHC. La elección, caracterización y genotipificación de genes candidatos implicó la generación de herramientas para la selección de los mismos y la optimización de técnicas de genotipificación de SNPs a gran escala. La detección de moléculas heterodúplex mediante: (1) corte con la enzima endonucleasa CEL1 (CEL1CH) y (2) cromatografía líquida de alto rendimiento en condiciones de desnaturalización parcial (dHPLC), demostraron ser técnicas robustas y versátiles para aumentar el número de loci e individuos a incluir en los estudios de mapeo por asociación. Un total de 16 genes se genotipificaron exitosamente en la población de mapeo por asociación constituida por 134 accesos del Banco Activo de Girasol de la Estación Experimental Agropecuaria (EEA) INTA Manfredi. El análisis estadístico de asociación incluyó el uso de modelos lineales mixtos que corrigieron los problemas de estructuración y las relaciones de parentesco entre los individuos de la población de mapeo. Un alelo del gen RhoBP_B exhibió una asociación estadísticamente significativa con una menor incidencia de PHC (pp<0,05). Los resultados obtenidos demuestran que es posible encontrar alelos útiles implicados en caracteres complejos a través de los estudios de mapeo por asociación en girasol.

Abstract:
Association mapping is a powerful tool to identify gene loci that may contribute to phenotypic variation. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (indels) have become the markers of choice to conduct these studies. The aims of this thesis were to study nucleotide diversity and the extent of linkage disequilibrium (LD) in cultivated sunflower to conduct association mapping for the resistance to Sclerotinia Head Rot disease. SNP frequency and nucleotide diversity were assessed using a set of 31 genes and 19 sunflower inbred lines (1SNP/61 pb, θ=0.0067). The relatively high frequency of SNPs found here, along with the predicted extent of LD over distances of 100 kb (r2~0.1) allowed the development of an association mapping strategy through candidate gene approach. A total of 30 genes were selected based on: (1) a microarray analysis from Brassica napus genotypes resistant to S. sclerotiorum, (2) differentially expressed genes from cDNA libraries from sunflower infected tissues; (3) previous literature reports. Different methods of candidate gene selection and optimization of SNP genotyping technologies for scale-up throughput were explored. CEL1 cleavage of heteroduplex (CEL1CH) and denaturing high performance liquid chromatography (dHPLC) proved to be robust and versatile techniques to increase the amount of loci and individuals to be included in the association panel. Sixteen genes were successfully genotyped in the association population composed by 134 inbred lines from INTA Manfredi Sunflower Germplasm Bank. Mixed linear models accounting for population structure and kinship relatedness were used for the statistical analysis of associations. One candidate gene, RhoBP_B, had significant results from association analysis, indicating that it might affect the quantitave variation in sunflower resistance to Sclerotinia Head Rot disease. These results demonstrate the potential of candidate gene association mapping for complex trait dissection in sunflower.

Fraguío, María Sol. "Estudio fluidodinámico de reactores multifásicos mediante técnicas de análisis no-invasivas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo presenta un estudio sobre algunos aspectos de la fluidodinámica de sistemas multifásicos utilizando técnicas que no perturban el movimiento de los fluidos y/o el sólido presentes. El objetivo es caracterizar y/o monitorear la fluidodinámica en sistemas de interés industrial, particularmente, columnas de burbujeo bifásicas y lechos fluidizados trifásicos. Para el estudio de los sistemas multifásicos involucrados en este trabajo se midieron y analizaron series temporales provenientes de experimentos de densitometría, de tomografía de emisión de partículas únicas, generalmente llamada ”Radioactive Particle Tracking” (RPT), y de fluctuaciones de presión. Se utilizaron técnicas estadísticas básicas y un test estadístico que permite tener en cuenta las características caóticas de los sistemas para determinar transiciones de régimen de flujo y/o monitorear un cambio brusco en la fluidodinámica del sistema. El análisis de las diversas series temporales registradas permitió proponer procedimientos de identificación de transiciones del régimen de flujo subyacente, habiéndose obtenido concordancia entre las predicciones que surgen del análisis de series temporales de distintas variables características. Asimismo, el análisis de series temporales durante una perturbación indica que es posible diagnosticar el inicio de la misma con un procedimiento similar al empleado para identificar transiciones de flujo. Por otra parte, además de haber implementado por primera vez la técnica de RPT en Argentina, se estudiaron exhaustivamente distintos aspectos de la misma y se exploró la posibilidad de utilizarla para obtener información en sistemas donde estén ocurriendo cambios en la fluidodinámica debido a una perturbación. Se cuantificaron por primera vez los errores en las determinaciones de posiciones y velocidades ”instantáneas” y se encontró que, para una columna de burbujeo con el sistema agua – aire, es posible utilizar una calibración realizada con la columna llena de líquido y sin circulación de gas para reconstruir las posiciones del trazador cuando la columna opera tanto en régimen homogéneo como heterogéneo.

Abstract:
This work presents a study of some fluid dynamic features in multiphase systems using techniques that do not disturb the behavior of the fluids or solids, in order to characterize or monitor the fluid dynamic in usual industrial systems, such as bubble columns and three phase fluidized beds. For the study of the multiphase systems involved in this work, time series from experiments of densitometry, single particle emission tomography, commonly known as Radioactive Particle Tracking (RPT), and pressure fluctuations were measured and analized. Diferent basic statistic techniques and a statistical test that allows taking into account the chaotic behavior of the multiphase systems were used to classify flow regime transitions and monitor a change in the system fluid dynamics. Analysis of different characteristic variables time series allowed suggesting procedures for flow regime transition identification. Good agreement was found between the predictions arising from the application of the statistic test to the different time series. Likewise, a perturbation could be sucessfully diagnosed from a similar time series analysis. Besides implementing the RPT technique for the first time in Argentina, different aspects of the technique were further investigated. Moreover, application of the technique to obtain information from systems where hydrodynamic changes due to a perturbation are taking place was explored. Errors in the positions and instantaneous velocities determinations were quantified for the first time. For an air-water bubble column, it was found that the use of a calibration carried out in a different hydrodynamic condition does not increase the inherent error of the technique. Hence, doing the calibration in the column with liquid and no gas circulation allows reconstructing the tracer positions measured when the column is operated in the homogeneous and heterogeneous flow regimes.

Fongi, Guillermina. "Estructura métrica y diferencial del conjunto de operadores autoadjuntos en un espacio de Hilbert" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo estudiamos aspectos métricos y geométricos del conjunto de operadores autoadjuntos en un espacio de Hilbert H. Extendemos la relación de equivalencia definida por A. C. Thompson en un cono convexo de un espacio de Banach, al conjunto de operadores autoadjuntos. Definimos una métrica completa en cada clase de equivalencia o componente de Thompson, que resulta compatible con la estructura diferencial de la componente. Estudiamos además la órbita de congruencia de un operador autoadjunto a. Describimos la órbita de a en términos de su descomposición polar y de su descomposición positiva ortogonal. Si a es de rango cerrado, dotamos a la órbita de a de una estructura de variedad diferencial. Finalmente, estudiamos descomposiciones de operadores autoadjuntos como diferencia de dos operadores positivos de manera que el ángulo mínimo entre sus rangos sea positivo, que llamamos descomposiciones positivas. Mostramos que las descomposiciones positivas de un operador autoadjunto a están relacionadas con las descomposiciones canónicas del espacio (H, menor , mayor a), donde menor , mayor a es una métrica indefinida asociada al operador a. Como aplicación, caracterizamos la órbita de congruencia de a en términos de sus descomposiciones positivas.

Abstract:
In this thesis, we study metrical and geometrical aspects of the set of selfadjoint operators on a Hilbert space H. We extend the equivalence relation, defined by A.C. Thompson on a closed convex cone of a Banach space, to the set of selfadjoint operators. We define a complete metric on each equivalence class or Thompson component, compatible with the differential structure of the component. We also study the orbit of congruence of a selfajoint operator a. We describe the orbit of a in terms of its polar decomposition and its positive ortogonal decomposition. If a is a closed range operator, we provide the orbit of a with a structure of differential manifold. Finally, we study decompositions of selfadjoint operators as a difference of two positive operators such that the minimal angle of their ranges is positive, called positive decompositions. We show that the positive decompositions of a selfadjoint operator a are related to the canonical decompositions of the space (H, menor , mayor a), where menor , mayor a is an indefinite metric associated to a. As an application, we characterize the orbit of congruence of a in terms of its positive decompositions.

Foieri, Federico. "Transporte cuántico en sistemas mesoscópicos con campos dependientes del tiempo y desorden" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis se estudian distintos aspectos del transporte electrónico en sistemas mesoscópicos desordenados y fuera del equilibrio. En estos sistemas las propiedades de transporte se ven afectadas por el tamaño de los mismos, su geometría particular y el tipo de contacto que ésta tenga con los reservorios de partículas (electrodos), número de impurezas, etc. En el capítulo 1 presentamos la definición precisa del concepto de sistema mesoscópico, las técnicas de fabricación y las magnitudes físicas relevantes al estudio de los mismos. También describimos cada una de las estructuras particulares estudiadas a lo largo de esta tesis. El método de cálculo utilizado se basa en el formalismo de Keldysh de funciones de Green fuera del equilibrio y es desarrollado en el capítulo 2. En el capítulo 3 estudiamos las propiedades de transporte electrónico en sistemas estrictamente unidimensionales y cuasi-unidimensionales con impurezas en el régimen de respuesta lineal a temperatura (T ) y voltaje (V ) finitos. En particular estudiamos las distribuciones de conductancia de cables cuánticos unidimensionales cuando éstos son conectados a dos reservorios en los que se establece una diferencia de potencial. Presentamos distintas alternativas para aproximar dichas distribuciones dependiendo del rango de V y T . A bajas T y V presentamos un modelo de tunneling resonante mientras que para T y V altos se presenta un método estadístico basado en convolu- cionar la distribución de T nula y V infinitesimal un número finito de veces. Estos métodos luego son aplicados aún en casos en los que los contactos entre el cable y los reservorios son imperfectos y para sistemas con varios canales de conducción. En el capítulo 4 se estudia el transporte electrónico en anillos mesoscópicos en presencia de flujos magnéticos variables en el tiempo y acoplados a un reservorio, analizando la influencia del desorden sobre las corrientes inducidas a través del mismo. Entre los resultados más relevantes hemos encontrado que los valores de conductancia pueden ser mayores que el cuanto de conductancia siendo estos sistemas estrictamente unidimensionales. Por otro lado, hemos determinado una longitud de localización efectiva, a partir de la cual ambos sistemas (tanto el anillo como el cable 1D) son equivalentes, es decir, poseen la misma distribución de conductancias (caracterizadas en capítulo 3). Por último, en el capítulo 5 estudiamos sistemas mesoscópicos en presencia de campos oscilantes en el tiempo, donde el transporte se genera mediante la aplicación de bombeos cuánticos (quantum pumps), que permiten inyectar partículas en forma variable con el tiempo en algún punto del sistema. Hemos estudiado la impedancia a cuatro terminales del sistema y las diferentes formas en las que se pueden caracteri- zar los efectos resistivos de un sistema mesoscópico. Esto se realizó incorporando una punta de voltaje débilmente acoplada al sistema que actúa como voltímetro. Además, se han obtenido expresiones analíticas para la resistencia a cuatro terminales uti- lizando teoría de perturbaciones, y también mostramos que esta resistencia puede ser considerada una característica universal del sistema, es decir, es independiente de la forma en que se induce el transporte. En cada capítulo se brinda una introducción en la que procuramos enfatizar la motivación del trabajo y describimos la situación actual, ya sea teórica o experimen- tal, de dicho problema. Luego se introduce el modelo Hamiltoniano, se presentan los cálculos realizados y se discuten los mismos. Finalmente se exponen las conclusiones.

Abstract:
In this thesis we study different aspects of electronic transport in disordered mesoscopic systems out of equilibrium. In these systems, the transport properties depend strongly on the size and geometry of the structure, the coupling with additional sys- tems (particle reservoirs), impurities, etc. In chapter 1 we describe extensively the mesoscopic systems, describing the fab- rication methods and the physical quantities relevant to quantum transport. We also describe every structure studied along this thesis. To perform calculations we em- ployed the Keldysh non equilibrium Green functions formalism which is described in chapter 2. Each chapter is organized as follows: we first give a brief introduction in which the motivation of our work is emphasized and then we describe the theoretical and experimental situation that motivates each work. Then we introduce the physical model in order to present the calculations and discuss the results. Finally, we end each chapter listing the summary and conclusions. We start studying the properties of electronic transport in strictly one-dimensional systems, in the linear response regime, for clean and disordered systems. In chapter 3 we studied the conductance distributions of one-dimensional quantum wires when transport is induced by connecting the sample to two stationary reservoirs with dif- ferent chemical potentials. Depending on the bias voltage V and the temperature T , we present different methods to fit the conductance distributions of these systems. At low T and V we present a resonant tunneling model while for high T and V we present a statistical method which consists in convoluting the conductance distribu- tion for zero temperature and infinitesimal bias. This method is applied even when the contacts between the wire and the reservoirs are imperfect and for systems with more than one conduction channel. In chapter 4, we study electronic transport in mesoscopic disordered rings coupled to a reservoir and driven by a magnetic flux with a linear dependence on time. We have identified two regimes: (i) A localized regime, characterized by a dc conductance whose probability distribution is identical to the one exhibited by a 1D wire of the same length L and disorder strength placed in a two terminal Landauer setup and (ii) a multifloquet regime which exhibits large conductances that can be greater than the quantum of conductance, in spite of the fact that the ring contains a single electronic transmission channel. In chapter 5 we study mesoscopic systems where transport is generated applying quantum pumping. We introduce and study the concept of four point impedance of a mesoscopic system and the different ways to characterize the resistive effects in these systems. This is achieved by adding a voltage probe which act as a voltimeter which is weakly coupled to the system. Moreover, we obtained analytical expressions for the four point resistance using perturbation theory and we show that the four point resistance can be taken as a measure of the resistive properties of a sample, irrespectively, of the mechanism used to induce the transport.

Fiorini, Franco Luis. "Esquemas regulares para la gravitación con estructura teleparalela" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Ferrer, María Florencia. "Construcción y evaluación de virus MVA recombinantes que expresan la glicoproteína D del virus BoHV-1" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus vaccinia Ankara modificado (MVA) es un virus altamente atenuado que se utiliza eficientemente como vector viral no replicativo para el desarrollo de nuevas vacunas. En este trabajo de Tesis se desarrolló un nuevo inmunógeno basado en MVA que expresa como antígeno de interés la glicoproteína D (versión secretada, gDs) del virus herpes bovino tipo I (BoHV-1), un agente infeccioso ampliamente distribuido en Argentina. Primeramente, se diseñó y construyó el vector de transferencia para obtener MVA recombinantes utilizando como sitio blanco de inserción el gen no esencial MVA086R. Se obtuvieron virus MVA-gDs recombinantes y se demostró la correcta expresión, antigenicidad y N-glicosilación de la glicoproteína D expresada a partir de dichos virus. Posteriormente, se evaluó la capacidad inmunogénica de los virus MVA-gDs en animales de experimentación (ratones y conejos). En el modelo de ratón, se observó que los virus MVA-gDs desencadenaron una respuesta inmune específica, de tipo humoral, que se mantuvo en niveles similares durante un período de siete meses (luego de la aplicación de dos dosis del inmunógeno). Además, se demostró que la síntesis de novo de la glicoproteína D a partir del vector viral no replicativo MVA-gDs fue la responsable de la respuesta inmune específica. La inoculación de conejos con virus MVA-gDs (por vía intramuscular o subcutánea) desencadenó una respuesta inmune específica de tipo humoral, observándose la máxima respuesta a los 9 días post dosis de refuerzo. En un ensayo de desafío de conejos con el virus BoHV-1, se observó que la inmunización por vía intramuscular de los animales con virus MVA-gDs disminuyó la excreción del virus de desafío. Finalmente, se demostró que la inmunización de ratones por vía intranasal con virus MVA-gDs adicionados con toxina colérica indujo respuestas inmunes humorales específicas de tipo IgA en muestras de lavados nasales y broncopulmonares y de tipo IgG en muestras de suero. De esta forma, se obtuvo, caracterizó y evaluó un nuevo inmunógeno denominado MVA- gDs que, en el futuro, podría ser evaluado como candidato a vacuna contra el virus BoHV-1 en bovinos.

Abstract:
Modified vaccinia virus Ankara (MVA) is a highly attenuated virus. During the past years, non-replicative recombinant MVA vectors have gained major interest in the development of new veterinary vaccines. Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) infection is widely distributed in Argentina and there are no efficacious vaccines to prevent the diseases caused by this virus. In order to develop a candidate vaccine for BoHV-1, the secreted version of glycoprotein D (gDs) was selected as the antigen to be expressed in new recombinant MVA non-replicative based vectors. First, the design and construction of the transference vector necessary to obtain recombinant MVA viruses was achieved using the non-essential gene MVA086R. Recombinant MVA-gDs virus was obtained and molecularly characterized, confirming the correct expression, antigenicity and N-glycosilation of glycoprotein D. Then, immunogenicity of recombinant MVA-gDs viruses was assessed in experimental animals (mice and rabbits). Mice immunized with MVA-gDs viruses developed a specific humoral immune response that was maintained for seven months and was dependent on the booster dose. In addition, mice immunized with MVA-gDs virus demonstrated that MVA-gDs non-replicative viral vector was responsible for the de novo synthesis of glycoprotein D and, consequently, for the immune response induced in animals immunized with not inactivated MVA-gDs virus. Intramuscular and subcutaneous rabbit inoculation with MVA-gDs virus was immunogenic and induced a specific humoral immune response. In a rabbit BoHV-1 challenge assay, diminished viral excretion was observed in those animals intramuscularly immunized with recombinant MVA-gDs. Finally, in order to evaluate MVA-gDs virus as a mucosal vaccine, two doses of MVA-gDs supplemented with cholera toxin were delivered by intranasal immunization of mice. These immunizations induced anti-gD IgA humoral immune responses in nasal and bronchopulmonar lavages as well as anti-gD IgG antibodies in serum samples. In conclusion, the new immunogen designated MVA-gDs was developed, characterized and evaluated in experimental animals. In the future, it could be evaluated in cattle as a candidate bovine vaccine for BoHV-1.

Fernández Slezak, Diego. "Estimación de parámetros en modelos biológicos complejos. Aplicación a modelos de crecimiento tumoral" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las ciencias de la vida comprenden todos los campos de la ciencia que estudian organismos vivos y procesos biológicos. Tradicionalmente, la biología y la medicina han sido los campos centrales de las ciencias de la vida. Los avances tecnológicos en biología molecular y biotecnología trajeron consigo un crecimiento sin precedentes de campos interdisciplinarios, tales como la bioinformática, biología computacional, biología de sistemas, y neuroinformática por nombrar algunas. En particular, el estudio computacional del cáncer y terapias asociadas se ha transformado en una rama muy importante dentro de la biología computacional. Resultados provenientes de la biología ́de sistemas están siendo utilizados para todo tipo de investigación que comprenden tanto descubrimientos biológicos como avances para el diagnósticoy la medicina clínica. En muchas aplicaciones, los datos provenientes de estudios clínicos, biológicos o moleculares son condensados en modelos matemáticos con cierto poder predictivo. No es infrecuente que estos modelos incluyan gran cantidad de parámetros libres cuyos valores deben ser estimados para obtener un completa determinación del modelo. El proceso de determinación de parámetros presenta un gran desafío en el desarrollo de modelos matemáticos o computacionales de procesos biológicos. En consecuencia, un paso necesario para la utilización efectiva de modelos en la predicción de fenómenos biológicos es la estimación de parámetros libres. El ajuste de parámetros es un área muy estudiada en ciencia, tecnología, economía estadística, y otras disciplinas, por lo cual existen muchos enfoques para resolverlo. En la mayoría de estos enfoques, uno de los desafíos más difíciles de confrontar es la enorme demanda de poder de cómputo requerida tanto en la resolución delmodelo como en el proceso de estimación de parámetros. Dado que la simulación numérica cuenta entre las aplicaciones más fértiles de la Ciencia de la Computación, no debe resultar extraño que un número considerable de estudiosos de la computación científica se hayan volcado al campo de simulación numérica de procesos biológicos. Con el crecimiento exponencial en la potencia computacional de los sistemas modernos, se han ampliado los desarrollos y resolución de sistemas cada vez más grandes y complejos que han permitido atacar el modelado de sistemas biológicos de alta complejidad. En esta tesis nos proponemos estudiar el problema de estimación de parámetros y evaluación de las soluciones encontradas en el modelado de crecimiento tumoral en etapa avascular, utilizando computación de alto rendimiento. Para ello, hemos extendido un modelo de crecimiento de esferoides multicelulares, modelo que abar ca una gran variedad de casos experimentales. Para la evaluación de este modelo de ecuaciones diferenciales en derivadas parciales con condiciones de borde dependientes del tiempo, se desarrollá una solución numérica utilizando el todo de diferencias finitas. Este modelo resultó tener una considerable versatilidad en las soluciones encontradas, mostrando un rango muy amplio de comportamientos que permiten la explicación de una amplia gama de posibles experimentos. A partir de datos experimentales y sintéticos hemos ajustado los parámetros del modelo mediante técnicas de optimización no lineal, utilizando una función decosto de cuadrados mínimos. Mediante el uso de computación de alto rendimiento con miles de procesadores disponibles, exploramos el espacio de parámetros del problema analizado, evaluando dicha función de costo a partir de distintos puntos iniciales y con distintos algoritmos de optimización. De esta forma, se realizó un barrido exhaustivo del espacio de parámetros, lo que nos permitió encontrar una multiplicidad de mínimos locales en el ajuste de parámetros, como así también lo que a todas luces parece ser el mínimo global de la función de costo. El resultado sorprendente de esta búsqueda exhaustiva es que el valor de los parámetros en el tan buscado mínimo global corresponde a valores de parámetros que carecen de sentido desde un punto de vista biológico. Esta tesis muestra un ejemplo en el cual los parámetros del modelo que optimizan el ajuste a los datos experimentales no son necesariamente los mejores en términos biológicos, un fenómeno que es similar al problema de sobreajuste, conocido en el ámbito de aprendizaje estadístico. De esta manera, ponemos de manifiesto la necesidad de una doble verificación de los parámetros encontrados para identificar posibles soluciones fuera del rango realista en términos biológicos dado la complejidad del espacio de par ́metros. Para evitar dicho sobreajuste del modelo a los datos, proponemos la utilización de parámetros sub-óptimos que, no obstante, son explicativos de comportamientos biológicos no tomados en cuenta en el ajuste, pero que podrán ser utilizados para restringir la enorme cantidad de soluciones sub-óptimas encontradas. De esta forma llegamos a una solución de compromiso entre la función de costo óptima y valores biológicamente realistas. Concluimos que la mejor estrategia para el ajuste de un modelo a un experimento dado es el diseño simultáneo del modelo y los experimentos acordes. Algunos experimentos pueden permitir la determinación de parámetros mejor que otros, por lo que una estrategia posible para el ajuste será la generación de experimentos independientes que permitan contrastar y acotar los valores de los distintos parámetros, especialmente de aquellos que la optimización no ha podido ajustar convincentemente. En la ausencia de un modelo basado en primeros principios, la estimación de parámetros no puede simplemente confiar en la optimización de una función de costo. Proponemos que el enfoque presentado en esta tesis deber ser un procedimiento estándar a la hora de ajustar los parámetros de modelos biológicos complejos, y presentamos una formalización del procedimiento como generalización de la estrategia.

Abstract:
Computational Life Sciences include all areas of science that study biology processes and living organisms. Computational Life Sciences is helping to provide a fundamental understanding of complex biological systems and offers the potential to significantly impact a wide variety of technologies, including drug discovery, novel therapies for human, animal and plant diseases,metabolic engineering and efficient production of traditional and high-value foodstuffs. In particular, the computational study of cancer and associated therapies has become in a very proliferative and important section of com- putational biology. The vast computational resources that became available during the past decade enabled the development and simulation of increasingly complex math- ematical models of cancer growth. These models typically involve many free parameters whose determination is a substantial obstacle to model develop- ment. Direct measurement of biochemical parameters in vivo is often difficult and sometimes impracticable, while fitting them under data-poor conditions may result in biologically implausible values. In this thesis, we extended a model of avascular tumor growth covering a great amount of experimental cases. We discuss different methodological approaches to estimate parameters in complex biological models. We make use of the high computational power of the Blue Gene technology to perform an extensive study of the parameter space in a model of avascular tumor growth. We explicitly show that the landscape of the cost function used to optimize the model to the data has a very rugged surface in parameter space. This cost function has many local minima with unrealistic solutions, including the global minimum corresponding to the best fit. The case studied in this thesis shows one example in which model parameters that optimally fit the data are not necessarily the best ones from a biological point of view. To avoid force-fitting a model to a dataset, we propose that the best model parameters should be found by choosing, among suboptimal parameters, those that match criteria other than the ones used to fit the model. We also conclude that the model, data and optimization approach form a new complex system, and point to the need of a theory that addresses this problem more generally.

Federman, María Noel. "Estudio comparado del papel de la epigenética en distintas fases de la memoria de largo término" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La consolidación de las memorias de largo término (MLT) necesita de la síntesis de novo de ARNm y proteínas. Trabajos recientes proponen la existencia de una nueva fase de consolidación en memorias estables y consolidadas, denominada reconsolidación. Esta nueva fase tiene lugar luego de la reactivación de la MLT inducida por la evocación de la MLT. La reconsolidación de la MLT también depende de eventos transcripcionales y traduccionales. La transcripción génica es controlada por factores de transcripción, cofactores y correpresores. Los cofactores y correpresores regulan la expresión génica mediante su interacción directa con la maquinaria de transcripción basal, remodelando la estructura de la cromatina y/o modificando químicamente las histonas. Una de las modificaciones post-traduccionales de histonas más estudiada es la acetilación. Este proceso es regulado por acetilasas (KATs) y desacetilasas de histonas (KDACs). En este trabajo de tesis se presentan evidencias acerca del papel fundamental que cumple la acetilación de histonas durante la consolidación y reconsolidación de la memoria contexto-señal en el cangrejo Chasmagnathus granulatus, así como también durante la consolidación de la memoria de reconocimiento de objeto novedoso en el ratón Mus musculus. En el cerebro central de Chasmagnathus se observó un aumento en los niveles de acetilación de histona H3 durante la consolidación, 1 hora luego de un entrenamiento fuerte. Asimismo, se observó un incremento similar en la acetilación de la histona H3 durante la reconsolidación, 1 hora después de la reactivación de la memoria. En este modelo, el bloqueo farmacológico de la acción de las KDACs mediante la administración del inhibidor butirato de sodio (NaB), durante la consolidación de una memoria débil, induce la facilitación de esta memoria. No se encontró un efecto facilitador de la memoria mediante la administración de esta droga durante la reconsolidación. Por otro lado, en el hipocampo de Mus musculus, se observó un aumento en los niveles de acetilación de histona H3 durante la consolidación, 1 hora luego de un entrenamiento fuerte, no así luego de entrenamientos de menor magnitud. Además, la memoria fue mejorada mediante la administración intra-hipocampal del inhibidor de KDACs NaB. En conjunto, estos datos sostienen que la acetilación de histonas es un mecanismo fundamental en la consolidación y reconsolidación de la MLT. Este proceso epigenético funcionaría como una característica molecular de memorias fuertes. Este mecanismo molecular regulador de la expresión génica durante la formación de la memoria se encuentra evolutivamente conservado.

Abstract:
Consolidation of long-term memories (MLT) requires de novo synthesis of mRNA and protein. Recent studies suggest the existence of a new consolidationlike phase of stable and already consolidated memories, which is called reconsolidation. This phase occurs by the reactivation of the MLT, induced by memory retrieval. Reconsolidation also depends on transcriptional and translational events. Transcriptional activation is controlled by transcription factors, their cofactors and repressors. Cofactors and repressors can regulate gene expression by interacting with basal transcription machinery, remodeling chromatin structure and/or chemically modifying histones. The acetylation is the most studied modification of histones related to gene expression regulation. This process is regulated by histone acetylases (KATs) and histone deacetylases (KDACs). This thesis presents evidences about the critical role of histone acetylation during consolidation and reconsolidation of context-signal memory in the crab Chasmagnathus granulatus, as well as during consolidation of novel object recognition memory in the mouse Mus musculus. In Chasmagnathus, it is shown an increase in the acetylation level of histone H3 in the central brain during consolidation, 1 hour after a strong training protocol. Moreover, that increased acetylation of histone H3 was also observed during reconsolidation, 1 hour after memory reactivation. In this invertebrate model, pharmacological blockade of the action of KDACs by administration of the inhibitor sodium butyrate during the consolidation of a weak memory, induces memory facilitation. We found no memory enhancement effect by administering the drug during reconsolidation. Moreover, in the hippocampus of Mus musculus, there was an increase in the histone H3 acetylation level during consolidation, 1 hour after a strong training. This change is not observed after weaker training protocols. Furthermore, memory was improved by intra-hippocampal administration of KDACs inhibitor sodium butyrate. Together, these data argue that acetylation of histones is a key mechanism in the consolidation and reconsolidation of the MLT. This epigenetic process functions as a molecular feature of stronger memories. This mechanism regulating gene expression during memory formation is evolutionarily conserved.

Escolar, Mariana. "Variaciones espacio-temporales en la comunidad de invertebrados bentónicos asociada al frente de talud. Equinodermos como caso de estudio" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta Tesis se presentaron las variaciones espacio-temporales, durante el período 2002-2005, en la comunidad de invertebrados bentónicos dominada por Zygochlamys patagonica (Mollusca: Bivalvia: Pectinidae) asociada al frente de talud y sujeta a explotación pesquera. El phylum Echinodermata fue uno de los grupos más diversos y dominante dentro de la captura incidental de la pesquería en toda el área y periodo estudiado. Se estudió también la distribución espacial, biomasa y estructura de tallas de Ctenodiscus australis (Asteroidea), Sterechinus agassizi y Pseudechinus magellanicus (Echinoidea), y Ophiactis asperula, Ophiacantha vivipara y Ophiura lymani (Ophiuroidea), especies de equinodermos estrechamente relacionadas con la vieira patagónica y con una importante contribución en la comunidad. Las seis estudiadas presentaron un patrón de distribución latitudinal. Las especies de erizos y ofiuras presentaron además una evidente separación espacial con respecto a la profundidad. La biomasa de P. magellanicus y O. vivipara disminuyó durante el período 2002-2005 en toda el área estudiada. A su vez se comparó la biomasa y abundancia de las especies en áreas con y sin pesca comercial. Si bien las especies detritívoras y/u omnívoras se vieron beneficiadas por el aumento en la disponibilidad de alimento debido al descarte de la pesquería, las especies de mayor tamaño resultaron vulnerables al impacto. Esta tesis presentó los primeros estudios a nivel poblacional de invertebrados bentónicos colectados como parte conspicua de la fauna acompañante de una pesquería de arrastre, en este caso equinodermos, ampliando la información sobre la ecología de este grupo en áreas de la plataforma continental asociadas al frente de talud.

Abstract:
This thesis showed spatial and temporal variations, during the period 2002-2005, of the benthic invertebrates assemblage dominated by Zygochlamys patagonica (Mollusca: Bivalvia: Pectinidae) in shelf-break frontal areas subjected to commercial fishery. The phylum Echinodermata was one of the most diverse and dominant as part of the by-catch in the whole study area and period. The distribution, biomass and size structure of Ctenodiscus australis (Asteroidea), Sterechinus agassizi and Pseudechinus magellanicus (Echinoidea), and Ophiactis asperula, Ophiacantha vivipara and Ophiura lymani (Ophiuroidea) are studied, being these echinoderm species closely related with the Patagonian scallop assemblage. They showed a latitudinal distribution pattern. The sea urchins and ophiuroids also showed a spatial separation according to depth. The P. magellanicus and O. vivipara biomass decreased in the study area during the period 2002-2005. Biomass and abundance of echinoderms are also studied in relation with areas with and without commercial fishing. Although detritivores and/or omnivores were benefited by an increase in food availability due to fishery discards, the largest species resulted vulnerable to impact. This thesis showed the first populational studies of benthic invertebrates collected as conspicuous components of the by-catch in a trawling fishery, echinoderms in this case, and gives novel information about the ecology of the group in continental shelf areas associated to the shelf-break front.

Elhalem, Eleonora. "Diseño y síntesis de nucleósidos carbocíclicos conformacionalmente restringidos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los nucleósidos carbocíclicos son análogos de nucleósidos en los que el átomo de oxígeno del anillo furanósico está reemplazado por un grupo metileno. La ausencia de una verdadera unión glicosídica le otorga mayor estabilidad metabólica pues no son afectados por fosforilasas e hidrolasas que sí atacan a los nucleósidos convencionales. Las enzimas responsables de distintas acciones farmacológicas de los nucleósidos convencionales también reconocen los análogos carbocíclicos correspondientes, obteniéndose un amplio rango de propiedades biológicas, especialmente como agentes antivirales y antitumorales. La conformación en este tipo de drogas cumple un rol fundamental en la actividad biológica; sin embargo, los carbanucleósidos presentan una conformación distinta a la de los nucleósidos convencionales en solución, por lo que son menos efectivos. N-metano-carba-timidina (50), un carbanucleósido sintético rígido en la conformación Norte y estructuralmente relacionado al nucleósido carbocíclico natural neplanocina C (48), construido en un sistema bicíclicohexano, exhibió una potentísima acción antiherpética, incluso mayor que aciclovir. Por este motivo, se llevaron a cabo estudios sintéticos para optimizar su estructura química. En los dos primeros capítulos de esta tesis se describen los antecedentes de nucleósidos, sus análogos carbocíclicos y aquellos que presentan restricciones conformacionales. También se incluye un resumen de los métodos de síntesis más comunes para la preparación de carbanucleósidos y la síntesis y actividad biológica de los compuestos más relevantes de esta familia de análogos. En el tercer capítulo se extendió el estudio de la monoprotección regioselectiva de glicoles por tratamiento con DIBAL-H y ortoformiato de metilo catalizado por nitrato cérico amónico. Este estudio surgió de la necesidad de proteger regioselectivamente un hidroxilo alílico secundario frente a uno homoalílico, durante la síntesis enantioselectiva de (+)-neplanocina F (183), realizada en nuestro laboratorio. En los capítulos cuatro y cinco se presenta la primera síntesis de nucleósidos carbocíclicos conformacionalmente restringidos en una conformación de tipo Norte, construidos en un sistema tiabiciclohexano. Para dicho estudio se desarrollaron nuevos métodos para la preparación de episulfuros fusionados a anillos de cinco miembros sintetizándose primero modelos simples de carbanucleósidos construidos sobre este sistema azufrado. N-tia-carba-timidina (273) se comportó como un agente antiherpético muy potente, comparable a aciclovir.

Abstract:
Carbocyclic nucleosides are nucleosides analogues in which the oxygen atom of the furanose ring is substituted by a methylene group. These analogues have great metabolic stability because they are unaffected by phosphorylases and hydrolases that cleave the glycosidic bond of conventional nucleosides. The responsible enzymes for pharmacological actions of conventional nucleosides also recognize the carba-analogues displaying a wide range of biological properties, especially as antiviral and antitumoral agents. The conformation of this type of drugs plays an important role in the biological activity. In solution, carbanucleosides present a different conformation than for conventional nucleosides, for that reason they are less effective in molecular recognition processes. N-methano-carba-thymidine (50), a carbocyclic nucleoside locked in the North conformation and structurally related to the natural carbanucleoside neplanocin C (48), built on a bicyclohexane system, exhibited potent antiherpetic activity, even greater than acyclovir, a well-known antiherpetic agent. Synthetic studies motivated to optimize the chemical structure of 50 were performed. Chapters one and two provide an introduction to nucleosides, carbocyclic nucleosides and those with conformational restrictions. A summary of the most common synthetic methods to prepare carbanucleosides and the synthesis and biological activity of representative members of this family of compounds are included. Chapter three describes the study of the scope about the regioselective monoprotection of glycols by treatment with DIBAL and methyl orthoformate catalyzed by ceric ammonium nitrate. This study emerged as a consequence of the need of protecting regioselectively a secondary allylic hydroxyl group over a homoallylic in the course of the enantioselective synthesis of (+)-neplanocin F (183), developed in our laboratory. Chapter four and five present the first synthesis of conformationally locked carbocyclic nucleosides built on a thiabicyclohexane system, in a Northern-type geometry. For this purpose, new methods for the preparation of an episulfide group fused to a five-member ring were developed. At the beginning, simple models of carbanucleosides built on this sulfur-containing system were prepared. N-thia-carba-thymidine (273) behaved as a very potent antiherpetic agent showing potency comparable to acyclovir.

Edelsztein, Valeria Carolina. "Síntesis orientada al diseño de organogelificantes esteroidales de bajo peso molecular" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo de tesis describe la síntesis de nuevos organogelificantes esteroidales de bajo peso molecular y el estudio de las propiedades micro y macroscópicas de sus geles con el fin de lograr una mejor comprensión del proceso de autoensamblado molecular. En primer lugar se sintetizó el nuevo organogelificante 3ß-t-butildimetilsililoxi-20ß- acetiloxi-5α-hidroxi-6ß,19-epoxipregnano mediante una reacción fotoquímica y se caracterizaron sus geles con distintos solventes orgánicos por técnicas espectroscópicas, rayos X, modelado molecular y microscopía. Este organogelificante, además, resultó capaz de gelificar tetraetil ortosilicato (TEOS) y transcribir, en condiciones de coensamblado in situ, su estructura fibrilar a la sílica dando lugar a la formación de nanotubos de dióxido de silicio. Con el fin de analizar la influencia de una estructura preorganizada en las propiedades gelantes de este tipo de esteroides, se encaró la síntesis de análogos diméricos. Se desarrolló entonces una metodología para la obtención de dímeros unidos mediante enlaces C-C, por reacción de metátesis en microondas con catalizadores de Grubbs de segunda generación. Para ello, fue necesario desarrollar y optimizar una metodología para la obtención de olefinas terminales mediante reacciones de Wittig libres de sales sobre distintos sustratos y estudiar la reacción de metátesis en distintas posiciones del núcleo esteroidal. Por otra parte, se prepararon análogos funcionales (por reemplazo de los grupos 3ß-t-butildimetilsililoxi y/o 20ß-acetoxi por otras funcionalidades) y diméricos (con enlaces éster) con el fin de analizar la relación estructura-propiedad gelante. Se determinó qué funcionalidades eran indispensables en la formación del gel y se analizó la influencia de la variación del tamaño y la polaridad de los sustituyentes. Se encontró que uno de los análogos, el 3ß-dimetilalilsililoxi-5α-hidroxi-20ß- acetoxi-6ß,19-epoxipregnano, también era capaz de formar geles termorreversibles en hidrocarburos. Estos geles fueron caracterizados mediante técnicas espectroscópicas, modelado molecular y microscopía. Finalmente, se propuso un modelo para el proceso de autoensamblaje de las moléculas esteroidales y la formación de la red fibrilar autoensamblada (SAFIN) consistente con los datos reunidos en este trabajo de tesis. Estos resultados contribuyen a incrementar los conocimientos acerca del proceso de autoensamblado molecular de los organogelificantes de bajo peso molecular para poder, en un futuro, diseñar a priori compuestos con propiedades gelantes.

Abstract:
This thesis work describes the synthesis of a new steroid-based low molecular weight organogelator and the study of the properties of its gels in order to get a better understanding of the molecular self-assembly process. The new steroid-based organogelator 3β-t-butyldimethylsilyloxy-20β-acetyloxy-5α- hydroxy-6β,19-epoxypregnane was synthesized by a photochemical reaction and its gels with different organic solvents were characterized by spectroscopic methods, X-ray diffraction, microscopy and molecular modelling. This organogelator was also able to gelate tetraethyl orthosilicate (TEOS) and it was successfully used as a template to grow silica nanotubes through a catalyst-free in situ co-assembly polymerization process. In order to analyze the influence of a preorganized structure in the gelation properties of this kind of steroids, we undertook the synthesis of dimeric analogs. We developed a methodology for obtaining C–C bonded steroidal homodimers, by an olefin metathesis reaction assisted by microwave heating with a second generation Grubbs catalyst. This required developing and optimizing a methodology for the synthesis of terminal olefins using a salt free Wittig reaction on different substrates and to study the metathesis reaction in several positions of the steroidal skeleton. On the other hand, we prepared functional analogs (replacing the 3β-t-butyldimethylsilyl and/or 20β-acetoxy groups for other moieties) and dimeric analogs (with ester bonds) in order to analyze the structure-gelation relationship. We identified the functional moieties essential for the formation of the gel and analyzed the effect of the size and polarity of substituents. One of the analogs, 3β-dimethylallylsilyloxy-5α-hydroxy-20β-acetoxy-6β,19- epoxipregnane, was also capable of forming thermoreversible gels in hydrocarbons. These gels were also characterized by spectroscopic methods, molecular modelling and electron microscopy techniques. Finally, we proposed a model for the self-assembly of the steroidal molecules and the formation of the self-assembled fibrillar network (SAFIN) consistent with data collected in this thesis. These results contribute to the understanding on the molecular self-assembly process of low molecular weight steroid-based organogelators and pave the way for designing compounds with novel gelation properties in the future.

Duffy, Tomás. "Desarrollo y aplicación de estrategias de PCR para la genotipificación y cuantificación de Trypanosoma cruzi" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La infección por el parásito Trypanosoma cruzi (T. cruzi), causante de la enfermedad de Chagas, sigue siendo un importante problema de salud pública en los 21 países endémicos de América, con una prevalencia estimada de 8 millones de personas infectadas. Esta enfermedad muestra un curso clínico variable, desde asintomática hasta fases crónicas con parasitemias bajas, cuya forma más severa es la cardiopatía. En diferentes regiones endémicas los pacientes se encuentran infectados con distintas poblaciones parasitarias que a su vez podrían desempeñar un papel en la patogenia, las formas clínicas y la gravedad de la enfermedad. Para el tratamiento de la enfermedad actualmente se dispone de quimioterapias que son más eficaces en las infecciones recientes que en la población adulta crónica. A su vez, la evaluación de la eficacia de nuevas drogas se encuentra seriamente comprometida dado que el criterio de cura actualmente se basa en la conversión serológica a negativa, lo que puede ocurrir sólo años después del tratamiento, lo que requiere un largo plazo de seguimiento. En este contexto, nos propusimos desarrollar ensayos de PCR cuantitativa (QPCR) sensibles y precisos para la cuantificación de la carga parasitaria que permitan evaluar tempranamente la eficacia o el fracaso de nuevas drogas tripanocidas, así como monitorear la respuesta al tratamiento con las drogas actuales en casos clínicos. El otro objetivo de la tesis ha sido el desarrollo de estrategias de PCR sensibles y con distintos grados de resolución para la genotipificación de T. cruzi. Estas técnicas permiten tipificar las poblaciones parasitarias directamente a partir de muestras biológicas y por lo tanto establecer asociaciones entre el genotipo del parásito y las formas clínicas de la enfermedad, así como evaluar el rol eco-epidemiológico de las distintas poblaciones parasitarias.

Abstract:
Infection with the parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi), which causes Chagas disease, remains a major public health concern in 21 endemic countries of America, with an estimated prevalence of 8 million infected people. Chagas disease shows a variable clinical course, ranging from asymptomatic to chronic stages with low parasitaemias, whose severest form is heart disease. Individuals from different endemic regions are infected with distinct parasite populations that may play a role in pathogenesis, clinical forms and severity of the disease. Current chemotherapies are unsatisfactory since they are more effective in recent infections than in the chronic adult population, and the criterion of cure relies on serological conversion to negative, which may occur only years after treatment, requiring long-term follow-up, hampering novel drug trails. In this context, we aimed to develop sensitive and accurate quantitative PCR strategies (QPCR) for T. cruzi quantification that may allow an early assessment of efficacy or failure of novel drugs in future trials, as well as to follow-up patients under etiological treatment with the currently available chemotherapies. The second aim of this thesis has been the development of sensitive PCR strategies for genotyping T. cruzi populations. These assays allow us to establish relationships between parasite genotypes and clinical forms of the disease, as well as to evaluate the eco-epidemiological role of distinct parasite populations.

Drelichman, Irene. "Acotaciones con pesos para la integral fraccionaria de funciones radiales y sus aplicaciones" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Dratman, Ezequiel. "Resolución eficiente de ciertos sistemas no lineales derivados de ecuaciones diferenciales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo estudiamos las soluciones estacionarias positivas de una discretización estándar, por medio de diferencias finitas, de la ecuación del calor semilineal con condiciones de borde no lineales de tipo Neumann. Demostramos que, si la difusión es suficientemente grande o suficientemente chica, en comparación con el flujo en los bordes, entonces existe una unica solución de dicha discretización. Esta solución aproxima la unica solución estacionaria positiva de la ecuación “continua”. Además, exhibimos un algoritmo que calcula una ε-aproximación de dicha solución mediante métodos de continuación. El costo de nuestro algoritmo es lineal en el número de nodos involucrados en la discretización y el logaritmo del número de dígitos de aproximación requeridos. En los casos restantes probamos que existen soluciones espurias. Estos resultados nos permiten obtener el panorama global de la comparación entre las soluciones estacionarias del problema diferencial en consideración y su discretización.

Abstract:
We study the positive stationary solutions of a standard finite-difference discretization of the semilinear heat equation with nonlinear Neumann bound- ary conditions. We prove that, if the diffusion is large enough or small enough, compared with the flux in the boundary, there exists a unique solution of such a discretization, which approximates the unique positive stationary solution of the “continuous” equation. Furthermore, we exhibit an algorithm computing an ε-approximation of such a solution by means of a homotopy continuation method. The cost of our algorithm is linear in the number of nodes involved in the discretization and the logarithm of the number of digits of approximation required. In the remaining cases we prove that there exist spurious solutions. From these results we obtain a complete outlook of the comparison between the stationary solutions of the differential problem under consideration and its discretization.

Dilernia, Darío A.. "Estudio de la evasión de la respuesta inmune citotóxica por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana Tipo-1 (HIV-1) y su relación con el tratamiento antirretroviral" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Introducción. El HIV es el agente causal del SIDA. Entender las formas en las que evade la respuesta inmune del hospedador es crítico para el desarrollo racional de una vacuna efectiva. Aunque la amplia extensión del tratamiento antirretroviral es capaz de impactar significativamente en los procesos naturales de selección y escape, pocos trabajos han estudiado esta temática. El objetivo de esta tesis fue identificar aquellas regiones virales sometidas a presión de selección inmune y evaluar el impacto del tratamiento antirretroviral en su selección y persistencia. Metodología y resultados. Mediante análisis estadístico se identificaron 12 mutaciones virales asociadas a escape inmune, 6 de ellas en regiones no caracterizadas previamente como epítopes. El análisis de secuencias obtenidas en los últimos 20 años de epidemia sugirió que varias de ellas han incrementado su frecuencia hasta estar presentes en la mayoría de las cepas virales actuales. La evaluación de la respuesta inmune péptido específica mostró reconocimiento principalmente de dos péptidos con restricción para el alelo HLA A02 (A02P65 y A02P84), uno para el alelo HLA A03 (A03P28) y uno para el alelo HLA B07 (B07P357). Para los dos últimos y para A02P65 se demostró que la variante de escape disminuía el reconocimiento por la respuesta inmune mientras que, para todos los casos, se evidenció la capacidad de inducir una respuesta polifuncional secretora tanto de IFN como de IL 2 y MIP 1 . Se evaluó también el nivel de agotamiento inmune y, aunque la técnica de tetrámeros presentó varios inconvenientes, se detectó una mayoría de respuesta no exhausta en los casos exitosos. La secuenciación del gen viral gag mostró la presencia de escape viral en la mayoría de los epítopes analizados y sugirió que la positividad de la respuesta inmunológica estaba asociada a una mayor afinidad del epítope por el alelo HLA que lo presenta. Al mismo tiempo, el análisis de secuencia de dicho gen viral en muestras repetidas de 50 pacientes separadas por un promedio de 3 años, demostró la presencia de recambio activo de variantes virales hacia el estado de escape durante el período de muestreo. Se encontró también que la selección activa resulta menos frecuente en los pacientes bajo tratamiento y el análisis del virus en dichos pacientes sugirió que esto sería debido a una reducción significativa de la capacidad evolutiva del virus en el contexto del tratamiento altamente efectivo. Finalmente, un análisis filogenético más profundo de las secuencias estudiadas permitió datar el inicio de la epidemia del HIV 1 en Argentina en la primera mitad de la década de 1970. Conclusiones. El presente trabajo de tesis permitió caracterizar regiones de la proteína viral Gag de frecuente reconocimiento inmune sobre las cepas del HIV 1 circulantes en nuestra región y caracterizar su dinámica a nivel poblacional a lo largo de veinte años de epidemia. El conjunto de datos obtenido de los ensayos inmunológicos confirma la aproximación estadística para identificar sitios de reconocimiento inmune demostrando respuestas citotóxicas polifuncionales mientras que el estudio de muestras seriadas en pacientes, la mayoría de ellos en estados clínicos avanzados, sugiere que la selección del escape viral se extiende más allá de los primeros momentos de la infección. En este sentido, el inicio del tratamiento puede tener un beneficio adicional al prevenir dicho escape por reducción significativa de la evolución viral.

Abstract:
Introduction. HIV is the etiological agent of AIDS. To understand the way the virus evade the immune response of the host is critical for the rational development of an effective vaccine. Although the expansion of treatment access is able to shape the natural process of selection and escape, few studies have analyzed this phenomenon. The objective of the present thesis was to identify viral genomic regions where the virus undergoes selective immune pressure and to evaluate the impact that the antiretroviral therapy may have in their selection and persistence. Methodology and results. A total of 12 viral mutations associated to immune escape were identified, six of them in regions not previously characterized as epítopes. The analysis of a set of viral sequences obtained from samples collected in the last twenty years suggested that many of them have increased their prevalence in time until become the most prevalent state of circulating viral strains. The evaluation of peptide specific immune response showed that the main targets of immune recognition were located in two HLA A02 restricted epítopes (A02P65 and A02P84), in a HLA A03 restricted one (A03P28) and in a HLA B07 restricted one (B07P357). For the last two and also for A02P65 we found that the escape mutations significantly impair recognition by the immune response. For all of them, the capacity of stimulating a polyfunctional response able to release IFN , IL 2 and MIP 1 was shown. Also, the evaluation of immune exhaustion through tetramer technique showed, in spite of many technical inconveniences, a low level of exhaustion in the majority of successfully analyzed samples. The sequencing of viral gene gag showed the presence of escape in the majority of the epítopes analyzed and suggested that detection of immune response was associated to a greater affinity of the epítope for the HLA allele. At the same time, the analysis of the same region in repeated samples collected from 50 patients within a time period of 3 years showed the presence of active replacement of viral sequences toward the escape state. That active replacement seems to be associated to the lack of antiretroviral therapy and the analysis of the virus quasispecies in under therapy patients suggested that the significant reduction of evolutive capacity of the virus in the context of the effective therapy is likely the reason for that observation. Finally, a deeper phylogenetic analysis of the sequences under study allowed us to locate the initiation of the HIV epidemic in Argentina at the first half of the 1970s decade. Conclusions. The present thesis allowed us to characterize the regions of the viral protein Gag under frequent immune recognition at the population level and to characterize their dynamics in the last twenty years of epidemic. The set of data obtained from the immunologic assays confirms the statistical approach of the identification of sites under immune recognition showing polyfunctional cytotoxic responses while the study of repeated samples from patients that were in their majority in advanced stages of infection show that selection of escape not only occurs in the first stages of infection. In this sense, the initiation of treatment could have an additional benefit in preventing the immune escape by significantly reducing the evolutive capacity of the virus.

Diaz, Marina Vera. "Análisis espacio-temporal del estado nutricional de larvas de anchoíta Engraulis anchoita. Relación con las características hidrográficas y la disponibilidad de alimento." (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio de la condición nutricional de las larvas de peces permite evaluar individualmente el estado fisiológico de los ejemplares y detectar así áreas de cría favorables para la supervivencia y el crecimiento larval. En el presente trabajo se emplearon técnicas morfométricas, histológicas y bioquímicas para determinar la condición nutricional de larvas de anchoíta, Engraulis anchoita, recolectadas en el mar. Los resultados obtenidos fueron complementados con los datos oceanográficos y las abundancias de diferentes componentes del plancton, tanto predadores como presas de las larvas de anchoíta. Se ha observado que los factores que determinan la distribución de las larvas de esta especie serían principalmente de naturaleza físico-química. Si bien no se encontraron diferencias significativas entre áreas, la condición nutricional fue algo mejor en las zonas caracterizadas por aguas de mezcla dentro las estructuras frontales presentes en el área de estudio. Por otra parte, la condición nutricional se vería favorecida durante las estaciones del año en las que no se observan altas densidades larvales. Probablemente las condiciones sean propicias para el crecimiento larval durante todo el año y las densidades bajas o intermedias de larvas de peces permitan a las larvas de anchoíta evitar o reducir la competencia intra e interespecífica por el alimento. Por otra parte, muy pocas larvas presentaron valores bajos de condición nutricional, esto podría indicar que E. anchoita encuentra durante todo el año en la zona estudiada las condiciones ambientales adecuadas para su supervivencia y crecimiento larval.

Abstract:
Nutritional condition studies allow the assessment of physiological state of each larva and thus, the establishment of favourable nursery areas which provide better survival and growth. In the present work, morphometrical, histological and biochemical techniques were employed to assess nutritional condition of anchovy, Engraulis anchoita, larvae captured in the sea. Its results were complemented with oceanographic data and information about zooplankton abundances, both prey and predators of anchovy larvae. Anchovy larvae abundance and distribution would be mainly determined by physico-chemical variables. Even though no significant differences were found in larval nutritional condition among the studied areas, larval condition was slightly better in frontal areas characterized by mixed water masses. On the other hand, anchovy larvae condition seems to be favoured during seasons when larval abundances remain low. Probably, ocean conditions are almost always favourable for larval growth and survival during the whole year, but low or intermediate larval densities allow avoiding both intra and inter-specific competition. As only a small number of anchovy larvae were described as in starving condition, it can be assumed that E. anchoita finds environmental conditions that favour its growth and survival. during all seasons in the studied area.

de Zavalía, Nuria María Asunción. "Mecanismos moleculares y neuroquímicos del reloj circadiano en la retina de mamíferos: interacción con los núcleos supraquiasmáticos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo de Tesis se demostró, por primera vez, que la síntesis retiniana de prostaglandinas E2 y F2α en el hámster dorado varía circadianamente aún en condiciones de oscuridad constante y está regulada por un reloj circadiano local, independiente de los núcleos supraquiasmáticos (NSQ), posiblemente localizado en la capa de células ganglionares. Asimismo, se demostró la existencia de variaciones diarias en los niveles nucleares (pero no citosólicos) de las proteínas reloj CLOCK y BMAL1 que persisten en condiciones constantes de iluminación ambiental, son independientes, al menos en parte, de la actividad del reloj hipotalámico y se expresan exclusivamente en las células ganglionares. Este conjunto de resultados indican un rol central para las células ganglionares de la retina en la actividad circadiana local. Dadas estas evidencias, se evaluaron las funciones no visuales en un modelo experimental de glaucoma. Para ello se desarrolló un modelo experimental de glaucoma a través de la administración semanal de condroitín sulfato (CS) en la cámara anterior del ojo de rata, que reproduce características centrales del glaucoma humano. Se demostró una disminución significativa en los niveles de melanopsina y en el número de células ganglionares que expresan este fotopigmento. Asimismo, se demostró una alteración significativa en el reflejo pupilar aferente, en la supresión fótica de la producción nocturna de melatonina pineal, en la inducción por luz de c-Fos en los NSQ y en los ritmos de actividad locomotora, luego de 10 semanas de tratamiento con CS. Estos resultados indican que el glaucoma induce alteraciones significativas en el sistema visual no formador de imágenes. En este contexto, se evaluó la fisiología circadiana en pacientes con glaucoma avanzado. Los resultados obtenidos demostraron que la eficiencia del sueño fue significativamente mayor en el grupo de pacientes control, en tanto que la cantidad de minutos de vigilia y la actividad durante el intervalo de sueño fueron mayores en el grupo de pacientes con glaucoma. Estos resultados, sugieren alteraciones circadianas, particularmente en la calidad de sueño, en pacientes con glaucoma avanzado.

Abstract:
In this thesis work, for the first time, we have demonstrated the existence of daily variations in the retinal synthesis of prostaglandins E2 and F2α in the golden hamster, which persisted even under constant darkness conditions. These variations are regulated by a retinal circadian clock, independent from the suprachiasmatic nuclei (SCN) and presumably located in retinal ganglion cells. We have also demonstrated the existence of daily variations in nuclear (but not cytosolic) levels of CLOCK and BMAL1 proteins that persisted in constant ambient lighting conditions, partially depended on the activity of the primary circadian pacemaker and are expressed exclusively in retinal ganglion cells. These results indicate a central role for ganglion cells in the retinal circadian activity. Based on these evidences, we evaluated the non-image forming visual system in an experimental model of glaucoma. For this purpose, we developed an experimental model of glaucoma in rats, induced by weekly injections of chondroitin sulphate (CS) in the eye anterior chamber, which reproduces central features of human glaucoma. We demonstrated a significant decrease in the levels of melanopsin and in the number of retinal ganglion cells which express this photopigment. We have also shown significant alterations in the afferent pupillary light reflex, the photic suppression of nocturnal pineal melatonin content, in the light-induced expression of c-Fos in the SCN and in the locomotor activity rhythms, after 10 weeks of treatment with CS. These results indicate that glaucoma induces significant alterations in the non-image forming visual system. In this context, we evaluated the circadian physiology in patients with advanced glaucoma. The results showed that the sleep efficiency was significantly higher in the control group, while the wake minutes and activity during the sleep interval were higher in the group of patients with glaucoma. These results suggest circadian disorders, particularly in the sleep quality, in patients with advanced glaucoma.

Desbats, María Andrea. "Estudio de la dinámica y función de la ¨Proteína Heterocromática 1 gama¨ durante el proceso de diferenciación celular" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La diferenciación celular es un proceso complejo en el cuál un grupo específico de genes se activa y el resto permanece silenciado. HP1γ se asocia a genes activos, pero se desconoce su rol durante la diferenciación celular. En los preadipocitos HP1γ localiza tanto en heterocomo eucromatina, pero cuando se induce la diferenciación HP1γ rápidamente se concentra en un polo del núcleo excluyéndose de regiones heterocromáticas. La polarización de HP1γ no se observa en células que no se diferencian. La fosforilación de HP1γ en Ser93 se induce durante la adipogénesis y también se localiza polarizadamente. La polarización de HP1γ depende de la transcripción, de la integridad del RNA y DNA, y de la señalización por PKA. Interesantemente, marcas epigenéticas que marcan activa transcripción y la RNA pol II colocalizan con HP1γ en dicho polo nuclear. Este dominio muestra altos niveles de incorporación de BrUTP y de acumulación de mRNAs. La inhibición de HP1γ con siRNAs disminuye la incorporación de BrUTP y la expresión de marcadores de diferenciación adipocítica. Este dinámico patrón nuclear polarizado no se ha descripto antes, y proponemos que podría constituir un nuevo mecanismo para regular la expresión de genes requeridos durante el inicio de la diferenciación celular.

Abstract:
Cell differentiation is a complex process in which a specific subset of genes is activated while the rest of genes are silenced. HP1γ is associated to actively transcribed genes, however little is known about its role during cell differentiation. In preadipocytes HP1γ localizes in heterochromatic and euchromatic domains, but when preadipocytes are induced to differentiate HP1γ rapidly concentrates in one pole of the nucleus being transiently excluded from heterochromatin. HP1γ polarization is not observed in cells that do not differentiate. HP1γ PSer93 is induced upon adipogenesis and also concentrates in a polarized manner. HP1γ polarization depends on transcription, RNA and DNA integrity, and on PKA signalling. Noteworthy, epigenetic marks that correlate with active transcription and RNA polymerase II co-localizes with HP1γ in the nuclear pole. This domain shows high level of BrUTP incorporation and mRNAs accumulation. Knock down of HP1γ by siRNAs causes a decrease in BrUTP incorporation and a decrease in the expression of markers of adipocyte differentiation. Importantly, to our knowledge this dynamic nuclear polarization has not been described before, and we propose that it may constitute a novel mechanism for regulating the expression of a determined subset of genes required during the initial steps of cell differentiation.

De Pino, Verónica. "Estudio de la función de los polipéptidos reversiblemente glicosilados (Reversibly Glycosylated Polypeptide) en plantas de interés agro-económico" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las plantas explotan una variedad de mecanismos para regular la producción y el acceso a los azúcares en respuesta al desarrollo, al ambiente, y al estado metabólico. La síntesis de polisacáridos a partir de fotosintatos, como la sacarosa, es un proceso muy regulado en el que están involucradas invertasas y glicosiltransferasas. La estructura y destino de los polisacáridos es bien conocida, pero el mecanismo de biosíntesis particularmente la síntesis de novo y las enzimas que transfieren los azúcares siguen siendo un enigma a resolver. En este trabajo de tesis nos focalizaremos en unas proteínas muy particulares que fueron descubiertas intentando identificar componentes de la pared celular. Estas proteínas se denominan RGP, por “reversibly glycosylated polypeptide”, y tienen capacidad de autoglicosilarse, a partir de UDP-Glc, UDP-Gal, UDP-Xyl y UDP-Ara dando como producto la proteína glicosilada y regenerando el nucleótido azúcar. Las RGPs están presentes en plantas superiores tanto en monocotiledóneas como en dicotiledóneas, pero están ausentes en otras especies, lo que indicaría que su función está muy conservada en las plantas, aunque se sabe poco de su rol fisiológico (Moreno & Tandecarz 1982; Moreno et al. 1986; Delgado et al. 1998; Bocca et al. 1999). Un análisis filogenético (Wald et al. 2003) muestra que hay dos clases, clase 1, la mayoría de las RGps pertenece a esta clase, que es muy activa, y la clase 2, a la cual no se le asoció actividad, pero sí capacidad de interactuar con la clase 1. Se encontró una multiplicidad de isoformas en todas las especies donde está presente, aspecto asociado con su capacidad de formar homo y heterodímeros. Anteriormente se demostró que la expresión de la RGP se produce en los tejidos donde hay activa síntesis de pared celular, durante este trabajo mostramos que la expresión esta modulada por el desarrollo, la inducción hormonal y el estrés, clarificando el rol fisiológico de la RGP en la remodelación/reconstrucción de novo de la pared celular vegetal, en donde uno de los caminos metabólicos claves en dicho proceso de la célula vegetal es la síntesis de polisacáridos.

Abstract:
Plants exploit diversity of mechanisms to regulate the production and the access to sugars in response to developmental cues, the environment and to the metabolic sate. Polysaccharide synthesis upon photosynthates as sucrose is a highly regulated process, in which invertases and glycosyltransferases are implicated. Although the structure and destination of polysaccharides is well established, mechanisms of de novo synthesis as well as the identification of glycosyltransferases are yet an enigma to be resolved. This work is focused on a group of proteins called reversibly glycosylated polypeptide, RGP which have the unique capability to perform self-glycosylation upon incubation with UDP-Glc, UDP-Gal, UDP-Xyl and UDP-Ara given as product the glycosylated protein and the regeneration of the nucleotide diphosphate. RGPs are present in higher plants; in monocotyledons as well as in dicotyledons, indicating that their functions is highly conserved, although little is known about their physiological role (Moreno & Tandecarz 1982; Moreno et al. 1986; Delgado et al. 1998; Bocca et al. 1999). A phylogenetic analysis of RGP (Wald et al. 2003) showed that there are two classes, class 1, the majority of RGP belongs to this class, which is highly active, and class 2, which is inactive but it has the capability to interact with the class 1 forming heteromultimers. It was found a multiplicity of forms of RGP in all species; this fact is associated with its ability to form homo and heterodimers. Previously, it was found that the expression of the RGP is particularly relevant in tissues where an active synthesis of cell wall take place. Here we demonstrate that the expression of the RGP is modulated by development, elongating involved hormones, germination as well by stress, clarifying the physiological role of the RGP in the remodeling/de novo synthesis of the plant cell wall, where the synthesis of polysaccharide is a key metabolic pathway.

Dellarole, Mariano. "E2, regulador de transcripción y replicación del papilomavirus humano: interacción con ADN, dinámica conformacional y divergencia evolutiva" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Más de 50 tipos de papilomavirus humanos (HPV) infectan epitelio mucoso causando una variedad de lesiones benignas y malignas. El dominio C-terminal de la proteína E2 de HPV (E2C) discrimina entre cuatro sitios de ADN altamente similares regulando el ciclo de vida del virus vía la activación de la replicación y la activación y/o represión de la transcripción. Con el fin de tratar de entender la naturaleza de la interacción entre E2C y ADN, realizamos un análisis detallado del complejo utilizando herramientas bioinformáticas y el contenido de información en las secuencias proteicas y nucleotídicas y usando técnicas biofísicas, proteínas E2C recombinantes y sitios sintéticos de ADN específicos y no-específicos. Antes de estudiar el rol de la interacción E2C-ADN, nos focalizamos en el proceso de polimerización no-funcional de E2C dado que su desarrollo es reprimido por la presencia de ADN específico. Inducida por temperatura, la polimerización de E2C se desencadena mediante la formación de un núcleo estructurado y finaliza en un paisaje morfológico de oligómeros solubles con propiedades amiloideas. El estudio computacional de la interacción E2-ADN de todos los tipos de HPV mucosos indica que las proteínas E2 de distintos tipos poseen propiedades de discriminación de ADN similares. Las diferencias en la interacción E2-ADN se encuentran principalmente en la secuencia de ADN específico, en acuerdo con el análisis de la unión de E2C a diferentes sitios mediante titulaciones isotérmicas de calorimetría. Basado solamente en la secuencia de ADN, logramos predecir diferencias en la energía de unión las cuales se ordenaron en seis grupos de afinidades discretas. Ciertas jerarquías de afinidades como también distancias entre sitios y presencia de sitios de metilación se encontraron estadísticamente asociados con tipos de HPV propensos a ser malignos. Estudiamos la estabilidad y la propiedad de discriminación de secuencia de cinco proteínas E2C homólogas de identidad de secuencia proteica en el rango 44% al 77%. La desnaturalización al equilibrio y la cinética de desplegado en cloruro de guanidinio mostró que todos los dominios son homodímeros estables que se desnaturalizan vía un mecanismo de dos estados. Medimos la unión a distintos sitios de ADN y confirmamos que el mecanismo de unión para todos los complejos es el mismo en base a una genuina compensación entropico-entálpica. Nuestros resultados muestran que la inusual estructura de barril-beta de E2C puede acomodarse a numerosas mutaciones manteniendo las propiedades cruciales de conformación y función. Pero la unión cooperativa a sitios adyacentes de ADN mostró que los componentes entálpicos-entrópicos de la reacción como la deformación del ADN puede divergir entre distintas homólogas en acuerdo con un fuerte acoplamiento entre la dinámica global de la proteína y el reconocimiento del ADN.

Abstract:
More than 50 Human papillomavirus (HPV) types infect mucosal epithelia causing a variety of benign and malign lesions. The C-terminal domain of HPV E2 protein (E2C) discriminates between four highly similar cognate DNA sites in order to regulate the virus life cycle by activating replication and repressing and/or activating transcription. In order to try to understand the nature of the interaction between E2C and DNA, we performed a detailed analysis of the complex using bioinformatics tools and the information content on DNA sequences and using biophysical techniques and recombinant engineered and homologous E2C proteins and synthesized specific and nonspecific DNA sites. Before studying the role of the E2C-DNA interaction, we focused on the nonfunctional polymerization process of E2C as its development is repressed by the presence of DNA binding sites. Triggered by heat, the polymerization of E2C starts by formation of a stable and structured nucleus and ends in an organized morphology landscape of soluble amyloid-like oligomers. The computational study of the E2-DNA interaction of all mucosal HPV types, indicates that E2 proteins have similar DNA discrimination properties. Differences in E2-DNA interaction among HPV types lie mostly in the target DNA sequence, in agreement with the analysis of binding of E2C to different sites using isothermal titration calorimetry. Based on DNA sequences only, we could predict differences in binding energies which clustered into six discrete affinity hierarchies. Finally, certain distances between sites, affinity hierarchies and their eventual changes upon methylation, are statistically associated with high-risk types. We studied the stability and DNA discrimination properties of five homologous E2C proteins with sequence identities ranging from 45% to 77%. Equilibrium denaturation and unfolding kinetics in guanidinium chloride showed that all five domains are very stable homodimers that unfold via a two-state mechanism. We used isothermal titration calorimetry to follow binding of the five proteins to three different DNA sites. Genuine enthalpy-entropy compensation confirms that the binding mechanism is the same for all complexes. The five domains have nearly identical capacities for DNA sequence discrimination despite the high degree of sequence divergence. Our results show that the unusual E2C beta-barrel can accommodate many mutations while retaining its crucial conformational and functional properties. But cooperative binding to tandem DNA E2 site showed that the enthalpic-entropic components of the reaction and DNA deformation can diverge in agreement with a strong coupling between global dynamics and DNA recognition.

De Lella Ezcurra, Ana Laura. "La sobre-expresión crónica del factor de necrosis tumoral alfa en la substantia nigra induce neurodegeneración y síntomas motores" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La neuroinflamación es considerada una característica neuropatológica de la enfermedad de Parkinson. Se ha observado activación de microglía y niveles elevados de citoquinas pro-inflamatorias, entre las que se encuentra el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), en la substantia nigra, una de las principales regiones del cerebro afectadas en esta enfermedad. Sin embargo, el rol funcional de la activación microglial y la sobre-expresión de TNF-α no es claro en la enfermedad de Parkinson. El objetivo de este trabajo fue determinar los efectos de la sobre-expresión crónica de TNF-α en la substantia nigra, e identificar moléculas candidatas a mediar ese efecto. Para ello, se inyectó en la substantia nigra de ratas adultas un adenovector que expresa TNF-α (AdTNFα), pudiendo detectarse la citoquina recombinante hasta 14 días p.i. La expresión crónica de TNF-α indujo una pérdida progresiva de neuronas en la substantia nigra, que comenzó el día 14 y se acentuó a los 21 y 28 días p.i., comparado con animales controles inyectados con un adenovector que expresa β- galactosidasa (Adβgal). La sobre-expresión de TNF-α produjo la aparición de síntomas motores a los 14 días p.i.; y la activación de la microglía y/o reclutamiento de macrófagos de la periferia desde el día 7 luego de la inoculación. No se pudo detectar inducción de IL-1β ni evidencias de apoptosis. En cambio, se observó un aumento en los niveles de ciclooxigenasa tipo 2 (COX-2) y en la actividad de la óxido nítrico sintasa (NOS) en los animales que sobre-expresan TNF-α, por lo que dichas moléculas podrían estar participando de la muerte neuronal inducida por la citoquina. Por otro lado, se llevó a cabo un estudio de los genes regulados por TNF-α utilizando la técnica de microarrays. Entre los genes que se encontraron diferencialmente expresados entre los animales tratados con AdTNFα y Adβgal, estaban significativamente representados procesos relacionados con la respuesta inmune y el metabolismo. Se validó por RT- PCR en tiempo real la expresión disminuida de la proteína quinasa C tipo delta (nPKC- delta) y el regulador de la señalización por proteína G 3 (RGS3) en los animales que sobre-expresan TNF-α con respecto a los controles. En conclusión, podemos decir que la expresión prolongada de niveles pro- inflamatorios de TNF-α es suficiente para producir un efecto tóxico en las neuronas de la substantia nigra, con la aparición de síntomas motores y una respuesta glial característica. Los niveles y la duración de la expresión de esta citoquina son variables importantes para que ejerza un efecto neurodegenerativo. Se generó un modelo animal que permite estudiar los mediadores del efecto tóxico de TNF-α como lo demuestran los resultados de genómica funcional, sentando las bases para estudios futuros que puedan identificar blancos para una posible terapia contra la enfermedad de Parkinson.

Abstract:
Neuroinflammation is regarded as a neuropathological characteristic of Parkinson’s disease. Microglia activation and high levels of pro-inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor alpha (TNF-α), have been reported in the substantia nigra, one of the main brain regions affected in this disease. The aim of this study was to determine the effects of the chronic overexpression of TNF-α in the substantia nigra, and to identify candidates to mediate that effect. To achieve this, an adenovector expressing TNF-α (AdTNFα) was injected in the substantia nigra of adult rats. We have been able to detect the recombinant protein until 14 days p.i. The chronic expression of TNF-α induced a progressive loss of neurons in the substantia nigra, which started 14 days p.i. and was more evident at 21 and 28 days p.i., compared to control animals injected with an adenovector expressing β-galactosidase (Adβgal). Chronic overexpression of TNF-α caused motor symptoms, appearing at 14 days p.i.; and activation of microglia and/or recruitment of macrophages form the periphery from day 7 after adenoviral inoculation. We could not detect induction of IL-1β expression, or evidences of apoptosis. On the other hand, we could observe increased levels of cyclooxygenase type-2 (COX-2) and increased activity of nitric oxide synthase (NOS) in animals overexpressing TNF-α, which suggests that these molecules could participate in the neuronal death induced by the cytokine. On the other hand, we studied the genes regulated by TNF-α using microarrays technology. We found that processes related to immune response and metabolism were significantly represented among de genes differentially expressed in AdTNFα and Adβgal injected animals. Using real time RT-PCR, we validated the downregulation of protein kinase C delta type (nPKC-delta) and regulator of G-protein signaling 3 (RGS3) in animals over-expressing TNF-α, compared to controls. Thus, we conclude that long-lasting expression of pro-inflammatory levels of TNF-α is sufficient to produce a toxic effect on neurons in the substantia nigra, as well as motor symptoms and a characteristic glial response. Levels and duration of TNF-α expression are important variables to establish its neurodegenerative effect. This study provides an animal model to study the mediators of the toxic effect of TNF-α as shown by the results of functional genomics, laying the foundations for future studies with the final objective of identifying possible therapeutic targets for Parkinson’s disease.

de Almeida, Alejandra. "Análisis de cepas recombinantes de Escherichia coli productoras de poli (3-hidroxibutirato): efecto de la acumulación del polímero y de la proteína PhaP sobre el metabolismo y la expresión génica" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El poli(3-hidroxibutirato) (PHB) en un polímero biodegradable de gran interés biotecnológico, debido a que presenta propiedades físicas similares a las de los plásticos derivados del petróleo. Con el fin de optimizar su producción, se construyó una cepa recombinante de Escherichia coli que expresa los genes responsables de la síntesis de PHB de Azotobacter sp. FA 8. Esta cepa recombinante también expresa la proteína PhaP, la cual se asocia a los gránulos de PHB y afecta positivamente la síntesis del polímero. Se estudió la acumulación de biomasa y PHB, y las propiedades físicas del polímero, en esta cepa y en la cepa sin PhaP, observándose que la cepa que expresa PhaP produce más PHB y biomasa que la cepa isogénica. En estudios realizados en biorreactor se observaron variaciones en la síntesis de PHB y de diferentes productos metabólicos, al utilizar distintas fuentes de carbono y niveles de aireación, lo que le permitiría a las bacterias adaptar los flujos de carbono y energía a las diferentes condiciones ensayadas. Con el fin de determinar las modificaciones en E. coli cuando acumula PHB, y los posibles efectos de PhaP, se estudió la expresión de diferentes genes mediante qRT-PCR y arrays de DNA en cepas productoras y no productoras de PHB. Se observaron grandes diferencias en la expresión de genes relacionados con el hambreado en nitrógeno, cuya expresión fue mayor en las cepas productoras. Esto podría deberse a la competencia por los metabolitos precursores, acetil-CoA y poder reductor. Inesperadamente, se encontró una menor expresión de genes de estrés al comparar la cepa de E. coli que acumula el polímero y expresa PhaP con la cepa control (que no acumula el polímero ni expresa PhaP). A raíz de estos resultados, se estudió el efecto de PhaP sobre la fisiología de E. coli, en ausencia de PHB. Se observó que PhaP promueve el crecimiento de E. coli, y que además la protege contra estrés térmico. Estos resultados sugieren que PhaP tendría un efecto protector en E. coli, el cuál podría ser de gran utilidad en la producción de compuestos heterólogos.

Abstract:
Poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) is a biodegradable polymer of great biotechnological interest, because it has physical properties similar to fuel-derived plastics. In order to optimize the production of PHB, we constructed a recombinant Escherichia coli strain that expresses the phb genes from Azotobacter sp. FA8. This recombinant strain also produces the protein PhaP, which is found associated to PHB granules and positively affects PHB synthesis. We studied the accumulation of biomass, PHB, and physical properties of the polymer produced in this strain, and in the strain lacking PhaP. The strain that expresses PhaP produced more PHB and biomass that the isogenic strain. The production of PHB and several metabolic products varied in bioreactor cultures when using different carbon sources and aeration conditions, allowing bacteria to adjust carbon and energy flow. To study the effect of PHB and PhaP on recombinant E. coli, we studied the expression of different genes by qRT-PCR and microarray analysis. In the PHB-producing strains there was an increase in the expression of genes related with nitrogen metabolism, which could be related to the fact that acetyl-CoA and reducing power are needed for the production of PHB. We also observed that the production of the polymer generates a stress response in E. coli, similar to a heat shock response, which is diminished in the presence of PhaP. Surprisingly, the expression of stress-related genes was lower in the PHB and PhaP producing strain, that in the strain which does not express either PHB or PhaP. Based on these results, we studied the effect of PhaP on the physiology of E. coli, in the absence of PHB. PhaP-bearing strains grew more, and were more resistant to heat stress. These results suggest that PhaP has a protective effect on E. coli, which could be very useful for the production of heterologous products.

Daneri, María Florencia. "Aprendizaje espacial en el anfibio anuro Bufo arenarum. Estrategias, fenómenos y bases neurales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presente tesis es un estudio de las estrategias, los fenómenos y las bases neurales del aprendizaje espacial en el sapo común Bufo arenarum. El análisis de las estrategias de aprendizaje espacial demuestra que estos animales son capaces de orientarse utilizando tanto una estrategia de guía (mediante el uso de claves visuales ambientales) como una estrategia de giro (tomando como referencia su propio cuerpo). Además, que esta última estrategia es la predominante si las claves ambientales brindan información contradictoria. También se pudo determinar la presencia de cuatro fenómenos del aprendizaje: el efecto de la distancia de la clave visual al refuerzo, el bloqueo y el ensombrecimiento entre claves y la inhibición latente. Estos fenómenos fueron ampliamente descriptos en otras clases de vertebrados, y por primera vez observados en anfibios en este trabajo. Al explorar las bases neurales de este tipo de aprendizaje, se pudo establecer el papel fundamental del pallium medial (área homóloga al hipocampo) para la orientación en el espacio, tanto mediante el uso de claves visuales como mediante el uso de la estrategia de giro. Estos resultados revelan que el hipocampo de los mamíferos y el pallium medial de los anfibios no tienen una equivalencia funcional completa.

Abstract:
This thesis is a study of the strategies, phenomena and neural basis of the spatial learning in the common toad Bufo arenarum. The analysis of the strategies of the spatial learning shows that these animals are capable of orientation using both a guide strategy (using environmental visual cues) as a turn strategy (taking their own body as a reference). Furthermore, the latter is the preferred strategy if the environmental cues provide contradictory information. The presence of four learning phenomena has been also determined: the effect of the distance between the visual cue and the reinforcer, blocking and overshadowing between visual cues and latent inhibition. These phenomena have been previously described in other classes of vertebrates, and first time observed in amphibians in this work. By exploring the neural basis of this type of learning, the key role of the medial pallium (mammalian hippocampus homologue area) for spatial orientation has been established, both for the use of visual cues as for the use of a turn strategy. These results reveal that the mammalian hippocampus and the amphibian medial pallium do not have a complete functional equivalence.

Cristiano, Piedad María. "Estimación de la productividad primaria mediante el modelo de eficiencias y sensores remotos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Uno de los modelos más utilizados para estimar la Productividad Primaria Neta (PPN) a escala regional es el de eficiencias de Kumar and Monteith que permite la inclusión de información satelital. Uno de los parámetros clave es la eficiencia en su utilización (EUR), afectado por los factores de estrés. El objetivo fue mejorar las estimaciones a escala regional de la PPN en pastizales, bajo distintas condiciones de estrés proponiendo una cartografía temática de EUR para la región pampeana, teniendo en cuenta los factores de estrés predominantes (hídrico y nutricional). A través de ensayos manipulativos, se determinaron los cambios en la EUR en 4 gramíneas y en una pastura multiespecífica donde se incluyó el efecto del pastoreo. Para regionalizar los resultados, se generó una cartografía temática de las condiciones hídricas y nutricionales de la región. Para validar este mapa se estimó la PPNA mensual y anual utilizando imágenes MODIS que se compararon con datos de PPNA estimados a campo y con los resultados de otros dos modelos comúnmente utilizados. En los ensayos monoespecíficos la EUR varió entre 2.3-5.2 g/MJ bajo condiciones óptimas de crecimiento y entre 1.02-1.75 g/MJ en las plantas con estrés. En el ensayo multiespecífico, la EUR varió entre 0.63-1.94 g/MJ. La PPNA estimada anual presentó los menores valores en el suroeste de la región (menor a 5800 kg/ha.año) y fue aumentando hacia el noreste hasta alcanzar valores de 14500 kg/ha.año. La validación con datos de PPNA observados y estimados por otros modelos indican que nuestro modelo de EUR variable presenta mayor nivel de ajuste que el de EUR fija.

Abstract:
One of the most commonly models used to estimate net primary productivity (NPP) at regional level is that of Kumar and Monteith efficiencies that allows the inclusion of satellite information. One of the key parameters is the radiation use efficiency (RUE), affected by different stresses. The aim was to improve regional estimates of NPP in grasslands under different stress conditions suggesting a thematic mapping of RUE for the Pampas region, taking into account the prevailing factors of stress (water and nutrition). Through manipulative experiments, changes in the EUR were identified in 4 grasses and a multispecies pasture where the effect of grazing was included. To regionalize these results, we generated a thematic mapping of water and nutritional conditions of the region. To validate this map, the monthly and annual aerial NPP (ANPP) was estimated using MODIS images. Data were compared with ANPP from field data and the results of two other commonly used models. In monospecific experiments, RUE ranged from 2.3-5.2 g/MJ under optimal growth conditions and between 1.02-1.75 g/MJ in plants under stress. In the multispecies experiment, the RUE varied between 0.63-1.94 g/MJ. The estimated annual PPNA presented the lowest values in the southwestern region (minor than 5800 kg/ha.year) and was increasing towards the northeast to reach values of 14,500 kg/ha.year. The validation results indicate that our variable RUE model presents adjustment higher than the fixed RUE model.

Corriale, María José. "Uso y selección de hábitat del carpincho (Hydrochoerus hydrochaeris) a distintas escalas espacio-temporales en los Esteros del Iberá, Corrientes, Argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El carpincho (Hydrochoerus hydrochaeris) es un roedor de hábitos semiacuáticos del que se tiene escasa información ecológica en nuestro país a pesar de ser un importante recurso de fauna silvestre. Este herbívoro selectivo, que habita en los humedales de Sudamérica utiliza varios tipos de hábitats cercanos a cuerpos de agua. El objetivo general de este trabajo de tesis fue analizar el uso y la selección a diferentes escalas espacio-temporales en los Esteros del Iberá (Corrientes, Argentina). Para ello se realizó una identificación y caracterización de los diferentes ambientes presentes en el área de estudio basados en las características topográficas y fisonómicas de la vegetación sobre la base de los cuales se analizó el patrón de uso del espacio estacionalmente, desde el invierno de 2006 hasta el invierno de 2008. Se analizó el uso y la selección a escala de paisaje (por diferentes cuerpos de agua ubicados al norte del sector central del Macrosistema Iberá), a escala de macrohábitat (porciones de ambientes usados en el área de acción dentro de su área de distribución), a escala de microhábitat (ambientes usados dentro de su área de acción) y la relación de la selección a diferentes escalas con las características ambientales. Por último, se analizaron los patrones de actividad, el comportamiento de alimentación y el uso de ambientes para fines forrajeros exclusivamente. A escala de paisaje, se encontró que el carpincho utiliza de manera similar los cuerpos de agua relativamente permanentes presentes en el área de estudio (bañados, lagunas y estero) pero hubo un uso diferencial entre las lagunas que estuvo asociado a características del ambiente que proveen una mayor aptitud del hábitat en cuanto al requerimiento de refugio y termorregulación. A escala de macrohábitat y microhábitat los ambientes usados con mayor intensidad fueron las interfases entre las zonas altas y el agua, mientras que la selección del resto de los ambientes varió entre escalas y a lo largo del año. Las áreas de acción de los grupos sociales estuvieron relacionadas inversamente a la disponibilidad de alimento pero no se observó relación frente a los diferentes tamaños de grupo (Hipótesis de Dispersión de Recursos). A fines de alimentación, las zonas altas fueron las más usadas y la selección de los ambientes estuvo asociada inversamente a la disponibilidad de forraje, con un aumento en el uso con la disminución en la disponibilidad de alimento durante las estaciones frías y de menores precipitaciones (otoño-invierno). Estas variaciones en la disponibilidad de alimento se asociaron a cambios comportamentales y fisiológicos. Durante el otoño y el invierno se observó un aumento de la frecuencia de coprofagia y una mayor calidad de la dieta, probablemente, como respuesta a una cambio en la estrategia de forrajeo con un comportamiento más selectivo a escala de microparches. En base a los resultados obtenidos se destaca por un lado, la plasticidad ecológica de esta especie que permite colonizar diferentes ambientes acuáticos y enfrentar variaciones en la disponibilidad de recursos y por otro, la necesidad de adoptar un enfoque a múltiples escalas en estudios de selección del hábitat para el diseño e implementación de medidas de manejo de la especie y a fin de prever posibles cambios en la viabilidad de las poblaciones frente a las modificaciones del ambiente por factores antrópicos.

Abstract:
Capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) is a semi-aquatic rodent and despite being an important wildlife resource little ecological information is available in our country. This selective herbivore that inhabits wetlands of South America used a variety of habitats close to water bodies. The overall objetive of this thesis was to analyze the use and habitat selection at different spatial and temporal scales in the Esteros del Iberá (Corrientes, Argentina). The work was carried out seasonally from winter 2006 until winter 2008 in different water bodies located in the north of the central section of the Ibera Macrosystem. Firstly, we made an identification and characterization of the different habitats of the study area based on topographic and physiognomic characteristcs of the vegetation; and on these basis we examined the pattern of space use at landscape scale (between different aquatic habitats), macrohabitat (portions of used habitats in the home range within its distribution range) and microhabitat (habitats used within its home range), and its relation to habitats characteristics. Furthermore, we examined the behavior and the habitat use only for feeding purpose. At landscape scale, we found that the capybara similarly used the relatively permanent water bodies pesent in the study area (wetlands, lagoons and esteros), but there was a differential use of lagoons associated with habitat features that provide a greater habitat suitability for shelter and thermoregulation. At macrohabitat and microhabitat scale the interface between the highland areas and water was more intensively used, while the selection of the remaining habitats varied between scales and throughout the year. It was found that the home range areas of social groups were inversely related to food availability but no relationship was observed between different group sizes (Resource Dispersion Hypothesis). The main habitats used for foraging activities were highlands areas associated with an increased availability of forage with an increase in the use associated with the food avalability decrease during the cold season and lower rainfall (autumn-winter). These changes in food availability were associated with behavioral and physiological changes. An increase in the frequency of coprophagy was observed during autumn and winter seasons, where a higher diet quality was found, probably in response to a change in foraging strategy with a more selective behavior at micropatch scale. Based on the results is highlighted, by a hand, the ecological plasticity of this species that can colonize different aquatic habitats and deal with variations in the resource availability, and by the other hand, the need for a multi-scale approach in studies of habitat selection for the design and implementation of management measures and to predict possible changes in the viability of populations faced with environmental changes caused by human factors.

Codesido, Mariano. "Ensambles de aves en agroecosistemas de la provincia de Buenos Aires: su relación con los patrones de uso de la tierra y las características del paisaje" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Entre enero de 2006 y enero de 2008 se estudió estacionalmente la estructura de los ensambles de aves en los agroecosistemas de las diferentes unidades ecológicas de la Región Pampeana comprendidas dentro de la provincia de Buenos Aires (Pampa Ondulada, Pampa Interior Plana, Pampa Interior Arenosa, Pampa Deprimida y Pampa Austral). Los objetivos generales de la tesis son: a) describir la estructura de los ensambles de aves terrestres de los agroecosistemas de la provincia de Buenos Aires, b) comparar la estructura de los ensambles de aves terrestres entre las diferentes unidades y analizar su asociación con los patrones de uso de la tierra; c) evaluar la asociación entre la composición y abundancia de los ensambles de aves y las características del paisaje, y d) evaluar la relación funcional entre la riqueza específica con la composición y la heterogeneidad del paisaje. Se registraron un total de 115 especies de aves terrestres. La mayor parte de las especies que forman parte del ensamble de aves de los agroecosistemas de la provincia de Buenos Aires son especies de estatus residente, en su mayoría insectívoras y generalistas en cuanto a su grado de especialización en los usos de hábitats de nidificación; a este numeroso conjunto de especies se le agrega un grupo de especialistas (de pastizal, de arboledas y palustres), siendo más numeroso el de las especialistas de pastizal, cuyas especies, en general, presentan menores abundancia y reducidas áreas de ocupación (lo que sugiere una distribución restringida). Este grupo de especialistas de pastizal le confiere al ensamble un rasgo distintivo. En síntesis, los resultados muestran que tanto la pertenencia gremial como el grado de especialización en el uso del hábitat de nidificación influyen sobre el grado de dominancia o rareza de las especies que componen los ensambles de aves en los agroecosistemas de la provincia de Buenos Aires lo que, en principio, sugiere que ciertos grupos de especies, como las especialistas de pastizal son más propensas a poseer especies raras y, por lo tanto, podrían ser más susceptibles a las actividades antrópicas. En términos relativos, las especies migrantes evidenciaron menores áreas de ocupación que las residentes, podrían tornarse potencialmente más raras, aunque en este caso sus respuestas también dependen de lo que ocurra fuera de la región. Los resultados de la comparación entre las diferentes unidades ecológicas de la Región Pampeana incluidas en la provincia de Buenos Aires mostraron consistencia, por un lado, con la hipótesis del pool de especies, que sostiene que la composición y riqueza del ensamble local es una fracción del tamaño o pool de especies potencialmente disponibles a escala regional. El pool de especies regional es filtrado por el ambiente a través de los patrones de uso de la tierra (asociado a factores de manejo) y los patrones del paisaje (asociado a factores ambientales) con el resultado que algunas especies son suprimidas porque no se adecuan a estas restricciones ambientales impuestas por el filtro todo lo cual, en última instancia, determina la composición del ensamble de aves del agroecosistema a escala del paisaje. Si bien los efectos de estos filtros se extienden sobre toda la provincia de Buenos Aires, en términos relativos, no actúan con igual intensidad entre las unidades ecológicas: a) los factores de manejo, como la mayor cobertura de cultivos, explican la menor riqueza, abundancia total de especies y de especies de pastizal en la Pampa Ondulada y b) los factores ambientales, como la presencia de ambientes acuáticos, explican gran parte de las variaciones en la abundancia de las especies del ensamble de la Pampa Interior Plana y la Deprimida, en donde algunas especies asociadas a áreas ganaderas y a ambientes acuáticos, parecen tener un protagonismo más acentuado. Por otro lado, las diferencias en las estructuras de los ensambles en las diferentes unidades también estuvieron relacionadas con aspectos biogeográficos, de historia de uso y con los patrones de migración y movimientos locales de las aves residentes. Nuevamente, si bien los efectos de estos procesos se extienden sobre toda la provincia de Buenos Aires, en términos relativos, no actúan con igual intensidad entre las unidades ecológicas: a) los factores biogeográficos son más importantes en la Pampa Ondulada (se observó una mayor proporción de especies raras que ingresan al área procedentes del bosque ribereño); b) los factores de historia de uso son más importantes en la Pampa Ondulada (una mayor historia agrícola se refleja en una menor riqueza y abundancia de especies de pastizal); y c) los efectos de los movimientos migratorios son más importantes en la Pampa Austral (se observó una menor cantidad de especies migrantes invernales), en tanto que los movimientos locales de especies residentes son más importantes en la Pampa Deprimida (gran variación estacional en la abundancia de especies palustres). En total, un conjunto de 26 especies mostraron una alta sensibilidad a las coberturas de uso de la tierra que integran el paisaje rural de los agroecosistemas pampeanos incluidos en la provincia de Buenos Aires. La combinación de las diferentes coberturas de los hábitats bajo manejo agrícola - ganaderos como así también la presencia de otros hábitats con baja cobertura (arboledas, borde de camino y ambiente acuático), influyeron sobre la composición y la abundancia de las aves del ensamble, tanto en el período reproductivo, como en el no reproductivo. Las respuestas de las aves fueron del tipo especie-específicas más que por el tipo de estatus de residencia o la pertenencia gremial de las especies. No obstante, tal como se esperaba, un gran número de especies de pastizal se asoció fuertemente a paisajes con ambientes de pastos cortos y altos, lo que evidencia, en este caso, un tipo de respuesta grupal por parte de un conjunto de especies a la composición del paisaje. Los resultados indicaron que la heterogeneidad del paisaje y las diferentes coberturas de uso de la tierra explican una parte significativa de la variación de la riqueza de especies de los grupos estudiados en los agroecosistemas de la Región Pampeana. Este resultado concuerda con la Hipótesis de la heterogeneidad de hábitat, que postula que un mayor número de tipos de coberturas y heterogeneidad del paisaje aportan una mayor diversidad de nichos y de formas de explotar los recursos, lo que en última instancia permite satisfacer las necesidades de diferentes grupos de especies. No obstante esta coincidencia en general con la hipótesis, se encontró que la relación funcional entre la riqueza y la heterogeneidad fue afectada por la estacionalidad, siendo la respuesta de la riqueza a la heterogeneidad del paisaje más sensible durante el período reproductivo que durante el no reproductivo. Por otro lado, sendos análisis de regresión indicaron que la riqueza aumenta sensiblemente con el incremento de las coberturas de pastizal y de bordes de caminos y disminuye sensiblemente con el aumento de los cultivos de soja. El conjunto de los resultados indica que tanto el uso de la tierra como las características del paisaje influyen sobre la riqueza, la composición y la abundancia del ensamble de aves en los agroecosistemas de la provincia de Buenos Aires y que, actualmente, estos ensambles cuentan con un grupo de especies fuertemente asociadas a las características del paisaje original (pastizales y céspedes) y, sumado a ello, un nuevo grupo de especies provenientes del Espinal y del Chaco, que habrían ingresado a la región siguiendo los nuevos elementos del paisaje introducidos en la Pampa, como las arboledas y los peridomicilios, en donde encuentran hábitats apropiados en donde establecerse. Las características de los ensambles nos permiten proponer que si se mantiene la actual intensificación de la agricultura y sus factores asociados, en particular los cambios en las cobertura de uso de la tierra basado en la expansión del cultivo de soja y una mayor tendencia hacia la homogeneización del paisaje, es probable que se afecte severamente a las especies especialistas de pastizales, que históricamente han sido comunes en los ensambles de aves de la Región Pampeana.

Abstract:
During January 2006 – 2008, I studied on a seasonal basis the structure of bird assemblages in agroecosystems comprising the different ecological units of the Pampean Region included in Buenos Aires province (the Rolling Pampa, the Flat Inland Pampa, the Sandy Inland Pampa, the Flooding Pampa and the Southern Pampa). The aims of this Thesis are: a) to describe the structure of landbird assemblages in agroecosystems of Buenos Aires province, b) to compare the structure of landbird assemblages among the different ecological units and to analyze their associations with land use patterns in each unit, c) to assess the association between the abundance and composition of bird assemblages with landscape characteristics, and d) to assess the functional relationship between species richness with landscape heterogeneity and composition. I recorded a total of 115 landbird species. Most of the species included in the landbird assemblage of the agroecosystems of Buenos Aires province are resident and insectivorous species with general nesting habits, even though there is also a group of habitat specialist species (mainly grassland birds, but also some wetland and woodlot birds), with a low constancy on transect samplings (suggesting a more restricted geographical distribution). Comparison among the ecological units of the Pampean Region included in Buenos Aires province showed consistency with the Pool Species Hypothesis, which states that the species composition and richness of a local assemblage is only a fraction of the potential pool of species available at a regional scale, since this regional pool receives the action of several “filters” related to management and environmental factors. Even if these filters extend all over the Pampas, their relative effects act with different intensity across the ecological units of the Pampas: management factors linked to agriculturization act stronger at the Rolling Pampas (reducing species richness, particularly grassland species), whereas environmental factors, such as the presence of wetlands, act more strongly at the Flat Inland Pampa and the Flooding Pampa (increasing species richness and bird abundance). Moreover, differences in bird assemblages among ecological units are related to biogeographic, historical and migration factors, and again, their relative effects vary among units: biogeographic and historic effects were more evident in the Rolling Pampas (where many rare species enter to the area from the Paraná-Plata system and some grassland species are missing), whereas migratory effects acted strongly at the Southern Pampa (where less wintering migrants are missing), and local movement effects were more evident at the Flooding Pampa (with a great seasonal variation in wetland bird species). In total, a group of 26 species showed a great sensitivity to the land covers in the rural landscape included in the agroecosystems of Buenos Aires province. Most responses were species-specific rather than related to a certain status or trophic guild. However, as expected, many grassland specialists showed a great association with both short and tall grassland cover. Both landscape heterogeneity and the different land covers explained a significant fraction of species richness variation. These results are in agreement with the Habitat heterogeneity hypothesis, which states that higher habitat heterogeneity provides greater niche diversity, thus increasing chances for more species richness. However, it should be noted that the functional response of species richness to habitat heterogeneity varied seasonally, being more evident during the breeding season. Moreover, species richness significantly increased with grassland cover and with the amount of spontaneous vegetation along dirty roads and fence lines, and strongly decreased with the amount of soybean crops. All these evidences indicate that land use patterns along with landscape characteristics influence on species composition, richness and abundance of bird assemblages in agroecosystems of Buenos Aires province. At present, these assemblages has a group of bird species deeply related to the original grassland landscape, and a more recent group of species which entered to the Pampean region from the biogeographic regions of the Chaco and the Espinal following the introduction of woodlots and peridomestic areas in the Pampean landscape. Finally, these results show that if this trend of soy expansion and habitat homogenization continues in the agroecosystems of the Pampas, it is highly probable that many bird species will be affected, particularly many of the grassland specialists that were formerly common species in this region.

Cánepa, Maximiliano Martín. "Variaciones de la hormona hipofisaria somatolactina en la adaptación a los cambios de coloración del entorno en Cichlasoma dimerus" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En peces, el control de la coloración corporal está regulada por múltiples hormonas y por el sistema nervioso autónomo (SNA). En esta Tesis se propone también a Somatolactina (SL) como factor involucrado en este proceso. En primer lugar se clonó y secuenció a SL y su receptor putativo, el receptor de hormona de crecimiento tipo 1 (RGH1) en el pez cíclido, Cichlasoma dimerus. El análisis filogenético de ambos indica que se encuentran altamente conservados entre los peces del superorden Acanthopterygii tales como medaka, Oryzias latipes, y tilapia, Oreochromis mossambicus. Posteriormente, se evaluó la expresión de SL en hipófisis y el RGH1 en el tegumento mostrando que la expresión de ambos es mayor en animales mantenidos en un entorno negro. A continuación, se observó que las fibras inmunoreactivas (ir-) a MCH (hormona concentradora de melanina) y fibras ir-GnRH (hormona liberadora de gonadotrofinas) están relacionadas morfológicamente con las células de SL. Por último, estudios de liberación de SL a partir de hipófisis intactas en cultivo mostraron que tanto MCH como GnRH actúan como factores liberadores de SL. A partir de los resultados de esta Tesis se concluye que SL forma parte de un sistema multifactorial de regulación de la adaptación de la coloración del entorno actuando directamente sobre el tegumento.

Abstract:
In fish, background color adaptation is regulated by multiple hormones and the autonomic nervous system. In this Thesis somatolactin is proposed as a factor involved in such process. Firstly, Cichlasoma dimerus SL and its putative receptor, growth hormone receptor type 1 (GHR1) were cloned and sequenced. The phylogenetic analysis showed that both proteins were highly conserved among species from the superorder Acanthopterygii such as the medaka, Oryzias latipes, and the Tilapia, Oreochromis mossambicus. Secondly, the expression of both was assessed under black and white background showing a higher expression in animals maintained in the black one. Then, a close association between immunoreactive (ir-) MCH (melanin concentrating hormone) or ir-GnRH (gonadotropin-releasing hormone) fibers and SL cells was found. Finally, MCH and GnRH increased somatolactin release in pituitary cultures. The results obtained in this Thesis suggest that SL takes part of a multifactorial regulation system of background color adaptation having probably a direct effect on the integument color.

Chemisquy, María Amelia. "Las orquídeas del género Gavilea Poepp: sistemática, taxonomía, biogeografía y conservación" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Gavilea es un género de orquídeas terrestres, que habitan en la zona húmeda sur-occidental de Argentina, desde Neuquén hasta Tierra del Fuego e Islas Malvinas y en Chile desde la V Región hasta la XII Región. Las especies de Gavilea han sido tratadas parcialmente en floras regionales o en revisiones parciales del género, faltando una revisión taxonómica global que incluya tanto las especies argentinas como chilenas de Gavilea. Se realizó la primera filogenia del género Gavilea y los restantes taxones de la subtribu Chloraeinae, utilizando tres marcadores del cloroplasto y un marcador nuclear. La filogenia muestra que la subtribu Chloraeinae es monofilética, mientras que para recuperar la monofilia de Gavilea fue necesario redefinir los límites del género. Se realizó una revisión taxonómica de Gavilea abarcando todas las especies que lo componen. Se esclareció la identidad de taxones confusos, se propuso una nueva especie y una nueva combinación, se actualizó la lista de sinónimos y se elaboró la primera clave que abarca a las 17 especies del género. Utilizando técnicas de reloj molecular se estimaron las fechas de divergencia de la subtribu Chloraeinae, el género Gavilea y otros clados relevantes. Se discuten los eventos climáticos que pudieron haber llevado al surgimiento de estos grupos. Finalmente, se evaluó el estado de conservación de las especies de Gavilea, indicando cuales son las más vulnerables y sugiriendo futuros estudios para conservarlas.

Abstract:
Gavilea is a genus of terrestrial orchids inhabiting the southern forests of Argentina, from Neuquén to Tierra del Fuego e Islas Malvinas and in Chile from the V Region to the XII Region. The species of Gavilea have been partially treated in local floras or partial revisions of the genus, but a global revision, comprising both the Argentinean and the Chilean species of Gavilea is still missing. In this thesis, the first phylogenetic analysis of the genus Gavilea and the remaining taxa of subtribe Chloraeinae was performed, using three molecular markers from the chloroplast and one nuclear marker. The resulting trees showed that the subtribe Chloraeinae is monophyletic, while in order to recover the monophyly of Gavilea, the genus had to be redefined. A taxonomic revision of Gavilea was carried out, including all the species of the genus. The identity of unclear taxa was solved, a new species and a new combination were proposed, the list of synonyms was updated and the first key comprising the 17 species of the genus was made. Using the relax clock methodology, the divergence time of the subtribe Chloraeinae, the genus Gavilea and other important clades of the group were estimated. The climatic events that may have caused the emergence of these groups are presented and discussed. Finally, the conservation status of all the species of Gavilea was evaluated, indicating the most vulnerable species and proposing future analyses related with the conservation of the genus.

Chemes, Lucía Beatriz. "La proteína supresora de tumores Retinoblastoma: caracterización de su dominio AB y mecanismo de interacción con la oncoproteína E7 del papilomavirus humano" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La proteína supresora de tumores retinoblastoma (Rb) es una proteína "hub" o central que juega un rol central en el control del ciclo celular en células eucariotas, y su inactivación funcional se encuentra asociada a la progresión del cáncer en humanos. En particular, la interacción de la proteína HPV-E7 con Rb se encuentra relacionada al poder oncogénico del papilomavirus humano (HPV). El atraso en los estudios estructura-función de Rb se debe en gran medida a la dificultad para la producción recombinante y el estudio en solución de esta proteína o sus dominios. En la presente tesis, nos avocamos al estudio en solución del dominio RbAB humano, que media una gran parte de las funciones de esta proteína incluyendo la interacción con HPV E7. Para ello, desarrollamos un protocolo para su expresión recombinante que permitió obtener rendimientos de 6 mg/litro con una pureza final mayor al 95%. Estudios biofísicos revelaron que RbAB se encuentra en solución como un monómero plegado a 20°C. RbAB es marginalmente estable a temperatura fisiológica, y estudios de plegamiento sugieren que los sub-dominios RbA y RbB tienen diferente estabilidad en solución. Estos estudios representan el primer análisis sobre las propiedades conformacionales en solución de este dominio. En la segunda parte de la tesis realizamos un análisis termodinámico y cinético de la interacción entre RbAB y HPV16-E7 en solución. Estos estudios revelaron que el 90% de la energía de interacción es aportado por el motivo lineal de alta afinidad LxCxE, pero que otros sitios secundarios en E7 participan de la interacción con el dominio RbAB, indicando que la misma es de carácter modular. El caracter intrínsecamente desordenado de E7 modula la interacción, y la fosforilación de la región CKII-PEST potencia la afinidad del complejo. Estudios cinéticos revelaron que la unión del motivo LxCxE a RbAB sigue un mecanismo de dos estados, con una asociación rápida y un tiempo de vida en el órden de 20-200 seg. El complejo E7-RbAB se encuentra estabilizado por interacciones de tipo electrostático, que podrían determinar al menos en parte la especificidad de la interacción de las diferentes proteínas E7 de papilomavirus. El estudio mecanístico de las interacciones proteína-proteína es esencial para comprender el funcionamiento de las intrincadas redes de interacción presentes en las células, y la presente tesis aporta información sobre una de estas interacciones, tomando como proteína modelo a una proteína clave para el desarrollo de tumores humanos. Dado que el motivo LxCxE se encuentra conservado en numerosas proteínas virales y celulares que unen a Rb, los estudios presentados sientan las bases para el análisis de los mecanismos que permiten la discriminación de diversas proteínas que compitan por la unión al "surco LxCxE"

Abstract:
The retinoblastoma tumor suppressor protein (Rb) is a hub protein wich plays a central role in cell cycle regulation in eukaryotic cells, and whose functional inactivation is associated with tumor progression in humans. In particular, the oncogenicity of high-risk human papillomavirus (HPV) depends critically on the interaction of one of its proteins, HPV-E7, with Rb. The delay in the understanding of structure-function relationships for Rb is due, to a large extent, to the difficulty in obtaining large quantities of pure protein which is amenable to biophysical analyses. In the present thesis, we studied the biophysical and interaction properties of the human RbAB domain, which mediates many of Rb's functions, amongst them the interaction with E7. We developed a protocol for its recombinant expression which allowed us to obtain up to 6 mg/liter of recombinant protein with >95% purity. Biophysical studies showed that RbAB is a folded monomer at 20°C, but that it has marginal stability at the mammalian body temperature (37°C). Folding studies strongly suggest that the A and B domains have different thermodynamic stability. This work represents the first study of conformational properties of the RbAB domain in solution. In the second part of this thesis, we performed thermodynamic and kinetic analysis of the interaction between HPV-E7 and RbAB. These studies showed that 90% of the binding free energy is provided by the high affinity LxCxE linear motif, but that multiple regions in E7 additionally participate of the interaction, pointing to its modular nature. The intrinsically disordered nature of E7 modulates binding, and phosphorylation at a conserved CKII-PEST site potentiates binding affinity. Kinetic studies revealed that the LxCxE motif binds through a two-state route with a fast association, which is favoured by electrostatic interactions, and a complex lifetime of 20-200s. The electrostatic nature of the interaction may explain at least in part the binding specificity of different papillomavirus E7 proteins. The mechanistic study of protein-protein interactions is essential to the understanding of the complex cellular protein interaction networks, and the present thesis provides biophysical information on one of these interactions, using the E7-Rb interaction as a model system. Given that the LxCxE motif is conserved throughout viral and cellular Rb partners, the information provided by this work may set the grounds for analyzing the mechanisms of discrimination of multiple possible targets which bind the "LxCxE cleft".

Chaneton, Luciano. "Nuevos enfoques en el diagnóstico, prevención y tratamiento de la mastitis bovina a través del uso de moléculas con acción antimicrobiana" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis fue caracterizar el papel de lactoferrina (LF) y otros factores solubles endógenos, en la defensa de la glándula mamaria contra la infección. También, se buscó analizar la potencial aplicación de estos elementos para el diagnóstico y la predicción de la mastitis bovina y para la generación de ganado resistente a esta enfermedad. Para abordar estos objetivos se realizaron estudios bioquímicos, microbiológicos y epidemiológicos que se presentan en 4 apartados de resultados. En el primer apartado de resultados se propuso estudiar la relación entre el incremento de los niveles de LF asociados a la infección intramamaria y el agente causal involucrado. Los resultados obtenidos muestran que la concentración de LF aumenta con la infección clínica o subclínica y que la infección con Streptococcus uberis está asociada a mayores niveles de LF en leche. Además se demostró que Strep. uberis es capaz de inducir la síntesis de LF in vitro y que este microorganismos es resistente a LF, lo que estaría indicando una asociación entre la respuesta mediada por LF a la infección y la sensibilidad a LF de los patógenos. En el segundo apartado de resultados se profundizaron los hallazgos del primero realizando un estudio de cohorte de 80 vacas durante una lactancia completa. Los resultados obtenidos permitieron determinar que la respuesta de LF es mayor en los primeros días de lactancia; que los cuartos mamarios positivos para infecciones presentan también concentraciones de LF aumentadas antes y después de la infección y que cuartos con mayores concentraciones de LF durante el periparto presentan mayor riesgo de infectarse durante la lactancia. En el tercer apartado de resultados se analizó la actividad antimicrobiana de β- lactoglobulina (β-LG) sobre bacterias causantes de mastitis. Se demostró que β-LG inhibe el crecimiento in vitro de Staphylococcus aureus y Strep. uberis pero no el de Escherichia coli en forma dosis dependiente. Este espectro de inhibición parece complementario al de LF. Además, se hallaron diferencias de actividad específica entre dos variantes alélicas de β-LG: β- LG A y β-LG. Por último se demostró que LF y β-LG pueden actuar en conjunto para inhibir el crecimiento de Strep. uberis y Staph. aureus. En el cuarto apartado de resultados se realizaron digestiones enzimáticas de LF y los péptidos obtenidos fueron caracterizados bioquímica y microbiológicamente. Uno de estos péptidos, identificado como la molécula lactoferricina (LFcin), presentó mayor actividad antimicrobiana que LF y una cinética de inhibición diferente. El péptido LFcin fue expresado en forma recombinante como proteína de fusión con β-LG en células CHO. Esta proteína quimérica demostró alta actividad antimicrobiana contra Staph. aureus y Strep. uberis pero no contra E. coli. En conjunto, los resultados presentados en este trabajo de tesis aportan información relevante sobre el papel de LF y β-LG en la infección intramamaria y sobre la potencial aplicación diagnóstica y terapéutica de estos elementos.

Abstract:
The aim of this thesis was to characterize the role of lactoferrin (LF) and other soluble factors in the defense of the mammary gland against infections. Additionally, we aimed to analyze the potential application of these elements in the diagnosis and prediction of bovine mastitis and in the generation of disease resistant cattle. To address these objectives we carried out biochemical, microbiological and epidemiological studies that are presented in 4 sections of results. In the first section we examined the relationship between the increase in LF levels associated with intramammary infection and the involved etiologic agent. Our results showed that the LF concentration increases upon clinical or subclinical infection and that infection with Streptococcus uberis is associated with the highest levels of LF in milk. We also showed that the challenge with Strep. uberis induced the synthesis of LF in vitro and that this microorganism is resistant to LF which suggests an association between infection response mediated by LF and pathogen susceptibility to this protein. In the second section, we extended the findings made in section 1. To do that, we carried out a longitudinal study over 80 cows during a complete lactation. The results indicated that: 1) LF response to infection is greater in the early days of lactation than in later stages. 2) infected quarters presented augmented levels of LF at sample times before and after the time of infection 3) quarters with higher concentrations of LF during peripartum presented increased risk of becoming infected afterwards. In the third section we analyzed the antimicrobial activity of β-lactoglobulin (β-LG) towards mastitis-causing bacteria. We demonstrated that β-LG inhibits the growth of Staphylococcus aureus and Strep. uberis but not Escherichia coli in a dose-dependent manner. This inhibition spectrum was complementary to the observed for LF. We also found differences in specific activity between two allelic variants of β-LG: β-LG A and β-LG. Finally, we showed that LF and β-LG can act together to inhibit the growth of Strep. uberis and Staph. aureus. In the fourth section, we performed enzymatic digestions of LF and the resulting peptides were characterized by means of biochemical and microbiological methods. One of the peptides obtained, identified as the molecule lactoferricin (LFcin), showed higher antimicrobial activity and different inhibition kinetics compared to LF. LFcin was expressed as a recombinant fusion protein with β-LG. When expressed in CHO cells, this chimeric protein showed high antimicrobial activity against Staph. aureus and Strep. uberis but not against E. coli. Overall, the results presented in this thesis provide relevant information on the role of LF and β-LG in intramammary infection and on the potential application of these molecules in the fight against bovine mastitis.

Cedrina, Lorena Valeria. "Procesamiento de señales de georadar: implementación del método de arreglos sintéticos de antenas emisoras" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El principal objetivo de esta Tesis es introducir el método de arreglos sintéticos de emisores de georadar y desarrollar las técnicas y herramientas básicas para hacer efectiva su implementación. Los métodos usuales de cobertura simple permiten resolver muy diversas situaciones experimentales. En particular los estudios realizados en la zona de Palo Blanco permitieron caracterizar adecuadamente estructuras arqueológicas con bajo contraste con el medio circundante. En algunas situaciones las señales son muy débiles y es necesario utilizar otras metodologías, con cobertura múltiple, para mejorar su visibilidad. Pero las metodologías usuales de cobertura múltiple, tales como la de punto medio común, también presentan limitaciones, ya que en algunos casos las mejoras que se logran no son suficientes. En este contexto se propone el método de arreglos sintéticos de emisores de georadar, en el que se consideran arreglos de antenas para obtener zonas iluminadas más estrechas, concentrando la energía sobre los blancos de interés, y disminuyéndola en las zonas periféricas, generadoras de señales secundarias. Mediante esta metodología de cobertura múltiple se logra mejorar la relación de intensidad de la señal primaria respecto de otras señales secundarias, así como su continuidad lateral. Los resultados obtenidos en el presente trabajo mostraron beneficios significativos en cuanto a la aplicación de este nuevo método en georadar, para estudiar reflectores que generan solamente señales muy tenues y para mejorar en forma selectiva señales originadas en distintos objetos, lo que constituye un paso fundamental para continuar con el desarrollo del método.

Abstract:
The main objective of this Thesis is to introduce the synthetic emitter array method and to develop the basic tools and techniques for its implementation. Usual single offset methods allow solving many different experimental situations. In particular, studies in the area of Palo Blanco allowed adequately characterizing archaeological structures with low contrast respect to the surrounding environment. In some situations signals are very weak and then other methodologies, with multiple offset, have to be used to improve its visibility. But the usual multi-offset methodologies, such as common midpoint, also have limitations, since in some cases the improvements are not suffcient for a clear characterization of the target. In this context, the synthetic emitter array method is proposed. This method employs emitter arrays to narrow the illumination area, thus concentrating the energy on the targets of interest and reducing it in peripheral areas, which generate secondary signals. Through this multi-offset methodology we increase the signal to noise ratio and the lateral coherence of the events, thus significantly improving the definition of very weak signals and the resolution of signals originated at different objects.

Ceballos, Leonardo Adrián. "Ciclo silvestre de transmisión de Trypanosoma cruzi en el noroeste de Argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La enfermedad de Chagas mantiene ciclos de transmisión tanto domésticos como silvestres. Con el fin de avanzar en el conocimiento sobre el ciclo silvestre de transmisión de T. cruzi en la región del Gran Chaco, se realizaron los siguientes estudios: a) Prevalencia de infección por T. cruzi en mamíferos silvestres tras dos décadas de control vectorial sostenido de T. infestans. Se determinó la prevalencia de infección de T. cruzi en mamíferos silvestres alrededor de ocho parajes rurales en una zona semiárida de Santiago del Estero entre 2002-2007, donde los tres parajes núcleo del área habían sido estudiados con el mismo objetivo dos décadas atrás (1984-1991). Se observaron variaciones a largo plazo en la dinámica e intensidad de la transmisión silvestre de T. cruzi al comparar ambos períodos. Se analizaron mediante xenodiagnóstico 605 mamíferos silvestres pertenecientes a 19 especies identificadas. Solo 4 (9,1%) de 48 zarigüeyas (Didelphis albiventris) y 1 (0,9%) de 107 zorrinos (Conepatus chinga) estuvieron infectados por T. cruzi. La prevalencia de infección por T. cruzi de las zarigüeyas del periodo entre 2002-2007 fue casi cuatro veces menor que en 1984-1991 y aumentó con la edad; la mayor prevalencia se detectó en primavera y la menor en otoño en ambos periodos de estudio. La prevalencia de infección de los zorrinos también disminuyó cinco veces entre ambos periodos. La fuerza de infección promedio de las zarigüeyas cayó más de 5 veces, desde 8,2 por cada 100 meses- zarigüeya entre 1988-1991 a 1,6 entre 2002-2007. En ambos periodos la Unidad Discreta de Tipificación (UDT) predominante en las zarigüeyas fue TcI, mientras que en los zorrinos fue TcV entre 1984-1991 y TcIII entre 2002-2007. Se discute si la deforestación masiva, cambios en la fauna silvestre y la muy reducida infestación por T. infestans en hábitats domésticos y peridomésticos desde 1992 hasta 2007 (debido al control vectorial por rociados con insecticidas) podrían explicar la importante disminución de la infección por T. cruzi en sus principales reservorios silvestres. b) Estudio de focos silvestres de T. infestans y otros triatominos en el chaco seco santiagueño. Se realizaron búsquedas de triatominos en el medio silvestre con el fin de investigar cuál o cuáles eran los vectores involucrados en la transmisión de T. cruzi. El principal resultado fue el inesperado hallazgo de varias colonias de T. infestans alejadas hasta 1.900 m de las casas más cercanas, y a 2.300 m de la casa más cercana con infestación detectada en las evaluaciones entomológicas después de un rociado de insecticidas con poder residual de todas las viviendas realizado 18 meses previos al hallazgo. Este es el primer hallazgo confirmado de múltiples colonias de T. infestans en hábitats silvestres fuera de Bolivia. A diferencia de otras capturas aisladas de T. infestans en el pasado, los hallazgos presentes de T. infestans en hábitats silvestres se realizaron en el contexto de la fase de vigilancia, con muy pocos focos (peri)domésticos de baja densidad en un bosque xerófilo secundario con diferentes grados de degradación. De los 174 triatominos silvestres totales capturados (24 Triatoma infestans, 138 Triatoma guasayana, 4 Triatoma garciabesi, 1 Triatoma platensis y 7 ninfas pequeñas no identificadas), 7 T. guasayana y 2 T. infestans fueron detectadas infectadas por T. cruzi mediante PCR-kADN. Estudios complementarios realizados con marcadores de ADN mitocondrial y de microsatélites, morfometría geométrica de alas y análisis espacial, permitieron concluir que los T. infestans hallados en hábitats silvestres muy probablemente eran derivados de poblaciones (peri)domésticas. Se discute si los hábitats silvestres proveerían un refugio efímero o permanente para las poblaciones (peri)domésticas de T. infestans después de las intervenciones con insecticidas y si las colonias serían viables en ausencia de inmigración. c) Estudio de focos silvestres de T. infestans melánicos en el chaco argentino. Siguiendo la identificación tentativa como T. infestans de dos triatominos melánicos colectados de nidos de loros en una reserva natural protegida del chaco argentino, se realizó una búsqueda intensiva dirigida a su captura. El muestreo abarcó tanto árboles con nidos de psitácidos (i.e., Amazona aestiva y Aratinga acuticaudata) como otros ecotopos (i.e., árboles vivos o muertos y troncos, ambos en pie o en el suelo, etc.). De un total de 33 triatominos silvestres capturados, 14 eran T. infestans. Todos los T. infestans adultos o ninfas que se pudieron criar hasta adulto fueron melánicos. La mayoría (64%) de los triatominos (incluyendo 10 T. infestans) fueron colectados de huecos en troncos de quebrachos que albergaban nidos de loros. Todos los T. infestans colectados en la vivienda infestada más cercana, localizada a 8 km del foco silvestre más cercano, mostraron caracteres cromáticos normales. Éste es el primer hallazgo confirmado de colonias de T. infestans en hábitats silvestres y melánicos (‘dark morphs’) en el chaco argentino. Los resultados aquí presentados refuerzan el rol que tienen de las zarigüeyas (D. albiventris) como hospedador silvestre de T. cruzi, ponen en relieve el hecho que existen focos silvestres de T. infestans mucho más frecuentemente que lo aceptado hasta ahora, remarcando una potencial fuente de reinfestación del ambiente humano habitualmente no tenida en cuenta por los programas de control vectorial, y apoyan la hipótesis que T. guasayana es el principal vector silvestre de T. cruzi en el área.

Abstract:
Chagas disease has both domestic and sylvatic transmission cycles. In order to have a better understanding of the sylvatic transmission cycle of T. cruzi in the Gran Chaco region, the following studies have been carried out: a) Prevalence of infection with T. cruzi in wild mammals after two decades of sustained vector surveillance of T. infestans. The prevalence of infection with T. cruzi in wild mammals was determined in eight rural villages in a semiarid region of Santiago del Estero during the years 2002-2007. The 3 central villages in the study area had been studied with the same goal two decades before (1984-1991). Long-term variations in the dynamics and intensity of the sylvatic transmission of T. cruzi were observed when comparing the two time periods. A total of 605 wild mammals divided into 19 identified species was examined by xenodiagnosis. Only 4 (9.1%) of 48 opossums (Didelphis albiventris) and 1 (0.9%) of 107 skunks (Conepatus chinga) were infected with T. cruzi. The prevalence of infection with T. cruzi in opossums during the period 2002-2007 was almost 4 times lower than during 1984- 1991 and increased with age; the highest infection prevalence was detected in spring and the lowest in the fall in both study periods. The prevalence of infection in skunks was also 5 times lower when comparing the two time periods. The average force of infection in opossums decreased more than 5 times, from 8.2 per 100 opossum-months during 1988-1991 to 1.6 during 2002-2007. In both periods the main Discrete Typing Unit (DTU) in opossums was TcI whereas in skunks was TcV during 1984-1991 and TcIII during 2002-2007. We bring into discussion whether massive deforestation, changes in wildlife and the very reduced infestation with T. infestans in domestic and peridomestic habitats from 2002 to 2007 (due to vector control with insecticide spraying), could explain the dramatic decrease of T. cruzi infection in the main sylvatic reservoir hosts. b) Study of sylvatic foci of T. infestans and other triatomines in Santiago del Estero’s arid chaco. Searches of triatomines in the wild were undertaken in order to assess which were the vectors involved in the transmission of T. cruzi. The main result was the unexpected finding of several T. infestans colonies located up to 1900 m of the nearest house, and more than 2 km from the nearest house with infestation detected during the previous 18 months after a community-wide residual spraying with insecticides. This is the first confirmed finding of multiple T. infestans colonies in wild habitats outside Bolivia. Unlike previous, isolated captures of T. infestans, the present findings of T. infestans in wild habitats were obtained in the context of surveillance efforts, when very few (peri)domestic foci T. infestans with low-density occurred in a secondary xerophytic forest. Among the 174 triatomines captured (24 T. infestans, 138 Triatoma guasayana, 4 Triatoma garciabesi, 1 Triatoma platensis and 7 unidentified small nymphs), T. cruzi infection was detected by kDNA-PCR in 7 T. guasayana and 2 T. infestans. Further complementary studies done with mitochondrial DNA markers and microsatellites, wing geometric morphometry and spatial analysis, led to the conclusion that the T. infestans found in wild habitats were probably derived from (peri)domestic populations. We discuss whether wild habitats provide an ephemeral or permanent refuge for (peri)domestic T. infestans populations after the intervention with insecticides, and whether the colonies would be viable in the absence of immigration. c) Study of sylvatic foci of dark morphs T. infestans in argentine chaco. Taking into account the tentative identification of two dark morph specimens that were collected from parrots’ nests in a natural protected reserve of the Argentine chaco as T. infestans, intensive searches towards its capture were undertaken there. The search sites comprised trees with psitacids nests (i.e., Amazona aestiva y Aratinga acuticaudata) as well as other ecotopes (i.e., living or dead trees and trunks, standing or on the ground, etc). Of 33 wild triatomines captured, 14 were T. infestans. All the adult T. infestans or nymphs that succeeded in growing to the adult stage were dark morphs. Most of the triatomines (64%, including 10 T. infestans) were collected from holes in ‘quebracho’ tree trunks that harbored parrots’ nests. All of the T. infestans collected in the closest infested house -8 km away to the closest sylvatic focus- displayed normal chromatic characters. This is the first confirmed finding of T. infestans colonies in wild habitats and of dark morphs in the Argentine chaco. The results presented here reinforce the role of opossums (D. albiventris) as sylvatic T. cruzi reservoir hosts, stands out the fact that sylvatic T. infestans foci appeared to be more frequent than accepted until now, highlighting a potential source of reinfestation of the human environment, usually not taken into account by the vector control programs, and support the hypothesis that T. guasayana is the main sylvatic vector of T. cruzi in the area.

Castro, María Ana. "Polímeros de coordinación mesogénicos basados en carboxilatos bimetálicos: modelado de propiedades y arquitectura supramolecular" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Los polímeros de coordinación líquido cristalinos conforman una clase de materiales que se espera presenten las propiedades correspondientes tanto a los polímeros de coordinación como a los cristales líquidos (CL) que contienen metales. Entre ellos, los carboxilatos bimetálicos han sido estudiados detalladamente en los últimos años con el objetivo de obtener estructuras unidimensionales que sean macroscópicamente orientables. En este contexto, el propósito de esta tesis es interpretar y predecir las propiedades físicas y la estructura supramolecular de estos materiales combinando métodos experimentales y computacionales. En una primera etapa se validó la metodología MC (mecano-cuántica) elegida para el análisis calculando algunas propiedades fisicoquímicas seleccionadas (geometría molecular, espectros UV-Vis) para varias unidades binucleares monoméricas. Las propiedades predichas resultaron consistentes con las medidas experimentalmente. Esto permitió interpretar tendencias en las propiedades de la serie - y analizar aspectos conformacionales en oligómeros superiores. Se utilizó también un enfoque MC, el método broken symmetry (BS), para interpretar las interacciones magnéticas observadas entre los centros metálicos en un complejo hexanuclear de cobre cristalizado en el laboratorio. El mismo presentó dos tipos de acoplamiento distintos que fueron correlacionados con la estructura y racionalizados a través de la determinación de las vías principales de interacción. Se utilizó la misma metodología para estudiar la influencia del ligando puente sobre la deslocalización electrónica de manera de establecer la combinación metal-ligando que la maximiza. En esta dirección, se utilizó nuevamente el método BS para estimar las interacciones magnéticas ya que la magnitud de estas interacciones es un parámetro cuantitativo para analizar la comunicación entre centros metálicos. Estos resultados sugirieron que el complejo de rutenio divalente con tetrazina como ligando puente era el mejor candidato para obtener deslocalización electrónica y, por este motivo, fue sintetizado y caracterizado en el laboratorio. Finalmente, se analizaron los factores que determinan las estructuras supramoleculares observadas en fase cristalina y fase CL para carboxilatos de rutenio poliméricos utilizando métodos MC y MM (mecánica molecular). Para ello, fue necesario utilizar un campo de fuerza adecuado lo que requirió estimar los parámetros a incluir para estos sistemas en particular. Esta parametrización fue evaluada por comparación con sistemas con estructura conocida y los resultados experimentales fueron reproducidos satisfactoriamente. Esta metodología permitió analizar la influencia del ligando ecuatorial sobre la conformación del oligómero. La misma depende de un delicado balance de interacciones Pi, dipolares y de van der Waals, con una contribución importante de las interacciones entre metilos y metilenos.

Carrevedo, María Laura. "Palinoestratigrafía y palinofacies de la transición glacial-postglacial del paleozoico tardío en la precordillera sanjuanina, Argentina: aspectos paleoclimáticos, paleobiológicos y paleoambientales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Durante el estudio de las secuencias neopaleozoicas del sur de la Precordillera sanjuanina: Formaciones Tupe, Andapaico, La Deheza y Río Francia, pudieron apreciarse los registros geológicos de los eventos climáticos que afectaron este sector: glaciación gondwánica, transgresión postglacial namuriana, carbones tupenses (CT) (período de alta humedad), transgresión postglacial de fines de Pennsylvaniano-inicios del Cisuraliano, máxima aridización durante el Cisuraliano temprano y posterior mejoramiento climático (fines del Cisuraliano- inicio del Guadalupiano). Se analizó el contenido palinológico y palinofacial de estas secuencias (lapso Pennsylvaniano-Cisuraliano preferentemente), y se identificó la Biozona DM (Raistrickia densa-Convolutispora muriornata) (Mina La Delfina, Puesto Maradona y Río Francia), asociada a la transgresión postglacial namuriana y carbones tupenses. En las microfloras del evento transgresivo marino (fines del Pennsylvaniano e inicios del Cisuraliano), identificado en todas las secuencias, se destacan Anapiculatisporites tereteangulus (Balme y Hennelly) Playford y Dino, Horriditriletes ramosus (Balme y Hennelly) emend. Bharadwaj y Salujha, Converrucosisporites confluens (Archangelsky y Gamerro) Playford y Dino, Brevitriletes spp., Barakarites rotatus (Balme y Hennelly) Bharadwaj y Tiwari. En las palinofacies de los CT dominan los fitoclastos opacos equidimensionales y el tipo tablilla en la transgresión. Para ésta la materia orgánica amorfa es granular y membranosa y variable para los CT. En ambos eventos están presentes las Prasinophyta (abundan para CT) y ausentes los acritarcas. También se documentan palinológicamente los eventos posteriores: fluvial anastomosado (Cisuraliano temprano; Biozona Pakhapites fusus-Vittatina subsaccata) y marino transgresivo (Cisuraliano tardío-inicios del Guadalupiano; Biozona Lueckisporites-Weylandites).

Abstract:
During the study of the neopaleozoic sequences of the south of Precordillera sanjuanina: Tupe, Andapaico, La Deheza and Río Francia Formation, the geological registries of the climatic events that affected this sector could be distinguished: gondwanic glaciation, namurian postglacial transgression, Tupe coals (period of high humidity), postglacial trangression of Pennsylvanian ends- Cisuralian beginnings, maximum desertification during the early Cisuralian and later climatic improvement (Cisuralian ends-Guadalupian beginnings). The palynologic and palynofacial content of these sequences was analyzed, (Pennsylvaniano-Cisuraliano period preferably), and consequently was identified DM Biozone (Convolutispora muriornata-Raistrickia densa) (Mina La Delfina, Puesto Maradona, and Río Francia), associated to the namurian postglacial transgression and Tupe coals. In the palynoflora of the marine transgressive event (Pennsylvanian ends-Cisuralian beginnings), identified in all the sequences stand out: Anapiculatisporites tereteangulus (Balme and Hennelly) Playford and Dino, Horriditriletes ramosus (Balme and Hennelly) emend. Bharadwaj and Salujha, Converrucosisporites confluens (Archangelsky and Gamerro) Playford and Dino, Brevitriletes spp., Barakarites rotatus (Balme and Hennelly) Bharadwaj and Tiwari. In the palynofacies of Tupe coals dominate equidimensional opaque phytoclasts and lath- shaped type during the transgression. This presents membranous and granular amorphous organic matter, but it is variable in the CT. In both events Prasinophyte are present but acritarch are absent. Later events are also palynologically documented: fluvial anastomosed (early Cisuralian; Pakhapites fusus-Vittatina subsaccata Biozone) and sea transgressive (Later Cisuralian-Guadalupian beginnings; Lueckisporites-Weylandites Biozone).

Capece, Luciana. "Determinantes estructurales de la coordinación y activación de O2 en hemoproteínas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las hemoproteínas conforman un ubicuo grupo de proteínas que presenta una gran diversidad funcional. Las mismas comparten como grupo prostético el grupo hemo, el cual contiene un átomo de hierro al cual se coordinan los ligandos. La gran mayoría de sus funciones involucran la unión de ligandos pequeños, en particular el dioxígeno. Este ligando, luego de ser unido al hemo, puede ser almacenado, transportado, o puede estar involucrado en la realización de reacciones químicas dentro de las proteínas. En este trabajo se utilizan una gran variedad de técnicas de simulación computacional para estudiar los mecanismos de regulación de la unión de oxígeno y su posterior activación en hemoproteínas. Las metodologías empleadas consistieron desde simulaciones de dinámica molecular clásica, estudios de reactividad en sistemas modelo basados en mecánica cuántica, hasta metodologías híbridas cuántico‐clásicas que permiten el estudio de fenómenos reactivos dentro de la estructura proteica. Nos hemos concentrado en particular, en primer lugar, en los mecanismos regulatorios de la afinidad por oxígeno, determinados por las características y el entorno del sitio activo. En segundo lugar, hemos estudiado el mecanismo de coordinación endógena, en el cual el sitio de coordinación de oxígeno está ocupado por un residuo proteico. Por último, se estudió la activación de oxígeno, la unión de sustrato y el mecanismo de reacción de dos dioxigenasas hémicas. Para este último caso se realizaron estudios experimentales que complementaron las simulaciones realizadas.

Abstract:
eme proteins, the group of proteins that share the heme as its prosthetic group, consist in a ubiquitous group of proteins which displays a wide functional diversity. Most of their functions involve binding of small ligands, in particular, molecular oxygen. The heme group contains an iron atom, which is responsible of the coordination of this ligand. Depending on each protein’s function, after binding to the heme, oxygen can be stored or transported, or it can be activated to be involved in chemical reactions inside the protein matrix. In this work we use a wide variety of computational tools to study the mechanism of oxygen binding regulation and activation in heme proteins. The employed methodologies consist from classical molecular dynamics, quantum mechanics calculations on model systems, to hybrid quantum mechanics‐ molecular mechanics (QM‐MM) simulations that allow the analysis of reactive processes inside the protein matrix. In particular, we have focused in the following areas: Firstly, we have studied the regulatory mechanisms of oxygen affinity, determined by the properties and environment of the active site. Secondly, we have analyzed the endogenous coordination mechanism, by which the oxygen binding site is occupied with a protein residue. Finally, we have studied oxygen activation, substrate binding and the reaction mechanism of two heme‐dioxygenases. For this last case, experimental data were collected in order to complete the analysis performed with the simulations.

Canepa, Gaspar Exequiel. "Genomica funcional de transportadores de aminoacidos y poliaminas de Trypanosoma cruzi" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El trabajo en el que se basa esta tesis representa un aporte al conocimiento de nuevos elementos del metabolismo del parásito Trypanosoma cruzi. En particular, describe genes encargados de transportar metabolitos esenciales para este organismo. Pero, más que nada, es un aporte para una futura sistematización en el estudio de moléculas transportadoras. Acerca del organismo estudiado podemos describir al Trypanosoma cruzi como el agente causal de la enfermedad de Chagas, una enfermedad endémica en Argentina y en toda América Latina. Este parásito presenta numerosas características metabólicas diferenciales respecto a sus hospedadores insectos y mamíferos, siendo incapaz de sintetizar numerosos componentes celulares. Sin embargo, esta incapacidad metabólica es compensada mediante sistemas transportadores de múltiples metabolitos desde el hospedador. Luego de la reciente secuenciación del genoma de T.cruzi, se estima que existen al menos 374 genes que codifican para distintos transportadores distribuidos en tres grupos principales: canales iónicos, transportadores dependientes de ATP y transportadores secundarios. En este trabajo se estudio con énfasis a la familia de transportadores de aminoácidos denominada AAAP (Amino Acid Auxin Permease) de T. cruzi (TcAAAP). El estudio bioinformático de esta familia demostró que todos sus miembros poseen diferencias en sus extremos amino terminales pero tienen un alto nivel de identidad en el resto de sus secuencias, llegando hasta el 75% de similitud. Luego de evaluar diferentes estrategias para la correcta expresión heteróloga de estas moléculas, se encontraron exitosas las llevadas a cabos en ovocitos de Xenopus laevis y células de Saccharomyces cerevisiae. El modelo de ovocitos de Xenopus permitió identificar y caracterizar a un transportador con afinidad para la poliamina espermidina, la cual T. cruzi es incapaz de sintetizar de novo. En cuanto al estudio en diferentes modelos de levaduras, se logró expresar funcionalmente tres transportadores específicos para los aminoácidos prolina, arginina y lisina. En el caso de los dos primeros, estos pudieron ser caracterizados desde el punto de vista molecular y relacionados con datos bioquímicos previos, que integran el transporte de estos aminoácidos con el metabolismo energético del parásito. Finalmente, la permeasa de lisina fue extensamente estudiada. Se realizó una caracterización bioquímica del transporte de este aminoácido en epimastigotes en cultivo y se produjeron numerosas construcciones para su manipulación génica. Esta metodología se utilizó para comprobar la actividad y especificidad de la permeasa, además de su localización subcelular en el bolsillo flagelar, donde, probablemente, ocurre el ingreso de diversos metabolitos a la célula a través de transportadores. Por lo tanto y como se mencionó anteriormente, en este trabajo se identificaron y estudiaron por primera vez moléculas involucradas en el transporte de aminoácidos y poliaminas en Trypanosoma cruzi, nutrientes esenciales para la vida de este parásito.

Abstract:
The work in behind this thesis represents a contribution to knowledge of new features of the metabolism of the parasite Trypanosoma cruzi. In particular, it describes genes responsible for transporting essential metabolites for this organism. But more than anything is a contribution for future systematization in the study of carrier molecules. About the studied organism Trypanosoma cruzi, it can be described as the ethiological agent of Chagas disease, endemic in Argentina and throughout Latin America. This parasite has many differential metabolic characteristics with respect to their vector insects and host mammals, being unable to synthesize many cell components. However, this metabolic inability is compensated by multiple conveyor systems of metabolites from the host. Following recent sequenciation of the T. cruzi genome, it is estimated that there are at least 374 different genes that encode transporters distributed in three main groups: ion channels, ATP-dependent and secondary transporters. In this study we focus on the amino acid transporter family called AAAP (Amino Acid Auxin permease) of T. cruzi (TcAAAP). The bioinformatic study of this family showed that all members have differences in their amino terminal but have a high level of identity in the rest of the sequences, reaching 75% of similarity. After evaluating different strategies for the successful heterologous expression of these molecules, we found that the best ones were those carried on Xenopus laevis oocytes and Saccharomyces cerevisiae cells. The model of Xenopus oocytes allowed the identification and characterization of a transporter with affinity for the polyamine spermidine, which T. cruzi is unable to synthesize de novo. Regarding the study on different models of yeast, functional expression was achieved with three transporters specific for the amino acids proline, arginine and lysine. For the first two, they could be characterized molecularly and biochemically, findings that could be related to prior data, which includes the link between transport of these amino acids to energy metabolism of the parasite. Finally, the lysine permease was extensively studied. We performed a biochemical characterization of this amino acid transport in T. cruzi epimastigotes cultures and there were produced numerous constructs in order to manipulate its gene. This methodology was used to test the activity and specificity of the permease, in addition to its subcellular localization in the flagellar pocket, where, presumably, occurs the entry of various metabolites into the cell through transporters. Therefore, and as mentioned above, in this work were identified and first studied, molecules involved in the transport of amino acids and polyamines in Trypanosoma cruzi, nutrients essential for the life of this parasite.

Camino, Nerina Andrea. "Comportamiento de hidroxipropilmetilcelulosas y sus mezclas con ß-lactoglobulina en solución, interfases y emulsiones" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo del presente trabajo fue estudiar la funcionalidad de hidroxipropilmetilcelulosas y sus mezclas con beta-lactoglobulina en coloides alimentarios. Los estudios realizados muestran que estos polisacáridos en solución presentan un comportamiento complejo que se manifiesta en la asociación/autoensamblaje mediado por interacciónes hidrofóbicas y modulado fuertemente por el pH, como tambien por la concentración y la temperatura. A pH3 la asociación/autoensamblaje de hidroxipropilmetilcelulosas se ve impedida en solución. El grado de asociación/autoensamblaje tambien puede modificarse por la aplicación de ultrasonidos de lata intensidad, impactando en algunas propiedades físicoquímicas de las celulosas. En la interfase aceite/ agua, las hidroxipropilmetilcelulosas, especialmente las de bajo peso molecular, presentan una importante actividad, la cual está modulada tambien por el pH. Las hidroxipropilmetilcelulosas presentan buenas propiedades emulsificantes a ambos pH. En las mezclas con beta-lactoglobulina se observa la misma tendencia con la variación del pH y la concentración de los biopolimeros en las mezclas. Existe distinta interacción entre ellos lo cual afecta su comportamiento en solución y en los coloides estudiados. Asi, el conocimiento y la caracterización de estos biopolimeros permitiran la manipulación de propiedades macroscopicas de productos alimenticios, controlando las interacciónes de un modo deseable, logrando asi la optimización en el uso de los ingredientes.

Abstract:
The objective of the present work was to study the hydroxypropylmethylcelluloses and their mixtures with beta-lactoglobulin in food colloids. The studies showed that these polysaccharides have a complex behavior in solution, leading to self-assembled structures by hydrophobic interactions, strongly modulated by pH, but also by polysaccharide concentration and temperature. Particularly at pH3, the hydroxypropylmethylcelluloses self-assembly would be impeded. The self- assembly degree could also be modified by the application of highintensity ultrasound that impacted in some physico-chemical properties. At the oil-water interface, the hydroxypropylmethylcelluloses, especially those with low molecular weight, showed a high interfacial activity also modulated by pH. Good emulsifying activity was observed for all the hydroxypropylmethylcelluloses at both pH. The same was observed in the mixtures with beta-lactoglobulin as affected by pH and concentration of componenets. The different interactions observed affected their behavior in solution and in food colloids (interfaces and emulsions). Thus, the knowledge and the characterization of these biopolymers would allow the manipulation of the macroscopic properties of food products and optimizing the use of these ingredients.

Calero, Cecilia Inés. "Modulación redox de los receptores GABAc p1" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
MODULACIÓN REDOX DE LOS RECEPTORES GABACρ1: En condiciones fisiológicas en el SNC la producción de especies reactivas de oxígeno es una consecuencia natural del metabolismo celular y el posible daño oxidativo se encuentra balanceado por antioxidantes intrínsecos. La actividad de un gran número de receptores sinápticos y canales iónicos puede ser modulada por agentes redox endógenos y/o farmacológicos. Estos incluyen a los NMDAR y AChR, así como también a los GABAAR, entre otros. Aunque, los GABAAR son susceptibles a diversos agentes redox, estudios previos sugerían una falta de sensibilidad de los GABACR a este tipo de modulación. Con el fin de estudiar si compuestos con propiedades redox son capaces de modular la actividad de los GABACR se expresaron heterólogamente en ovocitos de Xenopus laevis GABACR ρ1 homoméricos (GABAρ1R), y sus respuestas -corrientes de Cl- evocadas por GABA- se registraron electrofisiológicamente. Nuestros resultados muestran que los GABAρ1R, al igual que otros miembros de la familia cys-loop, son sensibles a los agentes redox. En presencia de compuestos reductores las curvas D-R se desplazaron hacia la izquierda, mientras que los oxidantes produjeron el efecto opuesto, esto indica un aumento o una disminución, respectivamente, en la afinidad aparente por el agonista de los GABAρ1R. Asimismo, encontramos que la modulación inducida por ácido ascórbico, un antioxidante celular, presenta tanto componentes redox como alostèricos. La modulación de los GABAρ1R fue suceptible a la modificación química de los grupos sulfhidrilos y a la mutación H141D, indicando que estos sitios, localizados en el dominio extracelular, tienen un importante rol en el proceso.

Abstract:
REDOX MODULATION OF GABAC ρ1 RECEPTORS: Free radical production is a natural consequence of metabolism and the possible oxidative damage is limited by cellular antioxidant mechanisms. Activity of many receptors and channels in the CNS can be regulated by redox mechanisms. Whereas the action of redox agents has been demonstrated on GABAA receptors, the sensitivity of GABAC receptors has not been studied. Here we report the effects of ascorbic acid, together with several reducing and oxidizing agents on homomeric GABAρ1 receptors (GABAρ1R) expressed in X. laevis oocytes. Our results showed that, similarly to others members of the cys-loop family, GABAρ1R were highly sensitive to redox modulation. Dose–response curves for GABA were shifted to the left in the presence of reducing agents, whereas oxidizing agents produced the opposite effect. Susceptibility was strongly dependent on GABA concentration. We also found that ascorbic acid modulation had both redox and non-redox components. GABAρ1R modulation was affected by chemical modification of SH- and site-directed mutagenesis of H141, indicating that these sites, located in the extracellular domain, play a key role in this process.

Calcaterra, Luis Alberto. "Distribución y abundancia de la hormiga colorada Solenopsis invicta en Argentina: sus interacciones con hormigas competidoras y moscas parasitoides (Pseudacteon SPP.)" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudiaron la distribución y abundancia de la hormiga colorada Solenopsis invicta y sus interacciones ecológicas con hormigas competidoras y moscas parasitoides en el extremo sur de su área nativa en Sudamérica. Solenopsis invicta se distribuyó a través de diversos hábitats y climas en Brasil, Paraguay, Uruguay y en Argentina hasta los 33° 41Ž latitud sur, los 64° 52Ž longitud oeste y los 1.100 m de altitud. Sorpresivamente, no se encontró S. invicta en Bolivia. Diez especies de fóridos estuvieron asociadas a S. invicta en su área nativa, nueve en un solo sitio. El clima determinó la presencia y abundancia de la mayoría de las especies, excepto P. litoralis y P. nocens. Pseudacteon obtusus (grande) mostró la distribución más austral y occidental (este es el primer registro de moscas en Chile) y fue registrada a la mayor altitud (2.280 m); P. curvatus fue la más abundante y una de las más ampliamente distribuidas y P. cultellatus fue encontrada por primera vez atacando a S. invicta. Una especie de mosca nueva para la ciencia, P. calderensis, fue descubierta y descripta en este trabajo. La tasa general de parasitismo natural registrada por primera vez en esta tesis fue muy baja (0,24%), aunque el porcentaje alcanzó al 2,81% de las colonias en un sitio. Los presencia de fóridos afectó la capacidad de forrajeo de S. invicta, pero no su jerarquía de dominancia. Solenopsis invicta fue espacial (64-82%) y numéricamente (23-27%) dominante en todos los ensambles, sin mostrar la mayor biomasa y sin excluir a otras especies. Al menos 8-10 especies de hormigas fueron muy comunes en la mayoría de ensambles; el 60% correspondió al grupo funcional Myrmicinae generalizado que interactuó frecuentemente con S. invicta. A pesar de no ser una buena descubridora de recursos, S. invicta ganó el 78% de las interacciones principalmente con P. obscurithorax y dominó ecológicamente a sus competidoras usando cuatro mecanismos: (1) alto número de individuos, (2) sistema de reclutamiento muy desarrollado, (3) comportamiento agresivo y (4) actividad de forrajeo continua. Fue mejor descubridora y dominadora en hábitats más simples y pobres en especies. La situación en Argentina contrasta fuertemente con lo observado en Norte América. El fuerte ambiente competitivo en los ensambles de hormigas en Argentina sería el factor más importante (seguido por los enemigos naturales) que limita el éxito de S. invicta. La introducción de un gran número de especies de moscas parasitoides desde Sudamérica debería reducir la habilidad competitiva y la abundancia de S. invicta en los Estados Unidos. Las especies elegidas deberían provenir de la región de origen de las poblaciones invasoras en los Estados Unidos. El conocimiento de la relación plaga-enemigo natural-ambiente en su área nativa es de suma utilidad para proyectos de control biológico en los Estados Unidos y otras regiones invadidas por S. invicta.

Abstract:
The distribution and abundance of the fire ant, Solenopsis invicta, and its ecological interactions with competitor ants and parasitoid flies were studied in its native land in southern South America. Solenopsis invicta was distributed in diverse habitats and climates in Brazil, Paraguay, Uruguay, and in Argentina up to 33° 41Ž S, 64° 52Ž W and 1100 m of altitude. Surprisingly, S. invicta was not found in Bolivia. Ten phorid species were associated with S. invicta in its native land and up to nine in the same site. Climate determined the presence and abundance of most species except P. litoralis and P. nocens. Pseudacteon obtusus (big) showed the southernmost and westernmost (it is the first record for Chile) distribution and was recorded at the highest altitude (2280 m); P. curvatus was the most abundant and one of the most widely distributed and P. cultellatus was found for the first time attacking S. invicta. A fly species new for science, P. calderensis, was discovered and described in this work. The overall natural parasitism rate, recorded for the first time in this thesis, was very low (0.24%), although the rate reached 2.81% of the colonies at one site. The presence of phorids affected the foraging capacity of S. invicta but not its hierarchy of dominance. Solenopsis invicta was spatially (64-82%) and numerically (23-27%) dominant in all ensembles without showing the highest biomass and not excluding other species. At least 8-10 ant species were very common in most ensembles; 60% corresponded to the Generalized Myrmicinae functional group, which frequently interacted with S. invicta. Despite not being a good discoverer of resources, S. invicta won 78% of the interactions mainly with P. obscurithorax, and ecologically dominated its competitors using four mechanisms: (1) large numbers of individuals, (2) well developed recruitment system, (3) aggressive behavior, and (4) not-interrupted-foraging activity. It was a better discoverer and dominant in simpler and poorer habitats. The situation in Argentina strongly contrasts with that observed in North America. The strong competitive environment in the ant ensembles in Argentina would be the most important factor (followed by natural enemies) limiting the success of S. invicta. The introduction of a large number of parasitoid fly species from South America should decrease the competitive ability and abundance of S. invicta in the United States. The species chosen should come from the region of origin of the invasive populations in the United States. The knowledge of the relationship pest-natural enemy-environment in its native land is greatly useful for biological control projects in the United States and other regions invaded by S. invicta.

Cahansky, Alejandra Valeria. "Inducción del crecimiento ovárico en la langosta de agua dulce Cherax Quadricarinatus, mediante la administración de antagonistas dopaminergicos y encefalinergicos" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se evaluaron los efectos de los antagonistas spiperona (dopaminérgico) y Cheraxnaloxone (encefalinérgico) sobre el crecimiento ovárico de quadricarinatus (Decapoda, Parastacidae), en diferentes períodos del ciclo reproductivo, tanto mediante ensayos in vitro como vivo. La incubación in vitro de piezas de ovario junto con ganglio torácico (sitio de producción de la hormona estimuladora gonadal, GSH), mas el agregado de cada antagonista mencionado, consiguió potenciar la síntesis proteica en ovario durante el período posreproductivo, sugiriendo una fuerte inhibición de las encefalinas endógenas sobre la secreción de GSH. Este resultados fue corroborado mediante ensayos in vivo, administrando los antagonistas incorporados al alimento; durante el periodo posreproductivo, el naloxone, mostró ser el inductor mas efectivo, al producir un aumento significativo tanto del índice gonadosomático como del diámetro oocitario. Por otra parte, se verificó la producción efectiva de hembras ovígeras, así como la viabilidad normal de los juveniles eclosionados de hembras tratadas con los antagonistas. Estos resultados constituyen una potencial herramienta en acuicultura, al permitir modificar el calendario reproductivo natural de una especie de alto valor comercial.

Abstract:
The effects of the antagonist spiperona (dopaminergic) as well as naloxone (enkephalinergic) on the ovarian growth of Cherax quadricarinatus (Decapoda, Parastacidae) were evaluated in different periods of the reproductive cycle, by means of both in vitro and in vivo assays. In vitro incubation of ovarian pieces, together with thoracic ganglion (production site of the gonad stimulating hormone, GSH) and the addition of each of the mentioned antagonist, yielded an augmented protein synthesis by ovary during the postreproductive period, suggesting a strong inhibition of endogenous enkepahlins on GSH secretion. This result was corroborated in vivo, by administering the antagonists incorporated to food; during the postreproductive period, naloxone showed to be the most efficient inductor, producing a significant increment of both gonadosomatic index and oocyte diameter. On the other hand, the effective production of ovigerous females, as well as the normal viability of juveniles hatched from females treated with the antagonists was verified. These results represent a potential tool for aquaculture, allowing the modification of the natural reproductive schedule of a high commercial value species.

Bueno, Carlos Alberto. "Un terpenoide natural con actividades inmunomoduladora y antiangiogénica como potencial agente antiherpético" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Queratitis Estromal Herpética (QH) se produce por una respuesta inflamatoria que ocurre en el ojo humano como secuela de la infección causada por el virus Herpes simplex tipo 1 (HSV-1), siendo la primera causa epidemiológica de ceguera infecciosa en los países desarrollados. Uno de eventos característicos de la evolución de la QH es la neovascularización. Para limitar la progresión de la enfermedad se utilizan los corticosteroides y el aciclovir (ACV) que mitigan la inflamación e impiden la diseminación viral, respectivamente. Teniendo en cuenta los efectos adversos generados por los corticoides y el fenómeno de emergencia de mutantes del HSV-1 resistentes al ACV, se pone de relieve la necesidad de encontrar nuevas drogas antivirales. La búsqueda no sólo debería estar orientada a la obtención de compuestos que interfieran con alguna etapa del ciclo de multiplicación viral, sino que también contemple el hecho que la droga en cuestión interfiera con alguna señal intracelular, produciendo un efecto final tanto antiviral como inmunomodulador. En nuestro laboratorio se ha demostrado que un extracto parcialmente purificado obtenido a partir de hojas de Melia azedarach L., denominado meliacina (MA), inhibe la multiplicación de virus pertenecientes a distintas familias, en condiciones in vitro y en ausencia de citotoxicidad. In vivo, MA inhibe la incidencia y la severidad de la QH murina, lo cual sugiere que ejercería un efecto antiinflamatorio, además de actuar como antiviral. Uno de los principios antivirales presentes en dichos extractos es el tetranortriterpenoide 1-cinamoil-3,11-dihidroximeliacarpina (CDM), que inhibe la multiplicación del HSV-1 in vitro, basifica los endosomas, y afecta el transporte de las glicoproteínas virales a la membrana plasmática. En el presente trabajo de tesis se investigó el mecanismo de acción antiviral e inmunomodulador de CDM en células epiteliales del tejido ocular y en células inflamatorias, así como también el efecto antiangiogénico del compuesto en células endoteliales. Así fue posible avanzar en la comprensión de mecanismos moleculares y celulares que podrían explicar el efecto curativo de MA en la enfermedad ocular inducida por HSV-1 en ratón.

Abstract:
Ocular Herpes Simplex virus type 1 (HSV-1) infection may result in a inflammatory lesion in the eye termed Herpetic stromal keratitis (HSK). Such HSK lesions represent the commonest infectious cause of blindness in developed countries. Neovascularization stands for a major step in HSK pathogenesis. The current standard of care includes topical corticosteroids and acyclovir (ACV). Corticosteroids are used to combat the inflammatory component of the disease, and the antiviral prevents viral disemination. Considering the adverse effects caused by steroids and the phenomenon of emergence of mutant HSV-1 strains resistant to ACV, highlights the need for new antiviral drugs. The search should not only be aimed at obtaining compounds that interfere with some stage of viral multiplication cycle, but should also affect an intracellular signal, gathering together both antiviral and immunomodulatory effects. Our laboratory has demonstrated that a partially purified extract obtained from leaves of Melia azedarach L., called meliacine (MA), inhibits the multiplication of viruses belonging to different families in the absence of cytotoxicity, in vitro. In vivo, MA inhibits the incidence and severity of the murine HSK, suggesting that it exerts an anti- inflammatory effect in addition to its antiviral action. One of the main antiviral principles obtained in these extracts is the 1-cinnamoyl-3,11-dihydroxymeliacarpin (CDM), which inhibits HSV-1 multiplication in vitro provokes the basification of the endosomal vesicles, and affects the trafficking of viral glycoproteins. In this thesis we investigated the antiviral and immunomodulatory activities of CDM in epithelial cells of ocular tissue and inflammatory cells, as well as its antiangiogenic effect in endothelial cells. Thus, it was possible to advance in the understanding of the molecular and cellular mechanisms involved in the healing effect of MA in the ocular HSV-1 infection in mice.

Brion, Laura. "Regulación hormonal y papel funcional de la map quinasa fosfatasa-1 (MKP-1) en células esteroidogénicas" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las MAP quinasas fosfatasas (MKPs) son componentes regulatorios importantes en aquellos procesos fisiológicos en los cuales participan las MAPKs debido a su capacidad de inactivar específicamente a estas enzimas. En este trabajo se analizó el rol funcional y la regulación transcripcional y post-traduccional de MKP-1 en células esteroidogénicas. Demostramos que hCG y AMPc incrementan los niveles de MKP-1 por mecanismos transcripcionales y post-traduccionales. Los resultados obtenidos indican que hCG/AMPc promueven la fosforilación de MKP-1 por acción de PKA y ERK1/2 y que esta modificación promueve su estabilización. También demostramos que esta fosfatasa se localiza tanto en núcleo como en mitocondrias. En lo que respecta al papel funcional de MKP-1, se comprobó que la expresión de MKP-1 inhibe la producción de esteroides por su capacidad de interferir con la inducción de StAR, una proteína clave para la esteroidogénesis. En conclusión, en este trabajo demostramos que LH/ACTH, además de promover la activación de enzimas necesarias para la síntesis de esteroides como ERK1/2, también dispara la activación de mecanismos que contribuyen a la inactivacion de esta enzima. Se concluye que el aumento en la expresión de MKP-1 y la estabilización de la proteína por acción de hCG/AMPc es un mecanismo clave para el cierre de la acción hormonal sobre la esteoidogénesis.

Abstract:
MAP kinase phosphatases (MKPs) are important regulatory components in the physiological processes in which the MAPKs are involved, due to its ability to inactivate specifically these enzymes. In this study we have analyzed the functional role and transcriptional and post-translational regulation of MKP-1 in steroidogenic cells. We show that hCG and cAMP increase MKP-1 levels by transcriptional and posttranslational mechanisms. The results indicate that hCG/cAMP promotes MKP-1 phosphorylation by PKA and ERK1/2 action and that this modification promotes its stabilization. We also show that this phosphatase is localized in nucleus and mitochondria. Regarding the functional role of MKP-1, it was found that the expression of MKP-1 inhibits the production of steroids by its ability to interfere with the induction of StAR, a key protein for steroidogenesis. In conclusion, in this work we demonstrate that LH/ACTH, in addition of promoting the activation of ERK1/2, which is necessary for steroid synthesis, also triggers the activation of mechanisms that contribute to the inactivation of this enzyme. We show the increased expression of MKP-1 and stabilization of the protein by hCG/cAMP action, as a key mechanism for the closure of hormone action on steroidogenesis.

Bouvier, León Alberto. "Estudio de adenilato quinasas de tripanosomas. Desarrollo de herramientas de manipulación genética" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las adenilato quinasas son fosfotransferasas que participan en la homeostasis intracelular de nucleótidos de adenosina. Se postula que constituyen los componentes clave de las redes enzimáticas de fosfotransferencia. Las mismas comunicarían, de forma espacial, los sitios de generación con los de consumo de ATP. Los kinetoplástidos, entre los que se incluye el parásito causante del mal de Chagas, el Trypanosoma cruzi, representan a los organismos con mayor número de isoformas de adenilato quinasas del que se tenga conocimiento. En este trabajo se desarrolló una herramienta de rastreo de bases de datos con la que se pudo identificar a seis isoenzimas codificadas en el genoma de Trypanosoma cruzi. Se estudiaron diferentes aspectos de cada una de las mismas. Algunas variantes fueron localizadas en la estructura flagelar, en el lumen glicosomal, solubles en el citosol y posiblemente asociadas a reservosomas. Adicionalmente se estudiaron los dominios y motivos responsables de su respectiva localización. Por otro lado se investigaron tres de las isoformas presentes en Trypanosoma brucei. Se determinó la esencialidad de la isoforma candidata mitocondrial, los patrones de expresión estadío específicos para la isoenzima glicosomal y además la potencial presencia de una señal críptica de localización a esta organela, en otra de las variantes. Finalmente se evaluaron metodologías de reemplazo génico dirigido en Trypanosoma cruzi y se desarrollaron numerosas herramientas que permiten la manipulación genética de este tripanosoma. Entre estas se encuentran vectores de expresión con diferentes marcadores de selección, plásmidos mínimos con marcadores de selección de sencilla transferencia y secuencias codificantes para múltiples epítopes, proteínas fluorescentes y sitios de proteasas. Se espera que estas herramientas sean de utilidad para futuras investigaciones de tripanosomas y otros organismos.

Abstract:
Adenylate kinases are phosphotransferases involved in intracellular homeostasis of adenosine nucleotides. They are thought to be key components of enzymatic phosphotransfer networks. These would spatially communicate sites of ATP synthesis with those involved in the consumption of this molecule. To the present knowledge kinetoplastids, which include the causative agent of Chagas' disease, Trypanosoma cruzi, are among the organisms with the highest number of adenylate kinase isoenzymes. In this work, a database screening tool was developed, which allowed us to identify six different isoenzymes present in the genome of Trypanosoma cruzi. For every one identified, various aspects where analyzed. Some variants where localized to the flagellum, inside the glycosomal lumen, soluble in the citosol and possibly associated to reservosomes. Additionally the domains and motifs responsible for their respective localization where studied. On the other hand three variants present in Trypanosoma brucei where investigated. The mitochondrial candidate was determined to be an essential enzyme, stage specific expression patterns for the variant localized inside glycosomes where established and the presence of a putative cryptic glycosomal targeting signal where found in another isoform. Finally methodologies for targeted gene replacement in Trypanosoma cruzi where evaluated and numerous tools for the genetic manipulation of this trypanosome where developed. Among them, expression vectors with different selectable markers, minimal plasmids with easy to transfer selectable markers and sequences which code for multiple epitopes, fluorescent proteins and protease cleavage sites. Hopefully these tools will be useful in future investigations regarding trypanosomes and other organisms.

Botbol, Nicolás S.. "Implicitación de aplicaciones racionales" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Bordoni, Andrea Verónica. "Herramientas sintéticas para la caracterización de glicofuranosidasas. Desoxigenación fotoinducida por transferencia electrónica en derivados de hidratos de carbono" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La desoxigenación de alcoholes es una transformación importante en síntesis orgánica, especialmente en el área de la química de productos naturales. Desde su desarrollo en 1975, el método de desoxigenación de Barton-McCombie ha sido muy utilizado. Sin embargo, esta estrategia involucra el uso hidruros de estaño, los cuales son tóxicos, costosos y difíciles de eliminar. Por este motivo, es deseable el desarrollo de procedimientos alternativos, libres de hidruros metálicos. En este trabajo de Tesis, se estudió una reacción por transferencia electrónica fotoinducida (PET) para la reducción de grupos hidroxilos en posición-alfa a carbonilos de grupos ésteres y lactonas. La eficiencia de esta reacción reside en la estabilización del radical intermediario producto de la ruptura homolítica de dicho hidroxilo, derivatizado adecuadamente. La desoxigenación PET se utilizó como reacción clave en la síntesis de 2-desoxi y 5-desoxiazúcares. La glicobiología de D-Galf es un tema de gran interés ya que éste azúcar únicamente se encuentra en glicoconjugados de bacterias, protozoarios y hongos, muchos de ellos patógenos, mientras que en mamíferos se presenta sólo en configuración piranósica. Por lo tanto, la caracterización de las enzimas relacionadas con la biosíntesis y el metabolismo de D-Galf son consideradas blancos importantes para el desarrollo de agentes terapéuticos. En este contexto, los 5-desoxigalactofuranósidos sintetizados fueron evaluaron como sustrato y/o inhibidores de la exo beta-D-galactofuranosidasa de Penicillium fellutanum, y mostraron que la ausencia de HO-5 disminuye drásticamente la interacción con la enzima. Por otro lado, se desarrolló una secuencia muy directa para la síntesis de galactofuranósidos marcados radioactivamente, como herramientas sensibles para la detección de alfa- y beta-D-galactofuranosidasas.

Abstract:
The deoxygenation of alcohols is an important process in organic synthesis, especially in the area of natural product chemistry. Since its development in 1975, the Barton-McCombie deoxygenation method has been widely employed. However, this procedure involves the use of organotin compounds, which are toxic, expensive and difficult to remove. Therefore, the development of alternative procedures avoiding the use of metal hydrides is a desired achievement. In this Thesis, a photoinduced electron-transfer (PET) reaction for the reduction of hydroxyl groups vicinal to the carbonyl functions of lactones or esters is studied. The effectiveness of this reaction relies on the stabilization by the vicinal carbonyl group of the intermediate radical formed by homolytic the cleavage of the hydroxyl group, conveniently derivatized. The PET deoxygenation was employed as key step in the synthesis of 2-deoxy- and 5- deoxy sugars. The glycobiology of D-Galf is a topic of great interest since its presence is restricted to glycoconjugates of bacteria, protozoa and fungi, many of them patogenic, whereas in mammals is found only in the pyranose form. Therefore, the enzymes involved in the biosynthesis and metabolism of D-Galf are considered important targets for the development of therapeutic agents. In this framework, the 5-deoxy galactofuranosides synthetized were evaluated against the exo beta-D-galactofuranosidase from Penicillium fellutanum, showing that the absence of HO-5 drastically diminishes the affinity for the enzyme. In addition, a straightforward procedure for the synthesis of radiolabeled galactofuranosides, as sensitive tools for detection of alfa- and beta- galactofuranosidases, was developed.

Bonomi, Hernán Ruy. "Rol del metabolismo de flavinas en la virulencia de Brucella abortus" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Brucella spp. son las bacterias causantes de la brucelosis, la enfermedad zoonótica con más incidencia en el mundo. Brucella es un patógeno exitoso que probablemente infecta animales desde hace millones de años, y se encuentra extremadamente adaptado al estilo de vida intracelular. La virulencia de este patógeno reside en su capacidad de invadir al hospedador, resistir los mecanismos de defensa y, establecerse y replicar en el inhóspito nicho replicativo. El nicho replicativo se caracteriza por ser escaso en nutrientes, tener baja tensión de O2 y someter a Brucella al daño oxidativo. A pesar de que Brucella no posee factores de virulencia “clásicos” posee una batería de mecanismos fisiológicos y adaptaciones metabólicas que en definitiva son los que le permiten sortear las defensas de los hospedadores y adaptarse a la vida intracelular. En este trabajo de tesis, se ha caracterizado y estudiado una parte de la fisiología básica de Brucella, como lo es el metabolismo de las flavinas. Se ha hecho foco en los genes rib, en particular en ribH2 que codifica una enzima lumazina sintasa (LS) que cataliza el penúltimo paso la ruta biosintética de la riboflavina. Se describió la regulación de la expresión de ribH2 por el elemento regulatorio riboswitch FMN, y se identificaron posibles proteínas que interactúan con RibH2 en Brucella. También, se estableció una relación directa entre virulencia y el metabolismo de flavinas en Brucella, resaltando la importancia de RibH2 para la supervivencia, tráfico y persistencia de las bacterias durante la infección en los modelos in vitro e in vivo. El rol de las flavinas en la simbiosis de Rhizobium leguminosarum con plantas, también fue estudiado. Los resultados muestran que el papel que juegan las proteínas RibH2 en el establecimiento bacteriano con el hospedador eucariota no está restricto sólo a Brucella, sino que parece ser compartido por otros Rhizobiales. Los hallazgos de este trabajo de tesis pueden dar lugar a nuevos estudios que lleven al desarrollo de vacunas y drogas contra la brucelosis y mejoras en las cepas bacterianas de inoculantes para uso agronómico.

Abstract:
Brucella spp. are the bacteria responsible for brucellosis, the most widespread zoonotic disease in the world. Brucella is a successful pathogen that has been infecting animals probably for millions of years and it is extremely adapted to the intracellular lifestyle. Its virulence lays in its ability to invade the host, resist defense mechanisms, establish and replicate in the inhospitable replicative niche. The replicative niche exhibits limited nutrients availability, low O2 tension and exposes Brucella to oxidative damage. In spite of the fact that Brucella does not possess “classic” virulence factors, it displays a variety of physiological mechanisms and metabolic adaptations that let these bacteria cope with the host’s defenses and adapt to live inside the cell. During this Thesis, part of the basic physiology of Brucella, the flavin metabolism, has been studied and characterized. The focus was laid on the rib genes, in particular on ribH2 which codes for a lumazine synthase (LS), the enzyme that catalyses the penultimate step in the riboflavin biosynthetic pathway. The regulation of the ribH2 gene expression by the FMN riboswitch was described, and some proteins that may interact with RibH2 were identified in Brucella. The direct relation between flavin metabolism and virulence was also established, highlighting the importance of RibH2 for survival, trafficking and persistence during infection in both in vitro and in vivo models. The role of flavins in the Rhizobium leguminosarum-plant symbiosis was also addressed. The results show that the part that RibH2 plays in the bacterial establishment in the eukaryotic host is not restricted only to Brucella, but it is shared with other Rhizobiales. The findings of this PhD Thesis, can lead to deeper and more specific studies culminating in the development of vaccines and drugs against brucellosis as well as improvements in the bacterial inoculants of agronomic use.

Béguelin, Wendy. "Definición de una nueva clase de complejo transcripcional: ErbB2 actúa de coactivador de Stat3 promoviendo la proliferación en tumores mamarios" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El receptor con actividad de tirosina quinasa ErbB2 y la proteína transductora de señales y activadora de la transcripción 3 (Stat3) juegan un rol importante en el desarrollo del cáncer de mama. Distintas evidencias sugieren la existencia de interacciones cruzadas entre ErbB2 y Stat3. Sin embargo, los mecanismos moleculares que subyacen a esta interacción en tumores mamarios permanecen poco estudiados. En este trabajo identificamos un nuevo mecanismo de interacción entre ErbB2 y Stat3 que involucra la translocación nuclear de ErbB2 y la formación de un complejo en el que ErbB2 actúa como coactivador transcripcional de Stat3. Mostramos que la formación de este complejo es inducida tanto por el ligando de los receptores ErbBs, heregulina, como por los progestágenos a través del receptor de progesterona (PR). Demostramos también que la función de ErbB2 como coactivador de Stat3 promueve la activación del promotor de ciclina D1. Cuando la formación del complejo Stat3/ErbB2 es inducida por progestágenos, encontramos al PR co-reclutado en el promotor de ciclina D1, revelando un nuevo mecanismo de acción genómico no clásico del PR. Demostramos que la presencia de ErbB2 en el núcleo celular ejerce un rol fundamental en la proliferación in vitro e in vivo en tumores mamarios. Estos hallazgos revelan una posible intervención terapéutica nueva en tumores de mama que sobreexpresan ErbB2, mediante la inhibición de la translocación nuclear de ErbB2, dado que esta estrategia es efectiva en células tumorales resistentes a las terapias anti ErbB2 convencionales.

Abstract:
ErbB2 tyrosine kinase receptor and Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (Stat3) have been unraveled as two major players in breast cancer growth. In spite of all the accumulating evidence suggesting a crosstalk between ErbB2 and Stat3, the molecular mechanisms underlying ErbB2 and Stat3 interaction in breast tumor remain poorly explored. In this work, we identified a new mechanism of ErbB2 and Stat3 interaction, which involves ErbB2 nuclear translocation and the assembly of a complex in which ErbB2 acts as a transcriptional coactivator of Stat3. We showed that the assembly of this complex is induced by heregulin, a ligand of the ErbBs receptors, as well as by ligand bound progesterone receptor (PR). We also highlighted that ErbB2 function as Stat3 coactivator drives cyclin D1 promoter activation. When the assembly of Stat3/ErbB2 complex is induced by progestins, we found PR recruitment together with Stat3 and ErbB2 to the cyclin D1 promoter, unraveling a new nonclassical PR genomic mechanism. We found that the nuclear Stat3/ErbB-2 transcriptional complex plays a key role in in vitro and in vivo proliferation of breast tumors. Our findings reveal a novel therapeutic intervention in ErbB2-overexpressing breast tumors, by inhibition of ErbB2 nuclear translocation, since this strategy has proven effective in tumor cells which are resistant to conventional anti ErbB2 therapies.

Bey, Paula. "Optimización de la expresión de un amplicón viral basado en PVX en plantas de tabaco. Caracterización funcional de la proteína de 15 kDa del Garlic mite-borne filamentous virus" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Con el objetivo de optimizar la producción de proteínas heterólogas en plantas se desarrolló un sistema de expresión basado en un amplicón derivado del genoma del PVX. Se diseñaron distintos amplicones virales que permiten la expresión, tanto constitutiva como inducible, de proteínas recombinantes. La utilización del amplicón constitutivo permitió obtener, por primera vez, plantas transgénicas que sobrexpresan altos niveles de proteínas virales. Además, se logró expresar exitosamente GFP a partir de un amplicón inducible, tanto en ensayos de expresión transitoria como en plantas transgénicas. Uno de los problemas que dificultan la producción de proteínas de interés en plantas utilizando vectores virales es el establecimiento de respuestas de silenciamiento génico postraduccional (PTGS) en respuesta a la replicación viral. Para intentar superar esta dificultad, se propuso co-expresar un amplicón viral junto con una proteína supresora del PTGS. Se caracterizó la actividad de una nueva proteína supresora del PTGS, la proteína 15K codificada en el genoma del Garlic mite-borne filamentous virus (GmbFV). Si bien esta proteína muestra una actividad supresora débil en plantas silenciadas por agroinfiltración con transgenes u horquillas de silenciamiento, presenta la ventaja de no producir fenotipos aberrantes en plantas transgénicas. Mediante la co-agroinfiltración con construcciones que expresan la proteína 15K y el amplicón PVX-2aA (amplicón que expresa el epítope 2aA del virus de aftosa) se lograron obtener altos niveles de una fusión del epítope de interés a la cápside viral en plantas de Nicotiana benthamiana en un corto período de tiempo. Este resultado sugiere que es posible generar sistemas estables que permitan obtener altos niveles de expresión mediante el cruzamiento entre plantas transgénicas que expresen la proteína supresora 15K y amplicones de interés.

Abstract:
In order to optimize the production of heterologous proteins in plants, an expression system based on the PVX genome has been developed. Several viral amplicons have been designed with the purpose of expressing recombinant proteins, either constitutively or in an inducible manner. The use of constitutive amplicons led, for the first time, to the generation of transgenic plants which over-express high levels of viral proteins. Moreover, GFP protein was successfully expressed from an inducible amplicon, both in transient expression assays and in transgenic plants. One of the problems that hinder the production of heterologous proteins using plant viral vectors is the establishment of post-transcriptional gene silencing (PTGS) in response to viral replication. In an attempt to overcome this restriction, the co-expression of PTGS- suppressor proteins and viral amplicons was explored. The 15K protein of Garlic mite-borne filamentous virus (GmbFV) has been characterized as a new PTGS-suppressor. Although this protein shows suppressor activity in agroinfiltration assays triggered by both transgenes or silencing hairpins, it has the advantage of avoiding the development of aberrant phenotypes in transformed plants. Co-agroinfiltration of the 15K protein and the PVX-2aA amplicon (harbouring the 2aA epitope of Foot and mouth disease virus) yielded high levels of a fusion comprising the epitope of interest and the PVX coat protein in N. benthamiana. This result suggest that stable expression systems could be developed by crossing of transgenic plants carrying the 15K suppressor protein and plant viral amplicons.

Berini, Carolina Andrea. "Virus linfotrópico T-humano tipo 1 y 2 (HTLV-1/2): optimización del diagnóstico y epidemiología molecular en distintas poblaciones de Argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo principal de esta tesis es ampliar los conocimientos sobre el diagnóstico, la prevalencia y la epidemiología molecular del HTLV-1/2 y brindar datos que permitan un diagnóstico más eficiente en Argentina. Con tal fin, se analizaron equipos de tamizaje frecuentemente utilizados en nuestro país, y se demostró la importancia de confirmar los resultados seroindeterminados por WB mediante una técnica molecular para obtener un diagnóstico final. En cuanto a la prevalencia de HTLV-1/2 en las distintas poblaciones estudiadas, hemos demostrado que ambos virus se encuentran circulando con prevalencias altas en poblaciones de riesgo y bajas en las de no riesgo en la mayor parte del país, manteniendo la característica epidemiológica de su restricción étnico/geográfica ya demostrada. Es por ello, que debemos considerar también el riesgo de infección en aquellos casos que presenten antecedentes de riesgo como, por ejemplo, haber nacido, ser descendientes o haber sido pareja sexual de individuos provenientes de áreas endémicas. Mediante estudios filogenéticos se demostró que todas las cepas estudiadas del HTLV-1, resultaron subtipo a subgrupo A, mientras que para el HTLV-2 el subtipo b fue el mayoritario ambos en poblaciones no originarias sugiriendo que estos subtipos han sido introducidos en nuestra población caucásica a partir de la interacción con comunidades originarias.

Abstract:
The main objectives of this thesis work were to widen the knowledge about the molecular epidemiology of HTLV-1/2 infection in Argentina and to collaborate with the implementation of an optimal algorithm for its diagnosis. Therefore, different commercial kits frequently used in blood banks along South America were analyzed, showing their efficiency and demonstrating that the further molecular confirmation of seroindeterminate results by WB is an important tool for obtaining a final diagnosis and the real serostatus of this infection. Regarding the prevalence of HTLV-1/2 in the different study populations, we demonstrated that both circulating viruses have high prevalence in at-risk populations and low prevalence in non at-risk populations in most of the country, maintaining the epidemiologic characteristics according to the ethnic/geographic restriction areas already demonstrated. In relation to HTLV- 1/2 infection risk, this data should be considered especially in the cases that have risk antecedents such as being born, being descendent or being a sexual partner of an individual coming from endemic areas. As for HTLV-1 phylogeny, all the circulating strains belong to subtype a subgroup A while for HTLV-2 the major subtype in non-aboriginal populations was b suggesting that these subtypes (HTLV-1aA and HTLV-2b) have been introduced to the general population due to closer interactions with aboriginal communities.

Arcila Gallego, Paula Alexandra. "Los depósitos sinorogénicos del sur de Mendoza y su relación con la faja plegada y corrida de Malargüe (35° -36°S), Mendoza. Argentina" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el extremo sur de la Cordillera Principal entre los 35º-36ºLS, los depósitos sinorogénicos y los estratos de crecimiento preservados en los depocentros sintectónicos de antepaís Horqueta, Pincheira y Ventana, registraron la historia de estructuración de la faja plegada y corrida de Malargüe desde el Neógeno hasta el Pleistoceno. Las secuencias sinorogénicas en los depocentros Horqueta, Pincheira y Ventana, alcanzan los 1.200 metros de espesor con depósitos de naturaleza volcánica, volcaniclástica, epiclástica, y en menor medida fluvial a lacustre, representados en las unidades litoestratigráficas Formación Molle, Agua de la Piedra, Butaló, Loma Fiera, Pincheira, Bramón y Coyocho. La evolución tectónica en los depocentros sinorogénicos de antepaís en función de la cronoestratigrafía, geoquímica y análisis de litofacies permite reconocer: (1) Estado inicial de cuenca de antepaís durante el Mioceno inferior. (2) Estado de depocentro de cuña frontal en el Mioceno medio. (3) La instalación de un arco volcánico local en el Mioceno superior y (4) Estado de cuenca de piggy-back durante el Mioceno superior a Plioceno. Los factores de control corresponden a la migración de la faja plegada y corrida de Malargüe con un estilo de deformación mixto hacia el antepaís, en un proceso de horizontalización de la placa subducida.

Abstract:
The foothills of the cordillera Principal at its southern end (35º-36ºLS) preserved synorogenic deposits and growth strata in the syntectonic foreland basins of Horqueta, Pincheira and Ventana which recorded the Neogene to Pleistocene kinematics of the fold and thrust belt of Malargüe. Synorogenic successions in these basins reach a thickness of 1.500 m and there are filled mainly with volcanic, volcaniclastic and epiclastic deposits and subordinately fluvial and lake systems. Lithostratigraphic units called Molle, Agua de la Piedra, Butaló, Pincheira, Bramón and Coyocho formations comprise these syntectonic sequences. Evolution of the foreland synorogenic basins based on the cronostratigraphic, geochemical and litofacies analysis provide recognition of different stages: (1) Initial foreland basin in the early Miocene. (2) Stage of wedge-top basin for the middle Miocene. (3) Establishment of local volcanic arc in the upper Miocene and (4) Stage of piggy-back basin between upper Miocene and Pliocene. The control factors are the normal propagation of the Malargüe fold and thrust belt toward the foreland with a hybrid structural style with basement structures transferring shortening to the sedimentary cover and the tectonic setting associated with a compressive regime during the shallowing of the subduction zone.

Alzogaray, Vanina A.. "Anticuerpos de llama de dominio único como inhibidores intracelulares de una toxina bacteriana" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los camélidos poseen anticuerpos que carecen de cadena liviana y de una fracción de la cadena pesada. El sitio de unión al antígeno está formado por el dominio variable de la cadena pesada, denominado VHH. Su largo CDR3 resulta especialmente apto para la unión a epitopes cóncavos, como los sitios activos enzimáticos. Salmonella tyhimurium es una bacteria intracelular patógena que posee una ADP‐ribosiltransferasa denominada SpvB, esencial para la virulencia. SpvB induce la depolimerización de los filamentos de actina, llevando a la muerte celular. En este trabajo de Tesis, mostramos la generación de una biblioteca de expresión en fagos, a partir de linfocitos de llamas inmunizadas con el dominio catalítico de SpvB, para obtener VHHs que reconocen a SpvB e inhiben su actividad enzimática. Los clones de VHHs anti‐SpvB se secuenciaron y clasificaron de acuerdo al CDR3. Fueron seleccionados 5 clones, los cuales se expresaron y purificaron como proteína recombinante. Mediante dos ensayos independientes, mostramos que estos VHHs inhiben a SpvB. Uno de los ensayos nos permitió cuantificar la relación molar VHH:SpvB para lograr un 100% de inhibición identificando así a VHH5, que inhibe a SpvB en relación equimolar. Se transfectaron macrófagos con VHH5 y se infectaron con Salmonella typhimurium. El análisis de las células por microscopía de fluorescencia mostró claramente que VHH5 expresado en el interior celular, tiene la capacidad de proteger su citoesqueleto. Por otro lado, mediante la translocación de SpvB al citoplasma, realizamos un ensayo en células transfectadas con VHH5 para discriminar el efecto de SpvB de otros factores de virulencia. Los resultados mostraron que la expresión intracelular de VHH5 protege el citoesqueleto del efecto citopático causado por SpvB. Estos resultados constituyen una prueba de concepto sobre el uso de anticuerpos de dominio único de llama para la inhibición de enzimas intracelulares.

Abstract:
Camelids produce unusual antibodies composed only of heavy chains. The antigen combining site of these antibodies is formed solely by the heavy‐chain variable domain (VHH). Their CDR3s form long finger‐like extensions that can protrude into cavities on antigens, e.g. the active site crevice of enzymes. Salmonella tyhimurium are pathogenic intracellular bacteria that express an ADP‐ ribosyltransferase called SpvB, which is essential for its virulence. SpvB induces the depolymerization of actin filaments leading to cell death. In the present work, we show the generation of an expression phage library from SpvB‐immunized llama lymphocytes to obtain VHHs that inhibit SpvB activity. SpvB‐recognizing VHHs clones were sequenced and classified according to their CDR3. Five independent clones were isolated, and the VHH proteins codified by them were expressed and purified. All VHHs were able to inhibit SpvB in two different assays. We quantitatively analyzed the inhibition of SpvB activity by fluorescence using pyrene‐labelled actin as substrate. VHH5 completely inhibited SpvB activity in an equimolar ratio. Furthermore, VHH5 was subcloned in a vector for eukaryotic expression. As such, eukaryotic cells were transfected and cells expressing VHH5 were infected with Salmonella typhimurium to test their effect on virulence. Fluorescence microscopy analyses clearly showed that VHH5, when expressed as an intrabody, effectively protected cells from wild type SpvB‐ expressing strains of Salmonella. Transfected cells were also protected against the cytotoxic activity of a translocation competent chimeric SpvB‐C2 toxin. These results constitute a proof of principle of the use of single domain antibodies for the specific intracellular inhibition of normal or pathogenic enzymatic functions.

Alvarez, Lucía Paula. "Efecto del ácido salicílico sobre la virulencia de Staphylococcus aureus y su interacción con el huésped" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
S. aureus es una bacteria oportunista capaz de generar infecciones severas en humanos. Entre los factores de virulencia más importantes de S. aureus se encuentran el polisacárido capsular (PC) y la adhesina Eap, cuya expresión está controlada por los reguladores globales sae y mgrA. La expresión de eap es activada por sae, mientras que el PC es activado por mgrA e inhibido por sae. El ácido salicílico (SAL) altera la expresión de diversas moléculas en células procariotas y eucariotas. Este trabajo se propuso estudiar el efecto del SAL sobre la expresión de los factores de virulencia de S. aureus y cómo esto afecta la interacción de la bacteria con el huésped. Al respecto, el SAL provocó un aumento en la capacidad de internalización de la cepa Newman en células epiteliales. Esto correlacionó con una expresión disminuida del PC5 y un aumento de Eap, debido al efecto positivo del SAL sobre sae y negativo sobre mgrA. Por otra parte, el tratamiento de las células endoteliales con SAL, así como también sobre los ratones generó una menor adherencia de S. aureus. Además, se determinó que Eap es esencial para la internalización y colonización de S. aureus tanto in vitro como in vivo. Estos hallazgos demuestran que el SAL altera la expresión de moléculas de S. aureus directamente involucradas en la interacción con el huésped y por lo tanto la progresión de la infección podría verse afectada.

Abstract:
S. aureus is an opportunistic bacterium capable of generating severe infection in humans. Among the most important virulence factors of S. aureus are the capsular polysaccharide (CP) and Eap adhesin, whose expression is modulated by sae and mgrA global regulators. Expression of eap is activated by sae, while CP is activated by mgrA and inhibited by sae. Salicylic acid (SAL) alters the expression of various molecules in prokaryotic and eukaryotic cells. This work proposed to characterize the effect of SAL on hostbacteria interaction. In this regard, SAL caused an increased internalization of strain Newman into epithelial cells. This observation correlated with a decreased expression of CP and an increased expression of Eap, which would be caused by a positive effect of SAL on sae and a negative effect on mgrA. Moreover, the action of SAL on endothelial cells and mice generated a lower adherence of S. aureus. Moreover, it was determined that Eap is essential for internalization and colonization of S. aureus both in vitro and in vivo. These findings demonstrate that SAL is able to alter the expression of molecules directly involved in of host - S. aureus interaction, and therefore the progression of infection would be affected.

Alló, Mariano. "Regulación epigenética del splicing alternativo mediante RNAs pequeños y argonauta 1" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los RNAs pequeños interferentes (siRNAs) son conocidos por mediar el silenciamiento post-transcripcional de genes (PTGS) promoviendo la degradación de mRNAs targets. Cuando son dirigidos contra regiones promotoras, los siRNAs participan en una vía alternativa conocida como silenciamiento transcripcional de genes (TGS) que promueve la metilación de histonas, formación de heterocromatina e inhibición de la transcripción. Mostramos aquí que los siRNAs dirigidos contra secuencias ubicadas en cercanías al exón alternativo EDI del gen de la fibronectina son capaces de regular su splicing alternativo en celulas de mamíferos. El efecto necesita de dos proteínas claves de la vía de interferencia por RNA, AGO1 y AG02. Sin embargo, como sólo AGO1 es necesario para el TGS concluimos que ésta es la principal vía involucrada. Por otra parte, la importancia del estado de la cromatina ha sido resaltada al mostrar que los efectos son eliminados o reducidos por factores que favorecen una estructura cromatínica mas relajada o que aumentan la elongación de la transcripción. Más aun, el mecanismo involucra la presencia de marcas epigenéticas de heterocromatina facultativa (H3K9me2 y H3K27me3) intragénicas en la región target y la función de la proteína asociada a heterocromatina HP1alfa. Utilizando tecnología genome-wide encontramos que aproximadamente el 40% de los eventos de splicing alternativo contenidos en un panel de RT-PCR relacionado a cáncer fueron afectados tras la depleción de AGO1 o Dicer. Mediante experimentos de ChIP-seq hemos encontrado un enriquecimiento de clusters de AGO1 en promotores de genes con alta expresión y en exones ubicados en genes con baja tasa transcripcional. Adicionalmente, descubrimos un aumento del solapamiento de marcas de histonas sobre sitios target de AGO1. Finalmente, hemos detectado un evento de splicing alternativo endogeno del gen SYNE2 (exón 107) que podría estar siendo afectado fisiológicamente por AGO1.

Albanese, María Soledad. "Ecología de la marmosa pálida, Thylamys pallidior (Marsupialia, Didelphidae), en el desierto de Monte Central" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La marmosa pálida es un pequeño marsupial que habita las zonas áridas de Sudamérica y cuya distribución es la más extensa dentro del género. Su historia natural es poco conocida, siendo éste el primer estudio ecológico de un marsupial en el Monte. El objetivo de esta tesis fue analizar la ecología de una población de marmosas en un ambiente árido y con gran heterogeneidad espaciotemporal. Se abordaron cuatro aspectos: la estructuración temporal de la población, la estrategia reproductiva, el uso y selección del hábitat y los hábitos alimentarios. El estudio fue realizado en 3 hábitats diferentes de la Reserva de Ñacuñán, Mendoza, entre los años 2005-2007. El esfuerzo de trampeo fue de 27.600 noches-trampas y se obtuvieron 118 capturas. Las marmosas presentaron una marcada estacionalidad en su abundancia, donde las lluvias juegan un papel importante probablemente al limitar la disponibilidad de artrópodos, su principal fuente de alimento. Su reproducción fue coincidente con la estación más favorable del año, encontrándose evidencias de mortalidad pos-reproductiva de adultos y reemplazo anual de generaciones, lo que daría lugar a una estrategia semélpara, poco común entre vertebrados. T. pallidior mostró hábitos escansoriales usando preferentemente áreas abiertas y de baja complejidad. Los resultados apoyan además un mecanismo de segregación tanto espacial, trófica como temporal del ensamble de micromamíferos al cual esta especie pertenece y sugiere una dimensión adicional: la segregación del espacio vertical. La sincronía de su historia natural con el ambiente, junto con las adaptaciones fisiológicas le permite a T.pallidior hacer frente a las condiciones ambientales heterogéneas y rigurosas que caracterizan al desierto de Monte.

Abstract:
The desert mouse opossum is a small marsupial inhabiting the aridlands of South America with the largest geographic distribution in the genus. Knowledge about its ecology is scarce, this being the first ecological study of a marsupial in the Monte. The objective of this thesis was to analyze the ecology of a mouse opossum population in an arid and heterogeneous environment. Three aspects of its ecology were studied: temporal population structure, habitat utilization and feeding habits. The study was carried out in three habitat types of the Ñacuñan Reserve, Mendoza, during the period 2005-2007. The capture effort was 27.600 trap-nights and 118 individuals were captured. Mouse opossums showed a strong seasonal abundance influenced by rainfall and probably limited by the availability of arthropods, their main food resource. Reproduction was coincident with the most favorable season, and showed some evidence of post-reproductive mortality and an annual replacement of generations, probably implying a semelparous strategy, very uncommon among vertebrates. T. pallidior showed scansorial habits and mostly used open and low complexity areas. The results support spatial, trophic and also temporal segregation mechanisms among species of this assemblage, and suggest an additional mechanism of resource partitioning: vertical spatial segregation. T. pallidior showed synchronicity with the environment in many aspects of its natural history. These strategies, coupled with physiological adaptations, allow the desert mouse opossum to cope with the heterogeneous and rigorous conditions that characterize the Monte desert.

Aiello, Matías. "Teorías de gravedad, propiedades termodinámicas e irreversibilidad" (2010). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo estudiamos la termodinámica de las soluciones de agujero negro de la teoría de gravedad de Gauss-Bonnet, la cual incluye potencias de segundo orden en la curvatura, en los casos de vacío y en el caso de acoplamiento con cargas de teoría electromagnéticas no lineales, como las de Hoffmann-Infeld y Born-Infeld. Las soluciones que hemos obtenido presentan características diferentes a las soluciones ya conocidas de relatividad general. Analizamos el calor específico de las soluciones, mostrando que su comportamiento indica la existencia de un punto de transición en las soluciones de vacío. Discutimos también la similitud que existe entre la geometría en 5 dimensiones en Gauss-Bonnet con la solución en tres dimensiones del agujero negro BTZ. Al igual que estos, la solución de agujero negro en Gauss-Bonnet tiene un tiempo de vida infinito. En el caso cargado obtenemos un perfil de temperaturas con dos máximos, lo cual lleva a la existencia de un plateau en el tiempo de evaporación que indica una región de inestabilidad en una escala intermedia. Esta escala viene dada por el parámetro de Gauss-Bonnet y por el acoplamiento con la carga no-lineal. Verificamos también que los resultados para la termodinámica son consistentes con las leyes generalizadas de la termodinámica de agujeros negros en teorías covariantes de gravedad, como lo es la gravedad de Gauss-Bonnet. En particular, obtenemos la corrección a la fórmula de la entropía de la relatividad general que afirma que la misma es un cuarto del área del horizonte de eventos. Por otro lado, como estas teoría de gravedad son invariantes ante inversión temporal, contienen soluciones que son simétricas temporalmente una de la otra, formando parte de una larga lista de ejemplos donde esto ocurre. Especulamos sobre una manera de seleccionar a una de estas soluciones, de manera de tener una dirección de la flecha del tiempo definida en base a la propia teoría y a sus propiedades globales.

Abstract:
In this work we study the thermodynamical properties of the black hole solutions to Gauss-Bonnet gravity, which includes quadratic terms in the curvature, for the vacuum case and in the coupled case to Non-linear electro dynamics theories, such as Hoffmann-Infeld and Born-Infeld. The obtained solutions have different characteristics to the solutions of general relativity. We show that the behavior of the specific heat indicates the existence of a transition point in the vacuum solutions. We also discuss the similarities existing between this five-dimensional geometry and the three-dimensional black hole. Like BTZ black hole, the Gauss-Bonnet black hole has an infinite lifetime. In the charged case, some of these solutions present a double peak behavior. This behavior leads to the existence of a plateau in the evaporation rate, which implies that black holes of intermediate scales turn out to be un stable. The scale is given by the Gauss-Bonnet parameters and the non-linear coupling to electrodynamics. We verify that the obtained thermodynamical results are consistent with the generalized laws of black hole thermodynamics for any covariant theory of gravity, such as Gauss-Bonnet. In particular, we obtain the correction to the black hole entropy formula of general relativity that states that the entropy is a quarter of the event horizon area. On the other hand, because these theories are time reversal invariant, they contain time symmetric solutions, forming part of a long list of examples where this occurs. We speculate on a way to select one of these solutions, in order to have a time arrow direction defined on the basis of the theory itself and its global properties.

Haurigot, Lorena Cristina. "Identificación y caracterización de un sistema de secreción de proteínas tipo I en Agrobacterium tumefaciens" (2010-12-22). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los Sistemas de Secreción de Proteínas tipo I (T1SS) permiten a una amplia variedad de bacterias Gram-negativas secretar proteínas al medio extracelular; estos sistemas participan en varias respuestas fisiológicas como la adaptación al medio ambiente y contribuyen a la virulencia en diversos patógenos. Los T1SS están formados por un componente de membrana interna (ABC) un componente de fusión de membrana (MFP) y un componente de membrana externa (OMF). Los genes de los dos primeros (e inclusive el OMP) suelen estar formando un operón y pueden estar adyacentes a los genes que codifican sus proteínas sustrato. En la bacteria simbionte Rhizobium leguminosarum, el T1SS, PrsDE, es responsable de la secreción de diversas proteínas que participan en la supervivencia del rizobio en el suelo, favoreciendo la formación de estructuras comunitarias denominadas biofilms. A. tumefaciens es un fitopatógeno de alto interés agronómico y biotecnológico. A pesar de la relevancia que los TISS muestran tener en diversas bacterias Gram negativas, hasta la fecha no se ha avanzado en el estudio y la relevancia fisiológica de estos sistemas de secreción en este fitopatógeno. En este trabajo, se aisló a partir de una biblioteca genómica proveniente de A. tumefaciens el cósmido pIJ7760 que fue capaz complementar el fenotipo de secreción de cepas mutantes en el sistema PrsDE de R. leguminosarum. Se determinó que dicho cósmido alberga los genes de un sistema homólogo al que se denominó AspD-AspE, Agrobacterium secretion protein D and E) formado por un componente ABC (dominio de unión a ATP) y otro MFP (proteína de fusión de membranas), respectivamente. Este sistema fue responsable de la secreción de una proteína, a la que se denominó Hla, de función desconocida codificada rio arriba de aspDE. El análisis de las secuencias del cósmido permitió identificar, río arriba de hla, genes cuyo productos presentan alta similitud de secuencia aminoacídica con receptores de hemo (denominado hlaR) y a factores sigma y anti sigma (denominados hlaS y hlaI). Las zonas promotoras de ambos loci presentaron secuencias consenso de reconocimiento del regulador RirA que responde a la concentración de hierro extracelular. Rio arriba de estos genes se identificó un probable sistema ABC de captación de hemo (denominado ahuUVTB) que presenta en su región promotora secuencias de reconocimiento de RirA y del regulador del metabolismo del hemo IrrA. El análisis de las proteínas presentes en el medio extracelular en diversas condiciones de cultivo y nutricionales permitió reflejar un complejo control y una regulación diferencial de la secreción de la proteína Hla en el hospedador sustituto R. leguminosarum A34 y A. tumefaciens C58. Se observó una muy elevada secreción de Hla en el hospedador sustituto R. leguminosarum A34 en medios ricos de cultivo. Se determinó que esta desregulación se debe a que la cepa de A34 contiene una mutación ancestral en algún regulador desconocido hasta la fecha que provoca un fenotipo pleiotrópico. Este regulador es codificado en el plásmido simbiótico pRL1JI y regula, la secreción de Hla. El estudio de la regulación en el pariente heterólogo R. leguminosarum mostró que la secreción de Hla también se ve reprimida por los reguladores globales de respuesta a hierro descriptos en Rhizobiaceae, RirA e IrrA. Por otro lado, el agregado de hemoglobina como fuente de hemo extracelular, indujo la secreción de Hla como proteína mayoritaria en el contexto heterólogo de Rhizobium. El análisis del contexto genético de hla mostró que este gen está incluido en un locus sinténico a otros clusters de genes involucrados en la captación de hemo a través de hemóforos, aunque Hla no presenta similitud de secuencia aminoacídica con hemóforos caracterizados. Sin embargo, la purificación por columna de afinidad de hemina mostró que Hla presenta capacidad de unir hemina y sería el primer hemóforo descripto en la familia Rhizobiaceae. Mediante mutagénesis dirigida se generó una mutante de secreción en aspD de A. tumefaciens C58. Los fenotipos asociados a esta mutante mostraron un carácter pleiotrópico, tanto la autoagregación bacteriana, la adhesión a soporte abiótico y la motilidad en agar se vieron afectadas. En A. tumefaciens la secreción de Hla respondió principalmente a condiciones microóxicas/anóxicas, además de a la ausencia de hierro y presencia de hemo. Interesantemente, la mutante deficiente en la secreción de Hla fue incapaz de inducir la formación de tumores en Kalanchoe sp. En conjunto, los resultados presentados en este trabajo sugieren que el T1SS AspDE, participaría en la captación de hemo extracelular a través de la secreción de un nuevo hemóforo (Hla) probablemente en condiciones microaerófilas y de bajo hierro presentes en el contexto del tumor.

Abstract:
Type I secretion systems (TISSs) enable a wide spectrum of Gram-negative bacteria to deliver proteins to the extracellular medium. This secretion machinery has been shown to be involved in several physiological responses such as adaptation to the environment and virulence. T1SS are composed by an inner membrane component (ABC), a membrane fusion component (MFP) and an outer membrane component (OMP). ABC and MFP are ussually encoded as an operon and they can even be located in adjacency to some of their substrate proteins. The PrsDE System of the related symbiont R. leguminosarum is responsible for the secretion of several proteins that participate in the survival behaviour of rhizobia in the soil by the establishment of structured communities known as biofilms. A. tumefaciens is an important agroeconomical and biotechnological phytopathogen. Despite the physiological relevance of the subject, previous observations suggested the presence of T1SS in A.tumefaciens since C58 strain genome sequences are available (2001), however there have been no advances in the characterization or functional studies of the secretion system in this phytopathogen. In this work, heterologous functional complementation assay has been carried out using an A. tumefaciens genomic library to revert PrsDE mutant strains of R. leguminosarum A34. This strategy allowed us to isolate an A. tumefaciens cosmid, pIJ7760 encoding a T1SS, namely AspDE (Agrobacterium secretion protein D and E). aspD and aspE genes encoded the ABC (ATP binding domain) and MFP (membrane fusion protein) components of the secretion system respectively. Hla, a conserved unknown protein located upstream in the cosmid, was identified as a substrate of AspDE system. The genetic analysis of the surrounding region revealed a putative heme receptor (HlaR) and an ECF sigma and antisigma factor (HlaSI) encoded upstream of Hla. These genes have a RirA (global iron regulation) consensus sequence in their promoter region. Another putative ABC uptake system (AhuUVTB) was identified in pIJ7760 with recognition sequence for RirA and IrrA (heme response regulator). Extracellular protein analysis from different cultured conditions shown that complex and differential control of the secretion of Hla occurs between R. leguminosarum A34 and A. tumefaciens C58 strains. An elevated Hla secretion was observed in rich medium in the R. leguminosarum A34 heterologous host. This miss regulation was found to be in response to a so far unknown mutation which triggers pleiotropic phenotypes. This regulator is encoded in the pRL1JI symbiotic plasmid and appears to regulate Hla secretion. The modulation of Hla secretion was studied using the related strain R. leguminosarum, and revealed that the secretion of the protein is also controlled by the two global regulators previously described in Rhizobiaceae, RirA and IrrA. Additionally, adding hemoglobin as an extracellular heme source induces the secretion of Hla as the major protein in the R. leguminosarum heterologous context. Despite the fact that Hla shows no homology with previously characterized hemophores, the gene is included in a region with remarkable homology to a locus involved in heme uptake through hemophores. Hla was purified from extracellular medium cultures using hemin affinity column suggesting novel hemophore in Rhizobiaceae family. Using directed mutagenesis, an aspD secretion mutant was generated in A. tumefaciens C58 strain. Phenotypic characterization revealed that the mutation has a pleiotropic phenotype affecting the bacterial aggregation, adhesion to an abiotic surface and agar-motility. Studies on A. tumefaciens showed that apart from responding to iron starvation and addition of heme to the medium, Hla secretion mainly responds to microoxic/anoxic conditions. Interestingly, aspD mutant, unable of Hla secretion was avirulet, as shown by incapability of tumor induction in Kalanchoe sp. plants. Taking together, these results suggest that the AspDE Type I Secretion System characterized in this work could be involved in heme uptake through the secretion of a novel hemophore (Hla) probably in the low iron and microaerobiosis present in the tumor.

Di Giacomo, Adrián Santiago. "Ecología y conservación del Yetapá de Collar (Alectrurus risora, Tyrannidae)" (2010-07-19). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En los últimos 100 años el Yetapá de collar (Alectrurus risora, Tyrannidae) ha reducido su distribución original en un 90% debido a la desaparición de los pastizales naturales de Argentina. En la actualidad persisten algunas poblaciones en las provincias de Formosa, Chaco y Corrientes, está considerada globalmente amenazada de extinción (categoría Vulnerable), y se esperan más disminuciones poblacionales debido a la intensificación agrícola. El conocimiento de la reproducción y uso de hábitat de las especies amenazadas es necesario para estimar el riesgo de extinción y efectuar acciones de conservación. Este estudio describe la selección de sitio de nido, la biología reproductiva, los factores que afectan la supervivencia de nidos y la respuesta al fuego de esta especie en la provincia de Formosa. La especie tiene un sistema de apareamiento poligínico, con machos manteniendo territorios contiguos con hasta tres hembras, y el cuidado parental es realizado exclusivamente por la hembra. La supervivencia de nidos es de 0.23 y disminuye con la edad del nido. Los machos y hembras crían 2.6 y 1.5 pichones respectivamente por año. Los patrones de selección de sitio de nido y de respuesta al fuego proveen evidencias del efecto negativo de la ganadería tradicional en los pastizales naturales donde persisten las últimas poblaciones.

Abstract:
The strange-tailed tyrant, Alectrurus risora, is a tyrant flycatcher that inhabits wet grasslands in north-east Argentina. During the last century, its original range has contracted by 90% in association with conversion of natural grasslands to agriculture. At present, it is classified as ‟vulnerable” and further decline in range and number is expected because suitable habitat is subject to current extensive agricultural intensification. Knowledge of the factors that affect the reproductive success and habitat use of threatened species is necessary for accurate assessments of the extinction risk and conservation of their populations. This study shows nest site selection, breeding biology, factors that affect nest survival and fire response of strange-tailed tyrants in a protected area of the humid Chaco, Formosa Province, Argentina. This species has a social polygynous mating system, with males owning contiguous territories with up to three females and parental care is provided exclusively by females. Nest survival was 0.23 and decreased with age of the nest. Males and females fledged 2.6 and 1.6 chicks respectively per breeding season. Nest site selection and fire response patterns provide evidence of the negative effect of the traditional livestock grazing practices in the natural grasslands where last populations remain.

Viau, Verónica Elizabeth. "Optimización del crecimiento y la supervivencia de juveniles de la langosta de agua dulce Cherax quadricarinatus mediante el mejoramiento del hábitat" (2010-05-28). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La langosta de agua dulce Cherax quadricarinatus (Crustacea, Decapoda, Parastacidae), originaria de los ríos del norte de Australia, ofrece grandes ventajas para la cría comercial, siendo cultivada en varios países del mundo. En Argentina se la cultiva desde hace algunas décadas, si bien no posee un clima óptimo para su cría, por lo cual se hace necesario desarrollar estrategias compensatorias que maximicen la producción en criadero. En el cultivo de esta especie, los primeros estadios de vida son esenciales para conseguir un buen rendimiento en la producción final, siendo las fases de hatchery (juveniles tempranos de hasta 1 gramo de peso corporal) y de nursery (juveniles avanzados de pre-engorde, de 1 a 5 gramos de peso corporal) de extrema importancia ya que durante éstas se presentan elevadas tasas de mortalidad, siendo entonces necesario optimizar las condiciones específicas de cultivo. En el presente trabajo se evaluaron diferentes tipos de sustratos, refugios y fuentes de alimentación en el cultivo de juveniles tempranos y avanzados, a fin de optimizar el crecimiento y la supervivencia. A partir de los resultados obtenidos, se recomienda complejizar el hábitat, es decir, utilizar un sustrato que otorgue sostén y resguardo durante la ecdisis (como piedras o canto rodado) y un refugio vertical (diseño tipo torre) que optimice la disponibilidad de lugares de amparo, aprovechando toda la columna de agua del acuario de cultivo; esta metodología demostró mejorar significativamente la supervivencia y el crecimiento de los juveniles tempranos, que resultaron ser los más susceptibles durante el cultivo. Además, utilizando un refugio vertical durante esta fase del desarrollo, se podría incrementar la densidad de siembra, sin afectar el crecimiento y la sobrevida de los juveniles. Por otro lado, la Artemia sp. como fuente de alimentación resultó favorable para el crecimiento y sobrevida de los juveniles tempranos, pudiendo reemplazar al costoso alimento balanceado que se utiliza actualmente en los criaderos. Asimismo, la incorporación al cultivo de biofilm adherido a un sustrato artificial, resultó beneficiosa para ambos tipos de juveniles cuando se lo administró como fuente complementaria de alimento, manteniendo la calidad del agua y resultando en un incremento en la sobrevida de los animales. Los avances obtenidos en la presente Tesis podrían ser transferidos al ámbito productivo, a fin de ofrecer soluciones concretas a problemas reales que manifiestan los mismos productores.

Abstract:
The freshwater crayfish Cherax quadricarinatus (Crustacea, Decapoda, Parastacidae), native form northern Australia, presents very good conditions for its commercial culture, which in fact takes place in several countries. This species is cultured in Argentina since some decades ago, even when the climate is marginal for its culturing; therefore, some compensatory strategies leading to maximize its production in farms should be developed. Successful development of the first juvenile instars is a critical step to achieve a high final yield, being both the hatchery (early juveniles having up to 1 g of body weight) and the nursery (advanced, pre-growing juveniles up to 5 g of body weight) the most important phases where both survival and growth are concerned. In this study, different kind of substrates, refuges and feed sources were assayed, both on early and advanced juveniles, in order to optimize their survival and growing A complex habitat, i.e., a substrate offering support and protection during molting (such as little stones), and also vertical refuges (tower design) that optimize the shielding sites throughout the entire column water, have shown to be the best options for improving both survival and growth of early juveniles, the more susceptible instars during the culture. Besides, by using vertical refuges, an increment of juvenile density is possible, without affecting growth or survival. Concerning feeding, cultured Artemia sp. produced good results, showed to be a good replacement for the expensive pellet food commonly used in farms. Incorporation of biofilm to culture tanks, added to an artificial substrate, result in benefit for both early and advanced juveniles when administering as a complementary feed source; it is especially relevant for maintain water quality, resulting in a higher juvenile survival. Strategies developed by this Thesis could be transferred to the productive sector, since they represent practical solutions to real problems claimed by farmers.

Chornogubsky Clerici, Laura. "Sistemática de la familia Polydolopidae (Mammalia, Marsupialia, Polydolopimorphia) de América del Sur y la Antártida" (2010-03-26). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los representantes de la familia Polydolopidae son marsupiales paleógenos hallados en la Provincia del Chubut (Argentina), Chile Central y la Península Antártica. Están representados en el resgistro fósil principalmente por restos dentarios. Sus premolares son plagiaulacoideos y sus molares, multicuspidados. Se realizó un estudio detallado de las homologías de las cúspides molares así como también se llevó a cabo un estudio sistemático a través del análisis filogenético (con y sin pesos implicados y utilizando el método de pruning para mejorar la resolución). En dicho análisis se incluyó a las especies de Polydolopidae más cinco especies de marsupiales tradicionalmente relacionados con la misma (Prepidolops didelphoides, Bonapartherium hinakusijum, Epidolops ameghinoi, Microbiotherium tehuelchum y Roberthoffstetteria nationalgeographica). El análisis filogenético dio como resultado lo que R. nationagegraphica es la especie hermana de los Polydolopidae y juntos conforman los Polydolopiformes. A su vez, se reconocieron los siguientes géneros: Polydolops, Eudolops, Archaeodolops, Kramadolops, Género A nov., Pseudolops, Antarctodolops, Amphidolops, Pliodolops. En cuanto a las características paleobiológicas, la masa corporal de los polidolópidos oscilaría entre los 60g y los 3,5kg y debieron tener una dieta variada, principalmente frugívora, aunque pudiendo alimentarse también de frutos duros y semillas, o incluso de insectos. Por último, la extinción de los polidolópidos debió estar relacionada a los cambios climáticos acaecidos para fines del Eoceno y comienzo del Oligoceno, período durante el cual el sur de América del Sur y la Antártida sufrieron una fuerte disminución en la temperatura así como también una progresiva desertificación.

Abstract:
Polydolopids are Palaeogene marsupials from Chubut Province (Argentina), Central Chile, and the Antarctic Peninsula. They are mainly represented by dentary remains in the fossil record. Polydolopid premolars are palgiaulacoid and their molars are multicusped. It has been carried out a detailed study on the molar cusp homologies, as well as a philogenetic analysis (with and without implied whitening and using pruning). The analysis included all the polydolopid species and five marsupials usually related by scientists with them (Prepidolops didelphoides, Bonapartherium hinakusijum, Epidolops ameghinoi, Microbiotherium tehuelchum y Roberthoffstetteria nationalgeographica). The results indicate that R. nationalgeographica is the sister-group of Polydolopidae and together they constitute the Polydolopiformes. It has been recognized the following genera: Polydolops, Eudolops, Archaeodolops, Kramadolops, Género A nov., Pseudolops, Antarctodolops, Amphidolops, Pliodolops. Paleobiologically, polydolopids were very diverse in body mass (60g-3.5kg) and they must have had a very diverse diet as well, mainly frugivorous but including hard items as seeds, or even insects. Finally, the extinction of polydolopids should be related with the drastic climatic changes occurred by the Eocene-Oligocene boundary, period in which Patagonia and Antarctica witnessed a rapid coolness and desertification.

Mahmud, Zulema Angela. "Influencia de los aditivos utilizados en el cincado en medio ácido" (2010-03-11). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En principio y a la luz de todo lo que se conoce sobre la deposición metálica (capítulo 1), de la teoría en general sobre el cincado y sobre los aditivos (capítulo 2) se estudian en la tesis los problemas que a nuestro entender resultaron ser relevantes. Uno de los problemas es la reproducibilidad en las mediciones. De ahí, la importancia de tratar el problema del “El Estado inicial” que consiste en la elección del potencial de inicio de las experiencias, para lograr reproducibilidad en la voltametría. Ese potencial, está relacionado con el potencial a circuito abierto, ECA, ambos característicos del sistema en estudio. Se investiga la posible formación de óxidos en el potencial inicial durante el acondicionamiento del electrodo en Ei, para entender su incidencia en el proceso de electrodeposición. Se analiza el mecanismo por el cual actúan los aniones cloruro, sulfato y el aditivo tiourea, en el estado inicial como en la electrodeposición. Para una mejor comprensión de cada uno de los problemas, se emplean las técnicas transientes como la cronoamperometría, la voltametría catódica, la voltametría de redisolución, la voltametría de onda cuadrada y por último y aparte se estudian las galvanostáticas (en distintas zonas de corrientes). Ésta es una técnica que es necesario considerarla especialmente, porque se usa en la industria. Se analiza la deposición voltamétrica de mezclas 1:1 de cloruros y sulfatos. Así como también, con el objetivo de comparar las eficiencias de deposición de cinc en medio de cloruros y de sulfatos, se recurre a la disolución voltamétrica del depósito. Asimismo, se han utilizado otras técnicas de análisis superficiales, la Microscopía Electrónica de barrido, la técnica de análisis superficial denominada XPS y la Difracción de rayos X para el análisis de texturas de cincados obtenidos en presencia y ausencia de tiourea. Finalmente, teniendo en cuenta las experiencias de la tesis y de lo que se sabe de la bibliografía, se consideran los problemas que aún quedan por resolver en el área.

Abstract:
Initially, and in the light of everything what is known on metallic deposition (chapter 1), on the general theory about zinc plating and about additives in electrodeposition (chapter 2), we consider in this thesis the relevant problems on this matter. One of the problems is the reproducibility in measurements. Thus, the importance of dealing with the problem of “the initial Stage” that consists on the choice of the initial potential of the experiences in order to obtain reproducibility in voltammetry. That potential is related to the open circuit potential, ECA -both of them characteristic of the system under study. The possible oxide formation in the initial potential during the preparation of the electrode in Ei is researched in order to understand its incidence on the electroplating process. The mechanism by which the anions like chloride, sulphate and the thiourea additive act, both in the initial state and in the electroplating, is analyzed. For a better understanding of each problem, transient techniques like chronoamperometry, cathodic voltammetry, redisolution voltammetry, square wave voltammetry are studied and, finally and separately, the electrodeposition in galvanostatic condition (in different current zones). The last one is a technique that is necessary to be specially considered since it is used in the industry. The voltammetric deposition of mixtures of chlorides and sulphates 1:1 is analyzed. We also use the voltammetric dissolution of the deposit with the aim of comparing the efficiencies of zinc deposition in the chlorides and sulphates media. Besides, other techniques of superficial analysis have been used: the Electronic Microscopy EDX, the XPS technique of superficial analysis, and the x-ray diffraction for the analysis of textures of zinc deposits obtained in presence and absence of thiourea. Finally, we consider the problems that still are to solve in the area, taking into account the existing bibliography and our experience with the thesis.

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