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Zallocchi, Marisa Laura. "Influencia del estrés sobre la regulación de la actividad 11ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa renal" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo pretende dilucidar algunos de los mecanismos mediados por el estrés y por los glucocorticoides, sobre la actividad de la llβ-hidroxiesteroide deshidrogenasa 2 (11βHSD2). Con este fin se obtuvieron los siguientes aportes: La presencia de la glándula adrenal intacta permite que el animal responda, ante una situación de estrés, con un aumento en la actividad y abundancia de la 11βHSD2 renal; produciéndose un aumento en el catabolismo de los glucocorticoides circulantes. En ausencia de la glándula adrenal, la respuesta del organismo difiere dependiendo de la situación de estrés ensayada. Para el caso de las ratas sometidas a una sobrecarga simulada, existe un incremento de la actividad y abundancia de la 11βHSD2 renal, mientras que, los animales sometidos a una acidosis metabólica, sólo evidencian un incremento en la actividad enzimática con la administración de glucocorticoides. Este incremento se produce sin un aumento en la expresión de la enzima. La administración aguda de corticosterona a ratas adrenalectomizadas, produjo un aumento progresivo de la actividad y abundancia enzimática, hasta la dosis fisiológica de 68 μg de corticosterona/ 100 g de peso corporal. La administración crónica de glucocorticoides, sólo produjo un incremento en la actividad y abundancia de la 11βHSD2, con la dosis suprafisiológica de 308 μg de corticosterona/100 g peso corporal. Existe un incremento progresivo de la actividad enzimática a medida que aumentan los niveles de glucocorticoides circulantes, hasta una cierta concentración (concentración umbral) a partir de la cual la actividad enzimática se vuelve independiente de los niveles de corticosterona. Esta falta de correlación entre los niveles de corticosterona y la actividad enzimática, junto con el aumento de actividad observado en animales adrenalectomizados estresados llevó a plantear la posibilidad de la existencia de algún factor extra-adrenal involucrado en la regulación de la actividad de la 11βHSD2. La linea celular MDCK, derivada de riñón distal de perro posee actividad 11β-deshidrogenasa. La serotonina, posible factor involucrado en la respuesta de la 11βHSD2 frente al estrés, estimula la actividad 11βHSD2 en esta línea celular. Esta estimulación depende de la concentración de serotonina utilizada y de la forma de administración. Además, serotonina muestra un efecto multifásico sobre la estimulación de la actividad enzimática. La acción de serotonina sobre las células MDCK, estaría mediada por receptores 5HT1Dα.

Abstract:
This work is focused on elucidation of some of the regulatory mechanisms of stress- and glucocorticoid-mediated renal 11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2 (11βHSD2) activity. To this purpose the following contributions were obtained. The presence of an intact adrenal gland allows the animal to increase renal 11βHSD2 activity and abundance in response to stress, thereby stimulating glucocorticoid catabolism. In the absence of the adrenal gland the organism’s response differs depending the stress situation applied: rats submitted to simulated gavage, increase renal 11βHSD2 activity and abundance, while rats submitted to metabolic acidosis only show an increase in enzyme activity upon glucocorticoid administration. This increment occurs without an increase in enzyme abundance. The acute administration of corticosterone to adrenalectomized rats produces a progressive increment in enzyme activity and abundance, up to the physiological dose of 68 μg corticosterone/ 100 g body weight. The chronic administration of corticosterone, only produces an increment in enzyme activity and abundance with the supraphysiological dose of 308 μg corticosterone/ 100 g body weight. The cell line MDCK (Madin-Darby Canine Kidney), derived from distal nephron, shows 11βHSD activity. Serotonin, believed to be the extra-adrenal factor involved in 11βHSD2 regulation in adrenalectomized rats, stimulates its activity. Besides, serotonin shows a multiphasic effect on dehydrogenase activity stimulation. Serotonin action in MDCK cells, is probably due to 5HT1Dα receptor activation.

Wainselboim, Alejandro Javier. "La trofalaxia en el marco de la recolección de néctar en la abeja doméstica Apis mellífera : la dinámica de la transferencia en función de la experiencia del individuo recolector" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió el comportamiento de intercambio de alimento (trofalaxia) en pares de abejas domésticas Apis mellifera en función de diversos parámetros de la fuente de alimento visitada por el individuo dador de solución. Se observó que dentro del comportamiento estudiado, la velocidad a la que se transfiere la solución recolectada (tasa de transferencia) es modulada en función de parámetros relacionados con las características de la fuente tales como el flujo ofrecido, el tiempo de visita a la fuente y la experiencia vivida previamente por la recolectora de alimento en la fuente. En términos generales, la tasa de transferencia parece ser una salida comportamental de tipo motivacional, modulada por la experiencia vivida por el animal en la fuente de alimento. Entre los factores capaces de modular este comportamiento se encuentran aquellos que determinan en gran medida la productividad de la fuente visitada: flujo de solución y tiempo de recolección en la fuente. Estos factores parecen ser integrados en un parámetro de “productividad media” de la fuente, que básicamente describe la cantidad de solución recolectada por el animal en determinado intervalo de tiempo, es decir un “flujo medio”. Esta integración de diversos parámetros de productividad en un valor único (integrador), coincide con trabajos previos de otros grupos de investigación. El posible valor funcional de la modulación de la tasa de transferencia es analizado dentro del contexto del comportamiento social de transferencia de información de las abejas. Brevemente, la evaluación de la tasa de transferencia del individuo recolector por parte de las receptoras-procesadoras de néctar, como así también el eventual reclutamiento de abejas receptoras-recolectoras podría ayudar a optimizar el ciclo de descarga, recepción y procesamiento del néctar proveniente de las fuentes más ricas del entorno en ese momento visitadas por las forrajeras de la colmena, contribuyendo así a la supervivencia de la colmena en su conjunto.

Abstract:
Food exchange behavior (trophallaxis) was studied in pairs of honeybees Apis mellifera as a function of several parameters of the food source visited by the food giving individual. Within the studied behavior, the speed at which the solution is unloaded (unloading rate) is modulated as a function of parameters related to the characteristics of the food source such as offered flow rate, visit time at the source and the experience previously lived by the forager at the source. In general terms, unloading rate seems to be a motivational output behavior, modulated by the experience the forager has gone through at the source. Within the factors capable of modulating this behavior are those that determine to a considerable extent the productivity of the visited source: flow of solution and visit time at the source. These factors seem to be integrated into a single parameter of “mean productivity” of the source, that basically describes the amount of solution collected in a certain period of time, i.e. a “mean flow rate”. This integration of several parameters of productivity into a single (integrative) one, agrees with previous works of other research groups. The possible functional value of the modulation of unloading rate is analyzed within the context of social behavior of information transmission in honeybees. Briefly, the modulation of thoracic temperature of the receptors as related to the unloading rate of the forager that has been observed in other works, could help optimize the cycle of nectar unloading, reception and processing that comes from the most productive sources currently visited by the hive's foragers, contributing in this way to the survival of the colony as a whole.

Vittori, Daniela Cecilia. "Mecanismos de acción del aluminio sobre la eritropoyesis" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La exposición a aluminio (Al) afecta la eritropoyesis. Sin embargo, poco se conoce acerca de las características de este efecto, así como de los mecanismos involucrados. En el presente trabajo de investigación se planteó, como primer objetivo, la necesidad de caracterizar la anemia producida por sobrecarga oral crónica con Al. Después de ocho meses de tratamiento, los animales desarrollaron anemia no ferropénica. La disminución de la concentración plasmática de haptoglobina, el aumento de reticulocitos y la presencia de esquistocitos apoyan la naturaleza hemolítica de la anemia desarrollada. A causa del tratamiento, se observó una importante inhibición del desarrollo de CFU-E en ensayos ex vivo de células de médula osea. El otro signo notable fue la aparición de severas alteraciones morfolófgicas en eritrocitos de sangre periférica, lo que sugirió una acción directa del A1 sobre las células eritroides maduras. Esa posibilidad fue corroborada en ensayos in vitro de eritrocitos humanos incubados en presencia del metal, en los cuales el rasgo persistente fue la desaparición de la típica forma bicóncava. El aumento de la degradación de la proteína estructural banda 3, observado junto con la detección de depósitos de A1 en la membrana, apoya no sólo la estrecha relación entre la morfología celular y la estructura y organización de la membrana del eritrocito, sino también una acción directa del metal sobre componentes de la membrana. La disminuida respuesta de las células progenitoras CFU-E a la eritropoyetina (Epo), después de la exposición crónica a Al, motivó la investigación de los efectos del metal sobre mecanismos involucrados en la vía de activación del receptor para Epo (EpoR). La exposición a A1 provocó disminución del EpoR a nivel de ARNm y de proteína, hallazgo que coincidió con la anulación del efecto antiapoptótico de la Epo sobre células K562. En la línea UT-7, altamente dependiente de Epo, sólo una exposición crónica a Al modificó la respuesta a la 1a hormona. Después de esa exposición, el aumento del EpoR a nivel de ARNm y de proteína, detectado bajo condiciones de carencia de Epo, sugiere un aumento de la sensibilidad de esta línea celular a1 factor de crecimiento. En conclusión, es evidente que el Al no resulta un elemento inocuo. Actúa sobre el sistema eritropoyético afectando a las células eritroides en distintos estadios de maduración. Los resultados sugieren una acción directa del metal sobre los componentes de la membrana celular de los eritrocitos maduros y un mecanismo de interferencia en distintos caminos de activación de células eritroides inmaduras mediados por la formación del complejo eritmpoyetina-receptor.

Vitale, Alejandra Mariel. "Acción autocrina/paracrina de la inhibina sobre la selección del folículo ovárico" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de la presente investigación consistió en evaluar los efectos in vivo e in vitro de la inhibina A recombinante humana durante distintos estadios del desarrollo folicular. En particular se evaluó el efecto de esta glicoproteína sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo, sobre la apoptosis y la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas y sobre la esteroidogénesis ovárica en ratas prepúeberes tratadas con DES o con PMSG. Los resultados indican que la inhibina A es producida in vitro por las células de la granulosa en cultivo obtenidas de ovarios de ratas estimuladas con DES y que su producción es estingulada por FSH, TGFβ y estradiol. También se observa que concentraciones fisiológicas de inhibina A disminuyen la proliferación celular inducida por estos tres factores. Además del efecto antiproliferatívo se observa, en este mismo modelo experimental, que la administración de inhibina A in vivo produce un retraso en el desarrollo folicular y un aumento de la apoptosis. Estos hallazgos fueron confirmados por ensayos in vitro donde se observa un aumento significativo de a fragmentación del ADN en folículos antrales tempranos incubados con inhibina A. Con respecto a la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas la inhibina A produce tanto in vivo como in vitro un aumento en los niveles de Bax, mientras que los niveles de Bcl-2 permanecen constantes. Por otra parte la inhibina no tiene ningún efecto en la esteroidogénesis. En cuanto a los ensayos realizados con ovarios de ratas estimuladas con PMSG se observó que la inhibina A no tiene efecto alguno sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo. Tampoco se advirtió ningún efecto de esta glicoproteina sobre la fragmentación del ADN en cultivos de folículos preovulatorios. Por otra parte la administración in vivo de inhibina en estas ratas produce un retraso en el desarrollo folicular de folículos inmaduros, pero no tiene ningún efecto en el crecimiento de folículos preovulatorios. Asimismo, en todos los tipos foliculares estudiados se observa una disminución de la apoptosis. Como conclusión, estos resultados sugieren que la inhibina A posee una acción local en el ovario, siendo uno de los factores de acción autocrina o paracrina que regula el crecimiento folicular.

Abstract:
The purpose of this study was to evaluate the role of inhibin A in follicular development and apoptosis- related mechanisms, in preantral and early antral follicles from prepubertal DES- treated rats and in preovulatory follicles in PMSG- treated rats. Granulosa cells isolated from the ovaries of 23-25-day-old DES- treated rats were cultured in serum-free medium containing FSH, TGFβ, and estradiol in the presence and absence of different concentratíons of inhibin A. 3H- thymidine incorporation was decreased in the presence of inhibin, while no significant changes were observed in culture media on progesterone and estradiol levels. An increase in low molecular weight DNA fragmentation indicative of apoptosis, and an increase in the protein levels of Bax with no changes in Bcl-2, were evident in early antral follicles incubated 24 h with inhibin. For each animal inhibin (0.5 μg/ovary) was injected intrabursally in one ovary while the contralateral ovary served as control. Ovarian histology revealed an inhibitory effect of inhibin treatment on the follicular development induced by DES. At 24 h of inhibin injection, the number of preantral follicles was increased as compared to controls, whereas the number of early antral follicles was decreased. In addition, in vivo inhibin treatment caused an increase in the percentage of apoptotic cells in preantral, and early antral follicles with a subsequent increase in Bax levels. On the other hand, granulose cells isolated from the ovaries of PMSG- treated rats were cultured in serum- free medium containing FSH, TGFβ, and estradiol in the presence and absence of different concentratíons of inhibin A. 3H- thymidine incorporation was not changed in the presence of inhibin. There were no changes in low molecular weight DNA fragmentation in early antral follicles incubated 24 h with inhibin. For each animal inhibin (0.5 μg/ovary) was injected intrabursally in one ovary while the contralateral ovary served as control. Ovarian histology revealed no effect of inhibin treatment on follicular development of preovulatory follicles induced by PMSG. At 24 h of inhibin injection, the number of preantral follicles was increased as compared to controls, whereas the number of early antral follicles was decreased. There were no changes in the number of preovulatory follicles. In addition, in vivo inhibin treatment caused a decrease in the percentage of apoptotic cells in all kind of follicles. These results suggest that inhibin produced by the dominant follicle may act as a paracrine factor inhibiting the growth of neighboring follicles; thus participating in the mechanism of follicular selection.

Villarreal, Mirta. "Síntesis de filtros compuestos para el reconocimiento de múltiples formas en simultáneo" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el transcurso de esta tesis se han propuesto y desarrollado distintas técnicas para aumentar, por un lado, la capacidad de almacenamiento de filtros a usar en correladores ópticos y por otro, la cantidad de procesos de reconocimiento que pueden realizarse en simultáneo. Básicamente las técnicas propuestas pueden dividirse en aquellas orientadas para sintetizar filtros sobre material fotográfico, es decir materiales en donde la función a representar viene codificada como variaciones de amplitud; y aquellas desarrolladas para implementar los filtros sobre moduladores sólo de fase. Se presentan dos métodos para generar filtros múltiples sobre película diapositiva color. En ambos el registro se lleva a cabo mediante el empleo de copiadoras digitales de alta resolución. El primero de ellos utiliza una apropiada combinación de colores del sistema RGB para almacenar diferentes partes de la información en canales independientes. El filtro así generado es utilizado en un correlador tipo Vander Lugt en el que se emplea una iluminación multiespectral. De esta manera es posible incrementar la cantidad de información a codificar en un filtro tradicional tantas veces como canales de color independientes se dispongan. El segundo método presentado se basó en la capacidad del material fotográfico para representar distintos niveles de gris. El método propuesto permite registrar directamente la función que representa la interferencia entre el haz objeto y la onda de referencia sin recurrir a los métodos binarios tradicionales para generar CGH, de este modo el filtro se comporta como un verdadero interferograma. Estos nuevos filtros poseen las mismas ventajas que tiene un holograma real por sobre el digital binario, como son la reconstrucción de tan sólo los órdenes 1,0 y —1 y la posibilidad de manejar libremente la orientación y frecuencia de la onda portadora. Así, en los filtros compuestos por varios hologramas es posible seleccionar la posición de la respuesta al impulso brindada por cada uno de ellos sin distorsiones ni pérdidas de la información. La segunda parte de la Tesis está orientada al diseño de filtros compuestos para ser utilizados en correladores en donde tanto la información de la escena de entrada como la correspondiente al filtro es representada en pantallas de TV de cristal líquido (LCD). Se estudian las configuraciones de polarización, para la luz incidente y emergente de las LCD, de modo que la utilizada para representar la escena module sólo la amplitud de la onda incidente y la correspondiente al filtro sólo la fase. Dadas estas características los filtros diseñados contienen información sólo de fase y se obtienen al registrar directamente los valores de fase de los objetos a reconocer en lugar de una codificación en amplitud de los mismos. Los mismos presentan la ventaja de no reproducir en su respuesta al impulso la imagen conjugada; por consiguiente al implementarlo en un correlador no se forma la señal de convolución y libera esa zona del plano de salida para procesar más información. Este nuevo diseño nos permite aumentar no sólo la capacidad de almacenamiento de los filtros sino la cantidad de identificaciones simultáneas que pueden llevarse a cabo.

Abstract:
In this Thesis we have proposed and developed several techniques to increase, on one hand, the storage capability of filters to be used in optical correlators, and on the other, the number of processes to be performed simultaneously. Basically, the proposed techniques can be separated in those orientated to synthesize filters onto photographic materials, i.e. materials in which the function to be represented have to be codified as amplitude variations; and those developed to be implemented on phase modulators. We have presented two methods to generate composed filters onto color film slides. In both methods we used a high resolution film recorder machine to transfer the filter to the slides. The first one; employs an adequate combination of the RGB color system to storage different parts of the information in independent color channels. The generated filter is used in a Vander Lugt correlator with multi-spectral illumination. In this way, the amount of information usually codified by a traditional filter can be increased as many times as independent color channels are available. The second one is based on the capability of photographic films to represent different gray levels. The proposed method allows the direct implementation of the function obtained by the interference between an object beam and a reference wave without making use of the traditional binary techniques to generate CGHs, in this way the filter acts like a true interferogram. These new kind of filters offer the same advantages that a real hologram, i.e. only the 1, 0 and -1 orders are reconstructed and it is possible to control, in an arbitrary way, the direction of the reference wave. Moreover, as gray level filters are obtained, it is possible to add several holograms without distortions and misinformation. The second part of this Thesis is orientated to the generation of composed filters to be used in optical correlators in which both, the input scene and the filter. are represented onto liquid crystal television displays (LCD’s). We have studied configurations of light polarization states that allow to obtain pure amplitude modulation or phase pure modulation by using LCD’s. In our case we chose to display the input scene as an amplitude function and the filter as a phase one . The proposed filters contain only phase information and no codification is needed to display them. The impulse response of these filters reconstruct only the real image; consequently the convolution signal is absent on the final plane and new places are now available to accommodate more correlation channels. This new filter design technique allows us to increase not only the storage capability of filters but also the amount of information to be processed simultaneously.

Vigliarolo, Paula K.. "Estudio de la variabilidad sinóptica extratropical del hemisferio Sur durante la primavera y el invierno. Su influencia en las variaciones de ozono." (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La variabilidad de escala sinóptica que se observa en la vecindad de Sudamérica durante el invierno y la primavera es analizada en detalle en esta tesis con el fin de mostrar el impacto que la misma produce en los cambios de ozono y de radiación ultravioleta, en particular en la vecindad de Ushuaia. El análisis de la distribución espacial de la variabilidad media de las perturbaciones sinópticas (storm-tracks) sobre el Hemisferio Sur mostró que presenta una gran correlación con la distribución correspondiente a la variabilidad de las perturbaciones de ozono de alta frecuencia (ozone-tracks). Los modos principales de variabilidad atmosférica de escala sinóptica sobre América del sur extratropical son identificados y caracterizados para seis inviernos (1983-88) y quince primaveras (1979-93). Dichos modos surgen luego de aplicar la técnica de funciones ortogonales empíricas extendidas y rotadas (REEOFs) a la perturbación temporal de alta frecuencia(que se obtiene luego de remover el campo medio climatológico y su variabilidad interanual) de la componente meridional del viento en 300 hPa. Los patrones asociados a los principales REEOFs muestran un tren de ondas desplazándose a lo largo de las latitudes del jet subpolar, sobre 50º-55º S en invierno y 55º-60º S en primavera. En ambas estaciones se observa que se trata de ondas baroclínicas con sus máximos en la alta tropósfera; aunque para los meses de primavera dichas ondas se hallan más extendidas en la vertical con amplitudes significativas hasta 30 hPa. La distribución de ozono asociada a los modos sinópticos más activos muestra que durante el invierno la correspondencia entre mínimos (máximos) de ozono y cuñas (vaguadas) es directa y por lo tanto indica una modulación dinámica del campo de ozono por las perturbaciones sinópticas. Durante la primavera, la distribución de temperatura y viento del estado medio propicia una mayor propagación en la vertical hacia la estratósfera de la energía emanante de la tropósfera. Además también en esta época, las variaciones de ozono son mayores en valor absoluto a las del invierno y adoptan una forma de "S" invertida y alargada en la dirección zonal. Se encontró que una perturbación negativa (positiva) de ozono, se asocia en su porción meridional, a la parte norte de un sistema anticiclónico (ciclónico), que típicamente ondula la tropopausa hacia arriba (abajo) y causa que la densidad del ozono en la baja estratósfera alcance un mínimo (máximo). En cambio, la porción más austral de la perturbación de ozono se asocia al extremo sudoeste del sistema ciclónico (anticiclónico) ubicado corriente abajo, que durante esta época está relacionado con la advección de aire estratosférico pobre (rico) en ozono y por lo tanto el contenido total de la columna disminuye (aumenta) en dicha región. Asimismo, también presentamos un análisis de las variaciones de radiación ultravioleta sobre la ciudad de Ushuaia para el período 1991-1998. En particular, la banda de 340 mostró una influencia netamente local en las primeras capas de la atmósfera de los sistemas de tiempo de escala submensual. En contraste, la banda de 305 que se asocia a la variabilidad sinóptica. Los patrones espaciales de correlación y regresión mostraron para la banda de 305 con respecto a los correspondientes a la banda de 340, una mayor extensión horizontal y mayores valores absolutos, con niveles de significancia máximos en la alta tropósfera y en la estratósfera media y baja, que se atribuye a la dependencia de dicha banda del contenido de ozono. En tal sentido, estos análisis confirmaron que la generación de perturbaciones de ozono por actividad de ondas sinópticas descripto previamente, producen cambios significativos en la UV sobre Ushuaia y su vecindad.

Vezzani, Darío. "El hábitat de Aedes aegypti (Diptera : Culicidae) en Buenos Aires para distintas escalas espaciales de estudio" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio del hábitat de Aedes aegypti es de gran importancia para el desarrollo e implementación de acciones de control efectivas. Con el objetivo de caracterizar el hábitat de este mosquito e identificar los factores que influyen en su calidad, se realizaron estudios para las siguientes escalas espaciales: los cementerios como macrohábitats, los parches dentro de un mismo cementerio, los microhábitats dentro de un mismo parche, y los recipientes donde cría. Entre 1998 y 2001 se llevaron a cabo monitoreos de actividad de oviposición de las hembras y de sitios de cría. Se estudió la asociación entre el nivel de infestación y la oferta de recipientes, la cobertura vegetal, la proximidad de otros sitios favorables, la sombra, la temperatura del agua, el orden y la limpieza del ambiente, y distintas características de los recipientes. En todas las escalas estudiadas se observaron gradientes del nivel de infestación del vector. Los ambientes que alcanzaron los mayores niveles de infestación, también fueron los que permanecieron infestados durante más tiempo. Entre las variables estudiadas, la vegetación y la proximidad a otras áreas favorables demostraron una asociación positiva con la calidad del hábitat de Ae. aegypti. La variable oferta de recipientes no se halló asociada con los niveles de infestación, en ambientes con más de 100 recipientes por hectárea. El material de los recipientes influyó en la calidad como hábitat de cría, dependiendo de las características del ambiente. Los recipientes de plástico fueron los más favorables y los de metal los menos favorables para la proliferación del vector. El nivel de infestación no se halló asociado con la capacidad de los recipientes. Los resultados sugieren que en áreas urbanas los ambientes más favorables para Ae. aegypti son aquellos de gran acumulación de recipientes con agua, protegidos de las condiciones ambientales extremas por la vegetación o por estructuras antrópicas. Estos ambientes actuarían como focos de proliferación y dispersión hacia el resto de la ciudad y sobre ellos habría que concentrar los esfuerzos para reducir la abundancia del mosquito. Los cementerios en Buenos Aires son sitios adecuados para ser utilizados como modelo en estudios ecológicos de culícidos urbanos que crían en recipientes artificiales.

Abstract:
The study of the habitat of Aedes aegypti is of great importance for the development and implementation of effective control measures. In order to characterize the habitat of this mosquito species and to identify factors affecting its quality, studies were conducted at the following spatial scales: cemeteries as macrohabitats, patches within a same cemetery, microhabitats within a same patch, and breeding containers. Female oviposition activity and breeding sites were monitored from 1998 to 2001. The associations between the infestation level and different environmental variables were evaluated. Those variables were container availability, vegetation cover, proximity to other favourable sites, shade, water temperature, cleanness of the environment, and container characteristics. The vector infestation level showed a gradient at all scales studied. Those environments with highest infestation levels also remained infested for a longer period. Among the studied variables, vegetation and proximity to other favourable sites showed a positive association with the habitat quality of Ae. aegypti. The infestation level was not associated with container availability in environments with more than 100 containers per hectare. Containers made of different materials showed a variable suitability as breeding sites of Ae. aegypti, according to environmental characteristics. Plastic and metal containers were the most and less favourable breeding sites, respectively. The infestation level was not associated with the capacity of containers. Results suggest that in urban areas the most favourable environments for Ae aegypti are sites with a large number of water-filled containers, sheltered from extreme environmental conditions by vegetation or manmade structures. Efforts to reduce the mosquito abundance should be focused on these sites, which represent potential proliferation and dispersal foci towards the rest of the city. Cemeteries in Buenos Aires are suitable areas to be used as a model in ecological studies of urban culicids breeding in artificial containers.

Veaute, Carolina M. I.. "Modelos de inmunidad natural y adquirida para el estudio del sistema proacrosina/acrosina en el proceso de fecundación" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Vazquez, Cristina. "Análisis de sistemas poliméricos por fluorescencia de rayos X con geometría de reflexión total" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El principio que emplea la reflexión total del haz primario de rayos X en los análisis por fluorescencia es conocido desde el año 1971 a partir del trabajo publicado por Yoneda y Horiuchi. En geometría por reflexión total, el haz primario incide sobre la muestra preparada como filme delgado y depositado sobre una superficie ópticamente reflectora, con un ángulo inferior al ángulo crítico de reflexión total. En estas condiciones, la radiación primaria no penetra virtualmente en el soporte reflector, produciendo una sustancial reducción del fondo espectral bajo los picos característicos del espectro fluorescente, aumentando sensiblemente el poder de detección por aumento de la relación señal/fondo. Su empleo en la determinación de cantidades del orden del nanogramo en sistemas acuosos ha sido demostrado en numerosas publicaciones que se pueden consultar a tal efecto. Sin embargo, su utilidad no ha sido muy estudiada en sistemas químicos orgánicos de elevada viscosidad donde otras técnicas analíticas presentan algunas dificultades. Como ejemplos de estos sistemas pueden mencionarse las dispersiones de polímeros hidrosolubles, de empleo creciente en los últimos años en la industria debido a su biodegradabilidad y su biosíntesis controlada, reproducible y económica. Su uso comercial está basado en la habilidad que tienen sus dispersiones para alterar las propiedades reológicas del agua. Son empleados generalmente como emulsiones estabilizadoras, agentes gelificantes y películas delgadas para reducir la energía de fricción en fluidos. Teniendo en cuenta que las impurezas presentes en estos polímeros pueden modificar sus propiedades fisicoquímicas, su determinación y control en procesos de purificación se hacen indispensables. Para su empleo con propósitos farmacéuticos y alimentarios, el control de impurezas previene problemas de toxicidad. Las motivaciones para el uso de la Fluoresoencia de Rayos X por Reflexión Total (TXRF) radican principalmente en la sencillez para la preparación de la muestra, su alto poder de detección, la existencia de curvas de calibración lineales en un amplio ámbito de concentraciones y la escasa cantidad de muestra requerida para el análisis (economía en reactivos y minima producción de desechos). Para la realización de este trabajo se han empleado los siguientes polímeros: scleroglucano, glucomannan, 2,3,6, tri-oxo-etilamilosa, xantano, goma guar, goma arábiga. carboximetilcelulosa, alginato de sodio, carragina, gelatina y pectina. En este trabajo de investigación se estudia: a) la aplicabilidad de la TXRF en sistemas políméricos en un amplio intervalo de concentraciones (desde soles a geles), empleando la linea de dispersión Compton como estándar interno, b) el uso de la información contenida en la región de dispersión Compton y Rayleigh de los espectros para estimar el contenido hidrógeno y carbono más oxígeno de los polímeros y para su clasificación empleando técnicas quimiométricas, c) la eficiencia de la TXRF para el control de la purificación de polímeros en procesos de diálisis, microfiltración y ultrafiltración, y, d) su utilidad para la evaluación del rendimiento de una reacción de marcado químico.

Abstract:
The principles on which Total Reflexion X-Ray Fluorescence (TXRF) chemical analysis are based have been established by Yoneda and Horiuchi, in 1971. In total reflexion geometry the primary X-Ray beam strikes a sample, prepared as a thin film and deposited on an optically reflecting surface, with an incident angle smaller than the critical total reflection angle. Under these conditions the primary radiation does not penetrate the reflecting sample holder, thus reducing substantially the spectral background under the characteristic fluorescence peaks, increasing the signal to noise ratio and therefore the detection power. The use of this technique in the determination of quantities in the order of nanogram in aqueous systems has been demonstrated in a large number of publications; this is not the case, however, for high viscosity organic systems where other analytical techniques present some difficulties. Typical examples of such systems are the dispersions of hydro soluble polymers, which have been used increasingly in recent years by the chemical industry due to their controlled, reproducible and economical biosynthesis, and they biodegradability. Their commercial use is based on the ability of their dispersions for changing the rheological properties of water. They are generally used as stabilizing emulsions, jellifying agents, and thin films to reduce friction in fluids. Taking into account that impurities may affect their physicochemical properties, the determination and control of these in purification processes are indispensable; impurity control also prevents toxicity problems when used for pharmaceutical and food purposes. The main reasons for using TXRF are essentially that the sample preparation is simple and small amounts of sample are required, minimizing the use of reactives and the production of waste; its detection power is high, and linear calibration curves for large concentration intervals exist. The polymers that have been used in the present Thesis are: sclerogucan. glucomannan, 2.3,6, tri-oxo-etilamilose, xantan, guar gum, arabic gum, carboximetiloelulose, sodium alginate, carrageen, gelatin and pectin. In this work we have focused our research on the following: a) Applicability of TXRF to the study of polymeric systems in a large concentration range (from sols to gels) using the Compton dispersion line as an internal standard. b) Use of the information contained in the Compton and Rayleigh dispersion spectral region to estimate the hydrogen and carbon+oxygen polymers content and for their classification using chemometric techniques. c) Efficiency of TXRF for the control of the purification of polymers in dialysis. and micro and ultra filtration. d) Usefulness of TXRF for the evaluation of a chemical labeling reaction.

Vadell, Eduardo Miguel. "Contribución a la sistemática y ecología de los dictiostélidos del Parque Nacional Iguazú, Misiones, Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La selva subtropical húmeda en el P.N. Cataratas del Iguazú, Pcia. de Misiones, Argentina, contiene en sus suelos y broza una comunidad de dictiostélidos y taxones afines de alta diversidad. Ésta riqueza es la consecuencia de un conjunto de factores ambientales y biológicos favorables, entre los que se cuentan la diversidad florística, los vectores de dispersión, la fertilidad del suelo y el régimen hídrico-térmico del clima. Se aislaron 32 taxones mediante una técnica de dilución a partir de muestras de la broza y suelo superficial de distintas zonas de muestreo, realizadas durante cuatro años. Algunas zonas con disturbios antrópícos considerables mostraron diferencias importantes en abundancia y riqueza específica, comparativamente con las zonas semi-prístinas. Las especies clasificadas, con excepción de tres, pertenecen a las familias Dictyosteliaceae y Acytosteliaceae dentro de la Subclase Dictyostelidae. Las caracteristicas morfológicas, de crecimiento y desarrollo de cada taxón fueron descriptas, registradas en dibujos, y microfotografiadas. Se anotaron las condiciones óptimas de cultivo en el laboratorio, flora del sitio de muestreo y otros parámetros climáticos y edáficos, registrándose las posibilidades de su conservación permanente por líofilizado, entre otras técnicas. Se valoraron críticamente los caracteres taxonómicos, así como los criterios de clasificación. Se realizó la observación y registro de las interacciones con algunos organismos de la selva. Los nuevos taxones descriptos e ilustrados son Dictyostelium nanopodium, D. schizocaule, D. caulicarpum, D. dichotomum, D.jesuiticum, D. microcaule, Polysphondylium ñandutensis, P. iguazuensis y las nuevas variedades D. quercibrachium var. misionense. P. asymetricum var. diversisporum y D. lavandulum var. apodum. La dominancia de D. macrocephalum, D. giganteum y del género Polysphondylium en la mayoria de las áreas, en términos de Valor de Importancia, y la subdominancia de D. monochasioides, D. polycephalum y D. purpureum, entre otras, muestran un sistema comparable a la de otros trópicos y subtrópicos del mundo, en que la diversidad de taxones es alta pero la densidad es baja. Las bajas densidades respecto a otros biomas comparables, y las variaciones de frecuencias sugieren que existen factores adversos, identificados para otros habitantes de la selva, de distinto origen, que pueden poner en riesgo la riqueza de estas comunidades microbianas.

Turjanski, Adrián G.. "Interacción de la melatonina con radicales libres" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de este trabajo de tesis fue el estudio a nivel molecular de la interacción de la melatonina (N-acetil-S-metoxitriptamina) con dos radicales libres de relevancia biológica, el radical oxhidrilo (OH·) y el óxido nítrico (NO). Para el desarrollo del presente trabajo se analizaron estas interacciones químicas desde un enfoque teórico, mediante técnicas de simulación computacional, desde un enfoque experimental, a través del estudio de las mismas en condiciones aisladas y controladas, y a través de la evaluación de los alcances fisiológicos de las reacciones propuestas. Para evaluar las interacciones con los diferentes blancos se analizó, en primer término, la superficie de energía potencial de la melatonina mediante técnicas de dinámica molécular basadas en campos de fuerzas clásicos y métodos semiempíricos. Se prestó especial atención a los aspectos relacionados con su libertad conformacional en vacío y en solución acuosa. Asimismo, se analizó la dependencia de las propiedades moleculares con la conformación. La reacción con el radical oxhidrilo se estudió mediante técnicas de estructura electrónica, evaluando los posibles mecanismos de reacción y realizando una exhaustiva caracterización de los intermediarios. El estudio de la interacción con NO se puede dividir en dos partes: i) la identificación y caracterización de los productos de reacción y la elucidación de los mecanismos operantes en diversos medios; y ii) el estudio del efecto de la melatonina sobre la biosíntesis de NO en la retina de hámster. Finalmente, mediante el uso de técnicas de resonancia magnética nuclear y de dinámica molecular, se realizó un estudio detallado de la interacción entre la melatonina y la calmodulina, una proteína con probado efecto estimulatorio en la biosíntesis del NO.

Abstract:
The goal of this thesis was the study at a molecular level of the interactions of melatonin (N-Acetyl-5-metoxytriptamine) with two free radicals of biological relevance, hydroxyl (OH·) radical and nitric oxide (NO). The evaluation of the different interactions has been performed by a theoretical approach using molecular modeling tools; through the study of these reactions in isolated and controlled conditions, and finally by the evaluation of their physiological relevance. In order to evaluate the interactions with these different targets, the potential energy surface of melatonin has been analyzed by classical molecular dynamics and semiempirical electronic structure methodologies. Special attention has been paid to the conformational behavior in vacuum and aqueous solution. Moreover, the influence of conformation on several properties has been studied. The reaction with OH· has been analyzed with electronic structure methods. Feasible reaction mechanisms have been evaluated along with a thorough characterization of the intermediates. The research on the interaction with NO consisted of: i) the identification and characterization of the products, and the elucidation of the mechanisms operative in different environments ii) by the analysis of the effect of melatonin on NO biosynthesis in the hamster retina. Finally, by means of nuclear magnetic resonance and molecular dynamics techniques, a detailed study of the interaction of melatonin with calmodulin, a stimulatory protein of NO biosynthesis has been carried out.

Torres, Juan Carlos. "Sistemas convectivos en mesoescala altamente precipitantes en el norte y centro de Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es el caracterizar el ambiente en el que se desarrollan los sistemas convectivos en el sudeste de América del Sur. Para ello se procedió a seleccionar aquellas situaciones que hubieran producido una precipitación superior a los 120 mm en al menos una estación pluviométrica del territorio argentino durante los meses de octubre a abril del período 1988/1993. Estos eventos representan casos extremos de precipitación, por lo que su estudio es fundamental por su alto impacto en las actividades socioeconómicas de la región y representan un desafio para el pronóstico a corto plazo de la convección y de la ocurrencia de fenómenos severos asociados. A fin de identificar y seguir la evolución temporal de los mesosistemas que habían generado los eventos incluidos en la muestra, se utilizaron las temperaturas de los topes de nubes, información disponible en la base de datos ISCCP-DX (International Satellite Cloud Climatology Project). El procesamiento de esta información se llevó a cabo con un conjunto de programas computacionales desarrollados en la Divisao de Ciéncias Atmosféricas (ACA) del Instituto de Aeronáutica e Espaco (IAE), Brasil. Las distintas etapas evolutivas de los mesosistemas (inicio, madurez y disipación) fueron definidas de acuerdo al área encerrada por la isoterma de —218K. Se procedió luego a realizar la composición de los campos de las variables dinámicas y termodinámicas correspondientes a las situaciones seleccionadas en cada una de estas etapas, utilizando para ello los reanálisis del European Centre for Medium-Range Weather Forecasts. Los resultados obtenidos muestran que los mesosistemas estudiados tienden a originarse en el faldeo oriental de la Cordillera de los Andes, al norte de los 40°S, desplazándose luego hacia el este. Tanto su duración media (17.5 horas), como las dimensiones que alcanzan en su madurez (504000 km2), exceden ampliamente los valores reportados para los complejos convectivos de mesoescala norteamericanos. Asimismo, al igual que en trabajos previos, se observa el carácter preferentemente nocturno de la actividad convectiva. Debe destacarse que el 81% de los casos incluidos en la muestra analizada correspondieron a eventos Chaco Jet en alguna de las etapas de evolución del mesosistema. La fuerte señal sinóptica que caracteriza a estos eventos y controla a los mecanismos forzantes de la convección se reconoce en los campos producidos por la técnica de composición. Por su parte, los mesosistemas convectivos son efectivos en perturbar localmente la atmósfera. La notable dimensión de los mismos permite caracterizar la estructura vertical de los movimientos verticales, la divergencia y la vorticidad relativa en la escala del mismo mesosistema durante su etapa madura, poniendo de manifiesto su carácter predominantemente convectivo. Se pone de relieve la importancia de la corriente en chorro en capas bajas como forzante de la actividad convectiva en el norte y centro de nuestro país, debido a su aporte fundamental a la advección de aire cálido y húmedo, y a la convergencia de flujo de humedad que se origina en la parte delantera del mismo. Esta importancia se hace más evidente si se tiene en cuenta que la disipación de los sistemas se produce cuando la corriente en chorro en capas bajas se debilita y, consecuentemente, se debilita también la convergencia de flujo de humedad, principal sustento de la actividad convectiva. Finalmente, el análisis de un caso individual confirma esta conclusión, y pone de manifiesto que, si bien el forzante sinóptico es fundamental, una vez desarrollado el sistema su ciclo de vida está controlado por el respectivo ciclo de vida de la corriente en chorro en capas bajas.

Abstract:
The goal of this Thesis is to characterize the environment that supports mesoscale convective systems (MCSs) over southeastem South America. In order to achieve this goal, particular situations have been selected during which heavy precipitation (higher than 120 mm) has occurred at least at one of the stations of the Argentina raingauge network during the October to April 1988/1993 period. To study these extreme precipitation cases is crucial because of their high impact in the regional socioeconomic activities. Therefore, the short-term forecast of the organized convection as well as of the occurrence of related severe weather over Argentina represent a worthwhile challenge. In order to identify and track the life cycle of the MCSs responsible for the events included in the heavy precipitation sample, cloud-top temperatures have been used. This information is available in the ISCCP-DX (International Satellite Cloud Climatology Project) satellite database. The data processing has been performed using software developed at the Divisao de Ciéncias Atmosféricas (ACA), Instituto de Aeronáutica e Espaco (IAE), Brazil. Different stages in the mesoscale systems evolution (initiation, maturity and dissipation) have been defined according to the area enclosed by the -218 K isotherm. After this procedure, the thermodynamic and dynamic fields corresponding to the selected events have been composited using the European Centre for Medium-Range Weather Forecasts reanalyses. The results show that the studied MCSs have a tendency to originate in the eastern Andes slopes, northward of 40°S, moving eastward. Both their average lifetime (17.5 hours) and their size at maturity (504000 km2) largely exceed the magnitudes that characterize the North American mesoscale convective complexes (MCCs). Besides, the MCS composite behavior exhibits a nocturnal phase already described in previous researches. It is noteworthy that 81% of the MCSs cases included in the sample have at least one of their lifetime stages occurring during Chaco low-level jet events. The strong synoptic signal that characterizes these events and modulates the forcing mechanisms of convective outbreaks is also evident in the fields produced by the composite technique. In turn, the MCSs are effective in locally perturbing the atmosphere. Their remarkable size afford the characterization of the vertical structure of the vertical motion, divergence and relative vorticity in the same convective system scale during their maturity, and demonstrate their mainly active convection character. The results also highlights the importance of the low-level jet (LLJ) as a convective forcing particularly over northern and central Argentina given its role in effecting warm and humid advection and because of the water vapor flux convergence that occurs downstream its core. This relationship is still more evident as the results demonstrate that the system decay occurs at the same time as the LLJ weakening and consequently in phase with the decay of the moisture flux convergence that is the main source of the convective activity. This is more clearly shown in the individual case analysis and confirms that even if the synoptic forcing is fundamental for triggering the MCS, once it develops its lifecycle is controlled by the respective LLJ lifecycle.

Torres Jordá, Martín. "Estudio de la relación entre el parásito Leidya Distorta (isopoda: bopyridae) y su hospedador Uca Uruguayensis (brachyura: ocypodidae), y descripción de los estadíos larvales de L. Distorta" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En 1994 se descubrió que algunos cangrejos Uca uruguayensis de Punta Rasa, bahía Samborombón, estaban infestados por el isópodo bopírido Leidya distorta. Este parásito había sido previamente encontrado en otras especies del género Uca y en el cangrejo Ucides cordatus, sobre la costa atlántica entre New Jersey (EE.UU.) y Rio de Janeiro (Brasil). Con el fin de estudiar la interacción entre L. distorta y su hospedador, se recolectaron mensualmente ejemplares de Uca uruguayensis en Punta Rasa, bahía Samborombón, desde febrero de 1995 hasta marzo de 1996. Se emplazaron 5 estaciones; en cada fecha de muestreo y en cada estación se trazaron dos transectas de 5 m de largo por 0,2 m de ancho, orientadas en la dirección de la pendiente de la playa. Las transectas fueron excavadas hasta una profundidad de 30 cm. Los cangrejos fueron separados a mano, fijados en formalina 5% y conservados en etanol 70%. De un total de 12.033 cangrejos recolectados a lo largo de los 14 meses de muestreo, 1.115 (9,3%) estaban infestados por algún estadio de L. distorta. El estudio de estos estadios permitió seguir el desarrollo del parásito en su hospedador definitivo. Cuando una larva criptonisquia invade una cámara branquial desocupada, se asienta en el espacio limitado por dos laminillas branquiales contiguas. Un tiempo después la criptonisquia muda al estadio bopyridium, el que permanece entre las laminillas branquiales. Este último es sucedido por varios estadios juveniles hembra, que se fijan al techo de la cámara branquial. Al alcanzar un cierto grado de desarrollo la hembra juvenil atrae a otra criptonisquia, que a poco de asentarse sobre su cuerpo deviene macho. Los machos van cambiando de posición sobre las hembras a medida que éstas crecen. Las hembras adultas son asimétricas y ocupan la mayor parte de la cámara branquial; se orientan con la cabeza hacia atrás, el vientre hacia arriba y el dorso contra las branquias del cangrejo. Estas hembras obtienen hemolinfa de un gran vaso horizontal que corre por debajo del epitelio interno del branquiostegito del cangrejo. El porcentaje de cangrejos infestados (prevalencia) por L. distorta varió entre 5,24% y 17,8% a lo largo de los l4 meses de muestreo. Todos los estadios del parásito fueron más abundantes en los cangrejos grandes. Siendo que los machos de U. uruguayensís alcanzan mayor talla que las hembras, la prevalencia fue mayor entre los primeros. Los cangrejos macho infestados mayores que 10,5 mm, si bien representaron solo 5,92% de los cangrejos recolectados, hospedaron 68,8% del total de parásitos. Las larvas criptonisquias fueron mucho más frecuentes entre los cangrejos que estaban mudando (blandos) que entre los cangrejos en intermuda (duros). La distribución estadística de las criptonisquias en los cangrejos en intermuda fue “agrupada” o “contagiosa”, en conformidad con el modelo binomial negativo. Los cangrejos infestados sufren varias alteraciones morfológicas. Aquellos que albergan un parásito hembra adulto a menudo presentan un área despigmentada sobre la pared lateral del caparazón. Un área despigmentada adicional se observa algunas veces en el fondo del surco ocular. Las hembras adultas del parásito producen un ligero abultamiento de la cámara branquial del hospedador, siendo esta deformación más marcada en los cangrejos pequeños. Las branquias de los cangrejos parasitados pueden estar deformadas: la hembra adulta de L. distorta tiene una robusta carena dorsal que encaja entre las branquias 4ta. y 5ta. del cangrejo, desplazándolas lateralmente. Por último, L. distorta inhibe el crecimiento alométrico del quelípedo mayor de los cangrejos macho: en los machos parasitados por hembras adultas el quelípedo mayor fue en promedio 6,5% más corto que en los no parasitados. La densidad de U. uruguayensis varió entre 133 y 207 ind./m² a lo largo del año. Los machos representaron 61,6% del total de individuos recolectados. Entre los cangrejos pequeños la razón de sexos fue 1:1, entre los medianos predominaron las hembras y entre los grandes prevalecieron los machos. La población presenta un componente de individuos adultos de tamaño grande que permanece estable a lo largo de todo el año. Los cangrejos se reproducen desde noviembre hasta febrero, dando lugar cada año a una nueva cohorte. Las hembras de L. distorta se reprodujeron activamente durante la primavera tardía y el verano. En otoño la actividad reproductiva fue decreciendo, de tal suerte que para el invierno todas las hembras adultas tenían sus marsupios vacíos. El crecimiento de los parásitos inmaduros se detuvo en invierno y recomenzó en primavera. En octubre-noviembre ya no quedaban criptonisquias en los cangrejos; aquellas larvas que sobrevivieron al invierno mudaron al estadio bopyridium al comienzo de la primavera y luego crecieron con rapidez, para reproducirse en diciembre o enero. La taxonomía de la superfamilia Bopyroidea ha sido establecida sobre la base de la forma de los adultos, sin prestar mayor atención a los estadios larvales. Sin embargo, la clasificación de los Bopyroidea está lejos de ser estable, dado que los individuos adultos muestran amplias variaciones aun dentro de una misma especie. En un esfuerzo por encontrar criterios más confiables para la clasificación de las especies del grupo, se describen en detalle las larvas epicarídea y criptonisquia de Leidya distorta. La larva criptonisquia de L. distorta tiene pleópodos unirramosos y urópodos con una larga seda caudal. En la literatura se encuentran descriptas tres criptonisquias que comparten estas características. Una es Cancricepon elegans que, al igual que L. distorta, pertenece a la subfamilia Ioninae. Otra, no identificada, fue encontrada en la desembocadura del río Tocantins, Brasil. La tercera fue asignada a Probopyrus bithynis, aunque su identidad específica es dudosa. El género Leidya contiene 4 especies, siendo Leidya bimini de las islas Bermudas la más próxima a L. distorta. Los adultos de estas dos especies se diferencian principalmente por la posición, más central o lateral, de los tubérculos que conforman la carena torácica dorsal. Las criptonisquias de L. bimini y L. distorta difieren en la longitud de las sedas caudales, hecho que refuerza la validez de estas especies.

Abstract:
In 1994, some specimens of the fiddler crab Uca uruguayensis from Punta Rasa, Samborombón Bay, Argentina, were found housing the bopyrid isopod Leidya distorta in their branchial Chambers. This parasite was previously reported from other species of Uca and Ucides cordatus, ranging from New Jersey (USA) to Rio de Janeiro (Brazil). In order to study the relationship between L. distorta and U. uruguayensis, fiddler crabs were monthly collected in Punta Rasa, Samborombón Bay, from February 1995 to March 1996. The sampling program included five stations; on each sampling date, two transects 5 m long and 0.2 m wide were delimited in each station. Transects were dug with shovels to a depth of 30 cm, and the chunks of sediment were examined for crabs. These were picked by hand, fixed in 5% formaldehyde and preserved in 70% ethanol. Throughout the study, 1,115 of 12,033 crabs (9.3%) were infested by different developmental stages of L. distorta. The inspection of these stages allowed me to follow the development of the parasite in the definitive host. When a cryptoniscus larva arrives in an unoccupied branchial chamber, it settles in the space between two contiguous gill lamellae. Then the cryptoniscus molts into bopyridium, which stays between the gill lamellae. The bopyridium is followed by several juvenile female instars that are attached to the roof of the branchial chamber. As a female grows, it becomes attractive to new arriving cryptonisci, which settle on the female’s body and develop into males. These males change their position on the female as the latter develops. Adult females occupy the branchial chamber almost completely, with the head directed backwards and the dorsurn in contact with the crab gills. They suck hemolymph from a large horizontal vessel that runs below the internal epithelium of the crab’s branquiostegite. Prevalence of L. distorta varied between 5.24% and 17.8% throughout the study. All parasite stages were more abundant among the larger crabs. Since the males of U. uruguayensis attain larger sizes than females, parasite prevalence was higher among the former. Infested male crabs larger than 10.5 mm carapace width, which represented only 5.92% of the crabs collected, housed 68.8% of all the parasites recovered. Cryptoniscus larvae were much more frequent among molting (soft) crabs than intermolt (hard) crabs. The frequency distribution of cryptonisci among hard crabs was contagious and could be fitted by a negative binomial model. Infected crabs showed several morphological pathologies. Those that housed an adult female parasite frequently bore an unpigmented area on the lateral wall of the carapace. An additional faded area was sometimes observed on the bottom of the eye orbit. Adult female parasites usually produced a subtle lateral swelling on the carapace of the host, this deformation being more marked in smaller crabs than in larger ones. Alterations of the host’s gills were noticed: the adult female parasite has a strong dorsal carina that fits between the fourth and fifth gills of the crab, displacing them laterally. Finally, L. distorta inhibits the allometric growth of the mayor cheliped of male crabs. In males that harbored adult female parasites, the chela was on average 6.5% shorter that in non-parasitized males. Density of U. uruguayensis ranged from 133 to 207 ind/m² throughout the study period. Males represented 61.6% of the crabs collected. Sex ratio among the smaller crabs was 1:1, however females outnumbered males in the medium-size classes, whereas the opposite was true in the larger size classes. The crab population presented a component of large adults that remained stable throughout the year. Reproduction extended from November to February, yielding a new cohort each year. Females of L. distorta bred actively during late spring and summer. In autumn reproductive activity decreased and by winter all the adult females had empty marsupia. The growth of immature parasites stopped in winter and resumed in spring. By October-November no cryptonisci remained in the crabs. Overwintered larvae molted to the bopyridium stage in early spring and then grew rapidly, attaining the ovigerous condition in December or January. The taxonomy of the Superfamily Bopyroidea has been based mainly on adults, whereas the larval instars have been paid little attention. However, adult bopyroids show high intraspecific variability and thus their classification is rather unstable. In order to provide more rigorous criteria for the classification of the species of this group, the epicaridium and cryptoniscus larvae of L. distorta are herein described in detail. The cryptoniscus larva of L. distorta has unirameous pleopods and uropods with long caudal setae. There are three other cryptonisci that share these features. One is Cancricepon elegans which, like L. distorta, belongs to the subfamily Ioninae. Another one, still unidentified, was collected in the plankton at the mouth of the Tocantins River, Brazil. The third was identified as Probopyrus bithynis; however, its taxonomical status remains questionable. The genus Leidya contains four species, of which L. bimini is the most closely related to L. distorta. The adults of these two quite similar species differ mainly by the position of the dorsal carina, which can be more lateral or more medial. In contrast, an unambiguous criterion can be drawn from their cryptoniscus larvae, which markedly differ in the lengths of the caudal setae of their uropods.

Todaro, Laura Beatriz. "Rol de la molécula de adhesión NCAM en patologías neurodegenerativas y neuroproliferativas humanas y experimentales" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La NCAM pertenece a la familia de las inmunoglobulinas siendo su función más conocida la promoción de la adhesión homofílica entre células vecinas, como neuronas, astrocitos y células musculares, y de la adhesión heterofilicas entre estas células y proteínas de las matrices extracelulares. Tiene tres isoformas principales: 120, 140 y 180 kDa. Sólo la NCAM de 120 kDa carece de los dominios citoplasmático y transmembrana y se encuentra unida por anclaje fosfatidilinositol. Una caracteristica de Ia NCAM es presentar cadenas homo poliméricas de ácido siálico (PSA) unidas covalentemente. La expresión de PSA NCAM es muy abundante en el sistema nervioso central durante el desarrollo embrionario y las primeras etapas postnatales pero en el adulto su expresión disminuye. La presencia de PSA en la NCAM adulta impide la adhesión celular y estimula la remodelación y plasticidad tisular. Además la NCAM puede encontrarse en forma soluble, puesto que se ha descrito su presencia en diferentes fluidos biológicos, proponiéndola como marcador soluble para algunas patologías tumorales como el cáncer de pulmón a células pequeñas y en patologías neurodegenerativas como la esquizofrenia. Nuestro obietivo fue estudiar la relación de la molécula NCAM con procesos tumorales y neurodegenerativas humanos y experimentales. A) Para ello estudiamos la participación de NCAM en el comportamiento biológico de la línea celular LP07, derivada de un tumor de pulmón murino de origen epitelial glandular con componente neuroendocrino. La expresión se evaluó en homogenatos y cultivos primarios tumorales, detectándose distintas isoformas de NCAM,cuya expresión varia a lo largo del crecimiento tumoral. Por otro lado, la disminución de metástasis experimentales con anti NCAM sugiere que esta molécula favorecería la colonización del órgano blanco. El tratamiento de NCAM in vitro con anticuerpos específicos disminuyó la adhesividad, la migración y la proliferación celular al mismo tiempo que induce la reorganización del citoesqueleto de actina compatible con una reversión epitelio mesenquimática, característica de la célula tumoral. B) Hemos estudiado el rol de NCAM sérica como marcadora tumoral en pacientes con patología cerebral benigna y maligna. Para ello en un primera etapa estudiamos por western blot y densitometría los niveles de todas las isoformas de NCAM sérica en individuos sanos apareados por edad y sexo, observando que las isoformas de bajo PM difieren con la edad de los individuos. Determinamos los niveles de las distintas isoformas de NCAM presentes en el suero de pacientes con tumores primarios del SNC: gliomas (n=34), metástasis única (n=27), tumores benignos (n=22). Las muestras de suero de cada paciente se analizaron por western blot y densitometría. La concentración de NCAM se asoció a los parámetros clínico-patológicos indicadores de pronóstico, así como con la evolución clínica de cada paciente. Se detectaron bandas específicas de alto (≥130kDa) y bajo PM (<130kDa). Se encontró que el cociente ≥130kDa /<130kDa está aumentado en los pacientes con tumores cerebrales vs controles sanos (diferencias independientes de edad y sexo). No se encontró diferencia entre pacientes con tumores benignos o malignos NCAM sérico mostró una especificidad del 80% y una sensibilidad del 60%, con un VP+ del 60% y VP- del 80% para identificar pacientes con tumores cerebrales. En una segunda muestra post cirugía fue posible encontrar una disminución de los valores séricos de NCAM en 9 de 12 pacientes analizados. C) Hemos medido los niveles de NCAM sérico en pacientes con déficit cognitivo como la Demencia tipo Alzheimer (DTA). Las patologías neurodegenerativas presentan niveles séricos elevados de todas las isoformas de NCAM. Además se observó un aumento especifico de la NCAM <130kDa asociada al grado de deterioro cognitivo de los pacientes DTA por lo tanto podría ser útil como marcador de seguimiento del paciente, lo cual facilitaría el diagnostico y el tratamiento en etapas tempranas.

Abstract:
NCAM is an adhesion molecule which belongs to the immunoglobulin superfamily and mediates both homophilic binding between neighbour cells like neurons, astrocites and muscular cells; and heterophilic binding between these cells and proteins from the extracellular matrix. NCAM presents three major isoforms: 120, 140 and 180 kDa. Only NCAM 120 kDa is linked to the membrane via a glycosyl-phosphatidyl inositol (GPI) anchor and lacks citoplamic and transmembrane domains. NCAM has sialic acid (PSA) homo polymeric chains covalently bond. PSA NCAM expression is highly expressed in central nervous system during embrionary development and post natal early stages but the PSA expression is down regulated in adult tissues. The presence of PSA NCAM in adults prevents cellular adhesion and stimulates tissular remodelling and plasticity. In addition NCAM exist in a soluble form, since its presence has been described in several biological fluids. Some authors proposed soluble NCAM as a diagnostic marker for tumoral pathologies like small cells lung cancer (SCLC) and neurodegeneratives pathologies including squizofrenia. Our objective was to study the relationship between NCAM molecule and experimental and human tumoral and neurodegenerative processes. A) We study the roll of NCAM in biological behaviour of the cellular line LPO7, derived from a murine lung tumor with neuroendocrine component. The NCAM expression was evaluated in homogenates and tumoral primary cultures. Several NCAM isoforms were detected whose expression varies through tumoral growth. On the other hand, decrease of experimental metastasis with anti NCAM suggests that this molecule is implicated in target organ colonization. In vitro NCAM treatment with specific antibodies diminishes adhesion, migration and cellular proliferation while induces actine cytoskeleton reorganization, compatible with mesenchematic epithelial reversion. B) We have study the roll of serum NCAM as a tumoral marker in patients with benign and malign brain pathology. First, we determine the levels of serum NCAM isoforms in healthy individuals paired by sex and age by western blot and densitometry. Low Molecular Weigh NCAM bands (100-130kDa) decreased significantly with age independently of sex. Then, we determine NCAM isoforms levels in serum from primary brain tumor patients: gliomas (n=34), brain metastsis (n=37) and benign tumors (n=22). NCAM values were associated with clinico-pathological prognostic parameters, as well as clinical evolution of each patient. There were detected specific bands of high (≥130 kDa) and low molecular weigh (<130 kDa). It was observed that the ratio ≥130 /<13O kDa is increased in patients vs control. It was no differences between benign and maligns tumors. NCAM showed a sensitivity of 60% and a specificity of 80%. The PV+ was about 60% and the PV- was 80% for brain tumors patients’ identification. In a post surgery sample we detected decreased serum values of NCAM in 9 of 12 patients. C) We have measure serum NCAM levels in patients with cognitive deficit like Dementia of Alzheimer Type (DAT).DAT patients presented values of all isoforms significantly higher than healthy controls of similar age. Only low molecular weight NCAM isoforms were associated with GDS, which may be useful as follow up marker. This marker would allow the diagnostic and treatment in early stages.

Thibeault, Marc. "Fluídos disipativos relativistas y cosmología" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Investigamos teorías tipo divergencia describiendo la interacción disipativa entre un campo y un fluido. Buscamos teorías que, bajo condiciones de equilibrio, se reducen a la teoría de un campo escalar de Klein-Gordon y un fluido perfecto. Mostramos que los requerimientos de causalidad y de producción positiva de la entropía imponen restricciones no triviales a la estructura del término de interacción. Estas teorías proveen una base para el estudio fenomenológico del periodo de recalentamiento. Presentamos un modelo macroscópico del decaimiento de un campo clásico escalar en fluctuaciones estadísticas a través del proceso de amplificación paramétrica. Resolvemos el modelo de teoría de campos (en adelante " microscópico ") al primer orden en una expansión de N grande, y mostramos que el modelo macroscópico da resultados satisfactorios para la evolución del campo medio, de su momento conjugado y del tensor de energía momento durante varias oscilaciones. El modelo macroscópico es substancialmente más simple que el modelo microscópico y puede ser generalizado para incluir fluctuaciones cuánticas. Aunque asumimos una situación homogénea, el modelo es totalmente covariante y puede ser aplicado a casos inhomogéneos también. Estos rasgos hacen de este modelo una herramienta útil para explorar la física del precalentamiento.

Abstract:
We investigate divergence-type theories describing the disipative interaction betwen a field and a fluid. We look for theories which, under equilibrium conditions, reduce to the theory of a Klein-Gordon scalar field and a perfect fluid. We show that the requirements of causality and positivity of entropy production put non-trivial constraints to the structure of the interaction terms. These theories provide a basis for the phenomenological study of the reheating period. We present a macroscopic model of the decay of a coherent classical scalar field into statistical fluctuations through the process of parametric amplification. We solve the field theory (henceforth, "microscopíc") model to leading order in a Large N expansion, and show that the macroscopic model gives satisfactory results for the evolution of the field, its conjugated momentum and the energy momentum tensor of the fluctuations over many oscillations. The macroscopic model is substantially simpler than the microscopic one, and can be easily generalized to include quantum fluctuations. Although we assume here an homogeneous situation, the model is fully covariant, and can be applied in inhomogeneous cases as well. These features make this model a promising tool in exploring the physics of preheating.

Steinberg, Marcos Wenceslao. "El rol de las proteínas tirosina quinasas ZAP-70 y Syk en la activación de las células T: Estudios preclínicos de terapia génica para la deficiencia en ZAP-70" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las proteínas ZAP-70 y Syk componen la familia Syk de tirosina quinasas. Estas dos proteínas presentan secuencias de amino ácidos y estructuras similares, sin embargo ZAP-70 y Syk son reguladas diferentemente en términos de expresión y probablemente de función. En los linfocitos T, estas quinasas intervienen en la diferenciación y la activación celular mediada por el receptor de células T (TCR). En este trabajo hemos sido capaces de realizar un estudio comparativo del rol de ZAP-70 y de Syk en los eventos precoces de señalización via el TCR, utilizando células T primarias y líneas celulares T transformadas expresando separadamente niveles equivalentes de ZAP-70 y de Syk. En dicho estudio demostramos que ZAP-70 y Syk contribuyen de manera diferencial a la señalización vía e TCR, en particular a la fosforilación de la cadena C del receptor. Además, Syk es menos eficaz que ZAP-70 para asociarse al TCR. Nuestro estudio demuestra que Syk funciona de manera diferente a ZAP-70 en la señalización precoz via el TCR. La deficiencia humana en ZAP-70 constituye una forma rara de inmunodeficiencia combinada severa (SCID) caracterizada por la ausencia de células T CD8+ y la presencia de células T CD4+ anormales. Utilizando la terapia génica basada en la transferencia de genes mediada por un vector retroviral, en este trabajo hemos sido capaces introducir el gen wild-type de ZAP-70 dentro de células T CD4+ primarias aisladas de pacientes deficientes en ZAP-70. En las células T CD4+ de pacientes transducidas, la expresión ectópica de ZAP-70 fue suficiente para reconstituir las funciones defectuosas de las mismas. Además, la introduccón del gen wildtype de ZAP-70 dentro de células progenitoras de la médula ósea “lin”, aisladas de ratones ZAP-70 KO, y su posterior transplante en estos mismos ratones, resultó en la reconstitución del desarrollo y las funciones de los linfocitos T CD4+ y CD8+. Nuestros descubrimientos proporcionan una importante información para el establecimiento de protocolos de terapia génica, no solo para la inmunodeficiencia en ZAP-70 sino también para diferentes tipos de inmunodeficiencias primarias.

Abstract:
The ZAP-70 and Syk proteins are the two members of the Syk family of protein tyrosine kinase. These two proteins share important similarities of sequence and structure, however, ZAP70 and Syk differ in terms of expression and probably of function. In T lymphocytes, these kinases are involved in cellular differentiation and activation. In this work, we have been able to compare both tyrosine kinases participation in TCR signaling pathway in human primary T cells obtained from ZAP-70 deficient patients, which expressed important levels of Syk in absent of ZAP-70. In addition, we performed the same study in transformed-T cell lines expressing stable equivalent levels of ZAP-70 and/or Syk. These results demonstrate that upon TCR stimulation, ZAP-70 and Syk differ in their capacity to support C-chain phosphorylation. Moreover, we have shown that Syk is less efficient than ZAP-70 in the association to the TCR. Our results suggest a differential role for ZAP-70 and Syk in the early signaling events after TCR stimulation. The human ZAP-70 deficiency is a rare severe combined immunodeficiency (SCID), characterized by a selective inability to produce CD8+ single positive T cells and a signal transduction defect in peripheral CD4+ T cells. A gene therapy approach may prove to be an alternative treatment for ZAP-70-deficient patients. In the present study we have been able to successfully introduce the wild-type ZAP-70 gene into primary T cells from ZAP-70-deficient infants with a reconstitution of T cell function. Moreover, introduction of the wild-type ZAP-70 gene was into murine ZAP-70ˉ/ˉ hematopoietic stem cells and subsecuent ZAP-70-transduced bone marrow cells transplantation, restored the development and function of CD4 and CD8 T Lymphocytes. Altogether, our studies offer important information to the establishment of new gene therapy-based protocols as an alternative treatment for ZAP-70 and other immunodeficient patients.

Sproviero, Eduardo Marcelo. "Estudio de efectos conformacionales y estructurales en moléculas : desarrollo de métodos basados en interacciones orbitales para analizar sus mecanismos electrónicos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se desarrolló un esquema derivado del formalismo de orbitales localizados NBO, en el que las interacciones intramoleculares se interpretan como interacciones entre orbitales moleculares localizados. A través de un análisis de tipo perturbativo, se evalúa la contribución de las interacciones entre orbitales a cualquier propiedad molecular. Esta descomposición permite interpretar la forma en que un cambio en una parte de la molécula se transmite a otras partes y determina la variación de cualquier propiedad. Se muestran varias aplicaciones entre las que se incluye, cómo las variaciones de geometría molecular o la adición de sustituyentes modifican, por medio de interacciones entre orbitales, varios parámetros de resonancia magnética nuclear. Como una alternativa al análisis anterior, se propone un descriptor basado en una generalización de la densidad de carga electrónica que incluye a los orbitales canónicos vacantes. Este descriptor permite analizar interacciones estereoelectrónicas en forma directa o a través de parámetros asociados con la densidad de carga. La aplicación combinada del efecto de las interacciones orbitales sobre propiedades moleculares y el de éstas sobre propiedades macroscópicas, se puede utilizar para individualizar cuáles son las interacciones intramoleculares que determinan una respuesta macroscópica particular. Orientado al estudio de la actividad biológica, se combinó el método del propagador de polarización (que permite evaluar contribuciones orbitales a propiedades moleculares), con el esquema GAPT de partición de propiedades moleculares en contribuciones atómicas (usualmente importantes para estudiar efectos biológicos), a nivel RPA-INDO. Se identificaron, además, parámetros de geometria y flexibilidad intramolecular que se utilizaron para interpretar la actividad biológica de compuestos esteroidales.

Abstract:
A scheme derived from the NBO formalism of localized orbitals was developed, in which the intramolecular interactions are interpreted as interactions between orbitals. The contribution of orbital interactions to any molecular property is evaluated through a perturbative type analysis. This decomposition allows interpreting the way in which a change in a region of the molecule is transmitted to other parts and determines the variation of any property. Several applications are shown that include the study of how changes in molecular geometry or the addition of substituents modify, by means of molecular orbital interactions, several nuclear magnetic resonance parameters. As an alternative to the previous analysis, a descriptor based on a generalization of the electronic charge density that includes canonical vacant orbitals is presented. This descriptor allows analyzing stereoelectronic interactions in direct form or through parameters associated with the charge density. The combined application of the effect of orbital interactions on molecular properties and of the latter on macroscopic properties can be used to individualize which are the intramolecular interactions that determine a particular macroscopic response. Oriented to the study of the biological activity, the method of the polarization propagator (that allows evaluating of orbital contributions to molecular properties) was combined with the GAPT scheme of partitioning of molecular properties into atomic contributions (usually important to study biological effects), at RPA-INDO level. In addition, parameters of intramolecular geometry and flexibility were identified, and were used to interpret the biological activity of steroidal compounds.

Sorin, María Verónica. "Medición de la distribución del Thrust Transverso de dos jets en colisiones protón-antiprotón" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Esta Tesis presenta la primera medición en un colisionador de hadrones de una variable de forma, el thrust transverso de dos jets Tt2,una variable relacionada con la distribución de jets en el plano transverso al de los haces colisionantes. Tt2 se calcula a partir de los dos jets más energéticos del evento, y toma valores entre Tt2 = 1, para el caso de dos jets en una misma dirección y sentidos opuestos, y Tt2 = √2/2 para dos jets de igual energía formando un ángulo de 90°. La medición se realizó con datos tomados en el Tevatron, el colisionador pṗ del Laboratorio Fermilab. La sección eficaz se presenta tanto en función de 1 — Tt2 como de log(1 — Tt2), que enfatiza la región de alta estadística cuando Tt2→1, para cuatro rangos de energía total del evento. Los resultados están en buen acuerdo con las predicciones de QCD perturbativo a orden O(α33), excepto a alto Tt2, donde se espera que la correcciones por resumación sean importantes, y por debajo de Tt2≈√3/2, donde la contribución de primer orden corresponde a diagramas O(α43). Los datos muestran asimismo un muy buen acuerdo con un recientemente publicado generador de tres jets a orden siguiente al dominante (NLO), que cubre todo el rango de la variable Tt2, excepto el caso extremo cuando Tt2=1. Palabras claves: Cromodinámica Cuántica, Algoritmo k┴ , Variables de forma

Abstract:
This dissertation presents the first measurement in a hadron collider of an event shape variable, the Dijet Transverse Thrust Tt2, which is sensitive to the spatial jet distribution on the plane perpendicular to the colliding pṗ beams. Tt2 is calculated with the two most energetic jets reconstructed with the k┴ algorithm, and it ranges from Tt2 = 1, for a pencil-like configuration, to Tt2 = √2/2/2, for two equal energy jets at 90°. The measurement is based on 87.3 pb(-1) of data collected with the DG detector at the Fermilab Tevatron pṗ Collider. The cross section is reported as a function of 1 — Tt2 and log(1 — Tt2), which enhances the high statistics Tt2→1 region, and presented for four separate event energy ranges. The measurement is in good agreement with a fixed-order O(α33) perturbative QCD prediction, except at high Tt2, where resummation corrections are expected to be important, and below Tt2≈√3/2, where the leading order diagrams contributíng to Tt2 are O(α43). The data also show a very good level of agreement with a recent Next-to-Leading pQCD three jet generator which covers the full Tt2 range, except for the Tt=1 point. Keywords: Quantum chromodynamics, k┴ algorithm, Event Shapes.

Sánchez, Laura Mabel. "Dinámica de Mode-Locking por efecto Kerr" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los pulsos laser ultracortos (picosegundos y femtosegundos) son cada vez más importantes en ciencia y tecnología, por lo que es de gran interés el estudio de las técnicas que permiten obtenerlos. La mas difundida es la llamada Kerr lens mode locking (KLM), y es la empleada en el laser de Ti:Zafiro, que es actualmente la fuente más utilizada de pulsos ultracortos. Como los pulsos generados por estos laseres presentan a menudo una gran variedad de inestabilidades, (comportamientos cuasiperiódicos, variaciones en algunos parámetros del pulso y no en otros, y hasta caos determinístico), es importante por razones prácticas y académicas entender la dinámica resultante en detalle. En esta Tesis llamada Dinámica del mode-locking por efecto Kerr se desarrolla un modelo adecuado para describir el caso más general posible (no restringido ningún otro material activo o diseño de cavidad en particular), y se alcanza una comprensión de la dinámica del fenómeno de KLM y sus características esenciales accesible intuitivamente. También existe una aparente contradicción entre la postura de algunos autores, que sostienen que la presencia de aberturas espaciales transversales dentro de la cavidad del laser, convenientemente ubicadas son indispensables para que este tipo de funcionamiento se pueda lograr, y las evidencias teóricas y experimentales que indican que una descripción sin aberturas puede explicar satisfactoriamente gran parte del comportamiento de los laseres de Ti:Zafiro. En esta Tesis se determina que las aberturas espaciales no son indispensables para describir al KLM, independientemente del medio activo que se tome.

Abstract:
Ultrashort laser pulses (picoseconds and femtoseconds) are becoming very important in Science and technology, so there is a great interest in the technics from they can be obtained. The most important one is the Kerr lens mode locking (KLM), which is widely used for Ti:Zafiro laser, the most usual source for short pulses. This pulses exhibit instabilities, as quasiperiodic behaviours, and deterministic chaos, so is very important from both, the academic and practical point of view to understand their dynamics. In this Thesis, a deep comprehension of the KLM dynamics and essential characteristics is achieved, with a very simple and general model, for any active medium and any cavity design. There is although a conceptual discussion about the roll of apertures in KLM. Some authors put forward the idea of fast saturable absorber, which is usually recognized as essential to KLM, but there are theoretical and experimental evidence indicating that is possible to describe the Ti:Zaphire lasers behaviour, without including apertures in the model. The fact that spatial apertures are not necessary for KLM description, is demonstrated in this Thesis.

Sinner, Débora Inés. "Efecto de prostaglandinas, óxido nítrico y endotelina-1 sobre el metabolismo y desarrollo del embrión en oncogénesis durante la gesta diabética" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El entorno diabético durante la preñez provoca alteraciones en el desarrollo del embrión, sin embargo los mecanismos subyacentes no han sido totalmente clarificados. En este trabajo hemos analizado los efectos de algunos agentes vasoactivos, sobre el desarrollo y metabolismo del embrión de rata durante la organogénesis en dos modelos diferentes de diabetes inducida por estreptozotocina. Ambos modelos presentan anomalías morfológicas y retardo en el crecimiento embrionario, siendo más severo el cuadro en el modelo de diabetes tipo l. En el embrión de rata diabética tipo Il, se hallaron niveles incrementados de Endotelina 1 (ET-1) y de Oxido Nítrico (NO), compuestos que se regulan negativamente entre sí. En forma diferente el embrión de rata diabética tipo 1, presenta niveles disminuidos de ET-1 e incrementados de NO, y no existe modulación entre ambos compuestos. A su vez, estos embriones presentan anomalías en el contenido y la producción de prostaglandina E2 (PGE2) debido a alteraciones en el transporte de dicho prostanoide. La síntesis de lípidos embrionarios es un mecanismo activo, proceso que se encuentra alterado en el embrión de rata diabética, siendo dicha anomalía más severa en el modelo tipo 1, la cual es revertida por acción de PGE; y acentuada por 15 deoxi delta 12,14 prostaglandina J2 (agonista del receptor nuclear PPARγ), ambos moduladores del metabolismo lipídico. Los resultados permiten afirmar que, en respuesta al grado de severidad del entorno materno diabético, se afecta la síntesis, producción y regulación de agentes vasoactivos que alteran en forma directa el desarrollo del embrión.

Abstract:
During pregnancy, diabetic milieu induces anomalies on embryonic development, although underlying mechanisms still remain unclear. In this work we have analyzed the effects of vasoactives agents on embryonic development and metabolism during organogenesis in two different models of diabetes induced by streptozotocin. Both models show morphological anomalies and delayed embryonic growth, being this condition worse in diabetes type 1. Increased levels of Endothelin-1 (ET1) and Nitric Oxide (NO) were found in embryos from diabetic type II rats, where there is a negative modulation between both agents. Differently, embryos from diabetic type I rats show diminished levels of ET-1 and increased levels of NO and no modulation between both compounds. In addition, these embryos show anomalies in embryonic levels and production of Prostaglandin E2 (PGE2) because of the transport alterations of this prostanoid. Embryonic lipid synthesis is an active mechanism, that is impaired in diabetic embryo, being more severe in type 1 model. This alteration is reverted by PGE2 and accentuated by 15 deoxy delta 12,14 prostaglandin J2. (an agonist of nuclear receptor PPARγ), both modulators of lipid metabolism. This results let us to state that, according to severity of maternal diabetic milieu , synthesis, production and regulation of vasoactive agents are affected, altering directly the normal embryonic development.

Simión Siu, Christian Israel. "Influencia de la temperatura y del sorbato de potasio en la resistencia térmica de mohos en dulce de leche" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Silvestri, Gabriel E.. "Relación entre la temperatura de la superficie del mar en el Océano Pacífico sur subtropical y la precipitación de primavera en el sudeste de Sudamérica durante los eventos ENSO" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se analiza la relación entre la variabilidad interanual de la lluvia en el sudeste de Sudamérica (SESA), la región al este de los Andes entre 20ºS y 40ºS, y la variabilidad interanual de la temperatura de la superficie del mar (TSM) y la circulación atmosférica asociada durante la primavera austral. La relación entre la precipitación en SESA y la TSM es estudiada usando un análisis de Correlación Canónica. Los dos primeros modos muestran el bien conocido patrón caliente-húmedo/frío-seco entre la TSM del océano Pacífico ecuatorial y la precipitación sobre gran parte de SESA. Sin embargo, la TSM de las regiones ecuatoriales no modula la variabilidad de la lluvia entre años El Niño (EN) y entre años La Niña (LN). Esto indica que la respuesta de la lluvia en SESA a la TSM del Pacífico ecuatorial es no lineal, resultando independiente de ella en los extremos del registro. En contraste, entre eventos EN, la TSM en el océano Pacífico sur subtropical (PSS) modula la precipitación estacional sobre gran parte de SESA. Además, cuando se considera el período completo, la TSM del PSS está correlacionada con la precipitación en una magnitud similar a la correspondiente a la TSM del Pacífico ecuatorial. Consistente con esto, el campo de circulación presenta un aumento de la advección ciclónica (anticiclónica) sobre la parte subtropical de SESA cuando la TSM en el PSS es más fría (caliente). La TSM del Pacífico ecuatorial está correlacionada negativamente con la del PSS pero esta correlación es prácticamente cero cuando se consideran sólo los casos EN o sólo los casos neutros y es muy pequeña en los casos LN. Esto permite realizar un análisis de composición de casos de acuerdo a diferente TSM en las regiones del Pacifico ecuatorial pero con TSM casi constante en el PSS y también se puede hacer una composición de casos con diferente TSM en el PSS pero con TSM casi constante en el Pacífico ecuatorial. Los eventos EN asociados con condiciones más frías en el PSS exhiben un patrón de onda de Rossby bien definido en el este del Pacífico sur, patrón que se observa menos intenso y más al oeste en los casos EN con mayor TSM en el PSS. La variabilidad de la circulación del Hemisferio Sur (HS) entre eventos LN también muestra una influencia de las condiciones de la TSM del PSS. Los eventos LN con mayor TSM en el PSS tienen mejor definido un patrón de onda entre latitudes ecuatoriales y altas del HS. La posibilidad de que las características de la TSM en el PSS puedan ser consideradas como un índice para discriminar entre eventos EN y LN de diferentes características no implica que esta TSM sea la causa de esas diferencias. Si las anomalías de TSM del Pacífico subtropical son inducidas por teleconexiones atmosféricas asociadas con el ENSO o si resultan de procesos oceánicos independientes del ENSO son cuestiones que escapan a los objetivos de este trabajo.

Abstract:
In this study we analyze the relationship between the interannual variability of rainfall over southeastern South America (SESA), the region east of the Andes between 20°S and 40°S, and the interannual variability of sea surface temperature (SST) and its associated atmospheric circulation during the austral spring. Rainfall in SESA and SST interannual variability is explored using canonical correlation analysis. The first two modes show the well-known warm-wet/cold-dry pattern between SST in equatorial Pacific and rainfall over most of SESA. However, SST in the equatorial regions does not modulate rainfall variability among EN years or among LN years, indicating that the SESA rainfall response to equatorial Pacific SST is not linear over the observed SST range, having no dependence on the extremes of this range. In contrast, among EN events, SST in the subtropical south Pacific (SSP) modulates the seasonal rainfall over most of SSA. In addition, when the complete period is considered, SST of the SSP has a correlation with precipitation of magnitude similar to those corresponding to the SST in equatorial Pacific. Consistent with this, the circulation field has enhanced cyclonic (anticyclonic) advection over subtropical SESA when SST in the SSP is cold (warm). SSTs in equatorial Pacific and in the SSP are negatively correlated, but their correlation is practically zero when only EN cases or only neutral cases are considered, and very small in LN cases. This allows a stratification analysis composing cases according to different SSTs in equatorial Pacific with almost constant SST in the SSP and similarly according to different SST in the SSP with approximately constant SST in equatorial Pacific. EN events associated with cold conditions in the SSP shows a well-defined Rossby wave pattern in the southeastern Pacific, pattern that is less intense and most to the west in EN cases associated with warm conditions in the SSP. The Southern Hemisphere (SH) circulation variability among LN events also shows an influence of the conditions of the SST in the PSS. LN events with warmest SST in the SSP presents better-defined Rossby wave patterns extending between the equatorial central Pacific and the SH high latitudes than those occurring during the rest of LN events. The possibility of that the SST features in the SSP can be considerated as a index to discriminate atmospheric circulation changes among EN or LN events, it does not necessarily mean that they are the cause of the observed changes in the SH circulation response. If the SST anomalies in the subtropical Pacific are induced by atmospheric teleconnections associated with ENSO or result from ocean processes independent of ENSO are questions that escape to the scope of this thesis.

Schere Levy, Carolina P.. "Búsqueda de factores involucrados en el origen y la evolución de tumores mamarios murinos, su relevancia enla biología de la mama normal : participación del LIF en estos procesos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El virus del tumor mamario murino (MMTV),es un retrovirus de tipo B que induce el desarrollo de tumores de mama, en ratones suceptibles a la infección, mediante mutagénesis insercional en genes de células somáticas. En este trabajo se utilizaron ratones de la cepa BALB/c infectados con la variante viral MMTV(LA),la cual fue encontrada previamente en nuestro laboratorio. Se ha descripto anteriormente que los ratones infectados con esta variante viral, poseen una incidencia de tumores de mama del 90%. Estos tumores presentan inicialmente un crecimiento preñez-dependiente (HD)que luego se independiza del control hormonal para mostrar un fenotipo hormono-independiente (HI). Para determinar si el compartimiento lobulo-alveolar es o no un factor relevante en la inducción de tumores por el MMTV(LA),se infectaron crías transgénicas WAP-TGFβ1 con esta variante viral mediante el amamantamiento utilizando madres infectadas con el virus. Estos ratones transgénicos expresan TGFBl bajo el control del promotor de la proteína WAP. Este promotor pertenece a una proteína de la leche abundante en murinos, es específica del epitelio mamario y se activa principalmente durante la preñez tardía y la lactancia. Ha sido demostrado previamente, que las hembras transgénicas para WAP-TGFβ1 son incapaces de amamantar a sus crías. Esto se debe a que la sobre-expresión de este factor durante la preñez, desencadena un incremento de la apoptosis en las células alveolares responsables de la producción y secreción de leche. Otra consecuencia de la expresión del transgen es la senescencia prematura de las células progenitoras (stem cells) mamarias, puesta en evidencia por la pérdida de la capacidad clonogénica de las mismas. Los resultados obtenidos en el presente trabajo indican que la actividad pro-apoptótica del TGFβ1 sobre las células lobulo-alveolares mamarias, no redujo la capacidad tumorigénica del MMTV(LA). Por otro lado, encontramos que la infección de las hembras WAPTGFβ1 con el MMTV(LA)revirtió la senescencia prematura de las células progenitores inducida por el transgen. El hecho que la infección con MMTV induzca el restablecimiento de la capacidad clonogénica de las “stem cells” mamarias transgénicas, sugiere que un evento temprano de la oncogénesis inducida por este vian podría ser la inmortalizaciónde las células progenitoras mamarias. Estos resultados (junto con los reportados por otros autores) sugieren que las "stem cells" mamarias podrían ser un blanco preferencial para la actividad oncogénica del MMTV. Esto implicaría un origen y crecimiento clonal para estos tumores. En relación con esta hipótesis se estudió, por análisis de Southern blot, el DNA de las inserciones virales exógenas en los pasajes de tumores mamarios inducidos por MMTV(LA). Estos experimentos se basan en el hecho que sólo puede encontrarse un patrón de bandas especifico y estable del DNA viral en todos los pasajes tumorales, si los tumores originales poseen un origen clonal u oligoclonal. El análisis de los resultados de 17 líneas tumorales in vivo generadas por pasajes singenéicos, muestran que los tumores HD se originan frecuentemente a partir de distintas células mamarias infectadas, mientras que los tumores HI surgen a partir de una sola célula. En todos los casos analizados, se encontraron nuevas inserciones de MMTV(LA) durante la progresión de tumores policlonales HD a tumores monoclonales HI. Por lo tanto, en este modelo, la progresión tumoral se produce asociada al surgimiento de clones que contienen inserciones ausentes o minoritarias en los tumores HD originales. Se ha reportado que la expresión del LIF tanto en el útero como en algunas líneas celulares de cáncer de mama puede ser regulada por estrógeno y progesterona. Sin embargo, no existían evidencias en la literatura sobre la expresión ni la actividad del LIF en la glándula mamaria normal. Por otro lado, se conoce bien que la presencia del LIF es necesaria para mantener a las “stem cells" embrionarias en estado pluripotente. Dado que la glándula mamaria está regulada por hormonas ováricas y que existen células progenitoras mamarias especificas involucradas en el desarrollo mamario normal y tumoral, nos propusimos investigar la participación del LIF en la biologia de la glándula mamaria. Nuestros resultados muestran que este factor se expresa durante el desarrollo de la glándula mamaria del ratón en mamas de hembras vírgenes y preñadas. Sin embargo, hallamos que su expresión máxima se induce durante la fase temprana de la involución mamaria postlactancia. En esta etapa, se habia demostrado que la acumulación de la leche causada por la falta de succión induce la liberación de factores locales que desencadenan la activación del factor de transcripción Stat3 y apoptosis del epitelio mamario. Aunque se sabía que dicho factor cumple un rol fundamental en desencadenar apoptosis durante esta fase, se desconocian los factores involucrados en su activación. Los resultados mostrados aquí indican que el LIF se libera como un factor local durante la fase temprana de la involución debido a la acumulación de la leche en la mama e induce apoptosis en el epitelio. Además detenninamos que el LIF es capaz de inducir la activación de Stat3 en el epitelio mamario in vivo. Por otro lado, nuestros resultados muestran que todos los tumores mamarios inducidos por MMTV(LA) poseen altos niveles de expresión de LIF y de activación de Stat3 y sugieren que el primero sería al menos parcialmente responsable de la activación del segundo. Si bien hemos encontrado el rol biológico de este camino de señalización (LIF-Stat3) en la glándula mamaria normal, queda todavía por dilucidar la significancia de este mecanismo en los tumores mamarios. En conclusión, los resultados presentados aquí refuerzan la idea que las células pluripotenciales y los factores asociados a prevenir su diferenciación, pueden cumplir un rol relevante en la biología de la glándula mamaria normal y tumoral.

Abstract:
Mouse mammary tumor virus (MMTV) is a type B retrovirus that causes mammary tumors in susceptible mice by insertional mutagenesis. In the present work it has been used the MMTV(LA),which has been first found in our laboratory. It has been previously showed that mice infected with this variant have a mammary tumor incidence of 90%. These tumors initiain show a hormone-dependent (HD) behavior, but evolve afterwards to a hormone-independent (HI)phenotype. In order to determine whether or not the mammary gland lobulo-alveolar compartiment is relevant for MMTV(LA)-induced tumorigenesis, WAP-TGFβ1 transgenic mice were nursed with MMTV(LA) infected mothers. This transgenic mice, express TGFβ1 under the control of the whey acidic protein (WAP) promoter. This promoter corresponds to a compicuos murine milkprotein, is mammary epithelium-specific and most active during late pregnancy and lactation. It has been demonstrated that TGFβ1 transgenic female mice are unable to lactate. This is because the ectopic expression of this factor in the lobular compartment of the mammary gland during pregnancy induces an increased rate of alveolar apoptosis. Another consequence of the WAP-TGFβ1 transgene expression is the premature senescence of the mammary specific epithelial stem cells manifested in a significant decreased capacity of WAP-TGFβ1 mammary transplant to grow and repopulate a cleared normal fat pad. The results showed herein indicate that WAP-TGFβ1 expression and the consequent lower number of lobulo-alveolar cells in the transgenic animals did not abrogate MMTV(LA) capacity to induce mammary tumors. On the other hand, we have found that MMTV(LA) infection reverted the proviously observed early senecence of WAP-TGFβ1 transgenic mammary epithelium. Since MMTV infection induces a recovery in the clonogenic capacity of the transgenic mammary stem cells, it raises the possibility that mammary stem cells inmortalization would be an early event in MMTV(LA)induced tumorigenesis. Our results show that mammary stem cells could be a preferencial target for MMTV-induced tumorigenesis. This implies a clonal origin for these tumors. Then, to test this hypothesis, Southern blot analysis of MMTV insertions in tumor cell DNA was performed. These studies were carried out based on the fact that a specific and reproducible pattem of bands can only be found in a mono or oligoclonal cell populations. Analysis from 17 tumor lines generated from pregnant MMTV(LA) infected females indicated that HD tumors frequently arise from different mammary infected cells while all HI tumor variants arise from a single cell. In all the cases analyzed herein, new MMTV(LA) insertions were found during progression from policlonal HD to monoclonal HI tumors. It has been reported that leukemia inhibitory factor (LIF) expression could be regulated by estrogen and progesterone in uterus and in some mammary tumor cell lines. However, there were no reports about LIF expression or activity in the normal mammary gland. On the other hand, it is very well known the importance of the LIF presence in order to maintain pluripotent embryonic stem cells. Since mammary gland is regulated by ovaric hormone and there are mammary specific stem cells involved in normal and neoplastic development. We decided to investigate LIF participation in the mammary gland biology. Our results show that LIF is expressed during mammary development in Virgin and pregnant females. However, LIF expression picks shortly after weaning during the early phase of mammary involution. It has been demonstrated that during this period, milk stasis caused by the lack of suckling results in the induction of local factors that lead to the activation of Stat3 transcription factor and mammary epithelium apoptosis. The results presented herein demonstrate that LIF is secreted as a mammary local factor in response to milk stasis and induces mammary ephitelium apoptosis. Moreover, we also demonstrate that LIF induces Stat3 phosphorylation in the mammary gland in vivo. On the other hand, we have found high LIF expression and Stat3 activation in all the MMW(LA) induced HD and HI mammary tumors and our results suggest that LIF would be at least partialliy responsible of that activation. While the biological role of this pathway in the nomal mammary gland has been very reciently uncover, its significance in mammary neoplastic glands remains to be elucidated. In conclusion, the results showed herein support the relevant role of mammary stem cells and factors possibly associated with the prevention of their differentiation, in the biology of normal and neoplastic mammary gland.

Samar, María Margarita. "Persistencia y/o transformación de tricotecenos durante algunas etapas del procesamiento de trigo" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La finalidad del presente trabajo fue obtener informaciónsobre la persistencia y / o transformación de tricotecenos durante algunas etapas de procesamiento del trigo para contribuir a la estimación de la exposición como consecuencia de la ingesta de alimentos elaborados con trigo potencialmente contaminados por tricotecenos en la Argentina. Las tendencias identificadas en los métodos analíticos para la determinación de tricotecenos, durante los años 1990-2000 en diferentes partes del mundo, muestran que la cromatografía gaseosa con detector de captura de electrones o la cromatografía en capa delgada para deoxinivalenol (DON) son las más adecuadas. A través de los estudios de variabilidad, se determinaron por primera vez en el ámbito mundial las funciones de distribución que representan la contaminación por DON del afrechillo, harina de trigo y gluten. Los resultados adquieren gran relevancia para el trigo, ya que la función de distribución encontrada representa los datos de contaminación por DON en el trigo argentino. Otro aspecto relevante, es que estos resultados facilitan la discusión de estrategias para reducir la variabilidad asociada a la determinación de DON en trigo, afrechillo, harina de trigo y gluten y posibilitan el desarrollo de adecuados planes de muestreo. El DON se distribuye durante la molienda entre las diversas fracciones, en tanto que en la producción de gluten y almidón se observa una reducción, que se supone es la consecuencia de la extracción de la toxina por las aguas de lavado. Este es el primer estudio que cuantifica la retención de DON en gluten, demostrando que el DON no es detectado en el almidón. El desarrollo de programas de control en micotoxinas implicadisponer de datos precisos y exactos sobre la concentración de las mismas. La variabilidad en la determinación debida a la falta de homogeneidad de la distribución de la contaminación está relacionada con la matriz analizada y difiere para cada micotoxina. La varianza total del método se subdividió en varianza debida al muestreo, a la preparación de la muestra y al método analítico. Se determinaron por primera vez las funciones de distribución que representan la contaminación por DON del afrechillo, harina de trigo y gluten y la función de distribución de la contaminación en trigo. Basado en estos resultados pueden discutirse estrategias para reducir la variabilidad asociada a la determinación de DON en estas matrices, considerando la relación costo-beneficio para decidir aumentar la cantidad o tamaño de las muestras analizadas. Durante la fritura de masa de empanadas se observó una reducción de la contaminación por DON y de los resultados obtenidos se concluye que es conveniente freír las tapas de empanadas a la menor de las temperaturas ensayadas para obtener una disminución mayor en la contaminación de DON. El conocimiento de la reducción de la contaminación por DON en este proceso, en conjunto con el conocimiento de la contaminación de la harina y el consumo de empanadas por la población, permitirá estimar la contribución que este consumo tiene en la ingesta tolerable diaria de esta micotoxinay aportar datos para la evaluación de la exposición de la población a la ingesta de DON.

Abstract:
The goal to present work was to get information upon the persistence and / or transformation of trichothecenes along some processing stages of wheat to contribute to exposure estimation, as a consequence to food intake of potentially contaminated wheat with trichochene in Argentina. Identified trends in analytical methods to trichothecenes determination, during 1990-2000 in different countries around the world, show that gas cromatography with electron capture detection, or thin layer cromatography for deoxynivalenol (DON) are more adequate. Through variability studies, for the first time in the world, distribution functions were determined, that represent DON contamination in bran, wheat flour and gluten. Results achieve great relevance for wheat, as found distribution function are representative to data of DON contamination for wheat in Argentina. Another relevant aspect, it is that these results simplify strategy discussion to reduce variability associated to DON determination in wheat, bran, wheat flour and gluten, so making possible development of adequate sampling plans. The DON distributes during milling among different fractions, while a reduction is observed as a consequence of toxin extraction by washing waters, during gluten and starch production. This is the first study to quantify DON retention in gluten, while DON is not detected in starch. Programs development to mycotoxins control, suppose precise and accurate data on their concentrations. Variability in the determination ought to lack on homogeneity on contamination distribution, is related to analyzed matrix and it is different for each mycotoxin. Total variance of method was subdivided in variance due to sampling, sampling preparation and analytical method. For the first time distribution functions were determined, which represent bran, wheat flour and gluten contamination by DON and distribution function of wheat contamination. Based upon those results, strategies can be discussed to provide reduction on variability associated to DON determination in those matrixes, considering cost benefit ratios, to establish increase quantity or size of analyzed samples. Along the frying of the empanadas dough, a reduction on contamination by DONwas observed, and from obtained results conclusion is convenience to fry empanadas dough to the lower temperature tested to obtain a larger reduction in contamination by DON. Knowledge about contamination by DON reduction in this process, together with knowledge in wheat contamination and empanadas consumption by population, will allow estimating contribution of this consumption in the tolerable daily feeding of this mycotoxin, and to supply with data to evaluate population exposure to intake of DON.

Salamone, Gabriela V.. "TNF-alfa y modulación del fenómeno apoptótico en neutrófilos humanos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El presente trabajo examinó la capacidad del TNF-a. de modular la apoptosis de neutrófilos humanos. Observamos que los neutrófilos cultivados sólo con TNF-a.sufren un pequeño pero significativo incremento en sus porcentajes de apoptosis. Llamativamente. observamos además que aquellos neutrófilos pretratados con TNF-a por 1-2 minutos a 37°C y expuestos luego a una variedad de agentes tales como IgG inmovilizada (IgGi), eritrocitos recubiertos por anticuerpos lgG (lgG-E), eritrocitos tratados con complemento (EC), zimosán (Z), ácido forbol miristico (PMA), suero activado por zimosán (ZAS), N-formilmetionil-leucil-fenilalanina (fMLP), Escherichia coli, y factor estimulador de la formación de colonias para granulocitos y macrófagos (GM-CSF) por 3 horas a 37°C, experimentaron un marcado incremento en sus porcentajes de apoptosis. Resultados similares fueron obtenidos en neutrófilos pretratados con TNF-a por 30 minutos, 1, 3 y 18 horas. Las concentraciones a las cuales el TNF-a. medió este efecto promotor de la apoptosis se hallaron comprendidas entre 1 y 100 nglml. En contraste con las observaciones realizadas en neutrófilos pretratados con TNF-a, no observamos promoción alguna de la apoptosis cuando el TNF-a fue añadido a neutrófilos previamente activados por agonistas convencionales. Las experiencias realizadas a fin de determinar el mecanismo responsable de la promoción de apoptosis por TNF-a mostraron que el mismo no es dependiente de la generación de intermediarios reactivos del oxígeno (IRO) ní de la participación del sistema Fas/FasL. Por el contrario, pareciera involucrar la activación de las vias intrínseca y extrinseca del mecanismo apoptótico y asociarse a una dramática disminución en la expresión de la proteina anti-apoptótica Mol-1. Nuestros resultados sugieren que el TNF-a juega un papel critico en el control de la sobrevida del neutrófilo en virtud de su capacidad de inducir la puesta en marcha del proceso apoptótioo, proceso que es 'gatillado' por una amplia variedad de agonistas convencionales.

Abstract:
This work examined the ability of TNF-a to modulate human neutrophil apoptosis. Neutrophils cultured with TNF-a alone undergo a low but significant increase in the number of apoptotic cells. More interestingly, when neutrophils were pretreated with TNFa. for 1-2 min at 37°C, and then were exposed to a variety of agents such as immobilized lgG (ilgG), IgG-coated erythrocytes (lgG-E), complement-treated erythrocytes (CE), zymosan (Z), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA),zymosan-activated serum (ZAS), N-formylmethionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP), Escherichia coli, and granulocytemacrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) for 3 h at 37°C, a marked stimulation of apoptosis was observed. Similar results were obtained in neutrophils pretreated with TNFa for 30 min, 1 h, 3 h, and 18 h. Bose-dependent studies showed that TNF-a enhances neutrophil apoptosis at oonoentrations ranging from 1 to 100 ng/ml. ln contrast to the observations made in neutrophils pretreated with TNF-a, there was no stimulation of apoptosis when TNF-a was added to neutrophils previously activated by conventional agonists. Experiments performed to establish the mechanism through which TNF-a promotes neutrophil apoptosis showed that: a) it was not dependent on the generation of reactive oxygen interrnediates (ROI) nor the participation of the Fas/FasL system, b) it appears to involve the activation of both, the extrinsic and ¡ntn'nsicpathway of apoptosis, and c) it was associated to a dramatic down regulation of the expression of anti-apoptotic protein Mol-1. Our results suggest that TNF-a plays a critical role in the control of neutrophil survival by virtue of its ability to induce an apoptotic death program which could be tiiggered by a variety of conventional agonists.

Rusjan, Marcia Cecilia. "Síntesis y estudio de propiedades fisicoquímica, estabilidad térmica y carácter mesomorfo de carboxilatos binucleares de metales de transición mono/ poliméricos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El desarrollo de nuevos materiales es uno de los campos de la química en mayor expansión en la actualidad, debido principalmente a la búsqueda de compuestos con propiedades específicas para su uso en dispositivos tecnológicos. Dentro de los materiales moleculares, un área importante es la de los cristales líquidos que contienen átomos metálicos (metalomesógenos). En ese contexto, durante esta tesis se estudiaron diversas propiedades de compuestos metalomesógenos basados en carboxilatos binuclcares de metales de transición. Se puso especial énfasis en el rango térmico de existencia de las mesofases, su estructura, estabilidad térmica y procesabilidad. El trabajo abarca la síntesis, caracterización y estudio de propiedades dc polímeros de coordinación iónicos basados en carboxilatos de Ru de valencia mixta (II,III), carboxilatos no poliméricos de Cu y Os, carboxilatos pscudopoliméricos de Rh y Ru divalentes y polímeros de coordinación neutros derivados de carboxilatos de Rh y Ru divalentes puenteados por pirazina. El uso de ligandos voluminosos (aplicación del principio de llenado eficiente del espacio intermolccular) aseguró el mesomorfismo en los compuestos puenteados por pirazina, al tiempo que permitió disminuir las temperaturas de transición a la mesofase en polímeros iónicos. Se estableció la influencia de las distintas partes moleculares sobre la estabilidad térmica de algunos de esos compuestos, y sobre el rol que tienen las interacciones intermolcculares en la estabilización de las fases cristal líquido. El agregado de solvente hidrocarbonado condujo a variaciones estructurales interesantes, así como al descenso de la temperatura de transición y la viscosidad de las mesofascs. Los resultados fueron interpretados a través de modelos que consideran su arquitectura supramolecular.

Abstract:
The development of new materials is nowadays one of the fields of Chemistry in greater expansion, mostly due to the search of compounds with specific properties for their use in technological devices. Among the molecular materials, metal containing liquid crystals (metallomesogens) are an important area. In that context, several properties of metallomesogcnic compounds based on transition metal binuclear carboxylates were studied during this thesis. Special emphasis was placed on the thermal range of existence of the mesophase, structure, thermal stability and processability. The work involves the synthesis, characterization and study of coordination ionic polymers based on mixed-valence Ru (II,III) carboxylates, non polymeric Cu and Os carboxylates, pseudo-polymeric Rh and Ru divalent carboxylates, and neutral coordination covalent polymers derived from Rh and Ru divalent carboxylates bridged by pyrazine. The use of bulky ligands (application of the principle of efficient intermolecular space filling)ensured the mesomorphism of the pyrazine bridged compounds and, at the same time, produced the lowering of the mesophasc transition temperature for the ionic polymers. The influence of the different molecular moieties on the thermal stability of some of these compounds and on the role that the intermolecular interactions play in the stabilization of the liquid crystalline phases was established. Addition of hydrocarbon solvent leads to interesting structural changes as well as to a decrease of the transition temperature and viscosity of the mesophases. The results were interpreted with models that take into account their supramolecular architecture.

Ruedin, Ana María Clara. "Multiwavelets no separables : construcción y aplicaciones para el procesamiento de imágenes" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Ribeiro, María Laura. "Participación del factor de crecimiento epidermal en el inicio del parto en la rata" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El parto es un proceso complejo, resultado de la delicada interconexión espacial y temporal entre los sistemas endocrinos materno y fetal. Los mecanismos precisos a través de los cuales ejercen su efecto las moléculas involucradas en el disparo del parto aún no han sido dilucidados. En el presente trabajo se investigó la participación de una de estas moléculas, el Factor de Crecimiento Epidermal (EGF) sobre el inicio del parto. En primer lugar se estudió el efecto del tratamiento intra-uterino (i/u) con EGF sobre el inicio del parto. Se realizó una curva dosis — tiempo — respuesta y se observó que la administración i/u de 500 ng de EGF en el día 21 de gestación retrasó 19.8 ± 0.7 h el inicio del parto con respecto a las hembras sham (hembras tratadas i/u con solución fisiológica). Por lo tanto, las hembras tratadas con EGF parieron el día 23 de gestación en lugar del día 22, como ocurrió en el caso de las hembras sham. Seguidamente se investigó el mecanismo por el cual el EGF exógeno modulaba el inicio del parto. Los resultados mostraron que 500 ng de EGF i/u administrados en el día 21 de gestación fueron capaces de: disminuir la síntesis de PGE2 y PGF2α en útero y en líquido amniótico; disminuir la expresión uterina de ambas isoformas de COX; aumentar la concentración de progesterona sérica y disminuir la fuerza de las contracciones miometriales. Los valores obtenidos para estas variables analizadas, fueron similares a los obtenidos en el día 21 de gestación para las hembras controles (día previo al inicio del parto), y recién en el día 23 de gestación (día del parto en las tratadas) alcanzaron el nivel obtenido durante el día 22 por las hembras sham. En la rata, el cuerpo lúteo es responsable de mantener la síntesis de progesterona indispensable para el éxito de la gestación, durante todo este proceso. Se ha postulado que a término, el aumento uterino de la expresión de COX-I y de la síntesis de PGF2α, desencadenaría el proceso luteolítico con la consecuente caída de la progesterona y el desencadenamiento del trabajo de parto. Dado que los resultados anteriores sugerían que el EGF podía estar ejerciendo su efecto a través de un mecanismo protector sobre el cuerpo lúteo, prolongando así la preñez, se procedió a analizar la morfología de los cuerpos lúteos de las hembras tratadas con EGF. Se observó que el tratamiento con 500 ng de EGF i/u en el día 21 de gestación, fue capaz de “re-luteinizar" el cuerpo lúteo, es decir que tomaron un aspecto similar al que poseen aquellos cuerpos lúteos con una alta capacidad de síntesis y secreción de progesterona. Los resultados hasta aquí descriptos, indican que el EGF exógeno estaría participando de los mecanismos moleculares involucrados en el inicio del parto, probablemente a través de un efecto inhibitorio sobre la luteólisis. Por último analizamos si el EGF endógeno participa en el inicio del parto. Se estudió la expresión uterina de los receptores de EGF, observándose una correlación temporal con el transcurso de la gestación. Además, analizamos la concentración de EGF en liquido amniótico y encontramos que este factor se encuentra aumentado en la mañana del día 21, sufriendo una abrupta caída doce horas después, correlacionándose con el aumento en la síntesis de la PGF2α, esencial para la luteólisis previa al inicio del parto.

Abstract:
Parturition is a complex process that results from the interaction between the maternal and fetal endocrine systems. Despite the remarkable increase in the knowledge of the mechanisms underlying parturition, the way in which the molecules involved in this process exerts their action remains unknown. In the present work we investigated the participation of one of these molecules, the epidermal growth factor (EGF) in the onset of labor. First of all we studied the effect of the intra-uterine (i/u) administration of EGF in the onset of labor. A dose — time — response curve was made and we observed that the i/u administration of 500 ng of EGF on day 21 of gestation was capable of delaying 19.8 ± 0.7 h the onset of labor compared to the sham animals (female rats that were treated i/u with saline solution). Thus, rats treated with EGF delivered during day 23 of gestation instead of day 22, as happened with the sham animals. Then we investigated the mechanism by which EGF was modulating gestation. The results showed that 500 ng of EGF administered i/u on day 21 of gestation was capable of: diminishing PGE2 y PGF2α in the uterus and amniotic fluid; diminishing the expression of both COX isoforms; augmenting serum progesterone level and reducing the amplitude of uterine contractions. The values obtained for the variables examined, were similar to those obtained for control rats during day 21 of gestation (the day before delivery), and only on day 23 (day of delivery for EGF treated rats) they reached the values observed on day 22 for the sham animals. In the rat, the corpus luteum is responsible for the maintenance of serum progesterone levels indispensable for the exit of pregnancy, during whole gestation. It has been postulated that at term, the rise in uterine COX-I expression and PGF2α synthesis, promotes the luteolitic process and in consequence the withdrawal of serum progesterone and the onset of delivery. The results presented above, suggested that EGF might have been exerting its effect on the onset of labor through a protective effect over the corpus luteum. Thus, we analyzed the morphology of the corpus luteum from EGFtreated rats. We observed that the i/u administration of 500 ng of EGF on day 21 of gestation was capable of “re-luteinizing” the corpus luteum, as its appearance was similar to that observed for the copus luteum with a high capacity of synthesizing and secreting progesterone. These results demonstrates that exogenous EGF might participate in the mechanisms underlying parturition, probably through an inhibitory effect over luteolysis. At last, we investigated the participation of endogenous EGF in the initiation of labor. When we analysed the expression of uterine EGF receptors, we found a temporal correlation with pregnancy progression. The concentration of EGF in the amniotic fluid was maximun in day 21 of gestation and abruptly decreased 12 h later, correlating with the PGF2α augmentation, essential for the mechanism of luteolysis previous to the initiation of labor.

Ramirez, Javier Alberto. "Estudio sobre síntesis y bioactividad de análogos de Brassinosteroides" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los brassinosteroides (BRs)son hormonas vegetales esteroidales de reciente descubrimiento, amplia distribución en la naturaleza, y esenciales para el normal desarrollo de las plantas. En los últimos años se han multiplicado los estudios sobre sus propiedades biológicas y posibles aplicaciones agronómicas. Debido a su baja concentración en las fuentes naturales, los compuestos utilizados en estos estudios deben obtenerse mediante síntesis química a partir de precursores accesibles. El trabajo desarrollado en esta Tesis se ha centrado en la síntesis de 28-homobrassinosteroides, a partir de estigmasterol. Se han sintetizado quince BRs, cuatro de ellos habían sido detectados como compuestos naturales, y once son análogos nuevos con modificaciones en C-3, C-S y C-6. En particular, resultó de interés la síntesisde análogos fluorados, debido a las importantes propiedades biológicas conocidas para los compuestos organofluorados. Se evaluó la actividad biológica de cada uno de los compuestos sintetizados. Los bioensayos utilizados fueron inclinación de la lámina de arroz, elongación del epicotilo de soja y crecimiento de plántulas normales y mutantes de Arabidopsis thaliana.

Abstract:
Brassinosteroids (BRs) are a new group of recently discovered plant hormones, widely distributed in the plant kingdom. BRs are essential for the normal development of plants. During the last past years studies concerning their biological properties and possible use as agrochemicals have increased. Chemical syntheses of BRs are required since they cannot be obtained from natural sources, due to their extremely low concentrations. This work has been devoted to the synthesis of 28-homobrassinosteroids, using stigmasterol as starting material. Four out of the fifteen obtained compounds had already been identified as natural products. The other eleven synthetic BRs were new analogues, with modifications involving the C-3, C-5 and C6. The synthesis of fluorinated analogues was of particular interest, due to the important previously reported bioactivities of organofluorinated compounds. Biological activity for each synthetic compounds has been evaluated using the following bioassays: the rice lamina inclination test, the soybean epicotyl elongation and the growth of wild type and mutant seedlings of Arabi dopsis thaliana.

Ramhorst, Rosanna Elizabeth. "Mecanismos inmunológicos involucrados en la prevención del rechazo semi-alogénico fetal" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Raimondi, Ana Rosa. "Relación epitelio-conectivo en la carcinogénesis experimental bucal: variaciones de ploidía epitelial en relación a la expresión del factor de crecimiento fibroblástico-básico y fibrosis" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El modelo de la bolsa de la mejilla del hámster muy aceptado y utilizado, reproduce la cancerización de la boca humana y una fibrosis subepitelial semejante a la fibrosis de la submucosa. En el se han analizado extensamente las características de los tumores que produce, pero se ha prestado menos atención al estudio de las etapas previas a la aparición de tumores. Las neoplasias que se observan en el modelo se dan en forma focal, precedidas por lesiones pre-malignas muitifocales, en una clara manifestación de la instalación de un campo cancerizado al igual que en la boca humana. Dado que el carcinoma de la mucosa bucal ha mantenido su incidencia y sus bajos índices de sobrevida durante los últimos 20 años parece importante disponer de un modelo experimental bien caracterizado para su estudio. Aproximadamente el 90% de los cánceres humanos son carcinomas, por lo cual resulta de interés que el abordaje del estudio de la biología de los carcinomas sea desde la perspectiva de la interacción epitelio-mesénquima. En base a estas observaciones, el objetivo de esta tesis doctoral fue el de estudiar los cambios que subyacen a la transformación maligna del epitelio, a través del análisis de ploidía y la desregulación de la interacción epitelio-conectivo, caracterizándola por medio del estudio de los cuadros fibrosos subyacentes al epitelio transformado. Tratando de aportar datos que pudieran ser trasladados a la biología de las lesiones pre-malignas humanas y a la búsqueda de marcadores de cancerización de campo. Para ello describimos las áreas NUMF(epitelios histológicamente normales pero cancerizados) que configuran los cuadros propios de la cancerización de campo. Como primer paso en el estudio de la interacción epitelio-conectivo evaluamos a través del análisis de ploidía las alteraciones epiteliales, cuantificamos las áreas NUMF, pre-neoplásicas y neoplásicas, encontrando que las zonas NUMF presentan un mayor contenido de ADN respecto de la mucosa normal a las 16 semanas de tratamiento. Para analizar las alteraciones en el tejido conectivo caracterizamos los cuadros desmoplásicos a través de la cuantificación de las áreas de fibrosis. Encontramos que la fibrohilalinosis aparece muy precozmente, antes que se evidencien cambios morfológicos en el epitelio transformado (a las 7 semanas de tratamiento, subyacente a las áreas NUMF) se presentan volúmenes de fibrosis aumentados significativamente respecto de la mucosa normal. Luego analizamos la expresión del FGF-2 durante el proceso, tratando de relacionado con los cuadros fibrosos. Encontramos que las variaciones en la expresión del FGF-2 en el tejido epitelial coinciden con la evolución de la fibrosis subepitelial en las etapas tempranas y que los carcinomas expresan en muy baja cantidad el factor o no lo expresan (se observó una regulación a través de la isoforma de 18 kd del factor). Encontramos expresión de los receptores 2 y 3 del FGF en el tejido epitelial y conectivo en las lesiones pre-malignas y expresión irregular de los mismos en los tumores. Finalmente analizamos si existía expresión de VEGF en el modelo. El VEGF presentó un cambio de su patrón de expresión en el epitelio en relación a los cuadros fibrosos durante las etapas pre-neoplásicas. También estudiamos si existia actividad proteolítica, encontrando un patrón de actividad correspondiente al de las MMP-2 y 9 en las etapas tempranas. El análisis conjunto de los resultados expuestos en esta tesis nos lleva a considerar que ni el b-FGF ni el VEGF tendrían un rol preponderante en el proceso angiogénico general de este modelo, ni en los tumores, pero el b-FGF tendrían un rol importante en la producción de fibrosis, de gran magnitud en las etapas tempranas. Tanto el factor como los cuadros desmoplásicos disminuyen desde las etapas intermedias en adelante, revelando su influencia en la disrupción temprana de la interacción epitelio-conectivo. Por lo tanto, la fibrosis junto a la ploidía de las áreas pre-neoplásicas son una manifestación temprana de la cancerización de campo.

Abstract:
The hamster cheek pouch carcinogenesis model is universally accepted and wider employed as a model of human oral cancer. It closely mimics human oral carcinogenesis and exhibits a subepithelial fibrosis that resembles the fibrosis of the submucosa. The tumors that develop as a result of the carcinogenesis protocols have been extensively studied. However, the earlier stages of malignant transformation have been less studied. Foci of neoplastic growth are preceded by multifocal premalignant lesions that evidence the presence of field cancerized tissue as occurs in the human oral cavity. Given that the incidence and low survival rate of oral carcinoma have remained unchanged over the last 20 years, a well characterized experimental model to study the different aspects of this pathology is of great value. Approximately 90% of all human cancers are carcinomas. Within this context it is interesting to address carcinoma biology from the viewpoint of epithelium-mesenchyma interactions. Based on these observations, the aim of the present PhD Thesis was to study the changes that underlie epithelial malignant transformation employing ploidy analysis and the evaluation of the deregulation of the interaction between epithelium and connective tissue. We characterized this interaction by evaluating the fibrosis that underlies the transformed epithelium. The particular aim was to contribute data that may be applied to the biology of human precancerous lesions and search for markers of field cancerization. Within this context we described NUMF areas (histologically normal but cancerized areas of epithelium), characteristic of field cancerization. As the first stage in our study of epithelium-connective tissue interactions we performed a ploidy analysis of the different areas of epithelium, i.e. NUMF, pre-neoplastic and neoplastic epithelia. We showed that the DNA content of NUMF epithelium at 16 weeks of treatment was larger than that of normal epithelium. We analyzed the changes in connective tissue in terms of desmoplastic features by quantitative evaluation of areas of fibrosis. We demonstrated that fibrohyalinosis appears very early on in the process of malignant transformation before the morphological changes become apparent in the transformed epithelium. At 7 weeks of treatment significantly larger volumes of fibrosis were detected underlying NUMF areas than those underlying normal tissue. We also analyzed the expression of FG-2 during the process and the association with fibrosis. We found that variations in the expression of FG-2 in epithelial tissue correlate with the evolution of subepithelial fibrosis in the early stages and that carcinomas express the factor very little or not at all (we observed regulation via the 18 kd isoform of the factor). We detected expression of receptors 2 and 3 of FG-2 in the epithelium and the connective tissue in precancerous lesions and irregular expression in tumors. We also examined the expression of VEGF in the model. VEGF evidenced a change in its expression pattern in the epithelium above areas of fibrosis that appear during the preneoplastic stages. The analysis of proteolytic activity revealed patterns of activity corresponding to MMP-2 and 9 in the early stages. A comprehensive analysis of the data presented in the present Thesis suggests that bFGF and VEGF do not play a central role in angiogenesis in this model or in tumors. bFGF would have an important role in the induction of fibrosis, a process which is particularly important in the early stages. Both the factor and the desmoplastic features decrease from the intermediate stages onwards, revealing their influence on the early disruption of the interaction between epithelium and connective tissue. In this way, fibrosis and ploidy in preneoplastic areas would be an early manifestation of field cancerization.

Raiger-Iustman, Laura J.. "Estudio de la fosforilación de péptidos asociados a membranas fotosintéticas en Rhodovulum sulfidophilum" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Durante más de 10 años, nuestro grupo ha estudiado la relación que existe entre la fosforilación de péptidos asociados a las membranas fotosintéticas de bacterias fototróficas pertenecientes a distintos géneros y la síntesis del aparato fotosíntético. Estudios similares han sido llevados a cabo por diferentes grupos de investigación tanto en organismos fotosintéticos como en cloroplastos de plantas superiores. En Rhodobacter capsulatus se demostró la existencia de péptidos del complejo antena, sobre todo de los péptidos α2 y β1 de, que sufrían una modificación postraduccional por fosforilación y que dicha modificación estaba regulada por las condiciones ambientales en que el cultivo bacteriano se desarrollaba. Esta modificación estaba también relacionada con la regulación genética de la síntesis de los componentes del aparato fotosíntético y el mecanismo de inserción del mismo en las membranas. En el transcurso de este trabajo de tesis se ha observado que en Rhodovulum sulfidophilum existe un péptido de un peso molecular aparente de 6 kDa, al que se lo denominó péptido P, que se fosforila in vivo exclusivamente en tirosina. A pesar de que este péptido resultó no corresponder a ninguna de las proteínas que unen bacterioclorofila descriptas hasta el momento, su fosforilación parece depender de condiciones que regulan, en genreal, la sintesis del aparato fotosíntético, o sea que responde a los cambios en las condiciones de crecimiento: luz-oscuridad, aerobiosis-anaerobiosis. Es probable que este péptido fosforilable esté relacionado con los sitios de iniciación del crecimiento de las membranas intracitoplasmáticas. Durante este trabajo de tesis se también se construyó y caracterizó una mutante LH1- , no polar, denominada rsLRI. Dicha mutante se obtuvo por deleción de los genes pufBA, que codifican para las apoproteínas LH1β y LHIα.

Abstract:
During the last ten years, our group has studied the relationship existing between phosphorylation of peptides of photosynthetic membranes in phototrophic bacteria belonging to different genera, and the synthesis of the photosynthetic apparatus. Similar studies have been performed in chloroplast of higher plants. In Rhodobacter capsulatus the LH2α and LH1β polypeptides were phosphorylated in vivo and the process was regulated by ambient growth conditions. This postranslational modification was related to the gene expression of the antenna polypeptides and their insertion in the membrane The present thesis work has revealed that in Rhodovulum sulfidophilum a small polypeptide of apparent MW of 6 kDa (P peptide) was phosphorylated exclusively in tyrosine This peptide could not be identified as a belonging to the photosynthetic apparatus although its phosphorylation depends on those conditions that regulates the synthesis of the photosynthetic apparatus. Thus it was govemed by changes in light-dark or aerobiosisanaerobiosis conditions. It is possible that peptide P was related with the initiation sites present in the intracitoplasmic membranes. In this work we have obtained and characterised a mutant resulting in a non-polar LH1- mutant was obtained by deleting pufBA genes codifying for LHl and βLH1α polypeptides

Raíces, Marcela. "Identificación y caracterización de quinasas y fosfatasas de proteínas inducidas durante la tuberización de Solanum tuberosum" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se estudiaron genes posiblemente involucrados en los procesos de señalización relacionados con la tuberización. Se identificaron los genes StCDPK1, StCDPK2 y StCDPK3, que son los primeros miembros de la familia CDPK de Solanum tuberosum. En particular se caracterizó el gen StCDPK1 que codifica para una quinasa activa con todas las propiedades de las CDPKs. Se demostró que StCDPK1 se miristoíla in vitro y que su localización subcelular depende de miristoilación y palmitoilación. Por otra parte se determinó que existe una fuerte correlación entre la expresión de StCDPK1 y el engrosamiento del estolón. Mediante ensayos de hibridación in situ se observó que StCDPK1 se expresa en el ápice de estolones inducidos a tuberizar. También se determinó que StCDPK3 se expresa diferencialmente en estolones tempranos. En ensayos de Western blot se identificaron dos CDPKs, de 55 y 60 kDa, cuya expresión correlaciona con la expresión de los genes StCDPK3 y StCDPK1 respectivamente. Se determinó que la actividad CDPK asociada a estolones tempranos y la actividad CDPK asociada a estolones inducidos poseen diferente especificidad de sustrato y distinta localización subcelular. Por otra parte se estudió el efecto de la sacarosa sobre la tuberización y sobre la expresión de StCDPK1. Se determinó la importancia de las actividades quinasa durante la inducción de la tuberización inducida por sacarosa y se demostró que este azúcar induce la expresión de StCDPK1 mediante un mecanismo que involucra la actividad de fosfatasas de la familia PP1/PP2A. Además, se identificó el gen StPP2A1c que codifica para la primer fosfatasa de la familia PP2A de Solanum tuberosum. Se determinó que el gen StPP2A1c se expresa diferencialmente durante la tuberización y, mediante ensayos de complementación en levaduras, se demostró que este gen codifica para una fosfatasa funcional.

Abstract:
In this work we studied genes which are possiby involved in the signalling events leading to tuber development. The first members of Solanum tuberosum CDPK family, StCDPK1, StCDPK2 y StCDPK3, were identified. The gene StCDPK1, which encodes an active kinase with all the features of CDPKs, was characterized. It was demonstrated that StCDPK1 suffers myristoylation in vitro and that its subcellular localization depends on myristoylation and palmitoylation. On the other hand, a strong correlation between StCDPK1 expression and stolon swelling was established. Using in situ hybridization we observed that StCDPK1 is expressed in the apical dome of tuberizing stolons. Moreover, StCDPK3 is differentially expressed in early stolons. By Western blot assays, two CDPKs of 55 y 60 kDa which correlated with the expression of StCDPK3 y StCDPK1 respectively, were detected. The CDPK activity associated to early and induced stolons showed different substrate specificity and subcellular localization. The effect of sucrose on tuberization and StCDPK1 expression was also analyzed. The importance of protein kinase activities during sucrose-induced tuber development was established and the induction of StCDPK1 by sucrose, through a mechanism that involves PP1/PP2A phosphatase activities,was demonstrated. Besides, we identified StPP2A1c, a gene that encodes the first phosphatase of the PP2A family in Solanum tuberosum. StPP2A1c was differentially expressed during tuberization and encoded a functional phosphatase, as was observed in yeast complementation assays.

Quintana, Irene Luisa. "Acción de la homocisteína sobre el sistema hemostático" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Numerosos estudios epidemiológicos han postulado que concentraciones plasmáticas elevadas de homocisteína (Hcy) constituyen un factor de riesgo independiente para la enfermedad vascular oclusiva, a nivel arterial y venoso. Aún no están esclarecidos los mecanismos fisiopatológicos involucrados en esta asociación. Los objetivos principales de esta tesis fueron: - Evaluar los niveles plasmáticos de Hcy en diversos grupos poblacionales, con un método analítico accesible y confiable. - Analizar determinantes genéticos y adquiridos de la homocisteinemia. - Determinar los valores de corte para homocisteinemia. - Estudiar la asociación de la variante termolábil de la MTHFR con la trombosis. - Evaluar la relación entre hiperhomocisteinemia y componentes del sistema hemostático. - Postular mecanismos responsables de la acción trombogénica de la Hcy. Para la determinación de la homocisteinemia en los estudios epidemiológicos realizados, se utilizó una técnica de ELISA, cuya validación arrojó resultados precisos y equivalentes a los del método de referencia (HPLC). Las muestras más apropiadas para ser analizadas fueron los plasmas en EDTA o los sueros obtenidos con gel separador, comprobándose que los congelamientos y descongelamientos sucesivos no afectan los resultados. Los valores de homocisteinemia de la población de Buenos Aires resultaron comprendidos entre 5,0-19,2 μM (3 a 59 años de edad); 1,2-11,6 μM (neonatos) y 6,0-30 μM (>65 años). Estos resultados no deben considerarse como valores de referencia; por el contrario, en el análisis de valores de corte se determinó que el nivel plasmático óptimo de Hcy debe ser S«12 μM. Se observó una prevalencia elevada de hiperhomocisteinemia (HHcy), sugiriendo que aproximadamente el 50 % de nuestra población estaría expuesta a un mayor riesgo de enfermedad vascular. Los niveles de Hcy se incrementaron con la edad de los individuos y resultaron mayores en los hombres que en las mujeres. Se demostró que existe una estrecha relación entre la homocisteinemia y los niveles de ácido fólico, vitamina B12 y creatinina. En particular, se observó que la restricción dietaria de folatos aumenta significativamente los niveles de Hcy, mientras que una dieta que aporte 400 μg/día de ácido fólico disminuye notablemente la homocisteinemia. Entre los factores genéticos que podrían afectar la concentración de Hcy se estudió el polimorfismo C677T de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR). Se observó que sólo la condición de homocigosis de la mutación se asociaría a niveles aumentados de Hcy. La HHcy resultó factor de riesgo independiente para la trombosis venosa, mientras que la presencia T677T/MTHFR no se asociaría a esta patología. En individuos hiperhomocisteinémicos mayores de 65 años se detectaron niveles significativamente aumentados de factor von Willebrand y de dermatán sulfato, probablemente asociados a una disfunción endotelial. Componentes del sistema hemostático tales como las plaquetas, los factores del sistema de coagulación y la fibrinolisis no mostraron alteraciones en presencia de altas concentraciones de Hcy, cuando fueron evaluados mediante pruebas del laboratorio de hemostasia. Sin embargo, en las experiencias de fibrinoformación se evidenciaron efectos importantes de la Hcy sobre la estructura de la red de fibrina. Se obtuvieron redes compactas, gruesas y muy ramificadas, que generarían coágulos más resistentes a la fibrinolisis. En estos resultados estaría involucrado el grupo tiol de la Hcy y uno de los componentes afectados en la fibrinoformación sería el factor XIII. Los hallazgos enunciados constituyen un nuevo aporte para el esclarecimiento de los mecanismos implicados en el efecto trombogénico de la hiperhomocisteinemia.

Abstract:
Several clinical and epidemiological studies have postulated that a high plasma homocysteine (Hcy) concentration is an independent risk factor for occlusive vascular diseases. The precise physiologic mechanisms of Hcy-associated atherothrombosis remain unclear. Main objectives in the present thesis were: - To evaluate plasma Hcy levels with a reliable method in various populations. - To analyze genetic and acquired determinants of homocysteinemia. - To propose homocysteinemia cut-off values. - To study the relation between the thermolabile MTHFR variant and thrombosis. - To evaluate hyperhomocysteinemia-haemostatic system interactions. - To postulate mechanisms involved in the thrombogenic effects associated to Hcy. Validation of an ELISA for the determination of plasma Hcy levels was performed. The method provided reliable data and showed agreement with HPLC. The most adequate samples were EDTA plasmas and serum obtained with gels. Frosting and defrosting procedures did not affect samples’ stability. The population of Buenos Aires showed a range of homocysteinemia between 5.0-19.2 μM (ages 3-59 years); 1.2-11.6 μM (newborns) and 6.0-30.0 μM(> 65 years old). These results must not be considered as reference values. On the contrary, homocysteinemia cut-off was 12 μM. Plasma Hcy concentration increased with age and was higher for male than for female. Homocysteinemia correlated inversely with folic acid and Vitamin B12 levels and positively with serum creatinine levels. Individuals with dietary restriction of folates showed hyperhomocysteinemia; meanwhile a diet providing 400 μg folic acid/day significantly diminished Hcy concentration. Polymorphism C677T of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) study showed an association of the homozygous mutant genotype with increased plasma Hcy. Hyperhomocysteinemia resulted in an independent risk factor for venous thrombosis, but MTHFR677TT would not show an enhancement of the thrombotic events. In elderly hyperhomocysteinemic subjects high factor von Willebrand and dermatan sulphate levels were measured. Probably, these results would be associated to an endothelial dysfunction in this population. Platelets, coagulation factors and fibrinolysis did not seem to be affected by high Hcy concentrations in laboratory tests. However, fibrinformation in vitro studies showed a significant Hcy-associated effect. Fibrin networks were different from control, with shorter, thicker and more branched fibers, resulting in a more compact structure. These changes would make clots more resistant to fibrinolysis. The thiol group would be involved in this effect and probably, factor XIII could be altered. These findings represent a new contribution to the knowledge about mechanisms involved in the thrombogenic effects associated with hyperhomocysteinemia.

Quartino, María Liliana. "Aspectos ecológicos de macroalgas marinas de Caleta Potter, Shetland del Sur, Antártida" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se estudian las asociaciones macroalgales de Caleta Potter (Shetland del Sur, Antártida), su distribución en relación con la profundidad, el sustrato, la irradiación, los nitratos y fosfatos, la salinidad, la temperatura del agua y el período luminoso; y se estima la producción macroalgal estival dentro de la Caleta. Los muestreos se realizaron en los años 1994-1995-1996, mediante buceo autónomo. Se colectaron 384 unidades muestrales, determinando las biomasas y densidades de las 39 especies de algas encontradas, dos de las cuales, Petalonia fascia (Müller) Kuntze y Nereoginkgo adiantifolia Kylin, fueron registradas por primera vez en Caleta Potter. Los análisis cuantitativos utilizando TWINSPAN (Análisis de dos vías de especies indicadoras) y CA (Análisis de correspondencias) permitieron definir cuatro asociaciones macroalgales: la primera de ellas ubicada en la franja de interfase entre el mesolitoral y el sublitoral superior, caracterizada por Iridaea cordura, Monostroma hariotii y Adenocystis utricularis. La segunda asociación se ubica en el sublitoral superior caracterizada por Desmarestia menziesii, Ascoseira mirabilis, Curdiea racovitzae y Kallymenia antarctica. La tercera se ubica en el sublitoral medio caracterizada por Desmarestia anceps, Georgiella confluens y Plocamium cartilagineum. Por último la asociación del sublitoral profundo caracterizada por Himantothallus grandifolius y Ballia callitricha. El análisis CCA (Análisis canónico de correspondencias) demuestra que el principal factor de distribución de las asociaciones es la profundidad, seguida en importancia por los sustratos, la irradiación, la salinidad y los nutrientes. Se pudieron también ajustar los óptimos de densidad de las principales poblaciones de macroalgas respecto a diferentes factores ambientales utilizando modelos HOF. La producción de biomasa de las especies más abundantes de macroalgas fue calculada sobre la base de la biomasa presente y valores publicados de estimaciones de tasa de crecimiento en condiciones de laboratorio. En Caleta Potter para el período de verano (121 días) la producción de las macroalgas más abundantes fue de 2206 Tm, siendo la producción diaria de 0,0157 g.gˉ¹ dˉ¹. Estos valores constituyen los únicos datos de estimación de producción macroalgal en la Antártida que se han estimado hasta la actualidad.

Abstract:
Macroalgal associations in Potter Cove (South Shetland, Antarctica), their distributions with depth, substrate, irradiation, nitrates and phosphates, salinity, water temperature and light period were studied. The macroalgal production within the Cove during the summer period was also estimated. Samples were collected during 1994, 1995 and 1996 by Scuba divers. A total of 384 sample units were collected. Biomasses and densities were determined for the 39 macroalgae species found, two of which, Petalonia fascia (Muller) Kuntze and Nereoginkgo adiantifolia Kylin, were recorded for the first time in Potter Cove. The quantitative analysis carried out using TWINSPAN (Two Way Indicator Species Analysis) and CA (Correspondence Analysis) enabled to define four macroalgal associations. The first one is placed within the interface strip between the mesolittoral and the upper sublitoral, it is characterized by Iridaea cordata, Monostroma hariotii and Adenocystis utricularis. The second association is placed within the upper sublitoral, it is characterized by Desmarestia menziesii, Ascoseira mirabilis, Curdiea racovitzae and Kallymenia antarctica. The third one, is placed within the central sublitoral, it is characterized by Desmarestia anceps, Georgiella confluens and Plocamium cartilagineum. Finally, the fourth association is placed within the deep sublittoral being characterized by Himantothallus grandifolius and Ballia callitricha. The CCA (Canonical Correspondence Analysis) demonstrates that the main factor influencing the associations distribution is depth, followed by substrates, irradiation, salinity and nutrients. Using HOF models, density optima for the main populations of macroalgae could also be fitted with respect to different environmental factors. The biomass production for the most abundant species of macroalgae was computed based on the existing biomass and on published estimates of growing-rates under laboratory conditions. In Potter Cove, for the summer period (121 days) the production of the most abundant macroalgae was 2206 metric tons and the daily production was 0.0157 g.gˉ¹dˉ¹. This set of macroalgal production data is the only one of its kind ever estimated in Antarctica.

Pérez, Gladys Mabel. "Interferencia del aluminio con el metabolismo del hierro" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El aluminio (Al) es un elemento ampliamente distribuido en la Naturaleza, de hecho, el tercero en abundancia. A pesar de su ubicuidad, no posee una función biológica conocida, por lo tanto, su incorporación a los seres vivos puede provocar signos de toxicidad. La sobrecarga con Al ha sido asociada con la aparición de diferentes desórdenes, tales como: defectos óseos, encefalopatía y alteraciones hematológicas. Estos signos de toxicidad, aunque fueron inicialmente detectados en pacientes con insuficiencia renal crónica, pueden presentarse también en individuos con función renal intacta. El extenso uso de este elemento en la vida cotidiana lo convierte en un riesgo potencial para la población en general. Una vez ingresado al organismo, el Al es conducido a través del torrente sanguíneo por la misma proteína que transporta hierro (Fe), la transferrina (Ti) y acumulado en distintos órganos y tejidos. Diversos antecedentes permitieron relacionar la acumulación de Al con el desarrollo de anemia. Por lo tanto, el objetivo planteado para desarrollar este trabajo de investigación fue estudiar la interferencia del Al con el metabolismo normal de Fe. Para ello, se emplearon células de la línea eritroleucémica K562, las cuales expresan receptores específicos para Tf (RTf y RTf2) en su membrana y experimentan maduración eritroide por la acción de inductores, tales como hemina y butirato de sodio. Los resultados demostraron que el Al interfiere con el proceso de diferenciación celular, ya que provoca disminución del número de células hemoglobinizadas. El cálculo de las Kd correspondientes mostró que el RTf posee afinidad similar por los complejos Tf-Fe y Tf-Al, lo cual conlleva al establecimiento de una relación competitiva cuando ambos están presentes simultáneamente en el entorno celular. Esta situación trae como consecuencia la disminución de la incorporación total de Fe y, por lo tanto, de su utilización en la síntesis de hemo. Sin embargo, cuando el Al es removido, dependiendo de la duración de la exposición a este metal y de las condiciones de inducción, la captación de Fe excede a la de las células que no fueron expuestas previamente a Al. Esta observación sugiere la activación de algún mecanismo destinado a compensar la menor incorporación del metal esencial por efecto del Al. La posibilidad de que la expresión del RTf o RTf2 fuera regulada positivamente fue descartada, ya que los niveles de ARNm y de proteína no fueron modificados como consecuencia de la exposición a Al. Además de las vías que median la incorporación de Fe unido a Tf, existen mecanismos alternativos para la captación del metal esencial cuando está presente en la forma de compuestos de bajo peso molecular. La remoción de Al, después de un tratamiento previo, indujo una regulación positiva de estos sistemas de transporte de Fe independientes de Tf. Puede concluirse que la presencia de Al en el entorno celular interfiere la normal incorporación y utilización de Fe. Ello induce una adaptación celular tendiente a alcanzar los niveles del metal esencial requeridos para el metabolismo. La regulación positiva de las vías alternativas de captación de Fe, las cuales no participan en la incorporación de Al, da cuenta de parte de esta respuesta, aunque no puede ser descartada la posibilidad de que la afinidad de los receptores para Tf pueda ser modificada. Sin embargo, a pesar de estas adaptaciones, la presencia continua de Al en el medio impide a las células lograr la utilización adecuada de Fe en la síntesis de hemoglobina.

Abstract:
Aluminum (Al) is widely distributed in Nature and, in fact, it is the third element more abundant. In spite of this, its biological function is not known, and its incorporation to living beings proved to have toxic effects. The exposure to Al has been associated to different disorders, such as: bone defects, encephalopathy, and hematologic alterations. Even though these toxicity signs were first detected in patients with chronic renal deficiency, they may be also observed in people with intact renal functions. The wide use of this metal in everyday life turns it into a potential hazard to the population in general. Once it enters the organism, Al is transported through the bloodstream by transferrin (Tf), the same protein that transports iron (Fe), and it is accumulated in different organs and tissues. Several facts related Al accumulation to the development of anemia. Therefore, the aim of this work was to study Al interference with normal Fe metabolism. Assays were carried out using cells from the erythroleukemic line K562, which express specific receptors for Tf (TfR and TfR2) in their membranes and experienced erythroid maturity due to the action of inducers such as hemin and sodium butyrate. Results showed that Al interferes with the cellular differentiation process causing a decrease in the number of hemoglobinized cells. The determination of the corresponding Kd showed that TfR has similar affinity for complexes Tf-Fe and Tf-Al, thus establishing a competitive relation between them when they are simultaneously present in the cellular environment. This situation triggers a reduction in the total incorporation of Fe and, thus, in its utilization in the synthesis of heme. However, when Al is removed, depending on the length of the exposure and on the induction conditions, Fe incorporation is higher than in cells not previously exposed to Al. This suggests the existence of a certain mechanism developed to compensate the lower essential metal incorporation caused by Al. Positive regulation of TfR or TfR2 expression was discarded since RNAm and protein levels were not modified by Al exposure. Apart from the pathways that mediate Tf-Fe incorporation, there are alternative mechanisms for essential metal uptake when it is in the form of low molecular weight compounds. The removal of Al after a previous treatment induced the positive regulation of these transport systems of Tf-independent Fe. We may conclude that the presence of Al in the cellular environment interferes with normal Fe incorporation and utilization. This induces a cellular adaptation intended to reach the essential metal levels necessary for metabolism. The positive regulation of the alternative Fe uptake pathways, which do not participate in Al incorporation, partly explains this response, but the possibility that the affinity of Tf receptors may be modified should not be discarded. However, in spite of these adaptations, the continuous presence of Al in cellular environment prevents the adequate utilization of Fe in hemoglobin synthesis.

Pontoriero, Andrea. "Epidemiología molecular de los virus influenza humanos circulantes en la Argentina en el período 1995-2002" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se realizó un estudio de aislamiento de virus (virus respiratorios sincicial, adenovirus, parainfluenza, influenza A y B) causantes de infecciones respiratorias, en muestras de pacientes menores de cinco años internados por infección respiratoria aguda baja, entre los años l995 a l999. Se pudo demostrar que alrededor del 6% de los casos son debidos al virus influenza. Para ese mismo período las curvas de mortalidad por influenza y neumonía muestran que los grupos de riesgo de la población son los menores de cuatro años y los mayores de 65, siendo muy importante la mortalidad por esta causa para los mayores de 75 años. El análisis de los datos recolectados por el SINAVE durante el período l995-1999 permitieron correlacionar los máximos de aislamientos positivos de virus influenza con los picos de morbilidad por síndrome tipo influenza notificados para toda la población. El análisis antigénico y genómico de aislamientos de virus Influenza humano provenientes de distintas localidades de la República Argentina durante el periodo l995- 2002 permitió establecer que las cepas circulantes de virus influenza A (H3N2) se relacionaron en forma cercana antigénicamente con las correspondientes cepas vacunales sólo a partir del año l999, mientras que las cepas HlNl se relacionaron con las componentes vacunales durante los años l998, 2000, 2001 y el 2002. Las cepas de influenza B no se relacionaron con las vacunales en los años l995, 2002 y lo hicieron parcialmente en el 2001. En la mayoría de los años estudiados hubo co-circulación de cepas de influenza A (HlNl), (H3N2) e influenza B. El análisis de la epidemiología del virus influenza en la Argentina permite concluir que el patrón epidemiológico es similar a lo que ocurre en el resto de los países del mundo desconociendo por el momento si nuestras aves también actúan como reservorios del virus así como el papel de los cerdos y otros mamíferos en el ciclo de vida de estos virus. Este estudio demuestra también que una situación similar ocurre en los países del Cono Sur, especialmente para la cepas de virus influenza A.

Piuri, Mariana. "Caracterización de la respuesta a estrés osmótico en Lactobacillus casei : rol del sistema proteolítico" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Lactobacillus casei es una bacteria que desde larga data ha sido empleada por el hombre en procesos fermentativos para la producción de quesos y chacinados y en los últimos años ha adquirido gran relevancia por su uso como probiótico. Durante los procesos mencionados y en el tracto gastrointestinal, Lb casei es sometida a diferentes tipos de estrés, entre ellos el estrés osmótico. El objetivo de este trabajo fue estudiar las modificaciones genéticas, fisiológicas y estructurales de este microorganismo cuando es sometido a un estrés hipersalino, priorizando el estudio de las actividades relacionadas con los procesos de elaboración de alimentos. En esta tesis se demostró que además de los solutos osmocompatibles generales glicín betaína y camitina, di y tripétidos pueden aumentar la osmotolerancia de Lb casei. Además de estimular el crecimiento en un medio hiperosmótico lograron restituir el grado de superenrollamiento del ADN (recuperación del linking number) de modo análogo a la camitina. La construcción y el análisis de una mutante deficiente en el transporte de di-tripéptidos, dtpT, mostró que aquellos péptidos que no son transportados eficientemente no ejercen osmoprotección, mientras que sí lo ejercen aquellos que son transportados de manera eficiente. Así mismo, se describió la pérdida de la represión ejercida por péptidos en las actividades de PrtP y Per , dos de las enzimas principales del sistema proteolítico y principales proveedoras de péptidos en el extracelular e intracelular respectivamente. En el caso de PrtP, se pudo demostrar que el aumento de la actividad se debe a una pérdida de la represión a nivel transcripcional. La demostración de la interacción de CodY (que había sido postulado como el efector de la represión por péptidos de varios componentes del sistema proteolítico en Lactococcus lactis) de Lb casei con la región promotora de prtP apunta a que ésta proteína reguladora mediaría la pérdida de represión en medio hiperosmótico. En un medio carente de péptidos y en alta sal, en cambio, la elevada actividad de PrtP se debe a un aumento de la velocidad máxima de la enzima durante el crecimiento en alta sal y no a un aumento de la actividad transcripcional. Dado que PrtP se encuentra anclada a la pared celular, la modificación de la actividad de la enzima podría ser consecuencia de modificaciones en el entorno de la proteína. Se describió una sensibilidad diferencial a la lisis y a antibióticos que actúan a nivel de envolturas en células provenientes de un medio con alta sal. El aumento de la sensibilidad a la lisis se debe directamente a alteraciones de la pared, ya que el mismo efecto se observó al emplear paredes purificadas. El análisis de las fotografias de microscopía electrónica reveló un aumento en el tamaño de las células crecidas en alta sal y claras diferencias en la pared de la misma. De estos resultados, se desprende la posibilidad de emplear el precrecimiento en NaCl como un método para facilitar la lisis de un microorganismo que normalmente es resistente a la misma. Los resultados obtenidos en esta tesis, contribuyen al conocimiento de la fisiología de bacterias lácticas en presencia de un efector de estrés que normalmente se encuentra durante los procesos en los que estos microorganismos participan.

Abstract:
Since long time, Laclobacillus casei has been used for the production of Cheese and sausages. In and the last few years they acquired relevance because of its use as a probiotic. During the fermentation process and in the gastrointestinal tract, Lb casei is subjected to a wide range of stressors and particularly to osmotic stress. The aim of this work was the analysis of the genetic, physiological and structural changes in this microorganism when it grows in a hyperosmotic saline condition, mainly the study of those activities related to the process involved in food production. In this thesis, it was demonstrated that as well as generally osmocompatible solutes, camithine and glycin betaine, di and tripeptides can improve osmotolerance in Lb. casei. Besides their role in stimulation of growth in high osmolarity media, they were able to re-establish the degree of DNA supercoil (recovery of linking number) as camithine did. The construction and analysis of a mutant,dtpT, unable to transport di-tripeptides, enable to show that those inefficiently transported peptides can not exert an osmoprotective role, in distinction from those efficiently transported. The lost of the repression exerted by peptides in PrtP and Per activities, two of the key enzymes of the proteolytic system and main providers of peptides was described. The lost of repression for PrtP took place at the transcriptional level. The interaction of CodY protein of Lb casei with the promoter region of prtP gene was demonstrated, this result suggests that this regulator protein would be involved in the lost of repression by peptides in a hyperosmotic media. In a hypersaline media in the absence of peptides, the high levels of PrtP activity were essentially through an increase of apparent Vmax instead of an increment of transcriptional activity. Since PrtP is anchored to the cell wall, the enzyme activity could be related to changes in the environment of the protein. The differences in the sensitivity to lysis and antibiotics, that exert their effect on the cell envelope in cells grown in the presence of salt, were indicative of these variations. The high level of lysis of the cells grown in NaCl, was also a direct consequence of changes in the cell wall; the same effect was observed when purified cell walls were used instead of whole cells. The analysis of electronic microscopy photographs revealed and increase in the size of cells grown in high salt as well as clear differences in the cell wall. These results raises, that pregrowth in hyperosmotic media could be used as an efficient method to improve lysis of this resistant to lysis bacteria. The results of this study, increase the knowledge about lactic acid bacteria physiology in the presence of NaCl, a stress effector that is usually found in fermentative process.

Pastorino, Ximena Inés. "Caracterización morfológica y reproductiva de la población de Artemia persimilis (crustacea branchiopoda:Anostraca) de la Laguna Colorada Chica" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los crustáceos anostracos del género Artemía se encuentran globalmente distribuidos en todos los continentes excepto la Antártica. A pesar de la amplia distribución del género, los hábitats que puede ocupar se encuentran restringidos a salinas y lagos o lagunas salados, donde la salinidad puede variar ampliamente entre 30 y 300 g l^-1. Estos crustáceos anostracos, son utilizados habitualmente en Acuicultura, como presa viva en la cría de peces y crustáceos marinos y/o de agua dulce de interés comercial. El género Artemia muestra una notable flexibilidad reproductiva que le permite adecuarse a las más diversas presiones de selección del medio; variando el tipo de descendencia que es liberada al medio en forma de quistes o larvas vivas, (reproducción ovípara u ovovivipara), y distribuyendo temporalmente la descendencia durante el período reproductivo. La reproducción es generalmente bisexual, aunque en Artemia puede presentarse también partenogénesis; en este último caso ambas modalidades son excluyentes. Esta variedad de estrategias reproductivas, sumada al potencial económico de este recurso natural, resalta la necesidad de profundizar el conocimiento de la biología de la reproducción de cada población. Esta tesis analiza en detalle la biología reproductiva de Artemía, realizando la caracterización morfológica, morfométrica y reproductiva de una población Argentina localizada en la provincia de La Pampa. Los resultados obtenidos nos permiten confirmar la ubicación taxonómica de la población de Anemia de la laguna Colorada Chica dentro de la especie A. persimilis mediante el uso de caracteres morfológicos simples y morfometría. Se caracterizaron los 5 estadios que forman parte del ciclo reproductivo de las hembras y se determinaron las fases que forman parte del ciclo de puesta, como resultado de la superposición de ciclos reproductivos sucesivos. El ciclo reproductivo tiene una duración aproximada de 6 días y presenta dos períodos principales, uno que transcurre en los ovarios (aproximadamente 3 días) y otro que transcurre en los oviductos y el útero. Mediante el análisis del comportamiento reproductivo de las hembras mantenidas en estado virginal (aisladas de machos) se descartó la presencia de partenogénesis como una modalidad reproductiva de esta población. El estudio de las variables reproductivas reveló la presencia de un mayor porcentaje de ovíparismo que ovoviviparismo, encontrándose hembras que fueron capaces de presentar estas dos modalidades reproductivas en camadas sucesivas. Las hembras criadas en diferentes condiciones de salinidad presentaron un mayor rendimiento reproductivo en la salinidad de 90 g l^-1, medido en función del número total de descendientes producidos por una hembra y al número total de puestas. Finalmente, un estudio a nivel microscópico, realizado en hembras y machos de las especies A. persimilis y A. franciscana, permite describir la morfología de Ia zona involucrada en el abrazo copulatorio.

Pastorino, Claudio. "Fases condensadas de moléculas flexibles: el azufre elemental" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se han estudiado las fases condensadas del azufre elemental con modelos de interacción que incluyen grados de libertad internos de las moleculas. Se centró el interés en el diagrama de fases cristalino de la molécula S8. Nuestro trabajo representa el primer estudio teórico-numérico sistemático de las tres fases polimórficas del azufre observadas experimentalmente: (α-, β- y γ-S8 y de sus transiciones de fase. También constituye una investigación de sistemas prototípicos con potenciales torsionales de doble pozo, que difieren de las dependencias de triple pozo, estudiadas extensamente por sus aplicación a compuestos orgánicos. Se emplearon técnicas de dinámica molecular clásica con algoritmos de presión y temperatura constantes y celda de forma variable para estudiar transiciones de fases estructurales, manteniendo un único modelo de potencial para describir las diferentes estructuras cristalinas. Utilizando primero un sencillo potencial intermolecular del tipo átomo-átomo isotrópico se reprodujeron exitosamente parámetros de las celdas primitivas, energías configuracionales, patrones de difracción de rayos X y correlaciones dinamicas en el intervalo de temperaturas 50-450K de las tres fases. También se reprodujo y caracterizó la transición orden-desorden orientacional dinámico de la fase β-S8. Alrededor de los 200K se observó una transición estructural espontánea de la fase α-S8 a una celda monoclínica (que llamamos α’-S8),que no ha sido observada experimentalmente. Además, calculamos una densidad de γ-S8 mayor a la de α-S8, que es lo opuesto a lo observado. Estas dos diferencias motivaron la revisión del potencial intermolecular isotrópico. Se propusieron dos modelos anisotrópicos de interacción intermolecular en base a datos experimentales y cálculos ab-initio de la densidad de carga de la molécula S8. Uno de ellos resultó superior al potencial original isotrópico, resolviendo las dos diferencias fundamentales de éste con los datos experimentales. Se realizaron además cálculos de energía libre mediante dos metodos: el de integración termodinámica y el de la aproximación cuasiarmónica para las fases α y α'. De la comparación de los dos métodos, se encuentra que la aproximación cuasi-armónica es adecuada para la estimación de diferencias de energías libres.

Abstract:
The elemental sulfur condensed phases have been studied by using interaction models with molecular internal degrees of freedom. Our work is mainly devoted to the phase diagram of the S8 molecule. This study is the first theoretical and numerical comprehensive approach to the experimentally reported polymorphic phases of S8 sulfur: α-, β-, γ-S8 and its phase transitions. It also is an investigation of prototypical double well torsional potential models. which differ from the widely studied triple well potentials to model organic compounds. We have used classical molecular dynamics techniques with constant temperature and pressure algorithms and variable cell shape while keeping the same potential model for all the phases and thermodynamic conditions. Cell parameters, configurational energies, X ray diffraction patterns and dynamical correlations were succesfully reproduced, in the range 50-450K, for the three phases with a simple isotropic intermolecular model. The β-S8 orientational order-disorder transition was also found in the temperature range reported by the experiments. We have also observed a spontaneous structural phase transition of the α-S8 sample towards a monoclinic cell (that we called α'-S8) which has not been experimentally observed. The density of γ-S8 was also calculated larger than that of α-S8, in contradiction with experimental findings. These two differences with experimental data prompted us to revise the isotropic potential model. Two new anisotropic interaction models, based in experimental measurements and ab initio calculations of the S8 electronic density of charge, were proposed. One of them improved the isotropic one solving the two above mentioned differences with the experimental data. Lastly, we have also performed free energy calculations using two approaches: the thermodynamic integration method and the quasi-harmonic approximation to study the free energy difference between α and α' phases. By comparing both methods we conclude thal the quasi-harmonic approximation is reliable for the estimation free energy differences.

Papinutti, Víctor Leandro. "Enzimas ligninolíticas en Fomes sclerodermeus" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Abstract:
White rot fungi are the only organisms capable to mineralize the lignin to CO2. These fungi posses at least three enzymes impicated in the process: lignin peroxidase, manganese dependent peroxidase and laccase. The screening of 13 strains of white-rot fungi showed that F. sclerodermeus was the more efficient ligninase producer fungus and the decolorization of the polymeric dye poly R was fast. Lip activity was not detected in any of the media tested. Optimal media conditions for laccase and MnP production in synthetic liquid media were found. The Doehlert uniform factorial experimental design was applied to study the effect of MnSO4, CuSO4 and asparagine. Among the aromatic compounds evaluated in GA medium, vanillin and fenilic acid were the more efficient laccase and MnP inducers. On the other hand, in semidefined medium (YPG) aromatic compounds had not effect on any activity. Under this conditions only copper and Mn increased laccase and MnP activities, respectively. Solid state fermentation on wheat or soy bran, high laccase and MnP were produced. Neither aromatic compounds, MnSO4 nor CuSO4 increased none of the activities. The effect on known ligninolytic inducers was studied on a crystalline cellulose (CC) based medium. Cellulolytic activities decreased 3-fold when CuSO4 or MnSO4 were added to the medium. MnP activity was only detected in the media containing MnSO4 as inducer, while the laccase activity was constitutiver expressed under all the conditions tested, and it was increased to a major extent when copper was added to the medium. Wood blocks of poplar incubated during six months with F. sclerodermeus registered dry weight losses of 51%. Differential hydrolysis of the wood blocks revealed that the remaining content of cellulose and lignin were 58 y 56%, respectively. On the other hand, the hydrosolubles increased 3-fold, due to the degradation products. Observation of the wood showed the degradation of parenchyma rays and thinning of the cell walls. Growing on sawdust medium, enzyme activities were produced only with poplar, whereas on cedar laccase and MnP were inhibited. Laccase and MnP produced in YPG medium by F. sclerodcrmeus were purified to electrophoretic homogeneity and characterized biochemically. Two isoenzymes of laccase (Lac I y Lac II) and two MnP (MnP I y MnP II) were found. Isoforms of both systems showed slight differences in their isoelectric points. Laccase activity produced on wheat bran based medium revealed three bands in PAGE with differential patterns of inactivation. Among the compounds tested, the CuSO4 1,25 mM was the best stabilizer. The combination of both CuSO4 and glycerol 0,2% further increased the stability of the enzyme. Laccase activity produced in the optimized conditions was used in assays of decoloration and detoxification of the fungicide malachite green. P. chrysosporium was used as biotest, this Fungus showed a high sensitivity to the fungicide, while degradation by F. sclerodermeus laccase rendered a not toxic compound. The presence of I-HBT accelerated the detoxification. The detoxification response of other white-rot fungi was similar to that observed for P. chrysosporium.

Ouviña, Susana María. "Disfunción endotelial en angiopatías : angiopatía diabética tipo 2" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La Diabetes Mellitus es un transtomo sistémico con alteraciones del metabolismo de los hidratos de carbono, lípidos y proteínas. La forma clínica predominante es la diabetes tipo 2 o no-insulino dependiente, siendo la enfermedad cardiovascular, la principal causa de muerte en estos pacientes. El desarrolllo de la diabetes está precedido por un período de resistencia a la insulina y de hiperinsulinemia. La incidencia de hipertensión arterial y el stress oxidativo están aumentados en los pacientes diabéticos y asociados a alteraciones vasculares. Se evaluó la disfunción endotelial en la diabetes tipo 2 mediante diferentes estudios clínicos en pacientes y se realizaron estudios experimentales con células endoteliales humanas, ratones y macrófagos. Se propusieron como objetivos: - Determinar la presencia de activación plaquetaria y la expresión de proteínas adhesivas. - Evaluar el metabolismo del óxido nítrico y la expresión de NOS. - Estudiar la liberación de citoquinas y FvW. - Determinar los niveles plasmáticos de ET-l en los pacientes diabéticos y su interacción con el NO. - Relación entre los niveles plasmáticos de insulina, PAI-l y Péptído C. - Evaluación de la función endotelial a través de la medición de la respuesta vasodilatadora a la isquemia hiperémica. - Seguimiento secuencial de los parámetros metabólicos, vasoactivos y marcadores de disfunción endotelial en una población de individuos hipertensos bajo tratamiento con una droga antihipertensiva y en otra población sin tratamiento farmacológico. - Estudiar la acción de los AGEs en células endoteliales obtenidas a partir de cordón umbilical humano. Determinar la migración de las CE en presencia de AGEs. Realizar co-cultivos de células endoteliales con eritrocitos provenientes de pacientes diabéticos tipo 2. - Determinar la respuesta en un modelo experimental animal (ratones Balb/c) expuesto a distintas concentraciones de albúmina glicosilada. - Estudio comparativo entre macrófagos murinos y la línea celular U-937, monoblastos de origen humano, diferenciada a macrófagos. La acción de los AGEs observada en los experimentos in vitro e in vivo reprodujo, en parte, los resultados obtenidos en los pacientes estudiados. Los pacientes diabéticos expresaron marcadores de activación plaquetaria y presentaron alteraciones en el metabolismo del NO y su interrelación con la ET-l. Las proteínas reactantes de fase aguda tales como FvW, Fibrinógeno y PAI-1 estuvieron elevadas y asociadas a la condición de insulino-resistencia. Las drogas antihipertensivas tipo IECA mejoraron significativamente la función endotelial, disminuyendo el riesgo de eventos trombóticos.

Abstract:
Diabetes Mellitus is a sistemic disorder with alterated carbohydrates, lipids and proteins metabolisms. The most frecuent type is the non-insulin dependent diabetes or type 2 diabetes. The cardiovascular disease is the main cause of death in these patients. A period of insulin-resistance or hyperinsulinaemia may preced the onset of diabetes. Arterial hypertension incidence and oxidative stress are increased in diabetic type 2 patients and associated to vascular alterations. Endothelial dysfunction was evaluated through different kind of clinical studies in patients. Experiments were also performed in human endothelial cells. mice and macrophages. The objetives of this Thesis were: - To evaluate the platelet activation and the adhesive proteins expression. - To analyse the nitric oxide metabolism and nitric oxide synthases expression. - To study the cytokines and von Willebrand Factor release. - To analyse the relatioship among insulin, PAI-l and C Peptide plasmatic levels. - To evaluate the endothelial function by the measure of the vasodilator response to the hyperemic ischemia. - Time followed metabolic and vasoactive parameters and endothelial dysfunction markers in a hypertensive patients group under anti-hypertensive drug treatment and in another hypertensive patients group without pharrnacologic treatment. - To study AGES action on the endothelial cells obtained from human umbilical cord and on their migration. To evaluate the endothelial cells and red blood cells from diabetic type 2 patients co-culture. - To propose the response of an experimental animal model (Balb/c mice) at different concentration of glycated albumin. - To compare murin macrophages and human monoblastic cellular line U-937, diferentiated to macrophage. The results obtained from the clinical studies were reproduced at least in pan. for in vivo and in vitro experiments done under the action of AGEs. Platelet activation markers were expressed in diabetic and they also showed NO metabolism and an altered relationship with ET-l. Plasmatic levels of acute reactant phase proteins such as von Willebrand Factor, Fibrinogen and PAI-l were increased and associated with the insulin-resistance condition. Anti-hypertensive drugs such as angiotensin-converting enzyme inhibitor significantly improved the endothelial function and in consequence, may decrease the thrombotic events risk.

Otero, Marcelo Javier. "Construcción y caracterización de estructuras complejas de biomoléculas con aplicación en el diseño de biosensores" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Un biosensor es un dispositivo de reconocimiento molecular donde una biomolécula interactúa en forma altamente específica con un analito y donde el cambio químico producido en presencia del analito se traduce en una señal eléctrica procesable. Una de las etapas más importantes en el diseño de un biosensor es la de generar una estructura o superestructura, en la cual estén insertas las biomoléculas responsables de la respuesta del sensor. De esta etapa dependerán la actividad de la biomolécula, la sensibilidad, la especificidad y el ámbito de uso del biosensor. En este trabajo de tesis se estudiaron diversos aspectos de la inmovilización de enzimas y anticuerpos en el contexto de la construcción de electrodos enzimáticos para la detección de glucosa y de la construcción de sensores inmunológicos para detectar moléculas pequeñas a través de un ensayo competitivo. Para ello se utilizaron en forma complementaria distintas técnicas como la Microbalanza de Cristal de Cuarzo (QCM), la Elipsometría, la Microscopía de Fuerza Atómica (AFM)y diversas Técnicas Electroquímicas. Como técnicas de inmovilización se utilizaron la funcionalización covalente de superficies, el autoensamblado electrostático, el empleo de uniones de importancia biológica como avidina-biotina o antígeno-anticuerpo en la inmovilización de enzimas y el uso de proteínas orientadoras como proteína A y proteína G para la inmovilización de anticuerpos. En primer lugar se describe el uso de la microbalanza de cristal de cuarzo para estudiar sistemas autoensamblados en multicapas de glucosa oxidasa (GOx)y polialilamina derivatizada covalentemente con un complejo de Os: +, (PAH-Os), depositadas sobre superficies de oro modificadas con ácido 3-mercaptopropansulfónico (MPS). Las etapas de adsorción del polímero y la glucosa oxidasa se repitieron alternadamente obteniendo cristales de cuarzo modificados hasta con 14 bicapas de polímero-enzima. El espesor elipsométrico, determinado a tres longitudes de onda, y la masa de las películas autoensambladas, determinadas por QCM en condiciones gravimétricas, se determinaron en contacto con solución de electrolito y en condiciones de sequedad y se estimó a partir de dichas mediciones la densidad de la película en ambas condiciones. Se plantea en esta tesis una estrategia general para la extracción de las propiedades viscoelásticas de peliculas autoensambladas por combinación de QCM y elipsometría. Por combinación del espesor y densidad estimados de la película, la expresión de la impedancia mecánica superficial del cristal de cuarzo, y la viscosidad y densidad del electrolito, se pudieron estimar los valores de los módulos de almacenamiento (G') y perdida (G") a 10 MHz para una película autoensamblada como función del espesor y el potencial de electrodo durante dos tipos de perturbaciones electroquímicas: voltametría cíclica y saltos de potencial. Una vez planteada la utilidad de ambas técnicas, QCM y elipsometría en el estudio de la construcción de películas autoensambladas, éstas se emplearon para el estudio del crecimiento de películas autoensambladas de glucosa oxidasa biotinizada y PAH-Os utilizando dos estrategias distintas de inmovilización de la enzima: la formación de una unión antígeno-anticuerpo y la formación de una unión avidina-biotina. Se estudió la cinética de adsorción de las biomoléculas y el grado de inespecificidad de las interacciones durante la inmovilización de la enzima. Se estudió además el comportamiento biocatalítico de la glucosa oxidasa biotinizada inmovilizada en las distintas estructuras autoensambladas y se llegó a la conclusión de que la eficiencia de la comunicación eléctrica entre las enzimas y el mediador se ve afectada tanto por el tipo de inmovilización de la enzima, como por la cantidad de centros redox del polímero de osmio por cada molécula de enzima. Las enzimas redox inmovilizadas en estructuras autoensambladas no solamente tienen aplicación en el diseño de electrodos enzimáticos, sino también en el desarrollo de biosensores inmunológicos. La formación de una unión antígeno-anticuerpo no genera una señal medible por lo cual se recurre al uso de sustancias marcadoras. La mayor parte de los inmunoelectrodos desarrollados últimamente están basados en el uso de enzimas oxidoreductasas como marcadoras. Además de los marcadores es necesario utilizar mediadores redox para transferir la carga entre el electrodo y el sitio redox de la enzima y revelar la actividad enzimática a través de la señal del mediador. De este modo la superficie del electrodo representa, tanto el transductor para la detección enzimática, como el soporte inerte sobre el cual se inmovilizan los antígenos o los anticuerpos. En este contexto se construyeron multicapas autoensambladas de PAH-Os y un anticuerpo, IgG antibiotina, con el objetivo de construir un biosensor modelo para la detección de moléculas pequeñas (como la biotina) a través de un ensayo competitivo, utilizando un marcador enzimático basado en peroxidasa de rábano, HRP-biotina. Con la técnica de EQCM se estudió la deposición de las multicapas, es decir la cantidad de IgG depositada en cada capa, los cambios viscoelásticos durante la adsorción, la cinética de adsorción para distintas concentraciones de IgG y el pegado del marcador o conjugado HRP-biotina. Con la técnica de AFM se observó la estructura y orientación de las moléculas de IgG adsorbidas sobre el polímero y finalmente con las técnicas electroquímicas se estudió el crecimiento de las bicapas y la utilidad de la supraestructura como biosensor, a través del estudio de la catálisis enzimática del conjugado. Finalmente se describen resultados preliminares sobre el uso de proteínas orientadoras, proteína A y G’, utilizadas para disminuir la inespecificidad del sensor y favorecer la reacción entre el antígeno y el anticuerpo inmovilizado. En conclusión, los resultados obtenidos confirman que la inmovilización de biomoléculas es por cierto una de las etapas más importantes en el desarrollo de un biosensor al afectar la respuesta del mismo. Además se muestra la necesidad de recurrir a distintas técnicas para su estudio y de este modo contrarrestar las limitaciones propias de cada técnica.

Abstract:
A biosensor is a molecular recognition device, in which a biomolecule interacts high specifically with an analyte and where the chemical change produced by its presence is transduced into a processable electric signal. One of the most important stages of biosensor design is the generation of a structure or superstructure that contains the biomolecules responsible of the sensor response. The biomolecule activity, the sensibility, the specificity and the use of the biosensor depend on this stage. ln this thesis were studied different aspects of the enzymes and antibodies immobilization in the context of the development of enzymatic electrodes for glucose detection and the construction of immunosensors for the detection of small molecules through a competitive assay. For this purpose several complementary techniques were used such as Quartz Crystal Microbalance (QCM), Ellipsometry, Atomic Force Microscopy (AFM) and electrochemical techniques. Different types of immobilization were used namely electrostatic self-assembly, covalent functionalization of surfaces, the use of biological unions like avidin-biotin or antigen-antibody for the immobilization of enzymes and the use of binding proteins like protein A and protein G for the immobilization of antibodies. First of all have been described the used of the Quartz Crystal Microbalance for the study of layer by layer self assembled multilayers of glucose oxidase (GOx) and a redox polymer polyallylamine-Os(bpy)2ClPyCH2NH (PAH-Os), deposited on to thiol modified gold surfaces. The alternate adsorption steps of the polymer and the enzyme were repeated, reaching up to 14 polymer-enzyme bilayers. The ellipsometric thickness and the QCM gravimetric response were determined for the self-assembly films under electrolyte solution and in air. The density of the films was estimated in both environmental conditions. In this thesis a general strategy for the determination of the viscoelastic properties of self-assembled multilayers with the combination of QCM and ellipsometry has been suggested. By combininig the estimated film thickness and density, the expression of the electrical impedance of the modified quartz crystal surface and the properties of the solution, it was possible to estimate the storage (G’) and loss gear (G”) moduli at 10 MHz for a self-assembled film as a function of the thickness and electrode potential under two different electrochemical perturbations: Cyclic Voltammetry and Potential Steps. Once the combination of both techniques proved to be useful in the study of film construction, they were used to study the growth of self-assembled monolayers of biotinylated glucose oxidase and PAH-Os by using two different approaches of enzyme immobilization: the antigen-antibody binding and the avidin-biotin binding. The adsorption kinetics, the specificity of the interactions, and the biocatalytical behaviour of the immobilized enzyme in the different strategies were studied. It was concluded that not only is the electrical wiring efficiency between the enzyme and the mediator affected by the immobilization strategy, but also by the relationship between the concentration of redox centers and the concentration of enzyme. It is currently widely known that the immobilized redox enzymes in self-assembled structures can be applied in the design of enzymatic electrodes, but also in the development of immunological biosensors. The binding between an antigen and the specific antibody does not generate a measurable signal, and therefore a marker must be used. Many of the recently developed immunoelectrodes use an oxidoreductase enzyme marker. Apart from the marker, it is also necessary to use a redox mediator in order to transfer the redox charge between the electrode and the redox sites and to detect the enzyme activity through the mediator signal. The electrode surface has two different functions: as inert substrate for the antibodies and as enzymatic detection transducer. Self assembled multilayers of PAH-Os and an antibody, IgG antibiotin, were constructed in order to develop a biosensor for the detection of small molecules such as biotin through a competitive assay, using an enzymatic marker or conjugate: horseradish peroxidase-biotin (HRP-biotin). By use of the QCM technique it was possible to investigate the adsorption of IgG in the multilayers, the viscoelastic changes during the protein uptake, the adsorption kinetics for different antibody concentrations and the conjugate adsorption. The structure and orientation of the IgG molecules on the polymer modified surface were studied with AFM. And finally the growth of the layers and the utility of the superstructure as biosensor were studied with electrochemical techniques. Preliminary results of the use of binding proteins like protein A and protein G’, used in order to improve the immunological reaction, were also described. In conclusion, the obtained results confirm that the biomolecule immobilization is one of the most critical stages in the development of a biosensor, since it affects the biosensor use and response. It has also been shown the need for the use of different complementary techniques in order to characterize the construction of self-assembled multilayers.

Monteoliva, Diana Beatriz. "Decoherencia en sistemas cuánticos caóticos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El proceso de decoherencia para un sistema cuántico abierto con análogo clasico caótico (un pozo doble perturbado armónicamente acoplado a un baño de infinitos osciladores arnninicos) es estudiado. Se analiza el comportamiento de la tasa de producción de entropía mostrando que posee dos regímenes relevantes: Para tiempos cortos ésta es proporcional a la intensidad del acoplamiento sistema-entorno. Posteriormente, pero antes del equilibrio, entra en un régimen donde es fijada por el exponente de Lyapunov del sistema. Este segundo régimen es encontrado siempre que el coeficiente de difusión supere cierto valor umbral. El tiempo de transición entre ambos regímenes muestra una dependencia lineal con la entopía del estado inicial y logaritmica con el coeficiente de difusión. Además, el desarrollo de estructuras en la función de Wigner es investigado, observando que para sistemas caóticos éstas saturan rápido, en un tiempo que concuerda con el tiempo de Ehrenfest. Comprobamos que, contrariamente a conjeturas previas, cuando el sistema es inacroscópico la saturación se produce a escalas que son típicamente sub-Planckianas. Estas escalas determinan la sensibilidad de un sistema cuántico a las perturbaciones. Mostramos que para sistemas cuánticos caóticos la tasa de decaimiento de la Fidelidad medida de la sensibilidad de un sistema cuántico a las perturbaciones, esta determinada por sus exponentes de Lyapunov. Esta escala temporal establece el tiempo de decoherencia de un sistema acoplado a un entorno caótico.

Abstract:
The decoherence process for a classically chaotic quantum open system (a double well harmonically perturbed coupled to a bath of infinite harmonic oscillators) is studied. The behaviour of the entropy production rate is analysed, showing it posses two relevant regimes: For short times it is proportional to the system-environment coupling strength. Afterwards, but before equilibration. it enters a regime where it is fixed by the Lyapunov exponents of the system. This second regime is reached only if the difussion coeficient if above certain threshold. The transition time between both regimes shows a linear dependence on the initial entropy and a logarithmic one on the diffussion coeficient. Moreover, the structure development of the Wigner function is investigated, observing that for chaotic systems it quickly saturates, in a tiemscale which agrees with the Ehrenfest time. Contrarywise to previous conjectures, we verify that when the system is macroscopic saturation happens tipically at sub-Planckian scales. These scales determine the sensitivity of a quantum system to perturbations. We show that for chaotic quantum systems the rate of decay of the Fidelity, a measure of the sensitivity of a quantum system to perturbations. is determinal by its Lyapunov exponent. This timescale establishes the decoherence time of a system coupled to a chaotic environment.

Méndez De Leo, Lucila Paula. "Estudio de soluciones acuosas de electrolitos en condiciones de alta temperatura por espectrofotometría UV-visible" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de este trabajo es el estudio del comportamiento de electrolitos en solución acuosa en condiciones de alta temperatura y presión. Existe muy poca información sobre el comportamiento de este tipo de sistemas en condiciones extremas. Para realizar el estudio se armó, a partir de partes modulares, un espectrofotómetro de doble haz al que se acopló una celda espectrofotométrica de flujo capaz de operar a alta temperatura y presión, diseñada y construida durante este proyecto. Este arreglo experimental se utilizó para estudiar dos equilibrios en soluciones de electrolitos de características muy diferentes. Por un lado se estudió el equilibrio ácido-base del 4-metilfenol hasta 175°C. El 4-metilfenol es un compuesto que puede ser útil como indicador de pH en sistemas acuosos a altas temperaturas. Por otro lado se estudió la asociación iónica de cobre (II) y sulfato hasta 200 °C. Este sistema resulta de gran interés para la comprensión de las interacciones entre los iones en soluciones acuosas y de los iones con el solvente, en un amplio intervalo de temperatura. Se obtuvo información sobre las propiedades termodinámicas de estos dos sistemas, a partir de la cual fue posible inferir la diferente solvatación de reactivos y productos, así como, en el caso de las asociación de cobre (II) y sulfato, fue posible obtener información sobre la estructura de los pares iónicos que se forman.

Abstract:
The purpose of this work is to study the behaviour of electrolytes in aqueous solutions at high temperature and pressure. There is a general lack of information about their properties in extreme conditions. A double beam spectrophotometer provided with a high temperature and pressure flow cell, designed and built during this project, was mounted using modular components. This setup was used to study two equilibria in aqueous solutions of electrolytes with very different characteristics. One equilibrium was the acid-base equilibrium of 4-methylphenol up to 175 °C. The 4-metylphenol is a compound that may be useful as a pH indicator in aqueous solutions at high temperature. The other equilibrium studied was the ionic association of copper (II) and sulphate up to 200 °C. The characteristics of this equilibrium are very interesting in order to understand the interaction between ions and between ions and solvent molecules in aqueous solutions over a wide range of temperature. Information about the thermodynamic properties of these two equilibria was obtained and used to infer the difference in solvation of reagents and products. For ionic association of copper (II) and sulphate it was also possible to obtain information about the structure of the ionic pairs formed.

Méndez Díaz, Isabel. "Problema de coloreo de Grafos : un estudio poliedral y un algoritmo Branch-and-Cut" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El problema de coloreo de grafos, PCG, es uno de los problemas clásicos de la teoría de grafos y es estudiado desde el siglo XIX. Más allá del interés teórico, tiene una significativa importancia práctica debida a las numerosas situaciones de la vida real en las cuales surgen problemas que pueden ser modelados como un problema de coloreo de grafos. PCG pertenece a la clase de problemas NP-Hard, es decir que no se conoce un algoritmo polinomial para resolverlo. Existe en la bibliografía gran cantidad de trabajos proponiendo algoritmos para su resolución especialmente heurísticas y en menor medida algoritmos exactos. Como muchos problemas de Optimización Combinatoria, PCG se puede modelar como un problema de programación lineal entera. Los algoritmos Branch-and- Cut son la herramienta más efectiva que se conoce para resolver un modelo de programación lineal entera. En particular, las implementaciones que usan desigualdades válidas del poliedro asociado al modelo han mostrado ser las más efectivas. Tal vez una de las mayores dificultades de este abordaje se presenta cuando el problema de programación lineal entera tiene la propiedad de simetría, es decir que existen múltiples soluciones con el mismo valor de la función objetivo. En estos casos, los algoritmos habituales disminuyen en gran medida su performance. El objetivo de esta tesis es abordar la resolución del problema de coloreo de grafos mediante modelos de programación entera binaria que parcialmente eliminen soluciones simétricas. Con este fin, proponemos varios modelos que tratan la simetría del problema con diferentes criterios. Estudiamos los poliedros asociados a estos modelos y desarrollamos e implementamos un algoritmo Branch-and-Cut donde utilizamos este estudio poliedral y estrategias particulares que guían la búsqueda evitando explorar sobre soluciones simétricas. Se presentan resultados que demuestran que este algoritmo es capaz de competir exitosamente con los algoritmos exactos conocidos.

Abstract:
The graph coloring problem, PCG, is perhaps one of the oldest and most well-known problems in graph theory. Nowadays, it arises in many applications such as scheduling, timetabling, electronic bandwidth allocation and sequencing. PCG is known to be NP-hard for arbitrary graphs. The practical importance of the problem makes neccesary to devise algorithms capable of solving, in acceptable computational times, medium to moderate instances arising in real-world applications. A lot of work has been spent in an attempt to develop efficient algorithms for the problem, mainly by using heuristic techniques to deal with large instances. Relatively few methods for solving the problem exactly can be found in the literature. Like most optimization problems on graphs, PCG can be formulated as a linear integer programming problem. LP-based Branch-and-Cut algorithms are currently the most successfull tool to deal with these models computationally. However, the amount of research effort spent in attempts to solve PCG by this method is not comparable with that devoted to other problems, like TSP or maximum stable set. If the integer programming formulation exhibits symmetries, i.e. many solutions exist with the same optimal value, it turns out that Branch-and-Cut exhibts poor performance even for small instances. The classical models for PCG suffered from this problem. In this thesis, we present new integer programming formulations that reduce the number of feasible symmetrical solutions. We develop a polyhedral study of the polytope associated with the proposed models in order to derive families of facet-defining inequalities. Branch-and-Cut implementations that take advantage of the particular structure of the problem under consideration have proved to be the most successfull. In this sense, the use of cutting planes arising from a polyhedral study of the feasible solution set allowed many instances of hard combinatorial optimization problems to be solved to proven optimality for the first time. We develop a Branch-and-Cut algorithm based on our theoretical polyhedral results. We also take into account many others factors like preprocessing, search and branching strategies, lower and upper bounds and streghthening of the LP-relaxation. We present computational results showing that our algorithm performance is successful when compared to known exact algorithms.

Miño, Mariela Haydée. "Caracterización de las comunidades de pequeños roedores en granjas avícolas del partido de Exaltación de la Cruz (provincia de Buenos Aires)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta Tesis se caracterizan las comunidades de pequeños roedores presentes en granjas avícolas del partido de Exaltación de la Cruz (Provincia de Buenos Aires) en cuanto a su riqueza, diversidad específica y abundancias relativas. También se analizan algunas variables reproductivas de las especies presentes con el objetivo final de reunir información que sirva para aplicar al control de roedores. Para eso se realizaron muestreos estacionales con trampas de captura múltiple continua durante dos años en 30 granjas. En cada granja se distinguieron 3 hábitats: galpones, perímetros e interfases (perímetros vecinos a los galpones). Las trampas se ubicaron cada 20m rodeando 3 galpones, alrededor del perímetro y a lo largo de las interfases de cada granja. Los animales capturados fueron determinados específicamente, medidos, sexados y caracterizados según su estado reproductivo. También se extrajeron los cristalinos para determinar las edades a partir de su peso seco y los úteros para registrar la presencia y número de embriones. Tanto en las granjas como en cada uno de los hábitats se capturaron 5 especies: Calomys lancha, Mus musculus, Akodon azarae, Oligoryzomysflavescens y Calomys musculinus (según el orden decreciente de sus abundancias en las granjas). La diversidad resultó significativamente mayor en los galpones que en los perímetros debido a que en los primeros hubo 2 especies dominantes (C. laucha y M. musculus), mientras que en los perímetros sólo dominó A. azarae. Todas las especies silvestres fueron más abundantes en las interfases que en los demás hábitats, pero sólo A. azarae resultó significativamente más abundante en las interfases y los perímetros que en los galpones. M. musculus, por su parte, fue más abundante en los galpones que en los perímetros. La abundancia de las especies silvestres fue significativamente mayor en las épocas frías que en las cálidas tanto en las granjas como en cada uno de los hábitats, en cambio, M. musculus no mostró diferencias significativas entre épocas en ningún caso. Esta especie, que se estaría reproduciendo en los galpones, presentó un período reproductivo prácticamente continuo alo largo del año. C. laucha, en cambio, también se estaría reproduciendo en los galpones, pero interrumpiría su reproducción durante el invierno, mientras que A. azarae se reproduciría en los perímetros y prolongaría su temporada reproductiva con respecto a la que muestra en el sistema campo-borde. En base a los resultados obtenidos se concluye que las granjas avícolas son colonizadas por roedores silvestres que ingresan del sistema campo-borde a través del perímetro y las interfases, mientras que M. musculus ingresaría además junto con el alimento balanceado directamente a los galpones. Su ingreso directo y los recursos y condiciones favorables de los galpones, facilitarían su establecimiento en ellos. Sin embargo, la aplicación de rodenticidas determinaría que desarrolle en este hábitat una estrategia ruderal. A. azarae, por su parte, se establecería en los perímetros por ser un hábitat menos disturbado, pero prolongaría su período reproductivo como consecuencia de alimentarse en los galpones durante el invierno. La reproducción prolongada en M. musculus y la aplicación de rodenticidas serían las causas de que esta especie no muestre variaciones significativas de abundancia entre épocas, mientras que las especies silvestres en conjunto muestran un hiato invernal en su período reproductivo que causaría la disminución de sus abundancias en las épocas cálidas. Finalmente, los resultados de esta Tesis permiten hacer algunas recomendaciones para el control de roedores en las granjas: mantener en el perímetro y todo el predio una cobertura vegetal baja, evitar la presencia de interfases y aplicar rodenticidas en los galpones en forma periódica.

Abstract:
The goal of this Thesis is to characterize the small rodent communities present in poultry farms in Exaltación de la Cruz, Buenos Aires Province, as to species richness, diversity and relative abundances. Some reproductive variables of the species present there, are also analized in this work with the final aim of collecting information useful to apply to rodent control. Seasonal samples using pitfall traps have been taken for two years on 30 farms. Three habitats were considered on each farm: poultry sheds, perimeters and interphases (perimetres close to the sheds). Traps were placed every 20m. surrounding 3 sheds, around the perimetres and along the interphases of every farm.The animals captured were specifically identified, measured, sexed and characterized according to their reproductive condition. Lenses and uterus were removed in order to estimate their age through dry weight, and to register the presence and number of embryons. Five species were captured on the farms and on each habitat: Calomys lancha, Mus musculus, Akodonazarae, Oligoryzomysflavescens and Calomys musculínus (according to their decreasing order of abundances on the farms). Diversity was significantly greater in the sheds than in the perimetres due to the fact that there were 2 dominating species C. laucha and M. musculus, while in the perimeters A. azarae was the only dominating one. All the wild species were more abundant in the interphases than in the other habitats, but only A. azarae was significantly more abundant in interphases and in perimeters than in sheds. On the other hand. M. musculus was more abundant in the sheds than in the perimeters. Abundance of the wild species was significantly greater in cold seasons than in warm seasons on the farms as well as on each habitat, whereas no significant differences between cold and warm seasons were shown as regards M. musculus. This species, which would be breeding in the sheds, showed a continous reproductive period throughout the year. On the other hand, C. laucha which would be also breeding in the sheds, would interrupt its reproductive period in winter, whereas A. azarae would breed in the perimeters and would carry on its reproductive period in reference to what it shows in the field-border system. According to these results the conclutions are that poultry farms are colonized by wild rodents that enter from the field-border system through the perimeter and the interphases, while M. musculus would also go in together with balanced food, directly into the sheds. Its direct entrance and the favourable resources and conditions of the sheds favour its settlement there.Nevertheless, the use of rodenticides would make this species develop a ruderal strategy in this habitat. A. azarae would settle in the perimeter as it is a less disturbed habitat, but it would carry its reproductive period longer as a consequence of being fed in the sheds in winter. The long reproductive period and the use of rodenticides would make M. musculus not show significant varations of abundance between cold and warm seasons,while the wild species in general show an interruption of the reproductive period which would cause the decrease of its abundance in warm seasons. Finally, the results of this Thesis allow some recommendations for rodent control on the farms: keep vegetal cover low in the perimeters as well as in all the site. avoid the presence of interphases and use rodenticides in the sheds periodically.

Mininni, Pablo Daniel. "El efecto dínamo y la generación de campos magnéticos en astrofísica" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la presente tesis estudiamos la teoría de dínamo en diferentes regímenes de interés astrofísico. La teoría de campo medio, utilizada para obtener el coeficiente de generación de energía magnética por efecto de la turbulencia, es generalizada para incluir efectos cinéticos. Para el caso particular del Sol, construimos un modelo basado en los perfiles medidos de rotación diferencial con el fin de explicar las características globales del campo magnético. Con el fin de individualizar las causas de las irregularidades observadas y de introducir correctamente estos efectos en el modelo, llevamos a cabo un estudio detallado de los datos existentes sobre el campo magnético solar. Presentamos estudios de correlación de amplitud y fase, así como reconstrucción del espacio de fases a partir de la serie temporal del número de manchas solares. También realizamos una descomposición en modos biortogonales de la distribución espacial y temporal del área cubierta por las manchas, y de los campos magnéticos observados en la superficie solar. Los resultados de todos estos estudios son utilizados como indicadores de la fuente de las irregularidades e introducidos finalmente en el modelo. Finalmente, presentamos simulaciones numéricas tridimensionales con el fin de verificar la validez de la mencionada generalización de la teoría. Según el caso, los resultados pueden ser aplicados en regiones convectivas estelares, en regiones pequeñas de discos de acreción y discos galácticos, o en estrellas compactas.

Abstract:
In this thesis we study the dynamo theory in different regimes of astrophysical interest. The mean field theory, used to obtain the magnetic energy generation coefficient by effect of the turbulent motion, is generalized to include kinetic effects. In the particular case of the Sun, we build a model based on measured profiles of differential rotation to explain the global features observed in its magnetic field. To identify the sources of the observed irregularities, and to introduce these effects in the model, we carry out a detailed study of the existing data of the solar magnetic cycle. We present studies of amplitude and phase correlation, as well as reconstruction of the phase space from the time series of the sunspot number. Also, we carry out a bi-orthogonal decomposition of the temporal and spatial distribution of the area covered by sunspots, and of the observed magnetic field in the solar surface. The results obtained are used to identify the source of irregularities and have been introduced in the model. Finally, we present direct simulations in three dimensions to validate the results obtained in the extension of the theory mentioned above. Depending on the case, the results can be used in stellar convective regions, in small regions of accretion disks, or in compact stars.

Milano, Julián. "Magnetotransporte en nanoestructuras de metales de transición" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El campo de investigación de los sistemas nanoscópicos magnéticos ha despertado interés creciente en las últimas dos décadas. No son ajenas a este fenómeno las aplicaciones tecnológicas de los mismos en distintas áreas. En esta tesis hemos estudiado las propiedades magnéticas y, esencialmente, de magnetotransporte de dos tipos de sistemas bien diferenciados: multicapas de Fe/Cu con Cr y aleaciones granulares de Co en Ag. Aún cuando ambos tipos de sistemas están compuestos por metales nobles y metales de transición magnéticos, en el primer caso los metales están depositados en capas continuas y presentan magnetorresistencia inversa, mientras que en el otro forman aleaciones granulares cuyas características de transporte dependen de la presencia y valor del campo magnético aplicado durante el crecimiento. Para ambos tipos de sistemas hemos obtenido teóricamente la conductividad dentro del marco de la ecuación semiclásica de Boltzmann logrando una modelización adecuada que da cuenta de los resultados experimentales. Hemos puesto de manifiesto la importancia de las bandas electrónicas para explicar las particularidades experimentales de cada uno de los sistemas, tales como la evolución en función del campo magnético de la GMR cn las multicapas de Fe/Cu con Cr y la coalescencia de los gránulos de Co, puesta de manifiesto a través de las propiedades de magnetotransporte, en el segundo sistema. Para las aleaciones granulares de Co en Ag hemos mostrado experimentalmente, haciendo mediciones de magnetización, de resonancia ferromagnética y de transporte eléctrico, que el comportamiento de aleaciones homogéneas es distinto al de las aleaciones granulares crecidas en multicapas.

Abstract:
Research on nanoscopic systems has arisen an increasing interest in the last two decades. The evolution of research in this area is certainly closer related to the potential technological applications. In this thesis we have undertaken the study of magnetic and, specially, of magnetotransport properties of two well differentiated types of systems: Fe/Cu multilayers with Cr and Co granular alloys embedded in Ag. Even if both types of systems are built up with noble metals and magnetic transition metals, in the first case the atoms form continuous layers and show inverse magnetoresistance, while the second kind of systems form granular alloys whose transport characteristics depend on the presence and value of an applied magnetic field at deposition. For both kinds of materials we have calculated the conductivities within the framework of the Boltzmann semiclassical approach, succeeding in formulating a proper system modelisation, which accounts for the observed experimental results. We have shown the importance of the electronic bands in order to be able to explain the particularities of each kind of system, such as the GMR evolution under a growing applied magnetic field for Cu/Fe with Cr and the percolation of Co clusters, which has its manifestation on the magnetotransport properties for the second kind of systems in the second case. We have also experimentally shown, performing magnetisation, ferromagnetic resonance and electric transport measurements, that the behavior of homogeneous granular alloys of Co in Ag can be clearly differentiated from the one of granular alloys grown in multilayers.

Maskin, Laura. "Estudio de la familia génica Asr de tomate (Lycopersicon esculentum)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se estudiaron los miembros de la familia génica Asr de tomate (Asr1, Asr2 y Asr3). Por métodos computacionales se compararon las secuencias aminoacídicas de las proteinas codificadas y se realizó una búsqueda de proteinas homólogas que reveló la existencia de moléculas proteicas conservadas que se acumulan en situaciones de variados tipos de estrés y/o en fruto. La comparación de todas estas proteínas "tipo ASR", provenientes de muy distintas especies, mostró que la homología se encuentra concentrada en dos dominios particulares. Además, todas comparten caracteristicas estructurales como la alta hidrofilicidad,alta carga, sitios conservados de miristoilación y dos regiones hidrofóbicas. Por otro lado, se evaluó la expresión de cada uno de los miembros conocidos de esta familia génica en tomate (L. esculentum), determinándose que poseen un nivel de expresión variable en condiciones basales en los órganos analizados y que se inducen diferencialmente en respuesta al estrés hídrico, al daño, al frio y durante la maduración del fruto. Se observó que la expresión basal de Asr1 y Asr2 en hoja se limita especificamente a células acompañantes del floema. En condiciones de falta de agua, la expresión en hoja y en raíz se visualiza también en las células parenquimáticas adyacentes. Se muestran evidencias de que ASR forma agregados in vitro (dímeros y trímeros). Finalmente, ensayos preliminares de expresión en sistemas heterólogos demuestran que ASR1 provoca un aumento de la viabilidad de levaduras sometidas a estrés salino.

Abstract:
This work reports the study of the members of the tomato Asr gene family (Asr1, Asr2 and Asr3). Using computational methods, the amino acidic sequences were compared. A search of homologous proteins reveled the presence of conserved molecules that accumulate in responses to various types of stress and/or in fruit. Comparison of all these ASR-like proteins from different plant species showed that homology is concentrated at two particular domains. Besides, all of them share structural features like high hydrophilicity, high charge, a conserved myristoylation signal and two hydrophobic zones. In addition, the expression of each known member of the Asr family in tomato (L. esculentum) were evaluated. The results showed variable basal expression level in all the analyzed organs and differential induction in response to water stress, wounding, cold and during fruit ripening. In leaves, Asr1 and Asr2 basal expression was restricted to the companion phloem cells. Under water deficit conditions, this expression was also visualized in leaf and root parenchyma adjacent cells. Evidences that ASR form aggregates in vitro (dimers and trimers) are shown. Finally, preliminar assays in heterologous expression systems showed that ASR1 causes an increment in viability of yeast subjeted to salt stressed.

Marzocca, Marina Patricia. "Caracterización de antígenos recombinantes de la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y su utilización como vacunas y reactivos de diagnóstico" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) pertenece al género Pestivirus de la familia Flaviviridae y es causante de importantes pérdidas económicas en la industria ganadera regional y mundial. Las manifestaciones clinicas de la infección son variadas y las pérdidas en la producción ganadera se deben principalmente a la disminución en la producción de leche, retraso en el crecimiento, aumento de infecciones secundarias y aumento de la mortalidad en animales jóvenes. El control epidemiológico de BVDV se realiza a través de programas de vacunación masiva y eliminación de animales persistentemente infectados, principales diseminadores del virus en los rebaños. Los bajos títulos virales obtenidos en cultivo de tejidos constituyen una dificultad importante en la elaboración industrial de vacunas inactivadas. La utilización de cepas atenuadas como vacunas anti BVDV es, por otra parte, un riesgo mayor ya que la aparición de revertantes en un animal pre-infectado con BVDV podría desencadenar la “enfermedad de las mucosas”, que es fatal y en vacas preñadas podría dar origen a una camada de terneros persistentemente infectados. El diagnóstico de las infecciones con BVDV, realizada a través de la detección de anticuerpos en suero bovino por seroneutralización y/o inmunoensayo enzimática (ELISA) también presenta dificultades debidas, entre otras, a la necesidad de contar con infraestructuras adecuadas para el cultivo de células y a los desafios técnicos que presenta la obtención de antígeno purificado. En este trabajo se expresó en sistemas recombinantes y se caracterizó bioquímica e inmunológicamente al principal inmunógeno de BVDV, la glicoproteína E2. La proteína fue expresada en células de mamífero y de insecto, en su forma entera (rE2) y delecionada en su extremo carboxilo terminal de anclaje a membrana (ΔrE2) y se ensayó su desempeño como vacuna y como antígeno para diagnóstico. La proteína recombinante E2 (rE2) presento características electroforéticas e inmunoquímicas idénticas a la E2 viral y resultó ser un potente inmunógeno en bovinos. La incorporación del gen de rE2 en el genoma de un Virus de la estomatitis vesicular (VSV) recombinante permitió, también , la creación de un virus atenuado de VSV (VSV-E2) capaz de inducir una excelente respuesta humoral anti BVDV en ratones y óptima producción de E2 recombinante en células de BHK en cultivo. En este trabajo también se demostró que la proteína ΔrE2 es expresada y liberada al sobrenadante del cultivo de células de Drosophila melanogaster lo que permitió contar con una preparación rápida y relativamente pura de antígeno. Este fue utilizado en un test de ELISA de captura (a través de un anticuerpo monoclonal anti rE2, también desarrollado en el curso de este trabajo de Tesis) que presenta alta sensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos anti BVDV en sueros bovinos.

Abstract:
The Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) belongs to the genus Pestivirus of the family Flaviviridae and is responsible for important economic losses in the cattle industry throughout the world. The clinical manifestations of the infection are varied and the looses in the cattle production are mainly due to the decreased production of milk, delay in the growth, increase of secondary infections and increase of the mortally in young animals. Control of BVDV is carried through programs of massive vaccination and elimination of persistently-infected animals that are the main source of contagious virus in the field. Deficient virus production in cell culture constitutes an important difficulty in the industrial elaboration of inactivated vaccines. The use of attenuated viruses as BVDV immunogens on the other hand, is risky since revertants could produce mucosal disease in preinfected animals. This is eventually fatal and, in the case of pregnant cows, could give origin to persistently infected calves. The diagnosis of BVDV infections is accomplish by detection of specific antibodies in bovine serum in seroneutralization and/or enzyme linked immuno (ELISA) assays. These techniques also present difficulties related, for instance, to the necessity of having appropiate infrastructures for cell culture and obtaining purified antigen in workable amounts, as well. In this work the main immunogenic protein of BVDV, the glycoprotein E2, was expressed in different recombinant systems and characterized, subsequently , biochemically and immunologically. The protein was expressed in mammalian and in insect cells either as a whole protein (rE2) or as a deleted form lacking its carboxi terminal membrane anchor (ΔrE2) and its potential as immunogen and as a diagnostic antigen was explored. The recombinant protein E2 (rE2) showed electrophoretic and immunochemical characteristics identical to those of its viral counterpart and also induced a potent anti BVDV serum response in bovines when administerd in an oil emulsion. Incorporation of the rE2 gene in a recombinant Vesicular stomatitis virus (VSV) genome allowed us, in addition, to generate an attenuated virus of VSV (VSV-E2) able to induce an excellent humoral anti-BVDV response in mice and to produce recombinant E2 in infected BHK cell cultures. The protein ΔrE2 is expressed and released to the extracellular medium of transformed Drosophila melanogaster cells expressing the recombinant protein, in what turned to be a quick and simple way to get relatively pure and soluble antigen. This allowed the design of an ELISA test using soluble rE2 as antigen and a specific anti E2 capture MAb (developed during this Thesis work using rE2 expressed by baculovirus) that presents high sensibility and specificity for the detection of anti BVDV antibodies in bovine sera.

Martin, Valentina. "Regulación de la respuesta inmune contra el toxoplasma gondii en la mucosa intestinal y análisis del valor inmunoprofiláctico de antígenos del parásito en el modelo murino" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Toxoplasma gondii, es un parásito protozoario que infecta al hospedador mediante la ingestión oral de quistes tisulares u ooquistes induciendo una respuesta inmune en el intestino y sistémica del tipo Thl, produciendo inmunidad contra una re-infección. La infección experimental oral de diferentes cepas de ratones resulta en dos modelos interesantes de regulación de la respuesta inmune. Los ratones C57BL/6 (H-2b) desarrollan una ileitis inflamatoria aguda (IBD), caracterizada por la sobreproducción de IFN-γ y la síntesis de óxido nítrico en el intestino delgado dentro de los primeros siete días que, dependiendo de la dosis parasitaria inicial, puede producir la muerte debido al proceso inflamatorio. En cambio los ratones C3H/HeJ y CBA/J (H-2k) muestran solo pequeños procesos inflamatorios, cursando una infección aguda normal con establecimiento de la infección crónica. En el presente estudio, se demuestra que los linfocitos intraepiteliales (IELs) primados con antígeno de T. gondii previenen la ileitis aguda en ratones susceptibles (C57BL/6), e in virro reducen la producción de quemoquinas inflamatorias por enterocitos infectados, evento que estaría mediado por el TGF-β que secretan. Los IELs serían un componente esencial en la homeostasis del intestino luego de la infección oral con este parásito. Como un primer acercamiento en el conocimiento de la respuesta que este parásito genera en ratones que cursan una infección aguda normal, se caracterizó la respuesta de la línea celular enterocítica MODE-K (H-2k)frente a la infección para estudiar su valor como modelo in vitro. Estas células mostraron activarse frente a la infección con taquizoitos del T. gondii, secretando un patrón de citoquinas y quemoquinas cuya cinética resulta cepa específica. Los IELs derivados de los ratones CBA/J mostraron reducir la expresión de quemoquinas en los enterocitos infectados, y este efecto fue observado tanto en IELs no primados como primados. Estos IELs de ratones naïve, a diferencia de los provenientes de ratones susceptibles, producirían citoquinas anti-inflamatorias en forma endógena lo cual podría ser un componente importante en la resistencia al desarrollo de la ileitis aguda frente a la infección. La segunda parte de esta tesis estuvo enfocada al estudio de la habilidad de antígenos específicos del parásito de estimular in vitro una respuesta a nivel sistémico y de mucosas luego de una infección oral de ratones susceptibles (C57BL/6) y resistentes (BALB/c

Abstract:
Toxoplasma gondii is a protozoan parasite that infects the host by oral ingestion of tissue cysts or oocysts, with the induction of a systemic and intestinal Thl immune response resulting in the production of immunity against re-infection. There are two interesting models of the immune response regulation in the experimental oral infection with cysts of different strains of mice. C57BL/6 mice (H-2^b) develop acute inflammatory ileitis (IBD) characterized by the overproduction of IFN-γ and nitric oxide synthesis in the gut after seven days of infection, and depending on the initial parasite-dose this inflammatory response can result lethal. In contrast, oral infection of C3H/HeJ and CBA/J (H-2^k) reveal only mild inflammation in the gut, resulting resistant to the acute phase of the infection with the establishment of the chronic infection. In the present study, we report that T. gondii antigen-primed intraepithelial lymphocytes (IELs) prevent the acute ileitis in C57BL/6 susceptible mice, and in vitro, reduce the production of inflammatory chemokines by infected enterocytes, event that would be mediated by TGF-β secretion. IELs could be an essential component in the gut homeostasis after oral infection with this parasite. As a first attempt to study the immune response induced by this parasite in mice resistant to the acute infection, we have characterized the response elicited by the infection of the enterocyte cell line MODE-K (H-2^k)to evaluate its value as an in vitro model. Infection with T. gondii tachyzoites induced the activation of these cells, with the secretion of a cytokine and chemokine pattem with a strain-specific kinetics. Both unprimed and antigen-primed IELs isolated from CBA/J mice reduce chemokine expression by infected enterocytes. These IELs from naïve resistant mice, in contrast to the IELs from naïve susceptible mice, would produce endogenous anti-inflammatory cytokines that could result in an important component in the resistance to acute ileitis after infection. The second part of this thesis, has been focused on the study of the ability of specific parasite antigens in stimulating in vitro a systemic and mucosal response in orally infected susceptible (C57BL/6) and resistant (BALB/c

Martinez Montaño, Romari Alejandra. "Biomarcadores de genotoxicidad en el estudio de la fragilidad genómica en el orden primates" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Existe cada vez más evidencia a favor de la hipótesis de que la inestabilidad genómica estaría directamente relacionada con la estructura de ciertos loci específicos involucrados en rearreglos cromosómicos recurrentes, conocidos como “puntos calientes". Con la finalidad de establecer si es posible detectar estos “puntos calientes” a nivel citogenético, la presente Tesis Doctoral emplea biomarcadores de genotoxicidad como manifestación de fragilidad cromosómica inducida por agentes químicos. Para ello, se trabajó con dos modelos: Cebus apella (CAP) y Homo sapiens (HSA), un sistema experimental como los linfocitos de sangre periférica (LSP) y un agente químico inductor como el metronidazol (MTZ). Cebus apella (CAP) es un Primate del Nuevo Mundo, ampliamente utilizado como modelo experimental en diferentes áreas de la biomedicina que, hasta el presente, poco había sido analizado en cuanto a su utilidad en estudios de genotoxicidad empleando agentes químicos. El Metronidazol (MTZ) es un derivado 5-nitroimidazólico considerado un agente genotóxico en sistemas in vivo e in vitro. En el presente trabajo de Tesis Doctoral, se utilizaron distintas concentraciones de MTZ en cultivos de linfocitos de sangre periférica (LSP) de Cebus apella y de humanos (HSA), con la finalidad de evaluar su potencial mutagénico sobre los genomas de ambas especies, por separado y a nivel intergenómico, realizando un análisis de las frecuencias de ICH y ACG a nivel de banda cromosómica, utilizando una técnica de Bandas G (Tinción Wright)-ICH secuencial puesta a punto en el marco de esta Tesis. Los resultados se analizaron en un nivel genómico general, para los cuatro biomarcadores empleados (Índice Mitótico —IM-, Índice de Replicacíón —IR-, Intercambio de Cromátides Hermanas —ICH- y Aberraciones Cromosómicas Incluyendo Gaps. —ACG-), empleando un diseño en bloques al azar (DBA) y un ANOVA de dos vías para CAP y para HSA. A nivel genómico sitio específico, se analizaron las frecuencias para dos biomarcadores (ICH y ACG) por cromosoma, brazo y banda cromosómica, utilizando una Chi cuadrado, considerando siempre como frecuencia esperada la correspondiente al control de diseño (sin el agregado de droga). A nivel intergenómico se utilizó la prueba U-Mann Whitney para el análisis de las frecuencias medias entre CAP y HSA. Se realizó una tabla de 41 puntos de homeología, según la literatura, que se completó con la información de las frecuencias de ICH y de ACG en dichos puntos para CAP y HSA realizando el análisis mediante el coeficiente de Spearman. El MTZ genera una disminución del IM y un aumento de los ICH por célula y las ACG por célula en cultivos de LSP de Cebus apella y de Homo sapiens, con respecto al control de diseño. Para ambas especies, el IR no se ve afectado por la presencia de MTZ en las concentraciones utilizadas en el presente estudio. Los promedios generales para los cuatro biomarcadores no mostraron diferencias estadísticamente significativas entre CAP y HSA. Este hallazgo es coherente con una conservación genómica de más del 80%. La ausencia de relación entre los ICH y las ACG por cromosoma y el tamaño o la morfología cromosómicos, junto a una concentración de ambos biomarcadores en un conjunto de bandas, indicaría la no aleatoriedad en la distribución de la fragilidad genómica, junto a una conservación de la información en los segmentos homeólogos entre ambos genomas. Encontramos bandas con elevadas frecuencias de ICH y/o ACG en todos los casos, es decir, puntos con una elevada “inestabilidad genómica basal”, y bandas con bajas o nulas frecuencias (de ICH y/o ACG) para el control de diseño, con diferencias estadísticamente significativas al agregar MTZ al cultivo. La mayoría de estas bandas contienen secuencias que han sido calificadas como indicadoras de inestabilidad genómica, o son consideradas Sitios Frágiles. Los hallazgos del presente trabajo representarían evidencias citogenéticas de la no aleatoriedad en la distribución de la fragilidad genómica en Primates, y de su conservación a nivel evolutivo.

Abstract:
There is increasing evidence supporting the hypothesis that chromosomal instability might be related to the structure of certain loci, involved in recurrent chromosomal rearangements. These sites are currently known as “hot spots”. With the goal of detecting these “hot spots” at a cytogenetic level, two models have been used: Cebus apella (CAP) and Homo sapiens (HSA), with an experimental system such as Peripheral Blood Lymphocytes (PBL) and a chemical inducer, such as metronidazole (MTZ), using genotoxicity biomarkers as an expression of chemically induced chromosomal fragility. Cebus apella (CAP) is a New World Primate, extensively used as an animal model in biomedicine. Up to now, its usefulness in genotoxic studies with chemical agents has been scarcely evaluated. Metronidazole (MTZ) is a 5-nitroimidazole derivative considered potentially genotoxic in several systems, both in vivo and in vitro. In this PhD Thesis, different concentrations of MTZ were added to PBL cultures of Cebus apella and HSA, with the aim of assessing, through genotoxicity markers, the effect of a potentially mutagenic agent in vitro on both genomes, separately and combined in an intergenomic analysis, performing an evaluation of the frequency of Sister Chromatid Exchanges (SCE) and Chromosomal Aberrations including Gaps (CAG) per band, using a sequential G(Wright stain)/SCE technique, developed for this Thesis. Results are analyzed at two levels: a) general, considering the four biomarkers measured (Mitotic Index, MI, Replication Index, RI, SCE and CAG), using a randomized block desing (RBD) and a Two-way ANOVA, and b) site-specific, for SCE and CAG frequencies, measured at each chromosome, chromosomal arm and band, with a Chi Square test, using always as the expected frequency the desing control (no MTZ added). At an intergenomic level, a U-Mann Whitney Test was used to compare all average values for the four biomarkers; a Table of 41 homeology regions was constructed following published references, and completed with the information for SCE and CAG for each point in CAP and HSA. Each homeolog pair was analyzed with a Spearman Coefficient. MTZ generates a decrease in MI and an increase , in SCE and CAG frequencies per cell in PBL cultures of Cebus apella and HSA (compared to the desing control). RI is not affected by the presence of MTZ in both species. General averages for the four biomarkers cannot be differentiated statistically between CAP and HSA. This is coherent with a genomic conservation of more than 80%. The lack of relationship between chromosomal length, size or morphology, along with a concentration of relatively high frequencies of SCE and CAG in a few chromosomal bands, can be considered indicators of a non random distribution of chromosomal fragility, along with the evolutionary conservation of homeolog segments between both genomes. We find bands with a high basal frequency of SCE and/or CAG in all cases, which represent regions of “basal genomic instability”, and bands with zero or low frequency of SCE and/or CAG in control cultures, showing a statistically significant increase of their frequencies in cultures exposed to MTZ. Most of these bands contain sequences that have been pointed as indicators of genomic instability, or are Fragile Sites. The current findings represent cytogenetic evidence of a non random distribution of chromosomal fragility in Primates, related to evolutionary conservation.

Mangone, Constanza Pía. "Biocatálisis en medio orgánico: Lipasas en la preparación de amidas y derivados de vitamina B6. Células enteras en la reducción de compuestos carbonílicos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Una serie de aciloxi derivados de piridoxina (l), uno de los tres miembros del grupo de la vitamina B6, fueron preparados mediante reacciones de esterificación y transesterificación catalizadas por lipasas en medio orgánico. En las condiciones de trabajo, las lipasas mostraron un comportamiento altamente regioselectivo catalizando la acilación de piridoxina únicamente en la posición 5 del anillo piridínico. La misma clase de selectividad fue observada en la alcohólisis de derivados acetilados de l al emplear la lipasa de Candida antarctica (CAL). La metodología enzimática permitió la síntesis de once nuevos derivados de l, diez de ellos preparados a partir de ácidos grasos. Teniendo en cuenta la actividad tensioactiva, su composición y lo poco contaminante que resulta el método enzimático para su preparación, estos compuestos podrían ser útiles como ingredientes en formulaciones cosméticas o farmacéuticas o bien como aditivos alimentarios. Continuando el trabajo con lipasas, se describe un procedimiento enzimático muy eficiente para la preparación de carboxamidas N-sustituidas a partir de sus correspondientes ácidos carboxílicos. El procedimiento consiste en un solo paso e involucra la formación in-situ del éster etílico y la subsecuente aminólisis del mismo. La metodología resultó aplicable a una gran variedad de ácidos carboxílicos: de estructura lineal, cíclicos, saturados e insaturados, dicarboxílicos, con otros grupos funcionales presentes (hidroxiácidos), etc. Además, la enzima mostró un comportamiento selectivo frente a aminas con más de un grupo fiincional presente. Finalmente, se presenta la reducción enantioselectiva de cetoésteres catalizadas por células enteras. Como biocatalizador se empleó al hongo Mucor rouxii, un microorganismo dimórfico que puede desarrollarse como micelio o como levadura dependiendo de las condiciones de aireación del medio de cultivo. La morfología micelio catalizó el proceso de manera eficiente únicamente en agua, mientras que las levaduras, resultaron activas tanto en agua como en solventes orgánicos. Las esporas, producidas por el hongo como mecanismo de defensa y de preservación, también resultaron catalizadores eficientes y estereoselectivos del proceso reductivo. Asimismo, las técnicas de secado del microorganismo (liofilización y secado por corriente de aire caliente) resultaron muy convenientes para la conservación de la biomasa de Mucor rouxii. Las células de levadura liofilizada, rehidratadas en un pequeño volumen de agua, mantuvieron la misma eficiencia y selectividad en las reducciones en medio orgánico que los cultivos frescos durante al menos 4 meses.

Abstract:
A series of acyloxy derivatives of pyridoxine (1), one of the three members of Vitamin B6 group, has been prepared by lipase-catalyzed esterification and transesterification reactions of l with carboxylic acids or ethyl carboxylates in organic media. Lipases showed a remarkable regioselective behavior: acylation of pyridoxine only occurred at C(5) of the pyridine ring. Moreover, acetylated derivatives of l were selectively deacetylated by enzymatic catalysis. This enzymatic approach allowed the preparation of novel fatty acids derivatives of l. The surfactant activity, composition and clean enzymatic methodology applied to the preparation of these products make them useful as ingredients in cosmetic and pharmnaceutical formulations or food additives. Continuing the work with lipases, an enzyme-catalde procedure is described for the onepot conversion of carboxylic acid into substituted amides via in-situ formation of the ethyl ester and subsequent aminolysis. This methodology proved to be general and can be applied to open chain, cyclic, hydroxy-, dicarboxylic-, various chain length , and unsaturated acids. Moreover, the enzyme showed a regioselective behavior in relation to primary and secondary amino groups. Finally, the efficient enantioselective reduction of a number of ketoesters by mycelial and yeast-like forms of the dimorphic fungus Mucor rouxii in a whole-cell process is presented. Mycelial cells, grown in aerobiosis, were efficient in water, whereas the yeast-like cells, grown in an anaerobic medium, were both efficient in water and in organic solvents. The fungal spores, which are the physiologically resistant form of the fungus, also catalyzed the reductive process efficiently and in a stereoselective way. The freeze-dried yeast-like cells, rehydrated in a small volume of water, maintained the same efficiency and selectivity of the reaction in organic solvents as the fresh biomass up to at least 4 months.

Mahler, Bettina. "Evolución del plumaje y el canto en las palomas americanas (Aves: Columbiformes)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo se estudió el patrón evolutivo de la coloración del plumaje y de la estructura del canto en las palomas americanas, el grado de correlación filogenética que presentan estos caracteres y las fuerzas selectivas que los han modificado. Los resultados obtenidos mostraron que en este grupo el grado de correlación filogenética difiere para los caracteres de plumaje y de canto, mostrando los primeros una mayor congruencia con la filogenia que los segundos. Esto sería consecuencia de los diferentes factores de selección actuando en cada caso. La coloración del plumaje se ve afectada por factores tanto de selección sexual como de selección natural. En primer lugar, se encontró que en al menos una especie, la torcacita Columbina picui, existen diferencias sexuales en la coloración del plumaje que no son percibidas por los humanos, ya que incluyen diferencias en el rango ultravioleta de la luz, un espectro que no es captado por los receptores del ojo humano. Además de que los machos presentaron un plumaje más brillante que las hembras, mostraron un mayor componente de luz ultravioleta en la coloración de varias regiones del plumaje que son exhibidas en contextos reproductivos. El hecho de que el plumaje pueda estar siendo modificado por un proceso de selección sexual fue confirmado por un análisis comparativo, que mostró que especies más dicromáticas presentan un brillo mayor en el plumaje que posee coloración melánica y estructural, indicando que un mecanismo de selección sexual esta originando un aumento en el brillo del plumaje. También se encontraron evidencias que sugieren que el color de las plumas está siendo seleccionado para maximizar el contraste con el ambiente, lo cual lo haría más eficaz como señal de comunicación. Las especies que habitan ambientes más cerrados mostraron tener plumajes con un importante componente de reflexión en longitudes de onda más largas, que presentan el mayor contraste con la vegetación circundante, mientras que especies que habitan en ambientes abiertos mostraron tener plumajes negros o blancos, que son los más conspicuos en estos ambientes. Asimismo, se estudió si las modificaciones presentes en las plumas primarias están ligadas a la emisión de sonidos mecánicos, como zumbidos o silbidos, que se han descripto para algunas especies de palomas. Se encontró que la emisión de sonidos mecánicos es independiente de la presencia de la modificación en las plumas primarias y que esta modificación probablemente se haya originado por algún otro proceso de selección. Por otro lado, se encontró que los cantos son diferencialmente variables en sus parámetros, siendo los parámetros de frecuencia menos variables que los parámetros temporales y estructurales. Esto probablemente sea una consecuencia del grado de dependencia con la morfología, ya que las frecuencias acústicas que pueden ser emitidas dependen fuertemente de la estructura del órgano fonador, mientras que los parámetros temporales y estructurales tienen una plasticidad mayor, dado que su variación depende de factores fisiológicos y comportamentales. También se encontró que los parámetros vocales que varían entre las especies son diferentes para los distintos grupos de palomas americanas y que no todos muestran las mismas respuestas a los factores de selección natural y selección sexual. Para uno de los grupos estudiados se encontraron evidencias que sugieren un efecto del ambiente sobre la duración de los cantos y de algún mecanismo de selección sexual sobre la complejidad de los mismos.

Abstract:
The aim of this study was to analyze the evolutionary patterns of plumage coloration and song structure in American pigeons and doves, the phylogenetic correlation of these characters and the selective forces that have modified them along evolution. The results showed that phylogenetic correlation differs for plumage and song characters in this group, being the former more congruent with phylogeny than the letter. This could be a consequence of the different selective pressures acting in each case. Plumage coloration showed to be influenced by sexual selection, as well as by natural selection. In the Picui Dove Columbina picui, differences in plumage coloration including the ultraviolet range of the light spectrum were present between the sexes. This part of the spectrum cannot be perceived by the human eye, but seems to be important in this species, as males showed a greater component of these wavelengths than females in the plumage regions exhibited during courtship displays. Males were also overall brighter than females. The indication that a sexual selection process may influence plumage color was confirmed in a comparative study that showed that more sexually dichromatic species had brighter melanic and structural plumage, suggesting that sexual selection is leading to increased plumage brightness. Evidences of natural selection acting on plumage color were also found. Colors that maximize contrast with the surrounding background are selected in this group. This increases the efficiency of plumage color as a communication signal, as it is easier to be detected by the receiver. Species inhabiting closed habitats showed plumage colors with a strong component in the long wavelengths, which are the most contrsting with dense vegetation. Species inhabiting open habitats, on the contrary, showed black and white plumage colors, which are the most conspicuous in these habitats. On the other hand, the association of feather modifications with mechanical sounds was analyzed. No association was found between both characters, suggesting that a different factor is selecting for feather modifications. Song structure was differentially variable depending on the vocal parameters studied, being the frecuency parameters less variable than temporal or structural ones. This is probably a consequence of the dependence of acoustic frequencies on syringeal morphology, in contrast to temporal or structural characters of the song that are more plastic and change with physiology or behaviour. Song characters showed to vary in a different way in the three groups of American doves and showed to respond differently to natural and sexual selection pressures. A relation of habitat with song duration and of sexual selection with song complexity was found in one of the groups.

Locatelli, Fernando F.. "Participación de la proteína quinasa dependiente de AMP cíclico (PKA) en la formación de la memoria de largo término en Chasmagnathus" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las hipótesis para el estudio de las bases neurobiológicas del aprendizaje y la memoria consideran que la información es almacenada por el sistema nervioso como cambios en las conexiones entre neuronas. Estos cambios son el resultado de un proceso de transformación inducido por la experiencia y dirigido en cada neurona por la activación de las vías de transducción, que por medio de la accion de quinasas, regulan cambios de corto término y la expresión de genes responsables de los cambios perdurables que subyacen la memoria de largo término. En la presente tesis se estudió la participación de la proteína quinasa dependiente de AMP-cíclico (PKA) en la formación de una memoria de largo término y aspectos de su activación fueron estudiados en estrecha relación con la experiencia y el tipo de memoria inducido. Con este objetivo se utilizó el paradigma de memoria contexto-señal del cangrejo Chasmagnathus granulatus, en el cual el animal aprende a reconocer la inocuidad de un estímulo inicialmente peligroso. Ante la falta de conocimiento previo sobre esta vía de transducción en crustáceos, se estudió la distribución de la actividad basal y total de PKA en sistema nervioso de cangrejo y se identificó y caracterizó a las isoformas I y II de la misma. Mediante la administración de un inhibidor de PKA, a distintos tiempo respecto del entrenamiento, se determinó la existencia de dos períodos en los cuales la actividad de PKA es fundamental para la consolidación. El primero durante el entrenamiento y el segundo en una ventana temporal entre 4 y 8 horas después del mismo. La medición de la actividad de PKA durante la consolidación permitió comprobar que la activación de PKA es parte de los mecanismos de la consolidación directamente inducidos por la experiencia. Se determinó que durante el segundo período de dependencia de PKA para la consolidación existe un aumento de la isoforma de PKA más sensibles al AMPc, PKA I, que estaría involucrado en el aumento de actividad de PKA necesario durante esa etapa de la consolidación. Finalmente, se estudió que aspectos temporales y mecanísticos de la activación de PKA son función específica de la activación inducida por distintas experiencias. La participación diferencial de isoformas de PKA es sugerida.

Abstract:
Current hypothesis for the study of neurobiological basis of learning and memory consider that information provided by experience is encoded as changes in the connections between neurons. These changes are consequence of a transformation process initiated by the experience and directed by coordinate action- of signal transduction pathways. Through phosphorylation, kinases regulate short-term synaptic changes and the expression of genes involved in the plastic changes that underlie the long-term memory. Works at this thesis were aimed at studying the role of cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA) on long-term memory formation and specific aspects of its activation were studied in relation with the kind of experience and the memory induced. The experimental model used was the context-signal learning paradigm of Chasmagnathus granulatus crab. The lack of previous information about the CAMP pathway in crustaceans prompted us first to characterize PKA from crab neural tissues. Basal and total PKA activity distribution was studied in the crab neural system and we also identified and characterized PKA isoforms I and 11. Using in vivo administration of a PKA inhibitor at different times from training, two periods of PKA dependence were determined for memory consolidation. The first of them during training session and a second one in a time window from 4 to 8 hours after training. PKA activity was measured in neural ganglia after training revealing that PKA activation is part of mechanisms directly induced by experience and involved in consolidation. Coincidently with the second PKA dependence period, an increase in the more sensible isoform, PKA I, was found. This increase could be responsible for the PKA activity necessary during this period. Finally, temporal and mechanistic aspects of PKA activation were found to be specific functions of the activation induced by different experiences that induce different memories. Differential PKA isoform participation is also suggested.

Lev, Paola Roxana. "Estudios moleculares de citoquinas relacionadas con fibrosis medular en la trombocitemia esencial" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La trombocitemia esencial (TE) y la mielofibrosis con metaplasia mieloide son enfermedades mieloproliferativas crónicas que se caracterizan por aumento de megacariocitos en médula ósea. Los pacientes con TE presentan además, aumento del recuento plaquetario en sangre periférica. Se estudió un grupo de pacientes con TE sin tratamiento y durante la normalización del recuento plaquetario por el tratamiento con anagrelide. En ellos se evaluó el nivel proteico en el plasma y en las plaquetas y el nivel de ARN mensajero intraplaquetario de tres citoquinas relacionadas con el desarrollo de fibrosis medular, el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), el factor de crecimiento transformante β (TGFβ) y el factor de crecimiento fibroblástico básico (bFGF). Se observó un incremento significativo en el nivel plasmático del PDGF que se normalizó con la reducción del recuento plaquetario por el tratamiento. Los pacientes que tenían fibrosis reticulínica leve en la biopsia de médula ósea mostraron mayores niveles de PDGF plasmático con respecto a los pacientes que no tenían fibrosis. Esta citoquina se encontró disminuida en las plaquetas y nuevamente los valores se normalizaron con el tratamiento. A diferencia de los niveles plasmáticos, los intraplaquetarios no se relacionaron con la presencia o ausencia de fibrosis en la médula ósea. El ARN mensajero se encontró disminuido antes y durante el tratamiento. La normalización del nivel plasmático de PDGF durante el tratamiento puede indicar que su incremento en el plasma se debe a liberación plaquetaria. La disminución del contenido intraplaquetario también podría atribuirse a una disminución de su síntesis en el megacariocito dado que se encontró disminuido el ARN mensajero. Los niveles plasmáticos del TGFβ se encontraron aumentados y los intraplaquetarios normales antes y durante el tratamiento y no se encontró relación con la presencia o ausencia de fibrosis reticulínica leve. El ARN mensajero intraplaquetario se encontró aumentado y se normalizó durante el tratamiento. Dado que el nivel plasmático de esta citoquina permaneció elevado aún con recuento plaquetario normal, se buscó la participación de otra fuente celular en este incremento. Se vió por inmunofluorescencia, la presencia de la citoquina en linfocitos y megacariocitos, la intensidad de marcación fue similar a la de los controles normales. Por lo tanto, los megacariocitos y no los linfocitos podrían ser una posible fuente celular causante del incremento plasmático, dado que su número se encuentra elevado en los pacientes con esta enfermedad. Los niveles plasmáticos e intraplaquetarios del bFGF se encontraron aumentados en los pacientes sin tratamiento y si bien disminuyeron significativamente con la normalización del recuento plaquetario, permanecieron aumentados con respecto al control. No se encontró relación con la presencia o ausencia de fibrosis reticulínica leve en la médula ósea. El ARN mensajero de la citoquina se encontró normal. Dado que el nivel plasmático se reduce cuando se normaliza el recuento plaquetario la liberación de esta citoquina podría ser atribuida en parte a las plaquetas. Pero por otro lado, se buscó la participación de otra fuente celular. Se vió por inmunofluorescencia, la presencia de la citoquina en linfocitos y megacariocitos con intensidad de marcación similar a la de los controles normales. Por lo tanto, también en este caso, los megacariocitos y no los linfocitos podrían ser una posible fuente celular causante del incremento plasmático. El aumento de estas citoquinas en el plasma de los pacientes con TE puede sugerir que éstas juegan un rol en la patogenia de la enfermedad. Los niveles del TGFβ intraplaquetarios normales con el aumento de su ARN mensajero y el aumento intraplaquetario del bFGF con el nivel de su ARN mensajero normal puede indicar una desregulación en su síntesis. Por otro lado se estudió el efecto del TGFβ sobre plaquetas normales. Se encontró la presencia de un número bajo de receptores en la membrana plaquetaria y se estudió el efecto de la citoquina sobre la agregación plaquetaria. El efecto del TGFβ sobre la función plaquetaria fue variable dependiendo tanto del tiempo de incubación como de la concentración de ADP utilizada como agonista. Se observó que el TGFβ potencia la agregación plaquetaria tanto en incubaciones de las plaquetas con la citoquina por períodos cortos como por períodos largos utilizando ADP en bajas concentraciones y tiene el mismo efecto cuando se incuban las plaquetas por periodos largos pero se utilizan concentraciones altas de ADP para inducir la agregación. En cambio, produce un efecto inhibitorio cuando las plaquetas se incuban con la citoquina por períodos cortos y se las estimula con concentraciones de ADP altas. En todos los casos el efecto fue leve y se corresponde con el bajo número de receptores encontrado por plaqueta. Las incubaciones de plaquetas con TGFβ in vitro durante tiempos largos podrían semejar situaciones patológicas en donde hay niveles altos de la citoquina durante tiempos prolongados. De esta manera, las plaquetas circulantes están continuamente expuestas a esta citoquina y ante un estímulo plaquetario las mismas responderían en forma incrementada Este sería el caso de la TE. La respuesta inhibitoria observada en tiempos cortos podría indicar un posible mecanismo de regulación negativa de la activación plaquetaria ante un estímulo intenso, en el sitio de injuria. Al estudiar el mecanismo por el cual la citoquina modula la función plaquetaria, se vió que cuando la activación plaquetaria está inhibida, la presencia de la citoquina no induce en forma directa la fosforilación de proteínas en residuos tirosinas. Al evaluar la fosforilación de proteínas durante la agregación plaquetaria inducida por ADP, en presencia de la citoquina, se vió una disminución en la intensidad de dos bandas correspondientes a 100 y 105 kd que estan relacionadas con la agregación. Este efecto se observó sólo al incubar las plaquetas durante 5 minutos en precencia de la citoquina y concuerda con el efecto inhibitorio causado por el TGFβ en la agregación plaquetaria.

Lamb, Caroline A.. "Mecanismos involucrados en la adquisición de la hormono-independncia : interacción entre receptores de progesterona y otras vías de señalización" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo de Tesis se evaluaron las siguientes hipótesis: 1. El receptor de progesterona (RP) está involucradoen el crecimiento tumoral progestágeno-independiente (PI). 2. Vias preliferativas activadas por factores de crecimiento activan al RP. 3. Factores del estrema tumoral participan en la transición hacia la hormono-independencia activando RP. 4. Los receptores de estrógenos alfa (REα) tienen un rol en el crecimiento tumoral pregestágeno-dependiente (PD). Los ensayos se realizaron en un modelo experimental de inducción de cáncer de mama por administración prolongada de acetato de medroxiprogesterona (MPA) en ratones hembras vírgenes de la cepa BALB/c. Los tumores utilizados fueron todos carcinomas ductales metastáticos con alto contenido de RE y RP, que se comportan como hormono-dependientes en los primeros pasajes subcutáneos singeneicos, creciendo sólo en presencia de progestágenos. En pasajes sucesivos pueden adquirir un fenotipo progestágeno-independiente, independizándose del requerimiento de hormonas, pero aún así mantienen la expresión de RE y RP. Un estudio de comportamiento de una serie de tumores PI, nos condujo a subclasificarlos en respondedores (PI-R) o no respondedores (PI-NR) (Helguero y col. Breast Cancer Res and Treat 79: 379-390, 2003) de acuerdo a la sensibilidad in vivo para regresionar con el tratamiento a antiprogestágenos. Para evaluar si existen factores de crecimiento capaces de reemplazar a los progestágenos en la estimulación de la proliferación celular en cultivos primarios de un tumor PD, el CC4-HD, usamos al bFGF y bloqueamos el RP mediante el uso de antiprogestágenos (RU 486 y ZK 299) y mediante el uso de oligonucleótidos antisentido. En todos los casos el bloqueo del RP inhibió la proliferación celular inducida por MPA, factores séricos o bFGF, de manera específica. Resultados similares se obtuvieron utilizando cultivos primarios de 3 tumores PI diferentes: 59-2-HI, C7-2-HI y CC4-HI. Estudios de Mobility Gel Shift confirmaron que tanto el MPA como el bFGF pueden inducir la activación del RP en células en cultivo y que los mismos se encuentran constitutivamente activados en cultivos primarios de tumores PI. Por otra parte se demostró que in vivo la terapia con oligonucleótidos antisentido de RP fue capaz de inducir una inhibición del crecimiento tumoral. Los tumores de animales tratados mostraron una significativa reducción de células en fase proliferativa y en la expresión de RP. Se observó incremento de apoptosis sólo en un tumor en el cual el tratamiento indujo reducción de tamaño. Para evaluar la expresión del bFGF y los receptores (RFGF 1 al 4) en los tumores PD y PI procedimos a evaluar primero su expresión en distintos estadios del desarrollo de glándulas mamarias normales por inmunohistoquímica. Si bien la expresión de bFGF en la mama normal de ratón ya estaba reportada, nuestros estudios revelaron una regulación de la expresión en el desarrollo. Los 4 receptores también se expresan en las mamas normales y su expresión también está regulada en los distintos estadíos del desarrollo. Por inmunohistoquímica o inmunofluorescencia no se detectaron diferencias evaluables de expresión de bFGF o de sus receptores entre tumores PD y PI-R; si bien se pudo determinar la marcación de bFGF predominantemente estromal y la de los receptores en el parénquima tumoral. Los RFGF 2 y 3 están ampliamente expresados con localización nuclear además de la convencional. Debido a que con la técnica inmunohistoquímica no se puede discriminar entre las distintas isoformas de bFGF, se hicieron estudios de Western blots para identificar la isofonna clásica de 16kDa. Se detectó una mayor expresión de esta isoforma cuando los tumores PD crecían en ausencia de progestágenos. Para poder evaluar mejor la contribución de las células epiteliales o los fibroblastos en la expresión de bFGF, separamos ambas poblaciones y se hicieron cultivos primarios. Observamos mayor expresión de bFGF en los fibroblastos estromales de tumores PI que en los de tumores PD. En su conjunto estos datos indicarían que el bFGF estromal podría contribuir a inducir la proliferación celular en tumores PI a través de la activación de RP. En co-cultivos de células epiteliales obtenidas de un tumor PD con fibroblastos estromales obtenidos de un tumor PD o de uno PI se demostró que ambos fibroblastos ejercían un efecto sinérgico de la proliferación celular y que este efecto era mayor con los fibroblastos PI. A la inversa, células epiteliales PI cultivadas con fibroblastos PD crecieron más lentamente que al cultivarlas con fibroblastos PI. En el primer capitlo concluímos que los tumores con fenotipo PD y los PI-R necesitan de un RP funcional para proliferar y que el estroma cumple una participación activa en el crecimiento tumoral. En el crecimiento PI-R, el bFGF junto con otros factores provenientes del estroma podría estar activando los RP presentes en el parénquima, contribuyendo al fenotipo PI. El estroma PI liberaría una mayor cantidad de factores en respuesta a señales del parénquima. En el segundo capítulo estudiamos la participación del RE en el crecimiento tumoral PD y para ello bloqueamos el REα con un antiestrógeno puro, el ICI 182.780 y oligonucleótidos antisentido de REα. Como resultado, en ambos casos obtuvimos una inhibición de la proliferación celular acompañada por una disminución de expresión de RP, sugiriendo que el REα participa en el crecimiento PD y que la alta expresión de RP pueda deberse a la presencia de RE activados. En el tercer y último capítulo estudiamos el efecto de dos SERMs, y del antiestrógeno puro ICI 182.780, utilizados en la clínica sobre el crecimiento de un tumor PD y sobre la síntesis de RP. El ICI 182.780, el tamoxifeno y el raloxifeno mostraron efectos inhibitorios per se en el crecimiento in vitro al igual que el 17-β—estradiol (E2) pero en mayores concentraciones. El raloxifeno indujo una estimulación de la proliferación en presencia de progestágenos. EI ICI 182.780 y el raloxifeno revirtieron el efecto inhibitorio del E2 mientras que el tamoxifeno fue inhibitorio. El ICI 182.780 disminuyó la síntesis de RP mientras que el tamoxifeno y el E2 los aumentaron y el raloxifeno no tuvo efectos significativos. Concluimos que el tamoxifeno tiene un efecto similar al observado en la clínica en nuestro modelo experimental inhibiendo el crecimiento tumoral y aumentando la expresión de RP. Estos resultados nos llevan a hipotetizar que el tamoxifeno pueda ejercer efectos inhibitorios por su efecto estrogénico leve más que por su acción antiestrogénica. En conjunto estos resultados: a) jerarquizan el rol del receptor de progesterona en el crecimiento de carcinomas mamarios, b) brindan al estroma un posible rol protagónico en la adquisición de la hormono-independencia y c) la similitud entre los efectos del tamoxifeno obtenidos en la clínica y en estos tumores son interesantes para validar aún más los dos ítems anteriores en cuanto a su relevancia clínica.

Abstract:
In this Thesis work we have tested the following hypothesis: 1. Progesterone receptors (PR) are involved in progestin-independent (PI) tumor growth. 2. Proliferative pathways activated by growth factors activate PR. 3. Tumor stromal factors activate PR and participate in the transition to hormone-independency. 4. Estrogen receptors alpha (ERα) are involved in progestin-dependent (PD) tumor growth. All experiments were carried out in an experimental model in which the continuous administration of medroxyprogesterone acetate (MPA) to virgin BALB/c female mice induces mammary carcinomas. The tumors are metastatic ductal carcinomas expressing high levels of PR and ER showing a hormone-dependent growth pattern in syngeneic passages, since they only grow in the presence of MPA. In successive passages the tumors may acquire a progestin-independent phenotype and they can grow in the absence of MPA, even though they retain ER and PR levels. In a recent work of our laboratory (Helguera et al Breast Cancer Research and Treatment 79: 379-390, 2003) we classified PI tumors in responsive (PI-R) and unresponsive (PI-UR) based on their capacity to regress with antiprogestin treatment. In order to evaluate the ability of growth factors to mimic the stimulatory effect of progestins on cell proliferation, primary cultures of the PD tumor line (CC4-HD), were used. Cells were incubated with either MPA or bFGF and PR expression was blocked using antiprogestins or antisense oligonucleotides. Both treatments were able to reduce significantly ³H-thymidine uptake and cell number suggesting that PR are mediating bFGF induced cell proliferation. Using primary cultures from three different PI tumors: 59-2-HI, C7-2-HI and CC4-HI we were also able to demonstrate that antiprogestins and antisense oligonucleotides were able to inhibit cell growth. Specificity of antisense treatment was assessed using unrelated cells and using scrambled oligonucleotides. The elfectiveness was assessed by Western blots and by binding techniques. Mobility Gel Shift studies confirmed that both MPA and bFGF can induce PR activation in PD cells and that PR are constitutively activated in primary cultures of PI tumors. On the other hand, these in vitro studies were supported by in vivo assays in which we demonstrated that antisense therapy using phosphorothioated oligonucleotides inhibited tumor growth. Tumors from antisense-treated animals showed a significant reduction of proliferating cells and PR expression, while no differences were found when comparing tumors from scrambled- treated or control mice. We next wanted to explore the expression of bFGF and its receptors (FGFR 1 to 4) in PD and PI tumors and in different developmental stages of normal mammary glands. The presence and distribution of bFGF in normal murine mammary gland has already been described, but no studies regarding its expression in different developmental stages have been acknowledged. The four receptors were present in normal mammary glands and their expression, as bFGF, were also regulated in the different developmental stages. Immunofluorescence and immunohistochemical studies did not reveal any significant differences in bFGF and FGFR expression between PD and PI tumors; although we could determine a basically stromal and parenchymal staining for bFGF and FGFR respectively. FGFR-2 and FGFR-3 were expressed in the nuclei of parenchymal cells in addition to the reported conventional localization. Immunohistochemical studies could not distinguish between the different bFGF isoforms so Western blot assays were used to determine the expression of the classical bFGF isoform of 16 kDa. This isoform was highly expressed in tumors from untreated as compared to MPA-treated mice. As bFGF was more expressed in stroma than in the parenchyma of both PD and PI tumors and to further evaluate the contribution of epithelial or fibroblastic cells to bFGF expression, we separated both populations obtaining tumor epithelial or fibroblastic enriched primary cultures. An impressive increase in bFGF expression was observed in stromal fibroblasts from PI tumors as compared to those of PD tumors. On the other hand, epithelial PD cells co-cultivated with fibroblastic PD cells or with Pl fibroblasts showed that both fibroblastic populations had a synergic effect on cell proliferation but this effect was greater when epithelial PD cells were co cultured together with PI fibroblasts. These data altogether indicate that stromal bFGF could contribute to activate cell proliferation in PI tumors through PR activation. In the first chapter we concluded that PD and PI-R tumors need a functional PR in order to proliferate and that the stroma has an active role in tumor growth. In Pl-R tumor growth, bFGF and other factors coming from the stroma could be activating PRs present in tumor parenchyma, contributing to the PI phenotype. In the second chapter we studied the role of ER in PD tumor growth. We blocked ERα with a pure antiestrogen (ICI 182.780) and antisense oligonucleotides to ERα. As a result, in both cases cell proliferation was inhibited and this was associated to a decrease in PR expression, suggesting that ERα participates in PD tumor growth and that the high levels of PR expression may be due to constitutive ER activation. In the last chapter, we studied the effects of two SERMs and a pure antiestrogen (ICI 182.780) commonly used in clinical studies, on PD tumor growth and on PR synthesis. ICI 182.780, tamoxifen and raloxifene disclosed inhibitory effects per se in in vitro cell proliferation as 17-β-estradiol (E2) although at higher concentrations. Raloxifene stimulated cell proliferation in the presence of MPA. ICl 182.780 and raloxifene reversed E2 inhibitory effect whereas tamoxifen was inhibitory. ICI 182.780 reduced PR expression while tamoxifen and E2 increased them and raloxifene had no significant effect. We conclude that tamoxifen has a similar effect to that observed in the clinic in our experimental model inhibiting tumor growth and increasing PR expression. These results led us to hypothesize that tamoxifen can exert its inhibitory effects as a result of small estrogenic effects and not because of its antiestrogenic action. Altogether our results: a) underline the role of PRs in the growth of mammary carcinomas, b) highlight the role of stromal factors in the acquisition of hormone-independence and c) the similarity between the effects of tamoxifen obtained in the clinic and in our tumors validate even further our experimental model of breast cancer highlighting the clinical relevance of the two items described above.

Lagorio, Silvia Leonor. "El volcanismo cretácico alcalino de la Sierra Chica de Córdoba: geoquímica, petrogénesis e implicancias geodinámicas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se realizó la caracterización petrológica, geoquimica y petrogenética del volcanismo básico alcalino del Cretácico Inferior de la sierra Chica de Córdoba. Éste forma parte de un complejo volcánico-sedimentario que constituye el relleno de sinrift depositado en hemigrábenes restringidos dentro de una cuenca transtensional, cuya formación está relacionada con el desmembramiento de Gondwana. En las diferentes áreas se reconocieron distintos grupos sobre la base del quimismo de los elementos mayores: ankaratritas, basanitas, suite basalto alcalino —traquifonolita/traquita y suite basalto transicional - latibasalto. El carácter general del volcanismo es potásico a potásico transicional; el grado de alcalinidad es moderado, sin verificarse litotiposperalcalinos. Las características geoquímicas junto a los datos paleomagnéticos de estudios previos para el norte de la sierra de los Cóndores, indican que los niveles lávicos se distribuyeron diacrónicamente a lo largo de toda la sucesión, con variaciones laterales entre las localidades, no resultando posible convalidar los dos ciclos volcánicos propuestos por autores precedentes. El rift tipifica como de baja volcanicidad, con actividad de tipo estromboliana. En las áreas en donde la sedimentación fue más importante se registran niveles brechosos de tipo peperítico. Episodios freatomagmáticos han tenido lugar en forma muy subordinada. Fenómenos de remoción en masa, de tipo debn's flow, han sido en cambio frecuentes. Los contenidos de Al2O3 y las composiciones normativas que presentan los magmas de tipo primario indican que la fusión del manto tuvo lugar a 35-70 km (13-18 kb). Las anomalías negativas para el K Rb obtenidas sugieren posible flogopita o anfíbol como fases residuales en la fuente mantélica portadora de granate. Los magmas de tipo primario de los diferentes grupos se caracterizan además por poseer diversas relaciones Th/La. La/Ta, La/Nb y contenidos de Zr, Hf y LREE. Los porcentajes de fusión (5 - 7%) a partir de un manto fuertemente enriquecido (con flogopita residual), son consistentes con la ubicación periférica respecto a la gran anomalía térmica (sobre la base del Geoide residual) que desencadenó los voluminosos derrames tholeíticos de Paraná. Los afloramientos ubicados al este (faja oriental), con mayor frecuencia de productos transicionales, podrían representar porcentajes ligeramente superiores a los de la faja occidental; no obstante, el comportamiento de algunos elementos traza revela anomalías consistentes con heterogeneidades en la fuente mantélica. Además, un distinto contenido en volátiles (H2O,C02) pudo haber condicionado la formación de magmas con distinto grado de saturación, particularmente en áreas de coexistencia de dichos productos.

Abstract:
A petrological and geochemical study of the Lower Cretaceous basic volcanism of the Sierra Chica of Córdoba has been done. It belongs to a volcanic-sedimentary complex, which defines a synrift fill in small half-grabens within a transtensional basin, due to tectonics which led to Gondwana break-up. In the different areas four groups of volcanic rocks were recognized from the major elements: ankaratrites, basanites, alkaline basalt - trachyphonolite/trachyte suite and transitional basalt - latibasalt suite. The general character of this volcanism is potassic transitional to potassic. Alkalinityis moderate, according to the absence of peralkaline types. Geochemical characteristics, with previous paleomagnetic data. indicate that lavas are distributed diachronically throughout the whole succession of the north of Sierra de los Cóndores, with lateral variations between the localities. So that the distinction of two volcanic cycles as was previously proposed by other authors, is not supported in this work. The Lower Cretaceous basin of Sierra Chica is a low volcanicity rift type, with strombolian activity. Several peperite type breccias were formed where the sedimentation was more important. Freatomagmatic events were very scarce. Instead, viscous mass flows, as debris flows, were frequent in the area. Al2O3 contents and normative compositions of the primary type magmas point out that melting took place under 35-70 km (13-18 kb). Negative anomalies in K and Rb suggest phlogopite or amphibole as a residual phase in the garnet bearing mantle source. Primary type magmas of the different groups also have diverse Th/La, La/Ta and La/Nb ratios and Zr, Hf and LREE contents. Melting degrees (5 - 7%) from an enriched mantle source (with residual phlogopite) are in accordance with the peripherical position related to the great thermal anomaly (from the residual Geoid) which triggered the voluminous flood tholeiites of Parana. Eastern outcropts of Sierra Chica, of more frequently transitional character, could represent slightly higher melting degrees than the western ones; nevertheless, certain anomalies in trace element compositions point out heterogeneities in the mantle source. Also, a diverse volatile content (H2O,C02) could have favoured magmas with distinct silica saturation, particularly where coexistence of those products has taken place. Trace element diagrams suggest that the more evolved rocks (volumetrically subordinated) were not genetically linked to the primitive magmas by fractional crystallization, so that they must have evolved from diverse parental ones. Likewise, textures involving resorption and reaction with the liquid showed by some clinopyroxene and plagioclase phenocrysts, specially from the more evolved rocks, and the slight but rather general increase in the Mg contents of clinopyroxene from the rim of the phenocrysts to the microlites of the groundmass, indicate frequent recharge with more primitive magmas. This also must have promoted mixing between diverse batches, so that an open-system behaviour is characterized, in which crustal contamination must have also taken part, though it does not seem to have been significant from the geochemical data. Differentiation processes would have taken place under low pressure, in accordance with Al^VIof the clinopyroxene phenocrysts. From the comparison with other alkaline localities also peripherical respect to Parana flood basalts, the Sierra Chica volcanism is coeval and lithologically similar to that of central-eastern Paraguay, also of potassic character. Nevertheless, while basic rocks from Córdoba are high-Ti, those from Paraguay are low-Ti and show striking Ta-Nb-Ti anomalies. The magmas of Sierra Chica are comparable hence to the younger ones from southeastern Brazil, for example those from Alto Paranaíba, though these have higher LILE, LREE contents and (La/Yb)n ratios, consistent with the ultrapotassic rocks that prevail in that area. Chemical similarities reflect therefore analogies between both sources, that could be due to resemblances in the metasomatic events. While low-Ti magmas reflect a metasomatic event during the Late Archean to the Middle Proterozoic in the Rio de la Plata craton, high-Ti ones represent a mantle enrichment episode that occurred in Middle to Late Proterozoic related to mobile belts, according to the model ages obtained by other authors. Hence, it seems probable that mantle beneth Sierra Chica, as that of Alto Paranalba, must have verified metasomatism during Brasiliano orogeny. The presence of low-Ti flood basalts and low-Ti potassic magmas from Paraguay, to the east and northeast of Córdoba, seems therefore to reflect the transition from the oldest to the younger metasomatic events, consistent with terrane accretion in the western margin of Gondwana. Tectonic models geologically supported by the presence of Cambrian calcalkaline granitos in the region, do no correlate with Cretaceous alkaline Chemistry. Ba/Nb vs. La/Nb, Ta/Yb vs. Th/Yb, Ba/La ratios and the absence of a Nb-Ta depletion on a normalized multielement plot do not reveal metasomatism by fluids or melts derived from a downgoing slab in the past. It seems probable that melting must have affected portions of the mantle that were not contaminated by the subduction processes. This is consistent with the heterogeneous nature of the lithospheric mantle, whose non-convective geodynamics, would have preserved the heterogeneities over long periods of the geological time.

Kriner, Alicia. "Los obstáculos en el aprendizaje del adelgazamiento de la capa de ozono en los alumnos de 12 a 18 años" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Kolender, Adriana Andrea. "Polisacáridos de Nothogenia Fastigiata y Georgiella Confluens (Rhodophyta) : nuevos métodos de análisis para polisacáridos de algas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo de Tesis versa sobre cuatro aspectos principales: l- Estudio de los polisacáridos del alga roja Nolhogenia jásligiala (Galaxauraceae, Nemaliales) y evaluación de su actividad antiviral. Comprende un sistema de D-mananos con uniones α-(l—>3), sulfatados en las posiciones 2 y 6, y con ramificaciones simples de D-xilosa enlazada β-(l—>2).Los xilomananos contenían mayoritariamente cationes de calcio y magnesio, que estaban involucrados en la formación de complejos entre los polisacáridos del sistema mediante interacciones cooperativas carbohidrato-carbohidrato dependientes de calcio. La fracción F6' fue la más activa frente a varias cepas de HSV tipos 1 y 2, dos de ellas resistentes a aciclovir. Por otra parte, no presentó actividad anticoagulante, lo cual constituye una ventaja para su aplicación potencial como agente antiviral en formulaciones de aplicación local. 2- Aplicación de espectrometría de masa UV-MALDI-TOF, para determinar los pesos moleculares y sus funciones de distribución, sobre xilomananos sulfatados y xilanos neutros de N.fastigiala. 3- Análisis estructural de los polisacáridos de Georgiella confluens (Ceramiaceae, Ceramiales). Los resultados indicaron la presencia de una cadena central de agarano altamente metilado con un esquema de sustitución inusual en galactanos de algas rojas: sulfatación en C-3 de unidades de α-L-galactosa y ramificaciones simples de xilosa en la posición 4 de β-D-galactosa. 4- Desarrollo de un método de desulfatación para polisacáridos sulfatados empleando clorotrimetilsilano. Permitió completar el análisis estructural de los xilogalactanos de G. confluens. También se encontraron las mejores condiciones para la desulfatación de carragenano kappa comercial, a fin de probar su eficacia en un polisacárido con máximo contenido de unidades de 3,6-anhidrogalactosa. El estudio por experimentos RMN mono- y bidimensionales de carragenano beta -obtenido por desulfatación de carragenano kappa permitió la asignación completa de su espectro protónico.

Abstract:
This Thesis comprises four major sections: l- Analysis of the polysaccharides from the red seaweed Nolhogenia filsligiala (Galaxauraceae, Nernaliales) and evaluation of their antiviral activities. The sulfated polysaccharides extracted from this seaweed comprise a family of α-(l → 3)-linked D-mannans, 2- and 6-sulfated and having single stubs of β-(1 → 2)-linked D-xylose. The high content of calcium and magnesium cations revealed the complexation -mediated by calcium-dependent, cooperative carbohydrate-carbohydrate interactions- of polysaccharides belonging to the system. Fraction F6' proved to be the most active against several HSV strains, two of them resistant to acyclovír. At the same time, F6' did not exhibit anticoagulant properties, making it interesting for potential use as an antiviral agent in local formulations. 2- Application of UV-MALDI-TOF mass spectrometry to xylans and sulfated xylomannans in order to determine their molecular weights and distribution functions. 3- Structural analysis of the polysaccharides from Georgiella confluens (Ceramiaceae, Ceramiales). The results indicated the presence of a highly methylated agaran backbone with an unusual substitution pattern for red seaweed galactans: sulfation mainly at the 3-position of the α-L-galactose units and the presence of xylose single stubs at the 4-position of the β-D-galactose residues. 4- Development of a desulfation method for sulfated polysaccharides using chlorotrimethylsilane. Its application made possible the structural elucidation of the sulfated xylogalactans from G. confluens. Besides, in order to determine its efficiency in a polysaccharide with the highest 3,6-anhydrogalactose content, the best conditions for desulfation of commercial kappa carrageenan were tested. Complete assignment of the 1H NMR rcsonances of beta carrageenan -obtained by desulfation of kappa carrageenan- was achieved by means of mono- and bidimensional NMR techniques.

Juárez, Angela Beatriz. "Estudios biológicos y enzimáticos en Chlorella kessleri (trebouxiophyceae, chlorophyta)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo de tesis, se abordaron estudios sobre distintos aspectos de la biología de una cepa de Chlorella kessleri, aislada de la Laguna verde (Complejo Termal Copahue, Neuquén, Argentina), que no había sido estudiada previamente. Se realizó la caracterización morfológica, ultraestructural, bioquímica y fisiológica de esta cepa autóctona y se asignó su correcta identidad taxonómica. La identificación de esta especie constituyó una cita nueva para la Argentina, el segundo registro mundial de la especie en un ambiente natural, y una nueva cita de una especie del género Chlorella en un ambiente de origen volcánico. Además, se realizaron estudios enzimáticos, relacionados con los pasos regulatorios claves del camino biosintético de las clorofilas. Se determinaron, por primera vez en Chlorella kessleri, las actividades de dos enzimas involucradas en el primer paso regulatorio de este camino (síntesis del primer metabolito, ácido d -aminolevulínico), detectándose la presencia de actividad de las enzimas d -aminolevulínico sintetasa y g ,d -dioxovalerato transaminasa. Se estudió y caracterizó por primera vez en una Chlorophyta y por segunda vez en algas en general, la enzima del segundo paso regulatorio clave del camino (uroporfirinógeno decarboxilasa, UroD). Los estudios realizados sobre la actividad de esta última enzima en función de distintas condiciones (fase de crecimiento del cultivo, pH, temperatura, tiempo de incubación, tiempo de almacenamiento, concentración de proteínas, concentración de sustrato) permitieron caracterizar la UroD de C. kessleri y sentar las bases para la determinación de su actividad en las microalgas. Adicionalmente, se llevó a cabo la purificación parcial de esta enzima y se estableció que su estructura correspondería a un heterodímero de ca. 116 ± 7 kDa constituido por dos monómeros de ca. 72 ± 7 kDa y 66 ± 5 kDa de masa molecular. Al mismo tiempo, se estudiaron dos aspectos importantes relacionados con la biología aplicada de las microalgas: La potencial aplicación de esta cepa y alguna de sus propiedades como índice de contaminación ambiental con metales y xenobióticos, analizando el efecto de un metal pesado (cobre) y un hidrocarburo aromático polihalogenado (hexaclorobenceno) sobre la actividad de la enzima UroD. Se observó que, en las condiciones ensayadas, C. kessleri tolera concentraciones de cobre más elevadas que las informadas para otras especies del género (no se registró inhibición de la tasa de crecimiento) y que este metal afecta principalmente el contenido de clorofila y la actividad de la enzima UroD. Mientras que el hexaclorobenceno afecta principalmente el crecimiento de la especie y su actividad UroD a tiempos cortos de exposición, existiendo una recuperación a tiempos más largos. Los resultados obtenidos muestran que la determinación de la actividad UroD puede constituir un biomarcador de la contaminación reciente con hidrocarburos aromáticos polihalogenados y de la toxicidad de niveles de cobre que no alcanzan a producir efectos ponderables sobre el crecimiento algal. La potencialidad de esta cepa como fuente de compuestos biológicamente activos, evaluando la actividad antimicrobiana de extractos extracelulares de cultivos axénicos de C. kessleri frente a 11 cepas de microorganismos patógenos. Estos extractos mostraron actividad inhibitoria frente a todas las cepas ensayadas, tres de las cuales corresponden a bacterias altamente patógenas y resistentes a las drogas antibacilares de uso clínico actual. Los resultados obtenidos muestran la potencialidad de los cultivos de C. kessleri para la extracción, aislamiento e identificación de metabolitos farmacológicamente activos que puedan ser producidos y utilizados en la industria farmacéutica.

Abstract:
This disertation deals with the study of different biological aspects of a Chlorella kessleri strain isolated from Laguna Verde (Complejo Termal Copahue, Neuquén, Argentina). It was carried out the morphological, ultrastructural, biochemical and physiological characterization and the correct taxonomical determination of this autochtonous strain. This species is a new record for Argentina, the second record in the world and a new specific recording of the genera for volcanic environments. In addition enzymatic studies related with the regulatory steps of the chlorophyll biosynthetic pathway were made. For the first time in C. kessleri the activity of two enzymes related with the first regulatory step of this pahtway were studied. Evidences of the activity of the enzymes d -aminolevulinic synthase and g ,d -dioxovalerate transaminase were detected. For the first time in a green algae (Chlorophyta) and for second time in an algae, it was studied and characterized the enzime uroporphyrinogen decarboxylase (UroD). The studies in the activity of the UroD in different conditions (growing culture phase, pH, temperature, incubation time, storage time, protein concentration and substrate concentration), allow to characterize the enzyme. In addition partial purificated enzyme was obtained and it was established that UroD is an heterodimer of ca. 116 ± 7 kDa formed by two monomers of ca. 72 ± 7 kDa and 66 ± 5 kDa. At the same time two important aspects related with the applied biology of the microalgae were studied: 1) The potential application of this strain as an index of heavy metal and xenobiotic environmental contamination. 2) The potential usage of this strain as an source of products with biological activity. Analizing the effect of the copper and hexachlorobenzene on the C. kessleri strain it was observed that this species has a higher rank of tolerance for this heavy metal than other species of the same genera. This metal affect the chlorophyll content and the activity of the UroD. On the other hand, the hexachlorobenzene affect the growing of the species and the UroD activity in short exposure times. The results show that the activity of the UroD it would be an excellent tool to establish the levels of contamination due to HCB or copper contamination. In the other aspect C. kessleri extracellular extracts were tested against 11 pathogenic strains, testing its inhibitory properties, the results were positive in all cases. The results show C. kessleri cultures potential as a source of pharmacological substance.

Jobbágy, Matías. "Síntesis, caracterización y propiedades de hidróxidos dobles laminares" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo de tesis se explora la síntesis, la caracterización y algunas de las propiedades mas relevantes de los Hidróxidos Dobles Laminares (HDL). En función de la composición de los sólidos sintetizados y los aspectos o propiedades que son evaluados en los mismos, resulta natural dividir este trabajo en dos partes principales. Los contenidos de dichas partes se resumen a continuación. Primera parte: la primera parte consiste en el estudio básico de la potencial aplicación de un HDL sintético de Mg(II) y Al(III), en procesos de depuración de efluentes. Se plantean dos casos, en donde se utiliza el HDL intercalado con cloruro o dodecilsulfato para la remoción de aniones tóxicos o moléculas orgánicas neutras, respectivamente. En el primer caso se estudia el intercambio iónico a 298 K y pH constante, entre el cloruro y tres aniones de interés ecotoxicológico: el cromato, el arseniato y el hexacianoferrato (III). Las reacciones de intercambio competitivo con carbonato, sulfato y oxhidrilo también son evaluadas. El fenómeno de intercambio aniónico es descripto en términos de la convención de Gapon. Las desviaciones del comportamiento ideal de las actividades de los aniones en la fase solida son tratadas según el modelo de soluciones regulares. Las características de los procesos de adsorción de borde y su contribución al proceso de inmovilización son discutidas. También se estudia la estabilidad de esta fase solida frente a la disolución ácida. A valores de pH menores de 4, la disolución sigue régimen de volumen contráctil. Se presenta la dependencia con pH y la constante de velocidad características a 298 K. En el segundo caso se utiliza un HDL híbrido sintético de Mg(II) y Al(III), intercalado con dodecilsulfonato, para la sorcion de moléculas orgánicas neutras. Se estudian aspectos concernientes a la incorporación de moléculas neutras al seno del solido. La modificación estructural que implica la incorporación de solventes neutros en el espacio interlaminar se discute en términos de la expansión (swelling) y/o delaminación del solido híbrido. La capacidad de sorcion (constante de partición) de tolueno y nitrobenceno (contaminantes modelo) en medios acuosos a 298 K es evaluada. El perfil característico de las isotermas de adsorción-partición (adsolubilización) es discutido. Segunda parte: la segunda parte comprende el desarrollo de un procedimiento novedoso de síntesis de HDL NiCr(OH)2(CO3)x/2.nH2O es presentado. Este esquema se discute en términos de las especies solubles cineticamente favorecidas y termodinámica estables de ambos cationes, así como las posibles especies mixtas. Las fases solidas obtenidas son caracterizadas tanto en composición química como en cristalinidad, en intervalo de composiciones x entre 0.15 y 0.5. El efecto de las variables principales (tiempo y temperatura de envejecimiento, contenido de Ni(II), de Cr(III) y de urea) sobre dichas características es evaluado. El papel del calentamiento microondas y su influencia en la velocidad de síntesis es discutido. La familia de HDL sintetizados en la etapa anterior es sometida a descomposición térmica con rampa de temperatura programada y en atmósfera controlada. El proceso de descomposición térmica del HDL es revisado y comparado con sistemas HDL análogos. La interconversión y recocido de los óxidos mixtos es explorada en el intervalo de temperatura 723 K-1123 K. Las fases oxidicas resultantes son caracterizadas en términos de abundancia, cristalinidad y composición (dopaje).

Jaureguizar, Andrés Javier. "Patrón espacial y temporal de las áreas de asociaciones ícticas demersales costeras (34°S- 41°S) y su relación con los factores ambientales" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente trabajo examinamos los cambios espaciales y temporales en la composición de las áreas de asociaciones de peces en el ecosistema costero del Atlántico Sur occidental (34°-4l°) durante la primavera de los años 1981, 1983, 1994, 1995, 1998 y 1999). Para cada área identificamos las especies más comunes y las que discriminan a cada área de la adyacente durante de cada año. Dentro de cada área identificamos las especies residentes (comunes todos los años), y facultativas (contribuyen menos del 90% de similitud dentro de cualquier periodo de tiempo). Asimismo, identificamos que parámetros controlan la estructuración de la comunidad íctica costera espacial y temporalmente. Para determinar de que manera los factores ambientales influyeron en la comunidad íctica, fueron analizados los indicadores agregados del estatus del ecosistema: curvas de dominancia- k, curvas "ABC", y espectro de tallas de la comunidad integrada. Los análisis (DCCA), realizados sobre la abundancia de las especies (t • mnˉ²), indican que todos los años hay áreas de asociaciones, consistentemente distinguibles una de otras, tanto por características ambientales como por la combinación de especies que las estructuran. Las áreas de asociaciones ícticas correspondieron a la región Interna. Central y Externa del estuario del Río de la Plata. y a la región Interna, Central y Externa de la plataforma costera. Las diferencias en la composición de las áreas fueron primariamente debidas a cambios en la composición de especies, más que a cambios en sus abundancias relativas. Los cambios espaciales en las asociaciones están primariamente relacionados con las características físicas de las masas de agua, y en cada ambiente diferentes factores, como la salinidad en el estuario o la temperatura en la plataforma, son más relevantes en la estructuración espacial de la comunidad de peces. Las áreas de asociaciones muestran un marcado grado de consistencia temporal en sus límites, con cierta variación temporal en cuanto a su extensión y localización. El análisis temporal indica que la pesca es uno de los factores más influyentes en la variación temporal de la comunidad íctica de las áreas de asociaciones ícticas. Diferencias significativas en la composición de especies fueron observadas entre la mayoría de los años analizados, principalmente asociadas a cambios en las abundancias relativas de las especies más que a cambios en su composición. La mayoria de los cambios en biomasa de las especies implicó una disminución, que fue particularmente evidente en las especies de condrictios. El porcentaje de contribución a la disimilitud temporal de las áreas por las especies residentes (comunes en todos los años) y especies facultativas, indica que las especies facultativas contribuyeron más que las especies residentes a la dinámica temporal de la ictiofauna. Esta estabilidad en la composición de especies residentes provee un grado de predictibilidad que da a las áreas de asociaciones alguna utilidad como una aproximación para el manejo basado en ecosistemas. Los indicadores agregados de la comunidad (curvas de dominancia-k, curvas “ABC”, y espectro integrado de tallas) sugieren que durante los últimos l8 años, la estructura de la comunidad tiende progresivamente a estar dominada por pocas especies y pequeños individuos, y con mayor nivel de perturbación.

Abstract:
In the present work we examined the spatial and temporal changes of the fish assemblage areas composition at the costal ecosystem of the western South Atlantic (34°-41° S) during six springs (1981, 83, 94, 95, 98 and 1999). For each assemblage area we identified the most common species and those species that discriminate it from adjacent assemblages areas within years. Within each area we also identified resident (common in all years) and facultative (contributing to less than 90% of similarity within any year) species. We also identified what parameters control the main structuring of the fish community on the spatial and temporal patterns. To determine how the environmental factors influenced the fish community structure, we analyzed the aggregate indicators of ecosystem status: dominance curves, ABC curves, and integrated community size spectrum. The analysis (DCCA), carried out on the species abundance (t • nmˉ²). indicated that there are fish assemblage areas consistently distinguishable between them during all years, by their environmental characteristics and species combination that structuring the areas. The fish assemblage areas correspond to Inner, Central and Middle region of the Rio de la Plata estuary, and Inner, Central and Middle region of the coastal shelf. The differences in the area composition were primarily due to changes on species composition more than changes on their relative abundance. The spatial changes in the assemblage areas were primarily related with water masses physical characteristics. Different factors, as the salinity in the estuary and the temperature in the shelf. were more relevant on the spatial structuring of fish community in each environment. The assemblage areas showed a remarked degree of temporal persistence of their boundaries. with some temporal variation in their extension and localization. The temporal analysis indicates the fishery as one of the factors more influent on the temporal variations of fish community of the fish assemblage areas. Significant differences on the species composition were observed between most of the analyzed years. mainly associated to changes on the relative abundances more than changes on species composition. Most of the changes on species biomass implied decreasing of biomass, this being particularly evident on chondrichthyes species. The percentage of contribution to the temporal dissimilarity of the areas by resident or facultative species indicated that facultative species contributed more to the temporal dynamics of species composition within assemblages than resident species. This relative stability of resident species composition provides a degree of predictability that may confer some utility to these areas as reasonable proxies for ecosystem management areas. The aggregate indicators of ecosystem status during the last 18 years, suggested that the community structure progressively trends to be dominated by less species and smaller individual, with higher perturbation level.

Iturmendi, Nilda Susana. "Estimación de la densidad relativa" (2003). Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Dadas dos variables aleatorias independientes, X0 y X, que llamaremos de referencia y de comparación respectivamente, se define la variable relativa como R = F0(X), siendo Fo la función de distribución acumulada de la variable X0. Existe abundante bibliografía sobre métodos para estimar la densidad de una variable a partir de observaciones independientes. En esta tesis consideramos el problema de estimar la densidad de la variable R, llamada densidad relativa, a partir de muestras independientes, X0,1,...X0,n y X1,...Xm, de ambas poblaciones. Para ello construimos predictores de la variable relativa obtenidos a partir de un estimador de la función F0 calculada en observaciones de la variable X. El conocimiento de la densidad de R, nos permite representar las similitudes o diferencias entre las distribuciones de X y X0. Para estimar la densidad relativa hemos combinado dos estimadores de la función de distribución, la función de distribución empírica y un estimador suavizado de la núsma, con estimadores de la densidad basados en núcleos y basados en vecinos más cercanos con núcleos. Respecto de la elección del parámetro de suavizado hemos considerado la ventana óptima y distintos procedimientos de validación cruzada. Mediante un estudio de simulación, se estudió el comportamiento para muestras pequeñas de los estimadores de la densidad relativa propuestos. Como medida del error de estimación se consideró una aproximación del error cuadrático medio integrado. El estimador basado en núcleos utilizando una ventana de validación cruzada sesgada y el que utiliza la ventana óptima, son los procedimientos con el mejor comportamiento.

Abstract:
Let X0 and X be given independent random variables, called reference variable and comparison variable, respectively. The relative variable is defined by R = F0 (X), where F0 is the accumulated distribution function of the variable X0. There is an extense bibliography dedicated to the estimation of the density of a given variable from the knowledge of independent observations. In this thesis, we will deal with the question of estimating the density of the variable R, called relative density, from the knowledge of independent samples, X0,1,...X0,n y X1,...Xm of the two populations under consideration. To achieve this, we build predictors of the relative variable, obtained from an estimator of the function F0 calculated at observations of the variable X. Knowledge of the density of R provides a way to represent similitudes and differences between the distributions of X0 and X. To estimate the relative density, we have used two estimators of the distribution function, the empiric distribution function, and a smoothed estimator of it, with estimators based on kernels, and on nearest neighbours with kernels. Regarding the choice of the soothing parameter, we have considered the optimal window and several cross-validation proceedures. By performing a simulation study, we have studied the behaviour for small samples of the proposed estimators of relative density. Wehave measured the error of estimation through an approximation of the meanintegrated squared error. The best perfomance of the error corresponds to the kernel method with biased cross-validation window, and the optimal window procedure comes in the second place.

Isoardi, Esteban José Pablo. "Métodos de modelado y simulación de metales y aleaciones" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Iriarte Capaccio, Christian Ariel. "Síntesis de dihidropiranonas ópticamente activas derivadas de hidratos de carbono : su uso como dienófilos en cicloadiciones " (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las dihidropiranonas quirales son precursores útiles de productos naturales y moléculas asimétricas biológicamente activas. El sistema carbonilo α,β-insaturado les confiere a las dihidropiranonas una gran versatilidad para diversos tipos de transformaciones químicas. Además, la presencia de estereocentros en sus moléculas les permite el control de la enantioselectividad en una variedad de reacciones. A partir de estas premisas, se planteó como objetivo general de esta Tesis el estudio de la reactividad del sistema carbonílico α,β-insaturado de dihidropiranonas derivadas de azúcares y la influencia de los estereocentros de las mismas en el curso estereoquímico de las reacciones aplicadas. Además de cumplimentarse este objetivo general, se alcanzaron los siguientes objetivos específicos: l) Mediante una secuencia de reacciones simples y estereocontroladas, se obtuvo un glicósido de la D-epi-purpurosamina, un aminotetradesoxiazúcar del tipo encontrado en antibióticos aminoglicosídicos. Se utilizó como compuesto de partida quiral una dihidropiranona derivada de D-galactosa. 2) Se construyeron sistemas carbociclicos mediante adiciones de Diels-Alder de dienos a la mencionada dihidropiranona y a otra derivada de la L-fucosa. Estos carbociclos, generados bajo estereocontrol, eran ópticamente puros y presentaban numerosas funcionalidades, por lo cual constituían intermediarios útiles para posteriores transformaciones sintéticas. 3) La dihidropiranona derivada de D-galactosa presentaba una reactividad limitada como dienófilo. Por eso, se prepararon dihidropiranonas derivadas de pentosas. Se estableció la configuración absoluta y la pureza óptica de estos compuestos portadores de un único estereocentro. Asimismo, se prepararon dihidropiranonas enantioméricamente puras por glicosidación de glicales con alcoholes quirales. 4) Las 2-alcoxi-2H-pirán-3(6H)-onas derivadas de pentosas resultaron excelentes dienófilos, tanto con butadienos como con dienos cíclicos. Se optimizaron las condiciones de las reacciones de cicloadición y se obtuvieron una variedad de carbociclos bajo estereocontrol. 5) Se determinaron las estructuras de los carbociclos obtenidos mediante técnicas de RMN, y se confirmaron las mismas por conversión de los cicloaductos en policiclos. Estos últimos resultan intermediarios útiles en la síntesis de una variedad de moléculas quirales.

Abstract:
Chiral dihydropyranones are useful precursors of natural products and asymmetric molecules that display varied biological activities. The α,β-unsatured carbonyl system of the dihydropyranones is suitable for a large number of well-known chemical transformations. Furthermore, due to the presence of stereocenters, most of the reactions applied to the conjugated carbonyl group proceed under stereocontrol. Therefore, in this work we studied the reactivity of the α,β-unsaturated carbonyl system of sugar-derived dihydropyranones, and the influence of their stereocenters in the stereochemical course of the reactions employed. The following specific goals, originally proposed, have been achieved: l) A sequence of simple and highly diastereoselective reactions was employed for the synthesis of a glycoside of D-epi-purpurosamine, an aminotetradeoxysugar of the type found in aminoglycosyl antibiotics. A dihydropyranone derived from D-galactose was used as chiral starting material. 2) Carbocyclic systems were constructed by means of Diels-Alder additions of dienes to the mentioned dihydropyranone, and to another one derived from L-fucose. The resulting carbocycles, generated under stereocontrol, were Optically pure products; and as they possess a number of functionalities, they may be considered useful intermediates for further chemical transformations. 3) The dihydropyranone derived from D-galactose showed only a moderate dienophilic activity. For this reason, dihydropyranones having a single stereocenter were synthesized from pentoses. The absolute configuration of such stereocenter, and the optical purity of the products have been established. Furthermore, enantiomerically pure dihydropyranones were prepared by glycosylation of glycals with chiral alcohols. 4) The 2-alkoxy-2H-pyran-3(6H)-ones derived from pentoses showed to be excellent dienophiles in cycloadditions with butadienes and cyclic dienes. The reaction conditions for the Diels-Alder cycloadditions were optimized to yield varied carbocyclic products under stereocontrol. 5) The structures of the carbocycles were determined using mono and bidimensional NMR techniques, and they were further confirmed by conversion of the adducts into polycyclic products. Such polycycles may be employed as chiral precursors in the enantioselective synthesis of asymmetric molecules.

Hirsch, Dan Francisco. "Modelos de transformación de Grafos para estilos de arquitectura de software" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La evolución de los sistemas de software y la creciente complejidad de sus procesos de desarrollo han hecho necesario establecer pasos de diseño bien definidos que permitan reducir el gap entre requerimientos e implementaciones. En esta dirección, en años recientes, un área importante de la investigación ha tratado con las Arquitecturas de Software. Básicamente, una arquitectura de software es una descripción de alto nivel de un sistema complejo, con un nivel adecuado de abstracción que permite capturar del dominio del problema los componentes, a partir de los requerimientos, que serán diseñados detalladamente más adelante. Un Estilo de Arquitectura de Software es una clase de arquitecturas que exhiben un patrón común. Si la reusabilidad y la clasificación de arquitecturas son objetivos principales para permitir que los diseñadores exploten el trabajo previo, la identificación de una arquitectura de un sistema dentro de un estilo específico requiere lenguajes expresivos y bien fundados para representar estilos. Los requerimientos de los sistemas modernos imponen nuevas características a la descripción de las arquitecturas de software. Estos incluyen la distribución, la concurrencia, la reconfiguración y la movilidad. Por lo tanto, es necesario desarrollar el lenguaje de estilos que soporte estas características y por consiguiente su semántica formal. Entonces, la descripción de un estilo de arquitectura de software debe incluir la estructura de los tipos de componentes y sus interacciones, los patrones de comunicación, y las leyes que gobiernan la reconfiguración y/o la movilidad en la arquitectura. Siguiendo esta línea de investigación, es nuestro objetivo contribuir a la formalización de modelos para la descripción de arquitecturas y estilos de arquitectura de software. Esta tesis presenta un marco formal para la descripción de estilos de arquitectura de software basado en los sistemas de transformación de grafos. Una gramática de grafos caracteriza una clase de grafos que comparten características estructurales y está compuesta por un conjunto de reglas de reescritura llamadas producciones. Inicialmente, los grafos representan las configuraciones estáticas de las arquitecturas y las gramáticas representan los estilos. Luego, podremos incluir producciones que especifiquen las interacciones en mntime entre componentes, la reconfiguración y la movilidad. Las arquitecturas de sistemas pueden ser controladas de manera centralizada a través de un coordinador o administrador, o pueden ser sistemas denominados self organising en los cuales la coordinación está distribuida localmente entre los componentes. Los sistemas que tenemos en mente son distribuidos, lieterogéneos y móviles, y por lo tanto elegimos una estrategia self organising. En particular, para describir estilos elegimos utilizar gramáticas libres de contexto para Recscritura de Hiperejes (Hyperedge Replacement (HR) granunars) y gramaticas HR de Sincronización (Synchronized HR (SHR) grammars) para modelar la comunicación y la coordinación entre componentes. Un hipereje es un elemento atómico con una etiqueta (de un alfabeto con rango) y con tantos tentáculos como el rango de su etiqueta. Un conjunto de nodos y un conjunto de liiperejes forman un hipergrafo si cada lripereje esta conectado, por sus tentáculos, con sus nodos de enlace (attachmcnt nodos). Los Hiperejes corresponden a los componentes y sus nodos de enlace son sus puertos de conmnicación con otros componentes. Una producción HR reescribe un solo hipereje en un hipergrafo cualquiera. Entonces, para modelar la coordinación de los componentes de la arquitectura combinamos reescritura de grafos con condiciones de sincronización, obteniendo los sistemas SHR. Las producciones sincronizadas se especifican agregando condiciones en los nodos que permiten coordinar varias reescrituras, determinando la manera en que los componentes interactúan y se reconfiguran. Las producciones para (la etiqueta de) un hipereje determinado representan las posibles evoluciones para un determinado tipo de componente del estilo. Las producciones de una gramática se agrupan en tres conjuntos: el primer conjunto contiene las producciones HR para la construcción de todas las posibles configuraciones iniciales del estilo. El segundo conjunto contiene las producciones SHR que modelan la evolución de la comunicación para cada tipo de componente, y el tercer conjunto contiene las producciones SHR para la reconfiguración de la estructura del estilo. Las producciones de la comunicación requieren sincronización pero no pueden cambiar la estructura topológica del grafo. Con respecto a literatura anterior. esta tesis presenta una extensión de los sistemas SHR con la adición de movilidad de nombres (name mobility como en π-calculus). Esta extensión permite aumentar substancialmente el poder expresivo del método para la representación de sistemas complejos móviles y reconfigurables, mantieniendo al mismo tiempo la capacidad de describirlos de una manera descentralizada y distribuida. Representamos a los liipergrafos y los sistemas SHR en forma textual usando syntactic judgements. Esto permite una clara separación entre reescritura y coordinación, y la introducción de varios mecanismos de sincronización como adecuadas álgebras (móviles) de sincronización. Específicamente, presentamos las reglas de inferencia al estilo SOS para las álgebras de sincronización Hoare (CSP) y Milner (CCS, π-calculus). Sin embargo. en nuestra propuesta extendemos las álgebras de proceso permitiendo la sincronización simultánea de cualquier número de participantes. Las condiciones de sincronización para movilidad se resuelven vía unificación. Como resultado importante y evidencia formal del poder expresivo del método, presentamos un resultado de correspondencia que prueba que SHR con sincronización de Milner subsume al π-calculus. Para esto, definimos una traducción donde una transición en π-calculus se representa como una transición del correspondiente syntactic judgement traducido (es decir, un paso de reescritura). Puesto que π-calculus está equipado con una semántica interleaving y sólo sincronizaciones entre pares de elementos, la prueba es una correspondencia completa entre π-calculus y una versión restringida de los sistemas SHR. En la segunda parte de la tesis continuamos usando gramáticas HR (sin sincronización) para describir estilos e introducimos un enfoque específico basado en teoría de tipos para describir las reconfiguraciones de estilos (llamadas transformaciones). Las nociones de reconfiguración y movilidad implican modificaciones a la estructura de la arquitectura cambiando componentes y conexiones. Estas modificaciones que un sistema puede sufrir conducen a la pregunta de cómo podemos asegurar que los cambios sean consistentes con el estilo al cual pertenece el sistema. Por analogía, podemos pensar en los estilos como tipos para las instancias de arquitectura y en derivaciones HR como pruebas de tipo. Las reconfiguraciones deben preservar los tipos: en terminología de la teoría de tipos esta propiedad se llama subject reduction. Nuestro método consiste en definir transformaciones sobre pruebas de tipo, en lugar que sobre grafos: mientras que cortar y pegar pruebas de tipo resulten nuevamente en pruebas de tipo, la propiedad de subjet reduction está garantizada. La formalización se efectúa representando grafos y producciones como términos de un cálculo λ tipado, donde un paso de derivación HR corresponde a aplicación seguido por reducción β. Entonces, las transformaciones se especifican como reescritura de términos (de alto orden): si todas las reglas de reescritura transforman pruebas de tipo en pruebas de tipo, entonces todas las posibles reescrituras satisfacen subject reduction. El uso de cálculo λ introduce la idea de reescritura de grafos de alto orden, permitiendo la parametrización del proceso de diseño con características de componentes y conectores que podrían ser especificados más adelante, manteniendo la garantía de consistencia. La principal diferencia del método para reconfiguración usando SHR con respecto al que utiliza transformaciones, es que SHR es más dinámico, ya que es aplicable a sistemas abiertos en ejecución sin control global, a excepción de la sincronización. Por el otro lado, el método con transformaciones puede ser útil para trabajar al nivel de diseño estático, es decir, cambiar los pasos del diseño del sistema para producir un sistema diverso pero consistente. De todas maneras, el último método puede ser aplicado para especificar clases muy generales de reconfiguraciones y movilidad (como se demuestra en los ejemplos de la tesis), pero requiere un conocimiento global de la estructura del sistema. Los diferentes temas introducidos en la tesis son acompañados por ejemplos específicos que permiten clarificar las diversas construcciones y demostrar su poder expresivo, y por un caso de estudio de un sistema remoto de asistencia médica que es utilizado a lo largo de toda la tesis.

Abstract:
The evolution of software systems and the increased complexity of their developing processes have led to the necessity of establishing well defined design steps to close the gap between requirements and implementations. In this direction, in recent years a main research area has concerned Software Architectures. Basically, a software architecture is a high-level description of a complex system, with an adequate level of abstraction that enables capturing, from its requirements, the components of the problem domain to be later designed in more detail. A Software Architecture Style is a class of architectures exhibiting a common pattern. If reusability and classification of architectures are main goals to allow designers to exploit previous work, the identification of a system architecture within a specific style requires expressive and well founded languages to represent styles. The requirements of modern systems impose new characteristics to the description of software architectures. These include distribution, concurrency, reconfiguration and mobility. Therefore, it is necessary to develop the style language and its formal semantics accordingly. Thus, the description of a software architecture style must include the structure of component types and of their interactions, the communication patterns, and the laws governing reconfiguration and/or mobility changes in the architecture. In this line of research our goal is to contribute to the formalization of models for the description of software architectures and of software architecture styles. This thesis presents a formal framework based on graph transformation systems for the description of software architecture styles. A graph grammar characterizes a class of graphs that share structural characteristics and it is composed of a set of rewriting rules called productions. At first, graphs represent the static configurations of architectures and grammars represent styles. Later we will be able to include productions specifying runtime interactions among components, reconfiguration and mobility. System architectures can be managed in a centralized manner by an explicit coordinator or administrator, or can be self organising indicating that coordination management is distributed locally among components. The systems we have in mind are distributed, heterogeneous and mobile, thus we choose a self-organising approach. In particular, we choose context-free Hyperedge Replacement (HR) grammars to describe styles and Synchronized HR (SHR) grammars to model communication and coordination among components. A hyperedge is an atomic item with a label (from a ranked alphabet) and with as many tentacles as the rank of its label. A set of nodes together with a set of hyperedges form a hypergraph if each hyperedge is connected, by its tentacles, to its attachment nodes. Hyperedges correspond to components and their attachment nodes are their communication ports with other components. A HR production rewrites a single hyperedge into an arbitrary hypergraph. Then, to model the coordination of the architecture components we combine graph rewriting with synchronizing conditions obtaining SHR systems. We specify synchronized productions by adding conditions on nodes which allow to coordinate several rewritings, thus determining how components interact and are reconfigured. The productions for a given hyperedge (label) represent the possible evolutions for a given component type of the style. The productions of a grammar are grouped in three sets: the first set contains the HR productions for the construction of all possible initial configurations of the style. The second set contains the SHR productions that model the communication evolution for each component type and the third set contains the SHR productions for the reconfiguration of the style structure. The communication productions require synchronization but cannot change the topological structure of the graph. With respect to previous literature, this thesis presents an extension of SHR with the addition of name mobility (as in π-calculus). This extension allows us to substantially increase the expressive power of the approach for representing complex mobile and reconfigurable systems, still maintaining the ability of describing them in a decentralized, distributed way. We represent hypergraphs and SHR systems in textual form using syntactic judgements. This allows the clear separation of rewriting and coordination and the introduction of various synchronization mechanisms as suitable (mobile) synchronization algebras. Specifically, we present the inference rules in the SOS style for Hoare (CSP) and Milner (CCS, π-calculus) synchronization algebras. However, we extend process algebras in that we allow synchronizations of any number of partners at the same time. Constraint conditions for mobility are solved via unification. As an important outcome and a formal evidence of the expressive power of the approach. we present a correspondence result proving that SHR with Milner synchronization subsumes π-calculus. We define a translation where a transition in the π-Calculus is represented as a transition of the corresponding translated judgement (i.e. a rewriting step). Since π-calculus is equipped with an interleaving semantics and only with two partner synchronizations, we prove a complete correspondence between π-calculus and a restricted version of SHR systems. In the second part of the thesis we continue using HR grammars (without synchronization) for describing styles and we introduce a specific, type-based approach for describing style reconfigurations (called transformations). The notions of reconfiguration and mobility imply changes to the architecture structure by changing components and connections. These modifications that a system may suffer lead to the question of how we assure that changes are consistent with the style the system belongs to. By analogy, we can think of styles as types for the architecture instances and of HR derivations as typing proofs. Reconfigurations must preserve types: in type theory terminology, this property is called subject reduction. Our approach is to define transformations on typing proofs rather than on graphs: as long as cutting and pasting typing proofs still yields typing proofs, subject reduction is guaranteed. The formalization is done by representing both graphs and productions as terms of a typed λ-calculus,where a HR derivation step corresponds to application followed by β-reduction. Then, transformations are specified as (higher order) term rewritings: if all the term rewriting rules transform typing proofs into typing proofs, then all the possible rewritings satisfy subject reduction. The use of λ-calculus introduces the idea of higher order graph rewriting, allowing to parameter-ize the design process with component and connector features which could be specified later, still guaranteeing consistency. The main difference of the approach for reconfiguration using SHR with respect to the one using transformations, is that SHR is more dynamic in the sense that it applies to running open-ended systems without global control except for synchronization, whereas the approach with transformations may be useful for working at the level of blueprints, i.e. it rearranges the design steps of the system to produce a different but consistent system. Thus, the latter method can be applied to specify very general kinds of reconfigurations and mobility (as it is shown in the thesis examples), but it requires a global knowledge of system structure. The different topics introduced in the thesis are accompanied by specific examples to clarify the various constructions and to show their expressive power, and by a case study of a remote medical care system that is used all along the thesis.

Hermida, Gladys N.. "Microanatomía del sistema respiratorio en Bufo arenarum y Melanophryniscus stelzneri stelzneri (Anura, Bufonidae)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el presente estudio se ha determinado que la microanatomía del sistema respiratorio de B. arenarum y M.s.stelzneri son en algunos aspectos muy diferentes. Utilizando técnicas macroscópicas, de microscopía óptica y de microscopía electrónica, se caracterizaron anatómicamente e histológicamente el sistema respiratorio de ambas especies. Para ello se dividió el estudio en I) vías aéreas extrapulmonares, II) pulmón y III) cuerpos neuroepiteliales. Las vías extrapulmonares están reducidas a una laringotráquea constituida por un par de cartílagos aritenoides y el cricoides. En B. arenarum a diferencia de M. s. stelzneri la laringotráquea está dividida en dos cámaras, una anterior y otra posterior delimitadas ambas por membranas. La mucosa que reviste el lumen de la laringotráquea así como las membranas que tapizan las cámaras presenta una diversidad celular importante. En B. arenarum la última porción de la laringotráquea se continúa con dos cámaras “bronquiales” que se abren cada una de ellas a un pulmón mientras que en M.s. stelzneri la laringotráquea se comunica directamente con los pulmones. Los pulmones son diferentes en ambas especies. En B. arenarum la estructura interna es más compleja por la presencia de tres tipos de septos: primarios, secundarios y terciarios con características histológicas propias, mientras que en M. s. stelzneri la organización interna es simple por la presencia solamente de septos terciarios. El parénquima pulmor es del tipo faveolar para B. arenarum y edicular para M. s. stelzneri. El epitelio respiratorio está constituido por neumocitos los cuales emiten prolongaciones citoplasmáticas que cubren a los capilares sanguíneos. Estas prolongaciones junto con el endotelio de los capilares constituyen la barrera de intercambio gaseoso. En M.s. stelzneri se determinó la presencia sobre los septos de cuerpos neuroepiteliales a los cuales se les adjudica una posible función secretora y/o receptora.

Abstract:
The present study has determined that the microanatomy of the respiratory system of B. arenarum and M.s.stelzneri are different in some aspects. Light and electron microscopy were used to study the anatomy and histology of the respiratory system of both species. For it was divided it the study in I) extrapulmonary airways, II) lung and III) neuroepithelial bodies. The extrapulmonary airways in these species are reduced to a laryngotrachea constituted by a couple of arytenoid cartilages and a cricoid cartilage. In B. arenarum contrary to M.s.stelzneri the laryngotrachea is divided in two laryngeal chambers, anterior and posterior. The epithelia of the chambers as well as the membranes that limit this chambers present an important cellular diversity. In B. arenarum the last portion of the laryngotrachea connected with two bronchial chambers which give out onto the lung. The lungs in both species are different. In B. arenarum the internal structure is more complex by the presence of three types of septa: first, second and third order. In M.s. stelzneri the parenchyma forms a polygonal network arrangement, therefore the parenchyma is edicular in both. These space are delimited by the interconnection of septa which are covered by respiratory epithelium. This epithelium consists of one type of pneumocytes, which emit a thin cytoplasmic process that cover the pulmonary capillaries to form the outer layer of the air-blood barrier. In M.s. stelzneri neuroepithelial bodies (NEB) appear randomly distributed over the septa. Each NEB consists of special cells, the corpuscular cells (cc) which contains numerous dense core vesicles (dcv). The NEB are associated with afferent and efferent terminal nerves. The location of the NEB, the presence of the dcv, the occurrence of synaptic contacts between nerve endings and the cc and the occurrence of capillaries close to the NEB, suggest a receptosecretory function for the NEB in the lung of M.s. stelzneri.

Halperin, Julia. "Transporte iónico en Chasmagnathus granulatus, Dana 1851 (Grapsidae): papel del branquiostegito y posibles vías de regulación neuroendócrina en branquias posteriores" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El estudio comparado entre el branquiostegito y las branquias de Chasmagnathus granulatus muestra que el primero es capaz de cumplir una importante función en el intercambio gaseoso durante la exposición al aire, pero no es apto para las funciones de regulación iónica. No se encontraron en el branquiostegito los tipos celulares asociados a estos procesos ni alta actividad de enzimas como la anhidrasa carbónica, necesarias para el transporte iónico. Se estudiaron algunas vías de regulación asociadas al transporte iónico en branquias posteriores sometidas a condiciones iso- e hipo-osmóticas. Se demostró que la dopamina tiene una función modulatoria del transporte de Na+ a través del epitelio branquial. En condiciones basales (osmolaridad hemolinfática normal), esta bioamina estimula transitoriamente el transporte de Na+ por activación de la Na+, K+ -ATPasa. Por otro lado, luego de un shock hipo-osmótico donde el transporte iónico se ve activado, con aumento de la actividad Na+, K+ -ATPasa, la dopamina actúa como un modulador negativo, reduciendo la amplitud de la respuesta al estímulo hipo-osmótico. En los estudios inmunohistoquímicos se observa que, cuando se transfieren individuos desde una condición hipo-osmótica a una iso- o hiper-osmótíca, la vía del cAMP-PKA, es inhibida en las branquias posteriores a través del aumento en la expresión de proteína G¡ (inhibidora de la adenilato ciclasa) en la membrana basolateral.

Abstract:
The inner integument of the branchiostegites of Chasmagnathus granulatus plays a complementary role in respiratory gas exchange during air exposure but it is not capable of performing ion transport functions. The epithelial tissue lining this organ lacks from the ultrastructural features of ion-transporting epithelia and also from the high activity rates of enzymes like carbonic anhydrase which are characteristic of this kind of tissue. We investigated some regulatory pathways related to ion transport in isolated posterior gills, perfused under iso- and hypo-osmotic conditions. Dopamine showed a modulatory effect on Na+ transport across the branchial epithelium. Under basal conditions (normal hemolymphatic osmolarity) dopamine increased the Na+ influx by enhancing Na+, K+ ATPase activity. On the other hand, after a hypo-osmotic stress, when the ion transport mechanisms are activated (through increased Na+, K+ ATPase activity), dopamine modulates the autonomic increase of Na+ influx, diminishing the amplitude of the response of the hypo-osmotic stimulus. Histochemical studies showed an inhibition of cAMP-PKA pathway in posterior gills after transference of animals from hypo- to iso- o hyperosmotic media, which is evidenced through an increase of Gi protein expression.

Guichón, María Laura. "Distribución espacial, comportamiento y estructura de poblaciones del coipo Myocastor Coypus en la cuenca del Río Luján (Buenos Aires, Argentina)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El coipo o nutria Mycastor coypus es un roedor de hábitos semiacuáticos del que se tiene escasa información sobre aspectos ecológicos dentro de su rango de distribucibn original (sur de Sudamérica),a pesar de su importancia como recurso de fauna. Los objetivos generales de este trabajo de tesis fueron: (1) analizar el patrón de distribución espacial del coipo en la cuenca del río Luján considerando distintas escalas espaciales y (2) estudiar la alimentación, el comportamiento social y la estructura de poblaciones de coipo. Se trabajó en cuerpos de agua ubicados a1 nordeste de la provincia de Buenos Aires (Argentina) entre marzo de 1997 y septiembre de 2000. En la primer parte del trabajo se describió el patrón de distribución del coipo a tres escalas espaciales. A escala de micro-ambiente, se observó que los coipos dedicaron la mayor parte del tiempo fuera de las cuevas a alimentarse, y que el uso del espacio estuvo restringido al medio acuático y a la costa (fundamentalmente a una franja de 10 m a cada lado de la línea de costa). A escala de macro-ambiente, la distribución espacial de los coipos a lo largo del río Luján estuvo positivamente asociada con la cobertura de pasturas y negativamente asociada con la cobertura de edificaciones y la presencia de perturbaciones antrópicas locales (v.g.calles, centros recreativos). Este resultado podría explicarse por un efecto positivo de la vegetación disponible en las pasturas naturales como fuente de alimento para los coipos, o por un efecto negativo de algunas actividades humanas. A escala de paisaje, se encontró que las zonas de la porción Pampeana de la cuenca con alta presencia de coipos tuvieron una alta correspondencia con la actividad ganadera, con los ambientes de zonas bajas y con las unidades de drenaje con valle aluvial ancho y menor pendiente del río. En la porción Deltaica de la cuenca del río Luján, la zona con alta presencia de coipos estuvo asociada a la actividad ganadera y a la presencia de Areas protegidas. En ambas porciones, la mayor frecuencia de cambio de uso de la tierra sobre las márgenes del río estuvo asociada con las zonas de baja-nula presencia de coipos. En la segunda parte del trabajo se estudió el comportamiento alimentario y social del coipo y la estructura de sus poblaciones. No se encontró, un mayor valor de nitrógeno en las plantas higrófilas, que constituyeron la mayor parte de la dieta (hipótesis de beneficios nutricionales). Si bien no se puso a prueba en este estudio, la selección de sitios de alirnentación dentro o cerca del agua permitiría reducir los costos asociados al riesgo de predación (hipótesis de balance costo-beneficio). La composición de los grupos sociales permitió corroborar que los coipos tienen hábitos gregarios y un sistema de apareamiento poligínico, donde la segregación espacial entre grupos condiciona la distribución de los coipos. En las poblaciones estudiadas, el crecimiento corporal de los coipos fue más lento y alcanzaron un tamaño menor que los coipos de poblaciones establecidas en el Hemisferio Norte. La caza de coipos puede modificar la estructura y distribución de sus poblaciones en ambientes relativamente estables en cuanto a variaciones de temperatura y alimento. La densidad poblacional baja (donde había baja supervivencia y alta proporción de inmigrantes) estuvo asociada con alta presión de caza y no con deficiencias en el recurso alimentario. La presión de caza varía espacialmente en función de la accesibilidad del sitio de caza, su distancia a asentamientos urbanos, la cantidad de habitantes del área y el grado de control. En base a los resultados obtenidos a escala de micro-ambiente y sobre estructura poblacional, se postula que la distribución de los coipos a escala de macro-ambiente se puede explicar por la menor actividad de caza en pastizales usados para ganadería y mayor presión de caza cerca de urbanizaciones y accesos al río. La estructura del paisaje en función del uso de la tierra y la fisiografía del terreno puede determinar zonas que reciban diferente presión de caza. Se propone que los modelos de fuente- sumidero aplicados a especies bajo explotación constituyen una aproximación útil para comprender la dinámica de las poblaciones de coipo en la Pampa Ondulada.

Groisman, Pablo. "Aproximaciones numéricas para problemas con blow-up" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Grassi, Lubiana. "Interacción Schistosoma mansoni y sus hospederos : mecanismos de resistencia en poblaciones argentinas de biomphalarias frente a S. mansoni y dinámica de la transmisión de ésta parasitosis por el hospedero mamífero" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La esquistosomosis es una enfermedad causada por parásitos del género Schistosoma, transmitidos por caracoles de agua dulce del género Biomphalaria (hospedero intermediario) y que infectan al mamífero entre ellos al hombre (hospedero definitivo). En el presente trabajo de Tesis se ha estudiado la interacción parásito-huésped, especialmente con el hospedero intermediario y, en relación al hospedero mamífero, la calidad del huevo/miracidio en función de su capacidad para infectar al caracol. Se estudió el sistema de defensa de poblaciones argentinas de biomphalarias descriptas como resistentes a S. mansoni (B. straminea y B.orbignyi) en comparación con B. glabrata (susceptible). Se abarcaron aspectos histológicos e inmunológicos para estudiar la respuesta celular y humoral del hospedero tendientes a determinar posibles mecanismos involucrados en la resistencia a S. mansoni. Por otro lado, se evaluó la dinámica en la tasa de eclosión de huevos recuperados de distintos tejidos del hospedero mamífero, así como la capacidad infectiva de los miracidíos obtenidos de estos huevos durante 12 meses de infección murina por S. mansoni. Los resultados de esta investigación evidenciaron que B. straminea posee un sistema de defensa muy potente que en menos de 24 hs es capaz de reconocer y destruir a los distintos estadios larvales de S. mansoni. No se logró romper esta resistencia, aún cuando se usaron elevadas dosis de miracidíos o exposiciones sucesivas al parásito. B. orbignyi fue descartado como especie refractaria a la infección al igual que como especie resistente. El parásito penetró y evolucionó hasta esporoquiste. Este hecho no pudo asociarse a un sistema defensivo potente, dado que aún pasados 30-60 días de la exposición al parásito se encontraron esporoquistes viables en distintos grados de desarrollo en sus tejidos, sin respuesta celular asociada a ellos pero sin otros progresos a partir de este estadio. En periodos más prolongados que 60 días de infección no se pudo evaluar la evolución de S. mansoni puesto que a estos tiempos el caracol infectado presentó un importante deterioro de la arquitectura tisular, que lo llevó a la muerte. Cuando se coinfectó B. orbignyi con otro trematode, S. mansoni evolucionó hasta la emisión de cercarias. Sin embargo, estas cercarias fueron menos exitosas para infectar al hospedero mamífero. La falta de respuesta celular aún en la especie resistente B. straminea podría estar compensada con una adecuada defensa humoral mediada por proteinas tipo citoquinas. En este sentido B. straminea presentó niveles basales altos de TNF-α e IL-6 con respecto a la especie susceptible B. glabrata y, a pesar que la exposición al parásito modificó estos niveles, los mismos se mantuvieron siempre por encima de los presentados por B. glabrata. Se podría especular que se requiere un umbral de estas citoquinas para mantener la resistencia frente a la infección, y que, los caracoles susceptibles no tendrían capacidad para producir o mantener esos niveles de citoquinas. Por el contrario en B. orbignyi los valores de estas citoquinas estuvieron siempre por debajo de las otras especies independientemente de la exposición al parásito. La falta de respuesta celular antes mencionada y el bajo nivel de citoquinas registrado en B. orbignyi, así como la mala calidad de las cercarias de S. mansoni emitidas al coinfectarlo con otros trematodes nos inducen a proponer a esta especie como un hospedero inadecuado. El patrón de proteinas de hemolinfa y tejido se evaluó con el propósito de determinar aquellas que pudieran estar expresadas diferencialmente pre y post exposición al parásito. En el caso de hemolinfa se registraron modificaciones en la expresión de 2 proteínas (76 y 79 kD). Las mismas se expresaron en B. orbignyi y desaparecieron en B. straminea luego de la exposición al parásito. En tejidos de B. orbignyi expuestos a S. mansoni también se expresaron 2 proteínas de 66 y 72 kD, mientras que en B. straminea una banda de 224 kD desapareció post-exposición. Ninguna de estas proteinas fue detectada en B. glabrata. Si bien estos son resultados preliminares seria interesante caracterizarlas y estudiar si están asociadas a infección y/o resistencia en estas especies. Dado que la efectividad de la transmisión de esta parasitosis está ligada a la calidad de los estadios parasitados que se liberan al medio para infectar al molusco, se estudió la potencialidad de transmisión de S. mansoni a lo largo de 12 meses de infección del hospedero definitivo. Se observó que tanto el éxito de eclosión de los huevos como la infectividad de los miracidios para B. glabrata, especie susceptible, disminuyeron con el tiempo de infección del mamífero. El conjunto de estos resultados indican que ante la eventual introducción en una región libre de esquistosomosis como es la Argentina, de mamíferos parasitados provenientes de áreas endémicas, la probabilidad de establecimiento de un foco sería dependiente, por lo menos, del tiempo de infección del hospedero vertebrado así como de la susceptibilidad de los caracoles y las modificaciones que los mismos puedan sufrir por coinfecciones con otros trematodes.

Abstract:
Schistosomosis is a disease caused by parasites of the gender Schistosoma, transmitted by freshwater snails of the gender Biomphalaria (Intermediate host) and capable to infect the human (Definitive host). Herein we studied the parasite-hosts interactions with special reference to the intermediate host and, when referred to the mammalian host, with the quality of egg/miracidia to infect the snail. We have studied the defense system to S. mansoni in Argentinean populations of biomphalarias (B. straminea and B.orbignyi) in comparison with B. glabrata (susceptible control). Histological and immunological aspects were considered to study the host cellular and humoral responses in order to determine possible mechanisms involved in resistance to S. mansoni. On the other hand, during 12 months of the murine infection the dynamics of the hatching rate of S. mansoni eggs obtained from different host tissues were evaluated, as well as the miracidia capacity to infect their intermediate hosts. The results of this investigation showed that B. straminea possess an efficient defense system which in less than 24 hs recognized and destroyed the S. mansoni larval stages. Resistance was equally efficient even when high doses of miracidia were used or successive exposition to the parasite were performed. B. orbignyi, was discarded as a refractory especie as well as a resistant one, because infection progresses up to sporocyst stage. This fact could not be associated to a potent defense system, since past 30-60 days post-exposition viable esporocyts in different development stages, without cellular response were observed. Thereafter, further progress of S. mansoni was impossible to evaluate because the huge deterioration of the snail’s architecture tissue after 60 days post-exposition. On the other hand, coinfection with another trematode allowed S. mansoni to progress up to cercarial emission. However, these cercaria were less effective to infect the definitive host. The lack of cellular response could be compensated by humoral defense mediated by hemolymph proteins. In this sense, B. straminea presented high basal levels of TNF-α-like and IL-6-like cytokines compared with the susceptible species. Despite that parasite increased or decreased cytokine levels, values always remained over those of B. glabrata. It might be speculated that a certain cytokines threshold level would be required to excert resistance. Therefore, it is possible that as a result of parasite-mediated interference, snails produce cytokine levels under the threshold and become susceptible to the infection. In the B. orbignyi cases, cytokines levels were always below the values registered for the other species, independently of the parasite exposuse. However, S. mansoni failed to progress in these snails. The lack of cellular reponse together with the extremely low level of cytokines as well the poor quality of the cercaria emited by coinfected snails, allowed us to classify B. orbignyi as an inadequate host. The protein patterns of hemolymph and tissues were evaluated in order to determine those that could be differentially expressed before and after parasite exposition. Modifications in the expression of two proteins of 76 and 79 kD were registered in hemolymph. Both were expressed in B. orbignyi and vanished in B. straminea, after-parasite exposition. In tissues of B. orbignyi other two proteins of 66 and 72 kD were expressed while other of 224 kD vanished in B. straminea afterexposition. Neither of these proteins were detected in B. glabrata. Even when these are preliminary results it will be interesting to characterize these proteins and to study whether they are or not associated to infection and/or resistance in these snail species. Since the effectiveness of the transmission of this parasitosis is bound to the quality of egg/miracidia that are liberated to infect the molluscs, the potentiality of S. mansoni transmission by the definitive host was studied along 12 months of infection. It was observed through this period that the capacity of the eggs to hatch and the miracidia to infect B. glabrata diminished with the time of infection of the definitive host. Summing up, the results of this Thesis indicate that the probability of establishment of a focus of schistosomiasis in a region free of this parasitosis like is Argentina will be dependent, at least, on the susceptibility of the snails, the modifications that coinfections can introduce in the intermediate host and the time evolved since the infection of the vertebrate host .

Goutman, Juan D.. "Caracterización farmacológica y biofísica de los receptores ionotrópicos de Gaba" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El ácido γ-aminobutírico (GABA) es el principal neurotransmisor inhibitorio del sistema nervioso central de vertebrados y hasta el momento se han caracterizado tres tipos de receptores de GABA, según sus propiedades farmacológicas: GABAa, GABAb y GABAc. Los receptores de GABAa (GABAaR) y GABAc (GABAcR) comparten además su mecanismo de señalización, ambos son receptores ionotrópicos con una alta permeabilidad a iones cloruro. Los receptores de GABAb son metabotrópicos, generalmente acopladas a proteínas G. En esta tesis se presenta una extensa caracterización de las propiedades farmacológicas y biofísicas de los receptores de GABA, con especial énfasis en los GABAcR Este subtipo de receptores de GABA fue el último en ser identificado y se caracteriza por su insensibilidad al antagonista clásico GABAérgico, bicuculina y por el lento curso temporal de sus respuestas. Este trabajo se realizó expresando los receptores en ovocitos de Xenopus laevis y estudiando sus propiedades con dos diferentes técnicas electrofisiológicas: fijación de voltaje con dos electrodos (FVDE) y patchclamp en la configuración outside out. Los receptores ionotrópicos de GABA (GABA-R) son modulables por una diversidad de compuestos de diferente naturaleza química. Entre ellos se encuentran los flavonoides (F), una familia de compuestos aislados de plantas vasculares que presentan una gran variedad de acciones neurofarmacológicas. Algunos son ansiolíticos y sedantes, y se ha propuesto que su mecanismo de acción sería a través de los GABAaR. En este trabajo, evaluamos la acción de un grupo de F sobre las respuestas mediadas por GABA-R. Los F utilizados en este trabajo fueron: quercetina, crísina, apígenina, morina, flavona y α-naftoflavona. Contra lo esperado, los F evaludados tuvieron un efecto inhibitorio general tanto sobre los GABAaR como los GABAcR. Quercetina fue el más potente para ambos receptores con un IC50 de aproximadamente 4 µM en cada caso. También se evaluó la acción de quercetina en otros receptores ionotrópicos de neurotransmisores, como los colinérgicos nicotínicos, serotonina y kainato. En todos ellos se observaron efectos inhibitorios con distinta potencia. Tanto los GABAaR como los GABAcR son sensibles al alcaloide picrotoxina. Se han propuesto distintos mecanismos para su acción sobre los GABAaR incluyendo efectos no-competitivos y mixtos. Sin embargo, aún no se ha esclarecido suficientemente el mecanismo de acción en los GABAcR. Picrotoxina produjo una inhibición reversible con un IC50 = 0.6 ǂ 0.1 µM. La curva dosis-respuesta (D-R) para GABA en presencia del antagonista (1, 10 y 100 µM) sufrió un desplazamiento hacia la derecha y para las concentraciones más altas de esta toxina, una reducción en la respuesta máxima. Este resultado sugeriría un mecanismo de acción de tipo no-competitivo. No obstante, al igual que los antagonistas competitivos, las respuestas a concentraciones bajas de GABA fueron más sensibles a picrotoxina que las más altas. La inhibición por esta toxina fue también dependiente del uso, es decir, requirió la activación de los receptores para ejercer su efecto. La recuperación de la inhibición también fue facilitada por la acción de GABA. Además, picrotoxina produjo un aumento en la velocidad de de-activación de las respuestas al GABA, sugiriendo un mecanismo de tipo no-competitivo. En resumen, la inhibición de los GABAcR por picrotoxina tendría un mecanismo de acción no-competitivo o mixto, y dependiente del uso aunque menos que los GABAaR. Los GABAcR son sensibles a la modulación por iones trivalentes de la serie de los lantánidos (L) que producen un incremento en las respuestas a GABA. En un estudio previo se caracterizó la acción de uno de los elementos pertenecientes a los L, lantano (La³+); mientras que en este trabajo se analizaron los efectos de otro, lutecio (Lu³+). Ya en experimentos preliminares, se observó que la acción de Lu³+ sería más compleja ya que produjo un aumento rápido de la corriente, seguido de una atenuación durante la aplicación del ión sobre la respuesta a GABA. Lu³+ provocó una aumento en la afinidad aparente por GABA (0.4 ǂ 0.1 µM) y un incremento en la respuesta máxima a concentraciones saturantes de agonista. También se evaluó cómo afectaba la presencia de Lu³+ a la acción de ciertos antagonistas, como parámetro de la función de los GABAcR. El antagonista competitivo, TPMPA, inhibió las respuestas evocadas por GABA en presencia de Lu³+ con una potencia semejante a lo observado en ausencia de este ión. No obstante, no tuvo un efecto protector de la atenuación de la respuesta mediada por Lu³+, sugiriendo que este proceso sería operado por este ión independientemente de GABA. Las respuestas evocadas en presencia de Lu³+ también fueron sensibles a picrotoxina pero con caracteristicas diferentes a lo ya descripto. Se elaboró, además, un modelo de gating de los GABAcR y de la acción de Lu³+, donde se propone la existencia de dos estados abiertos, revelado por la presencia de este ión, que además mediaría un proceso de desensibilización independiente de GABA. Los estudios existentes sobre la cinética de los GABAcR fueron hechos con técnicas de pobre resolución temporal, y por esto decidimos realizar esta serie de experimentos en parches de membrana con la técnica de patch-clamp en la configuración outside out. Las respuestas al GABA obtenidas con esta metodología presentaron un curso temporal característico de los GABAcR: activación y de-activación lentas, de varios segundos de duración, con escasa desensibilización. La afinidad aparente por GABA calculada fue 4.0 ǂ 0.8 µM con un n de Hill = l.7 ǂ 0.5. La relación corriente-voltaje fue lineal, y el canal mostró una permeabilidad alta a cloruro. Se evaluó la sensiblidad de los GABAcR en parches de membrana a una serie de agonistas (TACA, β-alanina, glicina), antagonistas (TPMPA, picrotoxina, quercetina, zinc) y moduladores (La³+ y Lu³+) conocidos. Todos estos produjeron efectos similares al descripto previamente. Un estudio más profundo de la cinética de de-activación de las respuestas mostró que a concentraciones altas de agonista, la relajación era mejor descripta por ecuación de decaimiento exponencial de segundo orden; mientras a dosis cercanas al EC50,de primer orden. Esto sugeriría un modelo de gating con dos estados abiertos con distinta cantidad de moléculas de agonista unido, que fue evaluado realizando simulaciones numéricas de la actividad del receptor.

Abstract:
γ-arninobutyric acid (GABA) is the main inhibitory neurotransmitter in vertebrate central nervous system. Three GABA receptors subtypes have been described according to their pharmacological properties: GABAa, GABAb, and GABAc. GABAa (GABAaR) and GABAc (GABAcR) receptors also share their signaling mechanism, they are both ionotropic receptors with high chloride permeability. GABAb receptors are metabotropic and commonly coupled to G protein. In this thesis, we show an extent pharmacological and biophysical description of GABA receptors with special interest in GABAcR. This is the more recently identified GABA receptor and characterizes by its resistance to the classic GABAergic antagonist, bicuculine, and its slow time-course responses. Receptors were studied in this work by means of the expression in Xenopus laevis oocytes and two different electrophysiological techniques: two electrode voltage clamp (TEVC) and patch-clamp in outside out configuration. Ionotropic GABA receptors (GABA-R) can be modulated by a variety of compounds with different chemical structure. Flavonoids (F) are a group of compounds isolated from vascular plant that show distinct neuropharmacological effects. Some of them are anxiolytic and sedative, and a mechanism mediated by GABA receptors has been suggested. In this study, we have evaluated the effects of a group of F on GABA receptors function. The F tested were: quercetin, chrisin, apigenin, morin, flavone and α-naphtoflavone. Unexpectedly, these F showed an overall inhibitory effects on GABAaR and GABAcR. Quercetin was the most potent antagonist on both types of receptors with an IC50 value of approximately 4 µM. The actions of quercetin on other ionotropic neurotransmitter receptors, like cholinergic nicotinic, serotonin and kainate, were also tested. Different degrees of inhibition were observed in all of them. Both GABAaR and GABAcR can be blocked by the alkaloid picrotoxin. Different mechanisms of action have been proposed for the inhibition of this antagonist on GABAaR, including non-competitive and mix effects. However, the exact mechanism of action for GABAcR has not been clarified yet. Picrotoxin produced a reversible inhibition on GABAcR with an IC50 = 0.6 ǂ 0.1 µM. Dose-responses (D-R) curves in the presence of this antagonist (1, 10 and 100 µM) were right-shifted and an insumountable blockage was seen for high concentrations of toxin. All these suggest a non-competitive mechanism of action. However, as described for competitive antagonists, inhibition was more profound with low agonist concentrations than higher. Picrotoxin action was also use-dependent, i.e., receptor activation was required to exert its effect. Antagonist wash out was also facilitated by GABA action. In addition, picrotoxin produced an increase in de-activation rate of GABA-evoked responses, suggesting a non competitive effect. In summary, GABAcR inhibition by picrotoxin would present a non-competitive or mix mechanism of action, and also use-dependent effect, but in a lower degree than GABAaR. GABAcR can be modulated by trivalent cations from lanthanides (L) series that produce an increase in GABA evoked responses. The actions of lanthanum (La³+), one of the L, on GABAcR have been characterized in a previous study, and here we have analyzed the effects of other L, lutetium (Lu³+). In preliminary experiments, Lu³+ showed more complex actions, with a fast increase in GABA-evoked current, followed by attenuation during ion application. An increase in apparent affinity for GABA (0.4 ǂ 0.1 µM) and also in maximal efficacy was observed in the presence of Lu³+. The inhibition of some antagonists was evaluated in the presence of Lu³+ as a parameter for GABAcR function. TPMPA, a competitive antagonist, inhibited the action of GABA and Lu³+ with a potency similar to that was observed in the absence of this ion. However, Lu³+ mediated current attenuation was not protected by this antagonist, suggesting that this process would be operated by this modulator independently of GABA. GABA-evoked responses in the presence of Lu³+ could also be inhibited by picrotoxin but with a different profile than was previously described. In addition, a model for GABAcR gating and Lu³+ actions has been elaborated, in which two open states were proposed based on this ion effect, that would also mediate a desensitization process independent of GABA. Currently available studies on GABAcR kinetics have been carried out with techniques devoid of a proper time resolution. This is why we decided to perform experiments on membrane patches with the patch-clamp technique in outside out configuration. GABA-evoked responses showed typical GABAcR characteristics when obtained with this methodology: slow activation and de-activation kinetics, and poor desensitization even at high agonist concentrations. An apparent affinity for GABA of 4.0 ǂ 0.8 µM was calculated with a Hill coefficient = 1.7 ǂ 0.5. Current-voltage relation was lineal, and the channel was highly permeable to chloride. GABAcR present in membranes patches were tested with distinct already-known agonists (TACA, β-alanine, glycine), antagonists (TPMPA, picrotoxin, quercetin, zinc) and modulators (La³+ and Lu³+). They all showed similar effects to what was already described. An extensive study on de-activation kinetics of GABA-evoked currents showed that relaxation at high concentrations was better fit by a second order exponential decay equation, while at EC50 doses a first order was used. This would suggest a gating model with two open states with distinct number of agonist bound molecules, that was evaluated by numerical simulations of receptors function.

González, Graciela Alicia. "Transporte iónico y patrones de crecimiento en electrodeposición ramificada" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se investigó la influencia de los distintos modos de transporte iónico (difusión, migración y convección) sobre el crecimiento y la morfología de depósitos metálicos ramificados. El estudio experimental se realizó principalmente por observación videomicroscópica, empleando análisis de imágenes combinado con distintas técnicas, como Schlieren y trazado por partículas, para revelar los gradientes de concentración y los movimientos convectivos. Los experimentos se realizaron galvanostáticamente en celdas planas de pequeño espesor. Se emplearon diversas condiciones experimentales tratando de establecer separadamente la influencia de los modos de transporte más importantes, que son la migración, la convección causada por gradientes de densidad (gravitoconvección) y la causada por el campo eléctrico (electroconvección). Dichas condiciones incluyen cambios de viscosidad, modificación del espesor de la celda y variaciones de concentración del electrolito y de la corriente aplicada. Para analizar los cambios morfológicos se contabilizó el número de ramas y se realizó la medición del área aparente del depósito en las imágenes de video. Los resultados muestran una interrelación compleja entre los modos de transporte, y en general no es posible separar completamente el efecto de cada uno de ellos. Se observa que la migración causa depósitos más uniformes, con ramas muy próximas que crecen a la misma velocidad, mientras que la convecciónprovoca depósitos más desordenados, donde algunas ramas crecen rápidamente consumiendo la solución y provocando la detención de las demás. En estos casos, la presencia de altos campos eléctricos causa depósitos con mayor ramificación; sin embargo, no es posible separar claramente la migración de la electroconvección. En el análisis teórico se aplico un modelo macroscópico general considerando todos los modos de transporte mencionados: las ecuaciones de Nernst-Planck para el transporte iónico, la ecuación de Poisson para el potencial eléctrico y las ecuaciones de Navier-Stockes para el fluido. El análisis dimensional muestra que los números adimensionales de Migración, Poisson y Grashof son relevantes en el estudio del modo de transporte dominante. Se encontró que las predicciones del modelopropuesto concuerdan con los resultados experimentales. Por otra parte, se estudió la formación de contactos entre discos metálicos a través del crecimiento de depósitos en condiciones de electroquímica bipolar. Se investigó experimentalmente la influencia de distintos factores sobre el tiempo de formación y la morfología del contacto. Se encontró que en el período previo al comienzo del depósito el transporte es dominado por la migración, y durante el crecimiento aumenta la influencia de la convección. Asimismo, se estudió mediante simulaciones numéricas la distorsión del campo eléctrico y su efecto sobre el depósito. La influencia del transporte es similar al caso monopolar, aunque la migración tiene aquí un efecto más importante sobre el proceso. Se emplearon también campos eléctricos pulsados, hallándose que se modifica la morfología del depósito, resultando másfino y menos ramificado a altas frecuencias.

Goldberg Cavalleri, Alina Viviana. "Estudio biológico y molecular del proceso de infección de un virus de la granulosis de Epinotia aporema y evaluación de su potencial como agente de control biológico" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El “barrenador de los brotes", Epinotia aporema, es una de las principales plagas de leguminosas en América del Sur. Las larvas de esta plaga, son infectadas por un granulovirus (EpapGV) el cual representa una de las principales causas de epizootias esporádicas en poblaciones de E. aporema. En el trabajo de tesis, se realizaron estudios biológicos y patológicos sobre EpapGV en larvas del insecto huésped, los cuales establecieron una base de conocimientos importante para determinar distintos aspectos de la interacción virus-huésped. Ensayos en laboratorio demostraron que el virus es altamente virulento y especie específico, lo que indica que es un buen candidato para ser utilizado en el control biológico de la plaga. Larvas infectadas con EpapGV sufrieron un retraso en el desarrollo, siendo inhibido el proceso de muda. Además, exhibieron un incremento en el peso mayor al observado en larvas sin infectar. Esto pudo deberse a la expresión del gen viral egt cuyo producto altera la fisiología de los insectos. Mediante exámenes de tejidos al microscopio óptico y electrónico, por medio de las técnicas de inmunohistoquimica e hibridación in situ (ARN-ARN), se observó que EpapGV causa infecciones de tipo poliorganotrópicas. Los principales tejidos afectados fueron el adiposo, la epidermis y la matriz traqueal. Luego de infectar el intestino medio, la diseminación del virus hacia otros tejidos se produce aparentemente vía hemolinfa. Los viriones producidos en células infectadas se acumulan entre la membrana plasmática y la lámina basal, lo que indica que dicha lámina constituye una barrera efectiva para diseminación de la infección. Mediante la técnica de inmuno-oro se detectó expresión de granulina dentro del núcleo, lo cual indica que la expresión de genes tardíos ocurre luego de la ruptura de la membrana nuclear. Análisis computacional de las secuencias de los extremos de clones de la biblioteca genómica de EpapGV generada en el laboratorio, permitieron identificar una posible proteína de fusión (Epap-F). El gen completo fue subclonado, secuenciado y analizado mostrando motivos característicos de las proteinas F de Nucleopolyhedrovirus (involucradas en la entrada del virus a una nueva célula). Sin embargo, no se había demostrado la funcionalidad de proteínas F de Granulovirus. Mediante la técnica de Northern blot se confirmó la expresión de dicho gen y se estudió su expresión temporal. Posteriormente, a través de la técnica de RACE, se mapeó el extremo 5' no codificante demostrándose que la transcripción del gen se realiza a partir de un motivo típico de transcripción tardío (CAGT) y también a partir de un motivo no convencional ATGC. Para demostrar la actividad fusogénica de dicha proteína se realizó un ensayo de actividad transiente in vitro. Para ello, se transfectó un cultivo de células (Spodoptera frugiperda. Sf21) con un plásmido conteniendo el ORF completo de Epap-F bajo el promotor ie-1 de Anticarsia gemmatalis MNPV, se modificó el pH del medio a 5 y se registró formación de sincicios. Con el fin de producir anticuerpos que reconozcan a Epap-F, se expresó dicha proteína utilizando un sistema de expresión de baculovirus. Los anticuerpos serán utilizados para la determinación de la ubicación subcelular de dicha proteína.

Abstract:
The bean shoot borer, Epinotia aporema, is a major pest of legume crops in South America. Larvae of this pest are infected by a granulovirus (EpapGV) that is the most important cause of sporadic epizooties in E. aporema populations. This PhD dissertation deals with the biological and pathogenesis studies on EpapGV on the host larvae that provide the basic information of the virus-host interaction. The high specificity and pathogenicity indicate that EpapGV is a good candidate for the biological control of this pest. Larvae infected by EpapGV, suffered a retardation of development and typically failed to pupate, but exhibited a weight increase greater than that of healthy larvae. It is possible that the effect observed was due to the expression of the egt viral gene whose product alters the insect physiology. Using immunohistochemistry and in situ hybridization (by both, light and electron microscope) we observed that EpapGV caused a polyorganotropic infection. We found that the fat body, epidermis and tracheal matrix were the main tissues infected. Virions liberated from the midgut may gain entry to other tissues via circulation through hemolymph. Virions produced by infected cells accumulated between the plasma membrane and basal lamina, this indicated that the basal lamina is an effective barrier for the spread of the infection. Granulin was detected in the nucleus by immuno-gold staining. indicating that late gene expression occurred prior to nuclear membrane disruption. Computer-assisted analysis of the sequence of the end sequences EpapGV clone library produced in our lab, revealed a putative fusion protein (Epap F). The complete gene was subcloned, sequenced and analyzed revealing aminoacids motif of characteristic for Nucleopolyhedrovirus F proteins (involved in virus entry to a new cell). However no functional F protein had been demostrated in any Granulovirus. Northern blots were used to confirm the transcription of this gene and to study its temporal expression. Employing the RACE technique we mapped the 5' untranslated region and we found that the transcription starts at a typical late gene (CAGT) motif and also at an unconventional (ATGC) motif. In order to demonstrate the fusion activity of Epap-F, we carried out a transient expression assay. To this end, a Spodoptera frugiperda (Sf 21) cell line was transfected with an expression plasmid containing the Epap-F ORF under the control of the Anticarsia gemmatalis MNPV ie-1 promoter and, alter lowering the pH to 5 many extensive syncytia were observed. With the aim of producing antibodies against Epap-F, the protein was expressed using a baculovirus expression system. The antibodies will be used to determine the subcelular localization of this protein.

Giribet, Gastón E.. "Teoría de Cuerdas sobre AdS3 X N" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Giordano, Carla Valeria. "Efectos de la radiación ultravioleta- B solar sobre Gunnera magellanica, una planta nativa de Tierra del Fuego" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los ecosistemas de Tierra del Fuego se encuentran sometidos a aumentos estacionales de radiación ultravioleta-B (UV-B: 280-315 nm) durante la primavera, debido al pasaje del agujero de ozono sobre la región. En la presente Tesis estudiamos los efectos del UV-B y UV-A (315-400 nm) solares sobre el crecimiento, la generación de daño molecular (dímeros en el ADN y daño oxidativo componentes celulares), y la inducción de respuestas de aclimatación (reparación de dímeros del ADN y acumulación de compuestos fotoprotectores foliares), en la flora nativa de Tierra del Fuego. Para ello utilizamos la herbácea perenne Gunnera magellanica como modelo de estudio. Realizamos ensayos con dos acercamientos experimentales: exclusión de distintas porciones del UV solar en el campo mediante el uso de filtros plásticos, y utilización de dosis controladas de UV-B suministradas con lámparas en invernáculo. En los experimentos a campo encontramos un efecto inhibitorio del UV-B en la expansión foliar de G. magellanica, en forma consistente durante tres estaciones de crecimiento. En relación a las respuestas de aclimatación al UV, la fotorreparación fué el principal mecanismo de remoción de dímeros de pirimidina del tipo ciclobutano (CPDs) en esta especie. La capacidad de fotorreparación fué inducida por UV, y la velocidad varió en función de la temperatura, siendo mayor a 25 °C que 8 °C. La velocidad de reparación de CPDs en G. magellanica fué menor que la presentada por otras especies vegetales, particularmente al compararla con A. thaliana en idénticas condiciones experimentales. El UV solar no reguló los niveles de compuestos fotoprotectores foliares (flavonoides) ni la masa foliar específica en esta especie. El principal componente de la radiación solar generador de CPDs fué el UV-B. Sin embargo, el contenido de CPDs no varió durante el día acompañando las fluctuaciones naturales de UV-B, sino que fué levemente menor al mediodía que al atardecer y al amanecer. Este perfil diario de CPDs puede explicarse al considerar la fluctuación diaria de factores ambientales que favorecen la reparación de los dímeros (radiación UV-A, visible, temperatura). En los experimentos realizados en invemáculo, encontramos que todas las dosis de UV-B ensayadas (correspondientes a dosis de UV-B bajas, medias y altas registradas normalmente en Ushuaia durante la primavera) redujeron la expansión foliar de G. magellanica. Esta reducción en el crecimiento estuvo acompañada por aumentos en el contenido de CPDs (en forma dependiente de la dosis de UV-B). La mayor dosis de UV-B ensayada produjo un estado de estrés oxidativo transitorio (evaluado mediante la relación entre el contenido de radical ascorbilo y ácido ascórbico), que fué rápidamente controlado por un aumento en los niveles de ascorbato. El daño celular que mejor explicó la inhibición en la expansión foliar fue la acumulación de CPDs en el ADN, pero no el nivel de peroxidación lipídica. En conjunto, nuestros resultados indican que los niveles actuales de UV-B tienen un impacto principalmente negativo sobre G. magellanica, que se ve reflejado en la reducción del crecimiento. Las modestas velocidades de fotorreparación a temperaturas relativamente elevadas (y bajas a temperaturas menores), junto con la falta de inducción en los compuestos fotoprotectores foliares, indicarían que futuros aumentos del UV-B (debidos a la erosión de la capa de ozono) producirían mayormente efectos negativos en G. magellanica, sin la inducción concomitante de respuestas de protección eficientes. La reducción de la expansión foliar inducida por UV-B, estuvo acompañada por daño al ADN en la forma de CPDs, pero no por daño oxidativo a componentes celulares (por ejemplo, lípidos de membrana). Esto sugiere que el daño al ADN está implicado en los procesos que llevan a la reducción de la expansión foliar causada por el UV-B en esta especie.

Abstract:
The ecosystems in Tierra del Fuego are seasonally subjected to elevated ultraviolet-B radiation (UV-B: 280-315 nm) during the spring, due to the passage of the ozone hole over the region. In the present Thesis, we studied the effects of solar UV-B and UV-A (315-400 nm) on growth, production of molecular damage (dimers in DNA and oxidative damage to cellular components), and induction of acclimation responses (dimer repair in DNA and accumulation of photoprotective compounds in leaves) in native plants of Tierra del Fuego. We used the perennial herb Gunnera magellanica as a model organism. We carried out two different experimental approaches: exclusion of different portions of solar UV with plastic filters in the field, and exposure of plants to different UV-B doses using lamps inside a greenhouse. In the field experiments, we found an inhibitory effect of UV-B radiation on G. magellanica leaf expansion, which was consistently detected throughout three growing seasons. Regarding acclimation responses to UV, photorrepair was the main pathway of cyclobutane pyrimidine dimer (CPD) removal in this species. Photorepair was slightly up regulated in plants exposed to solar UV. CPD photorepair was higher at 25 °C than at 8 °C. The rates of DNA repair in G. magellanica were modest compared to published values for other species, and were lower than those of Arabidopsis thaliana plants, grown under equivalent experimental conditions. The accumulation of UV-B absorbing compounds in leaves and the specific leaf mass were not affected by solar UV. UV-B was the main component of solar radiation that induced CPD formation in G. magellanica leaves. However, CPD levels did not fluctuate during the day tracking UV-B radiation, and were lower at noon than at dawn or in the morning. This daily CPD profile might be a consequence of the diurnal fluctuation of enviromental factors that promote CPD removal (UV-A, visible radiation, temperature). In the greenhouse experiments, realistic UV-B doses inhibited G. magellanica leaf expansion. This growth reduction was accompanied by high levels of CPDs. The higher UV-B dose induced oxidative stress (evaluated using the ascorbyl radical /ascorbate index), which was rapidly controlled by increments in ascorbate levels. The inhibition of leaf expansion correlated well with the CPD content, but not with levels of lipid peroxidation. Taken together, our results indicate that present-day levels of solar UV-B have mainly negative impacts on G. magellanica, with detrimental effects on growth. Modest photorepair rates at relatively high temperatures (and even lower at low temperatures), together with the lack of induction of UV-screening compounds in leaves, suggest that future increments in UV-B levels (caused by ozone reduction) would produce mainly damaging effects in G. magellanica, without sufficient enhancement of protective mechanisms. Inhibition of leaf expansion was well correlated with CPD levels, but not with oxidative damage to cellular components (such as membrane lipids), which sugests that DNA damage is involved in the inhibition of leaf expansion induced by UV-B in this species.

Giménez, Juliana. "Biología reproductiva y crecimiento del caracol Zidona dufresnei (Donovan, 1823) Caenogastrópoda, Volutidae de la Provincia de Buenos Aires, Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El desarrollo gonadal de Zidona dufresnei (Donovan, 1823) (Caenogastropoda:Volutidae) fue estudiado durante dos años consecutivos, a través del estudio histológico de las gónadas. En una población muestreada mensualmente en el área de Mar del Plata. El índice gonadosomático fue estimado para los machos y la talla oocitaria fue utilizada como un estimativo del desarrollo gonodal en las-hembras. La estación reproductiva en lo que se refiere a evacuación de gametos, para esta especie en esta localidad, se extiende desde octubre a marzo. Un sincronismo en la evacuación de gametos fue evidente para ambos sexos. La estación reproductiva esta ligada a los cambios de temperatura. La producción de gametas es continua durante todo el año. Se describió en detalle a través de la utilización de microscopía electrónica de transmisión, los diferentes estadios de la espermatogénesis y se realizo una descripción de la morfología del espermatozoide. La talla de primera maduración sexual fue estudiada, a través del análisis de tejido gonadal por cortes histológicos, junto al estudio de caracteres sexuales secundarios, como largo de pene, índice de la glándula de la cápsula. Siendo la talla mínima de madurez sexual en las hembras 12,8 cm y en machos 12,0 cm; la talla en la cual el 50% de la población adquiere la madurez sexual fue de 15,7 cm para las hembras y 15,0 cm para los machos. El crecimiento fue determinado a través de la utilización de isótopos radiactivos, con lo cual se determino la periodicidad de las marcas detectadas por rayos x. Dando un modelo de crecimiento de Gompertz que ajusta mejor a los datos. Siendo el crecimiento Lt = 208,84 mm * e^(-e^(-0.211*(t-5.496)), la producción máxima individual fue de 30,264 g de peso fresco sin concha, a los 12 cm de longitud. Basados en la distribución de frecuencia de tallas comerciales, se calculo la tasa anual de mortalidad y fue estimada en 0,61 a^-1. La dinámica de la pesca fue analizada en tres zonas de explotación. Se plantea el riesgo de sobreexplotación dado por la captura de tallas menores a la talla de madurez sexual y se plantea una talla de mínima de captura de 16 cm.

Abstract:
The gonadal development of Zidona dufresnei (Donovan,1823) (Caenogastropoda:Volutidae) was studied over a period of two consecutive years through microscopical analysis of gonadal tissue. Individuals were sampled month at the Mar del Plata area, Argentina. Gonadosomatic index was estimated for males and oocyte size was used to estimate the stage of gonadal development in females. The reproductive season of the species in the sampled locality extended from October to March (austral Spring-Summer). During summer, a stage of advanced gonadal development and spawning predominated in the adult population. In autumn, gonads were generally under atresia; during wintertime (June-August), they underwent a period of recovery that lasted until the spring months, when gametes were released again. Synchronism between both sexes was evident. Marked periods of spawning were followed by resorption periods and then a growing phase; it was very clear that reproductive seasonality was linked to changes in bottom water temperature. These results suggest that Z. dufresnei gonads have a yearly cycle of gamete production, with two major activity peaks in September-October and January-February. Size at sexual maturity was studied in Zidona dufresnei through analysis of gonadal tissue samples and secondary sexual characters. Individuals were sampled during two reproductive seasons (austral spring-summer)in the Mar del Plata area, Argentina. Gonadosomatic index was estimated for males and oocyte size frequency was used to estimate the stage of gonadal development in females. Gonad maturity occurred prior to the development of secondary sexual characters. Size at first gonadal maturity in females was 12.8 cm length and in males 12.0 cm length, but size at which 50%of the population was mature was 15.7 cm in females and 15.0 cm in males. The results of this study could help to establish a minimal catching size. The record of stable isotopes ratio 18 O deposited in the shell carbonate of Z. dufresnei that reflects seasonal oscillations in water temperature was used to infer size-at-age in four snails. A Gompertz growth function Lt = 208,84 mm * e^(-e^(-0.211*(t-5.496)) fitted these data best. Maximum individual production amounted to 30,264 g shell-free wet mass (SFWM) at 120 mm shell length. Based on a size-frequency distribution derived from commercial catches, annual mortality rate of Z. dufresnei was estimated to be 0,61 y^-1. Zidona dufresnei fisheries were analized in three diferents areas. Risk about overfishing is discussed.

Ghio, Sergio Claudio. "Clonado y caracterización de un antígeno rico en aminoacidos ácidos de Trypanosoma cruzi y su posible rol en la inmunopatogenia de la cardiopatía chagásica crónica" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se ha postulado la hipótesis de un origen autoinmune para explicar la etiología de la enfermedad de Chagas. Este proceso autoinmune podría ser el resultado de una respuesta inmune cruzada contra componentes específicos de células cardíacas que comparten epítopes con antígenos de Trypanosoma cruzí (mimetismo molecular). En trabajos anteriores demostramos que los anticuerpos de pacientes crónicos, inmunopurificados con el péptido correspondiente a los 13 aa C-terminales de la proteína ribosomal P28 de T. cruzi (TcP2β),alteraron la frecuencia de latidos de cardiocitos en cultivo ya que también podían reconocer el segundo bucle de los receptores cardiacos (M2 muscarínicos y β-adrenérgícos). Lo mismo ocurrió con los inmunopurificados contra un péptido correspondiente a la proteína ribosomal P0 (TcP0). Tanto los epítopes parasitarios como los del hospedador reconocidos por estos anticuerpos estaban formados por secuencias aminoacídicas ácidas. En la búsqueda de nuevos antígenos que pudieran producir este tipo de reacción cruzada, se propuso el rastreo de ESTs (Expressed Sequence Tags) producidos en el Proyecto Genoma T. cruzi que codificaran para proteínas ricas en secuencias ácidas. De este modo se aisló un EST de 718 pb. Se obtuvo la secuencia completa del gen que denominamos garp (glutamic acid rich protein) de 3500 pb, que es de copia única y origina un único ARNm de aproximadamente 4 kb. Según la comparación de secuencias se encontró una identidad de hasta 72% con secuencias de T. brucei. La proteína es de 130 KDa, y según ensayos de Western blot e inmunofluorescencia se localiza en el citoplasma del parásito. Aproximadamente el 20% de los sueros de pacientes con la enfermedad de Chagas crónica fueron capaces de reconocer la proteína recombinante GARP, y todos ellos lo hicieron con la región más C-terminal de la proteína, que contiene los aminoácidos ácidos. La inmunización con la proteína recombínante GARP provocó la aparición de anticuerpos dirigidos contra toda la proteína. Estos anticuerpos no modificaron la frecuencia de latidos de los cardiocítos en cultivo, y consecuentemente los ratones no sufrieron alteraciones electrocardiográficas. Como un método alternativo de inmunización, ensayamos la metodologia de inmunización con ADN. Con esta técnica de inmunización se pretendía reflejar mejor la situación de la infección crónica, ya que la presentación constantes de los antígenos parasitarios por las células musculares del hospedador podría ser mas adecuada para estudiar la patogenicidad de la enfermedad. Para poner a punto esta metodología, realizamos inmunizaciones con las proteínas ribosomales TcP2β y TcP0. Las inmunizaciones de ADN con TcP2β ,TcP0 y GARP generaron anticuerpos capaces de reconocer epítopes diferentes a los reconocidos en la infección natural. Los anticuerpos no provocaron alteraciones en la frecuencia de latidos de cardiocitos en cultivo ni se observaron alteraciones electrocardiográficas tales como las ocurridas cuando ratones fueron inmunizados con proteínas recombinantes TcP2β y TcP0. Por tanto concluimos que la inmunización con ADN es capaz de generar anticuerpos que reconocen epítopes diferentes a los inducidos por inmunizaciones con proteínas recombinantes o por la infección natural, lo cual es de utilidad al momento de generar una vacuna contra T. cruzi.

Abstract:
The hypothesis of an autoimmune origin has been postulated to explain the etiology of the Chagas' heart disease. This autoimmune process could be the result of an immune response capable of cross-reacting to specific components of heart (issues that share epitopes with antigens of Trypanosoma cruzi (molecular mimicry). As we have previously reported, antibodies of chronic patients, recognizing a peptide corresponding to the 13 aminoacid C-terminus (peptide R13) of the T. cruzi ribosomal P2 β protein (TcP2β) altered the frequency of cardiomyocyte beating culture. This antibodies were also able to recognize the second extracellular loop of the G-protein coupled receptors (M2 muscarinic and β-adrenergic receptors). Antibodies immunopurified against the C-terminus of the T. cruzi ribosomal P0 protein (TcP0) present a similar functional and physicochemical features. Both the parasitic and the host epitopes recognized by these antibodies are composed of acidic sequences. In the search of new antigens that could produce this type of cross-reaction, we looked for ESTs (Expressed Sequence Tags) in the Genome Project of T. cruzi coding for acidic residues rich proteins. So we identified a EST of 718 bp. The complete sequence of the gene (3500 bp) was obtained and we named it garp (glutamic acid rich protein). This gene exists in a single copy and gives origin to only transcript of approximately 4 kb. Its sequence was compared with database, finding a identity up to 72% with T. brucei sequences. The protein has 130 KDa, and both Western blot and immunofluorescence assays located it into cytoplasm. Approximately 20% of the sera of chronic chagasic patients were capable to recognize the recombinant protein GARP, and all of them recognized only the C-terminus of GARP, which contains the acidic sequences. When we immunized mice with the recombinant protein GARP, we achieved antibodies against the whole protein GARP. With anti-GARP serum we carried out assays on beating rat cardiomyocytes. With neither of the antisera beating frequency was altered and immunized mice with high anti-GARP titers showed no electrocardiografic alterations. As alternative method of immunization, we assayed immunizations with DNA plasmids. With this immunization technique we attempted to reflect better the situation of the chronic infection, since the constant presentation of the parasitic antigens from the host’s muscular cells could be more appropriate to study the pathogenicity of the disease. To set up this methodology we achieved immunizations with DNA coding genes of ribosomal TcP2β and TcP0 proteins. The DNA immunizations with TcP2β, TcP0 and GARP generated antibodies capable to recognize different epitopes to those obtained in the natural infection. No alterations in cardyocytes culture nor electrocardiografics recording in mice were observed. In contrast, immunization with TcP2β and TcP0 recombinant proteins generated functionally active antibodies. So we conclude that DNA immunization is useful to generate antibodies against epitopes that are different than the antibodies obtained in immunization with recombinant protein o in the natural infection. This could be useful to generate a vaccine against T. cruzi.

García Franco, Susana Nora. "Citotoxicidad y genotoxicidad de dos extractos naturales" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Es de actual importancia el desarrollo y uso de extractos vegetales en el control biorracional de plagas e insectos. Existe además una creciente inclinación por el uso de extractos naturales como parte de la dieta o en aplicaciones benéficas como ungüentos o lociones. Por otra parte, hay un intenso avance en la búsqueda e implementación de técnicas alternativas al uso de animales en la evaluación de la toxicidad de drogas y compuestos químicos. Estas razones motivaron el interés por llevar a cabo estudios de citotoxicidad y genotoxicidad, sobre extractos acuosos y metanólicos de dos vegetales autóctonos regionales de Argentina y parte de la zona subtropical de América: Vallesia glabra o Ancoche e Ilex paraguaiensis o Yerba Mate. Se efectuaron por lo tanto estos estudios, aplicando técnicas in vitro basadas en cultivos celulares, sometidos a tres tipos de exposiciones : I ) aguda ll ) repetida Ill ) crónica La Citotoxicidad se evaluó mediante a) ensayos de coloración (Cristal Violeta, Rojo Neutro) o por medición de actividades enzimáticas (Láctico deshidrogenasa, Succinato deshidrogenasa) o por determinación de la Concentración de Proteínas. b) Eficiencia de Clonado La Genotoxicidad se determinó por medición del Indice de Daño del ADN en el Ensayo del Cometa. Mediante exposiciones agudas se concluyó que los extractos metanólicos de Ancoche presentaron mayor comportamiento citotóxico que los acuosos para los ensayos que indican viabilidad celular (RN, CV, Proteínas, MTT) y menores para los que indican daño celular (LDH). Mediante el ensayo de Eficiencia de Clonado el extracto acuoso de Ilex paraguaiensis mostró ser más tóxico que el metanólico. El extracto acuoso de Ancoche a bajas concentraciones brindó cierto grado de protección de los cultivos. Las exposiciones repetidas evidenciaron aumento de las respuestas en el pasaje sexto. Las exposiciones crónicas de los cultivos con los extractos durante nueve pasajes consecutivos permitieron observar un aumento de la repuesta citotóxica a partir del cuarto (extracto metanólico) o del quinto (extracto acuoso) tratamiento para Ancoche. En exposiciones crónicas de los cultivos con los extractos durante nueve pasajes consecutivos permitieron determinar un aumento de la repuesta citotóxica a partir del cuarto (extracto acuoso) o del quinto (extracto metanólico) tratamiento para Yerba Mate. Las Cl50 que se determinaron por estos ensayos fueron: Ancoche en extracto acuoso : 500 μg / ml Ancoche en extracto metanólico : 250 μg / ml Yerba Mate en extracto acuoso : 1500 μg / ml Yerba Mate en extracto metanólico : 2000 μg / ml Sería interesante profundizar estas evaluaciones con estudios in vitro complementarios que permitan caracterizar mejor estos productos y asociar, si fuera posible, actividad biológica con estructura química.

Abstract:
The development and use of plant extracts is presently of key importance in the biorational control of plagues and insects. Besides, natural extracts have become increasingly important as dietary components or as beneficial applications, such as ointments or lotions. At the same time, there is an intense advance in the search and implementation of alternative techniques to the animal use in the evaluation of drugs and chemical compounds toxicity. These reasons motivated the interest to carry out studies of cytotoxicicity and genotoxicity on aqueous and methanolic extracts of two regional native plants of Argentina and part of the subtropical area of America: Vallesia glabra or Ancoche and Ilex paraguaiensis or Yerba Mate. These studies were conducted using in vitro techniques based on cell cultures, which underwent three kinds of expositions: I) acute II) repeated lll) chronic Cytotoxicity was evaluated by means of colorimetric staining assays with dyes (Crystal Violet, Neutral Red) or through the measurement of enzymatic activities (Lactic dehydrogenase, Succinate dehydrogenase) or by Protein Concentration assays. Cloning Efficiency assays for each extracts of both plants were also run. Genotoxicity was determined by measurement of the Index of DNA Damage in the Comet assay . From the acute expositions it could be concluded that methanolic extracts of Ancoche displayed greater cytotoxic behavior than aqueous ones by all the tests run. Low concentrations of aqueos extract of Ancoche exhibited certain levels of protection of the cultures. For Ilex paraguaiensis, aqueous extracts resulted as more toxic than methanolic, mostly by means of microscopy observations and Cloning Efficiency. Repeated expositions demonstrated an increase of the response on the sixth passage. Chronic exposure of the cultures with the extracts during nine consecutive passages allowed us to observe an increase of the cytotoxicity on the fourth exposure (methanolic extract) or on the fifth (aqueous extract) treatment for Ancoche. Chronic exposure of the cultures with both extracts of Ilex paraguaiensis during nine consecutive treatment showed an increase of the cytotoxicityon the fourth exposure (aqueous extract) or on the fifth(methanolic extract). Cl50 determined through this assays are: Ancoche ; aqueous extract : 500 μg / ml Ancoche; methanolic extract: 250 μg / ml Yerba Mate; aqueous extract : 1500 μg / ml Yerba Mate; methanolic extract : 2000 μg / ml Chemical composition of the extracts still have to be determined. To better characterize these products and, if possible, to associate biological activity with chemical structure, further complementary in vitro studies have to be carried out.

Franco, Diana Lorena. "Mecanismos moleculares de sensibilización y protección de la apoptosis inducida por TNF-alfa" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La mayoría de las células son resistentes a la apoptosis inducida por TNF-ᵅ y se sensibilizan cuando se inhibe la activad transcripcional de NF-kB o bien en presencia de inhibidores de la síntesis proteica capaces de inhibir la expresión de genes antiapoptóticos. En esta tesis analizamos el rol del estrés osmótico en la apoptosis inducida por TNF-ᵅ. Nosotros encontramos que éste es capaz de sensibilizar a células HeLa resitentes a la apoptosis inducida por TNF-ᵅ y que esta sensibilización involucra, un aumento de la actividad de varias MAPKs, la inhibición de la expresión de Bcl-2 y el aumento en una etapa tardía de la actividad de NF-kB. La muerte ocurre a pesar del aumento de la actividad de NF-kB, cuya inhibición por otro lado causa un aumento mayor de la apoptosis. La proteína quinasa p38 parecería estar involucrada en la activación de NF-kB ya que su inhibición provoca un aumento significativo del efecto del estrés osmótico en la apoptosis inducida por TNF-ᵅ. Se ha demostrado previamente que dosis bajas de TNF-ᵅ tienen un rol sensibilizador a la acción de los glucocorticoides en su protección de la apoptosis inducida por esta citoquina. En este trabajo estudiamos las señales inducidas por TNF-ᵅ que podrían estar involucradas en la regulación de la actividad del receptor de glucocorticoides. Analizamos el rol de las MAPKs en la regulación de las actividades biológicas del receptor de glucocorticoides, en un modelo de células sensibles a la apoptosis inducida por TNF-ᵅ, donde los glucocorticoides son capaces de proteger a las células de dicha muerte. Nosotros observamos que las cinco MAPKs mejor caracterizadas hasta el momento son capaces de fosforilar al GR in vitro y que cuatro miembros de esta familia, JNK, p38, Erk6 y Erk1/2 son capaces de interactuar in vivo. Asimismo vimos que p38 induce la activación transcripcional del GR, incrementa su localización nuclear y su unión a sus secuencias blanco presentes en el ADN. De acuerdo con nuestros resultados, existen mecanismos moleculares que involucran la participación de MAPKs inducidas por TNF-ᵅ, por los cuales la citoquina puede regular la actividad del GR y la sensibilidad a su acción protectora de la apoptosis en el modelo de apoptosis inducida por TNF-ᵅ.

Abstract:
Most cells are naturally resistant to TNF-ᵅ-induced cell death and become sensitized when NF-kB transactivation is blocked or in the presence of protein synthesis inhibitors that prevent the expression of anti-apoptotic genes. We analyzed the role of osmotic stress on TNF-ᵅ-induced cell death. We found that it sensitizes the naturally resistant HeLa cells to TNF-ᵅ-induced apoptosis with the involvement of an increase in the activity of several kinases, the inhibition of Bcl-2 expression and a late increase on NF-kB activation. Cell death occurs regardless of the enhanced NF-kB activity whose inhibition produces an increase in apoptosis. The inhibition of p38 kinase, also involved in NF-kB activation, significantly increases the effect of osmotic stress on TNF-ᵅ-induced cell death. It was previously shown that a low dose of TNF-ᵅ has a priming effect on the glucocorticoid-mediated inhibition to TNF-ᵅ-induced apoptosis. We analyzed TNF-ᵅ induced signals that could be involved in the regulation of GR activities. We also investigated the role of MAPKs in the regulation of GR biological activities in L-929 cells. These cells are sensitive to TNF-ᵅ-induced apoptosis which is prevented by ligand activated GR. We observed that five MAPK family members can phosphorylate GR in vitro and four members of this family: JNK, p38, Erk6 and Erkl/2 can physically interact with GR in vivo. We also found that p38 increases the transcriptional activity of GR, its nuclear localization and its binding to DNA specific sequences. According to our results, there are molecular mechanism that involves MAPKs induced by TNF-ᵅ by which the cytokine may modulate the activity of GR and the sensitivity to their protective role on TNF-a-induced apoptosis.

Fischer, Sylvia. "Dinámica estacional de insectos acuáticos en ambientes efímeros urbanos : con énfasis en los culícidos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los cuerpos de agua temporarios se caracterizan por su ciclo de inundación y sequía recurrente, que impone a los organismos limitaciones para su desarrollo. Algunos insectos han desarrollado adaptaciones que les permiten sobrevivir y reproducirse en este tipo de hábitats, entre las cuales se destacan la dispersión activa (migración) y la presencia de estadios de resistencia (tolerancia fisiológica). En general los organismos que habitan este tipo de hábitats poseen un desarrollo rápido que se completa antes de la desecación del ambiente. Entre los insectos se destacan los mosquitos (Diptera: Culicidae) por su abundancia, aunque también se registran diversas especies de Heteroptera, Coleoptera y Odonata. En los espacios verdes de la ciudad de Buenos Aires se registra gran cantidad de charcos temporarios. El objetivo de este trabajo fue estudiar las variables asociadas con la presencia y abundancia de distintas especies, principalmente culicidos. Se realizó un estudio intensivo de 89 cuerpos de agua temporarios en un parque de la ciudad (Parque Saavedra). Se analizó la relación de la permanencia del agua con variables meteorológicas y morfométricas de los cuerpos de agua. La composición de la fauna de insectos (principalmente culicidos) fue analizada cuali y cuantitativamente en función de diferentes variables (precipitaciones, temperatura, dimensiones de los charcos, hidroperíodo, insolación y cobertura vegetal). Los resultados fueron corroborados mediante información correspondiente a un segundo período de estudio. Las variables asociadas positivamente con la permanencia del agua en los charcos fueron las precipitaciones y las dimensiones, mientras que la temperatura y la vegetación mostraron una relación inversa. Durante el periodo de estudio se registraron 43 taxa de insectos, entre los cuales los culícidos fueron los más abundantes, seguidos de coleópteros y heterópteros. Algunas de las especies registradas son consideradas como pioneras tipicas de hábitats temporarios (Neoplea maculosa, Notonecta sellata, Buenoa fuscipennis, Sigara platensis y Ochlerotatus albifasciatus). La composición de insectos mostró similitudes con la de ambientes acuáticos afines de la región. Las mayores riquezas fueron halladas en la temporada de verano, asociadas con un alto grado de anegamiento y permanencia del agua. La mayor parte de los insectos registrados se dispersa activamente, y también son hallados en hábitats permanentes de la zona. La especie más abundante fue Ochlerotatus albifasciatus, que resiste la sequía mediante huevos de resistencia. Los cuerpos de agua del parque Saavedra pertenecen al extremo efímero del gradiente de duraciones favorables para los insectos estudiados. La abundancia relativamente baja de ejemplares inmaduros de heterópteros y odonatos indica que no serian los sitios de cría óptimos para estos organismos debido a su escasa duración. El grado de anegamiento fue la variable más relacionada con la presencia de las distintas especies de culícidos. Este trabajo aporta un marco general sobre la dinámica de cuerpos de agua temporarios y su comunidad de insectos en una área urbanizada. Esta información permite una mejor evaluación de posibles estrategias de manejo, principalmente apuntadas a las poblaciones de mosquitos, teniendo en cuenta la localización urbana de los hábitats.

Abstract:
Temporary pools are bodies of water that experience recurrent flooding and drying cycles and impose severe constraints to faunal development. Aquatic insects have developed different adaptive strategies to survive and reproduce in this kind of habitats, among which active dispersal (migration) and the occurrence of resting stages (physiological tolerance) are the most important ones. Organisms inhabiting temporary waters are characterised by their rapid development before the pool dries up. Although mosquitoes (Diptera: Culicidae) are among the most abundant taxa in this kind of habitats, several Heteroptera, Coleoptera and Odonata are also frequent. The presence of high numbers of temporary rain pools is characteristic of Buenos Aires city parks. The present work is aimed at describing and analysing the variables associated with the presence and abundance of different insect species, mainly culicids. A total of 89 temporary water bodies were intensively studied in a park of Buenos Aires city (Saavedra Park). Relationships between water permanence and meteorological and morphometric variables in each pool were analysed. Aquatic insect faunal composition (presence and abundance) were analysed as a function of different variables (rainfall, temperature, pool dimensions, hydroperiod, insolation degree and vegetation cover). Results were validated with data from a second study period. Water permanence was positively related to rainfall and pool dimensions, while temperature and vegetation cover showed a inverse relationship. Among the 43 taxa recorded during the study period, culicids were the most abundant, followed by coleopterans and heteropterans. Some of the species are considered typically pioneers in temporary pools (e.g. Neoplea maculosa, Notonecta sellata, Buenoa fuscipennis, Sigara platensis, and Ochlerotatus albifasciatus). Insect faunal composition showed similarities to other temporary waters in Buenos Aires. The highest richness was observed during the summer, in association to high water levels and water permanence. Most of the recorded species disperse actively, and are also observed in permanent habitats of Buenos Aires. The mosquito Ochlerotatus albifasciatus, the most abundant species, withstands drying by means of resistant eggs. The temporary pools at Saavedra park represent an extreme of the gradient of suitable conditions for the studied insects, owing to their ephemeral nature. The relatively low abundances of immatures of heteropterans and odonates suggest that most of the studied rain pools may be unsuitable breeding sites for these predatory taxa because of their short permanence. Water level is the variable most significantly associated to the presence of different species of Culicidae. This work provides a general framework about dynamics of temporary rain pools and their insect community in a urban area. This information allows a better evaluation of management strategies of this kind of habitats, mainly to control mosquito populations.

Ferreiro, Diego U.. "Mecanismo de unión a ADN del dominio C-terminal de la proteína E2 del papilomavirus humano, principal regulador de la expresión génica viral" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La interacción proteína-ADN juega un papel central en la fisiología celular. Dentro de éstas, se identifica al reconocimiento secuencia especifico con un rol regulatorio clave, pues de éstas interacciones depende la orquestación de los patrones de expresión génica de un organismo. Utilizando el dominio de unión a ADN del factor de transcripción E2 del papilomavirus humano, nos propusimos analizar la interacción en condiciones en las cuales fuera posible extraer datos fisicoquímicos precisos del proceso de unión. Confiamos en que la interpretación de éstos en términos termodinámicos provee un marco para relacionar las estructuras proteicas con su funcionalidad biológica Caracterizamos un mecanismo de unión E2c-ADN al equilibrio en el cual E2c presenta dos modos diferentes de unión de ADN diferentes. Estos modos resultan estar estrechamente relacionados con la ocurrencia de poblaciones conformacionales del estado plegado de E2c. Mostramos ademas que ésto no sucede en un homólogo cercano con el que comparte una alta identidad de secuencia y una topología de plegamiento idéntica, sugiriendo que ésto puede estar relacionado con los distintos roles funcionales que E2c presenta. El camino cinétíco de interacción E2c-ADN se inicia con una colisión rápida, limitada por la difusión de las macromoléculas en solución. Esto da lugar a un "complejo de encuentro" estabilizado por interacciones electrostáticas, en el cual E2c tiene la posibilidad de deslizarse sobre la doble hélice. Si el ADN contiene un sitio E2, el complejo sufre fuertes rearreglos conformacionales que, luego de una fase de expulsión de solvente. resultan en la formación de un complejo estable proteina:ADN. Este último paso involucra un ocultamiento de superficie accesible al solvente y es allí donde se consolidan las interacciones cercanas aminoácido-base. Experimentos de doble-mezcla por flujo detenido nos permitieron asignar el orden secuencial de los rearreglos y demostrar que la unión puede también proceder por una ruta macroscópica paralela. caracterizada como de dos estados. Utilizando una estrategia de mutagénesis sitio-dirigida realizamos un mapeo energético de la interfase de unión. Pudimos asignar las contribuciones que cada residuo realiza, en forma aditiva, a la energía libre de asociación. Las asignaciones energéticas resultaron estar en excelente concordancia con las estructuras de alta resolución, y correlacionan con el carácter altamente dinámico de la interfase de asociación. Lon conjuntos de estados de transición del camino cinético fueron analizados con 23 mutantes sitio-dirigidas. Esto nos permitió disectar las contribuciones energéticas de los residuos independientes a nivel atómico e inferir los cambios conformacionales que ocurren durante las etapas de unión y reconocimiento de secuencia. Mostramos que la plasticidad estructural que E2c presenta está íntimamente ligada a su capacidad de reconocimiento sitio-específico. Por último, presentamos un modelo funcional plausible de regular la actividad biológica de E2c y su capacidad de reconocimiento de secuencias de ADN.

Abstract:
Protein-DNA interactions play a central role in cellular physiology. Within these, site specific recognition is a primary topic that underprints the expression profile of whole genomes. Although many biological aspects of these non-covalent interactions are becoming clearer, detailed biophysical understanding of site specific recognition is lacking. Using the human papilomavirus (HPV) E2c transcription factor as a model system we aim a physicochemical dissection of its DNA binding properties. We set-up an spectroscopic binding essay, readily done in solution, which allowed us to quantify DNA binding parameters in energetic terms, detect conformational changes exerted on both macromolecules upon binding and relate them to the high resolution structures available. We characterized an equilibrium DNA binding mechanism where the HPV-16 E2c domain is capable of two distinct binding modes, which correspond to different conformational ensembles of the E2c molecule. Despite having a strong sequence identity and an identical folding topology, a close homolog does not show this behaviour under the same experimental conditions. The differences observed may be related to the distinctive transcriptional roles in which these proteins are involved. The kinetic DNA-binding mechanism is initiated by the diffusion controlled formation of an encounter complex stabilized by electrostatic interactions, in which E2c has the possibility to slide along the DNA duplex. If the target DNA contains an E2-binding site, substantial conformational rearrangements take place, and a solvent exclusion step leads to the formation of a highly stable protein-DNA complex. This last step involves the largest burial of surface area from the interface and the direct readout of the DNA bases is proposed to occur. Double-Jump stopped flow experiments allowed us to characterize the sequence of intermediate events and demonstrate that a last-formed final complex can be formed through a parallel two-state macroscopic route. An extensive site-directed mutagenesis analysis over the entire DNA binding reglon led us assign the energetic contributions of individual sidechains to the overall binding free energy. We show that each sidechain contribute in a small amount to the total free energy in an additive way. These contributions are in excelent agreement with the high resolution structures and correlate with the highly dynamic character of the interface. The transition state ensembles of the kinetic binding pathway were probed with 23 site-directed mutants. This led us to dissect the sidechain energetic contributions at almost atomic resolution, and infer the conformational changes that take place in each kinetic event. We show that the conformational plasticity this protein presents is intimately linked to its DNA recognition capacity. Finally, a plausible biological model for functional E2c regulation and specific DNA recognition is presented.

Fernández, Patricia C.. "La recolección de néctar en la abeja Apis mellífera: actividad recolectora y mecanismos de reclutamiento" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La abeja doméstica Apis mellifera es un insecto eusocial. Esto la constituye en un excelente modelo para estudiar el surgimiento de patrones de comportamiento social a partir de comportamientos individuales. La regulación de la actividad de reclutamiento de abejas a fuentes de alimento con relación a la recompensa que estas fuentes ofrecen es el problema analizado en esta tesis. La hipótesis que guía el análisis experimental presente propone que el número de abejas reclutadas hacia una fuente de alimento está directamente relacionado con la productividad de la misma. Se describe la actividad de reclutamiento a fuentes de néctar durante la recolección individual y colectiva en Apis mellifera. Las condiciones experimentales utilizadas permitieron que cada recolectora cargara parcialmente su buche en la fuente (lo que definimos como condiciones de flujos bajos). Cuantificamos el número de abejas que arribaron a una fuente (la respuesta de reclutamiento) estimuladas por una única recolectora empleada. El número promedio de abejas arribadas se distribuyó dependiendo principalmente de la productividad ofrecida en términos de flujo y concentración de solución azucarada. Además, la respuesta de reclutamiento resultó independiente del número de recolectoras empleadas en la fuente de alimento, de variaciones abruptas en los niveles de recompensa y del nivel de recompensa relativo a aquello que la abeja venía recolectando en visitas previas. Se estableció la importancia relativa de los diferentes mecanismos de transferencia de información relacionados con la actividad de reclutamiento: Algunos parámetros de la danza de contoneo, contactos trofalácticos y el número de estadías en la colmena correlacionaron con el número abejas arribadas. Para los flujos más elevados las abejas arribadas descendieron en la fuente de alimento poco después del descenso de la recolectora empleada, lo que correlacionó con el marcado olfativo de la misma. Por último dado que se trabajó con una misma fuente y un mismo grupo de recolectoras a lo largo de varios días, se correlacionó la experiencia de la recolectora empleada y sus compañeras desempleadas en la colmena. El número de abejas arribadas correlacionó fuertemente con el número de recolectoras desempleadas experimentadas disponibles en la colmena. La experiencia de la recolectora empleada no afectó la respuesta de reclutamiento pero resultó una variable clave que estructura la tarea de recolección colectiva. Estos resultados en conjunto indican que la respuesta de reclutamiento en condiciones de flujos bajos estaría determinada por el nivel de recompensa ofrecido a la recolectora empleada junto con la estimulación diferencial de recolectoras desempleadas que conocían previamente la fuente de alimento.

Abstract:
The honeybee Apis mellifera is an eusocial insect. It provides an excellent model to study how social behavior emerges from the individual one. The relationship between reward rate and the recruitment activity of bees at food sources, is the topic analyzed in this Thesis. This study is based on an hypothesis that propose that the number of bees arrived at a food source is directly related to their profitability. We described the recruitment activity to food sources during individual and collective foraging in Apis mellifera bees. Experimental conditions allowed bees to gather partially their crops at the food source (low flow-rate conditions). We quantified the recruitment response (number of bees that arrived at the food source) elicited by a unique test bee. The mean recruitment response was distributed depending on the food source profitability in terms of concentration and flow-rate of sucrose solution. Moreover, the recruitment response was independent of the number of employed foragers and transient variations in the reward rate. It also was independent of the reward rate collected on previous visits. The contribution of the different recruitment-related behaviors to the recruitment response was evaluated: waggle dance, trophallactic behavior and number of hive-stays correlated with the number of incoming bees. For the highest reward rates, the duration of Nasonov gland exposure at the feeding place was higher, and the arrival of most of the incoming bees occurred shortly after the test bee landed at the feeding platform. Finally we correlated the foraging experience of the test bees and the unemployed ones with the number of incoming bees. The foraging experience of the test bee did not affect the recruitment response but was related to the organization of collective foraging. The number of incoming bees highly correlated with the number of experienced unemployed foragers at the hive. These results as a whole indicate that the recruitment response is determined not only by the reward rate offered to the test bee but also the differential stimulation of unemployed experienced bees from the hive.

Federico, Roque Alejandro. "Reducción del ruido coherente y determinación de la fase óptica en interferometría digital de speckle usando la transformada wavelet" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta Tesis se presentan nuevos métodos basados en la transformada wavelet para filtrar el ruido de speckle y obtener distribuciones de fase en interferometría digital de speckle (DSPI). La performance de estos métodos se determina usando franjas simuladas por computadora y también se muestran aplicaciones en franjas experimentales. El método propuesto para la reducción del ruido de speckle se basa en el descarte de los coeficientes pertenecientes a las sub-bandas de la descomposición wavelet. La performance de este método se analiza y se compara con los resultados obtenidos mediante otras técnicas de filtrado que utilizan el wavelet shrinkage basada en los criterios estadísticos de hard y soft thresholding. Se muestra que el método de descarte de sub-bandas puede reducir más eficientemente el ruido de speckle que otras técnicas de filtrado. También se proponen dos métodos para recuperar la distribución de fase a partir de un único interferograma de DSPI, basados en la transformada wavelet continua y en el uso de una distribución suavizada. Ambos métodos no requieren de la aplicación de un algoritmo de desenvoltura de la fase o la introducción de franjas portadoras en el interferómetro. Estos métodos permiten obtener los gradientes de la distribución de fase a lo largo de un camino de pixels y el mapa de fase se determina por integración. Se demuestra que las franjas que cumplen con el límite asintótico analítico pueden ser procesadas por el método de la transformada wavelet en la aproximación de fase estacionaria. El uso de una distribución de Wigner-Ville con un kernel de suavizado de tipo gaussiano obtiene resultados más precisos que el método de la transformada wavelet continua. Se evalúa la influencia del proceso de filtrado y se discuten las limitaciones adicionales que se presentan en sus aplicaciones.

Abstract:
New methods based on the wavelet transform to reduce speckle noise and to evaluate optical phase distributions in digital speckle pattern interferometry (DSPI) are presented. The performance of these methods is determined using computer simulated DSPI fringes and also experimental data. The method for speckle noise reduction is based on the level-dependent removal of the wavelet coefficients of the transformed image. The performance of this method is analysed and compared with the results obtained with the denoising techniques that use wavelet shrinkage based on soft and hard thresholding criteria. It is shown that the wavelet subband removal method reduces speckle noise and maintains image features more effectively than wavelet shrinkage techniques. To retrieve optical phase distributions in DSPI, the continuous wavelet transform in the stationary phase aproximation and a smoothed distribution are proposed. Both techniques do not need the application of a phase unwrapping algorithm neither the introduction of carrier fringes in the interferometer. Phase gradients are found along a pixel path from a single DSPI image and the phase distribution is finally determined by integration. It is shown that only DSPI fringes that verify the analytic asymptotic limit can be processed with the continuous wavelet transform method. It is also shown that a Wigner-Ville distribution with a smoothing Gaussian kernel gives more accurate results than the methods based on the continuous wavelet transform. The influence of the filtering process to smooth the DSPI fringes and additional drawbacks that emerge when these methods are applied are finally discussed.

Farina, Mariana. "Participación de la progesterona en la regulación de factores moduladores de quiescencia y motilidad uterina durante la preñez y el parto" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La quiescencia miometrial es un requerimiento fundamental de todas las especies para llegar al término de la gestación. La falla en el mantenimiento de la relajación uterina a menudo provoca parto prematuro, una de las principales causas de morbilidad y mortalidad fetal. En este trabajo se investigó el efecto de la progesterona (P4), hormona responsable del mantenimiento de la quiescencia de la musculatura lisa uterina, sobre factores que suprimen o estimulan la actividad contráctil miometrial como el óxido nítrico (NO), el GMPc y las prostaglandinas (PGs). Se estudió el perfil de síntesis de NO y la expresión de las isoformas de NOS uterinas durante la preñez temprana, media y tardía, observándose que la actividad Ca independiente y el nivel proteico de la NOsintasa inducible (iNOS) y la NOS endotelial (eNOS) estaban aumentados durante la gestación y descendían antes del parto. Estos hallazgos mostraron una relación temporal entre los niveles de NO producido por el útero gestante y las concentraciones de P4 sérica. La administración de RU-486, antagonista de la P4, produjo una disminución de la actividad de las NOS y del nivel proteico de la iNOS, mientras que el tratamiento con P4 en los días previos al parto, provocó un incremento en la síntesis de NO y en el nivel proteico de la iNOS. Estos hallazgos muestran que la P4 podría modular la producción de NO durante la preñez. La P4 aumentó la acumulación de GMPc,hecho que fue abolido en parte por la incubación con Aminoguanidina, inhibidor selectivo de la iNOS, sugiriendo que el efecto de la P4 sobre el NO trasciende al GMPc. La producción de PGF2α y PGE2; se encontró disminuida durante la preñez, como así también el nivel proteico de las Ciclooxigenasas (COX) 1 y 2. La P4 inhibió significativamente la liberación uterina de PGF2α y PGE2 y el nivel proteico de la COX-2. A pesar que durante la preñez se detectó baja actividad de la PLA;secretoria, enzima que libera el sustrato de las PGs, no se observó una modulación de la misma por la P4. El metabolismo de la PGF2α evaluado por la actividad de PG dehidrogenasa (PGDH), resultó incrementado durante la preñez y por la administración de progesterona. Estos resultados nos indican que los niveles de PGs estarían modulados negativamente por la progesterona, que actuaría aumentando su metabolismo a través de la PGDH e inhibiendo las COX. Cuando se estudió la posible interrelación entre los sistemas de NO y PGs se observó que la administración in vivo de un inhibidor selectivo de la COX-2 redujo el efecto del RU-486 sobre la síntesis de NO y que las PGs in vitro inhibían la actividad de la NOS. Por otro lado un dador de NO fue capaz de aumentar la síntesis de PGE2 sin modificar la de PGF2α. Estos datos nos permiten sugerir la existencia de una interrelación entre el NO y las PGs en el útero de la rata gestante. Este trabajo demuestra que la progesterona es capaz de modular la síntesis de las principales moléculas involucradas en la regulación de la contractilidad uterina durante la gestación.

Abstract:
Myometrial quiescence is a key factor in all species to accomplish a succesful gestation. The failure to maintain uterine relaxation often results in premature birth, which is one of the main causes of fetal morbidity and mortality. In this work me effect of Progesterone (P4)-the hormone responsible for maintaining the quiescence of uterine smooth muscle- was investigated on several factors that either stimulate or suppress myometric contractile activity, such as nitric oxide (NO), cGMP and prostalglandins (PGs). The profile of NO synthesis as well as the expression of uterine NOS isoforms was studied during early, mid and late pregnancy; Ca-independent activity as well as me levels of NO inducible synthase (iNOS)and endothelial NOS were found to be greater during gestation, and to decrease before birth. These findings revealed a time-response relationship between the NO levels produced by the pregnant rat uterus and the serum P4 levels. The administration of RU-486, a P4 antagonist, caused a decrease in NOS activity and iNOS levels, whereas P4 treatment in the days before labor determined an increase in NO synthesis and iNOS levels. These findings show that P4 might modulate NO production during pregnancy. The amounts of cGMP were increased by P4, and this was partly abolished by incubation with Aminoguanidine -a selective iNOS inhibitor-, suggesting that the effect of P4 on NO transcended cGMP We found a decrease in PGF2α and PGE2 production during pregnancy, and also in the levels of cyclooxygenases (COX) 1 and 2. P4 significantly inhibited the uterine release of PGF2α and PGE2; and also COX-2 levels. Although a low secretory PLA2; -the enzyme that releases the substrate for PGs production- activity was detected during pregnancy, P4 was not found to modulate this activity. PGF2α,metabolism was assessed by PG dehydrogenase (PGDH) activity, which resulted high during pregnancy and as a result of P4 administration. These results indicate that PGs levels might be negativer modulated by P4 which would act by increasing its metabolism through a PGDH stimulation and COX inhibition. Once a possible cross talk between NO and PGs systems was evaluated, we observed that the in vivo administration of a selective COX-2 inhibitor reduced the effect of RU-486 on the NO synthesis, and that PGs inhibited NOS activity in vitro. All in all, this work demonstrates that progesterone is able to modulate the main molecules involved in the regulation of uterus conctractility during pregnancy.

Fabris, Victoria T.. "Contribución de los estudios cromosómicos a la comprensión de los mecanismos de la carcinogénesis hormonal: estudio citogenético de carcinomas mamarios murinos inducidos por progestágenos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El tratamiento prolongado con acetato de medroxiprogesterona (MPA) en ratones de la cepa BALB/c induce carcinomas mamarios de histología ductal, que expresan receptores de estrógenos y progesterona, y son metastásicos en pulmón y ganglio linfático. Estos tumores se mantienen in vivo por pasajes singeneicos, siendo hormono-dependientes (HD) ya que requieren del agregado exógeno del MPA para crecer, y no crecen en animales sin tratar con MPA. Se seleccionaron variantes hormono-independientes (HI) a partir de los tumores HD que comenzaron a crecer en los animales sin MPA. Estos tumores HI son capaces de crecer en animales sin tratar con MPA, pero mantienen los receptores hormonales. Los tumores HI presentan una respuesta diferencial a1 tratamiento con l7-ᵝ-estradiol (E2) y los antiprogestágenos mifepristona y onapristona. Se los clasifica en respondedores, aquellos tumores HI que inhiben su crecimiento in vivo por el tratamiento hormonal, y no respondedores a aquellos que no regresionan por el tratamiento. En la primera parte de este trabajo se estudió el cariotipo de los tumores HD (n=5) y sus variantes HI (n=ll) con técnicas de citogenética clásica (bandeo G) y molecular (hibridación in situ fluorescente, FISH), con el objetivo de relacionar el número de cromosomas y las alteraciones del cariotipo presentes con las características biológicas de los tumores. Tres de los 5 tumores HD (60%) presentaron un número de cromosomas en el rango diploide (ratón normal, 2n=40), mientras que los tumores HD que presentaron números modales en el rango triploide a tetraploide fueron estudiados en pasajes muy avanzados. Los tumores HI en pasajes tempranos presentaron números modales diploides. En pasajes tardíos la mayoría de los tumores HI (8 de los ll estudiados) presentaron cariotipos en el rango triploide a tetraploide. Todos los tumores presentaron alteraciones numéricas y estructurales de sus cromosomas. No se observó una alteración común a todos los tumores, o que estuviera asociada con la dependencia hormonal. Sin embargo, podemos inferir que los tumores con números modales diploides responderán al tratamiento con E2 y antiprogestágenos. Las alteraciones más frecuentes fueron ganancia de los cromosomas 3, 4 y 6 (entre el 50% y 60% de los tumores) y pérdida de los cromosomas 16 y X (en el 70% y 100% de los tumores, respectivamente). En un análisis global, la pérdida del cromosoma X resultó significativa. Se observaron numerosas translocaciones, que involucraron a los cromosomas 4 y 7 con mayor frecuencia (presentes en tres de las cuatro familias tumorales con alteraciones evaluables), observándose el mismo punto de ruptura para el cromosoma 7. Por otra parte, las alteraciones presentes en los tumores HD se conservan en los pasajes tempranos del crecimiento autónomo. En base a estos resultados podemos concluir que los tumores inducidos por el MPA serían diploides, y que con el continuo pasaje in vivo puede aumentar el número de cromosomas. La adquisición de la hormono-indepedencia no es causada por el aumento de la ploidía, y los tumores HI conservarían el cariotipo diploide de los tumores HD en los pasajes tempranos. El aumento del número de cromosomas y la adquisición de nuevas alteraciones sería posterior a la adquisición de la hormono-independencia y ocurriría como consecuencia del aumento de los pasajes. La ocurrencia en pasajes más tempranos de variaciones en el cariotipo observada en los tumores HI con p53 mutado, respecto de los tumores HI con p53 normal, podría estar asociada a las mutaciones en p53. Sin embargo, en el tumor HD la presencia de p53 mutado no está acompañada de inestabilidad cromosómica, sugiriendo que serían necesarios otros factores además de dichas mutaciones. En la segunda parte del trabajo se estudiaron los cambios del cariotipo durante el establecimiento de líneas celulares a partir de carcinomas mamarios murinos HD y HI. Se analizaron las variaciones en ploidía y de las alteraciones cromosómicas a lo largo de los repiques de las 8 líneas celulares obtenidas. Las líneas celulares conservaron el número de cromosomas diploide de los tumores parentales en los primeros repiques, este número de cromosomas aumentó con los posteriores pasajes in vitro, y se estabilizó en el rango triploide en 5 de las 8 líneas celulares, sugiriendo que éste les daría cierta ventaja para el crecimiento en cultivo. Sin embargo, una de las líneas celulares mantiene su cariotipo diploide hasta repiques avanzados. Todas las líneas celulares conservan los cromosomas marcadores de los tumores parentales a través de los repiques, pero 7 de las 8 líneas adquieren alteraciones nuevas desde repiques muy tempranos. Podemos concluir que el aumento de la ploidía se vería favorecido por el avance de los repiques. Por otra parte, los cromosomas marcadores del tumor no se pierden por el continuo cultivo in vitro, pero se favorece la formación de nuevas alteraciones. El conocimiento del cariotipo permitió, además de caracterizar las líneas celulares, discernir sobre el origen de una de las líneas establecidas. En resumen, en este trabajo de tesis se investigó la evolución cariotípica de diferentes tumores mamarios murinos en su evolución desde la hormono-dependencia hacia la independencia, y de las líneas celulares derivadas. En nuestro conocimiento, este es el primer informe del estudio citogenético en relación con la independencia hormonal en tumores mamarios murinos. Los genes ubicados en los sitios de ruptura de las translocaciones observadas, como por ejemplo Aurora C, merecen ser estudiados en investigaciones futuras.

Abstract:
Medroxyprogesterone acetate treatment in BALB/c female mice leads to the development of ductal mammary carcinomas which express estrogen and progesterone receptors and are metastatic in axilar lymph nodes and lungs. They are maintained by syngeneic transplantation in progestin treated female mice disclosing a hormone dependent (HD) pattern of tumor growth. Occasionally hormone independent (HI) variants have been selected. These HI tumors are able to grow without exogenous hormone supply. Some of them are able to regress completely afier l7-ᵝ-estradiol or antiprogestin administration and are so called responsive HI tumors while others are unresponsive to both treatments. In the first part of this study we have investigated the karyotype of 5 HD tumors and of ll HI variants using classic cytogenetic techniques as G banding and molecular approaches as fluorescence in situ hybridization (FISH). The aim of this study was to evaluate possible relationships between ploidy, chromosome markers and acquisition of hormone independence. A near diploid karyotype (2n=40) was found in 3/5 HD while a triploid to tetraploid karyotype was observed in the other two HD tumors which were studied in late passages. In early passages from HI tumors we obtained diploid karyotypes while in advanced passages they were mainly poliploid (8/11 tumors). All tumors showed number and structural chromosomal rearrangements. The tumors studied did not share chromosomal abnormalities neither chromosome markers could be related to HD or HI tumors. However, it seems that in this experimental model it can be inferred that a diploid tumor will be responsive to hormones whereas a poliploid tumor may be HD, responsive HI or unresponsive to hormone treatments. The most frequent chromosomal rearrangements found in individual tumors were gains in chromosomes 3, 4 and 6 (in 50 and 60% of the tumors) and loses in chromosomes 16 and X (70% and 100% respectively). In a global analysis of frequencies only loses of chromosome X were statistically significant. Nearly all tumors disclosed several translocations (22 in 9 tumors studied). Chromosomes 4 and 7 were involved independently in 3 of the 4 tumor families which could be studied. Twice they were together, and in the case of chromosome 7, in the same breakpoint. Abnormalties present in HD tumors were maintained in early passages of HI tumors although later on new rearrangements were observed. It can be concluded that MPA dependent tumors are probably diploid and polyploidy arises by continuous in vivo transplantation. The acquisition of hormone independence is not caused by an increase in ploidy. Conversely, HI tumors may maintain the same diploid karyotype in early passages while progressively losing and acquiring new markets in later passages. SSCP revealed a point mutation in p53 in 4/5 tumors of the same family. The parental HD tumor showed a diploid stable karyotype while the HI variants were poliploid and did not share common markers suggesting that mutated p53 is not uniquely involved in chromosome instability. HI variants may have acquired other alterations that together with mutated p53 may confer this phenotype. In the second part of this study the karyotype of 8 cell lines derived from 2 of these diploid tumors was investigated. Cell lines maintained the diploid karyotype during the early passages and nearly all of them after passage 35 changed to a stable triploid karyotype. Only one cell line, the MC4-L5 remained diploid for more than 45 passages. All cell lines maintained the same chromosome markers than the parental tumors and 7/8 acquired new markers which were different for each cell line and were characterized in this study. It can be concluded that the onset of the cell lines are not defined by increases in ploidy but that in vitro culturing favors their evolution towards a triploid state. The fact that the onset of the cell lines were associated with new different rearrangements suggests that these may favor this event. Thus cytogenetic analysis is extremely important to identify cell lines. In addition, cytogenetic studies helped to determine if one of the cell lines could have been originated as a consequence of an epithelial mesenchymal transition from the same cells or if it could have been originated from a different cell. Summing up, in this thesis we have investigated the evolution of karyotypes of different mammary tumors from a hormone dependent to a hormone independent state and in their derived cell lines. To our knowledge this is the first report on the field studying cytogenetics in relation to hormone independence in mouse mammary tumors. Genes located in breakpoints, such as Aurora C in chromosome 7, deserve further investigations.

Etcheverría, Mariela Patricia. "Geología y petrología de los volcanes cenozoicos Pocitos, Del MEdio y Tul Tul, provinciade Salta, Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el NO de la provincia de Salta, Argentina, en el ambiente geológico de la Puna, existe un grupo de tres estratovolcanes de edad miocena superior (Pocítos, Del Medio y Tul Tul) dispuestos con rumbo noroeste-sudeste vinculados a un lineamiento regional conocido como Cerro Rincón - Cerro Quevar. En disposición transversal al volcán Del Medio se destacan cuatro domos lávicos denominados Pozo Cavado que son posteriores al conjunto nombrado. Sobre la base de la petrografía y los rasgos morfoestiucturales se determinó la secuencia estratigráfica y se estableció la morfogénesis del grupo. Geoquímicamente las composiciones son basáltico-andesíticas y andesíticas para el volcán Pocitos; andesíticas, traquiandesíticas y dacíticas para los volcanes Del Medio y Tul Tul; y andesíticas para los domos Pozo Cavado. Representan a series calcoalcalinas, muy cercanas a las levemente alcalinas, de alto contenido en potasio para el volcán Tul Tul y de potasio medio para los volcanes Pocitos y Del Medio y los domos Pozo Cavado. Los contenidos geoquímicos e isotópicos de Sr y evidencias petrográficas tanto texturales como mineralógicas permiten inferir que los magmas se originaron a partir de mezclas con importante participación de fundidos del manto (baja proporción de fusión) y fundidos corticales y que la cristalización fraccionada habría actuado en forma subordinada. La asimilación de rocas ultramáficas también habría jugado un papel importante. Los diseños geoquímicos ponen en evidencia la influencia del ambiente de subducción en su génesis y las asignan a ambientes transicionales entre arco y retroarco con la excepción de los domos Pozo Cavado, quizá pliocenos, que corresponderían a retroarco, localizando de ese modo, a la región cerca del límite arco-retroarco mioceno superior. La mineralogía de los fenocristales y el quimismo de anfíboles indican una presión de 8 kb para su formación lo que equivale a una profundidad de 26 km para la probable cámara magmática e indica un espesor mínimo de corteza para los tiempos del Mioceno superior (8,6-6,5 Ma).

Abstract:
Pocitos, Del Medio and Tul Tul are three Late Miocene (8,6-6,5 Ma) stratovolcanoes located in the Argentinian Puna, at northwestem Salta province. NW-SE trending, they are associated to a regional structure known as Cerro Rincón-Cerro Quevar lineament. Tentatively Pliocene, Pozo Cavado domes lie perpendicularly to the Del Medio volcano. The volcanic stratigraphy and morphogenesis were established, based on petrographic, geochemical and morphostructural studies. Pocitos volcano is composed of basaltic andesites and andesites, whereas Del Medio and Tul Tul centers encompas andesites, trachyandesites and dacites. Pozo Cavado lavas correspond to andesites. All of them represent calc-alkaline to slightly alkaline series; ranging from medium-K (Pocitos, Del Medio and Pozo Cavado) to high-K (Tul Tul). Sr isotopes, geochemical, mineralogical and textural evidences strongly indicate that the magmas had been originated by mixing of mantle and crustal melts, with low percentage of mantle melting. Fractional crystallization might have played a secondary role. The assimilation of ultramafic rocks might have been important. Trace-element indicate an transitinal signature between arc and back-arc for Pocitos, Del Medio and Tul Tul volcanoes and a retroarc signature for Pozo Cavado domes. Mineralogy and amphibole composition indicate an 8 kb pressure, equivalent to a depth of 26 km for the magmatic chamber, thus constraining the crustal thickness. A subduction-related tectonic setting, close to the boundary arc-retroarc, is inferred for the studied area during Late Miocene times.

Estrella, María Julia. "Metabolismos de alfa y beta-glucanos en bacterias que interaccionan con plantas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las bacterias sintetizan y acumulan diferentes polisacáridos de tipo α y β, los cuales cumplen funciones relevantes en la adaptación a los distintos entornos ambientales y en la interacción de las mismas con otros organismos. Los estudios que realizamos se refirieron especificamente al metabolismo de los glucanos cíclicos y del glucógeno en bacterias del suelo que interaccionan con plantas. Una parte del trabajo estuvo orientada a conocer el tipo de glucano que producen los rizobios que establecen simbiosis con el género Lotus. En dichos estudios se estableció que los glucanos cíclicos producidos por la cepa B. loti NZP 2309 tienen el mismo tipo de unión y estructuras estrechamente relacionadas con los descritos previamente en B. japonicum USDA 110, aunque la estructura de la especie mayoritaria de cada cepa es diferente. La cepa B. loti NZP 2309 produce una mezcla de glucanos cíclicos con uniones β(1-3), β(1-6), que están formados por especies neutras, no sustituidas, con DP= 10, 11 y 12, y la especie cíclica mayoritaria esta ramificada, tiene un DP=11 y está formada por un anillo de 10 residuos de glucosa con un único residuo terminal que forma la rama. La proporción de enlaces glucosidicos que tiene este glucano cíclico es 3:7:1 para las uniones β(1-3), β(1-6)y β(1-3, 6) respectivamente. La comparación de los glucanos cíclicos producidos por las cepas de B. loti NZP 2309 y B. japonicum USDA 110, sugiere que dichas moléculas tienen propiedades hidrofóbicas diferenciales y distinta capacidad de unión con flavonoides de leguminosas. Por otra parte, se observó que ambas cepas de Bradyrhizobium sintetizan in vitro, glucanos cíclicos β(l-3), β(1-6) por mecanismos similares y que dichos glucanos están estructuralmente relacionados. En B. loti NZP 2309 se identificó una proteína de membrana interna de 85 kDa que podría estar involucrada en la sintesis de glucanos solubles β(1-3) y β(1-6); insolubles β(1-3) tipo laminarina, o en la sintesis de ambos compuestos. Las moléculas sintetizadas in vitro están formadas principalmente por enlaces β(1-3), mientras que las moléculas producidas in vivo tienen mayor proporción de enlaces β(1-6). Nuestros resultados sugieren que la síntesis de glucanos cíclicos β(1-3), β(1-6)en Bradyrhizobium sp podria involucrar la formación de un glucano cíclico con uniones β(1-3), al que posteriormente se introducen uniones β(1-6)por transglicosilación, a través de la proteína NdvC Además, determinamos y comparamos el tipo de glucano que sintetizan y acumulan dos cepas de colección de M. loti, y evaluamos si la estrucutra de los mismos está relacionada con la capacidad que tienen dichas cepas para nodular distintas espcecies de Lotus. Se determinó que las cepas M. loti NZP 2213 y NZP 2037 producen glucanos cíclicos neutros y sustituidos con residuos aniónicos y uniones β(1-2), los que son similares a los reportados en otros rizobios de crecimiento rápido. La sintesis de los glucanos de M. loti se realiza a través de una proteína intermediaria que tiene una masa molecular similar a la proteína de 319 kDa reportada en otros rizobios que sintetizan glucanos cíclicos β(1-2).Se estableció que el tipo de glucano producido por las cepas M. loti NZP 2213, NZP 2037 y B. loti NZP 2309 no está relacionado con el rango de hospedante, ya que se determinó que las dos especies de M. loti producen glucanos similares con el mismo tipo de unión y presentan distinto rango de nodulación. Además, se observó que dos cepas con distinto tipo de glucano forman nódulos efectivos en una misma especies de Lotus. Otra parte de la tesis se centró en el metabolismo del glucógeno en bacterias que interaccionan con plantas. Se clonó y caracterizó un fragmento de ADN genómico de B. loti que tiene homologia con el genes de la síntesis de glucógeno y que contiene gran parte del gen glgC y el gen glgA completo, que codifican para las enzimas ADPGlc PPasa y GS, respectivamente. El fragmento clonado es similar a una región presente en el genoma de B. japonicum, indicando que la organización de los genes estructurales del metabolismo del glucógeno en el género Bradyrhizobium está conservada y es diferente a la reportada en otras bacterias. Las secuencias aminoacidicas de la ADPGlc PPasa y GS de B. loti presentan un grado de homologia mayor con las enzimas de B. japonicum que con otras enzimas homólogas de rizobios. La ADPGlc PPasa de B. loti pertenece al grupo V de ADPGlc PPasas que están altamente reguladas ya que se activan por Fru 6P, Fru 1,6 bisP y piruvato. La actividad de esta enzima en nódulos reveló que la ADPGlc PPasa de bacteroides de B.japonicum aumenta con la maduración del nódulo, cuando los mismos todavía tienen actividad reductora de acetileno. Por otra parte, se realizaron experimentos de mutagénesis sitio-dirigida con la ADPGlc PPasa de A. tumefaciens, que se tomó como modelo experimental, para determinar el rol que tienen los residuos de arginina que están conservados y ubicados en la región N-terminal de las ADPGlc PPasas reguladas positivamente por Fru 6P y piruvato. Se determinó que una carga positiva en la posición 32 sería necesaria para mantener la afinidad aparente de las ADPGlc PPasas activadas por hexosas-fosfato y/o piruvato y cualquier modificación de arginina por otro aminoácido que altere el tamaño o la hidrofobicidad, reduce la afinidad aparente por Fru 6P. El comportamiento de las mutantes en la posición 33 respecto a los activadores fue diferente, afectándose de manera más drástica la activación por Fru 6P que la activación por piruvato. La presencia de arginina en la posición 33 es muy importante para la activación de la ADPGlc PPasa de A. tumefaciens y no podría ser reemplazada por otro aminoácido. La presencia de arginina en la posición 45 es importante para la activación de la enzima por Fru 6P pero es poco probable que desempeñe un rol directo en la unión de un efector particular, ya que está completamente conservada entre todas las ADPGlcPPasas bacterianas analizadas.

Estevez, José Manuel. "Aspectos biológicos y químicos del alga roja gymnogongrus torulosus (Hooker et Harvey) Schmitz (Phyllophoraceae, Rhodophyta)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Este trabajo de Tesis abarca cuatro temas principales: l- Aspectos biológicos del alga roja Gymnogongrus torulosus (Phyllophoraceae, Rhodophyta). La ubicación taxonómica del material utilizado se basó en: (i) el análisis filogenético del gen rbcL para las especies del género; (ii) la formación de tetrasporofitos crustosos a partir de carposporas en cultivo. De acuerdo a las evidencias obtenidas, se postula tentativamente la transferencia de Gymnogongrus torulosus (Hooker et Harvey) Schmitz al género Ahnfeltiopsis. Además, se hizo un estudio de la morfología interna del talo por MO y MET. También, se determinó la ubicación de los polisacáridos sulfatados en el talo, encontrándose una distribución uniforme. A nivel de pared celular, se diferenciaron dos estratos: (i) una matriz fibrilar compuesta mayoritariamente por polisacáridos neutros y (ii) una matriz amorfa que se extiende a los espacios intercelulares, compuesta principalmente por pulisacáridos sulfatados. A su vez, se detectó por MET la presencia de una cutícula uniestratificada, “pit plugs” con “cap membranes", y vesículas asociadas al aparato de Golgi. Además, se observó la presencia de cloroplastos anómalos en células medulares. En este trabajo se cuestiona el valor taxonómico de la “inner cap layer" en la ultraestructura de las “pit plugs". 2- Análisis estructural del sistema de polisacáridos. Se estudiaron los extractos acuosos obtenidos a temperatura ambiente y a 90 °C. Los resultados obtenidos muestran la presencia de galactanos híbridos DL con: (l) estructuras mayoritarias de carragenanos de la familia kappa; (2) estructuras minoritarias de agaranos, formadas por un esqueleto de unidades altemantes de β-D-galactosa enlazadas por la posición 3 y unidades de ᵅ-L-galactosa enlazadas por la posición 4, con el siguiente esquema de sustitución: (i) sulfatación parcial en C-4 de la unidad ᵝ y, en las posiciones C-2 y C-3 o solamente en C-3 o C-6 de la unidad ᵅ; (ii) presencia de unidades de 3,6-anhidro- ᵅ-L-galactosa, en parte sulfatadas en C-2, reemplazando parcialmente las unidades de ᵅ-L-galactosa. La caracterización de todo el sistema de polisacáridos permitió estimar que la pared celular de esta alga roja presenta una relación carragenano:agarano ~2:l. La dispersión estructural que presentan estos galactanos sulfatados, plantea interrogantes sobre el significado quimiotaxonómico y filogenético de estos polisacáridos dentro de las algas rojas. 3- Dada la altenancia en la estructura de los carragenanos a lo largo del ciclo vital que presentan las algas rojas pertenecientes a las familias Phyllophoraceae y Gigartinaceae, se estudió la estructura química de los mismos en las fases reproductivas de Gymnogongrus torulosus (Phyllophoraceae) y Gigartina skottsbergii (Gigartinaceae) utilizando FT-IR, RMN ¹³C y métodos químicos de análisis. En base a los resultados obtenidos, se determinó que, para las algas estudiadas: (i) la biosíntesis de carragenanos no está directamente relacionada con el nivel de ploidía de las células que los producen; (ii) el cambio biosintético de carragenanos kappa a lambda (y de carragenanos lambda a kappa) se produce luego de la liberación y durante el desarrollo de las esporas (carposporas y tetrasporas) en las fases macroscópicas correspondientes (tetraspóricas y gametolïticas, respectivamente). 4- Actividad antiviral in vitro de los polisacáridos aislados y caracterizados de Gymnogongrus torulosus contra los virus herpes simplex (HSV-l y HSV-2) y virus dengue (DEN-2). Varias de las fracciones presentan: (i) alta actividad inhibitoria contra ambos tipos de virus, especialmente contra DEN-2. La misma estaría asociada con el bloqueo de la unión inicial virus-receptor celular, por parte de los polisacáridos sulfatados en la etapa de adsorción viral; (ii) ausencia de citotoxicidad para células Vero; (iii) baja o nula actividad anticoagulante. Las fracciones que están compuestas por estructuras mayoritarias de carragenanos son las que presentan una gran actividad antiviral. Por esta razón, la actividad inhibitoria estaría relacionada, al menos en parte, con la sulfatación en C-4 de las unidades B-D-galactosa y en C-2 de las unidades de 3,6-anhidro-ᵅ-D-galactosa. Estas características convierten a estos polisacáridos sulfatados en potenciales antivirales de aplicación tópica para los virus ensayados. Este trabajo presenta dos aspectos importantes a ser remarcados: (l) es la primera vez que se caracteriza un galactano híbrido DL desde el punto de vista de la actividad antiviral; (2) es el primero donde se evalúa la actividad antiviral de polisacáridos de algas rojas contra el virus del dengue (DEN-2).

Abstract:
This Thesis focuses on four major topics: l. Biological features of the red seaweed Gymnogongrus torulosus (Phyllophoraceae, Rhodophyta). The taxonomic identification of this material was based on: (i) phylogenetic analysis of rbcL gene for the species of the genera; (ii) development of the carpospores into crustose tetrasporophytes in culture. According to the evidences obtained, it is postulated tentatively that the red seaweed Gymnogongus torulosus (Hooker et Harvey) Schmitz should be transferred to the genera Ahnfeltiopsis. In addition, the internal morphology of the thallus was analyzed using LM y TEM. The sulphated polysaccharides were characterized all over the thallus, showing a homogeneous distribution. Two strata can be distinguished in the cell wall: (i) a fibrillar matrix, composed principally by neutral polysaccharides, and (ii) an amorphous matrix. extended to the intercellular spaces, composed mainly by sulphated polysaccharides. At the same time. a single-stratified cuticle, pit plugs with cap membrane, vesicles associated to the Golgi body were found by TEM. Also, anomalous chloroplasts were detected in medullar cells. In this work, the taxonomic significance of the inner cap layer on the pit plug fine structure is questioned. 2. Structural analysis of the polysaccharide system. The extracts obtained with water at room temperature and at 90 °C were studied. The results obtained show the presence of DL-galactan hybrids with: (l) carrageenans of the kappa family as major structures; (2) minor structures of agarans, built up mainly by a backbone of alternating 3-linked ᵝ-D-galactose and 4-linked ᵅ-L-galactose units, with the following substitution pattern: (i) partial sulfation on C-4 of the ᵝ-unit and on C-2 and C-3, or only on C-3, or C-6 of the ᵅ-unit; (ii) presence of 4-linked 3.6-anhydro-ᵅ-L-galactose, partially sulphated on C-2, replacing the ᵅ-L-galactose units. The whole cell wall polysaccharide system characterization allowed us to estimate a ratio of carrageenan: agaran of ~2:l for this red seaweed. The structural dispersion of these galactan sulphates, opens the question about chemotaxonomic and phylogenetic significance of these polysaccharides within the red seaweeds. 3. Based on the alternation of carrageenan structures during the life cycle of the red seaweeds belonging to Gigartinaceae y Phyllophoraceae, the chemical structure of these products was studied in the reproductive stages of Gymnogongrus torulosus (Phyllophoraceae) and Gigartina skottsbergii (Gigartinaceae) by FT-lR, ¹³C NMR and chemical methods of analysis. According to the results obtained, we concluded that for the seaweeds studied: (i) there is no direct relationship between the biosynthesis of carrageenans and the cell ploidy; (ii) the switch of kappa to lambda-carrageenan (and from lambda to kappa-carrageenan) happens after the dispersal and during the development of the spores (carpospores and tetraspores) into the macroscopic phases (tetrasporic y gametophytic phases, respectively). 4. In vitro antiviral activity of the isolated and well-characterized polysaccharides of Gymnogongrus torulosus against herpes simplex virus (llSV-l y HSV-2) and dengue virus (DEN-2). Several fractions show: (i) high inhibitory activity against both viruses, especially against DEN-2. It would be associated with the capacity of these sulfated polysaccharides to block the initial virus attachment to the cellular receptors on virus adsorption; (ii) lack of citotoxicity in Vero cells; (iii) low or lack of anticoagulant activity. The highest antiviral activity was observed in fractions composed mainly by carrageenan structures. Therefore, the inhibitory activity could be correlated with sulfation on C-4 of the ᵝ units and C-2 of the 3,6-anhydro-ᵅ-D-galactose units. These results indicate the relevance of these polysaccharides as potent antiviral agents, with promising perspectives of topical application for the viruses essayed. This work presents two remarkable aspects: (l) it is the first time that DL-galactan hybrids are characterized as antiviral agents; (2) dengue virus (DEN-2) is evaluated for the first time against this type of sulfated polysaccharides obtained from red seaweeds.

Espelt, María Victoria. "Mecanismos que determinan la tolerancia a la anoxia celular" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En la presente tesis se estudió la relación entre el volumen celular y los flujos transmembranales de K+ en hepatocitos de goldfish (Carassius auratus) expuestos a condiciones anisosmóticas o a limitación energética. La respuesta de volumen fue luego comparada con aquella presentada por hepatocitos de trucha (Oncorhynchus mykiss) y de rata (Rattus rattus). El volumen celular fue estudiado utilizando video microscopía y microscopía de epifluorescencia, mientras que la medición de los flujos de K+ se estimó a partir de los flujos unidireccionales de 86Rb+. En hepatocitos de trucha y rata, la exposición a medio hiposmótico (180 mosM) a pH 7.45 produjo el aumento de volumen celular seguido por disminución regulatoria de volumen (RVD), respuesta que es mediada por el eflujo neto de KCl seguido de agua. Por el contrario, los hepatocitos de goldfish aumentaron su volumen pero no presentaron RVD en esas condiciones. En hepatocitos de goldfish, si bien la N-etilmaleimida pudo activar la salida de K+, esto no ocurriió cuando las celulas fueron expuestas a medio hiposmótico (120-180 mosM). Se desarrolló un modelo matemático con el fin de analizar las interacciones existentes entre el volumen celular, el potencial de membrana, y la masa de los principales solutos difusibles bajo condiciones anisosmóticas. Este modelo pudo ser utilizado para simular las respuestas volumétricas de los hepatocitos de las tres especies. Los resultados del modelo apoyan la idea de que la ausencia de RVD observada en hepatocitos de goldfish se debe a la ausencia de un elemento sensor de volumen. La comparación entre los resultados obtenidos con el modelo matemático y los resultados experimentales sugiere que los hepatocitos de goldfish poseen una capacidad restringida para desarrollar RVD. El bloqueo de metabolismo energético puede generar gradientes osmoticos por aumento de la osmolaridad intracelular. En el presente estudio, la inhibición de la glucólisis por ácido iodoacético (IAA)no alteró el volumen celular en hepatocitos de goldfish, mientras que en presencia de cianuro (CN), inhibidor de la fosforilación oxidativa, o de CN y IAA (IAA+CN), el volumen celular disminuyó un 3—7%.A pesar de que en los hepatocitos de goldfish la limitación energética no tuvo efecto sobre el eflujo de K+, el influjo disminuyó un 57-66% en presencia de CN y CN+IAA pero no se vio alterada por el IAA sólo. La pérdida de K+ intracelular luego de 20 min de exposición a CN o IAA+CN fue solo de un 4% del K+ intracelular total. En general, los resultados de este estudio sugieren que los hepatocitos de goldfish, a diferencia de las células de especies sensibles a la anoxia, evitan el desacople de los flujos transmembranales de K+ en respuesta a un gradiente osmótico o limitación energética. Esto podría explicar por un lado la incapacidad de estas células para presentar RVD, pero al mismo tiempo la extraordinaria capacidad para mantener las concentraciones intracelulares de K+, prolongando de esta manera la viabilidad celular.

Abstract:
The relationship between cell volume and K+ transmembrane fluxes of goldfish (Carassius auratus) hepatocytes exposed to anisosmotic conditions or energetic limitation was studied, and compared with the volumetric response of hepatocytes from trout (Oncorhynchus mykiss) and rat (Rattus rattus). Cell volume was studied by video- and epifluorescence microscopy, while K+ fluxes were assessed by measuring unidirectional 86Rb+ fluxes. In trout and rat hepatocytes, hyposmotic (180 mosM) exposure at pH 7.45 caused cell swelling followed by a regulatory volume decrease (RVD), a response reported to be mediated by net efflux of KCI and osmotically obliged water. In contrast, goldfish hepatocytes swelled but showed no RVD under these conditions. Although in goldfish hepatocytes a net K+ efflux could be activated by N-ethylmaleimide. this flux was not, or only partially, activated by hyposmotic swelling (120-180 mosM). A mathematical model was developed in order to gain insight into the multiple interactions between cell volume, membrane potential and the masses of diffusible solutes under anisosmotic conditions. This model was successfully used to simulate the volumetric responses of hepatocytes from the three species. Results from the model gave support to the idea that the lack of RVD observed in goldfish hepatocytes is due to the absence of a volume sensor element. A comparison between data predicted by this model and that obtained experimentally suggests that goldfish hepatocytes have a limited capacity to enable RVD. Blockage of the metabolism can be viewed as an osmotic challenge where intracellular osmolarity may increase. In the present work, the inhibition of glycolysis by iodoacetic acid (IAA)did not alter cell volume in goldfish hepatocytes, whereas in the presence of cyanide (CN), an inhibitor of oxidative phosphorylation, or CN plus IAA (IAA+CN), cell volume decreased by 3—7%. While in goldfish hepatocytes, energetic limitation had no effect on K+ efflux, K+ influx decreased by 57-66% in the presence of CN and CN+IAA but was not significantly altered by IAA alone. Intracellular K+ loss after 20 min of exposure to CN and IAA+CN amounted to only 4% of total intracellular K+. Collectively, these observations suggest that goldfish hepatocytes, unlike hepatocytes of anoxia-intolerant species, avoid a decoupling of transmembrane K+ fluxes in response to an osmotic challenge. This may underlie both the inability of swollen cells to undergo RVD but also the capability of anoxic cells to maintain intracellular K+ concentrations almost unaltered, thereby prolonging cell survival.

Edelstein, Alexis. "Epidemiología molecular y caracterización genética del hantvirus Andes causante de síndrome pulmonar en Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
A partir de una zoonosis emergente en el año 1995, se determinó la presencia de un hantavirus asociado al sindrome pulmonar en la Argentina, desconociéndose la magnitud del problema. Este trabajo tiene como objetivo aportar al conocimiento de la infección por hantavirus, su replicación, transmisibilidad ecoepidemiología y caracterización de virus circulantes. El estudio de la caracterización viral de las muestras humanas provenientes de distintas regiones geográficas determinó la existencia de 3 regiones endémicas asociadas a hantavirosis responsables del SPH en nuestro país: La región Norte (Salta y Jujuy) donde se estableció la existencia del linaje viral AND Nort., la región Sur (Rio Negro, Chubut y Neuquén) donde circula el linaje AND Sout,. y la región Central (Provincia de Buenos Aires) donde se detectaron los linajes AND Cent. Lec, AND Cent Plata y AND Cent Bs.As Los distintos análisis filogenéticos realizados sobre las secuencias nucleotídicas de los segmentos genómicos S y M mostraron claramente la evolución monofilética de los hantavirus. En esta evolución, el antecesor del virus Andes sería el virus Laguna Negra. Este análisis filogenético es apoyado por el aparente desplazamiento migratorio realizado por los Sigmodontinos desde América del Norte hasta el extremo sur del continente. Dentro del grupo Andes, la divergencia evolutiva no resultó tan clara, probablemente debido a que este grupo monofilético es de reciente radiación. Se obtuvo por primera vez la secuencia completa del virus Andes amplificándose y secuenciándose los segmentos S y M correspondientes al genoma viral y una porción del segmento L. Del análisis de dicho genoma se identificó al virus Andes como una nueva especie viral. Se determinó además para los 3 segmentos virales, la composición nucleotídica no putativa de sus extremos, responsables de la estabilidad del ARN viral y asociados además a su replicación /trascripción. A diferencia del segmento S, los segmentos M y L presentaron deleciones en ambos extremos posiblemente asociadas a la regulación de la persistencia viral. El análisis del brote ocurrido en El Bolsón en el año 1996, demostró por primera vez en el mundo, la existencia de un hantavirus capaz de transmitirse a través de contacto interhumano. Esta vía de contagio representó un evento único entre los hantavirus del grupo renal y pulmonar, solamente asociada hasta el momento al linaje Andes Sout. Con el objeto de determinar las posibles alteraciones genéticas asociadas a la vía de contagio interhumano hallada en Andes Sout, se amplificaron y secuenciaron en forma completa los segmentos S y M de un hantavirus perteneciente al linaje Andes Cent Plata, hasta el momento no asociado a contagio interhumano. La comparación de los segmentos S y M de las cepa transmisora y no transmisora no presentó diferencias estructurales significativas. La transmisión interhumana no parecería ser dependiente de la cepa viral requiriéndose la evaluación de factores alternativos como la carga viral o la respuesta inmune dependiente del huésped. Los hallazgos del presente trabajo de tesis aportaron las bases para el estudio de los mecanismos que influyen en la interrelación genética-viral y los aspectos biológicos tales como factores ambientales y ecológicos, cuyos efectos provocan alteraciones demográficas en huéspedes infectados y susceptibles, que conducen a la emergencia de enfermedades zoonóticas humanas.

Abstract:
From an emergent zoonosis in 1995, it was determined the presence of hantavirus associated to the pulmonary syndrome in Argentina, not knowing the magnitude of the problem. This work takes as target to reach to the knowledge of the infection with hantavirus, its replication, contagiousness, ecoepidemiology and characterization of circulating viruses. Viral characterization of human samples from different geographic regions determined the existence of 3 endemic regions associated to hantavirus illness responsible for the hantavirus pulmonary syndrome in our country: north region (Salta and Jujuy) where settled down the existence of viral lineage AND Nort., south region (Rio Negro, Chubut and Neuquén) where circulates lineage AND Sout. and central region (Province of Buenos Aires) where cocirculate lineages AND Cent. Lec, AND Cent Plata and AND Cent Bs.As. The different phylogenetic analyses realized on the sequences of the genomic segments S and M clearly showed a monophyletic evolution of the hantavirus. In this evolution, the predecessor of the virus Andes would be the virus Laguna Negra. This phylogenetic analysis is supported by the apparent migratory displacement realized by the sigmodontines from North America up to the south end of the continent. Inside the group Andes, the evolutionary difference did not turn out to be so clear, probably due to the fact that this monophyletic group is of recent radiation. The complete sequence of Andes virus was obtained for the first time through complete S and M segments amplification corresponding to the viral genome and a portion of segment L. The analysis of this genome identified Andes virus as a new viral species. It was determined in addition for the 3 viral segments, the non putative nucleotidic extremes sequences, which are responsible of RNA viral stability and associated in addition to its replication/trascription. Unlike S segment, segments M and L displayed deletions in both extremes possibly associated to the regulation of viral persistence. Analysis of the outbreak happened in El Bolsón in the year 1996, demonstrated for the first time in the world, the existence of a hantavirus capable of being transmitted across interhuman contact. This route of contagion represented a unique event between hantaviruses of renal and pulmonary group, only associated up to the moment with the lineage Andes Sout. In order to determine the possible genetic alterations associated with the route of interhuman infection found in Andes Sout, the complete S and M segments of a hantavirus belonging to the lineage Andes Cent Plata, not associated to interhuman infection until the moment, were amplified and sequenced. The comparison of segments S and M of the transmitting and nontransmitting lineages did not display significant structural differences. The interhuman transmission would not seem to be dependent of the viral lineage requiring the evaluation of alternative factors like viral load or immune response dependent of the guest. The findings of the present thesis work contributed the bases for the study of the mechanisms that influence in the genetic-viral interrelation and the biological aspects such as environmental and ecological factors, whose effects cause demographic alterations in infected and susceptible guests, who lead to the emergency of human zoonotic diseases.

Durman, Sandra Beatriz. "Grupos de compatibilidad miceliana (MCGs) en poblaciones Bonaerenses de Sclerotinia Sclerotiorum" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este estudio se obtuvieron 142 aislamientos de Sclerotinia sclerotíorum (Lib.) DeBary en un área de 25000 km² dentro de la provincia de Buenos Aires,provenientes de cultivos de soja, lechuga y girasol. Se distinguieron 49 grupos de compatibilidad miceliana (MCGs),de los cuales 28 estaban constituidos por dos o mas aislamientos. Las diferentes poblaciones de S. sclerotíorum estaban compuestas por numerosos MCGsy compartieron un perfil de frecuencias de MCGs similar, independientemente del hospedante o del sitio. La aparición de los MCGs difirió entre los diferentes cultivos, solo se encontraron dos MCGs en común entre los tres hospedantes, y aproximadamente el 60% de los MCGs fueron exclusivos para cada uno de ellos. El índice de diversidad de Shannon para los MCGs fue de 0.314 y el 98.4% de la diversidad total correspondió a variaciones dentro de las poblaciones. Las características morfológicas no fueron significativamente diferentes entre MCGs, excepto por el crecimiento miceliano en medio sólido y en medio liquido, y por la cantidad de esclerocios producidos por caja de Petri. Sin embargo, varios de los caracteres morfológicos pudieron relacionarse con el sitio o el hospedante al cual pertenecían los aislamientos. La fecundidad no fue diferente entre los MCGs, si bien pudieron detectarse aislamientos individuales especialmente fecundos. Sobre la base del ensayo in vitro sobre peciolos de apio, no pudieron detectarse diferencias en la agresividad entre los MCGs, siendo mas agresivos los aislamientos provenientes tanto de cultivos de girasol como los recolectados en 9 de Julio y Otamendi. El viraje del colorante azul de bromofenol (BPB),provocado especialmente por la liberación de ácido oxálico, pudo correlacionarse con la cuantificación de dicho ácido por espectrofotometría. Sin embargo, con las condiciones utilizadas en este trabajo no fue posible asociar la liberación de ácido oxálico con la agresividad. Las diferencias en la capacidad para liberarlo variaron entre los MCGs, y entre los aislamientos según su sitio u hospedante de origen, independientemente del método utilizado. El estudio de diferentes medidas fitosanitarios para el control de este patógeno demostró que aunque el uso de fungicidas de la familia de los bencimidazoles puede resultar muy efectivo, existen MCGs que se ven significativamente menos afectados que otros. Otras medidas menos convencionales, tales como la solarización, el anegamiento o el control biológico, no pudieron establecer efectos diferenciales sobre los MCGs, ni sobre los aislamientos según su origen. Un último análisis utilizando las herramientas de la taxonomía numérica indicó que las variables podian agruparse, en varios casos, coincidiendo con su naturaleza, morfológica o fisiológica. Por otro lado, ese mismo analisis evidenció una interesante asociación entre aquellos MCGs mas frecuentes, indicando que estarían compartiendo varias características en común que los harían altamente exitosos al momento de verse reflejados en mayor número en las muestras. A pesar de que los analisis estadísticos detectaron diferencias significativas entre los MCGs a partir de varios de los caracteres analizados, el gran solapamiento de estas diferencias significativas ha impedido establecer grupos discretos claramente definidos a partir de estos caracteres.

Abstract:
In this study 142 isolates of Sclerotinia sclerotiorum (Lib.)DeBary were obtained in a 25000-km² area of the Buenos Aires province, collected from soybean, Lettuce and sunflower fields. Forty-nine mycelial compatibility groups (MCGs) were distinguished overall, 28 of which consisted of two or more isolates. Each of the S. sclerotiorum populations were made up by numerous MCGsand shared a similar frequency profile regardless the host or the site. The occurrence of the MCGs differed among the crops, it was only found two MCGs shared by the three hosts and approximately 60% of the MCGs were unique for each one. The Shannon diversity index for the MCGs was 0.314 and 98.4% of total diversity corresponded to variations of diversity within populations. Morphological characteristics were not significantly different among MCGs, except for the mycelial growth in solid medium and in liquid medium, and for the number of sclerotia produced by Petri plate. Anyway, some of the morphological characters could be related to the site or the host to which the isolates belonged. Fecundity it was not different among MCGs, though some especially fecund isolates could be detected. On the basis of the detached celery petiole assay, it was detected no differences in aggressiveness among MCGs,being more aggressive isolates from sunflower crops and those collected at 9 de Julio and Otamendi. Turning of bromophenol blue dye (BPB),mainly caused by oxalic acid releasing, could be correlated to the spectrophotometric quantitation. But in the present conditions it was not possible to associate oxalic acid releasing with aggressiveness. Differences in ability to release varied among MCGs,and among isolates according their site or host source, irrespective of the used method. The study of different phytosanitary measures for the control of this pathogen showed that though the use of fungicides from benzimidazol family could be very effective, some MCGs were significantly less affected than the others. Others measures, less conventional, such as solarization, flooding or biologícal control, could set neither differential effects on MCGs,nor on isolates according to their source. A last analysis made with the tools of numeric taxonomy indicated that the variables could be grouped, in many cases, in agreement with their nature, morphological or physiological. In addition to that, the same analysis made evident an interesting association among those more frequent MCGs,painting out that such MCGs could be sharing some common characteristics, that made them more successful as to be the most sampled. In spite of the significant differences detected among MCGsby the statistical analysis in many of the analyzed characters, the high overlapping of these differences has made impossible to establish discrete groups clearly defined from those characters.

Dorfman, Verónica Berta. "Neurotransmisores y sus receptores en la médula espinal de ratas diabéticas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La diabetes es un desorden endócrino-metabólico asociado con alteraciones funcionales que entre otras incluye una disfunción sexual. Un gran porcentaje de pacientes diabéticos de sexo masculino presentan trastornos de disfunción sexual asociados a problemas de impotencia en los estadios avanzados de ésta patología. La región lumbosacra de la médula espinal interviene en la inervación del pene a través de los nervios pélvicos y pudendos regulando de esta manera los mecanismos de erección peneana y de eyaculación. El objetivo de este trabajo fue investigar los factores, que pueden estar modulando este mecanismo en la diabetes experimental. Para ello se estudiaron las características morfológicas y bioquímicas de la región lumbar6/sacro1 de la médula espinal de animales con diabetes inducida por tratamiento con estreptozotocina utilizando además otros modelos que también presentan una disminución en la respuesta sexual. Metodología: Se utilizaron: l- ratas macho con diabetes inducida por estreptozotocina con o sin tratamiento con insulina, 2- ratas con hipogonadismo funcional obtenido mediante tratamiento neonatal con monosodio glutamato (MSG), 3- ratas macho gonadectomizadas (GDX) y/o adrenalectomizadas (ADX) con o sin el tratamiento hormonal correspondiente, y 4- ratas macho intactas desde los 10 dias de vida hasta los 20 meses de edad. La médula espinal fue extraída por laminectomia dorsal y el tejido procesado según correspondiere al tipo de ensayo a realizar. Para los estudios morfológicos de los núcleos motores, se utilizaron técnicas histológicas (tinción de Nissl o tinción con tetraóxido de osmio) seguidas del análisis por microscopía óptica o microscopía electrónica. Los distintos factores probablemente involucrados en la regulación de los mecanismos de erección peneana y eyaculación fueron estudiados utilizando diversas técnicas tales como: autorradiografia cuantitativa para evaluar cambios en los receptores del sistema GABAérgico tipo GABA-B, GABA-A y sitios de unión para benzodiacepinas; los receptores mu- y delta-opioides y los receptores para los neuropéptidos ocitocina y vasopresina. La técnica de cromatografía líquida de alta performance fue utilizada para evaluar los niveles tisulares de los aminoácidos GABA y glutamato. Técnicas de radioinmunoensayo fueron utilizadas para determinar los niveles de testosterona plasmática y los niveles de beta-endorfinas tisulares. La técnicas inmunohistoquímica fue utilizada para determinar la localización y expresión del factor de crecimiento insulinico de tipo l (IGF-I) y la técnica histoquimica de reactividad NADPH diaforasa fue utilizada para el estudio de neuronas nitrérgicas. Resultados: Los animales diabéticos mostraron una reducción significativa del volumen del núcleo espinal del bulbocavemoso (sexualmente dimórfico), respecto al grupo control, como consecuencia de una reducción en el tamaño de sus motoneuronas, que presentaron signos de degeneramiento neuronal. Todas las alteraciones fueron revertidas por insulina. Los sistemas de neuromoduladores estudiados presentaron alteraciones en los animales diabéticos así como en los animales con alteraciones endócrinas. El estudio del sistema GABAéigico presentó marcación específica de los receptores en asta dorsal y región central, con aumento significativo en la densidad de los receptores tipo GABA-B en los animales diabéticos respecto al control, con una disminución en la afinidad y un aumento en el número total de sitios de unión. Los sitios receptores de tipo central para benzodiacepinas presentaron una disminución significativa de su densidad, asociada con disminución en la afinidad y en el número de sitios totales en animales diabéticos. En ambos casos los valores alterados volvieron a su nivel control con el tratamiento de insulina. Los receptores tipo GABA-A presentaron un aumento solo en los animales diabéticos tratados con insulina. El sistema GABAérgico presentó también alteraciones en animales GDX ó ADX y una disminución en los niveles de receptores, progresiva con la edad. Por otro lado los niveles de GABA mostraron una disminución significativa en la médula espinal de ratas diabéticas. En el estudio del sistema opioide se observó presencia de los receptores tipo mu y delta en el asta dorsal, con disminución significativa de los tipo mu, asociada a un aumento en la constante de disociación, en animales diabéticos que fue revertida por tratamiento con insulina. No se evidenciaron cambios en los receptores tipo delta. Los animales con diabetes experimental presentaron un aumento significativo en el contenido de beta-endorfinas en la medula espinal. No se observaron diferencias en los receptores mu-opioides por GDX y/o ADX. El análisis del sistema de receptores para ocitocina y para vasopresina demostró marcación específica para ambos receptores, el primero en asta dorsal y el segundo sobre los núcleos pudendos. El receptor para ocitocina presentó disminución significativa de su densidad en animales diabéticos y en animales MSG respecto a sus grupos control, y el receptor para vasopresina también se mostró alterado con la diabetes. En ambos casos los valores se normalizaron por el reemplazo con insulina. Además los receptores para vasopresina presentaron una disminución significativa en ratas hembras intactas respecto a machos intactos. Los animales GDX y los ADX presentaron disminución de la densidad de los receptores para vasopresina respecto a su control. Además se observaron diferencias significativas entre hembras y machos con menor expresión de estos receptores en los núcleos sexuales dimórficos del primer grupo. El estudio de IGF-I permitió describir la presencia de este factor las láminas IV y V del asta dorsal y en los entrecruzamientos fibrosos de la comisura gris ventral al epéndimo con disminución significativa del área de expresión en animales diabéticos, en animales tratados neonatalmente con MSG y en animales GDX. El estudio de la actividad NADPH-diaforasa demostró la presencia de la NOS en las neuronas de: las astas dorsales, de la región circundante al epéndimo, de la columna celular intermediolateral y de los núcleos motores pudendos, presentando alteraciones morfológicas y de actividad enzimática en los diabéticos y su reversión por tratamiento con insulina. Conclusiones: Los factores neuromoduladores estudiados se ven alterados en la diabetes experimental inducida por estreptozotocina, y esta variación podría ser generada tanto por la falta de insulina per se o por la hiperglucemia crónica, como por las alteraciones de los ejes gonadal y adrenal que ocurren en esta patología. Las alteraciones en los factores neuromoduladores podrían estar involucrados en la regulación de los mecanismos de erección peneana y eyaculación modulando el tono muscular peneano a través del nervio pudendo y/o la dilatación vascular que regula el flujo sanguíneo a través del nervio pélvico. Estos estudios aportan información de importancia para comprensión de la fisiopatología de la disfunción sexual relacionada con la erección peneana ya sea durante estadios avanzados de la diabetes, o en modelos con analogía endócrina, que podrán permitir el desarrollo terapéuticas para un mejoramiento en la.calidad de vida del individuo afectado.

Abstract:
Diabetes is an endocrine-metabolic disorder that has been associated with functional alterations including sexual impotence. A great percentage of male diabetic patients show sexual dysfunction associated to impotence at later stages of this pathology. The lumbosacral region of spinal cord innervates the penis through pelvic and pudendal nerves and regulates the penis erection and ejaculation mechanisms. The aim of this work was to study changes on the possible factors involved in the modulation of these mechanisms in the experimental diabetes model. Morphological and biochemical characteristics of the lumbar6/sacral1 spinal cord were evaluated using streptozotocine (STZ)-induced diabetic rats and other models with a known diminished sexual response. Methods: The animal models used were: 1- STZ- induced diabetic male rats with or without insulin treatment, 2- Animals neonatally treated with glutamate monosodium (MSG), 3- Animals that were gonadectomized (GDX) and/or adrenalectomized (ADX) and then treated or not with the corresponding hormone, and 4- Intact male rats from 1O days old to 20 months old. Spinal cords were removed by dorsal laminectomy and the tissue was processed according to the assay. Histological methods (Nissl or osmium tetroxide staining) were used to evaluate the morphology of the different motor nuclei. Tissue sections were analysed by optical or electronic microscopy. Different factors involved in penile erection and ejaculation were studied using different techniques such as: Quantitative autoradiography to study GABAergic receptors system GABA-B, GABA-A and benzodiazepine receptors sites, mu- and delta-opioid receptors and oxytocin and vasopressin receptors. High performance liquid chromalography to evaluate tissular levels of GABA and glutamate amino acids. Radioimmunoassay techniques were used to determine plasmatic testosterone levels and tissular beta-endorphins. Immunohistochemical technique was used to determine IGF-I, and histochemical NADPH-diaphorase reactivity technique was used to study nitrergic neurons. Results: Diabetic animals showed a significant reduction in the volume of the spinal nucleus of the bulbocavernosus as a consequence of a decrease in motoneuronal size. These neurons also presented some neuronal degeneration signs. All alterations were reverted by insulin treatment. All the studied systems showed changes in the diabetic animals as well as in those animals with endocrine alterations. The evaluation of the GABAergic system showed specific labelling at the dorsal horn and central region of the spinal cord. A significant increase in the GABA-B receptors density was found in diabetic rats, this was associated with a decrease in the affinity and an increase in the total number of binding sites. Moreover GABA levels showed a significant decrease in spinal cord of diabetic rats. The benzodiazepine receptor sites showed a significant density decrease in diabetic animals, associated with a decrease in the affinity and the total binding sites. In both cases insulin treatment was able to restore the altered receptor values. GABA-A receptors showed a significant increase in the diabetic animals that were treated with insulin. The GABAergic system also showed changes in GDX, ADX animals and a time depending decrease of the receptors levels with age. The study of the opioid system showed the presence of mu- and delta-opioid receptor types in the dorsal horn with a significant decrease of the mu receptor type in diabetic rats. These changes were associated with an increase in the dissociation constant that could be reverted with insulin treatment. There were not changes in delta-opioid receptors type density. Experimental diabetic animals showed a significant increase in the beta-endorphins content at spinal cord. No changes were observed on the opioid receptors on GDX and/or ADX animals. Oxytocin receptors were found on the dorsal horn of the spinal cord meanwhile the specific binding for vasopressin was seen on the pudendal nuclei. Receptor binding sites for both neuropeptides showed a significant decrease in diabetic animals and oxytocin showed similar results in MSG animals. In both cases the changes were restored to control values after insulin treatment. Vasopressin binding sites showed a significant decrease on GDX and ADX animals. Moreover, when intact animals of both sexes were compared, females also showed lower amount of vasopressin analogue binding than in male tissue. IGF-I immunoreactivity was observed in layers IV and V of dorsal horn and in the ependimal ventral grey commissure. A significant reduction of the expression area was seen in diabetic animals, as well as in the MSG and GDX animals. The NADPH-diaphorase reactivity showed the presence of nitrergic neurons at: the dorsal horns, the ependimus, the intermediolateral cell column and at the motor pudendal nuclei. Changes on the morphological cell characteristics as well as on the enzymatic activity was seen in diabetics animals being these changes reverted by insulin treatment. Conclusions: The neuromodulator factors evaluated were all altered in the STZ induced diabetic animals and those variations could be generated by insulin lack “per se”, by the chronic hyperglycemia, or by alterations in the gonadal and adrenal axis seen in this pathology. The observed alterations may be involved in the regulation of penile erection and ejaculation mechanisms regulating the penile muscular tone through pudendal nerve or the vascular dilatation regulating the blood flow through the pelvic nerve. These studies provide important information to the comprehension of the pathophysiology of the sexual dysfunction related with the penile erection during advanced stages of diabetes as well as in models with endocrine analogy. They may allow the development of new therapeutic strategies to improve the life quality of affected patients.

Distéfano, Ana Julia. "Caracterización molecular del Mal de Río Cuarto virus (MRCV) del maíz : estudio de los segmentos genómicos S1-S6, S8 y S10 y de las proteínas codificadas por los mismos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El Mal de Rio Cuarto es la principal enfermedad del maíz en la Argentina. Es causado por el Mal de Río Cuarto virus (MRCV) y transmitido por una chicharrita de la especie Delphacodes kuscheli. El MRCV pertenece a la familia Reoviridae, género Fijivirus, y tiene la propiedad de multiplicar tanto en plantas de maíz como en el insecto vector. Las particulas virales consisten en una cápside icosahédrica formada por una doble capa de proteínas y contiene en su interior lO segmentos genómicos de RNA de doble cadena (dsRNA) llamados Sl a SlO, siendo el tamaño del genoma de aproximadamente 29 kbp. En los últimos años, y en muchos casos en paralelo con el desarrollo de éste trabajo, se han reportado las secuencias de algunos segmentos de virus relacionados: el MRDV (Maize rough dwarf virus), el FDV (Fiji disease virus), el ODSV (Oat sterile dwarf virus), el genoma completo del RBSDV (Rice black streaked dwarf virus) y del NLRV (Nilaparvata lugens reovirus). En este trabajo se clonaron, secuenciaron y analizaron los segmentos genómicos Sl, S2, S3, S4, S5, S6, S8 y SlO completos del MRCV. Se determinó que todos los segmentos genómicos analizados poseen secuencias 5’ y 3’ terminales conservadas y características del serogrupo al cual pertenece el MRCV: 5’AAGUUUUU3’ (extremo 5’) y 5’CAGCUnnnGUC3’ (extremo 3’). Adyacente a los extremos conservados se encuentran repeticiones de 7 a 12 nucleótidos invertidas e imperfectas que son segmento específicas. La predicción de la estructura secundaria de las cadenas codificantes de todos los segmentos estudiados, muestra que las regiones terminales son capaces de formar estructuras secundarias determinadas y estables que fueron propuestas como señales de replicación y empaquetamiento en virus del género Rotavirus. Se compararon las secuencias de nucleótidos obtenidas y las secuencias de aminoácidos deducidas con las secuencias de otros reovirus depositadas en las bases de datos, y se identificó la presencia de motivos característicos, a menudo indicativos de función. Se determinó que el MRCV Sl codifica para una proteína básica de 168,4 kDa que contiene motivos conservados en las RNA polimerasas dependientes de RNA y es homóloga a las RNA polimerasas codificadas por los virus RBSDV, FDV y NLRV, asi como a las codificadas por miembros de otros géneros de la familia Reoviridae. El MRCV S2 codifica para una proteína de 134,4 kDa y posee homología con las proteínas codificadas por el RBSDV S4, el FDV S2 y NLRV S2. En este trabajo presentamos evidencias de que la proteína codificada en éste segmento es no estructural. El MRCV S3 codifica para una proteína de 141,7 kDa, y hemos demostrado que es la proteína mayoritaria de la cápside interna o “core” viral y posee una alta homología con las proteínas correspondientes codificadas por el RBSDV S2 y FDV S3. El MRCV S4 codifica para una proteina de 131,7 kDa y su función se desconoce. Presenta una relativamente alta homología con miembros del género Fijivirus como así también con otros miembros de la familia Reoviridae. El MRCV S5 codifica para una proteína de 106,9 kDa cuya función se desconoce. Esta proteína presenta homología con las proteínas codificadas por los segmentos S5 del RBSDV y del FDV. El MRCV S6 codifica para una proteína de 90 kDa cuya función se desconoce. Esta proteína presenta una llamativa baja homología con las proteínas codificadas por los segmentos S6 del RBSDV y del FDV. El MRCV S8 codifica para una proteína de 68,3 kDa que contiene un motivo de unión de ATP/GTP que es característico de helicasa. Además la proteína es homóloga con las proteínas codificadas por el RBSDV S8, el MRDV S7, el OSDV S9 y el NLRV S7, todas con probable función de helicasa. El MRCV SlO codifica para una proteína de 63,5 kDa y su probable función sería la de proteína de cápside externa. Esta proteína presenta una alta homología con las proteínas correspondientes codificadas por los segmentos SlO de los virus RBSDV, MRDV y FDV. El análisis de los valores de homología encontrados entre los distintos segmentos del MRCV y los segmentos de virus relacionados, apoyaría la idea de evolución independiente de cada segmento viral. El análisis filogenético realizado con las secuencias obtenidas del MRCV permitió proponer que a pesar de que el MRCV está relacionado con el MRDV y el RBSDV, debe ser considerado una especie diferente del género Fijivirus (Distéfano y col., 2002) y no una raza geográfica del MRDV, como había sido inicialmente propuesto. El análisis filogenético realizado con las secuencias de aminoácidos de polimerasas representativas de todos los géneros de la familia Reoviridae mostró la existencia de dos grupos evolutivos separados: uno agrupa a los Orthoreovirus, Aquareovirus, Orbivirus y Rotavirus, y otro agrupa a los Fijivirus, Cypovirus, Olyzavirus y Coltivirus. Se expresaron algunos de los segmentos virales en estudio en bacterias obteniéndose proteínas de fusión con un péptido rico en histidinas que facilita su posterior purificación. Se obtuvieron antisueros policlonales contra las proteínas codificadas por los segmentos S2, S3, S4 y S6. El antisuero obtenido contra la proteína codificada por el MRCV S3 fue capaz de reconocer específicamente una de las proteína estructurales presentes en partículas virales purificadas del MRCV en un ensayo de “Western blot”. Esta proteina correspondería a la proteína mayoritaria de la cápside interna o “core” viral. En un experimento complementario, un antisuero obtenido contra las proteínas de la partícula viral fue capaz de reconocer a la proteína del MRCV S3 expresada en bacterias. Asimismo el antisuero obtenido contra la proteína codificada por el MRCV S3 reconoce una proteína de tamaño similar al esperado en extractos de plantas enfermas. Mediante experimentos de inmunomicroscopía electrónica sobre cortes de hojas de maíz infectadas el con MRCV se confirmó que la proteína codificada por el S3 del MRCV es una proteína estructural del virus y se demostró que forma parte del “core” viral El antisuero obtenido contra la proteína codificada por el MRCV 82, reconoció específicamente a una proteína de menor tamaño al esperado en extractos proteicos totales de plantas enfermas. Mediante experimentos de inmunomicroscopía electrónica sobre cortes de hojas de maíz infectadas el con MRCV se confirmó que la proteína codificada por el S2 del MRCV seria una proteína no estructural presente en los viroplasmas. En experimentos de “Far-Western blot” se observó que la proteína codificada por el MRCV S3 era capaz de interactuar consigo misma, con una proteína de 130 kDa que correspondería a la espícula viral de tipo B y con la RNA polimerasa dependiente de RNA codificada por el MRCV Sl. En Rotavirus se demostró que las proteínas equivalentes interaccionan entre sí. Los resultados presentados en este trabajo contribuyeron al avance en el estudio del virus que causa la enfermedad del Mal de Río Cuarto, a la clasificación taxonómica del mismo y al estudio de su origen evolutivo. Además los datos obtenidos permitieron el diseño de una estrategia de resistencia al MRCV en plantas transgénicas de maíz basada en el desencadenamiento del silenciamiento génico post-transcripcional (PTGS).

Abstract:
Mal de Río Cuarto is the most important maize disease in Argentina. lt is caused by the Mal de Río Cuarto virus (MRCV) and transmitted by the planthopper Delphacodes kuschell. MRCV belongs to the Reoviridae family, Fijivirus genus, and has the interesting feature of being able to multiply both phloem cells of maize plants and in vector insects. The viral icosahedral double-shelled particles contain lO double-stranded RNA segments (dsRNA) called Sl -SlO, with a total genome size of nearly 29 kbp. In the last years, and in many cases simultaneously with this work, the nucleotide sequences of some Fijivirus genome segments have been reported: MRDV (Maize rough dwarf virus), FDV (Fiji disease virus) and ODSV (0at sterile dwarf virus). In addition the entire RBSDV (Rice black streaked dwarf virus) and NLRV (Nilaparvata lugens reovirus) has been published. This work reports the cloning, sequence and analysis of the genomic nucleotide sequences of MRCV Sl, S2, S3, S4, S5, S6, S8 and SlO. All the analyzed segments have the conserved 5’ and 3’ ends that were reported for viruses of the same serogroup to which MRCV belongs: 5’AAGUUUUU3’ and 5’CAGCUnnnGUC3’, respectively. In addition segment-specific imperfect inverted repeats of 7-12 nucleotides were identified immediately adjacent to the conserved sequences. Prediction of the secondary structure of all segments coding strands showed that terminal regions were able to form defined and stable secondary structures that are proposed to be replication and packaging signals in Rotavirus. We compared their nucleotide and amino acidic sequences with the ones deposited in Genebank for other reoviruses. MRCV Sl potentially encodes a 168.4 kDa basic protein that contains RdRp distinctive motifs and has identity with the RdRps encoded by RBSDV, FDV and NLRV as well as with RNA polimerases coded by virus belonging to other genera of the Reovirdae family. MRCV S2 encodes a single 134.4 kDa protein which has and intermediate identity to RBSDV S4, FDV S2 and NLRV S2-encoded proteins. In this work we showed that the protein coded by this segment is a non-structural protein. MRCV S3 codes for a l4l .7 kDa protein and we demonstrated that is the major core protein and has an extremely high homology with the proteins coded by RBSDV S2 and FDV S3. MRCV S4 codes for a 131.7 kDa protein and its function is unknown. It shows identity to members of Fijivirus as well as to two other genera of the Reoviridae family. MRCV S5 codes for a 106.9 kDa protein and its function is unknown. It shows identity with RBSDV SS and FDV S5-encoded protein. MRCV S6 codes for a 90 kDa protein and its function is unknown. It has a very low homology with the proteins coded by RBSDV S6 and FDV S6. MRCV SBcodes for a 68.3 kDa protein Significantly, MRCV S8 encoded protein contains an ATP/GTP-binding site motif that is a common feature of dsRNA helicases. In addition, MRCV S8 revealed identity with the proteins coded by RBSDV S8, MRDV S7, OSDV S9 and NLRV S7, all of them with proposed helicase function. MRCV SlO codes for a 63.5 kDa protein that probably corresponds to the outer capsid protein. This protein shows a high identity with the proteins coded by RBSDV SlO, MRDV SlO and FDV SlO. The comparative level of homology between different MRCV encoded proteins varied noticeably, supporting an independent evolution of the different genome segments. We discussed the evolutionary relationships of MRCV to other Reoviridae, and based on phylogenetic analysis we proposed that although MRCV is related to MRDV and RBSDV, it could be regarded as a new species of the Fijivirus genus and not a geographic race of MRDV as it was previously proposed. Phylogenetic analysis based on RdRps amimo acidic sequences of viruses belonging to all the genus of the Reoviridae family, showed the existence of two major evolutionary divisions of polymerase proteins among them: one grouped Orthoreovirus, Aquareovirus, Orbivirus and Rotavirus, and the second one grouped Fijivirus, Cypovirus , Oryzavirus and Coltivirus. Some of the studied segments were expressed in bacteria as fusion proteins with an histidine-rich peptide. Polyclonal antibodies were raised against S2, S3, S4 and S6 coded proteins. The antiserum obtained against the protein coded by MRCV S3 was able to specifically recognize a single structural protein present in the purified virus particles in a Western blot assay and a 140 kDa protein present in infected plants. This protein corresponds to the major core protein. On the other side, a polyclonal antiserum against the purified virus particle was able to recognize a MRCV S3 fusion protein expressed in bacteria. Inmuno-electron microscopy revealed that antiserum against the protein coded by MRCV S3 reacted with viral cores. The antiserum obtained against the protein coded by MRCV S2 was able to specifically detect a single protein of a smaller size as predicted in total proteins extracts from infected maize plants. Inmuno-electron microscopy revealed that antiserum against the protein coded by MRCV S2 reacted with viroplasms present in the phloem cells of infected maize plants. “Far-Westem blot” experiments showed that MRCV S3 coded protein interacts with itself with a protein of l30 kDa that probably correspond to the B-spike and with the RNA dependent RNA polimerase encoded by MRCV Sl. In Rotavirus the correspondent proteins also interact. The results showed in this work contribute to the understanding of the virus that cause Mal de Rio Cuarto disease, helped redefine the virus taxonomic classification within the genera, and collaborated with the determination of the evolutionary origin of the fijivirus genus. Also these results allowed to the design of a MRCV resistance strategy in trasgenic maize plants based on the triggering of post-transcriptional gene silencing (PTGS).

Depino, Amaicha Mara. "Estudio de la interleuquina-1 en modelos fisiológicos y patológicos del sistema nervioso central" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las citoquinas pro-inflamatorias son inducidas en condiciones patológicas en el sistema nervioso central (SNC) en situaciones de trauma o infección, y se ha demostrado que son capaces de exacerbar y/o disminuir una lesión (Rothwell and Luheshi, 2000). Asimismo, son expresadas de manera constitutiva e inducible por las células del SNC y actúan fisiológicamente sobre las neuronas en el cerebro normal adulto, modulando la plasticidad sináptica, la transmisión sináptica, etc. (Vitkovic et al., 2000). El sistema de la interleuquina-l (IL-1) juega un rol decisivo en la respuesta inflamatoria. La expresión de sus ligandos (IL-1α, lL-1β e IL-1ra) y de sus receptores ha sido demostrada en varias regiones del SNC y bajo diversas condiciones (Rothwell and Luheshi, 2000). Otros trabajos han demostrado no sólo una variedad de efectos de la lL-1 en el cerebro o en neuronas y glia in vitro, sino que los resultados publicados hasta la fecha resultan muchas veces contradictorios, demostrando efectos opuestos en el mismo sistema de estudio. El objetivo general de esta tesis es estudiar de manera sistemática y profunda los roles fisiológicos y los efectos farmacológicos de la IL-1 en el cerebro. Para ello se investigó a la molécula en cuatro modelos diferentes en los cuales se estudiaron las respuestas de la glia, las citoquinas, la neurodegeneración y las variaciones en el comportamiento, de forma de obtener una visión global de la fisiología de la IL-1 en el SNC. (1) Observamos similitudes y diferencias regionales en la respuesta aguda a la IL-1β. Por ejemplo, detectamos reclutamiento de neutrófilos en todas las regiones inyectadas, pero neurodegeneración sólo en el giro dentado. (2) En un modelo en rata de la enfermedad de Parkinson observamos Ia activación atípica de la microglia en la región lesionada, con una regulación particular de la expresión de citoquinas. (3) Demostramos que la neurogénesis en el mesencéfalo no es un fenómeno fisiológicamente relevante. (4) Demostramos que la IL-1α endógena hipocampal tiene un rol modulador del aprendizaje aversivo. De esta manera, caracterizamos funciones y/o efectos de la IL-1 en el SNC, obteniendo evidencia empírica no sólo de funciones especificas de la IL-1 sino también de características más generales de la gliosis/inflamación en el SNC. Así, observamos que los efectos de la IL-1 dependen tanto de las concentraciones utilizadas como de la región que se está estudiando y, probablemente, de la densidad glial en la misma. Por ejemplo, observamos que la IL-1 endógena modula el aprendizaje, pero que, cuando se inoculan cantidades farmacológicas de la misma, causa degeneración en la misma región (hipocampo).

Abstract:
Pro-inflammatory cytokines are induced in pathological conditions of the central nervous system (CNS) both after trauma and infection, and it was shown that they can exacerbate and/or diminish the lesion (Rothwell and Luheshi, 2000). Moreover, they are expressed by brain cells both constitutiver and after induction, and act physiologically on neurons in the adult nonnal brain, modulating synaptic plasticity, synaptic transmission, etc. (Vitkovic et al., 2000). The interleukin-l (IL-l) system plays an important role in the inflammatory response. The ligands (IL-1α, IL-1β and IL-1ra) and their receptors are expressed in many regions of the CNS and under different conditions (Rothwell and Luheshi, 2000). IL-l agonists have many effects both in the brain and in neurons and glia in vitro. Nevertheless, many reported effects are contradictory and even opposing. The main aim of this thesis is to gain a deep insight into the physiological roles and pharrnacological effects of IL-l in the brain. We used four different models to study the glial response, cytokine expression, neurodegeneration and behavior, to achieve a global idea of the physiology of IL-l in the CNS. (l) We observed similarities and differences in the regional response of the CNS to the acute administration of IL-1β. For example, we detected neutrophil recruitment in all injected regions, but neurodegeneration only in the dentate gyrus. (2) ln a rat model of Parkinson's disease we observed an atypical microglial activation in the lesioned region, with a tight regulation of cytokine expression. (3) We showed that there is no physiologically relevant neurogenesis in the adult rat mesencephalon. (4) We demonstrated a modulatory role of endogenous hippocampal IL-1α in aversive learning. In summary, we characterized the function and/or effects of IL-l in the brain, finding evidence not only for specific functions of IL-l but also for more general effects of gliosis/inflammation in the CNS. Indeed, we observed effects of IL-l that depend both on the concentration used and on the region under study, and probably on the glial density in it. For example, we observed that the endogenous IL-l modulates learning but exogenous IL-l causes degeneration in the same region (the hippocampus).

De Marco, Rodrigo. "Obtención de néctar, trofalaxia, y comunicación en Apis mellífera" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Cuando una sociedad carece de soluciones técnicas adecuadas para explotar recursos variables, compromete su supervivencia. Sabemos que como sistemas orgánicos, las colonias de abejas Api (Apis mellifera) responden eficientemente al arreglo corriente de la oferta melífera, y que las soluciones técnicas que exhiben a escala colectiva emergen de la actividad conjunta de los individuos. Sin embargo, en una colonia las recolectoras poseen información limitada sobre los recursos, y la commicación resulta fundamental para optimizar la explotación colectiva de la oferta. Así, los parámetros individuales que regulan el comportamiento recolector son alterados no sólo por ciertas caracteristicas propias de las flores sino también por algunos estímulos disponibles en el nido. Entre los mecanismos que subyacen a la comunicación en las colonias, la danza de las recolectoras (un notable despliegue motor que se libera frente a una oferta abundante, y que exhibe además claras correlaciones con algunas características de las flores) ha sido investigada de manera casi excluyente durante los últimos 50 años. Las danzas, sin embargo, son esporádicas bajo condiciones naturales (lo cual indica a su vez que las recolectoras se benefician de la comunicación aún en su ausencia) y desconocemos los mecanismos adicionales que aseguran el flujo normal de información. La trofalaxia es el intercambio de alimento líquido entre los miembros de la colonia, y el néctar constituye la principal fuente energética de las abejas. Así, tras considerar 1) las capacidades sensoriales de las recolectoras y la habilidad que exhiben para percibir el olor y el sabor del néctar, 2) la forma en que utilizan estas claves para localizar, identificar, y reconocer las diversas especies florales, y 3) el hecho de que las interacciones trofalácticas permiten el intercambio de las claves olfativas y gustativas del néctar; a lo largo del presente estudio examinamos el potencial de la trofalaxia como mecanismo capaz de asegurar el flujo de información sobre la oferta melífera. Los resultados señalan que la experiencia recolectora afecta rápidamente tanto la danza como la frecuencia de interacciones trofalácticas, y sugieren que las interacciones trofalácticas “breves”, aquellas que sólo permiten el intercambio de las claves olfativas y gustativas del néctar, podrian conformar un módulo conductual independiente para el intercambio de información sobre la oferta melífera. Es decir, un sub-sistema autorregulado que facilita, junto a la danza, la explotación coordinada y eficiente de una oferta fluctuante. Por otra parte, los resultados sugieren que la transferencia efectiva del néctar colectado opera como un canal de comunicación a través del cual las recolectoras adquieren información sobre la actividad global. Y como resultado del proceso, la información adquirida podría determinar, al menos parcialmente, la selectividad que exhiben las colonias frente a una oferta diversa.

Abstract:
Without the proper technical solutions to face fluctuating resources, any society will surely compromise its survival. We already know that, as highly integrated systems, honeybee colonies (Apis mellifera) are able to exploit efficiently a nectar offer that is in turn extremely variable. Moreover, while facing unpredictable foraging conditions the whole set of technical solutions that they exhibit at the group-level is clearly defined by the synchronized activities of each of its members. Nevertheless, within a colony, each forager has only limited information about the totality of the nectar sources exploited by the colony as a whole. Communication thus becomes essential to optimise collective decision making processes aimed toward exploiting selectively the most profitable nectar sources at any moment. As a result, individual parameters which regulate the honeybee foraging behaviour are naturally modified by several features of the flowers as well as some stimuli available within the colony. Among the mechanisms underlying communication within the colonies, the “dance language” (i.e.a remarkable motor display which presents features that are undoubtedly correlated to some characteristics of the highly profitable food sources) has been the main subject of scientific research during the last fifty years. However, “dances” are clearly unusual in nature. Thus, taking into account that communication serves foragers in any case, it becomes clear that some additional mechanisms must guarantee the flow of information within the colonies. Nevertheless, the current knowledge about these mechanisms remains larger unknown. Trophallaxis is the exchange of liquid food by mouth between the members of the same colony and, in addition, nectar serves bees as their main source of energy. Accordingly, we first considered 1) the honeybee sensory capabilities which allow foragers to perceive the odour and taste of the nectar collected, 2) the way in which foragers use these skills to search and recognize their foraging targets, and 3) the fact that trophallactic interactions allow the exchange of nectar olfactory and gustatory cues; and afterwards, we examined whether the forager trophallactic behaviour may guarantee the flow of information on nectar sources. Results indicate that the foraging experience affects rapidly the dance and trophallactic behaviour of single foragers, and they suggest as well that brief trophallactic interactions, which allow only the exchange of chemosensory cues, may represent an independent mechanism for the exchange of information. That is, a self-regulated system which may promote, together with the dance language, a well-organized exploitation of nectar sources. Results also indicate that the transfer of the collected nectar may allow foragers to acquire information derived from the foraging activity of the colony as a whole. Moreover, the information acquired may partially explain the colony skills to track highly profitable nectar sources.

De Magistris, Alberto A.. "Anatomía de la corteza de las Cupressaceae nativas y cultivadas de la Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La corteza comprende todos los tejidos existentes por fuera del cámbium vascular. Está compuesta por floema y peridermis y su renovación depende de la actividad del cámbium y el felógeno. Constituye, a la vez, una vía de transporte eficaz, un sitio de almacenamiento y una capa aislante y protectora que, en conjunto, permiten a los vegetales leñosos prosperar en variados ambientes. Tres especies de Cupressaceae son nativas de los bosques australes patagónicos de la Argentina. Austrocedrus chilensis es una de las especies leñosas argentinas más estudiadas en los últimos años. Fitzroya cupressoides y Pilgerodendron uviferum, ahora protegidas en distintos puntos, son reliquias vivientes que fueron llevadas hasta el borde de la extinción por su valiosa madera. La información referente a la corteza de estas especies es muy escasa. Otras 25 especies de la familia están introducidas y se cultivan en zonas del pais con variadas condiciones climáticas y edáficas, tanto en el ámbito rural como en el urbano. En esta tesis se abordó el estudio de la corteza de 13 géneros con 23 especies y 2 variedades de Cupressaceae, desde varios puntos de vista: a) macroscópico: exomorfología, textura y espesor, b) microscópico: anatomía estructural y ultraestructural, c) polución ambiental: utilización de la corteza como potencial biomonitor de contaminantes. La exomorfología es variada y denota una marcada influencia del medio ambiente sobre su diseño, espesor y textura. A través de los datos anatómicos estructurales del floema vivo es posible obtener una serie de caracteres diagnósticos propios para cada género y la mayoría de las especies. La citología permite incluir varios taxones no estudiados previamente en el grupo que posee en las células cribosas los plastidios tipo S. Finalmente, las especies de la familia ampliamente cultivadas en sitios urbanos, suburbanos e industriales ofrecen la posibilidad de utilizar su corteza para el monitoreo de la contaminación ambiental. Datos e interpretaciones inéditos completan la información concerniente a la anatomía de Cupressaceae y las coniferas en general. Constituyen éstos, además, un medio de referencia para esclarecer la sistemática de este grupo y para conocer aspectos necesarios en su uso industrial. Las posibilidades de utilización de las cortezas para productos como tableros aislantes o principios activos de uso farmacéutico, ubican a este recurso no maderero entre los principales componentes del aprovechamiento sustentable de los bosques y plantaciones.

Abstract:
The bark includes all tissues existing outside the vascular cambium. It consists of phloem and periderm, and its renovation depends on the cambium and phellogen activity. The bark constitutes in tum an effective conducting way, a storage site and an insulating and protective layer that, as a whole, allow life of the woody plants in different environments. Three Cupressaceae species are indigenous from the southern patagonic forest of the Argentina; one of them, Austrocedrus chilensis is the more studied native tree in the last years. Fitzroya cupressoides and Pilgerodendron uviferum, now protected in several areas, are living relics and due to its valuable wood, exploitation was carried out it close to extinction. Information about the bark of these species is very scarce. Another 25 introduced species of the family grown in both rural and urban areas of the country with different climatic and edaphic conditions. In this Thesis, the bark of the family was approached from three view points: a) macroscopic: exomorphology, texture and depth, b) microscopio: structural and ultrastructure anatomy, and c)environmental pollution: utilisation of the bark as a bioimonitor of contaminants. The exomorphology is diverse and its pattern design, texture and depth denote a high influence of the environmental conditions. The anatomy of the secondary phloem shows the main diagnostic features useful to identification genera and the most of the species. TEM observations allow corroborate the inclusion of various taxa not previously studied in the group that posses the type S plastids in sieve cells. Finally, the bark of these wider spreaded trees offers the possibility of utilise it as a biomonitoring of common and harmful elements deposited from air and soil. New records and descriptions complete the information concerning to the anatomy of the Cupressaceae familyand other conifers. The research contribute to clarify the systematic questions of the group and to understand necessary aspects for its industrial use. The potential utilisation of the barks for different purposes such as insulating boards or pharmaceutical Chemicals places this non-woody resource among the mean components of the sustainable exploitation of the forests and plantations.

Díaz Sylvester, Paula L.. "Mecanismos de control de la acidificación tubular proximal : 1)Regulación parácrina de la función tubular por el endotelio capilar 2) Interacción entre el sistema renina-angiotensina y el óxido nítrico (NO)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo del presente trabajo fue analizar diferentes mecanismos que modulan la acidificación tubular proximal utilizando dos estrategias: a) la modificación aguda de la viscosidad del fluido peritubular y b) la inhibición crónica del sistema renina-angiotensina (SRA). Se ha informado que el óxido nítrico (NO) estimula la acidificación tubular proximal. Dado que el shear stress es un agonista de la liberación de NO, y que el grado de shear stress es proporcional a la viscosidad (η) de la solución, evaluamos el efecto de aumentos en η de la solución perfusora peritubular (SPP: Ringer HNaPO42- 20 mM, pH 7.4) sobre la acidificación luminal del túbulo contomeado proximal (TCP). Se realizaron experimentos de micropuntura con perfusión luminal y peritubular simultáneas. Se midieron los cambios en el pH de una gota de Ringer HNaPO4- 20mM (pHt=0:7,4) ubicada en el lumen del TCP por medio de un microelectrodo de resina sensible a H+. La viscosidad de la SPP se incrementó por el agregado de dextran neutro (P.M.: 300.000-400.000). Dado que aumentos en el shear tress inducen la liberación de ATP, se evaluó el efecto de ATP (10^-5 M) agregado a la SPP de viscosidad normal. La viscosidad aumentada indujo un aumento en el flujo de H+ (JH+)(85% y 97% con aumentos en η de 30% y 50% respectivamente, sobre el control). Este efecto fue abolido cuando se agregó el inhibidor de la síntesis de NO Nω-nitro-L-arginina (L-NNA, 10^-4 M) o los antagonistas de receptores purinérgicos suramin (10^-4 M) y reactive blue 2 (RB2, 3x10^-5 M). La adición de L-arginina 5x10^-3 M, a la SPP de alta viscosidad conteniendo L-NNA, recuperó el efecto estimulatorio de la alta viscosidad. El ATP indujo un aumento del 80% en JH+ y este efecto se bloqueó con L-NNA. Nuestros resultados sugieren que cambios en η (y consecuentemente en el shear stress) modularían la secreción proximal de de H+, al menos en parte, a través de la liberación de NO dependiente de ATP desde las células endoteliales de los capilares peritubulares. Los cambios en la viscosidad de la sangre que circula por la arteriola eferente y los capilares peritubulares, debidos a la filtración glomerular, podrían participar en el control normal de la reabsorción tubular (es decir, en el control del balance glomérulo-tubular), además de los ya descriptos factores fisicos (presiones oncótica e hidrostática) La segunda parte de este trabajo se centró en el estudio del efecto de la inhibición crónica del SRA sobre la acidificación tubular proximal y de los mecanismos involucrados en tal efecto, haciendo énfasis en la interacción del SRA con el NO. Se utilizó un protocolo de administración crónica de enalapril, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina, y losartan, un antagonista de los receptores de tipo ATI para la angiotensina II (10 mg*Kg^-1xdía^-1 durante tres meses, en la bebida). Mediante experimentos de micropuntura se determinó que el JH+aumentó 52% en los tratados con losartan y 87% en los animales tratados crónicamente con enalapril, comparados con animales sin tratamiento. La inhibición de la síntesis de NO con L-NNA (15 mg/kg, IV) durante el experimento, previno los efectos estimulatorios de losartan y enalapril sobre JH+.La actividad de síntesis de NO (NOS) se determinó mediante el dosaje de -L-citrulina formada a partir de -L-arginina. Los homogenatos de corteza renal de animales tratados crónicamente con losartan y enalapril presentaron un aumento en la actividad de NOS de 41% y 46% con respecto al control, respectivamente. Estos resultados sugieren que el efecto estimulatorio del enalapril y del losartan sobre la secreción proximal de H+ podría estar mediado, al menos en parte, por NO. La inhibición crónica del SRA no modificó los niveles de la isoforma inducible de la sintetasa de óxido nítrico (iNOS), indujo un aumento en la abundancia de la isoforma endotelial (eNOS) y una disminución en la expresión de la isoforma neuronal (nNOS). Este resultado sugiere que las diferencias en la actividad de NOS observadas entre los grupos experimentales podrían deberse, en parte, a la variación en el nivel de expresión de la eNOS. Por otra parte, la inhibición crónica del SRA, indujo un aumento en los contenidos de NHE-3 y la H+-ATPasa en membrana apical, analizados por westem blot en vesículas aisladas de ribete en cepillo. Estos resultados sugieren que el efecto estimulatorio de esas drogas sobre la acidificación proximal podría depender, al menos en parte, de los niveles de expresión de dichos transportadores en membrana apical. Por lo tanto, la inhibición crónica del SRA afectaría a la acidificación proximal mediante al menos dos mecanismos: un aumento en la disponibilidad de los transportadores involucrados y la estimulación del intercambio Na+/H+ apical dependiente de la síntesis de NO. En resumen, este trabajo muestra que los mecanismos de control de la acidificación tubular proximal en respuesta al shear stress peritubular y a la inhibición crónica del SRA involucran la síntesis de NO, probablemente en el endotelio de los capilares peritubulares y/o de la arteriola eferente, y la interacción paracrina endotelio — epitelio.

Abstract:
The aim of this work was to study different mechanisms that modulate proximal tubule acidification using two strategies: a) the acute modification of peritubular capillaries fluid viscosity and b) the chronic inhibition of renin angiotensin system (RAS). It has been reported that nitric oxide (NO) stimulates proximal tubule acidification. Since shear stress is a strong agonist for NO release, and the degree of shear stress is proportional to fluid viscosity (η), we evaluated the effects of increasing η in peritubular capillary perfusates (PCP; 20 mM HNaPO42- Ringer, pH 7.4) on proximal convoluted tubule (PCT) acidification. Micropuncture experiments were performed with simultaneous luminal and peritubular perfusion. Changes in pH of a 20 mM HNaPO42- Ringer (pHFO 7.4) droplet placed in PCT lumen were measured with H+-sensitive microelectrodes. Viscosity was increased by adding neutral dextran (molecular wt 300,000-400,000) to the PCP. Since increases in shear stress induce ATP release, the effect of 10^-5 M ATP added to normal-η PCP was evaluated. High η increased H+ flux (JH+)(85 and 97% when η was increased 20 and 30%, respectively, above the control value). This increase was abolished by adding the NO synthesis inhibitor Nω-nitro-L- arginine (L-NNA; 10^-4 M) or the purinoreceptor antagonists suramin (10^-4 M) and reactive blue 2 (3x10^-5 M). Addition of 5x10^-3 M L-arginine to the peritubular perfusate overcame the inhibitory effect of L-NNA on high-η-induced increase in JH+. ATP increased JH+(80%), and this effect was blocked by L-NNA. These results suggest that changes in η (and consequently in shear stress) can modulate proximal JH+, at least in part, through ATP-dependent NO release from the endothelial cells of the peritubular capillaries. The changes in η of postglomerular blood due to glomerular filtration, could participate in the regulation of tubular reabsorption (i.e. in the control of glomerular-tubular balance) and operate in parallel with the already described physic factors (capillary oncotic and hydrostatic pressures). The second part of this work is aimed to study the effect of chronic RAS inhibition on proximal tubule acidification and the mechanisms involved in such effect, including the interaction between RAS and NO. We performed a protocol of chronic oral administration of enalapril, an angiotensin converting enzyme inhibitor and losartan a type AT1 angiotensin receptor antagonist (10 mgxKg^-1 x day^-1, along 3 months). Proximal H+secretion, compared to control values and assessed by micropuncture experiments, was increased 52% and 87% in losartan- and enalapril-treated animals, respectively. NO synthesis inhibition by bolus injection of L-NNA during micropuncture, abolished the stimulatory effects of chronic RAS inhibition. NO synthesis activity was assessed by measurement of conversion of -arginine to -citrulline. NOS activity increased in renal cortex homogenates from animals under chronic RAS inhibition (41% and 46%, compared to control, losartan and enalapril respectively). Our results suggest that the stimulating effect losartan and enalapril on proximal JH+ could be mediated, in part, by NO. Chronic RAS inhibition induced no changes in the levels of the inducible nitric oxide synthase (iNOS), a decrease in neuronal NOS (nNOS) and an increase in endothelial NOS (eNOS), suggesting that the differences in NOS activity among experimental groups might depend, in part, on eNOS protein synthesis. In addition, chronic RAS inhibition increased the abundance of NHE-3 and H+-ATPase in brush border membrane vesicles. These results suggest that the effects of the drugs used in this work on proximal acidification could depend, in part, on the abundance of transporters for apical membrane H+ extrusion. Thus, chronic RAS inhibition would affect proximal acidification through two mechanisms: an increase in the availability of the transporters involved and NO dependent JH+ stimulation. In summary, this work show that proximal tubule acidification mechanisms that involve effects of NO, probably synthesised in peritubular capillaries and/or efferent arteriole endothelium, on proximal tubule function.

Díaz, Emilce Silvina. "Influencia de las proteínas de la matriz extracelular sobre la morfología y funcionalidad de las células de Leydig de rata adulta" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Está ampliamente aceptado que las proteínas de la matriz extracelular (MEC) intervienen en la regulación de la diferenciación, morfogénesis, proliferación y migración celular. La mayor parte de las interacciones célula-MEC están mediadas por las integrinas, las cuales regulan a su vez, la reorganización del citoesqueleto, el transporte intracelular de iones, el metabolismo de los lípidos, la activación de quinasas y la expresión génica. Asimismo, en la última década se ha demostrado que las integrinas ejercen un papel importante en los procesos reproductivos, incluyendo la fertilización, implantación y embriogénesís. En el testículo, la regulación de distintos procesos como el desarrollo, la diferenciación y la esteroidogénesis de las células de Leydig, depende de la acción concertada de las hormonas gonadotróficas y de una gran variedad de factores locales producidos de manera autocrina o paracrina. A pesar de lo mencionado en el párrafo anterior, son pocos los estudios realizados que intentan dilucidar el papel que ejercen las proteínas de la MEC sobre la funcionalidad de las células de Leydig. Estas células están rodeadas por proteínas de la MEC organizadas como una membrana basal continua o discontinua. El objetivo de esta tesis fue estudiar la influencia de las proteínas de la MEC sobre la morfología, la adhesión celular, la expresión de integrinas y la esteroidogénesis de las células de Leydig . Como modelo experimental, se utilizó el cultivo de células de Leydig de rata adulta, utilizando como sustrato, la laminina-l, el colágeno tipo IV y la fibronectina. Nosotros observamos que las células de Leydig cultivadas sobre laminina-l, colágeno tipo IV y fibronectina, presentan un mayor número de prolongaciones cítoplasmáticas que las cultivadas sobre vidrio. Asimismo, demostramos que la adhesión de las células al sustrato es un fenómeno que ocurre rápidamente y que el grado de adhesión a las mismas varía según el sustrato al cual se adhieren. Además, observamos que si bien las integrinas se expresan de manera constitutiva en las células de Leydig, su expresión aumenta en respuesta a la adhesión de las células a las proteínas de la MEC. Con respecto al efecto de las proteínas de la MEC sobre la capacidad esteroidogénica de las células de Leydig, demostramos que el colágeno tipo IV y la fibronectina inhiben la producción de testosterona de las células de Leydig de rata adulta, tanto en condiciones basales como estimuladas con hCG y que este fenómeno no se debe a un efecto citotóxíco. En cambio, la laminina-l utilizada como sustrato, no ejerció un efecto modulador sobre la producción de testosterona. En relación al mecanismo de la esteroidogénesis, demostramos que el efecto inhibitorio del colágeno tipo IV y la fibronectina ocurre en un paso posterior a la producción de AMPc y anterior a la entrada del colesterol a la membrana mitocondrial interna. Por otra parte, demostramos que el colágeno tipo IV es capaz de modular la expresión de la proteína StAR, involucrada en el transporte del colesterol a la membrana mitocondrial interna. Teniendo en cuenta estos resultados, se decidió analizar alguna de las vías de señalización intracelular activadas por el colágeno IV, capaces de regular negativamente la esteroidogénesis de las células de Leydig. Demostramos que la modulación negativa del colágeno tipo IV sobre la esteroidogénesis de las células de Leydig de rata está mediada por la activación de tirosina quinasas. En particular, detectamos que la interacción del colágeno tipo IV con las integrinas de la subfamilia β1, activa la cascada de Ras/MEK/ERK, siendo estas las responsables de la modulación negativa del colágeno tipo IV sobre la esteroidogénesis. Asimismo demostramos que las proteínas ERK 1-2 están involucradas en las adhesiones focales inducidas por la interacción de las integrinas de las células de Leydig con las proteínas de la MEC. Las integrinas tienen la capacidad de activar la vía de señalización de las MAPK a través de distintos mecanismos. Uno de ellos, ocurre a través de la activación de las proteínas Ras, pudiendo ser dependiente o no de la proteína FAK. Nosotros demostramos que en las células de Leydig de rata, la activación de la cascada de las MEK, inducida por el colágeno tipo IV, se desencadena fundamentalmente, a través de un mecanismo FAK independiente. La activación de las proteínas ERK l-2 independiente de FAK, podría estar mediada por una proteína denominada caveolina-1. Nosotros identificamos la proteína caveolina-1 en las células de Leydig y detectamos que su fosforilación es modulada por la interacción del colágeno tipo IV con las integrinas de la subfamilia β1. Por otro lado, observamos que la expresión de la proteína StAR (“steroidogenic acute regulatory”) no solo es modulada por la vía de señalización del receptor de LH/hCG, sino que en su regulación participan las MAPK, en particular las MEK 1-2. Asimismo, demostramos que si bien el colágeno tipo IV, a través de las integrinas, es el principal responsable de la activación de las proteínas ERK 1-2, PKA también interviene en la fosforilación de las mismas, siendo capaz de modular la cascada de señalización de las MAPK en las células de Leydig de rata estimuladas con hCG. En conclusión, los resultados obtenidos en este trabajo, nos demuestran que las proteínas de la MEC, son capaces de modular la adhesión, la diferenciación celular y la expresión de integrinas. El colágeno tipo IV, a través de la interacción con las integrinas de la subfamilia β1 y mediante un mecanismo FAK independiente, activa a las proteínas ERK 1-2, las cuales regulan negativamente la expresión de la proteína StAR, inhibiendo la producción de testosterona. Además, observamos que el estímulo de LH/hCG al aumentar la producción de AMPc, activa a la PKA, la cual interacciona con la cascada de señalización de las MAPK, ejerciendo una regulación dual sobre la esteroidogénesis en las células de Leydig de rata adulta Los resultados presentados en esta tesis contribuyen a ampliar los conocimientos sobre la influencia que las proteínas de la matriz extracelular ejercen sobre la morfología y diferenciación de las células de Leydig. Demuestran además, que el colágeno tipo IV, es capaz de modular, in vitro, la esteroidogénesis de las células de Leydig de la rata adulta.

Abstract:
It is well known that extracellular matrix (ECM) proteins are involved in the regulation of the differentiation, morphogenesis, proliferation and migration of cells. Most cell-ECM interactions are mediated by integrins, which in turn regulate the reorganization of the cytoskeleton, intracellular transport of ions, lipid metabolism, activation of kinases and genic expression. In the last decade, integrins have also been shown to have an important role in reproductive processes including fertilization, implantation and embryogenesis. In the testis, the regulation of different processes as the development, differentiation and steroidogenesis of Leydig cells depends on the concerted action of gonadotrophic hormones and a large variety of local factors produced in an autocrine or paracrine way. In spite of the information in the paragraph above, few studies have attempted to elucidate the role of ECM proteins in the functioning of Leydig cells. These cells are surrounded by ECM proteins organized as a continuous or discontinuous basement membrane. The objective of this thesis was to study the influence of ECM proteins on the morphology, cell adhesion, integrin expression and steroidogenesis of Leydig cells. The experimental model used was the culture of adult rat Leydig cells, using laminin-1 , type IV collagen and fibronectin as substrates. We observed that the Leydig cells cultured on laminin-1, type IV collagen and fibronectin present a larger number of cytoplasmic processes than those cultured on glass. We also demonstrated that the cells adhesion to the substrate occurs rapidly and that their degree of adhesion varies depending on the substrate to which they adhere. We also observed that, although integrins are constitutively expressed in Leydig cells, their expression increases in response to the adhesion of the cells to ECM proteins. In relation to the effect of ECM proteins on steroidogenesis, we demonstrated that type IV collagen and fibronectin inhibit the production of testosterone of the Leydig cells of adult rat, both in basal conditions and when stimulated with hCG, and that this phenomenon does not result from a cytotoxic effect. On the other hand, laminin-1 used as substrate had no modulatory effect on testosterone production. With respect to the mechanism of steroidogenesis, we demonstrated that the inhibitory effect of type IV collagen and fibronectin occurs after AMPc production step and before the entry of cholesterol into the internal mitochondrial membrane. We also demonstrated that type IV collagen is able to modulate the expression of the StAR (steroidogenic acute regulatory) protein, involved in the transport of cholesterol to the internal mitochondrial membrane. In view of these results, we decided to analyze some of the intracellular signal pathways, activated by collagen IV and able to negatively regulate the steroidogenesis of Leydig cells. We demonstrated that the negative modulation of type IV collagen on the steroidogenesis of rat Leydig cells is mediated by the activation of tirosine kinases. In particular, we found that the interaction of type IV collagen with β1 subfamily integrins activates the Ras/MEK/ERK cascade, these being responsible for the negative modulation of type IV collagen in steroidogenesis. We also demonstrated that ERK 1-2 proteins are involved in the focal adhesions induced by interaction between Leydig cell integrins and ECM proteins. Integrins have the capacity to activate the MAPK signal pathway through different mechanisms. One of these occurs through the activation of Ras proteins, and may or may not depend on the FAK protein. We demonstrated that in rat Leydig cells, the activation of the MEK cascade induced by type IV collagen is triggered basically through an independent FAK mechanism. The activation of the ERK 1-2 proteins independent of FAK could be mediated by a protein: caveolin-l. We identified the caveolin-l protein in the Leydig cells and found that its phosphorilation is modulated by the interaction of type IV collagen with β1 subfamily integrins. We also observed that the expression of the StAR protein is not only modulated by the signal pathway of the LH/hCG receptor, but that the MAPK participate in its regulation, particularly MEK 1-2. We also demonstrated that although type IV collagen, through the integrins, is the main factor in the activation of ERK 1-2 proteins, PKA also intervenes in their fosforilation and is able to modulate the MAPK signal cascade in rat Leydig cells stimulated with hCG. In conclusion, the results of this work demonstrate that ECM proteins are able to modulate adhesion, cell differentiation and integrin expression. Type IV collagen, through interaction with β1 subfamily integrins and by an independent FAK mechanism, activates the ERK 1-2 proteins that negatively regulate expression of the StAR protein, inhibiting testerosterone production. We also observed that LH/hCG stimulation, by increasing AMPc production, activates PKA; interacting with the MPAK signal cascade, exerting dual regulation on the steroidogenesis of adult rat Leydig cells. The results presented in this thesis contribute knowledge of the influence of extracellular matrix proteins on the morphology and differentiation of Leydig cells. They also show that type IV collagen is capable of modulating, in vitro, the steroidogenesis of adult rat Leydig cells.

D’Angelo, Maximiliano A.. "Identificación y caracterización de enzimas involucradas en la regulación de los niveles de AMPc en Trypanosoma cruzi" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En este trabajo se caracterizó la adenilil ciclasa TczAC. Se determinó que el gen que codifica para esta enzima se encuentra altamente conservado con los genes de adenilil ciclasas identificados en otros tripanosomátidos, es parte de una familia multigénica y se expresa en todos los estadios del ciclo de vida de T. cruzi. Se determinó que el producto de este gen es una enzima funcional capaz de complementar una cepa de levaduras carente de actividad adenilil ciclasa. Esta enzima es específica para AMPc, presenta una mayor actividad en presencia de Mn+2 que de Mg+2 y es inhibida por Zn+2 y el inhibidor del sitio P, 2'-deoxy-3'AMP. Por otro lado, el Ca+2 estimula la actividad de la misma manera independiente de calmodulina. Utilizando la técnica de doble híbrido en levaduras se demostró que TczAC dimeriza a través de su dominio catalítico y se identificaron 13 clones capaces de interaccionar específicamente con la misma. En particular se analizó la interacción de TczAC con el clon correspondiente a la proteína de flagelo paraflagellar rod. Asimismo, TczAC fire expresada en una cepa mutante de levaduras S. pombe. Los resultados obtenidos con estos experimentos sugieren que este sistema de expresión podría ser de gran utilidad para la búsqueda de inhibidores específicos. Por otra parte, se identificó y caracterizó el gen TczPDE que codifica para la primer fosfodiesterasa de AMPc de T. cruzi. Se determinó que este gen es parte de una familia multigénica y codifica para una proteína que presenta un posible péptido señal, dos dominios GAF de unión a GMPc y un dominio catalítico altamente conservado. La funcionalidad de esta proteína se confirmó por ensayos de complementación en levaduras carentes de actividad fosfodiesterasa. En dichas levaduras TczPDE se encontró asociada a la fracción particulada, mostró una alta afinidad por el AMPc y no fue capaz de hidrolizar GMPc. Por ensayos de Western blot se confirmó la asociación de TczPDE a la membrana de las levaduras y se observó que esta se encuentra fuertemente asociada a la misma. La localización subcelular de TczPDE en T. cruzi se estudió por fraccionamiento subcelular e inmunolocalización. Estos experimentos demostraron que TczPDE se encuentra localizada en la membrana plasmática del parásito y concentrada en el flagelo.

Abstract:
In this work we have characterized TczAC adenylyl cyclase. The gene encodes an enzyme which is highly conserved with the adenylyl cyclase genes identified in other trypanosomatids, is part of a multigene family and is expressed in all the stages of T. cruzi life cycle. The product of this gene is a functional enzyme that can complement a yeast strain deficient in adenylyl cyclase activity. The enzyme is specific for cAMP, has a higher activity in the presence of Mn+2 instead of Mg 2+, and is inhibited by Zn+2 and the P-site inhibitor, 2'-deoxy-3 'AMP. On the other hand, Ca+2 stimulates its activity in a calmodulin independent manner. Using the yeast two-hybrid technique it was demonstrated that TczAC dimerizes through its catalytic domains, and 13 clones that interact with this protein were identified. In particular, the interaction of TczAC with the flagellar protein paraflagellar rod was analyzed. Besides, TczAC was expressed in a S. pombe mutant strain. The results obtain in these experiments suggest that this expression system could be useful for the identification of specific inhibitors. Apart from that, the gene TczPDE that codes for the first cAMP phosphodiesterase of T. cruzi was identified and characterized. It was found that this gene is part of a mutligene family and encodes a protein that presents a putative signal peptide, two GAF domains for cGMP binding and a highly conserved catalytic domain. The functionality of this protein was confirmed by complementation assays in yeasts lacking phosphodiesterase activity. In these yeasts TczPDE was found to be associated to the particulate fraction, showed a high affinity for CAMP and was not able to hydrolyze cGMP. By Western blot analysis, the association of TczPDE to the yeast membrane was confirmed, and it was observed that this enzyme is strongly associated to it. The subcellular localization of TczPDE in T. cruzi was studied by subcellular fractionation and immunolocalization. These experiments demonstrated that TczPDE is localized in the plasma membrane of the parasite and concentrated in the flagellum.

Courtalon, Paula. "Comparación de las comunidades de roedores sigmodontinos entre parcelas de maíz y soja en agroecosistemas pampeanos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El propósito de este trabajo fue estudiar las comunidades de roedores sigmodontinos en parcelas de cultivo de maíz y soja en Agroecosistemas Pampeanos. Se realizó en la localidad de Diego Gaynor, Partido de Exaltación de la Cruz. Provincia de Buenos Aires, Argentina, en dos años consecutivos (períodos) en que se siguió parcelas de cultivo desde su siembra (o etapa temprana) hasta la post cosecha (rastrojos). Para cada tipo de cultivo, tuvimos en cuenta la parcela completa y cada uno de los hábitats (campo de cultivo y sus márgenes enmalezados, bordes). En una primera parte se estudiaron las características de la comunidades a lo largo del ciclo completo de los cultivos en cuanto a composición específica, abundancia relativa y diversidad; y en una segunda parte describimos las características de las poblaciones de las distintas especies según el tipo de parcela de cultivo en cuanto a abundancia, estructura poblacional y condición fisica de los individuos. Se evaluó también si las diferencias en la abundancia de los cultivos a término y en la poscosecha pueden ser debidas al tiempo transcurrido desde la siembra. Las comunidades de roedores estuvieron compuestas por las mismas especies en ambos tipos de parcela: Akodon azarae, Calomys laucha, Calomys musculinus y Oligoryzomys flavescens, aunque no estuvieron siempre presentes todas las especies en todos los meses de muestreo en los dos cultivos. A. azarae y C. laucha fueron las especies más abundantes, la primera fue más capturada en los bordes de campos de cultivo y la segunda en los campos, independientemente del tipo de cultivo. La diversidad fue mayor en las parcelas de maíz que en las de soja cuando los cultivos estaban maduros o luego de la cosecha. Las diferencias en diversidad se debieron tanto a cambios en la riqueza (generalmente por ausencia de C. musculinus u O. flavescens) como a cambios en la equitatividad (por una mayor similitud en las densidades entre C. laucha y A. azarae). Las diferencias en abundancia entre las parcelas de maíz y soja, así como para los hábitats de campo y borde, variaron según el período y el momento de muestreo. La abundancia total de roedores fue mayor en las parcelas de maíz que de soja, aunque las diferencias no fueron estadísticamente significativas. C. laucha fue la especie que mostró mayores diferencias entre tipos de cultivo, ya que fue más abundante en las parcelas (incluyendo campos y bordes) y en los campos de maíz respecto a los de soja en el primer período, mientras que en el segundo fue significativamente más abundante en los bordes de maíz que en los de soja. El mayor uso del hábitat de campo por C. laucha respecto a las otras especies de roedores podría ser la causa de que esta especie sea la que muestra mayores variaciones de acuerdo al tipo de cultivo, ya que sufre en mayor grado los efectos de las labores, que difieren entre parcelas de maíz y soja. A. azarae fue más abundante en las parcelas de soja que las de maíz en el segundo período, pero en la pos cosecha del primer período fue más abundante en las parcelas de maíz. Una respuesta diferencial de estas especies frente a los tipos de cultivo es consistente con las diferencias que muestran en la selección de macro y microhábitat observadas en trabajos previos. C. musculinus fue más abundante en los campos de maíz en el primer período, pero no mostró diferencias significativas en el segundo. O. flavescens fue más abundante en los bordes de maíz que de soja en ambos períodos, pero las diferencias fueron significativas sólo en el primer período. Ambas especies fueron muy escasas. La mayor abundancia de A. azarae en la soja respecto a maíz en el segundo período puede atribuirse a distintos factores, en primer lugar a una mayor densidad en primavera, a una mayor duración de la estación reproductiva (que se extendió hasta mayo, mientras que en el maíz se interrumpió antes) y a una mayor supervivencia de adultos viejos luego de la cosecha. Las parcelas de maíz y soja mostraron las mayores diferencias luego de la cosecha, probablemente porque los rastrojos de maíz habían permanecido mayor tiempo sin disturbios luego de la cosecha que los de soja, permitiendo la recuperación de las poblaciones, ya que la cosecha de maíz se produce cuando aún hay reproducción.

Abstract:
The goal of this Thesis was to study rodent communities in corn and soybean fields in pampean agroecosystems. The study was conducted at Diego Gaynor, Exaltación de la Cruz Department, Buenos Aires Province, Argentina in two consecutive cycles of development of crops (periods). For each type of field (soybean and maize) I considered two habitats: the cropfields and the edges (borders). In a first section I studied diversity, species composition and relative abundance along the different stages of crops, and in a second section I described the variations between soybean and maize fields (taking in account the variability according to the month of sampling and habitats) in abundance, population structure, reproductive activity and individual physical condition for the different species. The effect of the time elapsed between sowing and sampling was also assessed. Species composition of rodent communities in soybean and maize fields were the same: Akodon azarae, Calomys laucha, Calomys masculinas and Oligoryzomys flavescens, but the 4 species were not present in all samplings in both types of fields. The first two species were the more abundant, A. azarae in borders and C. laucha in fields. Rodent diversity was higher in corn than in soybean fields when crops were mature or after the harvest. Differences in diversity were the result of changes in both richness (specially because of absence of C. musculinus or O. flavescens) and evenness, specially when A. azarae and C. laucha showed similar densities. Differences in abundance between maize and soybean fields, as well as in their habitats, varied according to the period and the month of sampling. Total abundance of rodents was higher in maize than in soybean fields, but differences were not significant. C. laucha was the species which showed more differences between types of crops, being more abundant in the whole maize field (including the cropfield and the edges) in both periods and in corn cropfields with respect to soybean cropfields in the first period, while in the second it was more abundant in maize than in soybean edges. A higher response of C. laucha to crop type than the other studied species may have been expected because it is the more abundant species in cropfields, and suffers in a high degree the effect of labors which are different for both crops. A. azarae was more abundant in soybean than in maize fields in the second period but in the post harvest (May) of the first period maize stubbles appeared to be a better habitat than soybean stubbles, because there was a higher density, individuals showed a higher physical condition than in soybean fields, there was reproductive activity and old individuals, whereas in soybean fields there was not reproductive activities and old individuals were not captured. A differential response to crop type by C. laucha and A. azarae is consistent with their differences in macro and microhabitat selection observed in previous studies. C. musculinus was more abundant in cornfields in the first period (considering all samplings and in May), but did not show differences between types of cropfields in the second period. O. flavescens was more abundant in maize than in soybean borders in both periods, but differences were significant only the first year. Both species were rarely captured. The higher abundance of A. azarae in soybean with respect to maize fields in the second period may be attributed to many factors, as a higher initial density in spring, a longer reproductive period, and a higher survival of adults to the post harvest period. Maize and soybean fields showed the highest differences in the post harvest period, probably because maize stubbles had remained undisturbed more time after harvest than soybean fields, allowing a recover of populations.

Costantino, Santiago. "Interferometría de banda ancha para la medición de espesores" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En esta tesis se presenta el desarrollo de la técnica interferometría de banda ancha en oposición a la interferometría de luz blanca como un método para medir espesores de líquidos y láminas delgadas. Es posible ganar precisión en la medición reduciendo el ancho de banda de la fuente para evitar las distorsiones causadas por la dispersión del material. A partir del análisis de este efecto se refiita el dogma establecido de que el mayor ancho de banda posible es el óptimo. Se demuestra que el conocimiento preciso de la dependencia del índice de refracción con la longitud de onda es imprescindible para una medición adecuada del espesor de un medio dispersivo. El dispositivo experimental presentado es, además, adecuado para obtener esta dependencia con suficiente resolución. En el marco del desarrollo de una técnica capaz de medir con eficiencia espesores de lubricantes, pinturas y barnices, se ilustran los alcances del sistema con la medición del espesor de aceite de siliconas sobre una superficie plana en tiempo real. Finalmente se propone una modificación al esquema experimental con el objetivo de reducir el espesor mínimo mensurable. Se presenta el desarrollo de la Interferometría de tres ondas como la solución para ampliar el rango dinámico de la interferometría de banda ancha.

Abstract:
In this thesis a new technique called Wide Band interferometry is presented as opposed to White-light interferometry to introduce a thickness measurement method for thin films and liquids. It is possible to gain precision by reducing the bandwidth of the light source in order to avoid distortions arising from the material dispersion. The established dogma that the widest possible bandwidth is the optimum falls after the analysis of this effect. It is shown that the precise knowledge of the frequency dependence of the refractive index is essential for an adequate thickness retrieval in optical experiments. The experimental device that is presented is also useful to obtain this information with enough resolution. Regarding the development of a method that allows to efficiently measure the thickness of lubricants, paints and varnishes, an experiment that shows the spreading of a silicone oil on a plane surface in real time is shown. Finally, a modification to the experimental setup is proposed in order to reduce the minimum measurable thickness. Three Wave interferometry is presented as a solution to increase the dynamic range of Wide Band interferometry.

Cosarinsky, Marcela Irene. "Micromorfología de nidos de termitas de la República Argentina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La presente contribución representa el primer estudio micromorfológico de nidos de termitas neotropicales. Incluye un análisis comparativo de la micromorfología de termiteros de diferentes especies, del nido y suelo circundante, y de los diferentes sectores del nido. Asimismo, se comparan rasgos micromorfológicos que han sido descriptos en nidos de especies de África y Australia con los observados en especies de Argentina, y se describen rasgos nuevos. Las descripciones micromorfológicas incluyen diferentes tipos de pellets, microestructuras, análisis de granulometría, frecuencia, selección de tamaño y distribución de los componentes minerales gruesos, rasgos compuestos de materia orgánica fina de origen fecal (material cementante de granos minerales y pellets, revestimientos de galerías e intercalaciones lineales en la masa basal), fábricas de birrefringencia del material fino, microagregación de arcillas, incrustraciones lenticulares cuarzo-arcillosas, relación de distribución de materiales finos y gruesos, presencia de restos vegetales y fragmentos cuticulares de termitas. Los nidos de termitas presentan una gran diversidad micromorfológica, sin embargo no se pudo hallar una relación directa entre la sistemática y la micromorfología de los nidos debido a que existe una notable variación intraespecífica de rasgos micromorfológicos en nidos localizados en diferentes tipos de suelo. En los nidos de Cornitermes cumulans, que presentan una arquitectura compleja, cada sector exhibe una micromorfología particular, relacionada con la función que cumple. La muralla presenta una densa estructura masiva o agrietada, relacionada con la protección mecánica y el aislamiento ambiental del nido. La región media exhibe una estructura pelicular muy porosa o esponjosa, que probablemente favorecería la termorregulación del nido. El sector hipógeo presenta una estructura masiva, de granos compactados o comentados, probablemente relacionada con el soporte del nido y el aislamiento del suelo. El habitáculo posee una estructura laminar de cartón estercoral, material muy higroscópico, adecuado para conservar la alta humedad necesaria para el desarrollo de las larvas. Asimismo, este tipo de nidos presenta una paulatina variación micromorfológica en las sucesivas etapas de madurez. En los nidos inmaduros, el montículo entero exhibe una microestructura densa, mientras que en los maduros, la muralla y la región hipógea presenta una estructura muy compacta que contrasta con la estructura porosa que posee la región media. Las termitas que construyen nidos epígeos e hipógeos modifican considerablemente la micromorfología del suelo. En molisoles arenosos, con una microestructura suelta de microagregados entre granos, granular y de bloques subangulares pequeños, los nidos de Cornitermes cumulans presentan una estructura de granos cementados en la muralla y en la región hipógea, estructura pelicular en la región media y estructura laminar en el habitáculo. En suelos de similares características, los nidos de Termes saltans poseen una estructura compacta y compleja, que alterna estructuras laminar y migajosa, y los nidos de Cortaritermes fulviceps presentan una densa estructura de granos cementados. En ultisoles arenosos con estructura esponjosa, los nidos de Cornitermes cumulans exhiben estructuras agrietada y masiva en la muralla, una estructura compleja donde se alteman estructuras esponjosa, masiva y de granos compactados en la región media, estructura laminar en el habitáculo y estructura de granos compactados en el sector hipógeo. En molisoles y entisoles franco-limosos, con estructura masiva, los nidos de Cortaritermes fulviceps presentan respectivamente estructura lenticular y compleja con estructuras masiva y esponjosa alternadas. En molisoles franco-arcillosos con una estructura débil de granos y microagregados de materia orgánica sueltos, los nidos de Cortaritermes fulviceps exhiben estructuras migajosa y masiva alternadas. En entisoles franco-limosos con estructura masiva, los nidos de Nasutitermes poseen estructura lenticular y agrietada en el sector epígeo e hipógeo respectivamente. La micromorfologia de nidos epígeos de hormigas neotropicales es analizada y comparada con la de nidos epígeos de termitas de la misma región. A diferencia de los termiteros, los hormigueros carecen totalmente de rasgos compuestos de materia orgánica fina de origen fecal y de microagregación de arcillas en los pellets. La micromorfología de termiteros actuales es una valiosa herramienta para la correcta identificación de termiteros fósiles. A modo de ejemplo, se compara la micromorfologia de los termiteros actuales con icnofósiles de diferentes formaciones y edades de Argentina y Uruguay, los cuales han sido atribuidos a posibles termiteros fósiles. La presencia de microagregados ultrafinos, intercalaciones de pigmento orgánico y distribución porfirica de materiales finos y gruesos de la masa basal son positivas evidencias micromorfológicas para el reconocimiento de los icnofósiles como posibles construcciones termíticas.

Abstract:
This contribution is the first study on Micromorphology of nests of Neotropical termites. It includes a comparative analysis of the micromorphology of nests of different species, of nests and their surrounding soil, and of different sectors of the nest. Micromorphological features, that have been observed in termite nests of African and Australian species, are compared with those observed in Argentinean species, and new features are also described. Micromorphological descriptions include presence of pellets, different types of microstructure, an analysis of the granulometry, frequency, sorting and distribution of coarse mineral componentes, fine organic features of fecal origin (cementing material of pellets and coarse grains, gallery coatings and linear intercalations in the groundmass), birefringence fabrics of fine material, clay microaggregation, lenticular clayey-quartzose crusts, porphyric distribution of coarse and fine components, and presence of plant remains and cuticle fragments of termites. A great micromorphological diversity occurs among nests of different termite species. However, a direct relation between termite systematic and micromorphology of its nests couldn’t be found because of the wide intraspecific variation of micromorphological features shown at different kinds of soils. In big and complex nests of Cornitermes cumulans, each region shows a particular micromorphology, which probably reflects its function in the nest. Dense massive or crack structures are present in peripheral walls, providing mechanical protection and environmental isolation, porous spongy or pellicular structures in the middle region probably enhance the thermoregulation of the nest, compact grain or massive intergrain cemented structures are present at the hipogeus region, probably related with soil isolation and weight support, hive has a platy stercoral carton structure, a very higroscopic material that keeps the high humidity level that larvae need. In addition, these complex nests show gradual micromorphological changes in its consecutive maturity stages: inmature nests show a dense structure in the whole mound, whereas mature ones show a porous structure in the middle region and a dense structure in the peripheral wall and hipogeous region. Termites with epigean and hipogean nests modify considerably the soil micromorphology. In sandy molisols with a loose intergrain microaggregate, granular and subangular blocky structures, nests of cornitermes cumulans show intergrain cemented structure at the peripheral wall of the mound and hipogeous region, pellicular structure at the middle region and platy structure in the hive. In similar soils, nests of Termes saltans have a compact complex structure with alternate platy and crumb structures, and nests of Cortaritermes fulviceps have intergrain cemented structure. In sandy ultisols with spongy structure, nests of Cornitermes cumulans show crack and massive structure in the peripheral wall of the mound, a complex structure at the middle region with alternate spongy, massive and compact grain structures, a platy structure at the hive and a compact grain structure at the hipogeous region. In silt-loamy molisols and entisols with an homogeneous massive structure, nests of Cortaritermes fulviceps have a lenticular structure and complex structure with alternate massive and spongy structures respectively. In clay-loamy molisols, with a very loose structure of single grains and organic microaggregates, the nests of Cortaritermes fulviceps have a complex structure with alternate crumb and massive structures. In silt-loamy entisols with a massive structure, the nests of Nasutitermes have lenticular and crack structure at the epigeous and hipogeous region respectively. The micromorphology of some epigean nests of Neotropical ants is analyzed and compared with those of termites. Ant nests differ from termite ones because ant nests don’t show any organic feature of fecal origin and their pellets don’t show clay microaggregation. The micromorphology of present-day termite nests may be a very useful tool for the correct identification of possible fossil termite nests. To test this, the micromorphology of present-day termite nests is compared with icnofossils of different formations and ages of Argentina and Uruguay, which have been attributed to termites. Micromorphological features like ultrafine microaggregates, intercalations of organic pigment and porphyric distribution of fine and coarse materials are positive evidences that suggest these ichnofossils might have arisen in termite constructions.

Cirigliano, Daniela. "Observación y diagnóstico de protuberancias solares a partir de los datos de la misión SOHO" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El presente trabajo de tesis se efectuó en el marco de una cotutela entre la Universidad de Buenos Aires y la Universidad de París XI. El estudio realizado se basa en la observación y el diagnóstico de las protuberancias solares a partir de los datos del satélite SOHO, que representa el mejor ejemplo de las posibilidades tecnológicas ofrecidas para un estudio detallado del Sol. Las protuberancias solares son estructuras magnificas y singulares de la atmósfera del Sol. Confinan un plasma frío y denso en comparación al plasma tenue y caliente de la corona solar circundante. Nuestro objetivo es medir, por medio de observaciones, parámetros fisicos tales como densidad, presión y temperatura del plasma que las compone. Los datos obtenidos durante este trabajo de tesis constituyen un aporte importante y original a la fisica solar, pues consisten en la observación simultánea de más de 50 líneas de emisión en el rango ultravioleta del espectro electromagnético con la mayor resolución espacial y espectral obtenida hasta el momento. Representan una ocasión única para verificar las teorías existentes y contribuyen al enriquecimiento del conocimiento del Sol.

Abstract:
This work is a co-thesis directed by two researchers of both universities, the University of Buenos Aires and the University of Paris XI. Our study is based in the observations and diagnostic of solar prominences carried out with the analysis of SOHO satellite’s data. They represent the best exponent of actual technological instrumentation offered for a detailed study of the Sun. Solar prominences are fabulous and peculiar plasma manifestations in the solar atmosphere. They are dense and cold plasma objects, in contrast to the hot and dilute surrounding corona. Our aim is to measure, by means of prominence observations, some of their plasma physical parameters such as density,pressure and temperature in order to learn how this structures can hold up in the solar atmosphere. The series of data obtained in this study represent an original and important contribution to solar physics research, since they consist in a simultaneous observation of more than 50 ultraviolet emission lines, with the best spatial and spectral resolution achieved to the moment. They represent an unique opportunity to verify theoretical models and contribute to the improvement of the knowledge of the Sun.

Chiocconi, Alejandro Andrés. "Síntesis de desoxi-ß-D-galactofuranósidos. Su uso para estudios de especificidad de exo ß-D-galactofuranosidasa" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La síntesis de desoxiazúcares es un tema de gran interés no sólo por ser éstos componentes de productos naturales, sino por considerarlos como herramientas para estudios relacionados con la actividad de enzimas. La bibliografía es extensa en desoxiazúcares piranósicos, que han sido utilizados para determinar la especificidad de glicosidasas y glicosiltransferasas, y por su potencial como inhibidores de esas enzimas. Los monosacáridos más comunes como glucosa, galactosa y manosa se encuentran sólo en configuración piranósica en células de mamíferos, de ahí el interés por la síntesis de desoxiazúcares en esa configuración. Sin embargo en las últimas décadas se ha encontrado que la β-D-galactofuranosa es constituyente de glicoconjugados muy importantes de la superficie de microorganismos patógenos, entre ellos Trypanosoma cruzi y Mycobacterium tuberculosis. Las enzimas responsables del metabolismo de la galactofuranosa, como las galactofuranosidasas y las galactofuranosiltransferasas son un buen blanco para el diseño de inhibidores que afectarian la viabilidad de los microorganismos sin afectar al mamífero infectado que no tiene glicoconjugados con galactofuranosa. En este trabajo de tesis de doctorado se han sintetizado por primera vez β-D-galactofuranósidos desoxigenados en las posiciones 2, 3 ó 6, y se ha utilizado como compuesto de partida a la D-galactono-1,4-lactona, que es un producto comercial, buen precursor del anillo furanósico y da lugar a sustituciones selectivas. Se han caracterizado los desoxiazúcares y sus precursores y se han utilizado los β-D-glicósidos para investigar su capacidad de actuar como sustratos de una exo β-D-galactofuranosidasa de Penicillium fellutanum. Esta enzima es un buen modelo pues es secretada al medio por un microorganismo no patógeno, y la producción y purificación de la enzima se han optimizado en nuestro laboratorio. Se ha determinado en este trabajo de tesis que ninguno de los derivados desoxigenados es sustrato de la enzima, o sea que los hidroxilos de C-2, C-3 y C-6 de la D-galactofuranosa son importantes para la interacción con el sitio activo.

Abstract:
The synthesis of deoxysugars is an area of great interest as components of natural products and as tool for studies related with the activity of enzymes. The common monosaccharides, glucose, mannose and galactose are present in mammal cells only in the pyranosic configuration, thus the interest for the synthesis of deoxysugars in this configuration. However. in the last decades it was reported that β-D-galactofuranose is constituent of important glycoconjugates of the surface of patogenic microorganisms such as Trypanosoma cruzi and Mycobacterium tuberculosis. The enzymes responsible for the metabolism of galactofuranose, like galactofuranosidases and galactofuranosyltransferases are good targets for the design of inhibitors that would affect the viability of the microorganisms without effect on the infected mammal, who lacks glycoconjugates with galactofuranose. In the present doctoral thesis, β-D-galactofuranosides deoxygenated in positions 2, 3 or 6 have been synthesized for the first time. As starting material, D-galactono- 1,4-lactone, commercially available, that may be selectively substituted, was used as a good precursor of the furanosic ring. The deoxysugars and their precursors have been characterized, and the β-D-glycosides have been used to study their suitability as substrates for the exo β-D-galactofuranosidase of Penicillium fellutanum. This enzyme is a good model because P. felutanum is a non pathogenic microorganism, the enzyme is secreted to the medium and its production and purification have been optimized in our laboratory. It was found that none of the deoxygenated compounds are substrates for the enzyme, that is that the hydroxyls of C-2, C-3 and C-6 of D-galactofuranose are important for interaction with the active site.

Char, Cielo Dolores. "HACCP, Microbiología predictiva y factores en combinación para mejorar la calidad de productos lácteos : dulce de leche : aplicación del concepto de factores en combinación y de la microbiología predictiva en el mejoramiento de la calidad del Dulce de Leche" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Cerutti, María Laura. "Desarrollo y caracterización de anticuerpos contra un factor de transcripción viral unido a su ADN específico" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El lupus eritematoso sistémico es una enfermedad autoinmune de etiología desconocida. El rasgo principal de esta enfermedad es la presencia de anticuerpos dirigidos contra componentes nucleares, como histonas y ADN doble cadena. En los últimos años, se ha demostrado que varios complejos proteína: ADN pueden inducir una respuesta autoimmune contra ADN en ratones normales, no-predispuestos a desarrollar autoinmunidad. En este trabajo de tesis se describe el desarrollo de un modelo de inmunización con un complejo proteína: ADN molecularmente definido y la caracterización de la respuesta inmune generada contra él en animales normales. En particular, se utilizó el complejo formado por el dominio C-terminal del factor de transcripción E2 del papilomavirus humano y un olígonucleótido doble cadena de 18 pb comprendiendo uno de sus sitios de reconocimiento específico dentro del genoma viral. El análisis de la respuesta inmune humoral de ratones inmunizados con la proteína E2 libre o unida a ADN indica que ésta es una proteína altamente inmunogénica. La inmunización con E2 libre emulsionada en un adyuvante de composición aceite-en-agua resulta en una respuesta policlonal dirigida hacia el reconocimiento de epitopes discontinuos, sugiriendo que la naturaleza acuosa del adyuvante es el responsable de mantener a la proteína en su conformación nativa. El estudio de la respuesta policlonal contra ADN desarrollada en los ratones inmunizados con este complejo proteína: ADN señala que el olígonucleótido específico puede adquirir potencial inmunogénico sólo cuando el complejo es incubado a altas concentraciones por un largo período de tiempo. En estos casos, los ratones inmunizados desarrollaron altos títulos de IgG anti-oligonucleótido durante una respuesta T-dependiente clásica. Además, la inmunización con la proteína E2, ya sea libre o unida a su secuencia de reconocimiento, resultó en una respuesta autoinmune contra ADN nativo doble cadena. Estos resultados son congruentes con la hipótesis de que proteínas virales con capacidad de unir ADN tendrían el potencial necesario para iniciar el desarrollo de la enfermedad autoimmune lupus eritematoso sistémico. A partir de uno de los animales inmunizados con el complejo E2: ADN han sido obtenidos y caracterizados seis anticuerpos monoclonales dirigidos contra la proteína viral y dos anticuerpos contra el olígonucleótido específico. En coincidencia con el patrón de reactividades observado en la respuesta políclonal, la mayoría de los hibridomas anti-E2 reconocen epitopes discontinuos en la proteína. Los estudios de mapeo epitópico-funcional realizados sobre estos anticuerpos monoclonales revelan que se han obtenido dos grandes poblaciones de anticuerpos: una formada por anticuerpos capaces de formar un complejo temario estable con E2 y el oligonucleótido, y otra población formada por anticuerpos que reconocen un epitope, parcial o totalmente, superpuesto con la superficie de unión a ADN en el factor de transcripción, interfiriendo en su interacción con ADN. Estudios detallados de la interacciones anti-ADN: ADN muestran que los dos anticuerpos monoclonales anti-ADN generados reaccionan contra el oligonucleótido utilizado como inmunógeno con afinidades comparables a las del factor de transcripción E2. Por el contrario, estos anticuerpos unen con muy baja afinidad moléculas de ADN no-relacionadas doble cadena del mismo largo. Más aún, ambos anticuerpos unen al oligonucleótido libre y acomplejado a E2 con afinidades muy similares, formando un complejo temario estable. La estructura de las regiones variables y el patrón de mutaciones de la secuencia de estos anticuerpos indica que éstas son muy similares a las encontradas en anticuerpos anti-ADN generados en modelos murinos de lupus. En conjunto, todos estos resultados sugieren fuertemente que estos anticuerpos monoclonales anti-ADN son el producto de una respuesta inmune dirigida por el antígeno, en el cual el complejo E2: ADN actuó como una nueva entidad inmunogénica.

Abstract:
Systemic lupus erythematosus is an autoimmune disorder with unknown etiology. The major hallmark of this disease is the presence of antibodies against nuclear components, including double-stranded DNA and histones. In the last years, several protein: DNA complexes have been shown to induce anti-DNA antibodies in normal, nonautoimmune-predisposed mice. This PhD thesis describes the development of an immunization model using a molecularly defined protein: DNA complex and the characterization of the immune response generated against it in non-autoimmune mice. In particular, a complex formed by the C-terminal domain of the human papillomavirus E2 transcription factor and a cognate 18 bp double stranded oligonucleotide corresponding to one of its recognition sites in the viral genome has been used. Analysis of the humoral immune response of mice challenged with free or bound E2 indicates that this is a very immunogenic protein. Immunization with free E2 emulsified in an oil-in-water adjuvant elicits a strong humoral response shifted to the recognition of discontinuous epitopes, suggesting that the aqueous nature of this adjuvant emulsion is responsible for keeping the protein in its native conformation. Analysis of the induced polyclonal anti-DNA response indicates that the specific oligonucleotide can acquire immunogenic potential only when the complex is incubated under high concentrations for a long-term period. In this case, the immunized mice develop high IgG anti-oligonucleotide sera titers during a typical T-dependent immune response. Besides, immunization with free or DNA complexed E2 protein also results in an autoimmune response to native double stranded DNA, supporting the hypotesis that viral DNA-binding proteins may have the potential to initiate the development of the autoimmune disease Systemic lupus erythematosus. From one of the E2: DNA complex immunized mice there has been obtained and characterized six monoclonal antibodies against the viral protein and two against the specific oligonucleotide. According with the pattern of reactivity observed in the polyclonal response, most anti-E2 hybridomas recognize discontinuous epitopes on the protein. Epitope mapping and functional analysis of these monoclonal antibodies reveals that two separate antibodies populations can be obtained: one formed by antibodies able to form a stable ternary complex with protein and the oligonucleotide, and other in which the antibodies recognize an epitope totally or partially overlapped with the DNA-binding surface of the transcription factor, interfering with its interaction with DNA. Detailed studies of the anti-DNA: DNA interactions showed that the two generated anti-DNA monoclonal antibodies react against the double stranded oligonucleotide used as immunogen with affinities comparable to that of the transcription factor. In contrast, they bind with low affinities with unrelated double stranded DNAs of the same length. Furthermore, they bind with almost the same affinity towards the free or E2 bound oligonucleotide, forming a stable ternary structure. The variable region structures and mutation pattern of the anti-DNA antibodies sequences indicate that they are similar to the anti-dsDNA antibodies described on murine models of systemic lupus erythematosus. Taken together these results strongly suggest that these anti-DNA monoclonal antibodies are the product of an antigen-driven immune response, in which the E2: DNA complex acted as an new immunogenic entity.

Celma, Cristina Cecilia del Pilar. "Virus de inmunodeficiencia de simios: estudio de la participación del dominio citoplasmático de la glicoproteína viral de envoltura (Env) en la infectividad viral y en la incorporación de Env a viriones" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En las últimas etapas del ciclo de replicación de los virus de immunodeficiencia de simios (SIV), ocurre el ensamblado de las partículas virales en la membrana plasmática de las células infectadas. Durante la morfogénesis de los viriones se produce la incorporación de la glicoproteína viral de envoltura (Env), proceso que es esencial para la infectividad viral. La glicoproteína Env se sintetiza como un precursor proteico, el cual es clivado en las subunidades de superficie y transmembrana por proteasas celulares. A diferencia de otros retrovirus, SIV posee una proteína transmembrana con un dominio citoplasmático (CD) particularmente largo, de 164 residuos. Para investigar el rol que cumple el CD en la incorporación de Env a las partículas virales y en la infectividad, se generaron y caracterizaron glicoproteínas Env mutantes llevando pequeñas deleciones internas de 4 a 7 aminoácidos en el CD o bien acortamientos progresivos de 20 residuos desde su extremo carboxilo. Las mutaciones introducidas no tuvieron efecto alguno sobre la síntesis, procesamiento y expresión en la superficie celular de la glicoproteína Env. Sin embargo, las deleciones internas que afectaron el tercio carboxilo terminal del CD de Env inhibieron significativamente tanto la incorporación de Env a viriones como la infectividad viral. El mismo fenotipo defectivo fue observado al remover 20 a 100 aminoácidos del extremo carboxilo del CD. En cambio, glicoproteínas Env con CDs de 44 o 24 aminoácidos se incorporaron a viriones en forma más eficiente que la proteína Env salvaje, e incrementaron no menos de 10 veces la infectividad viral respecto de la de viriones llevando la Env salvaje. Por otro lado, se realizó un estudio de evolución forzada de un virus mutante llevando una deleción interna en el CD de Env que bloquea la capacidad replicativa del virus. La propagación durante períodos prolongados de tiempo de células linfoideas infectadas con este virus mutante condujo a la selección de poblaciones virales revertantes. En estos virus, el fenotipo defectivo causado por la deleción original fue revertido por mutaciones puntuales en el gen env que acortaron el CD a una longitud de 52 o 48 aminoácidos. En conjunto, los resultados presentados en este trabajo de Tesis demuestran cómo variaciones en la longitud del CD de la glicoproteína Env de SIV modulan las funciones virales mediadas por Env.

Abstract:
During the late stages of simian immunodeficiency virus (SIV) replication, particle assembly takes place at the plasma membrane of the infected cells. During virus morphogenesis, the envelope glycoprotein (Env) is incorporated into virions, a step that is essential for virus infectivity. The Env glycoprotein is synthesized as a heavily glycosylated precursor that is cleaved by cellular proteases into the surface and transmembrane subunits. The cytoplasmic domain of the SIV transmembrane protein is unusually long (164 amino acids) compared to those of other retroviruses. To investigate the role that the SIV Env cytoplasmic domain plays in Env incorporation into virions and virus infectivity, we generated and characterized two sets of SIV Env mutants: a series of mutants carrying small in-frame deletions throughout the entire Env cytoplasmic domain, and another series of Env mutants bearing progressively truncated cytoplasmic tails. None of these mutations had an effect on the synthesis, processing and cell surface expression of the SIV Env glycoproteins. Interestingly, in-frame deletions targeting domains in the C-terminal third of the Env cytoplasmic tail impaired both Env incorporation into particles and virus infectivity. Asimilar defective phenotype was observed for the SIV Env mutants lacking the C terminal 20 to 100 amino acids. Of note, SIV Env glycoproteins bearing a 44- or 24- amino acid cytoplasmic tail were incorporated into virions at levels significantly higher than those of wild-type Env and increased virus infectivity by more than 10-fold with respect to that conferred by the full-length Env protein. In addition, we performed a “forced evolution” study in which we propagated for a long period of time cells infected with a replication-defective mutant virus containing an in-frame deletion within the SIV Env cytoplasmic domain. These experiments led to the selection of second-site revertant viruses in which the defective phenotype imposed by the original deletion was reversed by mutations in the env gene that truncate the Env cytoplasmic tail to 52 or 48 amino acids. In conclusion, our results demostrate how variations in the length of the SIV Env cytoplasmic domain modulate Env-mediated viral functions.

Castiglioni, José Luis. "Correspondencia de Dold-Kan para anillos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La correspondencia (dual) de Dold-Kan establece que hay una equivalencia de categorías K : Ch≥o —>UbΔ entre los complejos de cocadenas no negativamente graduados y los grupos abelianos cosimpliciales, que es inverso del funtor normalización. Mostramos que la restricción de K a DGR*, la categoría de anillos diferenciales graduados con diferencial de grado +1, o anillos diferenciales de cocadenas, se puede equipar con un producto asociativo, y que el funtor resultante DGR* —> RingsΔ, si bien no es una equivalencia, induce una a nivel de categorías de homotopía. Es decir, tanto DGR* como RingsΔ son categorías de modelo cerrado de Quillen y el funtor derivado total a izquierda de K es una equivalencia: LK : HoDGR* → Ho RingsΔ El dual de este resultado para anillos diferenciales de cadenas y anillos simpliciales fue obtenido, de forma independiente, por S. Schwede and B. Shipley mediante métodos diferentes (Equivalences of monoidal model categories. Algebraic and Geometric Topology 3 (2003), 287-334). Nuestra demostración está basada en un funtor Q : DGR* → RingsΔ, naturalmente homotópicamente equivalente a K, y que preserva la estructura de modelo cerrado. Este funtor tiene otras aplicaciones interesantes. Por ejemplo, usamos Q para probar una versión no conmutativa de los teoremas de Hochschild-Konstant-Rosenberg y Loday-Quillen. Nuestra versión se aplica al módulo cíclico → ЦnR S que se obtiene a partir de un homomorfismo de anillos no necesariamente conmutativos R → S, usando el coproducto ЦR. También como aplicación de las propiedades de Q obtenemos una descripción sencilla, que no involucra trenzas, de un producto en la potencia tensorial SxR, definido originalmente por P. Nuss, utilizando trenzas (Noncommutative descent and nonabelian cohomology, K-theory 12 (1997) 23-74.). Palabras clave: formas diferenciales no commutativas, anillos cosimpliciales, categoría de modelos.

Abstract:
The (dual) Dold-Kan correspondence says that there is an equivalence of categories K : Ch≥o —>UbΔ between nonnegatively graded cochain complexes and cosimplicial abelian groups, which is inverse to the normalization functor. We show that the restriction of K to DG-rings can be equipped with an associative product and that the resulting functor DGR* —> RingsΔ, although not itself an equivalence, does induce one at the level of homotopy categories. In other words both DGR* and RingsΔ are Quillen closed model categories and the total left derived functor of K is an equivalence: LK : HoDGR* → Ho RingsΔ The dual of this result for chain DG and simplicial rings was obtained independently by S. Schwede and B. Shipley through different methods (Equivalences of monoidal model categories. Algebraic and Geometric Topology 3 (2003), 287-334). Our proof is based on a functor Q : DGR* → RingsΔ, naturally homotopy equivalent to K , and which preserves the closed model structure. It also has other interesting applications. For example, we use Q to prove a noncommutative version of the Hochschild-Konstant-Rosenberg and Loday-QuilLen theorems. Our version applies to the cyclic module → ЦnR S that arises from a homomorphism R —>S of not necessarily commutative rings, using the coproduct ЦR of associative R-algebras. As another application of the properties of Q, we obtain a simple, braid-free description of a product on the tensor power SxnR originally defined by P. Nuss using braids (Noncommutative descent and nonabelian cohomology, K-theory 12 (1997) 23-74.). Keywords: noncommutative differential forms, cosimplicial rings, model category.

Castelo, Marcela K.. "Comportamiento de localización y patrones de explotación de hospedadores (Coleóptera: Scarabaeidae) por el moscardón cazador de abejas Mallophora ruficauda (Díptera: Asilidae)" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El moscardón cazador de abejas, Mallophora ruficauda, es la plaga de la apicultura más importante de la región pampeana argentina. Durante el estado adulto es depredador de insectos como las abejas melíferas y durante el estado larvario es parasitoide de larvas de Scarabaeidae, comúnmente denominadas gusanos blancos del suelo. El objetivo de esta Tesis es estudiar aspectos básicos de la biología y ecología de esta especie, con especial énfasis en los mecanismos de localización y explotación de sus hospedadores. Particularmente, se estudia cuál es la contribución relativa de las hembras y de las larvas en estos procesos y cómo son los patrones de parasitismo resultantes. Mallophora ruficauda deposita los huevos en ootecas, las cuales son puestas en vegetación herbácea elevada y alambrados. Las hembras regulan el número de huevos por ooteca en función de la altura de oviposición en el sustrato, depositando más cantidad de huevos a medida que se incrementa la altura. Además, seleccionan fuertemente la altura de oviposición en el sustrato, la cual es l,25-1,50 m sobre la vegetación (principalmente sobre Carduus acanthoides) y l,00-l,25 m sobre los alambrados. Las larvas son dispersadas por el viento y este proceso sería clave para el encuentro del hospedador. La altura mínima de oviposición, estimada mediante un modelo de simulación, que asegura la segregación de las larvas y maximiza el éxito reproductivo del parasitoide es 1,25 m, y es coincidente con la selectividad determinada a campo en ambos sustratos. La temporada de oviposición de M. ruficauda tiene una duración de 80 días. Las ootecas poseen 327,7 huevos en promedio y el período embrionario es de siete días. La fertilidad media es 96,2 % y no es afectada por fenómenos negativos de denso-dependencia. La larva de M. ruficauda es capaz de localizar activamente a su hospedador dentro del suelo usando información quimica, y la respuesta de orientación esta mediada por claves originadas en el intestino posterior del gusano blanco. Los gusanos blancos son capaces de detectar a los coespecíficos a través de una señal química que sería la misma que la usada por las larvas de M ruficauda para localizar a sus hospedadores. Las larvas parasitoídes que se encuentran superparasitando a un hospedador no evitan a sus coespecíficos y no se movilizan a otro hospedador libre de larvas. Mallophora ruficauda parasita a siete de las nueve especies de gusanos blancos que habitan en su área de distribución, con marcada preferencia hacia Cyclocephala signaticollis. Entre las especies de gusano blanco, C. signaticollis tiene mayor probabilidad de ser parasitada, incluso cuando individuos de otras especies se encuentran accesibles al parasitoíde. El porcentaje de parasitismo disminuye a medida que aumenta la densidad del hospedador, en las escalas espaciales más pequeñas que el radio de acción de los parasitoídes adultos. La denso-dependencia inversa hallada en el parasitismo sería explicada por el comportamiento de localización simultáneo entre hembras y larvas. Se observó que a escalas mayores que el radio de acción de los parasitoídes adultos, el patrón de denso-dependencia se diluye, y el parasitismo es independiente de la densidad del hospedador. Este fenómeno podría ser consecuencia de limitaciones de las hembras para detectar sitios de alta calidad de hospedadores. Mallophora ruficauda posee un limitado potencial como regulador de las poblaciones de gusanos blancos, sugiriendo que las acciones de control sobre sus poblaciones en los apiarios, traerían aparejadas limitadas consecuencias sobre la dinámica poblacional de sus hospedadores.

Abstract:
Mallophora ruficauda is the most important pest of apiculture in the Pampas region of Argentina. As an adult, it is a predator of insects like honey-bees and as a larva it behaves as a parasitoid of Scarabaeidae larvae, commonly known as white grubs. The aim of this Thesis was to study ecological and biological aspects of this species, setting the emphasis on both the host location and host exploitation mechanisms. Specifically it reports the results of studies on the relative contributions of females and larvae to these processes, and on the resulting patterns of parasitism. Mallophora ruficauda lays eggs in egg-clusters which are placed on tall grasses and wire fences. Females are able to regulate the number of eggs per egg-cluster according to oviposition height on substrates, laying a greater number of eggs when the height is increased. Furthermore, they select the oviposition height, which is 1.25-l.50 m on vegetation (mainly on Carduus acanthoides) and 1.00-1.25 m on wire fences. Larvae are dispersed by wind and this process would be key for host encounter. The minimum oviposition height, estimated by means of a simulation model, that secures maximal spread of larvae and hence maximizes the parasitoid fitness is 1.25 m, which is in agreement with the height selectivity measured in the field. The oviposition season of M. ruficauda has a duration of 80 days. Egg-clusters have 327.7 eggs in average and egg development takes seven days. Mean fertility is 96.2 % and is not affected by negative density dependence phenomena. Mallophora ruficauda larvae are able to actively locate its host underground, using chemical information and the orientation response is mediated by cues originated in the hindgut of the white grub. White grubs are able to detect conspecifics through chemical signals that would be the same that those used by the larvae of M. ruficauda to locate hosts. Parasitoid larvae superparasiting a host do not avoid conspecifics and do not move to another healthy host. Mallophora ruficauda parasites seven out of nine species of white grubs present within its distribution area, with a remarkable preference towards Cyclocephala signalicollis. Among white grub species, C. signaticollis has the highest probability to be parasitized, even when individuals of other species are available to parasitoids. The percentage of parasitism decreases when the host density increases, at spatial scales lower than the home range of adults. Inverse density dependent patterns observed may be explained by the host location behavior performed simultaneously by females and larvae. It was observed that at spatial scales higher than the home range of adult parasitoids, the density dependence pattern is diluted, and parasitism is independent of the host density. This may be a consequence of the constraints of females to detect sites with high host quality. Mallophora ruficauda has a limited potential a regulating agent of white grub populations, suggesting that the control actions againts M. ruficauda populations in apiaries bring minimal consequences on the host population dynamics.

Carmarán, Cecilia C.. "Contribución al conocimiento de la familia Diatrypaceae, biodiversidad y Taxonomía" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La familia Diatrypaceae (actualmente, orden Xylariales) incluye a los géneros Eutypella, Eutypa, Diatrype, Cryptosphaeria, Echinomyces, Leploperidia, Dothideovalsa, con ascos octosporados y a los géneros Diatrypella y Cryptovalsa con ascos poliesporados. De los géneros considerados dentro de la familia, estudiaremos en este trabajo, especies pertenecientes a 5 de ellos, siendo estos los más representativos de los géneros octosporados en la familia: Diatrype con 56 especies, Eutypa con 26 , Eutypella con 76, Cryptosphaeria con 5 y Echinomyces con 2. Los objetivos de este estudio, son: -identificar caracteres fenotípicos diagnósticos para cada jerarquía taxonómica, contribuir al conocimiento de la biodiversidad de la familia Diatrypalceae en la República Argentina, -aplicar técnicas numéricas, para elaborar una clasificación genérica e infragenérica que permita el reconocimiento de las especies o grupos taxonómicos afines, -aplicar técnicas cladísticas para analizar las relaciones filogenéticas entre las especies y/o grupos taxonómicos definidos. Se realizaron colecciones en diferentes localidades de las provincias de Jujuy, Salta, Tucumán, Misiones, Mendoza, San Juan, Tierra del Fuego, Entre Ríos, Corrientes y Buenos Aires. Como consecuencia de este trabajo se reconocen 80 entidades taxonómicas (especies y/o complejos taxonómicos), distribuidos en tres géneros: Clavipella nom. nov., Diatrype y Peroneutypa; se proponen 4 especies nuevas y 4 nuevas variedades; l nombre nuevo, l7 nuevas combinaciones y 7 nuevas primeras citas para nuestro país.

Abstract:
The family Diatrypaceae (at present, in Xylariales) includes the genera: Eutypella, Eutypa, Diatrype, Cryptosphaeria, Echinomyces, Leptoperidia, Dothideovalsa (with octosporic asci) and the genera: Diatrypella and Cryptovalsa (with polysporic asci). Among these genera, Diatrype (56 species), Eutypa (26 species), Eutypella (76 species), Cryptosphaeria (5 species) and Echinomyces (2 species) were studied, being the most representative octosporic genera of the family. The objectives of this study are: -to identify diagnostic phenotypic characters for each taxonomic hierarchy, -to contribute to the knowledge of the biodiversity of the Diatrypaceae in the Argentina Republic, -to apply numerical techniques to elaborate generic and infrageneric classifications which allow to distinguish the different species and/or taxonomic groups, -to apply cladistic techniques to analyze the phylogenetic relations among the defined species and /or taxonomic groups. The samples were collected in different localities of the following provinces: Jujuy, Salta, Tucumán, Misiones, Mendoza, San Juan, Tierra del Fuego, Entre Ríos, Corrientes and Buenos Aires. As conclusion of this work: 80 taxonomic entities were recognized (species and/or taxonomic complexes), distributed in 3 genera: Clavipella nom. nov., Diatrype and Peroneutypa; 4 new species and 4 new varieties were proposed; l new name, l7 new combinations and 7 were recorded for first time for our country.

Carbajo, Aníbal E.. "Distribución espacio-temporal de Aedes aegypti (Diptera :Culicidae) : su relación con el ambiente urbano y el riesgo de transmisión del virus dengue en la Ciudad de Buenos Aires" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Campos, Eleonora. "Obtención de mutantes de Brucella abortus genéticamente definidas: su caracteización molecular y evaluación de su uso como vacunas para la brucelosis bovina" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El desarrollo de las técnicas de ADN recombinante permitió la generación de vacunas racionalmente diseñadas. Teniendo esto en cuenta, el objetivo de este trabajo es la obtención de cepas de Brucella abortus genéticamente modificadas que puedan ser utilizadas como vacunas contra la brucelosis. La brucelosis es una zoonosis bacteriana causada por especies del género Brucella, un grupo homogéneo de patógenos intracelulares facultativos que tienen la habilidad de sobrevivir y multiplicarse en fagocitos profesionales y no profesionales. En bovinos, Brucella abortus produce una enfermedad crónica caracterizada por aborto, nacimiento de terneros enfermos y fertilidad reducida. La cepa vacunal para la brucelosis bovina en uso en la mayoría de los países es la cepa B. abortus Sl9, que confiere un 70 a 80% de protección contra el aborto pero genera dificultades en el serodiagnóstico y conserva considerable virulencia residual para el hombre. Con el fin de obtener cepas de B. abortus que sean compatibles con un ensayo diagnóstico diferencial y que tengan menor virulencia residual que Sl9, se construyó la cepa doble mutante B. abortus INTA] (II) por inactivación de los genes bp26 y bmp18. BP26 es una proteína periplásmica inmunodominante durante la infección con Brucella que no influye en la persistencia ni en la protección de la cepa en ratones BALB/c. BMP18 es una lipoproteína de membrana externa, también descripta como Ompl9, cuya anulación en Sl9 genera menor capacidad de replicar en el bazo de los ratones aunque con igual persistencia y capacidad protectiva. La cepa INTAl resultó más atenuada que S19, pero mantuvo su capacidad protectiva en el modelo ratón. Esta cepa mostró mayor sensibilidad a temperatura, a agentes hidrofóbicos y a moléculas policatiónicas que Sl9 y esta sensibilidad fue revertida por una copia funcional del gen bmp18. Para determinar la contribución de BMP18 a la virulencia de Brucella, se generó la cepa Ml8v por inactivación de bmpl8 en la cepa patógena B. abortus 2308. M18v no mostró diferencias significativas respecto de S2308 en su habilidad para sobrevivir y replicarse en macrófagos, pero fue más atenuada en ratones. Por lo tanto, la falta de expresión de BMP18 generaría desorganización de la membrana externa, haciendo a la bacteria más susceptible a mecanismos bactericidas del suero pero sin afectar significativamente su supervivencia intracelular. Para evitar el uso de genes que confieren resistencia a antibióticos en el desarrollo de cepas vacunales, se diseñó una estrategia para la generación de mutantes ísogénicas utilizando el gen sacB como marcador de contraselección. Con esta estrategia, se obtuvo la cepa B. abortus Mlluc por reemplazo de parte de la secuencia de bp26 por el gen luc en Sl9 y posteriormente la cepa doble mutante INTA2 (I2) por deleción del gen bmp18 en la cepa M1luc. Al evaluar las cepas Mlluc e I2 en bovinos, la protección obtenida contra el aborto después del desafio con una cepa patógena fue equivalente para Sl9 y Mlluc pero menor para I2. Estos resultados indican que la falta de BP26 no tiene efecto alguno sobre la capacidad de Sl9 de inducir una respuesta inmune protectiva tanto en el modelo ratón como en el hospedador natural. Sin embargo, la falta de expresión de BMP18 en Sl9 genera menor capacidad protectiva en bovinos. En las condiciones de desafio experimental de este ensayo, la respuesta humoral contra BP26 cuantificada por iELISA presentó gran heterogeneidad y bajos niveles de sensibilidad, para parámetros de especificidad óptima. La estrategia desarrollada para la obtención de mutantes ísogénicas en más de un gen sin marcadores de resistencia a antibióticos permitirá la posibilidad de generar cepas de Brucella con múltiples mutaciones definidas de manera de obtener cepas vacunales efectivas y seguras para animales y humanos que puedan ser utilizadas en el control de esta enfermedad.

Abstract:
Recombinant DNA technology has led to the development of rationally designed vaccines. In this context, the aim of this project was to develop genetically modified strains of Brucella abortus that could be used as vaccines against brucellosis. Brucellosis is a bacterial zoonosis caused by species from the genera Brucella, an homogenous group of intracellular facultative pathogens that have the ability to survive and replicate in professional and non-professional phagocytes. In bovines, Brucella abortus produces a chronic disease characterized by abortion, birth of sick calves and reduced fertility. The vaccine strain in use for bovine brucellosis in most countries is B. abortus Sl9. This strain confers 70 to 80% protection against abortion but generates difficulties in serodiagnosis and retains considerable residual virulence for human beings. The double mutant strain B. abortus INTA1 (II) was constructed by inactivation of bp26 and bmp18 genes, with the objective of obtaining strains of B. abortus that could have an associated differential diagnostic test and that are less virulent than Sl9. BP26 is a periplasmic protein that is inmunodominant during infection with Brucella. The lack of expression of this protein in Sl9 does not affect the strain persistence or protection capacity in the mouse model. BMP18 is an outer membrane lipoprotein, also reported as Ompl9. When its expression was abrogated in Sl9, the resulting mutant strain showed less replication in mice spleen, suggesting attenuation, although it maintained its protection capacity. B. abortus I1 resulted more attenuated than Sl9 and retained its protection capacity in the mouse model. This strain showed more sensitivity than Sl9 to temperature, hydrophobic agents and policationic molecules, and this phenotype was reverted by a functional copy of bmp18. In order to establish BMP18 contribution to Brucella virulence, bmp18 gene was mutated in pathogenic strain B. abortus 2308, generating strain Ml8v. This strain did not show any significant differences respect to S2308 in its ability to survive and replicate in murine macrophages, but was more attenuated in mice. Therefore, lack of expression of BMP18 would disrupt membrane integrity, probably leading to more susceptibility to sera bactericidal mechanisms but not affecting significantly intracellular survival. In order to avoid the use of antibiotic resistance markets in the construction of vaccine strains, a mutagenesis strategy for obtaining isogenic strains using sacB as counterselection marker was developed. With this strategy strains B. abortus Mlluc (Sl9 ∆bp26::luc) and INTA2 (I2) (Sl9 ∆bp26::luc Abmpl8) were obtained, replacing most of bp26 coding region for luc gene in M1luc and then deleting also most of bmp18 in the double mutant 12, without incorporating drug resistance markers. When strains M1luc and 12 were evaluated in bovines, protection against abortion was equal for Sl9 and M1luc but considerably reduced for I2. These results indicate that lack of BP26 has no effect in Sl9 protection capacity either in mice or the natural host. However, lack of BMP18 in Sl9 generates less protection capacity in bovines. In the conditions of experimental challenge of this assay, the humoral response against BP26 recombinant protein measured by iELISA after challenge presented high heterogeneity and poor sensitivity respect to LPS response, considering parameters of optimal specificity. The strategy for generation of mutant isogenic strains in more than one gene without the incorporation of antibiotic resistance markers opens the possibility of achieving strains with multiple defined mutations. This will most certainly lead to effective and safer vaccine strains against brucelosis.

Callegari, Gerardo Carlos. "Dinámica del demojado de películas líquidas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudia experimentalmente el demojado de peliculas líquidas de diversas viscosidades, sobre sustratos planos y en el interior de tubos capilares cilindricos de PVC. Mientras que en geometría plana la velocidad de demojado, Vd, permanece constante con el espesor de la película, h (para valores de h suficientemente bajos), en geometría cilindrica se observa un claro aumento de Vd con h. Los datos correspondientes a los líquidos de todas las viscosidades analizadas siguen una tendencia común. La velocidad de demojado disminuye para una película de viscosidad dada, cuando el fluido externo no es aire sino un líquido de viscosidad finita: la relación entre el factor de reducción de velocidad y las viscosidades de ambos líquidos concuerdan con lo estimado por un modelo semiempírico previo. Se desarrolla un modelo teórico que muestra que, en geometria cilíndrica, la fuerza capilar motriz aumenta con el cuadrado del espesor de la película. Finalmente, se presenta un modelo numérico en el cual se demuestra que la disipación en el interior del montículo que colecta el líquido que demoja, no es despreciable frente a la de la línea de triple contacto y que depende de la geometría. De esta manera se explica la tendencia de los resultados experimentales.

Abstract:
Dewetting of liquid films of various viscosities has been studied experimentally in PVC plane substrats and in the inner part of capillary cylindrical tubes. While in planar geometry the dewetting velocity remains constant with the film thickness, h (for thickness values low enough) a clear increase of the dewetting velocity with h is observed in cylindrical geometry, and a common trend is followed by data corresponding to all fluids of varying viscosities. The dewetting velocity decreases for a film of given viscosity when the surrounding fluid is not air but a finite viscosity liquid: the relationship between the velocity reduction factor and liquids viscosities are in agreement with estimations obtained with a previous semiempirícal model. A theoretical model is developed which shows that, in cylindrical geometry, the driving capillary force increases with the square of the film thickness. Finally a numerical model is presented showing that the disipation inside the bulk of the rim collecting the dewetting fluid, is important, compared with the disipation near the contact line and that it depends on the geometry. In this way the experimental trend of the results is explained.

Busaniche, Manuela. "Variedades de BL-álgebras generadas por BLn-cadenas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Bruzzoni, Pablo. "Efectos de superficie en la difusión de hidrógeno en hierro y aleaciones ferrosas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se ha estudiado el intercambio de hidrógeno entre un medio hidrogenante y láminas de hierro cubiertas de delgadas películas de níquel o paladío. Para tal fin se usaron técnicas de permeacíón de hidrógeno y análisis de respuesta en frecuencias, ya sea empleando carga catódica modulada o carga en fase gaseosa con presión modulada. Las películas de Ni y Pd fueron caracterizadas por diversas técnicas en cuanto a sus propiedades fisicas y su interacción con el hidrógeno. El intercambio de hidrógeno entre el medio y el sustrato de hierro es un proceso en varias etapas que incluye la difusión en el interior de la película metálica y el pasaje a través de las interfases. El pasaje a través de la interfase medio hidrogenante-material de la película juega un papel clave y se han determinado los coeficientes de transferencia correspondientes. Esta velocidad de transferencia finita, combinada con la capacidad de retención de hidrógeno de la propia película, determina en gran medida la respuesta del sistema en estado transitorio. Se propone que la transición de estado adsorbido a estado absorbido o soluto intersticial es la etapa determinante de la velocidad de pasaje a través de la interfase medio hidrogenante-material de la película. En el caso de la película de paladio, dicha velocidad de transferencia se reduce marcadamente con largos tiempos de exposición de la película al medio hidrogenante, lo cual se atribuye a la acumulación de hidrógeno subsuperficial. Finalmente se discuten estos resultados en relación con la técnica de permeacíón de hidrógeno aplicada a aleaciones de base hierro.

Abstract:
Hydrogen exchange between a hydrogenating medium and iron membranes covered with thin palladium or nickel films has been studied. For this purpose, techniques of hydrogen permeation and frequency response analysis were used, either with modulated cathodic chargíng or modulated gas phase chargíng. The nickel and palladium films were characterised through different techniques regarding their physical properties and their interaction with hydrogen. Hydrogen exchange between the medium and the iron substrate is a process of several steps that includes both the bulk diffusion in the metallic film and the transfer across the interphases. The transfer of hydrogen across the hydrogenating medium - film material interphase plays a key role; the corresponding transfer coefficient has been determined. This finite transfer rate, combined with the hydrogen retention capacity of the film itself, determines the transient response of the system to a great extent. It is proposed that the transition between adsorbed state and absorbed state or interstitial solute is the rate determining step for he transfer across the hydrogenating medium-film material interphase. In the case of the palladium film, this transfer rate is markedly reduced after long exposures of the film to the hydrogenating medium, which is attributed to subsurface hydrogen. Finally, these results are discussed in relation with the hydrogen permeation technique applied to iron base alloys.

Broggi, Leticia Elvira. "Productos agrícolas de la provincia de Entre Ríos: contaminación potencial por mohos y micotoxinas e influencia de los procesos de molienda regional" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La producción agrícola en Entre Ríos alcanza el 40 % del total de los ingresos, resultando relevantes las cosechas de soja, maíz, trigo, arroz y sorgo. Solamente existen estudios previos de contaminación por micotoxinas y flora fúngica en arroz. Se evaluaron las micotoxinas de aparición probable en dichos sustratos en esta provincia y se estimó el efecto de los procesos de la molienda regional en maíz y arroz. Entre los hongos potencialmente toxicogénicos prevalece Fusarium verticillioides en maíz; en trigo, sorgo, arroz y soja, se observa una predominancia de Alternaria alternate, situación no observada anteriormente en otras regiones del país. Debido a la alta prevalencia de A. alternate, se estudió su capacidad toxicogénica. Cepas de esta especie fueron productoras de alternariol monometileter, alternariol, altertoxina-l y ácido tenuazónico. En maíz, tanto en la cosecha como elaborado, no se observó co-ocurrencia de ocratoxina A, zearalenona ni deoxinivalenol y una sola muestra del año 1.999 fue positiva de aflatoxina B1. Se comprobó la presencia de fumonisinas B1, B2 y B3. tanto en el maíz recientemente cosechado, almacenado y en todas las fracciones de la molienda. En arroz con cáscara y en los subproductos de elaboración, no se detectó la contaminación por estas toxinas En los dos procesos industriales de molienda y para las micotoxinas estudiadas (fumonisinas en maíz y toxinas de Alternaria en arroz), se estimó la reducción en las fracciones destinadas a consumo humano (harina de maiz y arroz pulido) y el incremento en las correspondientes a consumo animal.

Abstract:
Agricultural production in Entre Ríos represents about 40 % of the total income in the province. The most relevant crop species are soybean, corn, wheat, rice and sorghum. Previous studies dealing with mycotoxin production and fungal contamination have only been carried out in rice. For that reason, the present work has evaluated those mycotoxins of liker occurrence in such grains. Additionally, the effects of the regional milling processes in corn and rice on mycotoxin contamination were also analyzed. Among potentially toxigenic fungi, Fusarium verticillioides was prevalent in corn, and Alternaria alternata was predominant in wheat, sorghum, rice and soybean. This situation has not been previously reported for other Argentinean regions. Due to the prevalence of A. alternata, its toxigenic ability was studied: the strains collected were found to be able to produce alternariol monomethyleter, alternariol, altertoxin-l and tenuazonic acid. In corn, both at harvest and in different milling fractions, no co-occurrence of ochratoxin A, zearalenone or deoxynivalenol was observed. Just one sample (year 1999) resulted positive for aflatoxin B1. The presence of fumonisins B1, B2 and B3 was determined in all freshly harvested, stored and corn milling fractions. No mycotoxin contamination was detected on hulled rice or its milling fractions. Finally, reduction in mycotoxin contamination (fumonisins in corn and Alternaria toxins in rice) for those milling fractions aimed at human consumption was studied, as well as the increment in those fractions destined to animal feed.

Bravo, Susana Patricia. "Efecto de Carayá (Alouatta caraya) en la dinámica y regeneración de las selvas de inundación del Paraná medio" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Entre Julio de l996 y Mayo de 2002 estudié el comportamiento de carayá (Alouatra caraya, Primate, Cebidae) y su papel como dispersor de semillas en la selva de inundación de la Isla Brasilera (Prov. del Chaco, Argentina), una de las tantas islas ubicadas a lo largo del Río Paraná. Comencé describiendo los tres tipos de bosques que conforrnaban la selva, y estudiando la fenología de las especies arbóreas con fruto carnoso, potencialmente dispersables por carayá. El bosque que encontré en los albardones más antiguos fue el Bosque de Laureles, tuvo la mayor diversidad y abundancia de especies con fruto carnoso y tres estratos, dos arbóreos y uno herbáceo. El Bosque de Sangre de Drago y Timbó crecía en albardones de similar altura al anterior pero de más reciente formación y el Bosque de Palo itá crecía en los albardones más bajos y era prácticamente monoespecífico. En cuanto a la fenología pude distinguir dos grupos de especies, las que producían frutos en mayor o menor cantidad todo el año y aquellas que tenían la fructificación temporalmente acotada. El segundo paso fue estudiar la dieta, el comportamiento y el uso del espacio que realizaba carayá en cl Bosque de Laureles. La dieta fue rica en frutos flores y hojas nuevas, además un cuarto de los registros de alimentación fueron sobre estructuras vegetales infestadas por artrópodos. Todo esto hizo que carayá no estuviese limitado energéticamente para desplazarse y pudiera utilizar con alta frecuencia todo su territorio. Luego estudié mediante ensayos de laboratorio la germinación de las semillas dispersadas, y en el campo el patrón espacial de la dispersión. Encontré que el pasaje de las semillas por el tracto digestivo de carayá no afectaba la capacidad de germinación y para algunas especies aumentó la velocidad de germinación. Carayá depositó semillas en las zonas de sus dorrmideros y en los bosteaderos puntuales, que a causa de las confrontaciones entre grupos se ubicaban principalmente en los límites de los territorios. Continue estudiando el impacto de la dispersión en este bosque (i. e. escala local) a lo largo de los años, para ello realicé conteos de juveniles y renovales arbóreos en los sitios donde carayá deposita las semillas y fuera de ellos. Así encontré que la mayoría de las especies dispersadas se establecían tanto en los dormideros como en los bosteaderos puntuales, y no lograban hacerlo fuera de ellos. Con muestreos similares, evalue el impacto de la dispersión de larga distancia en los tres tipos de bosque de la isla y el crecimiento de los juveniles con mediciones sucesivas a lo largo de dos años. Observe que la dispersión de semillas que realiza carayá es fundamental para la colonización de los bosques jóvenes por parte de las especies del Bosque de Laureles, principalmente Ocotea diospyrifolia, Eugenia punicifolia y Psychotria carthagenensis. Mientras que estas mismas especies no pueden establecerse en el Bosque de Palo itá, posiblemente por la mayor frecuencia de inundación que presenta. Por último, para conocer si el reclutamiento en los bosteaderos se debía a la ausencia de predadores y patógenos, a la saturación de los mismos debido al gran número de semillas que arribaban, o a una serie de interrelaciones más complejas entre distintos factores. Evalué los daños que sufrían los juveniles, determine que artrópodos visitaban los bosteaderos, la disponibilidad de nitrógeno y fósforo, y la remoción de semillas. Esto me permitió arribar a la conclusión de que sumado al alto número de semillas que arribaban, el mecanismo por el cual se produce el establecimiento de los renovales a lo largo de los años se debería a una baja tasa de remoción de semillas, una disminución de la herbivoría por la presencia de artrópodos predadores y un aumento en la velocidad de crecimiento por una mayor disponibilidad de nitrógeno que facilitaría el escape a la mortalidad por ataque de los patógenos. El efecto de carayá como dispersor de semillas no sólo acelera la regeneración del Bosque de Laureles y la maduración de los bosques jóvenes de la isla, sino que esta aceleración va en aumento debido a que se genera una retroalimentación positiva entre el aumento en la densidad de las especies dispersadas y la densidad del dispersor. Esta puede ser una explicación para la rápida recuperación de estos bosques que se observa luego de las inundaciones extraordinarias.

Abstract:
I studied black howler (Alouatta curaya. Primate, Cebidae) behavior and its role as seed disperser in the flooded forest of Brasilera Island (Chaco, Argentina), one of Paraná River‘s islands, between July l996 and May 2002. I began by describing of the three kinds of forests which make up the flooded forest and by studying the phenology of trees with fleshy fruits. In the oldest and highest areas of Brasilera Island I found the “Laurel Forest", which was the most diverse and had the greatest fleshy fruits species abundance. This forest had three strata, two of them arboreal and one herbaceous. The “Sangre de Drago and Timbó Forest" grew on areas of similar height which had recently been incorporated to the island. The “Palo itá Forest" grew on low areas and had the lowest diversity. I could found two phenological sets of species, one set offered fruits throughout the year, while the other set concentrated its fruit production in only in one or two months. The second step was the study of the black howler's diet, behavior and spatial use, in the Laurel Forest. Fruits, flowers and new leaves represented a high proportion of the diet all year long, and 25 % of feeding records were on arthropods infested items. Thus, black howler's travel distances were not energetically constrained, and groups could use their whole territory with high frequency. Then, I studied dispersed seed germination in the laboratory and the spatial pattern of seed dispersal in the field. I found that passage through black howler's digestive tract did not affect seed germination, but ingested seeds of some species germinated faster than not ingested seeds. Black howlers transported seeds from the parent tree to sleeping trees and to latrines. As black howler groups confronted and defecated with high frequency within their territory limits, latrines were more abundant in these areas. I evaluated the impact of seed dispersal over several years in the Laurel Forest (i. e., local scale) by sampling tree juveniles and renewals in latrines, and around sleeping trees, and outside these areas. In general, trees could grow in the latrines, and around the sleeping trees, but did not grow outside them. I evaluated long distance dispersion between the three kinds of forests with similar methods as the ones used in the Laurel Forest, and the growth of juveniles for two years. Seed dispersal by black howler is fundamental for the colonization of new forests by Laurel Forest species, specially Ocotea diospyrifolia, Eugenia punicifolia y Psychotria carthagenensis. These species could not grow in Palo itá Forest, possibly because of a higher flood frequency. Finally, I studied whether the recruitment of trees was due to the absence of predation and pathogens in the latrines, the saturation by the great number of seeds that arrive, or an growth related to a higher nitrogen availability in the latrines, are important latrines, nitrogen and phosphorus availability, and Seed removal in the latrines. I concluded that added to the great number of seeds that arrived to the latrines, the low rate of seed removal, the attenuated herbivory by the presence of arthropods predators, and the faster for trees recruitment are important as well for trees recruitment. Fast growth could help juveniles to escape at mortality by pathogens. Acceleration in Laurel Forest regeneration and in maturation of new forests is an effect of black howler seed dispersal, Also, as in Brasilera lsland there are a positive feedback between the increase in dispersed species density and disperser density, the acceleration is increasing. It could be an explication for the highest restoration of flooded forest after an extraordinary flood.

Bossi, Mariano L.. "Fotocromismo en cristales líquidos nemáticos y colestéricos" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es el estudio de la interacción de compuestos fotocrómicos con cristales líquidos de bajo peso molecular, encarado desde dos aspectos principales. Por un lado las modificaciones que genera la absorción de luz por parte de la sonda en el entorno ordenado que la roda y por el otro, la influencia de la anisotropia del medio sobre la reacción fotocrómica, especialmente el decaimiento térmico del fotoisómero. Se eligieron dos fases mesogénicas: una fase nemática y una colestérica presentes en un intervalo de temperaturas que incluye temperatura ambiente. La fase nemática se obtiene de una mezcla comercial de cianofenilbiciclohexilos (ZLI1132) y la fase colestérica se prepara por agregado de un inductor quiral (5811) a dicha mezcla. Los compuestos fotocrómicos incluidos en estas mesofases pertenecen a tres familias. Se utilizaron tres azobencenos, dos espirocompuestos (un espiropirano y una espirooxacina) y dos fulgidas, compuestos puramente fotocrómicos. Las dos fulgidas y uno de los azobencenos fueron sintetizados. La sondas se incluyeron en concentraciones de 0.5 a 10% p/p. Todos los azobencenos exhibieron alta afinidad por la fase nemática y la fotoisomerización produjo un marcado descenso en el orden del cristal líquido. Los espirocompuestos presentaron baja afinidad con esta fase. En esta familia, la isomerización produjo un aumento significativo en el orden del medio pero dicho cambio fue menor que el observado para los azobencenos. Las fiilgidas presentaron fotocromismo altamente reproducible en fase nemática, pero ninguno de sus fotoisómeros mostró alta afinidad por la mesofase, por lo que la fotoisomerización no produjo una perturbación medible del orden. Las propiedades de la fase colestérica estuvieron regidas principalmente por el inductor quiral y la fotoisomerización no produjo grandes perturbaciones en esta mesofase. En la ventana de tiempos medidos (hasta algunos milisegundos), la dinámica del sistema estuvo regida por la reacción fotocrómica. El medio se reacomodó instantáneamente a la composición relativa de los isómeros. La cinética de la recuperación térmica del estado inicial presentó un decaimiento monoexponencial en ambas fases, excepto el espiropirano que mostró un decaimiento biexponencial. Los parámetros de activación fueron en general similares en ambas mesofases y en algunos casos presentaron diferencias respecto a su comportamiento en solución. Este hecho se explica por la influencia que ejerce el medio ordenado sobre la reacción, que es tanto energética como entrópica. Palabras clave: fotocromismo, termocromismo, azobencenos, fulgidas, espiropiranos, espirooxacinas, merocianinas, cristales líquidos, nemática, colestérico, birrefringencia, dicroísmo.

Abstract:
The aim of this work is to study the interaction between photochromic compounds and low molecular weight liquid crystals frorn two points of view. On one hand, the perturbations in the media produced by light absorption by the probe, and on the other hand the influence of anisotropic media on the photochromic reaction, specially on the thermal decay of the photoisomer. Two mesogenic phases were used: a nematic phase and a cholesteric phase, stable in a temperature range including room temperature. The nematic phase is a cyanophenylbícyclohexyl commercial mixture (ZLIl 132) and the cholesteric one is prepared by addition of a chiral inductor (SSI 1) to the nematic mixture. The photochromic compounds belong to three families. The probes were three azobenzenes, two spirocompounds (a spiropyran and a spirooxazine) and two fulgides, the latter purer photochromic. One of the azobenzenes and both fiilgides were synthesized . All compounds were used in a 0,5 to lO % w/w concentration range. All azobenzenes showed high affim'ty for the nematic phase and its photoisomerization caused an important decrease in liquid crystal order. Spírocompounds exhibited low compatibility with this phase. In this family isomerization produced a significant increase in the order of the medium but smaller than the one observed for azobenzenes. Fulgides showed a highly reproducible photochromism in the nematic phase, but none of the photoisomers presented high aflinity for the mesophase. Thus, photoisomerisation showed negligible perturbation of-the liquid crystal. The photoisomerisation didn’t produce large perturbations in the cholesteric phase, because its properties were mainly governed by the chiral inductor. In the time window explored (up to a few milliseconds) the dynamics of the medium changes were controlled by the isomerization. The mesophase reoriented itself fast enough to follow the decay process. The kinetics of the thermal recovering showed monoexponential behavior in both phases, except for spiropyran, whose decay was biexponential. The values of the activation parameters were similar in both mesophases, but in some cases they were different to values in solution. These differences were accounted for by the influence of the ordered medium on the reaction, which is both energetic and entropic. Keywords: photochromism, thermochromism, azobenzenes, fulgides, spiropyrans, spirooxazines, merocyanines, liquid crystals, nematic, cholesteric, bire‘i'ingence, dichroism.

Bonelli, Eduardo. "Reescritura de términos y sustituciones explícitas" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La operación de sustitución constituye un engranaje básico en los fundamentos de la teoría de lenguajes de programación. Juega un rol central en el lambda cálculo (por ende, en lenguajes de programación funcional), en unificación de primer orden y de orden superior (por ende, en lenguajes de programación basados en el paradigma lógico), en modalidades de pasaje de parámetros (por ende, en lenguajes de programación imperativos), etc. Recientemente, investigadores en informática se han interesado en el pasaje de la noción usual de la sustitución, atómica, y de gruesa granularidad, hacia una noción más refinada, de más fina granularidad. La noción de sustitución es transportada del metalenguaje (nuestro lenguaje de discurso) al lenguaje objeto (nuestro lenguaje de estudio). Como consecuencia de ello se obtienen los llamados cálculos de sustituciones explícitas. Estos son de sumo interés a la hora de estudiar la interpretación operacional de los formalismos en cuestión y constituyen los objetos de interés de esta tesis. Se desarrollan los siguientes tres ejes de estudio: Primero, se consideran estrategias de reescritura perpetuas en lambda cálculos con sustituciones explícitas. Estas son estrategias de reescritura que preservan la posibilidad de reducciones infinitas. Se propone una caracterización inductiva del conjunto de términos que no poseen reducciones infinitas (los llamados fuertemente normalizantes). Un lambda cálculo polimórfico con sustituciones explícitas también es analizado, incluyendo propiedades tales como subject reduction y normalización fuerte. Segundo, colocamos el ς-cálculo de M. Abadi and L. Cardelli enriquecido con sustituciones explícitas bajo el microscopio. Este cálculo se encuentra en un nivel semejante de abstracción al lambda cálculo pero se basa en objetos en lugar de funciones. Propiedades tales como simulación del lambda cálculo, confluencia y preservación de la normalización fuerte (aquellos términos que son fuertemente normalizantes en ς también lo son en ς con sustituciones explícitas) son consideradas. Finalmente, dirigimos nuestra atención a la tarea de relacionar la reescritura de orden superior con aquella de primer orden. Fijamos una variante de los ERS (apodados SERSdb) de Z. Khasidashvili como nuestro formalismo de orden superior de partida y definimos un proceso de conversión que permite codificar cualquier SERSdb como un sistema de reescritura de primer orden. En este último, cada paso de reescritura se lleva a cabo módulo una teoría ecuacional determinada por un cálculo de sustituciones explícitas. La misma se formula de manera genérica a través de una presentación de cálculos de sustituciones explícitas basada en macros y axiomas sobre estas macros, parametrizando de esta manera al procedimiento de conversión sobre cualquier cálculo de sustituciones explícitas que obedece la presentación basada en macros. El procedimiento de conversión se encarga de codificar pattern matching de orden superior y sustitución en el entorno de reescritura de primer orden. Asimismo, propiedades que relacionan la noción de reescritura en el orden superior con aquella de primer orden son analizadas en detalle. Se identifica una clase de SERSdb para los cuales el sistema de primer orden resultante de su conversión no requiere una teoría ecuacional para implementar pattern matching de orden superior, bastando para ello matching sintáctico. También se argumenta que esta clase de sistemas de orden superior es apropiada para transferir resultados del entorno de reescritura de orden superior a aquella de primer orden. A modo de ejemplo no-trivial de ello, estudiamos la transferencia del teorema de standarización (fuerte).

Abstract:
Substitution spans many areas in programming language theory. It plays a central role in the lambda calculus (hence functional programming), in first and higher-order unikation (hence logic programming), parameter passing methods (hence imperative programming), etc. Recently researchers became interested in shifting from the usual atomic, coarse grained view of substitution to a more refined, fine grained one. Substitution is promoted from the metalevel (our language of discourse) to the object-level (our language of study). This is interesting when studying the operational interpretation of the formalisms in question. Calculi of object-level or explicit substitution is the concern of this thesis. The following three study axes are developed. First we consider perpetual rewrite strategies in lambda calculi of explicit substitutions. These are rewrite strategies that preserve the possibility of inhite derivations. Also, we study how to characterize inductively the set of terms that do not possess infinite derivations (the strongly normalizing terms). Polymorphic lambda calculus with explicit substitutions shall receive our attention too, including properties such as subject reduction and strong normalization. Secondly, we put the ς-calculus of M.Abadi and L.Cardelli augmented with explicit substitutions under the microscope. This calculus is at the level of the lambda calculus but is based on objects instead of functions. Properties such as simulation of the lambda calculus, confluence and preservation of strong normalization (terms which are strongly normalizing in ς are also strongly normalizii in ς with explicit substitutions) are considered. Finally, we address the task of reducing higher-order rewriting to first-order rewriting. We fix a variant of Z-Khasidashvili's ERS (dubbed SERSdb) as our departing formalism and provide a conversion procedure to encode any ERS as a first-order rewrite system in which a rewrite step takes place modulo an equational theory determined by a calculus of explicit substitutions. The latter is achieved with the aid of a macro-based presentation of calculi of explicit substitutions, thus parametrizing the conversion procedure over any calculus of explicit substitutions in compliance with the aforementioned presentation. The conversion procedure is in charge of encoding higherorder pattern matching and substitution in the first-order framework. Properties relating the rewrite relation in the higher-order framework and that of the resulting first-order system are studied in detail. We then identify a class of SERSdb for which the resulting first-order system does not require the equational theory to implement higher-order pattern matching, thus contenting itself with syntactic matching. It is argued that this class of systems is appropriate for transferring results from the first-order framework to the higher-order one. As a non-trivial example we study the transfer of the (strong) standardization theorem.

Boggiano, César. "Uso de bibliotecas sintéticas combinatorias para el desarrollo de vacunas y antirretrovirales para el tratamiento y prevención del SIDA" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
En el año 2002, 3 millones de personas murieron como consecuencia del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y se estima que 5 millones se infectaron con el virus de la inmunodeficiencia adquirida humana (HIV). Hasta la fecha no existe un tratamiento que pueda erradicar la infección en todos los pacientes HIV+ y tampoco una vacuna efectiva profiláctica o terapéutica. Las bibliotecas sintéticas combinatorias (BSCs) son colecciones de compuestos orgánicos, peptidomiméticos o peptídicos. Debido a su alta complejidad (miles a millones de compuestos diferentes) son excelentes herramientas para la identificación de compuestos capaces de alterar diferentes eventos biológicos. En primer lugar, se estudió la capacidad de las bibliotecas de inhibir el primer evento del ciclo replicativo de HIV-1, adsorción y entrada, en un sistema de fusión de membranas dependiente de HIV-1 Env y receptores celulares. Los compuestos individuales derivados de bibliotecas de piperazinas y triaminas, mostraron actividad inhibitoria de la fusión aunque con elevada toxicidad. También se identificaron D-decapéptidos capaces de inhibir en el rango micromolar, la replicación de cepas de laboratorio HIV-1 y un aislamiento clínico resistente a AZT. El mecanismo inhibitorio de la replicación involucra la entrada viral. Además, se descubrieron compuestos antagonistas de la quiomiotaxis inducida por SDF-1α en células CXCR4+, aunque este mecanismo no parece estar involucrado en la inhibición de la replicación. Por otra parte, una BSC de L-nonápeptidos fue utilizada para identificar inmunógenos naturales y sintéticos específicos para un clon de células T citotóxicas derivadas de un paciente HIV+. Se identificaron superagonistas capaces de estimular no sólo el clon original mejor que el péptido natural (Gag77-85), sino también clones con la misma especificidad aislados de otro paciente HIV+. También se identificaron por primera vez, secuencias derivadas de virus heterólogos que son capaces de estimular un clon específico para HIV-1 Gag77-85.

Berlín, Guido. "Efectos cuánticos en la interacción entre átomos con radiación en cavidades" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La idea central de la presente tesis es poner de manifesto efectos cuánticos que aparecen en la interacción entre átomos de pocos niveles con radiación electromagnética y entre modos de radiación entre sí considerando la radiación cuantificada. Se trataron diferentes sistemas de interés en el ámbito de la elcctrodinámica cuántica de cavidades, utilizando técnicas como la de hallar los operadores relevantes en el marco de la teoría de álgebras dinámicas y también utilizando ecuación maestra para la evolución del operador densidad. Se estudió el problema de un átomo de dos niveles interactuando con dos modos de radiación en presencia de un medio no lineal. Para este sistema se encontró que la presencia del medio no lineal inhibe los efectos típicos de estos sistemas como ser los colapsos y resurrecciones de la inversión de población, y también el antiagrupamiento. También se estudió un hamiltoniano de Jaynes-Cummings generalizado que no toma en cuenta la aproximación de onda rotante y además en presencia de un campo externo. Se pudo encontrar un conjunto de operadores adecuado para estudiar este sistema que permite evaluar la evolución temporal del valor medio de cualquier cantidad de relevancia. En la presente tesis se hace una propuesta para poder utilizar un divisor dc haz como discriminador de entrelazamiento entre dos modos del campo electromagnético; además en algunos casos podemos identificar diferentes elementos de la base de Bell. También en este trabajo se hace un estudio de factibilidad de una propuesta para generar en forma condicional estados de Fock en una cavidad. Para ello se relajan aproximaciones y se tienen en cuenta las pérdidas dentro de la cavidad, encontrándose que el esquema es robusto antes condiciones reales, siendo entonces promisoria su realización experimental.

Abstract:
The main idea of this thesis is to expose quantum effects that appear on the interaction between few level atoms and electromagnetic radiation, and between radiation modes, considering that the electromagnetic field is quantized. Different problems of interest on the field of Cavity Quantum Electrodynamics were studied, using techniques such us finding the relevant operators in the scenario of dynamical algebras theory, and also the density matrix approach. We studied the problem of a two level atom interacting with two modes of radiation in the presence of a non-linear medium. We found that, for this particular system, the nonlinear medium inhibits the decay of the population of the excited level, and the antibunching effect on the radiation field. We also studied a generalized Jaynes-Cummings hamiltonian that does not take into account the Rotating Wave Approximation, and also in the presence of an external driving field. We found a set of relevant operators suitable for studying this problem, that allows us to solve the temporal evolution of the mean value of the mean value of any quantity of interest. In this thesis, a proposal is made for using a beam-splitter as a state and entanglement detector between two modes of the electromagnetic field. We also found that in some cases we can discriminate between different elements of the Bell basis. We also tackle the problem of the factibility of a proposal for conditionally generating Fock states of the radiation in a cavity. We modified a previously proposed model, account for cavity losses, take into account levels that were adiabatiacally eliminated, and concluded that the proposal is robust under experimental conditions.

Benedetti, Rubén Mariano. "Inducción, producción y mantenimiento de la respuesta inmune sistémica por inmunización oral" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Tradicionalmente se pensaba que las mucosas poseían un sistema inmune propio y común con pocos puntos de contacto con el resto del sistema inmune. Esto se fundamentaba en que las mucosas se caracterizan por (l) el predominio de la IgA, (2) la dificultad de obtener respuesta inmune en las mucosas con una inmunización sistémica y (3) que con una inmunización por una mucosa es posible dar protección en otras mucosas distantes. Con posterioridad, se encontraron varias interacciones entre los tejidos linfoides de las mucosas y los sistémicos que llevan a pensar que en realidad no hay una clara separación en dos sistemas inmunes, sino que constituyen una unidad. El fenómeno de la tolerancia oral, la posibilidad (en algunos casos) de inducir la respuesta inmune sistémica por inmunización por la vía de las mucosas y el transporte hepatobiliar de IgA polimérica desde el suero al intestino son ejemplos de esa comunicación. Otra conexión posible es que la médula ósea reciba células productoras de anticuerpos luego de una inmunización sistémica. Es bien conocido que en la médula ósea aparecen células plasmáticas luego de una inmunización sistémica. La médula ósea es el principal productor de anticuerpos en la respuesta secundaria. Pese a esto, no era claro si una inmunización por las mucosas podía llevar a que la médula ósea se convierta en productora de anticuerpos especificos. En este trabajo efectuarnos inmunizaciones orales (intragástricas e intra-placas de Peyer) utilizando toxina colérica, uno de los más potentes antígenos y adyuvante por las mucosas, para observar la cinética de aparición de las células plasmáticas antitoxina en el intestino, el bazo y la médula ósea. También observamos la respuesta de memoria. En estas condiciones encontramos que: - Tanto durante el primado como en la memoria, en la médula ósea aparecen células plasmáticas y este es el principal órgano productor de anticuerpos destinados a la circulación sanguínea. - La médula ósea es, además, el único órgano que mantiene células secretoras de anticuerpos muchos meses después de la inmunización oral, cuando consideramos que ya no queda antígeno en el organismo. - Existe una muy temprana presentación antigénica en el bazo, paralela a la que ocurre en el intestino. - La médula ósea posee linfocitos T y B de memoria, aunque el ganglio mesentérico y el bazo tienen mayor concentración de células de memoria. Todas estas observaciones contribuyen al mejor conocimiento de la amplia comunicación entre el llamado sistema inmune de las mucosas y el central y sostienen la idea de la unidad del sistema inmune.

Abstract:
Traditionally it was thought that the mucosae had a common immune system with few meeting points with the rest of the immune system. This was based on that the mucosae are characterized by (l) the predominance of the IgA, (2) the difficulty to obtain immune response in the mucosae with a systemic immunization and (3) that with a mucosal immunization is possible to give protection in other distant mucosae. Later, several interactions between the mucosal and systemic lymphoid tissues were found wich led to think that in fact there is no clear separation between the two immune systems, but that they constitute a unit. The phenomenon of oral tolerance, the possibility (in some cases) of inducing a systemic immune response by immunization by the route of the mucosae and hepatobiliar transport of polimeric IgA from serum to intestine are examples of that communication. Another possible connection is that the bone marrow receives antibody producing cells after a systemic immunization. It is well known that in the bone marrow plasma cells appear after a systemic immunization. The bone marrow is the main antibody producing site in the secondary response. In spite of this, it was not clear whether an immunization by the mucosae could make the bone marrow become a producer of specific antibodies. In this work we carried out oral immunizations (intragastric and intra-Peyer patches) using cholera toxin, one of the most powerful antigens and adjuvant by the mucosae, to observe the kinetics of appearance of the antitoxin plasma cells in the intestine, spleen and bone marrow. We also observed the memory response. In these conditions we found that: - During the priming as well as during the memory, plasma cells appear in the bone marrow and this is the main organ producing antibodies destined to blood circulation. - The bone marrow is, in addition, the only organ that maintains antibody secreting cells many months after oral immunization, when we consider there is no more antigen left in the organism. - A very early antigenic presentation in spleen exists, parallel but independent from what happens in the intestine. - The bone marrow does have memory T and B cells, although the mesenteric lymph node and spleen have greater concentrations of memory cells. All these observations contribute to the best knowledge of the extensive communication between the so called mucosal immune system and the central immune system and support the idea of the unit of the immune system.

Belforte, Juan E.. "Participación del estriado de la rata en los mecanismos de la analgesia endógena" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los ganglios de la base están constituidos por una serie de núcleos subcorticales bilaterales que forman un circuito altamente interconectado; poseen una estrecha relación anatómica y funcional con el tálamo y la corteza cerebral y han sido clásicamente involucrados en el control de la función motora. Los componentes principales de los ganglios de la base son el globo pálido, la sustancia negra, el núcleo subtalámico y el estriado. Este último es el principal núcleo de entrada de información a los ganglios de la base. Recibe aferencias glutamatérgicas excitatorias, topográficamente organizadas de prácticamente toda la corteza cerebral y varios núcleo talámicos. A su vez, la sustancia nigra pars compacta ejerce, mediante la proyección dopaminérgica nigroestriatal, un papel regulatorio sobre la actividad del estriado. Recientemente han surgido evidencias electrofisiológicas, comportamentales, bioquímicas y clinicas que sugieren la participación de los ganglios de la base en la nocicepción y específicamente en los mecanismos de modulación del dolor. Es asi que, con el objeto de ampliar los conocimientos referentes al rol funcional de los ganglios de la base en la neurofisiología del dolor, el objetivo de esta tesis doctoral fue el de estudiar la participación del estriado de la rata en el control de la nocicepción y los mecanismos de analgesia endógena. Para ello trabajamos sobre un modelo de dolor que caracterizamos y validamos: el reflejo de abertura bucal evocado por la estimulación nociceptiva de los incisivos inferiores en ratas anestesiadas. Empleando dicho modelo, pudimos demostrar que la activación tanto eléctrica como química (mediante microinyecciones intraestriatales de glutamato) de determinadas regiones del mismo resulta en una disminución significativa en la amplitud del reflejo. Por medio de registros extracelulares de neurona única (single unit) en los núcleos motor y sensorial del trigémino se pudo analizar el efecto inhibitorio del estriado sobre neuronas de la via del reflejo. De esta manera, demostrarnos que el efecto inhibitorio generado por la estimulación del estriado se debe a la modulación de las aferencias sensoriales y no a un efecto motor, como podría esperarse al tratar con los ganglios de la base. El análisis conjunto de los resultados expuestos en esta tesis nos lleva a considerar fuertemente la participación de los ganglios de la base en la modulación del dolor y en los mecanismos de analgesia endógena. De esta manera, los ganglios de la base no solo estarían involucrados en la coordinación e integración de la función motora con aspectos motivacionales y afectivos; sino que además, podrían promover respuestas fisiológicas adaptativas consecuentes con el plan motor seleccionado. La activación de los mecanismos de analgesia endógena podría formar parte de este proceso.

Abstract:
The basal ganglia consist of a number of highly interconnected nuclei that conform a closed cortico-basal ganglia-thalamo-cortical loop. The principal components of the basal ganglia are the striatum, the globus pallidus, the substantia nigra and the subthalamic nucleus. The most abundant inputs to the basal ganglia arise from the cortex in the form of topographically organized excitatory glutamatergic cortico-striatal projection. Dopamine, released from endings of neurons that are located in the substantia nigra pars compacta, modulates the activity of striatal cells and therefore of the whole circuit. The involvement of the basal ganglia in motor functions has been well studied. However, several lines of evidence have implicated the basal ganglia with autonomic, affective and cognitive function. In addition, recent electrophysiological, pharmacological, behavioral and clinical experiments indicate that the basal ganglia also process noxious somatosensory information. The basal ganglia receive noxious somatosensory inputs from several sources such as the cerebral cortex, intralaminar nuclei of thalamus, raphé nuclei and amygdala. The noxious inputs produce activation or inhibition of a high proportion of the striatal, globus pallidus and substantia nigra neurons in anesthetized animals. Studies made in human volunteers have demonstrated that thermal painful stimulation of the hand increased the blood flow within the contralateral striatum. In addition, many patients with Parkinson diseases complain of pain dysfunctions not related to the motor disturbances. The objective of my doctoral thesis was to determine whether the striatum could be involved in the modulation of nociceptive inputs. We worked with 300-450 g Sprague-Dawley rats anesthetized with urethane 1.2 g/kg and s.c. local anesthetic, in which painful responses were evoked by electrical stimulation of the tooth pulp of lower incisors. The jaw opening reflex was measured as the peak to peak amplitude of the electromyographic response evoked in the digastric muscle by means of bipolar Stainless steel twisted electrodes. The head of the animals was fixed to a stereotaxic frame and different regions of the striatum were electrical or chemical stimulated during the experiments. In addition, in a second set of experiments extracellular single unit activity was recorded by mean of glass microelectrodes (l-lOMΩ), filled with 2% Pontamine Sky Blue in 2M NaCl. Spontaneous neural activity and evoked by dental nociceptive stimulation was recorded within the spinal trigeminal nucleus pars eaudalis and motor trigeminal nucleus and off-line quantified using post-stimulus time histograms. The striatum was stimulated with a microinjection of glutamate (82 nmol/0.5 μl). The present study demonstrates that unilateral electrical and chemical stimulation of some regions of the medial striatum (between bregma +0.1 and +0.6 approximately) could inhibit the nociceptive reflex.. The activation of striatal neurons mainly inhibited the responses evoked by tooth pulp stimulation in second order neurons of the sensory trigeminal nucleus without affecting the motor response directly. In conclusion, our results provide evidence that the striatum is involved in the modulation and control of nociceptive inputs and suggest an involvement of the striatum in the regulation of endogenous analgesic systems.

Barrozo, Romina Beatriz. "Orientación al hospedador en la vinchuca Triatoma infestans (Heteroptera : Reduviidae) : claves sensoriales responsables" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se analizó la orientación de larvas de Triatoma infestans a varias señales relacionadas con sus hospedadores. A distancias cortas, el vapor de agua resultó ser atractivo para las vinchucas. Además, la humedad incrementó significativamente la respuesta de estos insectos a estímulos térmicos. No obstante, la humedad de una corriente de aire no afectó el comportamiento anemotáctico positivo espontáneo de esta especie. La respuesta anemotáctica no fue influenciada por el equilibrio hídrico de los insectos. Con respecto a las señales olfativas, las larvas de T. infestans se orientaron siguiendo corrientes de aire enriquecidas con dióxido de carbono, situándose el umbral comportamental entre 300 y 400 ppm sobre el fondo de CO2 del ambiente. La precisión de la respuesta orientada hacia el dióxido de carbono se incrementó con el aumento en la intensidad del estímulo. Notablemente, los insectos no cambiaron su umbral de sensibilidad al dióxido de carbono con el tiempo de inanición. La atracción por el dióxido de carbono dependió del momento del día. Es decir, estos insectos nocturnos sólo se orientaron hacia corrientes de aire cargadas con dióxido de carbono durante las primeras horas de la noche. La persistencia del ritmo en condiciones de oscuridad constante reveló la existencia de un control endógeno de este comportamiento. La respuesta de los insectos fue afectada por la estructura temporal de la pluma de olor transportadora de CO2 de maneras diferentes, dependiendo de la frecuencia de pulsos de la corriente de aire ofrecida. Los insectos mostraron respuestas al ácido L-láctico, l-octen-3-ol y ácidos grasos de cadena corta de manera dosis-dependiente a nivel sensorial, tal como revelaron los electroantennogramas (EAGs). Al nivel comportamental, las chinches mostraron una orientación positiva a corrientes de aire cargadas con l-octen-3-ol. Esta respuesta no se modificó por la adición de dióxido de carbono. El L-ácido láctico no evocó respuestas orientadas cuando se presentó como un estímulo único, para una gama amplia de concentraciones. Sin embargo, un marcado sinergismo se hizo evidente cuando el L-ácido láctico se combinó con el dióxido carbono a una concentración subumbral. En esta condición, el umbral de respuesta al dióxido carbono disminuyó a valores de 75-150 ppm sobre el fondo ambiental de CO2. Aunque los ácidos grasos de cadena corta no evocaron una respuesta en los insectos al ser ofrecidos como estímulos únicos, éstos interactuaron de forma sinérgica con el L- ácido láctico. Una mezcla de ácidos grasos, ácido L-láctico y C02 mostró ser capaz de atraer a las vinchucas bichos de manera similar que un hospedador vivo.

Abstract:
The orientation of larvae of Triatoma infestans to several host-related cues was analysed. At short distances, water vapour revealed as attractive for T. infestans. Besides, the humidity improved significantly the response of these bugs to thermal stimulation. Nevertheless, the humidity content of an airstream did not affect the spontaneous positive anemotactic behaviour of this species. The anemotactic behaviour was also not influenced by the water balance of the bugs. Regarding olfactory cues, T. infestans oriented towards airstreams enriched with carbon dioxide, laying the behavioural threshold response between 300 and 400 ppm above the ambient CO2 background. The accuracy of the oriented response to carbon dioxide increased with the stimulus intensity. Remarkably, insects did not change their sensitivity threshold to carbon dioxide with the starvation time. The attractiveness to carbon dioxide depended on the time of the day, i.e., these nocturnal bugs only oriented towards carbon dioxide-loaded airstreams during the first hours of the night. The persistence of the rhythm under constant darkness revealed the existence of an endogenous control of this behaviour. The response of the insects showed to be affected by the temporal structure of the odour plume carrying CO2 in different ways, depending on the frequency of pulses of the offered airstream. Bugs showed sensory responses to L-lactic acid, l-octen-3-ol and shortchain fatty acids in dose-dependent manner, as revealed by electroantennograms (EAGs). At the behavioural level, the bugs showed positive orientation to airstreams loaded with l-octen-3- ol. This response was not modified by the addition of carbon dioxide. L-Lactic acid did not evoke oriented responses when presented as a single stimulus in a wide range of concentrations. However, a marked synergism was evident when L-lactic acid was combined with carbon dioxide at a sub-threshold concentration. Under this condition, the threshold response to carbon dioxide decreased to 75-150 ppm above ambient CO2 background. Although short-chain fatty acids as single stimulus did not evoke attraction for bugs, they interacted synergistically with L-lactic acid. A blend mixture of fatty acids, L-lactic acid and CO2 showed to attract these bugs in a similar way than a live host.

Barg, Monica Viviana. "Osteología y relaciones filogenéticas de los anuros neobatracios del género Pseudis" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Los pseudidos constituyen un grupo de neobatracios acuáticos conocidos por el gran tamaño de sus larvas, el dedo dos de la mano oponible y la presencia de elementos intercalares largos entre la última y la penúltima falange de cada dedo. Las relaciones filogenéticas del grupo son controvertidas y las interrelaciones entre las especies de Pseudis desconocidas. Se describe aquí la osteología adulta de Pseudis minuta, una especie tomada como base del análisis de caracteres. Además, se presentan datos sobre la osteogénesis de esta especie y se compara con la información disponible para otras especies de Pseudis. Estas comparaciones sugieren que en la evolución del género pudieron haber intervenido cambios en la trayectoria ontogenética ancestral. Con el objeto de estimar la ubicación taxonómica de los pséudidos se realizó un análisis de parsimonia basado en 35 taxa y 69 caracteres de adultos. Los dos árboles maximamente parsimoniosos resultantes concuerdan en la exclusión de los centrolénidos de una cercana relación con los pseudidos, la monofilia de estos últimos, y la naturaleza parafilética de los hílinos respecto a los pséudidos. Ambos árboles muestran la misma topología interna del clado de los pséudidos, con Pseudis minuta y Pseudis cardosoi como taxones hermanos con una posición basal con respecto a otras especies del género.

Abstract:
Pseudids constitute an aquatic neobatrachian group widely known because of their large tadpoles, they opossable thumb, and the presence of an intercalary cartilage between their two last phalanges of each finger. The phylogenetic relationships of this group are controversial and the interrelationships among Pseudis species are unknown. The adult osteology of Pseudis minuta, a species taken as the basis of the character analysis, is described herein. In addition, data on the osteogenesis of this species are presented and compared with the available information for other species of Pseudis. This comparisons suggest that changes in the ancestral ontogenetic trajectory may have operated in the evolution of the genus. In order to assess the taxonomic placement of pseudids parsimony analysis based on 35 taxa and 69 adult characters was performed. The resulting two most parsimonius trees agree in the exclusion of centrolenids from a close relationship with pseudids, the monophyly of the latter, and the paraphyletic nature of hylines with respect to pseudids. Both trees show the same internal topology of the pseudid clade, with P. minura and P.cardosoi as sister taxa having a basal position with respect to other species of the genus.

Baeza, Rosa Isabel. "Interacciones entre ß-lactoglobulina y polisacáridos en coloides alimentarios" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Se estudió el efecto de diferentes polisacáridos en las propiedades de gelificación y espumado de la β-lg en condiciones de limitada compatibilidad termodinámica (pH > pI). En presencia de polisacáridos no gelificantes (λ-C, XAN y PGA) se observó una disminución en la concentración mínima de proteína necesaria para gelificar y una modificación en la dinámica de gelificación (tiempo de gelificación y velocidad de desarrollo del gel). La presencia de polisacáridos afectó principalmente la etapa de agregación de la proteína, limitante del proceso de gelificación, obteniéndose en presencia de los PS grandes agregados que permitieron la formación de un gel. Se observó en general un aumento en la estabilidad térmica de los sistemas mixtos β-lgPS (6%/0,5%) en relación a la β-lg sola. Esto se manifestó en un aumento de las temperaturas de inicio de desnaturalización y del cambio de entalpía total. Las propiedades de los geles mixtos fueron muy diferentes de acuerdo al polisacárido utilizado. En los geles mixtos β-lg/PGA se observó la mayor variación en las propiedades micro y macroestructurales con el pH, T, concentración de sólidos totales y relación PS/proteína. Las propiedades de las interfases y espumas en sistemas mixtos estarían controladas por la proteína, debido a su mayor actividad interfacial. El efecto de los polisacáridos en las propiedades interfaciales de una proteína es complejo debido a la existencia de por lo menos tres fenómenos: (a) Incompatibilidad entre los biopolímeros (b) fenómenos competitivos o cooperativos (c) interacciones específicas de complejamiento a través de ciertas regiones de la molécula del PS y de la proteína. Al estudiar el efecto de los polisacáridos en monocapas esparcidas de β-lg se observó en general un aumento de la presión superficial y una disminución de la elasticidad y módulo dilatacional elástico. El Manucol ester mostró una mayor actividad superficial que los otros PGA (K-0 y K-LVF) dado que produjo el mayor aumento de la presión superficial. En los estudios de adsorción dinámica (tensiómetro de gota) se observó que el Manucol ester debido a su mayor adsorción entre los PGA es el que produce películas con menor estructuración. Esto se observó en los ensayos dinámicos (G’max más bajo), como en los estudios de monocapas esparcidas donde el Manucol dió los menores valores de módulo dilatacional elástico y de elasticidad. En presencia de la goma xántica los resultados muestran que aún sin penetrar en la interfase, este polisacárido tiene una enorme influencia en la misma, derivada principalmente de un posible complejamiento sobre la proteína en la monocapa y de fenómenos de limitada incompatibilidad tanto en el seno de la solución como en la interfase. Las características reológicas de la película interfacial tienen una profunda influencia en la estabilidad de las espumas

Abstract:
In the present work, the effect of polysaccharides on the properties of β-lg gels and foams was studied in conditions of limited thermodynamic compatibility (pH > pI). In the presence of non-gelling polysaccharides (λ-C, XAN and PGA) it was observed a decrease in the critical concentrations for β-lg gelation and a modification in the dynamic of protein gelation (gel time, rate of development of the gel structure). The presence of polysaccharides greatly affected the aggregation of β-lg, that constituted the limiting step in the rate of gelation process. In the presence of PS large aggregates were formed during heat treatment, that allowed gel formation at low β-lg concentration. In general, the presence of PS increased the thermal stability of B-Ig, as we observed an increase in the onset temperature and enthalpy change of the denaturation process in the mixed systems. The properties of mixed gels were totally different according to the polysaccharide present in the mixed gel. In the presence of PGA it were observed the greatest variations in macro and microstructural properties of gels with pH, T, solids content and PS/β-lg ratio. The properties of β-lg interfaces and foams would be controlled by protein, due to its highest surface activity. The effect of polysaccharide on β-lg interfacial properties is complex due to the existence of the following phenomena: (a) incompatibility between biopolymers, (b) cooperative or competitive adsorption (c) complexation through specific interactions between polar regions on the protein and polysaccharide molecules. In the study of spread monolayers, it was observed an increase in surface pressure and a decrease in elastic dilatational modulus and elasticity. MAN showed the highest increase in surface elasticity, as a consequence of its high surface activity. In the dynamic adsorption experiments (drop tensiometer) MAN was the polysaccharide that produced the less structurated films in the presence of β-lg due to its higher adsorption at the interface in comparison with K-0 and K-LVF. This was manifested by low G’max and the lowest G’ and elasticity obtained in spread monolayers. The presence of XAN produced a large effect in the film properties, even without presenting surface activity by itself. This effect would be due to complexation with protein adsorbed at the interface and limited incompatibility in the bulk solution and in the interface. Rheological characteristics of the film have a large influence on foam stability.

Arazi, Andrés. "Medición de la reacción 25Mg(p, gamma )" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La reacción 25Mg(p,γ) es el principal mecanismo de producción estelar del radioisótopo 26Al. Dada la vida media del 26Al(τ~ 10 6 a), este radioisótopo puede escapar de la estrella que lo origina y decaer en el medio interestelar. La detección de la radiación gamma generada en este decaimiento permite rastrear los sitios de producción de 26 Al en la Vía Láctea y ajustar así los modelos de nucleosíntesis. Para esto último es necesario, además, precisar la tasa de producción de la reacción resonante 25Mg(p,γ)26 Al en el rango de energías estelares. Previo a este estudio, las intensidades de las resonancias de esta reacción se determinaron mediante la detección en línea de rayos gamma de desexcitación del núcleo compuesto 26Al. Sin embargo, a las energías estelares, muy por debajo de la barrera coulombiana, la reacción tiene una producción en extremo baja y su medición se dificulta por causa del fondo gamma ambiental y el fondo producido por reacciones en elementos contaminantes. Para eludir estos inconvenientes, en este trabajo se desarrolló un método de medición alternativo, basado en la alta sensibilidad de la espectrometría de masas con aceleradores (AMS). En este método, se bombardean blancos de MgO con un gran número de protones (del orden de 10 19)a las energías de resonancia. A continuación, estos blancos son tratados químicamente, agregando y homogeneizando una cantidad bien determinada del isótopo estable 27 Al y eliminando el Mg que lo componía originalmente. Las muestras así generadas contienen el 26Al producido en la reacción p + 25Mg y la cantidad de los mismos se determina midiendo la concentración 26Al/27Al mediante la técnica AMS. La pequeña cantidad de 26Al presente en las muestras (del orden de 10 6 - 10 7 átomos) hizo necesario optimizar la eficiencia de detección. A estos efectos, las mediciones de concentración de las muestras se realizaron extrayendo es estas el ion molecular 26AlOˉ de la fuente de iones. Dado que el ion molecular es hasta 25 veces más prolífico que el ion atómico Alˉ utilizado usualmente, su empleo permitió incrementar la eficiencia de detección hasta un valor de 4 x 10ˉ5. Como contrapartida, el ion molecular 26AlOˉ sufre la interferencia del ion isobárico 26MgOˉ. Por lo tanto, la aplicación de este método requirió la supresión del 26Mg, la cual se efectuó mediante la técnica de imán con gas y una separación química muy selectiva. A este fin se desarrolló un procedimiento químico que redujo la presencia de 26Mg a niveles del orden de 5 ppm en muestras de 500 μg de Al. Esta supresión de la interferencia isobárica, conjuntamente con la eficiencia de detección lograda, permite detectar la presencia de 26Al en muestras conteniendo tan sólo 10 5 átomos de este isótopo. Mediante este nuevo método se determinó la intensidad de tres resonancias de la reacción 25Mg(p,γ)). Estas resonancias, con energías E lab p = 316,1; 389,0 y 434,5 keV dominan la producción estelar de 26Al en novas y presupernovas (0,1 GK <~ T <~ 1,5 GK). Los resultados los obtenidos en este trabajo coinciden con las mediciones más recientes de estas resonancias.

Abstract:
The 25Mg(p,γ) reaction is the main mechanism for the stellar production of the radioisotope 26Al. Due to its long mean life (τ(26Al)~10 6 a) this radioisotope may escape from its originating star and decay in the interstellar medium. The detection of the radiation generated by its decay allows to trace the 26Al-producing spots within the Milky Way, and hence to impose constrains on nucleosynthesis models. For this purpose, it also necessary an accurate knowledge of the production rate of the 25Mg(p,γ)26Al 9 resonant reaction at the stellar energy range. Previous to this work, the resonance strenghts of this reaction were determined by online detection of the prompt gamma-ray from the deexcitation of the compound nucleus 26Al. However, at stellar energies, far below the Coulomb barrier, the reaction has an extremely low production rate and its measurement is hindered by room gamma background and background produced by reactions on contaminating elements. To overcome this hindrance, in this work an alternative method based on the high sensitivity of the accelerator mass spectrometry (AMS) was developed. In this method, MgO targets are proton-bombarded (in amounts of 10 19)at each resonance energy. Subsequently, these targets are chemically treated, adding and homogenizing a well-determined amount of the stable 27Al isotope and eliminating the original Mg from the sample. The samples generated in this way contain the 26Al produced in the p + 25Mg reaction, and their amount is determined measuring the 26Al/27Al concentration by means of the AMS technique. The small amount of 26Al contained in the samples (in the order of 10 6 - 10 7 atoms) required an optimization of the detection efficiency. To this end, concentration measurements on samples were done extracting molecular 26AlOˉ from them. The use of the molecular ion, about 25 times more prolific than the commonly-used atomic Alˉ ion, yielded an improvement in the detection efficiency up to a value of 4 x 10ˉ5. However, the molecular ion 26AlOˉ suffers the drawback of 26MgOˉ interference. Therefore, this method requires the suppression of the 26Mg isobar, which was achieved by means of a gas-filled magnet and a highly selective chemical separation. To this end, a chemical procedure was developed which is capable of suppressing 26Mg down to contamination levels of about 5 ppm from small (500 μg) Al samples. This background suppression, combined with the achieved detection efficiency, allows to trace 26Al nuclei in samples containing amounts down to 10 5 atoms of this isotope. By means of this new method, the strength of three resonances of the reaction 25Mg(p,γ) were determined. These resonances, with energies of E lab p = 316.1, 389.0 and 434.5 keV, dominate the stellar production of 26Al in novae and presupernovae (0.1 GK <~ T <~ 1.5 GK). Results obtained in this work agree with most recently obtained values for these resonances.

Antico, Pablo Luis. "Ocurrencia de casos extremos en la intensidad de la corriente en chorro subtropical media mensual sobre América del Sur durante el invierno" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Durante el período 1978-1999 se identificó a la corriente en chorro subtropical media mensual sobre América del Sur (CST) a partir de los reanálisis del NCEP/NCAR. Durante los meses de julio, agosto y septiembre, cuando la CST alcanza su máxima intensidad y se presenta con más frecuencia, se define un conjunto de casos intensos y otro de casos débiles. Simultáneamente con la ocurrencia de una intensa CST, la convección tropical se fortalece en el este del Océano Pacífico frente a la costa de América Central. Esta región de ascenso de aire constituye la rama ascendente de una circulación tipo Hadley que es responsable de la intensificación de la CST sobre América del Sur. En el caso de una CST débil, la convección tropical es menos intensa frente a la costa de América Central, debilitando a su vez a la celda de Hadley y por consiguiente a la CST. La intensidad de la celda local de Hadley responde a la presencia de anomalías de la temperatura de la superficie del mar en el este del Océano Pacífico. Al ocurrir un calentamiento la convección tropical se intensifica y por consiguiente la celda de Hadley también se fortalece. En cambio, al enfriarse la superficie del mar se reduce la convección y por lo tanto la celda de Hadley también se debilita. Durante julio-septiembre de 1995 ocurre un caso intenso de CST que no puede explicarse mediante la intensificación de la celda de Hadley. Se detecta en cambio la acción de ondas de Rossby que se originan en el centro del Océano Pacífico Sur en latitudes extratropicales siguiendo una trayectoria en forma de arco que las desvía hacia el trópico cuando alcanzan América del Sur. Como consecuencia, se establece un patrón de anomalías en la circulación de los niveles altos que favorece la intensificación de la CST sobre el continente. En este estudio se encontró que los casos de CST intensa ocurren en coincidencia con la culminación de la fase caliente del fenómeno El Niño - Oscilación del Sur. Durante la ocurrencia de los casos intensos de la CST las anomalías de la precipitación respecto del promedio 1978-1998 resultan positivas en la región sudeste del continente, en particular en la región costera del extremo sur de Brasil y Uruguay. Distinta es la situación cuando ocurren casos de CST débil, ya que la precipitación en toda la región tiende a ser inferior o cercana al promedio. Al ocurrir los casos intensos de la CST prevalece el ascenso de aire a la latitud de la CST sobre el sudeste del continente debido a la mayor actividad ciclónica observada a esa misma latitud. Durante la ocurrencia de los casos débiles de la CST la mayor actividad ciclónica se observa unos 20° al sur de la posición media de la CST. con lo cual se establece en el promedio una celda local de Ferrel cuya rama ascendente coincide con la zona de mayor actividad ciclónica y la rama descendente se ubica justamente a la latitud de la CST. La persistencia de la subsidencia en esa zona explica la tendencia a observarse una anomalía negativa en la precipitación durante la ocurrencia de los casos débiles de la CST.

Alonso, Diana Graciela. "Desarrollo y diferenciación de las branquias externas e internas en embriones y larvas de Bufo arenarum : análisis descriptivo y experimental" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
Las branquias externas de anuros son estructuras respiratorias embrionarias que desaparecen en las larvas, mientras que las branquias internas permanecen hasta la metamorfosis. La morfología branquial fue estudiada con microscopio óptico en embriones y larvas de Bufo arenarum. Los filamentos branquiales externos se originan a partir de los arcos vicerales 3 a 5 embrionarios; estos filamentos presentan una doble capa epidérmica, células mesenquimáticas y algunos capilares. Las branquias son recubiertas por completo por el opérculo en el estadio 25 y finalmente desaparecen. Los cuatro pares de braquias internas se encuentran ubicadas en dos cámaras branquiales a cada lado del corazón; cada branquia esta formada por un arco branquial en el cual se insertan ventralmente los filamentos respiratorios y dorsalmente los filtros branquiales. Cada filamento esta compuesto por un eje y numerosas ramificaciones, que presentan una cobertura epitelial, tejido conectivo, vasos sanguíneos y capilares mesodérmicos. El sistema branquial es sostenido por el cartílago del arco branquial; por debajo se encuentran las arterias branquiales aferentes y eferentes y el músculo constrictor. Si bien el proceso de regresión de las branquias internas de anuros ha sido bastante dilucidado, la desaparición de las branquias externas ha sido poco estudiada hasta el momento. La apoptosis es un tipo de muerte celular presente durante el desarrollo embrionario, caracterizada por la fragmentación de ADN. En el presente trabajo, células apoptóticas fueron estudiadas en el epitelio de las branquias externas con el microscopio óptico, y fueron detectados in situ fragmentos de ADN a través de la técnica TUNEL. La presencia y distribución de núcleos marcados fue mayor en los estadios 24 y 25, aunque tambien se encontraron en los restantes estadios embrionarios analizados. Un ensayo inmunohistoquímico para detectar PCNA (proliferating cell nuclear antigen) identifica células en todas las fases activas del ciclo celular. En este estudio, esta metodología permitió marcar las células proliferativas en tejidos embrionarios del sistema branquial, durante la regresión de las branquias externas. La presencia de apoptosis en el epitelio de las branquias externas progresa simultaneamente con una activa proliferación en las branquias internas. Los resultados obtenidos muestran la importancia de la apoptosis en la regresión de las branquias externas, ya que este tipo de muerte celular parece ser el proceso principal para reajustar el número celular del epitelio branquial, preparandolo para el nuevo sistema respiratorio de las larvas No existe información previa acerca de la distribución de componentes del citoesqueleto en las branquias de anuros. Con el objeto de conocer la distribución de algunos de las principales proteínas citoesqueletales en las branquias de Bufo arenarum; se efectuó una ensayo inmunocitoquímico en las branquias externas e internas. Se observó inmunorreacción para actina en el epitelio y tejido conectivo; la inmunodetección a miosina estuvo restringida al tejido conectivo de las branquias internas. Se encontró expresión de a y b tubulinas en el epitelio y las células ciliadas. La inmunocoloración para la vimentina fue débil en las células epiteliales e intensa en el tejido conectivo. La inmunorreacción positiva para las citoqueratinas de bajo peso molecular se encontró en los epitelios branquiales y en otros tejidos que en vertebrados superiores expresan vimentina, como el endotelio de los vasos y células musculares. Los resultados obtenidos demuestran que existe una gran diversidad de elementos en el citoesqueleto de las branquias larvales de anuros. El desarrollo de las branquias de anfibios es un excelente modelo de estudio de las interacciones entre las capas germinales de los embriones. Con el objeto de analizar la capacidad de diferenciación, especificación y determinación del esbozo branquial en el estadio de botón caudal, se llevaron a cabo explantes y transplantes en embriones de Bufo arenarum. Los esbozos transplantados desarrollaron filamentos análogos a los observados en las branquias externas e internas, incluso funcionalmente. Los explantes de endo-mesodermo fueron capaces de diferenciar tejidos branquiales típicos, en presencia de distintos ectodermos; el ectodermo presuntivo branquial en forma aislada no diferenció ninguna estructura. En los embriones explantados, el desarrollo de las branquias externas fue impedido tanto por la ausencia del ectodermo como del endo-mesodermo branquial. La diferenciación de las branquias internas solo fue afectada por la pérdidad del endo-mesodermo del esbozo. Estos resultados sugieren que el ectodermo branquial presuntivo se encuentra definido en el estadio de botón caudal, pero es incapaz de diferenciar estructuras branquiales en ausencia del end- mesodermo. Los Factores Natriuréticos Atriales son una familia de péptidos vasodilatadores, diuréticos y natriuréticos, cuya presencia ha sido demostrada en el corazón de larvas y adultos de Bufo arenarum. En el presente estudio, se efectuó un análisis ultraestructural e inmunhistoquímico acerca de la presencia de FNAs en las branquias internas de larvas premetamórficas. Los resultados del estudio inmunocitoquímico indican que en el estadio II larval y subsiguientes, se encuentran células inmunorreactivas en las branquias internas. A nivel ultraestructural, se encontraron en las células claras de los filtros branquiales gránulos secretorios similares a los gránulos FNA-inmunorreactivos de las células mioendócrinas de la misma especie. Estas observaciones permiten suponer que las hormonas cardíacas podrían jugar un rol paracrino y/o autocrino en el balance osmótico y electrolítico a nivel de las branquias internas.

Abstract:
In anuran larvae external gills are embryonic structures that regress at hatching or shortly thereafter; but internal gills are retained much longer, until metamorphosis. The morphology of gills was studied under light microscopy in Bufo arenarum embryos and tadpoles. The extenal gills filaments originate on visceral arches 3 to 5 just before the heartbeat stage; they have a two-layered epidermis, mesenchymal cells and some capillary loops are present. These gills are covered by the operculum at the 25 stage and they finally disappear. The four pair internal gills are located in two branchial baskets on either side of the heart; each gill consist of a branchial arch with gill tufts projecting ventrally and gill filters running dorsally. Each gill tuft is composed of a stem and numerous ramifications; it consists of an epithelial covering, connective tissue, the blood vessels and mesodermal capillaries. The gill system is supported by cartilage of the branchial arch; the afferent and efferent branchial arteries and the musculus constrictor branchialis extend beside the arches. Although the regression of internal gills of anurans is well understood, the loss of the external gills was poorly studied. Apoptosis is a form of naturally occurring cell death during development and it is characterised by extensive DNA fragmentation. In the present work, apoptosis was detected in the epithelium of external gills by light microscopy and using in situ nick end-labelling of DNA breaks. The presence and distribution of stained nuclei were frequent at 24-25 stages, but it were also present during the other embrionic stages. An immunohistochemical assay for proliferating cell nuclear antigen (PCNA) identifies cells in all active phases of the cell cycle. In this study, PCNA methodology marked cells in embryonic proliferating tissues of branchial system, during the involution of external gills. . Epithelial apoptosis of the external gills progresses simultaneously with active proliferation of the internal gills. These results show the relevance of apoptosis at regression of external gills, when this kind of death seems to be the unique process by wich cell numbers in the gill epithelium are adjusted, in order to prepare for the new respiratory system of tadpoles. There is no information about the distribution of cytoskeletal components in the anuran gills. The aim of this work was to know the distribution of some major cytoskeletal proteins in Bufo arenarum gills; an immunocytochemical study was performed in external and internal gills. Actin immunoreaction was observed in epitelia and connective tissue;.immunodetection to myosin was restricted to connective tissue of the internal gills. Expression of a and b tubulins was found in epithelia and cilliated cells. Vimentin immunostaining was weak in the epithelial cells and intense in the connective tissue. Immunoreaction to some small cytokeratins was observed in epithelia and other tissues that in higher vertebrates express primarily vimentin; such tissues were endothelia and certain muscle cells. It is concluded that the diversity of cyotskeleton has already been established in gills of lower vertebrates such as anuran larvae. The development of amphibian gills is an excellent model for studying the interactions between the germ layers of embryos. In order to analyze the differentiation capacity, specification and determination stage of the branchial rudiment at tail bud stage, explants and transplants were performed in Bufo arenarum embryos. Rudiments transplanted developed filaments analogous to the ones observed in external and internal gills, even functionally. Endo-mesoderm explants were able to differentiate typical branchial tissues, in presence of diferent ectoderm; the isolated pressumptive gill ectoderm did not differentiate any structure. In the explanted embryos, development of external gills was prevented by either the absence of branchial ectoderm or the meso-endoderm. Differentiation of the internal gills was only affected by the lack of the intenal layers of the rudiment. These results suggest that the presumptive branchial ectoderm is defined by the tail bud stage, but is unable to differentiate branchial structures in the absence of meso and endoderm. Atrial Natriuretic Factors are a family of vasodilatadory, diuretic and natriuretic peptides, whose existence has been demonstrated in the heart of larval and adult amphibians, including Bufo arenarum. In this study, an ultrastructural and immunohistochemical analysis was carried out on the presence of ANF-like substance in the internal gills of premetamorphic larval stages. The results of immunohistochemical study indicate that, at larval II and following stages, ANF-like immunoreactive cells are seen in internal gills. At electron-microscopy level secretory granules similar to those ANF-immunoreactive granules of myoendocrine cells of the same species are seen only in clear cells of gill rakers. These observations support the hypothesis that cardiac hormones might play a paracrine and/or autocrine role in the water and electrolyte balance at internal gills level.

Alemán, Mercedes. "Papel de los polimorfonucleares neutrófilos en el proceso inflamatorio crónico de la tuberculosis : efecto del Mycobacterium tuberculosis y mecanismos involucrados" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La tuberculosis (TB) es una enfermedad inflamatoria crónica causada por Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Al comienzo de una infección por micobacterias, la activación de las células de la inmunidad innata (linfocitos Natural Killer (NK), Tγδ y polimorfonucleares neutrófilos (PMN), asi como las citoquinas (CK) secretadas por ellas, influencian y modulan el curso de la reacción inflamatoria. Los PMN participan en la formación del granuloma, precediendo a los monocitos en las áreas de inflamación granulomatosa, liberando quimioquinas (QK) que atraen a los monocitos activándolos indirectamente. A pesar de que, durante el curso crónico de la TB humana, la respuesta inflamatoria se caracteriza por un infiltradode monocitos-macrófagos en el sitio de infección pulmonar, a medida que la enfermedad avanza se puede observar un elevado número de PMN en el lavado broncoalveolar (BAL)que se correlaciona con el contenido de interleuquina (IL)-8 en pulmón. Esta CK, cuya producción por el macrófago es inducida por interleuquina (IL)-1β y factor de necrosis tumoral (TNF)-α, podria inducir a su vez la secreción de otras CK por el PMN. Por otra parte, se ha demostrado que, dentro de las lesiones pulmonares, los PMN son capaces de matar a la micobacteria. Luego de arribar al foco inflamatorio, los PMN subyacen a la muerte. Esto puede ocurrir por dos mecanismos de muerte: 1) necrosis: donde la liberación del contenido citoplasmático al medio extracelular provoca una respuesta de tipo inflamatoria, 2) apoptosis: donde la membrana permanece intacta, de manera que los neutrófilos son removidos por los macrófagos sin liberar su contenido. Además, cuando los macrófagos ingieren células apoptóticas, no liberan mediadores pro-inflamatorios pero si en cambio moléculas de acción anti-inflamatorias. Por otra parte, los PMN apoptóticos pierden previamente la habilidad de degranulación, fagocitosis, estallido respiratorio y quimiotaxis. Por eso, si bien los PMN juegan un rol central en la defensa contra microorganismos infecciosos, la presencia de estas células en el pulmón puede contribuir a la injuria tisular local y en este contexto, la muerte del PMN por apoptosis, representa un mecanismo que permite su reconocimiento e ingestión por los macrófagos residentes, limitando asi el daño tisular que genera el marcado influjo de PMN durante el curso de una infección bacteriana. El objetivo de este trabajo fue estudiar el estado de activación de los PMN circulantes en pacientes con TB (TB-PMN) y su posible contribución a la fisiopatología de esta enfermedad. Por otra parte, sabiendo que muchas funciones que dependen de la activación del PMN generan en éste señales intracelulares, que estarían asociadas a la inducción del proceso apoptótico en los PMN, estudiamos la apoptosis en los PMN circulantes y el proceso apoptótico espontáneo e inducido por Mtb in vitro evaluando a su vez los mecanismos involucrados en este fenómeno y las señales intracelulares que participan. Por último, para corroborar los experimentos in vitro, evaluamos los mismos parámetros en líquidos pleurales de pacientes con TB y patologías no relacionadas. Los resultados demuestran que: ▪ Los polimorfonucleares neutrófilos circulantes de pacientes con TB (TB-PMN), tienen aumentada la expresión del receptor para la fracción constante de la inmunoglobulina G (FcγR)-IIIB(CD16) y el receptor para TNFα de 55 kD (TNF-R55). A su vez se observó la expresión del FCγRI (CDG4)que no se expresa constitutivamente en PMN. En concordancia con el aumento en la expresión de los receptores CD16 y CD64, las funciones que de ellos dependen tales como citotoxicidad mediada por complejos inmunes (Cx-CI) y citotoxicidad dependiente de anticuerpos (CCDA), también se hallaron aumentadas en los TB-PMN. ▪ Por otra parte, en los TB-PMN la liberación de anión superóxido fue inducida a concentraciones quimioatractantes del péptido formilado FMLP. Estos resultados sugieren que los PMN de los pacientes con TB se encuentran activados y liberando intermediarios reactivos del oxigeno, fuera del sitio de infección. Por lo tanto la activación de los PMN en sangre periférica observada en los pacientes, puede ser considerada como una inflamación sistémica, contribuyendo a la fisiopatología del proceso crónico inflamatorio en tuberculosis. ▪ En circulación los PMN de los pacientes con TB no presentan signos de apoptosis. Los TB-PMN tienen mayor expresión de los receptores CD16 y CD11b, ambos son parámetros indicativos de la activación del PMN. ▪ Los TB-PMN presentan una apoptosis espontánea aumentada que se correlaciona con la pérdida espontánea del receptor CD16 en cultivo (marcador de apoptosis en PMN). La marcada apoptosis espontánea podria explicarse por la mayor expresión en membrana de la proteína pro-apoptótica Fas y una menor expresión de la proteina anti-apoptótica bcl-2 en citoplasma. ▪ Mtb activa a los PMN in vitro incrementando la expresión de CD11b tanto en N- como en TB-PMN y dicha activación aceleraría el proceso apoptótico in vitro. Más aún, observamos que los PMN activados se ubican en una zona de mayor tamaño celular y mayor expresión de CD11b. Este hecho, nos permite postular que la mayor apoptosis espontánea observada en los TB-PMN, podría deberse al estado de activación que in vivo presentan los PMN de pacientes con TB. ▪ La apoptosis inducida por Mtb en los TB-PMN está inicialmente retrasada. Este hecho se correlacionó con la conservación del receptor CD16 y una mayor producción de IL-8. A períodos mas prolongados, Mtb aceleró significativamente la apoptosis en los pacientes. ▪ El componente del Mtb causante del efecto apoptótico, no seria manLAM ni estaría presente en el el lisado total bacteriano de la cepa virulenta Rv utilizada en este trabajo, ya que no indujeron apoptosis comparable con la bacteria entera. El efecto pro-apoptótico del Mtb ocurre aún a relaciones no fagocíticas (Mtb:PMN, 1:3). Por lo tanto, el Mtb entero dispararía el proceso apoptótico sin necesidad de ser fagocitado. ▪ La apoptosis no está mediada por el TNFα endógeno y no involucra al receptor CD11b. ▪ La apoptosis inducida por Mtb en TB-PMN es dosis dependiente. A pesar de que la fagocitosis de la bacteria induce el proceso apoptótico en PMN, nosotros mostramos que la apoptosis es inducida también a bajas relaciones Mtb:PMN(1:3). Por Io tanto, La apoptosis inducida por Mtb ocurriría mediante la interacción de la bacteria con un receptor diferente del CD11b sin mediar fagocitosis. ▪ Analizamos la activación de ciertas kinasas tales como mitogen-activated-protein-kinasa (MAPK)p38 que en los PMN estaría asociada tanto a la activación celular como al proceso apoptótico y extracelullar-signal-regulated kinase (ERK) ERK1/2 asociada a la sobrevida. Observamos que p38 MAPK participa en la apoptosis mediada por Mtb, pero no en la apoptosis espontánea. Por otro lado, la activación de ERK sería necesaria para prevenir el proceso apoptótico ya que al inhibirla se indujo un aumento en la apoptosis. Esto hecho, podría deberse a la anulación de alguna señal anti-apoptótica que actúa por esta vía, como por ejemplo la IL-8. ▪ La expresión de Ia MAPK p38 fosforilada (activada) se encontró elevada en los TB-PMN circulantes respecto de PMN de individuos sanos o de patologías inflamatorias no relacionadas. Además, Mtb es capaz de inducir la expresión de p-p38 MAPK. ▪ Finalmente, evaluamos los parámetros de activación y apoptosis de los PMN en líquidos plurales. Observamos que los PMN presentes en líquidos pleurales de pacientes con tuberculosis, presentan un aumento en la expresión de los marcadores de activación, CD64, CD11b, TNF-R55 y una disminución del CD16, respecto de sangre periférica del mismo paciente. Basados en los experimentos in vitro, evaluamos si los PMN, una vez extravasados al sitio de infección, presentaban una grado de apoptosis mayor. Efectivamente, los PMN de los derrames pleurales tuberculosos tienen elevados niveles de apoptosis, no observándose el mismo efecto en derrames pleurales de patologías no relacionadas, a la vez que tienen una elevada expresión de la proteína p38 activada, por lo que concluimos que el fenómeno es característico de la enfermedad tuberculosa. Se sabe que en el contexto de una reacción inflamatoria pulmonar, el reclutamiento masivo de los PMN al foco infeccioso genera un daño tisular importante. Para evitar tanto el daño tisular como para resolver el proceso inflamatorio, es necesario remover oportunamente a estas células del pulmón. Por lo tanto, si la respuesta inflamatoria mediada por los PMN es regulada por la activación del proceso apoptótico se estaría controlando su potencial destructivo en el sitio de infección. En este trabajo demostramos que los PMN están activados antes de arribar al foco infeccioso y una vez allí, el encuentro con el Mtb dispararía una serie de señales que, moduladas a su vez por las CK presentes, activarían aún mas al PMN, como lo hemos observado en los derrames pleurales de etiología tuberculosa. Sin embargo, en un primer momento la apoptosis de los PMN extravasados sería contrarrestada por ciertas citoquinas como la IL-8, de manera tal, que en presencia del Mtb conservarían ciertos receptores, como el CD16, permitiendo al PMN extravasado mantener su capacidad efectora en el sitio inflamatorio. Posteriormente, la apoptosis inducida por el Mtb en los PMN se acelerarla rápidamente, promoviendo así la remoción de los PMN por los macrófagos alveolares y el control del proceso inflamatorio en el sitio de infección, lo que evitaría un mayor daño tisular.

Abstract:
Tuberculosis (TB) is a chronic inflammatory disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). ln the early phase of infection, activation of cells of the innate immunity such as Natural Killer (NK) cells, Tγδ lymphocytes and neutrophils (PMN), as well as the cytokines (CK)secreted by them, modulate the course of the inflammatory reaction. PMN participate in the granuloma formation preceding monocytes in the areas of granulomatous inflammation and releasing chemokines that attract monocytes. Although tuberculosis lesions are characterized by a predominant migration of monocytes/macrophages to the site of infection, the earliest response to mycobacteria is primarily an influx of PMN. Nevertheless, as the disease evolves, an increased number of PMN is observed in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) of affected lung that correlates with the interleukin (IL)-8 content. The production of this chemokine in macrophages is induced by interleukin (lL)-1β and tumor necrosis factor alpha (TNF)-α, that could induce in turn the secretion of other CK by PMN. It has been recently documented that PMN are able to kill Mtb in tuberculosis lesions. Once localized in the site of infection, the PMN underlie to death by two possible mechanisms: 1) necrosis: characterized by the release of the cytoplasmic content to the extracellular media generating an inflammatory response and 2) apoptosis: characterized by the preservation of the membrane integrity, so PMN might be removed by macrophages without releasing their cytotoxic content. More over, macrophages that phagocytes apoptotic cells do not release inflammatory mediators but anti-inflammatory molecules. On the other hand, apoptotic PMN loose some of their functions as degranulation, phagocytosis, respiratory burst and chemotaxis. Therefore, although PMN play a central role in the infectious process, the excessive recruitment of these cells generates tissue injury. In this context, apoptosis of PMN represents an effective mechanism that leads to the removal of undesirable cells by macrophages limiting tissue damage during the course of the inflammatory response. The aim of these studies was to investigate the activation state of circulating PMN of patients with active pulmonary tuberculosis (TB-PMN) and their possible contribution to the chronic inflammatory process. It is known that several functions that depend on the activation state leads to changes in second messengers that are associated with the induction of apoptotic process in PMN. Therefore, we evaluated apoptosis in circulating PMN and spontaneous and Mtb-induced apoptosis in vitro as well as the mechanisms involved in this process. Finally, in order to corroborate the findings observed in vitro, we evaluate the same parameters in pleural fluids of tuberculosis and non-tuberculosis diseases. Results demonstrated that: ▪ TB-PMN have an increased expression of (FcγR)-IIIB(CD16) and TNF-R55 compared to those of healthy subjects (N-PMN). Furthermore, FCγRI(C64) whose expression is almost exclusively restricted to mononuclear phagocytes, is observed in TB-PMN. Functions that depends on FCγR such as immune complex-mediated cytotoxicity (Cx-IC) and antibodydependent cellular cytotoxicity (CCDA), are also increased in circulating TB-PMN. ▪ On the other hand, in TB-PMN, superoxide anion generation are triggered even at chemottractant concentrations of the formylated peptide FMLP, suggesting that PMN of TB patients are activated and might release reactive oxygen intermediates (ROI) outside the site of infection so, we speculate that the chronic inflammatory response could no longer be considered solely as a local lung inflammation but it could contribute to a systemic inflammation in active TB patients. ▪ Although recently isolated TB-PMN show an elevated expression of CD16 and CD11b indicating that they are activated in circulation, they do not exhibit apoptotic features. ▪ Spontaneous apoptosis of TB-PMN is significantly increased and correlates with the loss of the CD16 receptor expression in culture (indicative of apoptosis in PMN). This spontaneous apoptosis could be due at least in part to the higher expression of Fas and/or the lower bcl-2 expression observed in TB-PMN compared to N-PMN. ▪ Mtb activates PMN in vitro enhancing the CD11b expression in N- and TB-PMN accelerating the apoptotic process in vitro. Moreover, activated TB-PMN are located in a new region characterized by a larger size and CD11b expression. This fact, lead us to speculate that accelerated spontaneous apoptosis of TB-PMN, could be due to the activation state that these cells have in circulation. ▪ Mtb-induced apoptosis of TB-PMN is initially delayed and correlates with the preservation of the CD16 receptor and with an increased secretion of IL-8. Later in the time of culture Mtb markedly accelerates the apoptotic process in TB-PMN. ▪ The pro-apoptotic effect of Mtb is not due to the major mycobacterial cell wall component, the glycolipid ManLAM. Furthermore, a whole cell lysate preparation has no effect on PMN apoptosis. Therefore, the whole Mtb triggers apoptotic process in PMN. ▪ Mtb-induced apoptosis in TB-PMN is not mediated by endogenous TNFα and does not involvs the CD11b receptor. ▪ Mtb-induced apoptosis in TB-PMN is dose dependent. Although phagocytosis induces high levels of apoptosis in PMN, we show that it is also induced at a low Mtb:PMN ratio (1:3). Therefore, Mtb-induced apoptosis might occur by the interaction with a receptor different from CD11b and does not depend on the phagocytosis of Mtb. ▪ mitogen-activated-protein-kinasa (MAPK)p38 and extracellular-signal-regulated kinase (ERK) ERK1/2 were analyzed because these proteins participate in cellular activation an survival. We demonstrated that p38 MAPK is involved in Mtb-induced apoptosis and not in spontaneous apoptosis. On the contrary, activation of ERK would be necessary to prevent the apoptotic process. In this context, some anti-apoptotic signal (i.e. IL-8) might have been annulated when ERK activation was blocked. ▪ Activated MAPK p38 (p-p38) expression in circulating TB-PMN is higher compared to N-PMN or to PMN of inflammatory non-related pathologies. ▪ TB-PMN in pleural fluid (PF) have an increased expression of activation markers as CD64, CD11b, TNF-R55 and a lower CD16 expression compared to peripheral blood PMN from the same patient. Furthermore, PMN that have migrated to the site of TB infection show high levels of apoptosis and a high p-p38 expression. On the contrary, we do not observe the same pattern in PMN of PF of inflammatory non-related pathologies suggesting that these features are characteristic of the tuberculosis disease. In the context of a pulmonary inflammatory reaction the massive recruitment of PMN to the infectious focus generates injury in the lung. Therefore, timer removal of PMN might avoid tissue damage and progression to chronic inflammation. Thus inflammatory response mediated by PMN in tuberculosis, is regulated by the activation of the apoptotic process limiting their detrimental potential in the lung. All these findings have a potential clinical relevance because PMN that have migrated to the site of inflammation are most likely to be either primed or activated before encountering mycobacteria. The delayed apoptosis at short culture times together with the preservation of CD16 suggest that PMN would be able to perform their effector functions at the site of infection. Likewise, later in time, Mtb-induced activation might lead to accelerated apoptosis of PMN, as can be observed in tuberculous pleuritis, thus avoiding tissue damage.

Agote Robertson, Marcos. "Modulación de la función tiroidea por radiación y factores de crecimiento" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
El trabajo de investigación realizado en la presente tesis doctoral tuvo dos objetivos principales: l. la investigación de la posible aplicación de radiosensibilizadores en el tratamiento del cáncer de tiroides o el hipertiroidismo, con radioiodo. 2. Elucidar el rol de las diferentes isoformas del TGF-β en la regulación de la función y proliferación celular tiroidea en células normales y tumorales con distintos grados de diferenciación y la variación de su expresión durante la evolución y prevención del bocío. Los resultados pueden resumirse de la siguiente manera: l. Estudios in vivo en ratas normales y bociosas demostraron que la administración de nicotinamida incrementó la radiodestrucción de la tiroides causada por el 13l-I. Esta acción radiosensibilizadora no está relacionada con mecanismos de poli-ADP ribosilación de proteínas nucleares, proceso involucrado en la reparación del ADN dañado. La nicotinamida produjo un incremento del flujo sanguíneo tiroideo y por lo tanto, postulamos que esto a su vez incrementaría la oxigenación tisular, aumentando asi la producción de radicales libres, altamente dañinos para las células. Para confirmar esta última hipótesis, fueron analizadas las actividades de diversas enzimas y la concentración de algunos compuestos relacionados con el metabolismo de los radicales libres. Nuestros resultados demuestran que la administración de nicotinamida y radioiodo causa un aumento significativo en la producción de peróxidos orgánicos y en la expresión de la eNO sintasa. No ocurrió lo mismo con las actividades de SOD (superóxido dismutasa), catalasa y glutatíón peroxidasa. Estos resultados abren la posibilidad de la utilización de la nicotinamida como radiosensibilizador de la acción del radioiodo en las terapias antitiroideas. 2a. Estudios in Vitro Las 3 isofonnas del TGF-β causaron una inhibición de magnitud similar en la proliferación de células normales tiroidas de la línea FRTL5. Un incremento progresivo a la resistencia a esta acción inhibitoria encontramos en las líneas tumorales, de acuerdo con el grado creciente de pérdida de funciones diferenciadas tiroideas: cáncer tiroideo folicular humano (WRO) < cáncer papilar humano(NPA) < cáncer tiroideo indiferenciado humano (ARO). Notamos, asimismo que las isoformas 2 y 3 son más potentes, en líneas generales, que la l. 2b. Estudios in Vivo La expresión de la proteína TGF-β3 se incrementó a medida que evolucionaba el bocio. La administración simultánea de 6-iodo-delta lactona del ácido araquidónico inhibió la formación del bocio ydisminuyó la expresión del TGF-β3. La inyección de ioduro de potasio en conjunto con un inhibidor de la peroxidasa tiroidea, mostró que no redujo la formación del bocio ni la expresión de la isoforma 3. Per se, ni el ioduro ni la iodolactona alteraron los niveles de expresión del TGF-β3 Estos resultados confirman el rol de la iodolactona en la autorregulación tiroidea y nos permiten descartar un rol para el TGF-β3 en este mecanismo.

Abstract:
The research work performed in the present Doctoral Thesis deals with two main objectives: l. to investigate the possible applicaction of radiosensitizers in the treatment of thyroid cancer and hyperthyroidism with radioiodine. 2. To clarify the role of the isoforms of TGF-β in the regulation of thyroid cell proliferation and function in normal and tumoral cells with distinct degrees of undifferentiation, and the variations of their expression in the course of goiter induction and involution. The results obtained can be summarized as follows: l. In vivo studies in rats demonstrated that the administration of nicotiamide to normal rats increase the degree of thyroid ablation produced by different doses of 131-I. Similar results were obtained with rats bearing goiter induced by the previous administration of a goitrogen. The radiosensitizing action of nicotinamide is not related to the inhibition of poli-ADP ribosylation of nuclear proteins, a biochemical pathway involved in DNA repair. Nicotinamide produced a very significant increase in thyroid blood flow, and therefore we postulated that this would in turn increase tissue oxygenation, thereby causing a greater production of free radicals, responsible for the greater tissue damage. In order to explore this latter hypothesis the activities of varios enzymes and compounds related to feer radical metabolism were assayed. Our results demonstrated that simultaneous administration of nicotinamide and radioiodine caused a significant increase in the production of organic peroxides and the acitivty of the eNO synthase. No significant changes were observed in SOD (superoxide dismutase), catalase and glutathion peroxidase. These results open the possibility of applying the simultaneous use of radioiodine and nicotinamide to clinical trials. 2a. In Vitro Studies The three isoforms of TGF-β caused a similar degree of inhibition of normal thyroid cell proliferation (FRTL5). A progressive increase in the resistance to this effect was observed as the degree of undifferentiation increased: human thyroid follicular cancer (WRO) < human papillary cancer (NPA) < undifferentiated thyroid cancer (ARO). A tendency to show that isoforms 2 and 3 are more potent inhibitors than the isoform l was observed. 2b. In Vivo Studies The expression of the protein of TGF-β3 was increased during goiter induction. The simultaneous administration of 6-iodo-delta lactone of arachidonic acid inhibited goiter growth and decreased the expression of TGF-β3. The injection of iodide plus a blocker of iodide organification, showed no significant action on both goiter growth and TGF-β3 expression. Neither iodide nor iodolactone by themselves caused a significant increase in the expression of TGF-β3 These results confirm the role of iodolactone in thyroid autoregulation and allow us to discard the participation ofTGF-β3 in this mechanism.

Agüero, Marta Susana. "Fructificación partenocárpica en tomate: efecto del ácido giberélico sobre la proteólisis" (2003). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La antesis de una flor es un estadio crucial para el destino del ovario ya que estímulos endógenos -polinización O nivel hormonal elevado- o exógenos -aplicación hormonal- inducen el proceso de fructificación. En ausencia de estos estímulos el ovario deja de crecer e inicia un proceso de senescencia. Dada la importancia que posee la aplicación hormonal mejorando el establecimiento de los frutos de tomate cuando la autopolinización resulta alterada por las condiciones ambientales, el objetivo de este trabajo fue estudiar el control de actividades proteolíticas durante los procesos alternativos de senescencia o fructificación del ovario. Como sistema experimental se emplearon ovarios no polinizados y frutos en desarrollo obtenidos por polinización natural o aplicación de auxinas o giberelinas a ovarios no polinizados. La ausencia de estímulos endógenos o exógenos inició el programa de senescencia en los ovarios no polinizados, aunque éstos mantienen su sensibilidad hasta por lo menos 20 dpa. Durante este periodo se evidenciaron parámetros característicos de la senescencia como la disminución en los niveles de la subunidad mayor de la RuBisCO y el incremento en la actividad proteolítica sobre azocaseína, en los polipéptidos relacionados antigénicamente con papaina y la tiolproteasa C14, y en la expresión del gen C14-tiolproteasa. El proceso de fructificación, en cambio, fue acompañado por una disminución de estos parámetros. Los resultados obtenidos indicarían que en los ovarios no polinizados la expresión y/o actividad de proteasa/s de la familia de la papaína es regulada temporal y espacialmente durante los procesos alternativos de senescencia o fructificación.

Abstract:
Flower anthesis is a crucial stage for the ovary's fate because endogenous stimuli -pollination or high hormonal level- or exogenous ones -hormone application- induce the fruit set. In the absence of these stimuli, the ovary stops growing and starts the senescence process. Given the importance that hormone application has for the improvement of fruit set in tomato when self-pollination is altered by environmental conditions, the objective of this work was to study the control of proteolytic activities during the alternative processes of senescence or fruit set. Unpollinated ovaries and developing fruits obtained by natural pollination or by the application of auxins and gibberellins to unpollinated ovaries, were used as experimental system. The absence of endogenous or exogenous stimuli began the senescence program in the unpollinated ovaries, although these maintain their sensitivity until at least 20 dpa. During these period parameters typical of senescence, such as a decrease in the levels of the large subunit of RuBisCO and the increase in proteolytic activity on azocasein, polypeptids antigenically related to papain and recombinant tomato Cl4 thiolprotease, and in the expression of the Cl4-thiolprotease gene. None of these changes are detected if the ovary senescence is prevented and the fruit set and development was induced. The results obtained would indicate that the expression and/or activity of protease/s of the papain family in unpollinated ovaries are temporal and spatially regulated along the two alternative processes: senescence or fruit development.

Goldszmid, Silvana Romina. "Células dendríticas en la inmunoterapia del cáncer : desarrollo de una vacuna anti-melanoma en un modelo experimental" (2003-12). Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

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Resumen:
La incidencia del melanoma aumenta a mayor velocidad que la de otros cánceres y la sobrevida de pacientes con metástasis distantes es generalmente < l año. Con el avance en la comprensión de los requerimientos para inducir inmunidad las CD se han convertido en atractivos vectores para la inmunoterapia del cáncer. Consideradas las más potentes células presentadoras de Ag (APC), las células dendríticas (CD) actúan como centinelas del sistema inmune, patrullando a través de la sangre, tejidos periféricos, linfa y órganos linfoides secundarios alertando al sistema inmune y controlando sus decisiones más tempranas. En la periferia las CD inmaduras capturan antígenos (Ag) y migran hacia los órganos linfoides secundarios donde presentan dichos Ag a linfocitos T naïve induciendo la activación de la respuesta inmune. El objetivo del presente trabajo de Tesis fue estudiar desarrollar una vacuna anti-melanoma utilizando CD cargadas con células tumorales apoptóticas y estudiar los mecanismos involucrados en la respuesta inducida contra el tumor. Para ello, se utilizó el modelo de melanoma murino B16. El melanoma B16 es un tumor de origen espontáneo, débilmente inmunogénico y por lo tanto provee un marco adecuado para el estudio de la modulación de la respuesta inmune anti-tumoral. Las CD aisladas a partir de precursores de médula ósea fueron cultivadas en presencia de sobrenadante de cultivo de la línea productora de GM-CSF establecida mostraron un fenotipo inmaduro con baja expresión de moléculas MHC I y II y coestimulatorias y alta capacidad de captación antigénica tanto por fagocitosis de Ag particulados como endocitosis de macromoléculas. Luego de inducir la maduración con LPS se observó un marcado aumento en la expresión de moléculas MHC I y II y coestimulatorias y un aumento en la capacidad estimulatoria en cultivos mixtos alogeneicos. Ensayos de migración in vitro mostraron la alta capacidad migratoria de las CD inmaduras en respuesta a estímulos inflamatorios y de CD maduras en respuesta a quimioquinas constitutivamente secretadas en los ganglios linfáticos. Se comprobó también, mediante la realización de ensayos de migración in vivo, que las CD inyectadas subcutáneamente eran capaces de migrar hacia los ganglios linfáticos de drenaje. Estos resultados reflejaron el potencial de las CD obtenidas para su utilización en el diseño de una vacuna anti-tumoral. La apoptosis de las células B16 fue inducida por radiación y y evidenciada por tinción con Anexina V / IP. 48 hs después de la irradiación se observaron 70 —80 % de células apoptóticas caracterizadas por la tinción Anexina +/ IP - comparadas con lO—12 % en las células sin tratar. Las células Bl6 apoptóticas fueron eficientemente fagocitadas por CD inmaduras. Luego de 24 hs de cocultivo gran proporción (> 50 %) de CD había incorporado material apoptótico según se evidenció por FACS, microscopía confocal y microscopía electrónica. El cocultivo con células tumorales apoptóticas indujo la maduración de las CD, evidenciada por un aumento en la expresión de MHC II y CD86 respecto a CD inmaduras cultivadas en ausencia de células apoptóticas. Dicho aumento se observo principalmente en la población de CD que había incorporado material apoptótico. Otra evidencia de la maduración de las CD, fue la marcada disminución de la capacidad endocítica con respecto a CD inmaduras (intensidad de fluorescencia media 35,8 vs. 192,5). Luego de ser inyectadas subcutáneamente, CD cocultivadas con células apoptóticas o CD solas migraron hacia los ganglios linfáticos en forma comparable. Las CD encontradas en los ganglios correspondían a ~0.5% del inoculo original y en ambos casos se observo una expresión uniforme de MHC II y CD86 equivalente a la observada en CD maduras. La vacunación con CD cargadas con células tumorales apoptóticas (CD-Apo) indujo un alto nivel de protección contra el desarrollo del melanoma B16: 80 % de los animales permanecieron libres de tumor 12 semanas después del desafió. Dicha protección fue especifica para el melanoma B16, ya que todos los animales vacunados desarrollaron tumor cuando fueron desafiados con un tumor singeneico no relacionado. 80 % de los animales vacunados con CD-Apo y desafiados 10 semanas después de la inmunización permanecieron libres de tumor, consistente con la inducción de memoria inmunológica. Estudios de depleción in vivo de subpoblaciones linfocitarias demostraron que tanto linfocitos T CD4+ como CD8+ son son necesarios para la efectiva vacunación con CD-Apo. Se evidenció que ambas poblaciones linfocitarias son activadas para la producción de IFNy cuando son estimuladas con CD-Apo y CD-TRP-2. Además, los linfocitos CD8+ son capaces de reconocer células Bl6 intactas in vitro y de lisar células pulsadas con TRP-2 in vivo. El estudio de la inmunidad humoral demostró la presencia de anticuerpos específicos dirigidos contra las ce'lulas B16. Por último, en el análisis del sitio de inyección del tumor se observó un importante infiltrado de neutrófilos a tiempos muy tempranos, siendo máximo seis días después de la inyección del tumor. La presencia de linfocitos en el sitio de inyección se observó más tardíamente. Esto podría indicar que los neutrófilos también juegan un rol importante en el rechazo tumoral. En el presente trabajo de Tesis se ha demostrado por primera vez, que la vacunación con CD cargadas con células tumorales apoptóticas (CD-Apo) induce inmunidad a largo plazo dependiente de la acción combinada de linfocitos T CD4+ y CD8+ contra el melanoma B16 débilmente inmunogénico. Este modelo preclínico provee el marco necesario para la realización de estudios clínicos comparables utilizando CD-Apo como adyuvante para la inmunización activa contra el cáncer.

Abstract:
Melanoma is the cancer with the fastest increasing incidence, and survival of patients with distant metastases is generally < l year. With increased understanding of the requirements for initiating immunity, dendritic cells (DCs) have become attractive vectors for immunotherapy of this and other cancers. Considered the most potent antigen presenting cells (APC), DC act as sentinels of the immune system, they patrol trough the blood, periphery, lymph and lymphoid organs, alerting the immune system and controlling its early decisions. At the periphery immature DC capture antigens (Ag) and migrate to the secondary lymphoid organs where they present those Ag to naïve T cells and therefore inducing the immune response. The aim of this Thesis work was to develop an anti-melanoma vaccine using DC loaded with apoptotic tumor cells and to study the mechanisms underlying the induced anti-tumor response. In order to do that, we used the B16 melanoma. The B16 melanoma is a poorly immunogenic tumor of spontaneous origin, thus providing the adequate background to explore maneuvers to increase host defenses against it. The DC obtained from bone marrow precursors were cultured in the presence of GM-CSF containing supematant from the previously established GM-CSF producing cell line, showed an immature phenotype with low expression of MHC II and I and co-stimulatory molecules and high Ag capture capacity. After LPS induced maturation DC showed an up-regulated expression of MHC I and II and co-stimulatory molecules and high T cell activation capacity in the mixed leukocyte reaction. DC also showed a high migratory activity as evidenced by in vitro migration assays. Furthermore, it has also been shown that after s.c. injection DC migrated to the draining lymph nodes. These observations pointed out the potential of DC for the design of anti- tumor vaccines. To induce apoptosis, B16 cells were irradiated (70 Gy) and cultured for 48 h. Apoptosis was documented by AnexinV / PI staining. After 48 h, cultured unirradiated cells contained 10-12% early apoptotic cells characterized by AnnexinV + / PI —staining. In contrast, 70-80% of irradiated cultured tumor cells had undergone early apoptotic death. 12-19% of the cells displayed AnnexinV + / PI + staining, indicating secondary necrosis in both unirradiated and irradiated cultures. Then DCs were cultured apoptotic tumor cells for 24h. At 37°C, over 50% of immature DCs phagocytosed apoptotic material, as confirmed by FACS, confocal fluorescence microscopy and electron microscopy. After coculture a large fraction of the tumor-exposed DCs upregulated CD86 as well as MHC II. Another evidence of the induced maturation was the down-regulated capacity to endocytose FITC-Dextran as compared with immature DC(mean fluorescence 35,8 vs 192, 5). Following injection, DCs migrated to the draining lymph nodes comparably to control DCs at a level corresponding to ~0.5% of the injected inoculum and uniformly expressed high levels of CD86 and MHC II molecules comparable to fully mature and immunogenic DC. Mice vaccinated with tumor-loaded DCs (DC-Apo) showed a strong protection against an intracutaneous challenge with B16: 80% of the mice remaining tumor-free 12 weeks after challenge. This protection was not observed when vaccinated mice were challenged with a nonrelated syngeneic tumor. 80 % of mice receiving a tumor challenge 10 weeks after vaccination were also protected, consistent with the induction of tumor-specific memory. When either CD4+ or CD8+ T cells were depleted in vivo at the time of challenge, the protection was completely abrogated, indicating that both CD4+ and CD8+ T cells are necessary for the effective anti-tumor response induced DC-Apo vaccination. CD4+ and CD8+ T cells were efficiently primed in vaccinated animals, as evidenced by interferon-y secretion after in vitro stimulation with DC-Apo or DCs pulsed with TRP-2. In addition, B16 melanoma cells were recognized by immune CD8+ T cells in vitro, and cytolytic activity against TRP-2(180-188) pulsed target cells was observed in vivo. The study of the humoral response showed the presence of anti-B16 specific antibodies. Finally, when the tumor injection site was analyzed a large amount of neutrophils were observed at very early time points and being maximum six days following tumor challenge. The presence of lymphocytes at the injection site was observed only at later time points. This could indicate tha neutrophils also play an important role in the tumor rejection. In the present Thesis work it has been shown for the first time, that DCs phagocytosing apoptotic tumor cells (DC-Apo) elicit long-lived combined CD4+ and CD8+ immunity against the poorly immunogenic B16 melanoma. This preclinical model sets the stage for comparable studies in humans with DC-Apo as adjuvants for active immunization against cancer.

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