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"Ideales de operadores multilineales en espacios de Banach y espacios de sucesiones" (2016-04-27). Villafañe, Norberto Román. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo definimos el espacio de sucesiones asociado a un ideal de operadores multilineales en espacios de sucesiones. Es decir, para cada ideal de operadores multilineales U, para cada par de espacios de sucesiones E y F y para cada n Є N, asociamos un espacio de sucesiones que lo notamos ln(U;E, F). Vamos a utilizar dicho espacio para comparar los ideales de operadores multilineales nucleares, integrales, extendibles y continuos en espacios de sucesiones lp. También vamos a estudiar características estructurales de dichos espacios de sucesiones -como maximalidad, minimalidad y dualidad- en relación con ciertas características del ideal y de los espacios de sucesiones involucrados. Damos aplicaciones para los ideales de operadores multilineales r-dominados y (E, p)-dominados. Definimos la propiedad de Radon-Nikodým vectorial para un ideal de operadores multilineales y mostramos, bajo ciertas hipótesis, que los ideales de operadores multilineales con dicha propiedad coinciden isométricamente con su núcleo minimal en espacios Asplund. Como consecuencia, probamos la existencia de ciertas estructuras en algunos ideales de operadores multilineales clásicos (existencia de bases, separabilidad o la propiedad de Radon-Nikodým). Por otra parte, damos una demostración alternativa a dos resultados ya conocidos. Uno es la versión vectorial del Teorema de Littlewood-Bogdanowicz-Pelczyński que dice que los operadores multilineales de c0 X ... X c0 en Y son aproximables si y solo si Y no contiene copia de c0. El otro dice que el ideal de operadores multilineales Pietsch-integrales coincide isométricamente con el ideal de operadores multilineales nucleares en espacios Asplund.

Abstract:
In this work we define the sequence space associated with an ideal of multilinear operators between sequence spaces. That is, for each ideal of multilinear operators U, for each pair of sequence spaces E and F and for each n Є N, we associate a sequence space that we note ln(U;E, F). We will use that space to compare the ideals of nuclear, integral, extendible and continuous multilinear operators between lp-spaces. We will also study structural characteristics of such sequence spaces - as maximality, minimality and duality - regarding certain characteristics of the ideal and the sequence spaces involved. We will give applications to the ideals of r-dominated and (E, p)-dominated multilinear operators. We define the vector Radon-Nikodým property for an ideal of multilinear operators and show, under certain assumptions, that the ideals of multilinear operators with that property coincides isometrically with its minimal kernel on Asplund spaces. As a consequence, we prove the existence of certain structures in some classical ideals of multilinear operators (existence of bases, separability or the Radon-Nikodým property). Furthermore, we give an alternative proof of two results already known. One is the vector version of the theorem of Littlewood- Bogdanowicz-Pelczyński that says that the multilinear operators from cₒ X ··· X cₒ to Y are aproximables if and only if Y does not contain a copy of cₒ. The other one says that the ideal of multilinear operators Pietsch-integral coincides isometrically with the ideal of nuclear multilinear operators on Asplund spaces.

"Identificación de dos moléculas de Trypanosoma cruzi involucradas en la invasión de las células del huésped" (2000). Silber, Ariel M.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Identificación de ejes quimiotácticos que guían células madre mesenquimales al estroma tumoral en adenocarcinomas mamarios" (2014-03-31). Sganga, Leonardo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El crecimiento tumoral depende en gran medida en la interacción de las células tumorales con el microambiente que las circunda. Entre otras células que componen el estroma tumoral se encuentran precursores locales y precursores estromales o células madre mesenquimales (MSCs) que se alojan en el tumor tras ser reclutadas desde la médula ósea. En base a esto surge la pregunta: ¿cuáles de los factores del microambiente tumoral son los responsables de la migración de MSCs provenientes de médula ósea? Utilizando un modelo in vitro del microambiente tumoral representado por medios condicionados (MC) por muestras humanas de adenocarcinomas mamarios realizamos un estudio proteómico de citoquinas y quimioquinas sobre 8 muestras tumorales, destacándose IL-6, GRO, IL-8 y MCP-1 como los factores más representados de los medios condicionados por tumores, siendo el perfil muy similar entre todas las muestras tumorales. En busca de un modelo que remede el aporte de factores quimiotácticos por parte de los tumores humanos, se crecieron tumores ortotópicos en ratones nude combinando una línea tumoral mamaria humana con fibroblastos humanos adultos. Utilizando este modelo, se logró cuantificar las MSCs llegadas tras migración local luego de ser inyectadas de modo peritumoral. En una validación técnica y funcional in vitro, IL-6 resultó ser quimiotáctico para MSCs pero en concentraciones mucho mayores a las encontradas en los tumores; sin embargo no se descarta un rol de IL-6 directo o indirecto. Por otra parte los ejes quimiotácticos de GRO, IL-8 y MCP-1 no revelaron un aporte significativo sobre la migración de MSCs. Por otro lado, de un análisis estadístico y funcional comparando los MC provenientes de tumores y tejidos adyacentes libres de patología, resultó una lista de factores diferencialmente representados de los cuales MIP-3α o proteína inflamatoria de macrófagos 3 alfa surge como el factor más relevante como posible mediador del reclutamiento de las MSCs hacia el tumor. La validación funcional del eje quimiotáctico MIP-3α / CCR6 sugiere que este eje estaría involucrado, al menos en parte, en la migración de MSCs hacia tumores. En suma, hemos logrado identificar un factor relevante para la modulación de la migración de las MSCs hacia el tumor, factible de ser utilizado en estudios posteriores para el diseño de terapias celulares contra el cáncer.

Abstract:
Tumor growth depends greatly on the interaction of tumor cells with the surrounding microenvironment. Among other cells comprising the tumor stroma, there are local precursors and stromal precursors or mesenchymal stem cells (MSCs) that home into the tumor after being recruited from the bone marrow. Based on this, the question arises: which of the factors from the tumor microenvironment are responsible for the migration of bone marrow-derived MSCs? Using an in vitro model for the tumor microenvironment represented by conditioned media (CM) from human samples of breast adenocarcinomas, we performed a proteomic study of cytokines and chemokines in 8 tumor samples, highlighting IL-6, GRO, IL-8 and MCP-1 as the most represented factors in tumor -conditioned media, with a very similar profile among all tumor samples. Looking for a model that represents the contribution of chemotactic factors from human tumors, orthotopic tumors were grown in nude mice by combining a human mammary tumor cell line with human adult fibroblasts. Using this model, we were able to quantify MSCs arriving after local migration after being injected in a peritumoral way. In a technical and functional in vitro validation, IL-6 was found to be chemotactic for MSCs but at much higher concentrations than those found in tumors; however, we cannot disregard a direct or indirect role for IL-6. Moreover, chemotactic axis involving GRO, IL-8 and MCP-1 did not reveal a significant contribution on MSCs migration. Furthermore, a statistical and functional analysis comparing MC from tumors and adjacent tissues free of pathology, resulted in a list of factors differentially represented where MIP-3α or macrophage inflammatory protein- 3 alpha emerges as the most relevant factor as possible mediator for the recruitment of MSCs to the tumor. Functional validation of the chemotactic axis MIP-3α / CCR6 suggested that this axis would be involved, at least in part, on MSCs migration to tumors. In summary, we could identify a factor relevant for the modulation of MSCs migration into the tumor, likely to be used in subsequent studies to design cell therapies against cancer.

"Identificación de jets con hadrones b producidos por desdoblamiento de gluones con el detector ATLAS" (2012). González Silva, María Laura. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En esta tesis se presenta un estudio de la subestructura de jets que contienen hadrones b con el propósito de distinguir entre jets-b genuinos, donde el quark b se origina a nivel de elemento de matriz (por ejemplo, en decaimientos de top, W, o Higgs) y jets-b producidos en la lluvia partónica de QCD, por el desdoblamiento de un gluón en un quark y un antiquark b cercanos entre sí. La posibilidad de rechazar jets-b producidos por gluones es importante para reducir el fondo de QCD en análisis de física dentro del Modelo Estándar, y en la búsqueda de canales de nueva física que involucran quarks b en el estado final. A tal efecto, se diseñó una técnica de separación que explota las diferencias cinemáticas y topológicas entre ambos tipos de jets-b. Esta se basa en observables sensibles a la estructura interna de los jets, construídos a partir de trazas asociadas a éstos y combinados en un análisis de multivariable. En eventos simulados, el algoritmo rechaza 95% (50%) de jets con dos hadrones b mientras que retiene el 50% (90%) de los jets-b genuinos, aunque los valores exactos dependen de pT , el momento transverso del jet. El método desarrollado se aplica para medir la fracción de jets con dos hadrones b en función del pT del jet, con 4,7 fb¹ de datos de colisiones pp a √s= 7 TeV, recogidos por el experimento ATLAS en el Gran Colisionador de Hadrones en 2011.

Abstract:
This thesis presents a study of the substructure of jets containing bhadrons with the purpose of distinguishing between “single” b-jets, where the b-quark originates at the matrix-element level of a physical process (e.g. top, W or Higgs decay) and “merged” b-jets, produced in the parton shower QCD splitting of a gluon into a collimated b quark-antiquark pair. The ability to reject b-jets from gluon splitting is important to reduce the QCD background in Standard Model analyses and in new physics searches that rely on b-quarks in the final state. A separation technique has been designed that exploits the kinematic and topological differences between both kinds of b-jets using track-based jet shape and jet substructure variables combined in a multivariate likelihood analysis. In simulated events, the algorithm rejects 95% (50%) of merged b-jets while retaining 50% (90%) of the single b-jets, although the exact values depend on pT , the jet transverse momentum. The method developed is applied to measure the fraction of double b-hadron jets as a function of jet pT , using 4.7 fb‾¹ of pp collision data at √s = 7 TeV collected by the ATLAS experiment at the Large Hadron Collider in 2011.

"Identificación de la proteína quinasa dependiente de calcio isoforma 3 de Solanum tuberosum (StCDPK3): estudio genómico, transcripcional y bioquímico" (2011). Grandellis, Carolina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las CDPKs acoplan un sensor de calcio a un dominio quinasa y coordinan respuestas fisiológicas frente a estímulos. StCDPK3 codifica una CDPK funcional homóloga a isoformas de tomate y tabaco. Se amplificó el gen StCDPK3 (11366 pb), se generó y purificó la proteína recombinante y se determinaron sus parámetros cinéticos. Antagonistas de calmodulina disminuyen la actividad de 6xHisStCDPK3. La proteína recombinante se autofosforila y fosforila histonas. Se generó un anticuerpo policlonal que detecta a StCDPK3 en extractos particulados de hojas. StCDPK3 se expresa en respuesta a PGA y ABA, pero disminuye en respuesta a GA. Líneas transgénicas de fusión del promotor a GUS indican que es activo en hojas, raíces, ojos y brotes de minitubérculos y en estolones elongantes. La actividad GUS disminuye tras la elongación del estolón previo al inicio del crecimiento radial y aumenta en tubérculos tempranos. El factor de transcripción NtRSG es fosforilado por NtCDPK1. Se subclonó su homólogo en papa que es fosforilado in vitro por 6xHisStCDPK3. Además, StCDPK3 fosforila a StABF1. StCDPK3 podría participar en la transducción de señales asociada a procesos de crecimiento y elongación durante el desarrollo del tubérculo (modelo I), el desarrollo de raíces y brotes (modelo II) y como quinasa específica del FT StRSG (modelo III).

Abstract:
CDPKs couple calcium sensors to a kinase domain, and coordinate physiological responses to stimuli. StCDPK3 encodes an active CDPK homologous to tobacco and tomato isoforms. The gene was amplified (11366 bp), the recombinant protein was produced and kinetic parameters were evaluated. Calmodulin antagonists, CPZ and 48/80 reduce 6xHisStCDPK3 activity. The recombinant protein autophosphorylates and is able to phosphorylate histones. A policlonal antibody was produced that detected StCDPK3 in particulate extracts from leaves. StCDPK3 is induced in response to PGA and ABA, but is reduced after GA treatment. Transgenic lines carrying the StCDPK3promotor fused to GUS displayed GUS activity in leaves, roots, minitubers eyes, sprouts and in elongating stolons. When stolon elongation ceases before the onset of radial growth, GUS activity was downregulated to be later detected in early tubers. NtRSG is a transcription factor (TF) phosphorylated by NtCDPK1. The potato homologue, StRSG, was subcloned. In vitro, 6xHisStCDPK3 could phosphorylate NtRSG and StRSG, and an ABA transcription factor, StABF1, suggesting that these TFs could be endogenous targets of the kinase. StCDPK3 could play a role in elongation and proliferation events associated to tuber development (model I), root and sprout growth (model II) and as a specific kinase for StRSG (model III).

"Identificación de péptidos bloqueantes del sistema de secreción de tipo III y de la adherencia a epitelios de Escherichia coli enterohemorrágico (EHEC) y Escherichia coli enteropatógeno (EPEC)" (2010). Larzábal, Mariano. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Escherichia coli Enteropatógeno (EPEC) y Escherichia coli Enterohemorrágico (EHEC) se encuentran asociadas con diarrea en seres humanos. EPEC es una de las principales causas de diarrea infantil en países desarrollados, mientras que EHEC es responsable de enfermedades cuyo espectro clínico incluye diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH), que es la principal causa de insuficiencia renal aguda de niños menores de 5 años en la Argentina. La expresión de la toxina Shiga (Stx) codificada por bacteriófagos integrados al cromosoma de cepas EHEC, es considerada la responsable de la colitis hemorrágica y el SUH. El principal reservorio de EHEC es ganado bovino sano a pesar de que un número limitado de serotipos se han asociado con diarrea en terneros jóvenes, mientras que el reservorio de EPEC son los niños sintomáticos y asintomáticos. Ambos patotipos de E. coli, al igual que Citrobacter rodentium, poseen un isla de patogenicidad conocida como Locus of enterocyte effacement (LEE). El LEE codifica para el sistema de secreción de tipo III (SSTT), cuya función es traslocar proteínas efectoras a los enterocitos, provocando la subversión celular. Este resulta en la formación de lesiones características de attaching and effacement (A/E) en el epitelio intestinal, que consisten en la destrucción de las microvellosidades y la formación de pedestales de actina polimerizada por debajo del sitio de contacto entre la bacteria y la célula. El SSTT es una estructura compleja con más de 20 proteínas que forman un sistema de 'aguja y jeringa' que permite inyectar proteínas efectoras directamente en la célula hospedadora. El LEE contiene cinco grandes operones que han sido completamente secuenciados: LEE1, LEE2, LEE3, LEE4 y LEE5. EspA, EspB y EspD son algunas de las proteínas codificadas por el LEE4 que componen la parte del traslocon del SSTT. EspA, es la proteína mayoritaria, y sus polímeros forman filamentos huecos (estructura aguja), que están presentes de manera transitoria. EspB y EspD, se asocian al extremo del filamento y están involucrados en la formación de poros en las membranas de las células infectadas. El extremo proximal del filamento de EspA se apoya sobre el cuerpo basal formado por polímeros de la proteína EscF, que también se encuentra codificado en el LEE4. La proteína de membrana externa intimina, se encuentra codificada en el LEE5, y es responsable de la adherencia íntima de la bacteria al enterocito, así como también su propio receptor Tir, que es traslocado a través de la SSTT al citoplasma para luego anclarse en la membrana celular. Con el fin de utilizar a los factores de virulencia responsables de la lesión A/E como blancos de terapias de intervención, se determinó la inmunogenicidad y la antigenicidad de las proteínas del sistema de secreción de tipo III y la adhesina intimina empleando calostro de bovinos naturalmente infectados o colonizados. Los resultados demostraron que el calostro de bovinos no vacunados, proveniente de ganado lechero y cárnico de la región Pampeana de la Argentina, contiene una alta frecuencia de anticuerpos contra las proteínas intimina-γ C280, EspA y EspB. Por otro lado, también se obtuvieron sueros policlonales a partir de conejos inmunizados con proteína EspA, EspB y N-EspD recombinantes, demostrando la capacidad por parte de estas proteínas de inducir elevados títulos de respuesta inmune humoral en anticuerpos IgG. En este trabajo, se observó que tanto el calostro bovino como anticuerpos policlonales específicos contra proteínas del SSTT, inhibieron la acción mediada por SSTT de EPEC 2348/69 sobre los GRs de manera dependiente de la dosis, demostrando que compuestos dirigidos contra el SSTT pueden inhibir su funcionalidad. Estos efectos protectores han sido parcialmente atribuidos a la presencia de anticuerpos contra componentes del SSTT, ya que una reducción significativa en la actividad inhibitoria fue obtenida cuando el calostro o los sueros policlonales fueron depletados de IgG total. La inmunogenicidad, antigenicidad y exposición en superficie de varios de los componentes responsables de la lesión A/E, los convierte en potenciales candidatos para vacunas, y moléculas blanco para péptidos y otros compuestos. Por lo tanto, resulta atractiva la estrategia de utilizar a los factores de virulencia como blanco de terapias de intervención. Con el objetivo de impedir el desencadenamiento de la acción del SSTT por parte de EHEC y EPEC, se utilizó la técnica de phage display para disponer de péptidos de 12 aminoácidos seleccionados específicamente contra proteínas estructurales y efectoras del SSTT, como EspA y EspB, susceptibles de ser bloqueadas. Si bien, los péptidos obtenidos por phage display tuvieron una alta afinidad hacia las proteínas blanco, no consiguieron neutralizar la patogénesis de EPEC in vitro, indicando que no necesariamente la interacción entre péptidos y proteínas blanco afecta la funcionalidad del SSTT. Teniendo en cuenta estos resultados, se trató de reducir el rango de especificidad de péptidos hacia regiones altamente conservadas y funcionalmente importantes de proteínas estructurales del inyectosoma, como son las regiones coiled-coil que consisten en α-hélices hidrofóbicas con repeticiones de siete aminoácidos, que participan de las interacciones proteína-proteína especialmente en la formación de complejos de multímeros. En este estudio, se examinaron los péptidos sintéticos, diseñados para bloquear la formación del SSTT. Los péptidos CoilA y CoilB, representan la región coiled-coil del C-terminal de la proteína traslocadora EspA y el péptido CoilD, correspondiente a la región coiled–coil del extremo N-terminal de la proteína EscF, fueron efectivos en la inhibición de la hemólisis de glóbulos rojos dependiente del SSTT de EPEC E2348/69 y EHEC O157:H7. Los péptidos de CoilA y CoilB también redujeron la formación de pedestales de actina cuando fueron pre-incubados con las bacterias EPEC E2348/69 y afectaron la traslocación por medio del SSTT a las células epiteliales de la proteína efectora Tir. A su vez, CoilA y CoilB fueron capaces de bloquear el ensamble del filamento de EspA, evitando la polimerización in vitro de la proteína EspA recombinante y por microscopía electrónica se observó una reducción en la longitud de los filamentos de EspA. Esto sugiere que los péptidos coiled-coil pueden prevenir el montaje y por lo tanto la funcionalidad del TTSS. A su vez, ensayos de western blot demostraron que los péptidos también inhibieron la correcta secreción de las proteínas EspB y EspD en EPEC E2348/69 y EspD en C. rodentium. Estos resultados motivaron a desarrollar un ensayo de protección contra C. rodentium in vivo, como modelo de infección para bacterias que contienen LEE. El tratamiento vía oral de ratones con una combinación de péptidos CoilA y CoilB, previa y durante la infección con C. rodentium, previno de la lesión A/E colónica. Estos resultados demostraron que el tratamiento preventivo y post inoculación con los péptidos coiled-coil inhibe la formación del SSTT de C. rodentium in vivo, actuando con un efecto protector contra la formación de la lesión A/E en ratones. En conclusión, el diseño de moléculas que perjudiquen la asociación íntima de los patógenos a la mucosa intestinal probablemente tendrán un efecto importante en las estrategias disponibles contra microorganismos patógenos, y existe la posibilidad de que los inhibidores específicos contra un mecanismos de virulencia sean efectivos por un largo tiempo antes que la resistencia se convierte en un problema, ya que habría poca o ninguna presión selectiva al no afectar la viabilidad, reduciéndose así el desarrollo de resistencia a estos agentes antimicrobianos. La investigación orientada a la búsqueda de inhibidores contra distintos mecanismos de virulencia puede tener un alto potencial terapéutico y preventivo como en este caso, a la vez que puede servir como herramienta para dilucidar los sistemas regulatorios intrínsecos que modulan la virulencia EPEC y EHEC o de cualquier otra bacteria que posea un SSTT. Los péptidos coiled-coil son moléculas pequeñas, más fáciles de sintetizar que moléculas orgánicas complejas, y podrían ser parte de formulaciones nutracéuticas contra patógenos diarreagénicos. Por lo tanto, la interferencia en la formación y/o funcionalidad del SSTT podría evitar la manifestación de lesiones A/E, impedir la colonización del epitelio intestinal y en última instancia podrían prevenir la enfermedad. Incluso, reducir la carga bacteriana de animales próximos a ingresar a frigorífico o mantenidos en feed-lot, disminuyendo la posibilidad de contaminación de la carne.

Abstract:
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) are associated with diarrhea in humans. EPEC is one of the leading causes of childhood diarrhea in developed countries, while EHEC is responsible for the clinical spectrum disease include diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS), which is the main cause of acute renal failure in children under 5 years in the Argentina. The expression of Shiga toxin (Stx) encoded by bacteriophages integrated in the chromosome strains EHEC is considered responsible for hemorrhagic colitis and HUS. The main reservoir of EHEC is healthy cattle while a limited number of serotypes have been associated with diarrhea in young calves while EPEC reservoir is symptomatic and asymptomatic children. Both diarrheagenic E. coli, as well as Citrobacter rodentium, possess a pathogenicity island known as the locus of enterocyte effacement (LEE). The LEE encodes type III secretion system (TTSS) whose function is to translocate effector proteins to the enterocytes, causing cellular subversion. This results in the formation of characteristic attaching and effacement lesions (A/E) in the intestinal epithelium, which consist of the microvilli destruction and formation of actin polymerized than contact between bacteria and the cell site pedestals. The TTSS is a complex structure with more than 20 proteins that forms a system of 'needle and syringe' which allows injecting effector proteins directly into the host cell. The LEE contains five major operons which have been fully sequenced: LEE1 LEE2, LEE3 LEE4 and LEE5. EspA, EspB and EspD are some of the proteins encoded by the LEE4 comprising part of the TTSS translocon. EspA, is the major protein and its polymers are hollow filaments (needle structure), which are present on a transitional basis. EspB and EspD, are associated with the end of the filament and are involved in the formation of pores in the membranes of the infected cells.The proximal end of the EspA filament relies on basal body formed by the EscF polymers, protein that is also encoded in the LEE4. The outer membrane protein, Intimin, is encoded in the LEE5 and is responsible for intimate adhesion to the enterocytes as well as its own receptor Tir, which is translocated through TTSS into the cytoplasm to then anchor into the cell membrane. In order to use the virulence factors responsible for the A/E lesion as targets of intervention therapies, the immunogenicity and antigenicity of TTSS proteins and intimin using naturally infected or colonized bovine colostrum. The results showed that bovine colostrum from unvaccinated dairy and meat cattle from Argentina contains a high frequency of antibodies against intimin-γ C280, EspA and EspB proteins. On the other hand polyclonal IgG antibodie from in rabbits immunized with EspA, EspB and N-EspD recombinant proteins, demonstrating the ability of these proteins to induce a strong humoral immune response. In this work, it was observed that both bovine colostrum and specific polyclonal antibodies against proteins of the TTSS inhibited the lysis on the red blood cells (RBCs) mediated by TTSS of EPEC 2348/69, demonstrating that directing substances against the TTSS can inhibit its functionality. These protective effects have been partially attributed to the presence of antibodies against the TTSS components because a significant reduction in inhibitory activity was obtained when colostrum or polyclonal sera were IgG totally depleted. Immunogenicity, antigenicity and exhibition surface of various proteins responsible for the A/E lesion, demonstrated that they can be potential candidates for vaccines, and target molecules for peptides and other molecules. The strategy used to intervention therapies target virulence factors is therefore attractive. In order to prevent the triggering action from EHEC and EPEC TTSS, the technique of phage display was used to obtain peptides of 12 aminoacids selected specifically against structural and effector TTSS protein such as EspA and EspB, likely to be blocked. Although peptides obtained by phage display had a high affinity towards target proteins, did not neutralize the pathogenesis of EPEC in vitro, indicating that not necessarily interaction between peptides and target proteins affects the functionality of the TTSS. Given these results, the range of specificity of peptides was reduce to functionally important and highly conserved regions of the inyectosome-structural proteins such as coiled-coil regions, consisting of hydrophobic α- helices with repetitions of seven amino acids involved in protein-protein interactions especially in the formation of multimers complexes. This study examined the synthetic peptides, designed to block the formation of the TTSS. Peptides CoilA and CoilB, represent the coiled-coil region at the C-terminus of the protein EspA and the peptide CoilD, corresponding to the coiled-coil region of N-terminal EscF protein, were effective in RBCs hemolysis mediated by TTSS of EPEC E2348/69 and EHEC O157:H7. Peptides CoilA and CoilB also reduced formation of actin pedestals when they were pre-incubated with EPEC E2348/69 bacteria and affected translocation by the TTSS epithelial cells of the Tir effector. In turn, CoilA and CoilB were able to block the ensemble the filament of EspA, avoiding the polymerization in vitro of EspA recombinant protein. By electron microscopy a reduction in the length of the filaments of EspA was observed. This suggests the coiled-coil peptides can prevent the ensemble and thus the TTSS functionality. In turn, western blot assays showed that peptides also inhibited the correct secretion of EspB and EspD proteins from EPEC E2348/69 and EspD protein from C. rodentium. These results led to develop a test for protection against C. rodentium in vivo, as model of infection by bacteria containing LEE. Treatment by oral route of mice with a combination of peptides CoilA and CoilB prior and during the infection with C. rodentium, prevented colonic A/E lesion. These results showed that preventive treatment and post inoculation with the coiled-coil peptides inhibits the formation in vivo of TTSS from C. rodentium, acting with a protective effect against the formation of A/E lesion in mice. In conclusion, design molecules which harm the intimate association of pathogens to the intestinal mucosa probably will be an important effect on strategies available against pathogenic microorganisms. The specific inhibitors against virulence mechanism are effective for a long time before resistance becomes a problem, since there would be little or no selective pressure to affect the viability, thus reducing the development of resistance to antimicrobial agents. Research aimed at finding inhibitors against different mechanisms of virulence can have a high therapeutic and preventive potential as in this case. Also, it can used as a tool for elucidating the regulatory mechanisms that modulate the EPEC and EHEC virulence, and also for any other bacteria possessing a TTSS. Coiled-coil peptides are small molecules, easierad to synthesize than complex organic molecules, and could be part of nutraceutic formulations against diarrheagenic E. coli. Therefore, training and/or functionality of the TTSS interference could avoid A/E lesion manifestation, the colonization of the gut epithelium and ultimately could prevent the disease. Even could reduce the bacterial load of animals going to slaugtherhouse or at the feed-lot, decreasing the possibility of contamination of meat.

"Identificación y análisis de los genes asociados al metabolismo de polihidroxialcanoatos en Pseudomonas extremaustralis" (2013). Catone, Mariela Verónica. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los polihidroxialcanoatos (PHA) son polímeros de reserva bacterianos que poseen propiedades termoplásticas y son biodegradables. P. extremaustralis acumula polihidroxibutirato (PHB), formado por monómeros de longitud de cadena corta. Esta es una característica poco común en bacterias del género Pseudomonas, que normalmente acumulan PHA de longitud de cadena media (PHAmcl). Trabajos previos demostraron que los genes PHB se encuentran en una isla genómica. El objetivo de este trabajo consistió en la búsqueda y análisis de genes relacionados con la producción de distintos tipos de PHA en P. extremaustralis. También se realizaron análisis bioinformáticos del genoma de esta bacteria para identificar los genes involucrados en vías metabólicas centrales y los relacionados con la producción de alginato, de interés para comprender el metabolismo de compuestos carbonados que podrían estar relacionados con la producción de PHA. Se identificaron los genes de producción de PHAmcl, phaC1ZC2D y phaFI, además de los genes, phbFPX, asociados a la síntesis de PHB. Los análisis filogenéticos realizados permitieron inferir que estos genes poseen diverso origen. En base a estudios de complementación, de expresión génica y de proteómica de los gránulos del polímero se determinó la funcionalidad de las polimerasas de PHAmcl (PhaC1 y PhaC2) y se comprobó que la diferencia en la expresión de las 3 polimerasas, encontradas en el genoma de esta bacteria, podía explicar la alta producción de PHB en comparación con otros PHA. Los resultados en conjunto ponen de manifiesto la importante capacidad de adaptación al metabolismo de esta bacteria de genes probablemente adquiridos por transferencia horizontal, como los genes PHB. La capacidad de producción de PHA con distintas propiedades en P. extremaustralis resulta de interés biotecnológico dado que a través de manipulaciones genéticas sería posible lograr la producción de diferentes bioplásticos, utilizando la misma bacteria.

Abstract:
Polyhydroxyalkanoates (PHAs) are reserve bacterial polymers that possess thermoplastic properties and are biodegradable. P. extremaustralis accumulates polyhydroxybutyrate (PHB), a PHA composed by short chain length monomers. This is an unusual feature in bacteria of the genus Pseudomonas, which normally accumulate medium chain length PHAs (PHAmcl). Previous works demostrated that PHB genes are located in a genomic island. The aim of this work was the identification and analysis of genes involved in the production of different types of PHAs in P. extremaustralis. Bioinformatic analysis of the genome of P. extremaustralis were performed in order to identify genes involved in the central metabolic pathways and other associated with alginate production, interesting to understand the metabolism of carbon compounds that could be associated with PHA production. Genes coding PHAmcl production (phaC1ZC2D and phaFI) were identified, and other group of genes (phbFPX) associated with the synthesis of PHB. Phylogenetic analysis allowed to infer that these genes have different origins. Complementation studies, gene expression analysis and proteomics assays of polymer granules showed the functionality of PHAmcl polymerases (PhaC1 and PhaC2), the key enzymes for the PHAmcl production, and allowed to determine that the difference in the expression of the 3 polymerases found in the genome of this bacterium could explain the high production of PHB in comparison with other PHAs. The overall results show the high adaptability of genes probably acquired by horizontal transfer to the metabolism of this bacterium, as PHB genes. The capability of PHA production with different properties in P. extremaustralis has biotechnological interest due to genetic manipulation could allow the production of different bioplastics such as PHB and other PHAmcl, using the same bacterium.

"Identificación y análisis funcional de los factores que regulan la transcripción del gen de fibronectina humana" (1998). Alonso, Claudio Roberto. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El presente trabajo de tesis esta centrado en el estudio de la region promotora del gen de la fibronectina humana (FN). En primer lugar se han definido los roles funcionales in vitro e in vivo de los elementos FN-CRE y FN-CCAAT. Ambos enfoques coincidieron en definir a los factores CRE y CCAAT como moduladores positivos de la actividad transcripcional del gen FN. Mediante experimentos de inmuno-precipitacion y retardo en gel se identificaron las proteinas NF-I y CPI como los factores hepaticos que se unen al elemento FN-CCAAT. Posteriormente a traves de la implementacion de una nueva metodología que combina la inmunoprecipitación con el entrecruzamiento covalente por luz U.V. se detectó la interacciín física entre la proteína de union a CRE, ATF-2 y los factores CCAAT, CPI y NF-I. Debido a la importancia fisiológica de los cambios cuali y cuantitativos en la expresion de la fibronectina vinculados a procesos de fibrosis hepática, se caracterizaron los factores que se unen al elemento FN-CRE en diferentes tipos celulares hepaticos. Los resultados mostraron que los factores ATF-2 y ATF-3 ocupan el elemento solo en hepatocitos, mientras que otros factores, como la proteina FRA-2 ocupan el elemento CRE tanto en hepatocitos como en celulas endoteliales sinusoidales (SEC). Experimentos de transfección transitoria de cultivos primarios de hepatocitos y SEC, permitieron definir elementos enhancer y silencer dentro del promotor asi como la region necesaria para conferir inducibilidad al factor de crecimiento TGF-β. Estos resultados proveen las primeras evidencias de una ocupacion y funcionamiento diferenciales del promotor FN específicos de tipo celular hepático.

Abstract:
The present work was focused in the study of the promoter region of the human fibronectin gene (FN). First, we defined the in vitro and in vivo functional roles of the FN-CRE and FN-CCAAT elements. Both approaches have agreed to define the CRE and CCAAT factors as positive modulators of the transcriptional activity of the FN gene. Through immunoprecipitation and gel shift experiments the proteins NF-I and CPI were identified as the liver factors that bind the FN-CCAAT element. Thanks to the development of a new methodology that combines immunoprecipitation and UV crosslinking techniques, it was possible to define the physical interaction among the CRE protein ATF2 and the CCAAT factors NF-I and CPI. In virtue of the physiological relevance of the qualitative and quantitative changes in the FN expression associated with hepatic fibrosis, the factors that bind the FN-CRE element in different liver cell types were characterized. Results showed that factors ATP-2 and ATP-3 bind the element only in hepatocytes, while other factors, such as FRA-2 were present in both hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SEC). Transient transfection experiments carried out on primary cultures of hepatocytes and SEC, allowed to define enhancer and silencer elements within the promoter, as well as the minimal region needed to confer inducibility to the growth factor TGF-B.These results provide the first evidences of a differential occupation and function of the FN promoter specific of liver cell types.

"Identificación y análisis molecular de una cepa hipervirulenta de PVX, PVX MS y estudio de las modificaciones postraduccionales de la proteína de Capside de PVX" (1997). Tozzini, Alejandro Carlos. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Hasta el momento sólo una cepa de PVX capaz de replicar en genotipos portadores de algunos de los genes de resistencia extrema Rx ha sido descripta, esta el la cepa HB. En el presente trabajo describimos la identificación de una nueva cepa con características de hipervirulencia aislada en Argentina; esta cepa, PVX MS, es capaz de replicar en genotipos Rxacl. La detección inmunológica con anticuerpos monoclonales mostró que la cepa MS pertenece al serotipo PVX° (común o europeo) mientras que la cepa HB corresponde al serotipo PVXᴬ(andino). El análisis comparativo por western blotting de las proteínas de cápside (CP) de diferentes cepas mostró que PVX MS se distingue por su movilidad electroforética, lo cual fue confirmado por secuenciación nucleotídica. Debido a que la CP está involucrada en varios aspectos de la interacción virus-planta, incluída la virulencia, se estudió el gen de la CP de la cepa MS. Este gen no contiene los mismos determinantes de virulencia presentes en PVX HB. Estos resultados sugieren que otras regiones virales están también involucradas en la virulencia. El análisis del genoma completo de PVX MS, respecto de otras cepas, mostró que éste presenta tres regiones exclusivas localizadas en los ORFs 1, 2 y 3, candidatas a ser responsables de la hipervirulencia de PVX MS. Por otro lado, el estudio de la CP condujo a descubrir que esta proteína es una glicoproteína. El gen de la CP de todas las cepas de PVX codifica para una proteína de 25 kDa. El análisis de las CPs por SDS-PAGE muestra un peso molecular aparente de 27 a 30 kDa, dependiendo de la cepa, pero la identidad amino acídica entre algunas cepas es muy alta como para explicar las diferencias de movilidad entre ellas. La CP de seis cepas fueron analizadas mediante oxidación con periodato, tratamiento con ácido trifluometano-sulfónico, digestión con glicosidasas, reconocimiento por lectinas, tratamiento alcalino suave (β-eliminación) y por espetroscopía de masa de las regiones amíno y carboxi terminales, indicando la presencia de O-glicosilaciones en ambos extremos. Sin embargo, estas modificaciones post-traduccionales no parecen determinar diferencias de virulencia entre cepas de PVX.

Abstract:
Just one PVX strain, PVX HB, was described as being able to replicate bearing the extreme resistance genes Rx until now. Here we report a new resistance-breaking isolate in Argentina, PVX MS , that multiplies in genotypes carrying the Rxacl gene. Immunoblot detection with specific monoclonal antibodies showed that PVX MS belongs to the serotype PVX° (common or European strain), whereas PVX HB is included in the serotype PVXᴬ (Andean), which was confirmed by nucleotide sequencing. Western blotting of the coat proteins of different PVX strains showed that PVX MS differed in mobility in SDS-PAGE. Since the PVX coat protein (CP) is involved in many aspects of plant-virus interaction including the virulence, we studied the coat protein gene of PVX MS. This gene does not show the virulence determinants reported for PVX HB. These results suggest that other regions of the viral genome are also involved in virulence determination. The analysis of the complete PVX MS genome shows three regions located at ORFs l, 2 and 3 that are only found in this strain. These regions could be responsible of the PVX MS virulence. On the other side, the study of the coat protein leaded us to discover that this protein is a glycoprotein. The coat protein gene of all the strains of potato virus X codes for a protein of 25 kDa. Analysis of the CP by SDS-PAGE shows a migration mobility of 27 to 30 kDa, depending on the strain, but the amino acid identity is too high to explain such difference in the migration. The CP of six PVX strains were analysed by periodate oxidation, trifluoromethanesulfonic acid, digestion with glycosydases, recognition by lectins, mild alkaline treatment (β-elimination) and mass spectroscopy of the N- and C- terminal regions, indicating the presence of O-linked sugars in both ends. These post-transcriptional modifications seem to have no effect on PVX virulence.

"Identificación y caracterización de antígenos de Babesia bigemina" (2010). Petrigh, Romina Sandra. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los protozoarios intraeritrocitarios Babesia bovis y Babesia bigemina son los agentes causales de la babesiosis bovina, una enfermedad transmitida por la garrapata Rhipicephalus microplus que provoca importantes pérdidas económicas a la ganadería en áreas enzoóticas. En tal sentido resulta de gran relevancia la identificación de genes y la caracterización de proteínas para el desarrollo de pruebas diagnósticas de elevada sensibilidad y especificidad y el diseño racional de vacunas. En este trabajo, hemos desarrollado un método de detección molecular de B. bigemina, basado en la amplificación del gen rap-1a, útil para el estudio epidemiológico de la babesiosis bovina en áreas enzoóticas. La PCR en un solo paso, resultó altamente específica detectando 0,00002% de parasitemia. Por otra parte, para la identificación de nuevos antígenos de B. bigemina, se aplicaron dos estrategias: proteómica y herramientas de genómica comparativa. A través de la aproximación proteómica logramos extraer y separar en geles de dos dimensiones las proteínas solubles del estadio de merozoíto de B. bigemina que fueron reconocidas por sueros de bovinos infectados. A partir de las secuencias disponibles del proyecto genoma de B. bigemina y en base a la información proveniente de los genomas anotados de otros apicomplejos, pudimos identificar, anotar y caracterizar una familia de ocho genes que codifican para proteínas del tipo perforina (PLP) con el dominio de ataque a membrana MACPF en B. bigemina. Además se demostró que si bien todos los genes plp se transcriben en el estadio intraeritrocitario, particularmente los genes plpb y plpe presentan una tasa transcripcional significativamente mas alta indicando su importancia en este estadio. Asimismo, el reconocimiento de la proteína PLPA por los sueros bovinos infectados puede ser considerado como un indicio de la participación de esta proteína en la salida del parásito del eritrocito. Este trabajo de tesis contribuye al estudio de la babesiosis bovina a través del desarrollo de herramientas de diagnóstico y de la identificación de genes implicados en los mecanismos moleculares que median la interacción parásito-hospedador.

Abstract:
The intraerythrocytic Protozoan, Babesia bovis and Babesia bigemina, are causal agents of bovine babesiosis, a tick-borne disease trasmitted by Rhipicephalus microplus that cause important economic losses to livestock in areas where the disease is enzootic. In this regard is important the gene identification and protein characterization in order to develop highly sensitive and specific diagnostic methods and rational vaccines. In this work, we developed a molecular test, based on rap-1a gene amplification, for B. bigemina detection, a useful tool for epidemiological studies of babesiosis in enzootic areas. The one-step PCR assay was highly especific and sensitive detecting up to 0.00002% of parasitemia. Moreover, to identify relevant B. bigemina proteins to the development of methods of diagnosis and control of babesiosis, we applied two strategies: proteomic and comparative genomic tools. In the proteomic aproach we could purify and separate B. bigemina merozoites proteins using two dimensional gels and detecting immunodominant proteis using bovine sera. The bioinformatic tools applied to the available sequences of the B. bigemina genome project based on data from the annotated genomes of other apicomplexans, allowed us to identify, annotate and characterize a perforin-like proteins family (PLP) in B. bigemina containing a membrane-attack complex domain (MACPF). Transcriptional studies showed that while all plp genes are transcribed in the intraerythrocytic stage, particularly plpe and plpb genes have a significantly higher transcriptional rate, which may suggest its possible role in intraerythrocytic stage. Furthermore, PLPA recognition of bovine sera from animals infected can also be considered as an indication of the involvement of this protein in the exit of the parasite erythrocyte. This thesis work, contributes to the study of bovine babesiosis through the development of diagnostic tools and the identification of genes involved in the molecular mechanisms that mediate the parasite-host cell interaction.

"Identificación y caracterización de antígenos de Mycobacterium bovis" (1998). Bigi, Fabiana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Identificación y caracterización de enzimas involucradas en la regulación de los niveles de AMPc en Trypanosoma cruzi" (2003). D’Angelo, Maximiliano A.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se caracterizó la adenilil ciclasa TczAC. Se determinó que el gen que codifica para esta enzima se encuentra altamente conservado con los genes de adenilil ciclasas identificados en otros tripanosomátidos, es parte de una familia multigénica y se expresa en todos los estadios del ciclo de vida de T. cruzi. Se determinó que el producto de este gen es una enzima funcional capaz de complementar una cepa de levaduras carente de actividad adenilil ciclasa. Esta enzima es específica para AMPc, presenta una mayor actividad en presencia de Mn+2 que de Mg+2 y es inhibida por Zn+2 y el inhibidor del sitio P, 2'-deoxy-3'AMP. Por otro lado, el Ca+2 estimula la actividad de la misma manera independiente de calmodulina. Utilizando la técnica de doble híbrido en levaduras se demostró que TczAC dimeriza a través de su dominio catalítico y se identificaron 13 clones capaces de interaccionar específicamente con la misma. En particular se analizó la interacción de TczAC con el clon correspondiente a la proteína de flagelo paraflagellar rod. Asimismo, TczAC fire expresada en una cepa mutante de levaduras S. pombe. Los resultados obtenidos con estos experimentos sugieren que este sistema de expresión podría ser de gran utilidad para la búsqueda de inhibidores específicos. Por otra parte, se identificó y caracterizó el gen TczPDE que codifica para la primer fosfodiesterasa de AMPc de T. cruzi. Se determinó que este gen es parte de una familia multigénica y codifica para una proteína que presenta un posible péptido señal, dos dominios GAF de unión a GMPc y un dominio catalítico altamente conservado. La funcionalidad de esta proteína se confirmó por ensayos de complementación en levaduras carentes de actividad fosfodiesterasa. En dichas levaduras TczPDE se encontró asociada a la fracción particulada, mostró una alta afinidad por el AMPc y no fue capaz de hidrolizar GMPc. Por ensayos de Western blot se confirmó la asociación de TczPDE a la membrana de las levaduras y se observó que esta se encuentra fuertemente asociada a la misma. La localización subcelular de TczPDE en T. cruzi se estudió por fraccionamiento subcelular e inmunolocalización. Estos experimentos demostraron que TczPDE se encuentra localizada en la membrana plasmática del parásito y concentrada en el flagelo.

Abstract:
In this work we have characterized TczAC adenylyl cyclase. The gene encodes an enzyme which is highly conserved with the adenylyl cyclase genes identified in other trypanosomatids, is part of a multigene family and is expressed in all the stages of T. cruzi life cycle. The product of this gene is a functional enzyme that can complement a yeast strain deficient in adenylyl cyclase activity. The enzyme is specific for cAMP, has a higher activity in the presence of Mn+2 instead of Mg 2+, and is inhibited by Zn+2 and the P-site inhibitor, 2'-deoxy-3 'AMP. On the other hand, Ca+2 stimulates its activity in a calmodulin independent manner. Using the yeast two-hybrid technique it was demonstrated that TczAC dimerizes through its catalytic domains, and 13 clones that interact with this protein were identified. In particular, the interaction of TczAC with the flagellar protein paraflagellar rod was analyzed. Besides, TczAC was expressed in a S. pombe mutant strain. The results obtain in these experiments suggest that this expression system could be useful for the identification of specific inhibitors. Apart from that, the gene TczPDE that codes for the first cAMP phosphodiesterase of T. cruzi was identified and characterized. It was found that this gene is part of a mutligene family and encodes a protein that presents a putative signal peptide, two GAF domains for cGMP binding and a highly conserved catalytic domain. The functionality of this protein was confirmed by complementation assays in yeasts lacking phosphodiesterase activity. In these yeasts TczPDE was found to be associated to the particulate fraction, showed a high affinity for CAMP and was not able to hydrolyze cGMP. By Western blot analysis, the association of TczPDE to the yeast membrane was confirmed, and it was observed that this enzyme is strongly associated to it. The subcellular localization of TczPDE in T. cruzi was studied by subcellular fractionation and immunolocalization. These experiments demonstrated that TczPDE is localized in the plasma membrane of the parasite and concentrated in the flagellum.

"Identificación y caracterización de eventos de splicing alternativo en Arabidopsis thaliana utilizando herramientas de transcriptómica de alto rendimiento" (2016-12-27). Mancini, Estefanía. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El mecanismo de splicing alternativo es un mecanismo de regulación post-transcipcional presente en los organismos eucariotas que amplía las capacidades regulatorias y funcionales de los genes mediante la generación de múltiples isoformas. Las consecuencias de este proceso son proteínas funcional y estructuralmente diferentes como así también productos no traducibles con funciones regulatorias en sí mismos. El advenimiento de las nuevas tecnologías de secuenciación masiva, incluyendo las que se utilizan para ARN (RNA-Seq) permiten estudiar cambios transcripcionales incluyendo splicing alternativo de una manera inusitada. Sin embargo, la descripción de los cambios en los patrones de splicing bajo diferentes condiciones no es trivial y ha dado lugar durante los últimos años al desarrollo de múltiples herramientas bioinformáticas. En este trabajo de tesis, se describe ASpli, un paquete de R integrativo y fácil de usar que facilita el análisis de los cambios en el splicing alternativo tanto en eventos anotados como nuevos a partir de datos de RNA-Seq. Nuestra propuesta es combinar la información estadística del uso diferencial de exones, intrones y junturas junto con las métricas de inclusión (PSI) y retención de intrón (PIR) que se obtienen por el análisis de las junturas sobre cada región genómica en estudio. La utilización de este abordaje integral intenta cuantificar de manera más exacta la ocurrencia de eventos de splicing alternativo. El desarrollo del paquete fue fundamental para el análisis de la remodelación del transcriptoma ante numerosos tratamientos en la planta modelo Arabidopsis thaliana así como en otros organismos. Como parte de los resultados, se describen los análisis del efecto de un pulso de luz en plantas y sus consecuencias globales en la regulación del splicing alternativo.

Abstract:
Alternative splicing (AS) is a common mechanism of post-transcriptional gene regulation in eukaryotic organisms that expands the functional and regulatory diversity of a single gene by ge- nerating multiple mRNA isoforms that encode structurally and functionally distinct proteins. The development of novel high-throughput sequencing methods for RNA (RNA-Seq) has provided a powerful means of studying AS under multiple conditions and in a genome-wide manner. Despite the fact that a plethora of bioinformatic tools have been developed in the last few years, using RNA-Seq to study changes in AS under different experimental conditions is not trivial. In this thesis, we describe ASpli, an integrative and user-friendly R package that facilitates the analysis of changes in both annotated and novel AS events. Our method combines statistical information from exon, intron, and splice junction differential usage, with information from splice junction reads to calculate differences in the percentage of exon inclusion (PSI) and intron retention (PIR), which reliably reflect the magnitude of changes in the relative abundance of different annotated and novel AS events. This approach is intended to improve the analysis of RNA-Seq data for the quantification and discovery of AS events. The package has been intensively used for the analysis of alternative splicing in a genome-wide manner in Arabidopsis thaliana as well as other organisms. As part of the results, we present the analysis of the accute effects of light on alternative splicing in light-grown plants.

"Identificación y caracterización de genes con variación natural para el tiempo de desarrollo a partir de mutantes heterocrónicos de Drosophila" (2009). Mensch, Julián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Comprender la arquitectura genética de caracteres ecológicamente relevantes requiere la contribución tanto de la biología evolutiva como de la biología del desarrollo. El tiempo requerido para alcanzar la edad reproductiva es un carácter adaptativo conocido como tiempo de desarrollo. El impacto del tiempo de desarrollo sobre el fitness particularmente en los insectos holometábolos que explotan habitats efímeros, como las moscas de la fruta, es aún más drástico. El presente trabajo es uno de los primeros estudios sistemáticos sobre la arquitectura genética del tiempo de desarrollo, en el cual además evaluamos el impacto de la variación ambiental en la expresión de este carácter. Analizamos 179 líneas mutantes artificiales generados por inserciones de elementos móviles P en Drosophila melanogaster, con el objetivo de identificar genes candidatos que afecten el tiempo de desarrollo en moscas criadas a 25ªC. El sesenta por ciento de las líneas mostró un fenotipo heterocrónico, lo que sugiere que una gran cantidad de genes afectan al carácter. Los mutantes Merlin y Karl mostraron los fenotipos más extremos del estudio, exhibiendo una reducción y un aumento de 2 y 4 días en relación al control, respectivamente. Además, a partir de una submuestra de 42 líneas seleccionadas al azar de las 179 iniciales, se cuantificó el tiempo de desarrollo a 17ºC. Interesantemente, la interacción gen-ambiente contribuyó con el 52% de la varianza fenotípica total. De esta manera, se encontraron un gran número de genes candidatos con normas de reacción plásticas. En la siguiente etapa del proyecto encontramos gran variación genética natural para el tiempo de desarrollo asociada al cromosoma II en respuesta a gradientes altitudinales. A partir de estos resultados realizamos ensayos de complementación genética para varios mutantes heterocrónicos plásticos para la temperatura, con el objetivo final de identificar genes con variación natural para el carácter. De esta manera, pudimos determinar que una importante fracción de la variación natural está asociada a la variación a nivel de las secuencias de invected, mastermind, criclket y CG14591. En conclusión, nuestros resultados enfatizan la necesidad de tomar en cuenta el efecto que las vías de señalización metabólicas ejercen sobre la arquitectura genética de este complejo carácter de historia de vida.

Abstract:
Understanding the genetic architecture of ecologically relevant adaptive traits requires the contribution of developmental and evolutionary biology. The time to reach the age of reproduction is a complex life history trait commonly known as developmental time. In particular, in holometabolous insects that occupy ephemeral habitats, like fruit flies, the impact of developmental time on fitness is further exaggerated. The present work is one of the first systematic studies of the genetic architecture of developmental time, in which we also evaluate the impact of environmental variation on the expression of the trait. We analyzed 179 co-isogenic single P-element insertion lines of Drosophila melanogaster to identify novel genes affecting developmental time in flies reared at 25ºC. Sixty percent of the lines showed a heterochronic phenotype, suggesting that a large number of genes affect this trait. Mutant lines for the genes Merlin and Karl showed the most extremes phenotypes exhibiting a developmental time reduction and increase, respectively, of over 2 days and 4 days relative to the control. In addition, a subset of 42 lines selected at random from the initial set of 179 lines was screened at 17ºC. Interestingly, the gene-byenvironment interaction accounted for 52% of total phenotypic variance. Plastic reaction norms were found for a large number of developmental time candidate genes. In the next part of the project we found an altitudinal clinal variation for second chromosome natural substitution lines. As a consequence, we performed genetic complementation tests for a number of heterochronic temperatureplastic mutants to identify genes with natural variation. We were able to establish that an important fraction of the genetic natural variation is attributed to invected, mastermind, criclket and CG14591. Taken together, our results stress the need to take into account the effect of metabolic signaling pathways on the genetic architecture of this complex life-history trait.

"Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección" (2001). García, Gabriela Andrea. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las drogas utilizadas para el tratamiento de la infección por T. cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, presentan múltiples efectos colaterales y una eficacia variable en las etapas indeterminada y crónica de la infección. Por otro lado, no existe una vacuna para esta parasitosis que impida la transmisión y/o la enfermedad. Teniendo en cuenta la necesidad de la obtención de buenos inmunógenos y nuevas drogas tripanocidas más efectivas y seguras, el objetivo del Trabajo de Tesis fue definir nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de la infección por T. cruzi a partir de la identificación de proteínas en este parásito relacionadas con glutatión-S-transferasas (GSTs)de otros organismos. la selección de las GSTs para dirigir esta búsqueda se basó en la participación de esta enzima, cuyos genes aun no fueron identificados en T. cruzi, en un metabolismo divergente entre el parásito y su hospedero mamífero y en una respuesta inmune protectiva contra la infección experimental por este parásito. En la primera parte del trabajo, que se denominó Parte A, se planteó la identificación de secuencias de genes funcionales resultantes del Proyecto Genoma de T. cruzi con homología con GSTs y su posterior caracterización a fin de determinar si su producto puede postularse como posible blanco de quimioterapia. Como resultado de esta búsqueda se identificó un nuevo gen de copia única, denominado TCGRX,cuyo producto presentó el patrón aminoacídico completo de glutarredoxinas (ers) y similitud con ers y GSl‘sde diversos organismos pero no con enzimas de mamíferos. El modelado molecular de una porción de la TCGRX sobre la Grx 3 de Escherichia coli sugiere que esta proteína tendría la estructura típica de ambas familias. En la segunda parte del trabajo, (Parte B),teniendo en cuenta la existencia en T. cruzi de antígenos de reactividad cruzada con la GST de 26 kDa de Schistosoma japonicum (GSTsj) y que las GSTs son enzimas muy conservadas en su estructura tridimensional se planteó la identificación de estos antígenos utilizando como herramienta un suero anti-GSTsj y su posterior caracterización y evaluación en protocolos de inmunoprotección. Por cromatografía de inmunoafinidad con el suero anti-GSTsj se purificó una fracción a partir de epimatlgotes de T. cruzi, denominada PHGST, que presentó actividad de GST.Por otro lado, el rastreo de una biblioteca genómica de T. cruzi con este antisuero dio como resultado la selección de 38 clones que codificaron para antígenos de la familia Tc13 de la superfamilia de antígenos de superficie de tripomastigotes. la identificación de un miembro de esta familia en la cepa Tulahuén del parásito, denominado PHGST#5, permitió su comparación con los ya conocidos en cuanto a su estructura aminoacídica. Mediante la hibridación de cromosomas separados y transferidos a membranas, se determinó que los genes Tc13 se localizan principalmente en el cromosoma III y su homólogo. Las funciones inmunomoduladoras descriptas para ciertas proteínas de la superfamilia de antígenos de superficie y su participación en el desarrollo de una respuesta inmune protectiva, sustentó la evaluación del antígeno PHGST#5 en experimentos de inmunoprotección en ratones de la cepa BALB/c. La inmunización plasmídica con PHGSTT#5 no indujo una respuesta humoral específica y la respuesta celular, evaluada por efecto de hipersensibilidad retardada (DTH) frente a la inoculación con el antígeno recombinante, fue muy leve; mientras que, la inmunización con la proteína recombinante MBP-PHGST#5 indujo tanto una respuesta humoral como celular, evaluada por DTH. La inmunización plasmídica de PHGST#5, así como la inmunización con MPB-PHGST#5 produjeron una disminución significativa de la parasitemia luego del desafío con formas infectantes del parásito. La inmunización plasmídica con PHGST#5,además disminuyó el daño y el parasitismo tisular luego del desafío. Por lo tanto, la selección de las GSTs para dirigir la definición de nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de la infección por T. cruzi permitió identificar el gen TCGRX,cuyo producto por no poseer contraparte en el mamífero, luego de la caracterización bioquímica podría postularse como posible blanco para el diseño de drogas tripanocidas e identificar el antígeno PHGST#5, un nuevo miembro de la familia Tc13 con posibles epitopes compartidos con la GSTsj, y definir su efecto inmunoprotector tanto de la infección y como de la patología chagásica.

Abstract:
Trypanosoma cruzi is the ethiological agent of Chagas’disease. Drugs that have been utilized so far in the treatment of T. cruzi infection have shown colateral effects. No vaccine does exist against this parasitosis. The objective of this thesis has been to define new possible targets for the control of the transmission of T. cruzi infection by means of the identification of parasite proteins related to Glutathion-S-Trasferases (GST)of other organisms. The selection of the GSTs to direct this screening was based on the participation of this enzyme in a divergent metabolism between the parasite and the mammal host and in a protective immune response against the experimental infection with the parasite. These genes have not been identified in T.cruzi yet. The identification of functional T. cruzi gene sequences which showed GST homology resulted from the T. cruzi Genome Project and allowed to identify a unique (single) gene copy TcGRX.The product of this gene showed homology to glutaredoxin (ers) and GSTs from different organisms, but no homology was found to enzymes from mammals. This characteristics support biochemical studies of TcGRX with the purpose of postulating a new possible target for the design of trypanocidal drugs. The utilization of an anti-GST of Schistosoma japonicum serum as a tool for the identification of cross reacting antigens in T. cruzi allowed the purification of an epimastigote fraction, which showed GST activity. The purification of this fraction was performed by immunoaffinity chromatography. The a-GSTsj serum was used to screen a T. cruzi genomic library and allowed the finding of a new member of the Tc13 family. This family belongs to the denominated PHGST#5 superfamily of trypomastigote surface antigens. This antigen showed an immunoprotective effect against the infection as well as the chagasic pathology, and was evaluated by means of both plasmid and recombinant protein immunization.

"Identificación y caracterización de quinasas y fosfatasas de proteínas inducidas durante la tuberización de Solanum tuberosum" (2003). Raíces, Marcela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se estudiaron genes posiblemente involucrados en los procesos de señalización relacionados con la tuberización. Se identificaron los genes StCDPK1, StCDPK2 y StCDPK3, que son los primeros miembros de la familia CDPK de Solanum tuberosum. En particular se caracterizó el gen StCDPK1 que codifica para una quinasa activa con todas las propiedades de las CDPKs. Se demostró que StCDPK1 se miristoíla in vitro y que su localización subcelular depende de miristoilación y palmitoilación. Por otra parte se determinó que existe una fuerte correlación entre la expresión de StCDPK1 y el engrosamiento del estolón. Mediante ensayos de hibridación in situ se observó que StCDPK1 se expresa en el ápice de estolones inducidos a tuberizar. También se determinó que StCDPK3 se expresa diferencialmente en estolones tempranos. En ensayos de Western blot se identificaron dos CDPKs, de 55 y 60 kDa, cuya expresión correlaciona con la expresión de los genes StCDPK3 y StCDPK1 respectivamente. Se determinó que la actividad CDPK asociada a estolones tempranos y la actividad CDPK asociada a estolones inducidos poseen diferente especificidad de sustrato y distinta localización subcelular. Por otra parte se estudió el efecto de la sacarosa sobre la tuberización y sobre la expresión de StCDPK1. Se determinó la importancia de las actividades quinasa durante la inducción de la tuberización inducida por sacarosa y se demostró que este azúcar induce la expresión de StCDPK1 mediante un mecanismo que involucra la actividad de fosfatasas de la familia PP1/PP2A. Además, se identificó el gen StPP2A1c que codifica para la primer fosfatasa de la familia PP2A de Solanum tuberosum. Se determinó que el gen StPP2A1c se expresa diferencialmente durante la tuberización y, mediante ensayos de complementación en levaduras, se demostró que este gen codifica para una fosfatasa funcional.

Abstract:
In this work we studied genes which are possiby involved in the signalling events leading to tuber development. The first members of Solanum tuberosum CDPK family, StCDPK1, StCDPK2 y StCDPK3, were identified. The gene StCDPK1, which encodes an active kinase with all the features of CDPKs, was characterized. It was demonstrated that StCDPK1 suffers myristoylation in vitro and that its subcellular localization depends on myristoylation and palmitoylation. On the other hand, a strong correlation between StCDPK1 expression and stolon swelling was established. Using in situ hybridization we observed that StCDPK1 is expressed in the apical dome of tuberizing stolons. Moreover, StCDPK3 is differentially expressed in early stolons. By Western blot assays, two CDPKs of 55 y 60 kDa which correlated with the expression of StCDPK3 y StCDPK1 respectively, were detected. The CDPK activity associated to early and induced stolons showed different substrate specificity and subcellular localization. The effect of sucrose on tuberization and StCDPK1 expression was also analyzed. The importance of protein kinase activities during sucrose-induced tuber development was established and the induction of StCDPK1 by sucrose, through a mechanism that involves PP1/PP2A phosphatase activities,was demonstrated. Besides, we identified StPP2A1c, a gene that encodes the first phosphatase of the PP2A family in Solanum tuberosum. StPP2A1c was differentially expressed during tuberization and encoded a functional phosphatase, as was observed in yeast complementation assays.

"Identificación y caracterización de un sistema de secreción de proteínas tipo I en Agrobacterium tumefaciens" (2010-12-22). Haurigot, Lorena Cristina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Los Sistemas de Secreción de Proteínas tipo I (T1SS) permiten a una amplia variedad de bacterias Gram-negativas secretar proteínas al medio extracelular; estos sistemas participan en varias respuestas fisiológicas como la adaptación al medio ambiente y contribuyen a la virulencia en diversos patógenos. Los T1SS están formados por un componente de membrana interna (ABC) un componente de fusión de membrana (MFP) y un componente de membrana externa (OMF). Los genes de los dos primeros (e inclusive el OMP) suelen estar formando un operón y pueden estar adyacentes a los genes que codifican sus proteínas sustrato. En la bacteria simbionte Rhizobium leguminosarum, el T1SS, PrsDE, es responsable de la secreción de diversas proteínas que participan en la supervivencia del rizobio en el suelo, favoreciendo la formación de estructuras comunitarias denominadas biofilms. A. tumefaciens es un fitopatógeno de alto interés agronómico y biotecnológico. A pesar de la relevancia que los TISS muestran tener en diversas bacterias Gram negativas, hasta la fecha no se ha avanzado en el estudio y la relevancia fisiológica de estos sistemas de secreción en este fitopatógeno. En este trabajo, se aisló a partir de una biblioteca genómica proveniente de A. tumefaciens el cósmido pIJ7760 que fue capaz complementar el fenotipo de secreción de cepas mutantes en el sistema PrsDE de R. leguminosarum. Se determinó que dicho cósmido alberga los genes de un sistema homólogo al que se denominó AspD-AspE, Agrobacterium secretion protein D and E) formado por un componente ABC (dominio de unión a ATP) y otro MFP (proteína de fusión de membranas), respectivamente. Este sistema fue responsable de la secreción de una proteína, a la que se denominó Hla, de función desconocida codificada rio arriba de aspDE. El análisis de las secuencias del cósmido permitió identificar, río arriba de hla, genes cuyo productos presentan alta similitud de secuencia aminoacídica con receptores de hemo (denominado hlaR) y a factores sigma y anti sigma (denominados hlaS y hlaI). Las zonas promotoras de ambos loci presentaron secuencias consenso de reconocimiento del regulador RirA que responde a la concentración de hierro extracelular. Rio arriba de estos genes se identificó un probable sistema ABC de captación de hemo (denominado ahuUVTB) que presenta en su región promotora secuencias de reconocimiento de RirA y del regulador del metabolismo del hemo IrrA. El análisis de las proteínas presentes en el medio extracelular en diversas condiciones de cultivo y nutricionales permitió reflejar un complejo control y una regulación diferencial de la secreción de la proteína Hla en el hospedador sustituto R. leguminosarum A34 y A. tumefaciens C58. Se observó una muy elevada secreción de Hla en el hospedador sustituto R. leguminosarum A34 en medios ricos de cultivo. Se determinó que esta desregulación se debe a que la cepa de A34 contiene una mutación ancestral en algún regulador desconocido hasta la fecha que provoca un fenotipo pleiotrópico. Este regulador es codificado en el plásmido simbiótico pRL1JI y regula, la secreción de Hla. El estudio de la regulación en el pariente heterólogo R. leguminosarum mostró que la secreción de Hla también se ve reprimida por los reguladores globales de respuesta a hierro descriptos en Rhizobiaceae, RirA e IrrA. Por otro lado, el agregado de hemoglobina como fuente de hemo extracelular, indujo la secreción de Hla como proteína mayoritaria en el contexto heterólogo de Rhizobium. El análisis del contexto genético de hla mostró que este gen está incluido en un locus sinténico a otros clusters de genes involucrados en la captación de hemo a través de hemóforos, aunque Hla no presenta similitud de secuencia aminoacídica con hemóforos caracterizados. Sin embargo, la purificación por columna de afinidad de hemina mostró que Hla presenta capacidad de unir hemina y sería el primer hemóforo descripto en la familia Rhizobiaceae. Mediante mutagénesis dirigida se generó una mutante de secreción en aspD de A. tumefaciens C58. Los fenotipos asociados a esta mutante mostraron un carácter pleiotrópico, tanto la autoagregación bacteriana, la adhesión a soporte abiótico y la motilidad en agar se vieron afectadas. En A. tumefaciens la secreción de Hla respondió principalmente a condiciones microóxicas/anóxicas, además de a la ausencia de hierro y presencia de hemo. Interesantemente, la mutante deficiente en la secreción de Hla fue incapaz de inducir la formación de tumores en Kalanchoe sp. En conjunto, los resultados presentados en este trabajo sugieren que el T1SS AspDE, participaría en la captación de hemo extracelular a través de la secreción de un nuevo hemóforo (Hla) probablemente en condiciones microaerófilas y de bajo hierro presentes en el contexto del tumor.

Abstract:
Type I secretion systems (TISSs) enable a wide spectrum of Gram-negative bacteria to deliver proteins to the extracellular medium. This secretion machinery has been shown to be involved in several physiological responses such as adaptation to the environment and virulence. T1SS are composed by an inner membrane component (ABC), a membrane fusion component (MFP) and an outer membrane component (OMP). ABC and MFP are ussually encoded as an operon and they can even be located in adjacency to some of their substrate proteins. The PrsDE System of the related symbiont R. leguminosarum is responsible for the secretion of several proteins that participate in the survival behaviour of rhizobia in the soil by the establishment of structured communities known as biofilms. A. tumefaciens is an important agroeconomical and biotechnological phytopathogen. Despite the physiological relevance of the subject, previous observations suggested the presence of T1SS in A.tumefaciens since C58 strain genome sequences are available (2001), however there have been no advances in the characterization or functional studies of the secretion system in this phytopathogen. In this work, heterologous functional complementation assay has been carried out using an A. tumefaciens genomic library to revert PrsDE mutant strains of R. leguminosarum A34. This strategy allowed us to isolate an A. tumefaciens cosmid, pIJ7760 encoding a T1SS, namely AspDE (Agrobacterium secretion protein D and E). aspD and aspE genes encoded the ABC (ATP binding domain) and MFP (membrane fusion protein) components of the secretion system respectively. Hla, a conserved unknown protein located upstream in the cosmid, was identified as a substrate of AspDE system. The genetic analysis of the surrounding region revealed a putative heme receptor (HlaR) and an ECF sigma and antisigma factor (HlaSI) encoded upstream of Hla. These genes have a RirA (global iron regulation) consensus sequence in their promoter region. Another putative ABC uptake system (AhuUVTB) was identified in pIJ7760 with recognition sequence for RirA and IrrA (heme response regulator). Extracellular protein analysis from different cultured conditions shown that complex and differential control of the secretion of Hla occurs between R. leguminosarum A34 and A. tumefaciens C58 strains. An elevated Hla secretion was observed in rich medium in the R. leguminosarum A34 heterologous host. This miss regulation was found to be in response to a so far unknown mutation which triggers pleiotropic phenotypes. This regulator is encoded in the pRL1JI symbiotic plasmid and appears to regulate Hla secretion. The modulation of Hla secretion was studied using the related strain R. leguminosarum, and revealed that the secretion of the protein is also controlled by the two global regulators previously described in Rhizobiaceae, RirA and IrrA. Additionally, adding hemoglobin as an extracellular heme source induces the secretion of Hla as the major protein in the R. leguminosarum heterologous context. Despite the fact that Hla shows no homology with previously characterized hemophores, the gene is included in a region with remarkable homology to a locus involved in heme uptake through hemophores. Hla was purified from extracellular medium cultures using hemin affinity column suggesting novel hemophore in Rhizobiaceae family. Using directed mutagenesis, an aspD secretion mutant was generated in A. tumefaciens C58 strain. Phenotypic characterization revealed that the mutation has a pleiotropic phenotype affecting the bacterial aggregation, adhesion to an abiotic surface and agar-motility. Studies on A. tumefaciens showed that apart from responding to iron starvation and addition of heme to the medium, Hla secretion mainly responds to microoxic/anoxic conditions. Interestingly, aspD mutant, unable of Hla secretion was avirulet, as shown by incapability of tumor induction in Kalanchoe sp. plants. Taking together, these results suggest that the AspDE Type I Secretion System characterized in this work could be involved in heme uptake through the secretion of a novel hemophore (Hla) probably in the low iron and microaerobiosis present in the tumor.

"Identificación y caracterización funcional de genes candidatos asociados a la senescencia foliar en girasol basado en perfiles transcripcionales y metabólicos" (2014). Moschen, Sebastián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El proceso de senescencia en plantas es un mecanismo complejo controlado por múltiples variables genéticas y ambientales que condicionan el rendimiento de los cultivos. En el caso del girasol, el segundo cultivo oleaginoso en importancia económica para nuestro país, se trata de un proceso con impacto económico que interviene en la brecha existente entre el rendimiento potencial y el rendimiento real observado, por la mayor o menor oportunidad de las plantas para mantener el sistema fotosintético activo durante periodos prolongados. Los parámetros visuales resultan tardíos para evaluar el desencadenamiento y posterior tasa de evolución de la senescencia foliar. La clorosis, la variación en el contenido de clorofila así como también la necrosis de las hojas, son detectables mucho tiempo después que la señal iniciadora de la senescencia ha sido activada. Este trabajo tuvo como objetivo general el estudio del proceso de senescencia en girasol a través de distintos niveles de organización: ecofisiológico, metabolómico, transcriptómico, culminando con la integración de los diversos enfoques ómicos mediante una aproximación de biología de sistemas, con el objetivo final de identificar potenciales biomarcadores asociados al proceso de senescencia en girasol. Se condujeron distintos ensayos que fueron realizados tanto a campo, en la Estación Experimental INTA-Balcarce como en invernáculo, en el Instituto de Biotecnología INTA Castelar, para evaluar el progreso del proceso de senescencia tanto en condiciones naturales como controladas. Asimismo se evaluó la respuesta frente a condiciones de restricción hídrica impuesta en distintas etapas del desarrollo de las plantas. Se realizaron evaluaciones ecofisiológicas relacionadas con el avance de la senescencia, a través de la medición de variables como contenido de clorofila, azúcares solubles y nitrógeno total de hojas, mediciones a campo de área foliar verde, SPAD, intercepción de la radiación y materia seca por órganos, mediante las cuales fue posible evaluar la evolución del proceso en las diferentes hojas, en condiciones naturales de cultivo. Adicionalmente, se llevó adelante un análisis de los perfiles metabólicos utilizando técnicas de cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa (GC-MS) que permitió la optimización del protocolo de la extracción de metabolitos de hojas de girasol, y la detección de aproximadamente 60 metabolitos primarios incluyendo distintos aminoácidos, ácidos orgánicos, azúcares y azucares alcohol. Asimismo se optimizó la tecnología de cromatografía iónica, mediante la cual se cuantificaron diferentes nutrientes iónicos relevantes durante el proceso de senescencia tales como nitratos, sulfatos, fosfatos entre otros. En forma paralela se llevó a cabo un estudio a nivel transcriptómico considerando tanto estrategias de genes candidato, mediante la búsqueda de secuencias putativamente ortólogas a girasol asociadas a senescencia en especies modelo, como el análisis concertado de expresión génica utilizando una micromatriz de oligonucleótidos desarrollada para esta especie. A partir del análisis estadístico de los datos obtenidos con la micromatriz, se realizó un análisis de enriquecimiento funcional sobre el total de los unigenes que mostraron un comportamiento diferencial y significativo para las distintas condiciones evaluadas, utilizando la metodología de Gene Set Analysis basado en modelos de regresión logística. De este modo se identificaron las diferentes categorías funcionales asociadas a bloques de genes con un patrón de expresión similar. La búsqueda de genes candidato se profundizó con la consulta de bases de datos de genes asociados a senescencia (SAGs del inglés: Senescence Associated Genes), así como también sobre aquellos genes con dominios de factores de transcripción como posibles desencadenantes de las cascadas de señalización de este proceso. Por último, se realizó la integración de los datos obtenidos a partir de distintas estrategias (fisiológicas, metabolómicas y transcriptómicas) utilizando una aproximación basada en biología de sistemas con el objetivo de identificar biomarcadores asociados a la senescencia en girasol. Para este fin se usaron los programas Paintomics 2.0 (http://www.paintomics.org) (García-Alcalde y col 2011) y Mapman (http://mapman.gabipd.org/) (Thimm y col 2004) que fueron adaptados para su uso con datos provenientes de esta especie. Los resultados obtenidos a partir de la integración de datos mostraron una correspondencia entre los cambios detectados a través de los diferentes niveles analizados. A partir de una visión general del metabolismo celular se pudo observar una disminución de la actividad fotosintética y el crecimiento celular, y un incremento en el metabolismo de sacarosa, ácidos grasos, nucleótidos y aminoácidos así como también en aquellos procesos relacionados al reciclado de nutrientes. En particular, los factores de transcripción con dominios NAC, AP2- EREBP y MYB mostraron altos niveles de expresión y mayores niveles de correlación y co-expresión, puntualizándolos como importantes biomarcadores candidatos para la ejecución del programa de senescencia en girasol. Los resultados de este trabajo permitieron contribuir al conocimiento de los mecanismos moleculares involucrados en el desencadenamiento y evolución del proceso de senescencia en girasol, así como a la selección robusta de genes involucrados en las distintas etapas del desarrollo del proceso, especialmente factores de transcripción. Estos últimos fundamentalmente, podrán ser validados a futuro sobre materiales de mejora para ser incorporados a los programas de mejoramiento asistido de este cultivo de gran importancia agronómica para nuestro país. Finalmente, las estrategias, metodologías, herramientas y conocimientos desarrollados en esta tesis contribuyen al desarrollo del cultivo y promueven la adopción de la genómica y la post-genómica en las distintas etapas del mejoramiento de girasol.

Abstract:
Leaf senescence is a complex mechanism controlled by multiple variables, either from genetical and environmental origin that has strong impact on crop yield. In sunflower, the second economically important oil crop in Argentina, the senescence process has an economic impact involved in the gap between potential and real yield observed due to the incapacity of the plants in keeping their green leaf area for longer periods. Visual parameters are belated to assess the onset and the evolution of leaf senescence. Chlorosis, variation in chlorophyll content as well as leaf necrosis is detected long after the triggering signal has been activated. The main objective of this work was the study of the senescence process in sunflower through different organization levels: ecophysiological, metabolomic, transcriptomic, and finally an integration of the different omics strategies using a systems biology approach, in order to identify potential biomarkers associated to leaf senescence in sunflower. Different experiments were conducted in both, field and greenhouse condition at INTA-Balcarce Experimental Station and at the Biotechnology Institute, INTA Castelar respectively, assessing the senescence process under natural and controlled conditions. Response to water restrictions imposed at different plant development stages was also evaluated. Ecophysiological assessments related to the senescence progress were performed through different measurements such as chlorophyll, soluble sugars and total leaf nitrogen content, field measurements of green leaf area, SPAD, interception of radiation and dry material by organ, allowing the evaluation of the senescence process progression in different leaves growing under natural field conditions. Additionally, metabolic profiles analysis was performed by using Gas Chromatography - Mass Spectrometry technique (GC-MS), allowing the metabolite extraction protocol optimization in sunflower leaves and the detection of approximately 60 primary metabolites, including different amino acids, organic acids, sugars and sugar alcohol. Likewise, it was possible to optimize the ion chromatography technology, leading to the quantification of relevant ionic nutrients content such as nitrates, sulphates, phosphates and others, along the senescence process. In parallel, transcriptomic studies were performed considering both, candidate gene strategies by searching of sunflower orthologous gene sequences reported as senescence associated in model species, as well as through a concerted expression analysis using a customized oligonucleotide microarray developed for this species. Statistical functional enrichment analysis was conducted over the complete significant unigenes set derived from the microarray assay, for each evaluated conditions, using Gene Set Analysis methodology based on logistic regression models. In this way, different functional categories were identified for gene clusters with similar expression patterns. Moreover, the exploration for candidate genes was deepened by searching into the senescence associated gene databases for model species, as well as by identification of putative triggers of the signalling pathways leading to senescence in sunflower among the transcription factor domains gene database. Finally, a systems biology approach was achieved in order to integrate the information from the different physiological, metabolomic and transcriptomic strategies with the aim to identify biomarkers associated with leaf senescence in sunflower. These analyses were performed using Paintomics 2.0 (http://www.paintomics.org) (Garcia-Mayor et al 2011) and Mapman software (http://mapman.gabipd.org/) (Thimm et al 2004) that were adapted for sunflower data. These results showed a correspondence between the changes detected by the different strategies. Through a metabolism overview, a decrease of photosynthetic activity and cell growth was detected. Moreover, sucrose, fatty acids, nucleotides and amino acids metabolism as well as those pathways related to nutrient recycling processes showed an up-regulation during leaf development. In particular, NAC, AP2-EREBP and MYB transcription factors showed high expression levels and higher levels of correlation and co-expression making them important candidates biomarker in the execution of the senescence program in sunflower. The results of this work contributed to the knowledge of the molecular mechanisms involved at the onset and evolution of the senescence process in sunflower as well as to the identification of robust candidate genes involved in the different developmental stages of this process, especially transcription factors. These genes could be further validated on breeding materials to be incorporated into assisted breeding programs for this agronomic important crop for our country. Furthermore, the strategies, methodologies, tools and knowledge developed in this thesis, contribute to the crop development and promote the adoption of genomics and post-genomics in the different stages of sunflower breeding.

"Identificación y caracterización molecular y funcional de variantes de la Proteína Latente de Membrana 1 del virus de Epstein Barr" (2016-08-24). Gantuz, Magdalena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El Virus de Epstein Barr (EBV), agente etiológico de la mononucleosis infecciosa (MNI), se asocia también a neoplasias. Si bien las causas por las cuales contribuye a la linfomagénesis están aún en estudio, la identificación de variantes virales asociadas a tumores podrían responder en parte este interrogante. Dado que LMP1 es la principal proteína oncogénica de EBV, el objetivo fue identificar y caracterizar las variantes moleculares en sus regiones promotora y codificante, y determinar su participación en la patogenia de las enfermedades asociadas. Se incluyeron 29 pacientes pediátricos con linfomas asociados a EBV, 30 con MNI y 14 controles con hiperplasia reactiva. Se amplificaron mediante PCR las regiones promotora ED-L1 y codificante, se secuenciaron y se realizó análisis filogenético. Se analizó además in vitro la actividad del promotor. Región ED-L1: se definieron 4 clados denominados según las líneas celulares B95.8, Cao, Raji and P3HR1. B95.8 fue el más frecuente (47%), pero no se asoció a a ninguna patología en particular. Se observaron mutaciones en sitios de unión a factores de transcripción, la pérdida del C/EBP disminuye 3 veces la actividad de ED-L1. Región codificante: se identificaron 6 clados (China1, China2, Med-, Alaskan, B95.8 and Argentina ) de los cuales prevaleció la variante de circulación local, Arg, (46%) potencialmente originada por recombinación Raji/China1 y que podría tener un origen africano. No se observó una asociación entre variantes específicas y linfomagénesis, aunque algunos polimorfismos tuvieron mayor frecuencia en linfomas. Se estimó una tasa de evolución acelerada en comparación a lo esperado para un herpesvirus, quizás influenciado por la presión de selección positiva sobre codones específicos. Este análisis muestra una evolución compleja de este gen y revela la importancia de su potencial utilización como marcador de variantes virales geográficas.

Abstract:
Epstein Barr virus (EBV), the etiological agent of infectious mononucleosis, is also associated with neoplasia. Little is known about variants prevalence and their influence in EBV diseases. Our aim was to study viral LMP1 variant distribution among children with EBV+ malignant and benign conditions as well as healthy carriers. Oral secretions (OS) and blood cells (PBMC) from 30 children with IM, and biopsies from 14 EBV+ reactive hyperplasia (RH) and 29 EBV+ lymphomas (L) were included. LMP1 sequences were amplified by nested PCR. Sequencing and phylogenetic analysis was performed. Promoter activity was assayed in EDL1 variants. ED-L1: Phylogenetic reconstruction defined 4 clades termed after B95.8, Cao, Raji and P3HR1. B95.8 clade was the most frequent (47%), but it was not associated with any particular condition. Mutations were found in transcription factor binding sites; the abolition of C/EBP caused a 3-fold diminish in EDL1 activity. Coding region: 6 clades were defined (China1, China2, Med-, Alaskan, B95.8 and Argentine (Arg)). Arg clade, the most prevalent (46%), proved to be a Raji and China1 recombinant. No pathology or compartment associations were observed for LMP1 variants, however some polymorphisms presented a higher prevalence in lymphoma patients. Viral evolutionary rate estimated from LMP1 was faster than the expected for a herpesvirus, perhaps due to positive selection influence. These results contribute to the knowledge of EBV genetic diversity and evolution. LMP1 appears to have a complex evolution pattern and reveals the importance of its potential use as a marker of geographical viral variants.

"Identificación y distribución de la hormona hipofisaria Somatolactina en el pejerrey, Odontesthes bonariensis (Teleostei, Atherinidae) : Su relación con el ciclo gonadal"" (2000). Vissio, Paula Gabriela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La somatolactina (SL) es una hormona recientemente identificada en peces teleósteos. Por su estructura pertenece a la familia de la hormona de crecimiento (GH) y la prolactina (PRL). Su función es aún poco conocida, pero datos bibliográficos recientes la relacionan entre otros con los procesos reproductivos. Con el objeto de estudiar su participación en éstos se establecieron los _ siguientes objetivos: Estudiar la distribución de los diferentes tipos celulares de la adenohipófisis (ADH) y establecer la presencia de células productoras de SL en el pejerrey, Odontesthes bonariensis. Determinar la relación entre las variaciones morfométricas de las células SL y el ciclo gonadal tanto en machos como en hembras de pejerrey. Establecer si existe una relación entre SL y el neuropéptido liberador de gonadotrofinas (GnRH). Los resultados mostraron que las células productoras de las diferentes hormonas hipofisarias se localizaron en sitios específicos de la ADH. Las células productoras de PRL y de ACTH en la pars distalis rostral (PDR), las productoras de hormona de crecimiento (GH), de hormona tirotrófica (TSH) y de gonadotrofinas (GtHs) en la pars distalis proximal (PDP). Estas últimas también se encontraron en el borde externo de la pars intermedia (PI) junto con las células presuntivamente productoras de hormona melanocitoestimulante (MSH). Las células secretoras de SL, reconocidas específicamente con cuatro antisueros se ubicaron en estrecha proximidad con la neurohipófisis (NH) también en la PI. El área de las células productoras de SL mostró diferencias significativas entre hembras activas o vitelogénicas e inactivas o no vitelogénicas. Se observó también una correlación positiva entre el área de las células ir-SL y el Indice gonadosomático (GSI). En machos con altos valores de GSI las células productoras de SL eran más numerosas y de mayor tamaño en comparación con los individuos con valores menores de GSI. Sin embargo, esta diferencia no fue estadísticamente significativa. En este trabajo de Tesis se demostró una clara asociación morfológica entre las células productoras de SL y las fibras de GnRH. Por otra parte, se determinó la presencia de receptores a GnRH en estas células, utilizando un cultivo primario de hipófisis de pejerrey. Los sitios de unión se revelaron por autoradiografia de un análogo superactivo de GnRH (GnRH-A)y las células inmunoreactivas, ir-SL se identificaron por inmunocitoquímica. Una gran cantidad de gránulos de plata representando sitios de unión de GnRH-A se encontraron asociadas a estas células. Los resultados obtenidos aportan mayor información a la hipótesis sobre el papel que jugaría la SL en los procesos reproductivos de los peces teleósteos.

Abstract:
A pituitary hormone, somatolactin (SL), belonging to the growth hormone (GH)/prolactin (PRL) family is a recently discovered polypeptide produced in the pars intermedia (PI) of teleosts. Its function is still uncertain but several authors propose that SL may be involved in some physiological aspects of reproduction. In the present work the following objectives were established: To analyse the distribution of different cellular types in the adenohypophysis (ADH) of pejerrey, Odontesrhes bonariensis and to determine the presence of SL producing cells. To study in both sexes the relationship between morphometric changes of SL producing cells and gonadal development. To determine the association between ir-GnRH fibers and the SL expressing cells and analyse the presence of GnRH binding sites in the same cells. Results showed that prolactin (PRL) cells were immnunostained in the external border of the rostral pars distalis (RPD). Immunoreactive (ir-) corticotrophic (ACTH) cells were identified in the same area and crossreactivity was observed in the pars intermedia (PI), corresponding to presumptive melanocyte-stimulating hormones cells. Ir-growth hormone (GH) cells were identified in close contact with the neurohypophysis (NH) in the proximal pars distalis (PPD). Ir-gonadotrophic (GtH) cells were distributed in the PPD and in the external border of the PI. Ir-thyroidstimulating hormone (TSH) cells were revealed in the PPD. Ir-somatolactin (SL) cells were recognised specifically using four different antisera in the PI in close contact with the neurohypophysis. The area of the cells ir-SL showed a significant difference between the area of ir-SL cells of resting/reggresing and sexually active (vitellogenic) females. A significant positive correlation between the ir-SL cellular area and the GSI was also observed. In males with the highest GSI values the ir-SL cells appeared more numerous and showed an increase in the immunostained area when compared to those of individuals with lower GSI values. However, the correlation between the area of ir-SL cells and the GSI in males was not statistically significant. A close association of GnRH fibers and SL cells was determined. In addition, GnRH receptors were observed in SL cells , using a pituitary primary cell culture system. GnRH binding sites were revealed by autoradiography of an iodinated superactive GnRH agonist (GnRH-A)and pituitary cells were identified by immunocytochemistry using piscine antisera. Following autoradiography, silver grains representing specific GnRH-A binding were associated with SL cells. These results demonstrate the presence of GnRH binding sites in these cells.

"Identificación, caracterización e importancia biológica de las ADN glicosilasas del sistema de reparación del ADN por escisión de bases de Helicobacter pylori" (2002). O’Rourke, Eyleen J.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Identificación, caracterización molecular y mutagénesis insercional de genes codificantes para antígenos proteicos de Brucella Abortus" (1998). Boschiroli, María Laura. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Brucella abortus, el agente etiológico de la brucelosis bovina, es una bacteria intracelular que replica en células fagocíticas y que también infecta a humanos, por lo que la enfermedad es considerada una zoonosis. Esta enfermedad produce grandes pérdidas en el sector pecuario y de salud pública del país y del mundo. Los factores de virulencia de esta bacteria son pobremente conocidos, y el diagnóstico de la enfermedad es aún dificultoso y poco confiable. Una manera de sobrellevar estas dificultades es por medio del estudio genético de la bacteria. En este trabajo se caracterizaron tres genes y las proteínas que éstos codifican de B.abortus S19, la cepa vacunal bovina. La estrategia para conocer el rol en la fisiología bacteriana fue por un lado obtener la de los genes y buscar homologías en bancos de datos, y por otro lado mutagenizartos por intercambio alélico y estudiar el comportamiento de las cepas mutantes in vivo e in vitro. Se lograron identificar genes del operón 2-oxoglutárico deshidrogenasa y la enzima superóxido dismutasa dependiente de cobre y zinc. En el primer caso, las mutantes muestran claras diferencias con respecto a la cepa salvaje, demostrando un rol fundamental de estas proteínas en la fisiología bacteriana. En el segundo caso, la cepa mutante no muestra diferencias significativas, confirmando resultados previos, por lo que se demuestra que esta proteína no es un factor de virulencia.

Abstract:
Brucella abortus, the causative agent of bovine brucellosis, is an intracellular bacteria which can replicate within phagocytic cells and can also infect humans, therefore the disease is considered a zoonosis. Brucellosis produces great economical and public health losses not only in our country but worldwide. Brucella’s virulence factors are poorly understood, and diagnosis is difficult and unreliable. A means to overcome this drawbacks is studying the bacterial genetics. In this work 3 genes from Brucella abortus vaccine Strain 19, and the proteins they codify for, were studied. In order to understand their physiological role, genes sequences were determined and compared to other known sequences in databases. On the other hand, these genes were knocked out by allelic replacement and mutant strains’ behavior was studied in vitro and in vivo. Genes from 2-oxoglutarate dehydrogenase operon and Cu/Zn superoxide dismutase were identified. Mutants for the former genes showed clear differences compared to the wild type strain, demonstrating an important physiological role in the bacteria. Confirming pre-existing results, mutants for the latter gene showed no significant differences, hence this protein is not a real virulence factor.

"IgA y plaquetas como moduladores del fenómeno apoptótico en granulocitos neutrófilos y eosinófilos" (2002). Schettini, Jorge L.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En la presente Tesis desarrollamos dos líneas de investigación, relacionadas ambas con la identificación y caracterización de factores propios al microambiente inflamatorio capaces de modular la apoptosis de granulocitos neutrófilos y eosinófilos. En relación a los neutrófilos hemos demostrado que Ia IgA inmovilizada, tanto plasmática como secretoria, promueve notoriamente el proceso apoptótico. En contraste, las formas solubles de la IgA plasmática y secretoria, como así también la IgA agregada soluble no mostró actividad modulatoria alguna. El mecanismo subyacente a la capacidad de la IgA inmovilizada de promover la apoptosis del neutrófilo mostró depender de la actividad de la molécula MAC-1 (CD11b/CD18) y de la activación del estallido respiratorio. Por el contrario, no involucró la actividad del sistema Fas/FasL. En relación a los eosinófilos hemos demostrado que las plaquetas ejercen un poderoso efecto preventivo sobre el proceso apoptótico, prolongando dramáticamente la sobrevida celular. Hemos demostrado que las plaquetas producen GM-CSF y que esta citoquina juega un papel central en la prevención de la apoptosis de eosinófilos mediada por plaquetas. La posible relevancia de las observaciones realizadas, en relación al curso y/o etiopatogenia de entidades patológicas tales como la nefropatía por IgA y el fenómeno alérgico es discutida en la presente Tesis.

Abstract:
In the current Thesis we develop two lines of investigation, both related with the identification and characterization of the own factors from inflammatory microenviroments able to modulate the apoptotic rate of neutrophilic and eosinophilic granulocytes. We found that culture of neutrophils on immobilized plasma IgA (ilgAp) or secretory IgA (iIgAs) induced a marked increase in apoptotic rates. By contrast, soluble IgAp, IgAs, or aggregated-plasma lgA (algAp) exerted no effect. Promotion of apoptosis by iIgA was almost completely prevented by blocking antibodies directed to either CD18 or CD11b, and showed to be dependent on the activation of the respiratory burst. We also report here that platelets delay apoptosis enhancing eosinophil survival. A marked inhibition of spontaneous apoptosis was observed using eosinophil:platelet ratios of 1:50, 1:25 and 1:10. Moreover, we found that promotion of apoptosis by either pronase or dexamethasone was also markedly inhibited when the cellular cultures were performed in the presence of platelets. The anti-apoptotic effect mediated by platelets was depended on the release of soluble products, and was markedly inhibited by neutralizing antibodies directed to GM-CSF. Studies performed by flow cytometry, directed to analyze the cellular source of this cytokine, demonstrated that intracellular GM-CSF is present in resting platelets. Moreover, GM-CSF was found in platelet supernatants, at concentrations able to prevent eosinophil apoptosis. The possible significance of our findings, in relation to the development of pathologic entities such as lgA nephropathy and the allergic phenomenon are discussed in the current Thesis.

"Imagen y espectroscopía de alta resolución utilizando sondas plasmónicas" (2011). Scarpettini, Alberto F.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Impacto conjunto de dos agentes antropogénicos de cambio ambiental: efecto del herbicida glifosato y del mejillón invasor Limnoperna fortunei en ecosistemas de agua dulce" (2014-05-16). Di Fiori, Eugenia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El hombre ha generado durante las últimas décadas un importante cambio en los ecosistemas que lo sostienen. En la naturaleza los agentes de impacto ambiental no actúan de forma aislada sino por el contrario operan de manera conjunta, pudiendo provocar importantes cambios sobre las comunidades afectadas. En este sentido, el objetivo de la tesis fue analizar el efecto de la interacción de dos factores de cambio introducidos por la actividad humana sobre los ecosistemas de agua dulce: el herbicida glifosato y el molusco invasor Limnoperna fortunei. Se estudió el impacto conjunto sobre la estructura de las principales comunidades microbianas y sobre la calidad del agua mediante aproximaciones en ensayos controlados de laboratorio y a escala ecosistémica en microcosmos al aire libre. Se encontró que bajo las mismas condiciones, la presencia de L. fortunei acelera la disipación del glifosato en agua en casi 4 veces, con una velocidad de hasta 50,2 ± 3,4 gs por gramo de peso seco del tejido blando de mejillones por día, excretando fosfatos como producto de su degradación. Asimismo, pudimos detectar que tanto el mejillón íntegro como sus valvas por separado participan en la reducción del glifosato disuelto, determinando de forma más precisa el modo de acción de este factor sobre el herbicida. Si bien la presencia del molusco favorece la disipación del glifosato, la acción conjunta del agroquímico y L. fortunei sería perjudicial para los ecosistemas de agua dulce ya que presentan un efecto sinérgico, producto de su interacción. El aporte de nutrientes a partir de la degradación del herbicida promueve el desarrollo del bacterioplancton, estimula el crecimiento de algas filamentosas y aumenta la turbidez acelerando el deterioro de la calidad del agua en el corto plazo. Los estudios a escala ecosistémica sobre el impacto de agentes de estrés ambiental y su interacción sobre comunidades en microcosmos a la intemperie permiten predecir con mayor grado de realismo los efectos de la actividad del hombre sobre el ambiente natural.

Abstract:
During the past decades human activity has created a major shift in surrounding ecosystems. In nature, the environmental impact agents do not act separately but rather interact and operate together, being able to generate major changes on affected communities. Accordingly, the aim of this Thesis was to analyze the effect of the interaction of two environmental impact agents introduced by human activity on freshwater ecosystem: the glyphosate herbicide and the invasive mussel Limnoperna fortunei. We studied the joint impact on the structure of the main microbial communities and on water quality through experimental approaches in laboratory and in outdoor microcosms. We found that under the same conditions, the presence of L. fortunei accelerates glyphosate dissipation in water at about 4 times, with a speed of up to 50,2 ± 3,4 gs per gram of mussell dry weight per day, excreting phosphates as a breakdown product. Moreover, we detected that both the entire mussel as well as its empty valves participate in glyphosate dissipation in water column, determining more accurately its mode of action on the herbicide. Although mussels’s presence favours glyphosate dissipation, the combined effect of the agrochemical and L. fortunei would be detrimental to freshwater ecosystems as they present a synergic effect, due to their interaction. Nutrient overload due to herbicide degradation accelerated bacterioplankton development, stimulates the growth of filamentous algae and enhances water turbidity through time, promoting the impoverishment of the water quality in the short term. Ecosystem-scale studies on the impact of environmental stressors and their interaction on outdoor microcosms communities become more realistic approaches when predicting the effect of human activity on natural environment.

"Impacto de la anafilotoxina C5a en la respuesta inmune inducida por cepas locales de Mycobacterium tuberculosis multirresistentes a drogas" (2015-03-13). Sabio y García, Carmen Alejandra. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La tuberculosis es un problema de salud prioritario en Argentina, así como lo es a nivel mundial al punto que la Organización Mundial de la Salud ha declarado la emergencia pública sanitaria global. Este problema se ve agravado por el surgimiento de cepas de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) multirresistentes a las drogas de primera línea utilizadas para combatirla. En la presente tesis, evaluamos el rol de la anafilotoxina C5a y sus receptores, C5aR y C5L2, sobre la respuesta inmune inducida por las cepas locales de brote multirresistentes a drogas, M y Ra, tomando como referencia la cepa de laboratorio H37Rv. Nuestros resultados muestran que: 1) Mtb induce la producción de C5/C5a en los monocitos y modula la expresión de C5aR y C5L2, receptores del fragmento activado C5a, durante la diferenciación de los monocitos a macrófagos; 2) el receptor C5aR expresado en monocitos participa de la inhibición de la polarización Th1 en la respuesta inducida por la cepa M, impidiendo el aumento de la población CD4+IFNγ+ en respuesta a la estimulación con esta cepa; 3) la interacción C5a-C5aR modula la expresión de las moléculas de superficie CD11b y HLA-DR en monocitos en diferenciación a macrófagos estimulados con las cepas H37Rv, M y Ra; 4) C5a aumenta la producción de intermediarios reactivos del oxígenos inducido por H37Rv y Ra, y puede compensar la disminución en esta respuesta debida la ausencia de señalización por otros receptores involucrados en la misma; 5) H37Rv, M y Ra presentan diferencias en la inducción de las respuestas estudiadas. La cepa M en particular, induce menor respuesta en: inducción de la producción de C5/C5a en monocitos, regulación de la expresión de los receptores C5aR y C5L2, inducción de intermediarios reactivos y ausencia de regulación de su producción por C5a. Aun así, el perfil de activación inducido por esta cepa es susceptible a ser modulado por C5aR. Estos resultados sugieren que C5a es producido como consecuencia de la presencia de Mtb y que esta anafilotoxina actúa, a través de sus receptores, modulando distintos niveles de la respuesta inmune contra este patógeno los cuales son determinantes para el éxito o fracaso de dicha respuesta. Más aún, demostramos que tanto los parámetros estudiados como su modulación por C5a dependen del genotipo bacteriano. Palabras claves: Mycobaterium tuberculosis - cepas multirresistentes a drogas – anafilotoxina C5a – receptores C5aR y C5L2 –monocitos – respuesta T CD4+ – intermediarios reactivos del oxígeno

Abstract:
Tuberculosis is a major health problem in Argentina as well as at a global level, and because of its relevance it was declared as a global public health emergency by the World Health Organization. This problem has been aggravated by the appearance of Mycobacterium tuberculosis (Mtb) strains resistant to the two first line anti-tuberculosis drugs. In the present thesis, we evaluate the role of C5a anaphylatoxin and its receptors, C5aR and C5L2, in the immune response induced by the local outbreak multidrug-resistant strains, M and Ra, by taking H37Rv as a laboratory reference strain. Our results show that: 1) Mtb induces C5/C5a production by monocytes and modulates C5aR and C5L2, which are receptors of the activated fragment C5a, during monocyte-to-macrophage differentiation; 2) the C5aR receptor expressed in monocytes is involved in the inhibition of M strain-induced Th1 polarization, which prevents the increase of CD4+IFNγ+ T cells in response to this strain stimulation; 3) the C5a-C5aR interaction modulates the surface expression of CD11b and HLA-DR of monocytes in differentiation to macrophage stimulated with H37Rv, M or Ra strains; 4) C5a increases reactive oxygen species (ROS) production induced by H37Rv and Ra, and is able to compensate the decrease of ROS production due to the absence of signaling from other receptors involved in this response; 5) H37Rv, M and Ra display different immune responses. Particularly, M strain induces a weaker response in: monocyte C5/C5a production, the regulation of C5aR and C5L2 expression, the induction of ROS production and lack of C5a regulation of this last response; yet, the activation profile induced by this strain is susceptible to C5aR modulation. These results suggest that C5a is produced in response to Mtb and acts, through it receptors, modulating the immune response against this pathogen at different levels which are determinants for the success or failure of this response. Moreover, we demonstrated that the bacterial genotype influences both the analyzed parameters and their modulation through C5a. Keywords: Mycobaterium tuberculosis – multidrug resistant strains – monocytes – C5a anaphylatoxin – C5aR and C5L2 receptors– CD4+ T cells response – reactive oxygen species

"Impacto de la incompatibilidad/compatibilidad termodinámica entre proteína del lactosuero e hidroxipropilmetilcelulosa en las propiedades físico-químicas de las mezclas" (2011). Jara, Federico Luis. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de este trabajo fue estudiar el impacto de la incompatibilidad/compatibilidad termodinámica entre las proteínas del lactosuero y diferentes hidroxipropilmetilcelulosas, sobre las transiciones térmicas de las mezclas deshidratadas de dichos biopolímeros, la formación de los geles mixtos, las propiedades de las películas interfaciales mixtas, y el fraccionamiento de las proteínas lactoséricas. En todas las experiencias se caracterizó, previamente, el comportamiento de los componentes solos. Los resultados demostraron que los sistemas ternarios WPC/HPMC/agua se comportan como una emulsión agua-en-agua, donde la micro-estructura de la misma está determinada por la relación de volúmenes entre las fases segregadas. En el caso de las transiciones térmicas se observó que las mezclas compatibles (sin separación de fases) presentaron una única temperatura de transición vítrea (Tg) que se ajustó con modelos previamente descriptos en literatura. Por el contrario, las mezclas acuosas que presentan una separación total (incompatibilidad) o parcial de las fases (compatibilidad limitada), la Tg quedó determinada por la morfología y el grado de segregación de las fases. Así mismo, se encontró que dicha micro-estructura define tanto el comportamiento reológico (carácter sólido, G’; viscoelasticidad relativa, tan δ) como las características macroestructurales (dureza) de los geles mixtos los cuales están determinados por el componente (WPC o HPMC) que constituye la fase continua. Sin embargo, la temperatura de gelificación (Tgel), al igual que la temperatura de transición vítrea (Tg), quedó determinada por la morfología y el grado de separación de fases. Por otra parte, las mezclas de proteínas del lactosuero (β-lactoglobulina) e hidroxipropilmetilcelulosas (E50LV) en condiciones de limitada compatibilidad termodinámica y concentraciones que permiten la saturación de la interfase por ambos biopolímeros, presentaron un comportamiento competitivo en la interfase aire-agua, modulado por el pH. Debido a su mayor carácter tensioactivo y buenas propiedades formadoras de películas, la HPMC dominó tanto la presión superficial como las propiedades reologicas de las películas interfaciales. Finalmente, se demostró la capacidad de los “sistemas acuosos de dos fases” (ATPS, Aqueous Two-Phase Systems) constituidos por WPC/HPMC, para fraccionar las proteínas lactoséricas de bajo PM (α-lactalbúmina y β-lactoglobulina). En términos generales, este trabajo aporta al conocimiento del entendimiento de las interacciones entre proteínas y polisacáridos y su posible aplicación tanto en el campo científico como en el tecnológico.

Abstract:
The aim of this work was to study the impact of the thermodynamic incompatibility/compatibility between whey proteins and different hydroxypropylmethylcelluloses on the thermal transitions of their dry-blends, the formation of mixed gels, the properties of interfacial mixed films, and whey protein fractionation. In all the experiments the behavior of the single components was previously characterized. The results showed that the ternary systems WPC/HPMC/water behave like a water-in-water emulsion, where their micro-structure is determined by the volume ratio between the segregated phases. In the case of thermal transitions it was observed that compatible mixtures (without phase separation) showed a single glass transition temperature (Tg) that was fitted with models previously described in literature. On the contrary, in full (incompatibility) or partial (limited compatibility) phase separated aqueous mixtures, the Tg was determined by morphology and the extent of phase segregation. Moreover, it was found that the micro-structure defines both the rheological behavior (solid character, G'; relative viscoelasticity, tan δ) and macrostructural characteristics (hardness) of mixed gels are determined by the component (WPC or HPMC) which contitutes the continuous phase. However, the gelation temperature (Tgel), as well as the glass transition temperature (Tg) were determined by morphology and the degree of phase separation. Furthermore, mixtures of whey proteins (β-lactoglobulin) and hydroxypropylmethylcellulose (E50LV) in conditions of limited thermodynamic compatibility and concentrations that allow saturation of the interface for both biopolymers, showed a competitive behavior at the air-water, which was modulated by pH. Because of their greater surfactant character and good film forming properties, the HPMC dominated both surface pressure and the rheology of interfacial films. Finally, it was demonstrated the ability of WPC/HPMC aqueous two-phase systems (ATPS) to fractionate low molecular weight (α-lactalbumin and β-lactoglobulin) whey proteins. In general, this work contributes to the knowledge of understanding the interactions between proteins and polysaccharides, and their possible applications in the field of science and technology.

"Impacto de la interacción entre polifenoles de té verde y proteínas del lactosuero sobre las propiedades biológicas y funcionales de las mezclas" (2011). von Staszewski, Mariana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo del presente trabajo fue estudiar la interacción entre polifenoles de té verde y proteínas del lactosuero y su impacto sobre las propiedades funcionales y biológicas de los componentes. Los estudios realizados muestran que los polifenoles poseen una fuerte afinidad por todas las proteínas del lactosuero estudiadas y a todos los pH analizados. El tamaño de los complejos formados es máximo cercano al punto isoeléctrico de cada proteína por lo que la insolubilidad de los mismos está mayormente determinada por su carga superficial. La presencia de polifenoles aceleró el proceso de gelificación tanto de β- lactoglobulina (β-lg) como de caseinomacropeptido (CMP). Resultados similares se observaron con WPC. A pH 6,0, pudieron utilizarse concentraciones de polifenoles de hasta 0,5% (p/v) sin producir precipitación del sistema y sin afectar negativamente la viscoelasticidad y la textura de los geles de proteína o WPC. Las variedades de té verde argentino mostraron excelentes capacidades como agentes antioxidantes y antimicrobianos. La formación de complejos entre los polifenoles de té verde y el WPC disminuyó significativamente estas actividades. La actividad antimicrobiana del té verde en presencia de WPC se observó principalmente frente a bacterias gram positivas. Además, el tratamiento previo con té verde mejoró, en la mayoría de los casos, la efectividad de distintas condiciones de estrés aplicadas sobre los microorganismos, sin producir efectos de protección cruzada. Los polifenoles presentaron un gran potencial como agentes anticancerígenos. Sin embargo, la interacción de los polifenoles con β-lg o CMP tuvo efectos sinérgicos o antagónico dependiendo de la línea celular evaluada. La elección adecuada de la concentración de polifenoles permitiría obtener los efectos biológicos para la salud presentes en este ingrediente funcional sin afectar negativamente las propiedades funcionales de sistemas lácteos como el WPC y sus proteínas.

Abstract:
The objective of the present work was to study the interaction between green tea polyphenols and whey proteins, and its impact on the functional and biological properties of the components. The studies revealed that polyphenols have a strong affinity for all whey proteins studied and at all pH evaluated. The size of the complexes formed was maximum close to the isoelectric point of each protein and their solubility was mainly determined by their superficial charge. The presence of polyphenols accelerated the gelation process of both β-lactoglobulin (β-lg) and caseinmacropeptide (CMP). Similar results were observed with WPC. At pH 6.0, polyphenol concentrations up to 0.5% (p/v) can be used without producing precipitation neither affecting negatively the viscoelasticity and the texture of protein or WPC gels. Argentinean green tea varieties showed very good capacities as antioxidants and antimicrobials. The complexes formation between green tea polyphenols and WPC decreased very significantly these activities. The green tea antimicrobial activity in the presence of WPC was mainly observed against gram positive bacteria. Additionally, the previous treatment with green tea improved, in most of the cases, the effectiveness of different stress conditions applied on the microorganisms, without producing cross- protection effects. Polyphenols presented a great potential as anticancer agents. However, the interaction between polyphenols and β-lg or CMP had synergistic or antagonistic effects depending on the cell line evaluated. The right polyphenols concentration would allow obtaining the biological health effects present in this functional ingredient without negatively affecting the functional properties of dairy systems as they are WPC and its proteins.

"Impacto de la interacción entre ß-lactoglobulina, caseinoglicomacropéptido y polisacáridos en coloides alimentarios" (2010). Martínez, María Julia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de este trabajo fue estudiar el impacto de las interacciones entre ß-lg y CMP y entre ellos y polisacaridos en coloides alimentarios. Previamente se caracterizo el comportamiento de los componentes solos. El CMP presento autoensamblaje reversible dependiente del pH a temperatura ambiente. A pesar de que a pH 7 el CMP no gelifica, todos los sistemas mixtos gelificaron indicando un efecto sinergico. Por el contrario, a pH 3,5 donde ambos componentes gelificaron por si solos, se observo un fuerte antagonismo. Este comportamiento fue atribuido a la formacion de estructuras CMP:ß-lg asociadas electrostaticamente. La agregacion y gelificacion termica de la ß-lg es promovida y acelerada en presencia de polisacaridos. Esto se puede explicar en terminos de un aumento de la concentracion efectiva de ß-lg debido a la limitada compatibilidad termodinamica entre ambos biopolimeros. Respecto al comportamiento interfacial de mezclas CMP:polisacaridos predomino el efecto competitivo ya que el CMP es muy pequeno y no se favorecerian tanto los fenomenos segregativos. Los resultados de este trabajo indican que la asociacion entre CMP y ß-lg en solucion es mas una regla que una excepcion y tiene un fuerte impacto sobre las propiedades funcionales. Probablemente debido a que la ß-lg domina el comportamiento de los sistemas mixtos CMP:ß-lg, no se ha dado importancia al estudio de la influencia de CMP en productos derivados del suero. Los resultados muestran que el sinergismo entre CMP y ß-lg en ciertas condiciones puede ser explotado para el diseno de alimentos con una textura deseada conteniendo CMP como ingrediente bioactivo. Tambien se demuestra que la utilizacion de mezclas de proteinas y polisacaridos puede promover una mejora de las propiedades funcionales.

Abstract:
The objective of this work was to study the impact of the interactions between CMP-ß-lg and with polysaccharides in food colloids. Previously the behaviour of the pure components was characterized. CMP undergoes a pH-dependent self-assembly at room temperature. At pH 7.0, where CMP did not gel, all the mixed systems gelled, but strong synergism was observed for 25:75 CMP:ß-lg ratio. Contrarily, at pH 3.5 where both components gelled on their own, a strong antagonism was observed. This behaviour is ascribed to the formation of electrostatically driven assembled CMP:ß-lg structures. The thermal aggregation and gelation of ß-lg is promoted and accelerated in the presence of polysaccharides. This was explained in terms of an increase of the effective ß-lg concentration because of a limited thermodynamic compatibility between both biopolymers. Respect to the interfacial behaviour of CMP:polysaccharides mixtures predominated the competitive effect due to CMP is very small so segregative phenomenon are not favorable. The present results point out that the assembly of CMP and ß-lg in aqueous solutions is more a rule than an exception and has a strong impact on functional properties. Probably, because ß-lg dominates the behaviour of mixed CMP:ß-lg systems it has been not highlighted the importance of studying the influence of CMP in whey products. The results show that the synergism between CMP and ß-lg in some conditions can be exploited for the design of foods with desired textures containing CMP as a bioactive ingredient. Additionally, it was demonstrated that the use of protein and polysaccharides mixtures can promote an improvement on functional properties.

"Impacto de las condiciones de suelo en el clima del sur de América del Sur en diferentes escalas temporales" (2012). Pessacg, Natalia Liz. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En esta tesis se evalúa la respuesta del clima regional del sur de Sudamérica a dos forzantes locales asociados a las condiciones de superficie, los cambios de uso/cobertura de suelo y los cambios en las condiciones de la humedad de suelo. Por otro lado, se analiza cómo la respuesta del clima regional a distintos forzantes remotos es modulada por los cambios de uso/cobertura de suelo. En primer lugar, se analiza la capacidad de una serie de modelos climáticos regionales para representar los balances de radiación y los flujos de calor en América del Sur, ya que los cambios en las condiciones de superficie afectan fuertemente estos balances. En particular, se evalúa la capacidad del modelo regional MM5, utilizado como herramienta para el abordaje de esta tesis. En segundo lugar, se estudia la respuesta del clima regional del sur de Sudamérica para diferentes escenarios idealizados de cambios de uso/cobertura de suelo, asociados a los procesos de desertificación, reforestación y remplazo de la cobertura actual por tierras para la agricultura, procesos que se han dado en nuestra región en las últimas décadas y que continúan teniendo una tendencia positiva. Se encontró que los cambios en la cobertura de suelo influyen fuertemente sobre la temperatura y la precipitación mediante cambios en los balances de energía y agua en el sur de Sudamérica. En tercer lugar, se evalúa cómo los cambios en la cobertura de suelo modulan la respuesta del clima regional a la señal asociada a distintos forzantes remotos, ENSO y el aumento en la concentración de los gases de efecto invernadero. Finalmente, se analiza el efecto de los cambios de humedad de suelo en la variabilidad climática estacional del sur de Sudamérica. En particular, considerando que la humedad de suelo es una de las variables con mayor memoria del Sistema Climático, se evalúa la influencia de este forzante local en la predictabilidad climática en escala estacional.

Abstract:
In this thesis the regional climate response to two local forcings related with the surface conditions, land use/land cover changes and soil moisture conditions changes over southern South America is studied. In addition, the modulation of the regional climate response due to the interaction between changes in land use/land cover changes and different remote forcings is analyzed. First, the capability of a group of regional climate models to represent the radiation budgets at surface and the heat fluxes over South America is analyzed, since the changes in the surface conditions strongly affect the radiation budget. In particular, the capability of the regional climate model MM5, which is the tool used for addressing this thesis, is evaluated. Secondly, the southern South American climate response is studied for different idealized scenarios of land use/land cover changes, related with desertification, reforestation and replacement of actual cover by agricultural land, processes that southern South America suffered during the last decades and continue with a positive tendency. The results indicated that the land use/cover changes strongly influence the temperature and precipitation by means of changes in the energy and water budgets. Thirdly, it is evaluated how the land use/cover changes modulate the regional climate response to the signal related with remote forcings such as ENSO and the increase of the concentration of greenhouse gases. Finally, the effect of soil moisture changes in the seasonal climate variability over southern South America is evaluated. In particular, assuming that soil moisture is one of the variables with longest memory in the Climate System, it is analyzed the influence of this local forcing in the climate predictability in seasonal time scale.

"Impacto de los inhibidores de Deacetilasas de Histonas (iHDAC) sobre la funcionalidad de células NK" (2012). Rossi, Lucas Ezequiel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Desde el descubrimiento de que la expresión y funcionalidad de las deacetilasas de histonas (HDAC) se encuentra alterada en muchos tumores y que las mismas contribuyen a la carcinogénesis, se han desarrollado inhibidores de HDAC (iHDAC) para el tratamiento del cáncer. Los iHDAC inducen apoptosis, arresto del ciclo celular e inhibición de la angiogénesis en células tumorales. Sin embargo, no se ha estudiado adecuadamente el impacto de los iHDAC sobre células del sistema inmune involucradas en la respuesta anti‐tumoral. Por eso y debido a la relevancia de las células NK en la respuesta contra tumores, el objetivo de esta tesis fue estudiar el impacto de los iHDAC sobre estas células. Hemos demostrado que los iHDAC Tricostatina A (TSA), valproato de sodio (VPA) y butirato de sodio (NaB) inhibieron la producción de IFN-γ y la actividad citotóxica de células NK humanas. Aunque las drogas indujeron apoptosis en una fracción de las células NK, la marcada inhibición de sus funciones efectoras también se debió a la inhibición de la translocación nuclear de NF-κB y a una modulación negativa en la expresión de receptores activadores (NKG2D, NKp44 y NKp46), receptores de citoquinas (IL-12Rβ1, IL-15Rβ, IL-2Rγ e IL-18R) y de la subunidad α del receptor de IL-2 de alta afinidad (CD25). Además, demostramos que esta modulación negativa de NKG2D, NKp46 y CD25 fue funcionalmente relevante. Estos resultados fueron validados in vivo con células NK de ratones tratados con TSA, las que mostraron una menor expresión de los receptores NK1.1, NKG2D y NKp46, y una menor producción de IFN‐γ en respuesta a la estimulación ex vivo con citoquinas. Asimismo, comenzamos un estudio con muestras de sangre de pacientes epilépticos tratados con VPA ya que las células NK de estos pacientes se encuentran expuestas sólo a los efectos de la droga. Observamos un menor porcentaje de células NK en células mononucleares de los pacientes, las que exhibieron una menor expresión de receptores activadores, una menor producción de IFN-γ y una menor capacidad de degranulación. Estos resultados indican que estas drogas poseen efectos supresores sobre células NK (comprometidas en la inmunovigilancia contra tumores) y contribuyen al diseño de nuevos enfoques para el desarrollo de drogas terapéuticas que no comprometan la respuesta inmune anti-tumoral.

Abstract:
Since the discovery that many tumors exhibit altered expression and activity of different histone deacetylases (HDAC) and that they contribute to carcinogenesis, many HDAC inhibitors (HDACi) have been developed for the treatment of cancer. HDACi can induce apoptosis, cell cycle arrest and inhibit angiogenesis on tumor cells. However, their impact on cells of the immune system involved in immune surveillance against tumors has not been studied. Thus, the aim of this work was to investigate the effect HDACi on NK cells as they constitute critical actors of the anti‐tumor immune response. We have demonstrated that the HDACi Tricostatin A (TSA), sodium valproate (VPA) and sodium butyrate (NaB) inhibited in vitro IFN-γ production and cytolytic activity by human NK cells. Although the drugs induced apoptosis of a minor fraction of NK cells, the strong inhibition of their effector functions involves additional mechanisms such as inhibition NF-κB p50 nuclear translocation and down‐regulation of activating receptors (NKG2D, NKp44 and NKp46), cytokine receptors (IL-12Rβ1, IL-15Rβ, IL-2Rγ, IL-18R) and CD25 (the α chain of the high affinity IL-2R). Downregulation of NKG2D, NKp46 and CD25 were functionally relevant. Our results were validated in vivo, in HDACi treated mice, which exhibited NK cells with lower expression of the activating receptors NK1.1, NKp46 and NKG2D, and produced less IFN-γ upon ex vivo stimulation with cytokines. Preliminary data obtained with peripheral blood mononuclear cells from epileptic patients treated with VPA, showed that these patients exhibited lower percentages of NK cells than normal controls, and these NK cells presented lower expression of NKG2D and NKp46, lower IFN-γ production upon stimulation with citokynes and lower degranulation after stimulation with K562 cell line. Thus, our results suggest that HDACi have immunosuppressive effects on NK cells that may dampen their immune surveillance capacity. Our results may contribute to the development of drugs with a higher therapeutic eficacy which do not compromise immune response.

"Impacto del glifosato y algunos de sus formulados comerciales sobre el perifiton de agua dulce" (2011). Vera, María Solange. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de esta tesis es analizar el efecto del glifosato y el de algunos de sus formulados comerciales en el perifiton de agua dulce desde un punto de vista integrado y ecológico a escalas comunidad y ecosistema, a través de experimentos en mesocosmos y microcosmos en condiciones controladas de laboratorio y al aire libre. A escala comunidad se estudió la comunidad perifítica en laboratorio, analizando los posibles cambios en su estructura por adición de glifosato grado técnico y un formulado. A escala ecosistema se estudió el efecto de algunos formulados de glifosato sobre el perifiton en interacción con otras comunidades acuáticas microbianas (fitoplancton, bacterioplancton y zooplancton) analizando tanto su estructura y funcionalidad como sus interacciones y con el medio abiótico circundante. Nuestros resultados demuestran que el glifosato altera significativamente la estructura y funcionamiento del perifiton, de las otras comunidades microbianas y la calidad del agua en general favoreciendo la eutroficación. El efecto es directo sobre las comunidades autótrofas y se extiende a través de las tramas tróficas. El glifosato no es inocuo para el ambiente y por lo tanto, los cuerpos de agua naturales se hallan en riesgo de ser afectados directamente por su toxicidad como por los efectos indirectos que genera en el agua. Si tenemos en cuenta la aplicación intensiva y recurrente de altas cantidades de glifosato, tanto en la Argentina como en toda la región de América Latina, el ambiente corre peligro de ser afectado por un tiempo bastante prolongado.

Abstract:
The objective of this thesis is to analyze the effect of glyphosate and some commercial formulations on freshwater periphyton from an integrated and ecological perspective at community and ecosystem scales, through mesocosm and microcosm experiments under laboratory controlled conditions and outdoors. At community level, periphytic community was studied in the laboratory, analyzing possible changes in its structure by the addition of glyphosate technical grade and a formulation. At ecosystem level, the effect of some glyphosate formulations were studied on the periphyton in interaction with other aquatic microbial communities (phytoplankton, bacteria and zooplankton) by analyzing both the structure and functionality as their interactions and with the surrounding abiotic environment. Our results demonstrate that glyphosate significantly alter the structure and function of periphyton, the other microbial communities and water quality in general favoring eutrophication. The effect is direct on the autotrophic communities and extends through the food webs. Glyphosate is not safe for the environment and therefore, natural water bodies are at risk of being affected directly by its toxicity and by the indirect effects that generates in the water. Considering the intensive and recurrent application of high amounts of glyphosate, both in Argentina and throughout Latin America, the environment is in danger of being affected by a rather long time.

"Impacto del herbicida paraquat sobre invertebrados acuáticos" (2004). Della Penna, Angela Beatriz. Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El paraquat es un herbicida, ampliamente usado en ambientes terrestres y acuáticos. El objetivo del presente trabajo fue investigar algunos efectos tóxicos del paraquat en dos especies no blanco de invertebrados acuáticos. Especificamente se emplearon ejemplares adultos del oligoqueto Lumbriculus variegatus J. y moluscos gastrópodos pigmentados y no pigmentados de Biomphalaria glabrata S. En primer término se determinaron los valores de CL50, exponiendo ambos organismos en condiciones agudas. El paraquat presente en un producto formulado comercial resultó ser más tóxico para la especie L. variegatus que la solución conteniendo el compuesto puro. Para organismos de L. variegatus la toxicidad del paraquat formulado comercial aumenta con el aumento de temperatura y disminuye por el efecto de material particulado presente en el medio del bioensayo. Los valores de CL50 (96 horas y 25 +/- °C) resultaron similares para L. variegatus y ejemplares pigmentados de B. glabrata resultaron ser considerablemente más sensibles. En segundo lugar, se efectuaron bioensayos subletales a fin de investigar diversas respuestas bioquímicas. En este trabajo se reportan, por primera vez según nuestro conocimiento, valores de los niveles de las poliaminas putrescina, espermidina y espermina, en organismos controles de las dos especies de agua dulce en estudio. Por tratamiento a un nivel de 0,5 mg/L se observó que los niveles de poliaminas resultaron ser modificados por acción del paraquat producto comercial en L. variegatus. En cambio no se observaron diferencias significativas, con respecto a los controles, en organismos pigmentados y no pigmentados de B. glabrata. Los organismos de L. variegatus. al igual que ejemplares pigmentados de B. glabrata, no evidenciaron cambios en los procesos de peroxidación lipídica por acción del paraquat formulado comercial a un nivel de exposición de 0,5 mg paraquat/L. En cambio, tras 48 horas de exposición los organismos no-pigmentados de B. glabrata presentaron un aumento significativo en la peroxidación de lípidos. Los resuñtados que se obtuvieron en el presente trabajo permiten proponer tanto el análisis de niveles de poliaminas como la investigación de procesos de lipoperoxidación como posibles parámetros biomarcadores de contaminación por paraquat

"Impacto del molusco invasor Limnoperma fortunei sobre el ecosistema: interacción trófica y efectos sobre las larvas de peces nativos" (2010). Paolucci, Esteban Marcelo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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El objetivo de esta tesis es estudiar el impacto de las velígeras del bivalvo invasor Limnoperna fortunei en dieta de las más abundantes larvas de peces de los ríos y ambientes marginales de la cuenca del Río de la Plata. De los 25 taxones de peces registrados, 18 tenían velígeras de L. fortunei en su tracto digestivo, incluyendo los Characiformes y Siluriformes más abundantes de la cuenca. De las 825 larvas con contenido estomacal, 135 (16%) consumieron exclusivamente larvas de L. fortunei, y el 20% (169 peces) tuvieron L. fortunei y algunas otra presa. La frecuencia y biomasa relativas de velígeras de L. fortunei difirió fuertemente durante el desarrollo larval. En protolarvas y mesolarvas, las velígeras representaron el 30-35% del contenido del intestino, mientras que en metalarvas representaron sólo el 3%. Experimentalmente se observó que las protolarvas y mesolarvas de P. lineatus consumieron velígeras casi exclusivamente (88-90% en términos numéricos y de biomasa, respectivamente) cuando este ítem fue ofrecido en alta concentración, mientras que en metalarvas las velígeras solo representaron el 16% del alimento consumido. Las proporciones de velígeras en el contenido estomacal fueron siempre superiores a las suministradas en la dieta. Las larvas alimentadas con una dieta enriquecida en velígeras crecieron significativamente más (tanto en peso como en largo) que las alimentadas con las otras dietas. Concluimos que este nuevo y abundante recurso alimenticio tiene un impacto importante en la supervivencia y el crecimiento de P. lineatus y probablemente en otras especies de peces.

Abstract:
The aim of this work is to study the impact of veligers of the exotic bivalve Limnoperna fortunei on the diets of the more abundant larval fish in the Río de la Plata basin and associated lentic environments. Of the 25 fish taxa collected, 18 had veligers of L. fortunei in their guts incluiding the more abundant Characiformes and Siluriformes. Of the 825 feeding larvae recorded, 135 (16%) fed exclusively on L. fortunei, and 20% (169 fishes) had L. fortunei and some other prey. The relative frequency and biomass contribution of L. fortunei larvae differed strongly in fishes of different developmental stage. In protolarvae and mesolarvae, veligers accounted for 30–35% of the gut contents. In metalarvae, veligers accounted for only 3%. Experiments show that protolarvae and mesolarvae of Prochilodus lineatus consumed veligers almost exclusively (88-90%, both in numbers and in biomass) when offered prey enriched in veligers, whereas for metalarvae veligers represented only 16.0% of the food consumed. Proportions of veligers in gut contents were always higher than those in the experimental diet. Larvae fed a veliger-enriched diet grew to a significantly larger size than larvae fed the other two diets. We anticipate that this new and abundant food resource has an important impact on the survival and growth of P. lineatus and probably othes fish species.

"Impacto del sistema renina angiotensina en la involución mamaria y en la progresión tumoral" (2016-10-26). Cambados, Nadia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El desarrollo de la glándula mamaria es un proceso dinámico que involucra ciclos continuos de proliferación, diferenciación y regresión. Luego de la lactancia, comienza la involución de la misma. Dicho proceso, consiste en una masiva apoptosis de las células epiteliales alveolares y en un intenso remodelado tisular, acompañado de un aumento en la expresión de factores pro-inflamatorios, devolviéndole a la glándula una estructura similar al de una hembra virgen. Por otro lado, el sistema renina angiotensina (RAS) se vincula, actualmente, a una multiplicidad de procesos biológicos, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. La mayoría de los efectos de la AngII, principal efector del RAS, son mediados por el receptor AT1 (AT1-R), y se discute aún la participación del AT2 (AT2-R). En los últimos años, se descubrió que múltiples actividades biológicas del RAS involucran no sólo la acción de la AngII, sino también la de un conjunto de péptidos bioactivos como la Ang-(1-7). Diversas publicaciones indican que la Ang-(1-7) tendría una actividad antiproliferativa y antiangiogénica, contrarrestando los efectos de AngII en diversos tipos celulares. Dado que AngII puede actuar como una citoquina pro-inflamatoria, investigamos en primer lugar, si el RAS cumple algún rol durante la involución mamaria. Demostramos por primera vez, que la AngII induce una marcada activación de STAT3 en el epitelio mamario in vivo. Dicho efecto, es medidado por el AT1-R. Asimismo, observamosque la inyección de AngII intramamario induce una rápida activación de ERK1/2 y un aumento significativo en el porcentaje de células apoptóticas. Para evaluar el rol de AngII endógena, se trataron ratones con el inhibidor de AT1-R losartan, durante la involución mamaria. El bloqueo del AT1-R desencadenó un aumento en los niveles de factores de supervivencia celular AKT y Bcl-XL, y una disminución de la expresión de los genes de respuesta temprana LIF y TNF-α, del porcentaje de células apoptóticas y de la actividad de MMP-2 y MMP-9. Investigamos además, la relevancia de los dos subtipos del AT1-R, AT1a-R y AT1b-R, en la involución mamaria, mediante el uso de ratones deficientes para dichos receptores. Encontramos un retardo significativo en involución a las 72 y 96 hs en los ratones dobles KO AT1a/AT1b. Dicho retardo, se correlacionó con una disminución de células apoptóticas y de fibras de colágeno y reticulina. A continuación, estudiamos el rol de AngII y Ang-(1-7) en células mamarias normales y tumorales. En células normales epiteliales mamarias, encontramos que ambos péptidos inducen activación de AKT y ERK1/2. Sin embargo, Ang-(1-7) induce menor activación y, la estimulación simultánea con ambas angiotensinas, produce un patrón de activación de AKT similar al desencadenado por Ang-(1-7). Asimismo, AngII es capaz de promover la transición epitelio mesenquimal (TEM) en dichas células, induciendo la expresión de marcadores mesenquimales y disminuyendo la expresión de marcadores epiteliales. Nuevamente, dicho efecto es contrarrestado en células pre-tratadas con Ang-(1-7). En ensayos de migración e invasión, observamos que AngII aumenta significativamente la capacidad migratoria e invasiva de líneas celulares tumorales mamarias, mientras que el pre-tratamiento con Ang-(1-7) disminuye la migración inducida por AngII a valores similares al control. Por último, demostramos que Ang-(1-7) inhibe el aumento desencadenado por AngII sobre los niveles de expresión de ARNm de VEFG y MMP-9, así como en la actividad de dicha metaloproteasa. En conjunto, nuestros resultados sugieren que AngII, a través del receptor AT1-R, juega un papel preponderante en la involución mamaria, identificándose un nuevo rol para el RAS. Asimismo, mientras que AngII promueve el desarrollo tumoral, Ang-(1-7) contrarresta los efectos desencadenados por AngII en células tumorales mamarias.

Abstract:
Mammary gland development is a complex, dynamic process, which undergoes repeated cycles of growth, differentiation, and regression. After lactation, a rapid switch from survival to death signaling occurs, leading to involution. This process consists in massive apoptosis of alveolar epithelial cells and extensive tissue remodeling, together with an increase in the expression of pro-inflammatory factors. The gland is returned to a virgin-like state. On the other hand, the renin angiotensin system (RAS) is actually associated to multiple biological processes, both in physiological and pathological conditions. Most of the effects of AngII, the main effector peptide of the RAS, are mediated by the AT1 receptor (AT1-R), while the role of AT2 (AT2-R) receptor is still controversial. During the last years, it was discovered that multiple of the biological activities of the RAS involve not only the effects of AngII, but also of a group of bioactive peptides, like Ang-(1-7). Several publications suggest that Ang-(1-7) has an antiproliferative and antiangiogenic activity, counteracting the effects of AngII in different cell types. Since AngII can act as a pro-inflammatory cytokine, we first investigated the role of the RAS during mammary involution. We demonstrated for the first time, that AngII strongly induces STAT3 phosphorylation in the mammary epithelial cells in vivo. This effect is mediated by the AT1 receptor. Furthermore, we observed that intra-mammary injection of AngII induces a rapid activation of ERK1/2 and a significant increase in the percentage of apoptotic cells. To define the role of endogenous AngII, mice were treated with the AT1-R blocker losartan, during involution. Blocking the AT1-R triggered an increase in the levels of the survival factors AKT and Bcl-XL, and decreased the expression of the early responsive genes LIF and TNF-α, the percentage of apoptotic cells and the MMP-2 and MMP-9 activity. Moreover, we analyzed the relevance of the AT1 receptor isoforms, AT1a-R and AT1b-R, during involution, in mice deficient for one or both receptor’s subtypes. We found a significant delay in involution by 72 and 96 h in double KO mice AT1a/AT1b, which was correlated with a significantly lower rate of apoptotic epithelial cells and reduced collagen and reticulin deposition. We next studied the role of AngII and Ang-(1-7) in normal and tumor mammary cells. In normal epithelial cells, both peptides induce phosphorylation of AKT and ERK1/2, although Ang-(1-7) activated it in a lesser extent. However, pre-treatment with Ang-(1-7) prior to stimulation with AngII, produces an activation pattern similar to the one triggered by Ang-(1-7) alone. Furthermore, AngII is capable of promoting epithelial mesenchymal transition (EMT) in these cells, inducing the expression of mesenchymal markers and inhibiting the expression of epithelial ones. Once again, this effect was counteracted in cells pre-treated with Ang-(1-7). In migration and invasion assays, we found that AngII significantly increase the migration and invasion capacity of mammary tumor cell lines treated with AngII, while pre-treatment with Ang-(1-7) reduced this effect to control levels. Finally, we demonstrated that Ang-(1-7) inhibits AngII induced mRNA expression levels of VEGF and MMP-9, as well as the activity of this metalloprotease. Our results suggest that AngII, through AT1 receptor, plays a critical role in post-lactational regression, identifying a new function for the RAS. Moreover, while AngII promotes tumor progression, Ang-(1-7) counteracts the effects triggered by AngII in mammary tumor cells.

"Implementos de la técnica de irradiación total de piel con electrones y su verificación mediante dosimetría in vivo a través de detectores luminiscentes ópticamente estimulados" (2015-09-16). Viteri Revelo, Jully Elizabeth. Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La Irradiación total de piel con electrones (TSEI) es una técnica de radioterapia especial que a sido generalmente utilizada para el tratamiento de pacientes adultos con mycosis fungoide, tiene como objetivo suministrar una dosis uniforme a toda la piel del paciente sin afectar los demás órganos de manera significativa. La TSEI también a sido extendida para el tratamiento de otras enfermedades cutáneas tales como el sarcoma de Kaposi y scleromyxodema. El presente trabajo tuvo como objetivo la implementación de la técnica de TSEI así como su verificación mediante la dosimetría in vivo utilizando dosímetros luminiscentes ópticamente estimulados (OSLD) de óxido de aluminio dopados con carbono (Al2O3:C). Una amplia variedad de medidas dosimétricas se llevaron a cabo para el desarrollo de la técnica Stanford para TSEI. Entre las mediciones se encontró el ángulo de inclinación del gantry entre la horizontal y el eje central del haz, la verificación del perfil del campo, la distribución de dosis en profundidad y la determinación del factor de rotación. Para la verificación de la técnica se implementó la dosimetría in vivo con OSLD. Los dosímetros fueron calibrados en condiciones de TSEI, se calibraron en un rango de dosis de 10cGy a 300cGy y asimismo los OSLD fueron caracterizados para encontrar sus cualidades dosimétricas tales como la linealidad con la dosis y su dependencia con el ángulo de incidencia del haz de radiación. Todas las mediciones se realizaron a una distancia de 440cm de SSD de un acelerador lineal Varian Clinac 2100C operando bajo la modalidad de alta tasa de dosis (HDR) con electrones de 6MeV perteneciente al Centro de Terapia Radiante CEDITRIN. Se encontró un ángulo de inclinación de gantry de ±16º desde el eje horizontal, el cual garantiza la uniformidad de la dosis de ±10% sobre una región de más de 170cm de largo de acuerdo al perfil del campo obtenido. También se midió varios puntos excéntricos con OSLD los cuales reportaron para el eje vertical un 2% menos de dosis a los 14cm respecto de la dosis en el eje central y para la distancia de 28cm un 3% más de dosis. Por otro lado el factor de rotación obtenido con OSLD reportó una diferencia del 2.35% respecto al obtenido con la cámara de ionización de placas plano paralelas ROOS, su verificación es de vital importancia ya que representa la disminución de la dosis para cada campo dual debido a la contribución de los campos adyacentes. Los resultados encontrados para la implementación de la dosimetría in vivo reportaron que los dosímetros tienen una respuesta lineal de acuerdo a la dosis recibida en el rango de los 10cGy hasta los 300cGy, de tal manera que no se produce supralinealidad alguna. Con respecto a la dependencia angular de los OSLD para la geometría que corresponde a las condiciones de tratamiento, se encontraron desviaciones menores al 6.5% hasta 75°y desviaciones menores al 48% para 90° y 270° respecto de 0°. Cuando se evalúo la dependencia angular en una geometría semi-ideal, se encontraron desviaciones menores al 1% hasta 75° y desviaciones menores al 16% para 90° y 270° respecto de 0°y para el tercer arreglo que representó una geometría ideal, se encontraron desviaciones menores al 1,3% en todos los ángulos de incidencia respecto de 0°. Finalmente, se evalúo la dosimetría in vivo en 4 pacientes, reportándose desviaciones menores a ±10% entre lo prescrito y lo medido con los OSLDs, estando acorde con los datos encontrados en la literatura y con las recomendaciones protocolarias. Por los resultados obtenidos mediante la dosimetría in vivo con OSLDs implementada se puede concluir que la técnica Stanford para la irradiación total de piel con electrones se logró desarrollar con gran éxito.

"Implicancia del grado de sialilación y complejidad de los oligosacáridos de FSH en la regulación de la función ovárica: estudios clínicos y experimentales" (2012-12-20). Loreti, Rosana Nazareth. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La FSH se sintetiza y secreta como una familia de variantes glicosiladas, las cuales difieren en el grado de sialilación y complejidad de sus oligosacáridos y en la inducción de respuestas biológicas en células blanco, in vivo e in vitro. El objetivo general de esta Tesis Doctoral fue establecer la relación existente entre las características de los carbohidratos presentes en la molécula de FSH y la inducción de respuestas biológicas en las células de la granulosa. La acción de variantes glicosiladas, aisladas de FSH recombinante humana (FSHrh), fue evaluada in vitro utilizando dos modelos experimentales. Se estudió la producción de inhibinas diméricas en células de la granulosa de rata; de esteroides e inhibinas en la línea celular de granulosa humana, KGN, como así también el patrón de expresión génica global y la expresión de enzimas esteroidogénicas y subunidades de inhibinas. Estudios in vitro demostraron que el grado de sialilación y la complejidad de los oligosacáridos presentes en la FSHrh reguló en forma diferencial la producción de esteroides y péptidos. Asimismo, el análisis de ontología génica reveló la capacidad que poseen las variantes glicosiladas de FSHrh de modular en forma diferencial la expresión de genes involucrados en funciones o procesos esenciales para el mantenimiento de la función celular. Las características de las variantes glicosiladas de la FSH circulante fueron determinadas en condiciones fisiológicas y en pacientes infértiles con ciclos regulares. Se observaron alteraciones en el grado de sialilación de la FSH circulante en las pacientes con trastornos reproductivos y en mujeres jóvenes ovodonantes. Los resultados obtenidos demuestran que los oligosacáridos de la molécula de FSH regulan distintas funciones de la célula de la granulosa. Alteraciones precoces en el grado de sialilación de la gonadotrofina podrían comprometer la capacidad reproductiva en la mujer.

Abstract:
FSH is produced and secreted as a family of glycosylation variants which differ from each other in the oligosaccharide sialylation and complexity and in the induction of different biological responses in vitro and in vivo. The aim of this Doctoral Thesis was to establish the relationship between the FSH carbohydrate characteristics and the induction of biological responses in granulosa cells. The effect of recombinant human FSH glycosylation variants were evaluated in two experimental models in vitro. Dimeric inhibin production was assessed in rat granulosa cells, steroids and inhibin production in human granulosa cell line KGN, as well as global gene expression profile and the expression of steroidogenic enzymes and inhibin subunits. In vitro studies demonstrated that sialylation and complexity of rhFSH oligosaccharides induced a differential regulation of steroid and inhibin production. Gene ontology analysis revealed the ability of rhFSH glycosylation variants to differentially modulate the expression of genes involved in essential cell biological processes and molecular functions. Circulating FSH oligosaccharides characteristics were determined under physiological conditions and in infertile patients. Alterations in FSH sialylation were observed in infertile patients and in ovodonors. The results obtained in this study show that FSH oligosaccharides regulate different functions in granulosa cells. Early alterations in FSH sialylation may jeopardize the reproductive capacity in women.

"Implicancias de la farmacogenética en la infección pediátrica por HIV-1" (2011). Bellusci, Carolina Paula. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El gen de resistencia a múltiples drogas (MDR1) codifica para la Glicoproteína P (P-gp), que bombea diversos sustratos hacia el exterior de la célula, entre ellos los antirretrovirales: inhibidores de proteasa (PI). Además, el nivel de expresión de MDR1 está regulado por el receptor nuclear PXR. En el presente trabajo de Tesis Doctoral evaluamos la influencia de los polimorfismos de nucleótido simple (SNP) de MDR1 (T-129C, C1236T y C3435T) y PXR (C63396T) en la infección pediátrica por HIV-1, la respuesta al tratamiento antirretroviral y la expresión de P-gp. Los SNPs C1236T y C3435T cumplirían un rol protector retrasando la progresión a SIDA pediátrico, pero no afectarían la transmisión vertical por HIV-1. Además, evaluamos el efecto de los SNPs en la respuesta antirretroviral al PI lopinavir, demostrando que el SNP C1236T se asocia con una menor concentración plasmática de la droga y una mayor carga viral. Por otra parte, analizamos si los niveles de expresión de P-gp en linfocitos CD4+ se asocian con los SNPs de MDR1 o PXR, sin hallar diferencias entre los distintos genotipos. Sin embargo, observamos que el nivel de expresión de P-gp en linfocitos CD4+ aumenta con la edad y la infección pediátrica por HIV-1. En conjunto, nuestros resultados sugieren que P-gp es un factor clave tanto en la modulación de la infección por HIV-1, independientemente de su función en el transporte de drogas, como en la respuesta a la terapia antirretroviral.

Abstract:
The multidrug resistant gene (MDR1) encodes for P-glycoprotein (P-gp), which pumps several substrates out of the cell, such as the antiretroviral protease inhibitors (PI). In addition, the MDR1 expression level is regulated by the nuclear receptor PXR. In the present PhD Thesis we evaluated the influence of the single nucleotide polymorphisms (SNP) T-129C, C1236T y C3435T of MDR1 and C63396T of PXR in HIV-1 pediatric infection, response to antiretroviral therapy and P-gp expression. The SNPs C1236T and C3435T may play a protective role delaying progression to pediatric AIDS, but we did not observe an effect HIV-1 vertical transmission. In addition, we evaluated the effect of SNPs on antiretroviral response to the PI lopinavir, demonstrating that the SNP C1236T is associated with a lower drug plasma concentration and a higher viral load. We analyzed whether P-gp expression levels in CD4+ lymphocytes are associated with the SNPs of MDR1 or PXR, but no differences between the genotypes were found. However, we observed that P-gp expression levels in CD4+ lymphocytes increase with the age and the HIV-1 pediatric infection. Our results suggest that P-gp is a key factor either in the modulation of the HIV-1 infection, independently of its function in drug transport, or in the response to antiretroviral therapy.

"Implicancias del gen FMR1 en la función ovárica" (2014). Ferder, Ianina C.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El gen FMR1, responsable del Síndrome de Fragilidad del X (SFX), se localiza en el sitio FRAXA en el brazo largo del cromosoma X (Xq27.3), está compuesto por 17 exones, abarca aproximadamente 38 kilobases (kb) y su producto transcripcional es un ARN mensajero de 3,9 kb que puede sufrir splicing alternativo. En su región 5’ no codificante presenta una zona de tripletes CGG que puede variar en longitud. Según el tamaño de la expansión, los alelos se clasifican en normales (5- 44 repeticiones), intermedios (45-54 repeticiones), premutados (55- 200 repeticiones) o con mutación completa (>200 repeticiones). Mientras que la mutación completa es la causante del SFX, el estado de premutación se asocia a otros 2 desórdenes clínicos: Síndrome de temblor/ ataxia asociado a la Fragilidad del X (FXTAS), un desorden neurodegenerativo de inicio tardío y a la Insuficiencia Ovárica Primaria (IOP) asociada a la Fragilidad del X (FXPOI). La IOP se define como la presencia de amenorrea (de al menos 4 meses) antes de los 40 años, que se acompaña de un aumento en los niveles séricos de FSH (a niveles menopáusicos) y de bajos niveles de estradiol (hipoestrogenismo). Es un síndrome muy heterogéneo de patogénesis multicausal tales como alteraciones cromosómicas, enzimáticas, autoinmunidad, causas iatrogénicas e infecciosas. Tiene una incidencia del 1% en mujeres menores de 40 años y del 0,1% en menores de 30. FXPOI es la causa genética conocida más común de la IOP 46, XX y la premutación en FMR1 es responsable del 4- 6% de todos los casos de IOP 46, XX. Aproximadamente el 2% de las mujeres 46, XX con IOP aislada y el 14% de la mujeres 46, XX con IOP familiar son portadoras de la premutación en el gen FMR1. Asimismo, se ha descripto que alrededor del 20% de las mujeres portadoras de la premutación desarrollan IOP. A su vez, las mujeres portadoras se vuelven menopáusicas aproximadamente 5 años antes que las no portadoras. Si bien no todas las mujeres portadoras de la premutación experimentan una temprana pérdida de la fertilidad, todas ellas enfrentan el potencial adelantamiento en la aparición de condiciones asociadas con la deficiencia estrogénica (aumento en el riesgo de osteoporosis y de enfermedades cardiovasculares). Estudios genéticos epidemiológicos sugieren que el comienzo y la gravedad de la disfunción ovárica asociada a FXPOI son variables y podrían estar moduladas, potencialmente, por el largo de las repeticiones CGG y otros factores ambientales. El status de premutación per se pareciera estar influyendo en la expresión de la enfermedad. De hecho, no se ha descripto que mujeres que poseen expansión completa de tripletes (>200 repeticiones y con signos clínicos de Síndrome de Fragilidad del X) desarrollen IOP. Si bien no se conoce el mecanismo por el cual la premutación del gen FMR1 puede causar la disfunción ovárica y la insuficiencia ovárica primaria, se ha postulado que puede ocurrir una disminución inicial del número de folículos o una velocidad acelerada de la atresia. Es sabido que la proteína que codifica este gen, FMRP, se expresa en altas cantidades en células germinales del ovario fetal. Asimismo, se ha descripto que esta proteína actúa como inhibidor de la traducción de algunos ARN mensajeros formando parte de los procesos de silenciamiento génicos mediados por miRNAs. Teniendo en cuenta su función, se ha postulado como posible hipótesis de la patogenia, que un aumento de FMRP en estadios tempranos del desarrollo de los ovocitos podría conducir a una haploinsuficiencia de proteínas involucradas en este proceso, provocando una disminución del pool inicial de folículos. Sin embargo, y dado que en FXTAS se ha observado un aumento del ARN mensajero del gen como consecuencia de la premutación, se postula como mecanismos alternativo la existencia de un aumento del ARN mensajero en el ovario que ejerza un efecto tóxico en el tiempo, con el consecuente incremento de la atresia folicular. Ninguno de estos mecanismos han sido aún comprobados en el ovario, más aún la función fisiológica de la proteína en el mismo no está establecida. No se conoce además, si existe expresión diferencial a lo largo del desarrollo folicular. Considerando la escasa información que existe acerca de FMR1 y su expresión en ovario, nuestro trabajo consistió, en una primera fase, en el estudio de la expresión de la proteína FMRP y su mensajero a lo largo de la foliculogénesis, en un modelo de rata. Se utilizaron 3 grupos de ratas: ratas prepuberales de 18 días, ratas prepuberales de 21-23 días tratadas con dietilestilbestrol (DES) para enriquecer a los ovarios en folículos antrales tempranos y ratas prepuberales de 21-23 días tratadas con gonadotrofina coriónica equina (PMSG) para enriquecer los ovarios en folículos preovulatorios. En la primera parte del trabajo analizamos, por inmunohistoquímica, la expresión de FMRP en los distintos tipos celulares del folículo. Hallamos que la proteína se expresa en células de la granulosa, de la teca y en células estromales, con excepción de un grupo de células que rodea al folículo. La expresión se detectó en los folículos en los tres estadios del desarrollo estudiados: preantrales, antrales tempranos y preovulatorios. La expresión de la proteína FMRP fue estudiada también por Western blot en los tres tipos foliculares. Observamos una menor expresión en folículos preantrales y una mayor expresión en estadios más avanzados de la foliculogénesis. Por otra parte, se detectaron al menos 4 isoformas de la proteína cuyos patrones de expresión resultaron diferentes a los observados en testículo y cerebro. Teniendo en cuenta la función de la proteína como parte del complejo de silenciamiento post-transcripcional, estos resultados nos permitirían estimar que las diferencias observadas en los niveles de expresión de la proteína tendrían un rol en el correcto desarrollo del folículo. Asimismo, la presencia de isoformas distintivas en el ovario sugeriría una función específica para algunas de ellas en la gónada. La segunda parte del trabajo consistió en el estudio de la expresión del ARN mensajero de Fmr1 en los 3 estadios foliculares. Por PCR en tiempo real observamos que el patrón de expresión era opuesto al que se obtuvo para la proteína. En los folículos preovulatorios, el nivel del ARN fue menor respecto al de los estadios anteriores. Estos resultados sugerirían que la expresión del mensajero y su proteína en el ovario están regulados de manera diferente y posiblemente independiente. Por otro lado, identificamos por RT-PCR y posterior secuenciación, la existencia de varias isoformas del ARNm del gen, resultantes del splicing alternativo del mismo. Entre ellas, detectamos la isoforma que contiene al exón 12, la cual no ha sido previamente descripta en rata. El último aspecto que quisimos abordar en nuestro estudio fue el efecto biológico de la introducción de tripletes en el rango de la premutación sobre una línea celular de células de granulosa humana (KGN). Par tal fin se transfectaron las células con un plásmido conteniendo tripletes en el rango normal o de la premutación, río arriba de un gen reportero (GFP). Luego de 18 horas de transfección, los niveles de ARNm del gen reportero resultaron más elevados en las células que poseían los tripletes en el rango de la premutación, en concordancia con lo observado en diferentes experimentos y pacientes con FXTAS. Asimismo, detectamos una menor cantidad de células que expresan la proteína GFP, en presencia del plásmido con la premutación, en todos los tiempos de transfección estudiados. A nivel neuronal se ha relacionado al estado de premutación con posibles efectos apoptóticos en la célula. Si bien nuestros estudios aún no demuestran que el efecto de la introducción de tripletes en el rango de la premutación resulte en un aumento en la apoptosis de las células KGN, los resultados obtenidos en esta tesis abren la posibilidad de que este mecanismo sea analizado en un futuro. En conclusión, en esta tesis se describe por primera vez la expresión de la proteína FMRP y de su mensajero a lo largo del desarrollo folicular, y la presencia de algunas isoformas distintivas, producto del splicing alternativo del gen. Asimismo, se iniciaron los estudios tendientes a demostrar el efecto patogénico que posee la expresión de tripletes expandidos en células del ovario.

Abstract:
The FMR1 gene, responsible for the Fragile X Syndrome (FXS), is located in the FRAXA site of chromosome X. The gene is composed of 17 exons, spans about 38 kb and encodes an messenger RNA (mRNA) of 3.9 kilobases (kb) that can be alternatively spliced into a number of different isoforms. The 5’ UTR of the FMR1 gene presents a CGG repeat that is unstable and therefore variable. Based on the size of the expansion, alleles are classified as normal (5–44 trinucleotide repeats), intermediate (45- 54 repeats), premutated (55–200 repeats), or fully mutated (>200 repeats). While full mutation is the responsible for FXS, the premutation condition has been associated to other 2 clinical disorders: Fragile X-associated tremor/ataxia syndrome (FXTAS), a neurodegenerative disorder of late onset and to the Fragile X- associated primary ovarian insufficiency (FXPOI). Primary ovarian insufficiency (POI) is defined as amenorrhea (for at least 4 months) before age of 40, an increase in serum levels of FSH (to menopausal levels) and low levels of estradiol (hypoestrogenism). This syndrome is very heterogeneous with a multicausal pathogenesis, and any of the following: chromosomal, enzymatic, iatrogenic, autoimmune or infectious aberration may be the cause of the disease. It has an incidence of 1% in women under age of 40 and of 0.1% below 30 years of age. FXPOI is the most common known genetic cause for IOP and the premutation condition is responsible for 4-6% of all cases of 46, XX IOP. About 2% of women 46, XX with IOP and 14% of women 46, XX with familial IOP, carry the premutation in the FMR1 gene. Moreover, it has also been described that around 20% of women carrying the premutation, become menopausal around 5 years earlier than not carriers. The premutation status seems to influence the expression of the disease. In fact, no full mutated women with IOP have been described. While not all women carries of the permutation experience an early loss of fertility, all carriers face the potential advance in the onset of the conditions associated with estrogenic deficiency (higher risk for osteoporosis and hearth diseases). Epidemiologic genetic studies also suggest that the onset and severity of ovarian dysfunction associated to FXPOI is variable, and could be potentially modulated by the CGG repeat length and environmental factors. Even though the underlying mechanism by which the FMR1 premutation is responsible for the ovarian dysfunction and POI is not known, it has been suggested that an initial decrease of the number of follicles or an accelerated rate of atresia may take place. The protein encoded by the FMR1 gene, FMRP, is highly expressed in germ cells in the fetal ovary. The protein acts as a translation inhibitor of some target mRNA, most likely via the microRNA silencing complex. Given that in FXTAS an increase in FMR1 mRNA has been observed, another possible mechanism for FXPOI is that high levels of mRNA exert a toxic effect causing an increase in follicular atresia. None of the postulated pathogenic mechanisms has been demonstrated in the ovary. Moreover, the physiological role of FMRP in the gonad has not been established, and the expression pattern of the protein during follicular growth remains unknown. Considering that there is limited information related to FMR1 expression and function in the ovary, the goal of our work was, initially, to study the expression of FMRP protein and its messenger during folliculogenesis in a rat model. For this propose, three groups of rats were used: 1- prepubertal rats of 18 days, 2- prepubertal rats of 21-23 days treated with Diethylstilbestrol (DES) to enrich ovaries with early antral follicles and 3- prepubertal rats of 21-23 days treated with equine chorionic gonadotropin (PMSG) to enrich ovaries with preovulatory follicles. The expression of FMRP in the rat ovarian follicular cells was analyzed by immunohistochemistry (IHQ) and Western blot (WB). By IHQ we found that the protein is expressed in granulosa, theca and stromal cells, except in a group of cells surrounding the follicle, mainly in the cytoplasm. Expression was detected in follicles at all stages of folliculogenesis: preantral, early antral and preovulatory. After WB assays, lower expression in preantral follicle was detected, whereas higher levels of FMRP were observed in later stages of folliculogenesis. Moreover, at least 4 isoforms of the protein were detected whose expression pattern differed from that observed in testis and brain. Considering FMRP’s function as part of the post -transcriptional silencing complex, these results may suggest that the differences observed at FMRP expression levels, could exert a role in the proper development of the follicle. Furthermore, the presence of distinctive isoforms in the ovary could imply a specific function for some of them in de gonad. In the second part of the work we studied the messenger RNA (mRNA) expression of Fmr1 in the three follicular development stages. Using quantitative RT-PCR (qRT-PCR) we found that the mRNA expression pattern was opposite to that observed for the protein: in preovulatory follicles, mRNA level was lower compared to earlier stages. These results suggest that mRNA and protein expression in the ovary may be regulated at different and perhaps independent levels. In addition, by RT-PCR and subsequent sequencing, we identified several messenger isoforms resulting from alternative splicing. Among them, we detected the variant including exon 12, which has not been previously described in other rat tissues so far analyzed. The last aspect we addressed in our work was the biological effect that the CGG repeats in the permutation range could exert on a human ovarian granulosa cell line (KGN). Cells were transfected with a plasmid containing repeats in the normal or in the premutation range cloned upstream of the GFP reporter gene. After different times of transfection, mRNA of the reporter gene was measured by qRT- PCR. We found that after 18 hours, the levels of mRNA was higher in cells transfected with the repeats in the premutation range comparing to the levels found for those with the normal one. These results are in agreement with the observations reported for FXTAS patients and for animal models of the syndrome. Moreover, when cells were transfected with the permutated plasmid, we detected fewer cells expressing the GFP protein in all the transfection times assayed. In neurons, the permutation state has been associated with possible apoptotic effects in the cell. Even though our preliminary studies do not yet show that transfection of KGN cells with the premutation plasmid results in increased apoptosis, the results obtained in the present work open the possibility for this mechanism to be analyzed in a future. In conclusion, this work describes, for the first time, the expression of the FMRP protein and its messenger during folliculogenesis in a rat model. Moreover, the presence of some distinctive isoforms resulting from the alternative splicing of the gene in the ovary is also described. Although we found an increase in mRNA levels and reduced protein expression of the reporter gene containing permutated repeats, further studies are needed to elucidate the pathogenic mechanism of the expanded triplets in the ovary.

"Implicitación de aplicaciones racionales" (2010). Botbol, Nicolás S.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Implosiones de microesferas constituídas por una burbuja fusil rodeada por un manto denso" (1985). Szapiro, Benito Teodoro. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Importancia de la información espectral y olfativa en las estrategias de recolección de néctar de la abeja Apis mellífera L." (1991). Giurfa, Martín. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Impresión óptica de nanopartículas metálicas" (2017-03-23). Gargiulo, Julián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las nanopartículas metálicas (MNPs) presentan propiedades optoelectrónicas únicas que dependen de su forma y su tamaño y que no están presente en partículas de tamaños macroscópicos. Estas propiedades surgen a partir de sus resonancias plasmónicas superficiales localizadas (LSPRs), que producen intensificaciones enormes del campo electromagnético cerca de la superficie de las MNPs y aumentan sus secciones eficaces de dispersión y absorción. Estos efectos han motivado el uso de las MNPs en muchas aplicaciones del campo de la nanotecnología, incluyendo el sensado ultra-sensible, celdas solares, fotónica, microscopía, catálisis, medicina y farmacéutica. La fabricación de MNPs puede conseguirse mediante métodos top-down(de arriba hacia abajo) o bottom-up(de abajo hacia arriba). En los primeros, un proceso litográfico o de ataque químico le agrega morfología a una película metálica previamente depositada sobre un sustrato. De esta manera pueden fabricarse estructuras en dos dimensiones con alta precisión y resolución. Sin embargo, la calidad del material es en general pobre y se obtienen partículas policristalinas con bordes rugosos. Además, la combinación de dos o más materiales mediante estas técnicas es complicada. Por otro lado, MNPs de una gran variedad de formas y composiciones pueden ser producidas en procesos bottom-up mediante sintesis química. Estas MNPs son monocristalinas y se les puede dar funciones químicas o biológicas específicas en su superficie. Sin embargo, las MNPs coloidales se obtienen en suspensiones líquidas y no es fácil controlar su ensamblado en posiciones precisas de un sustrato. Uno de los desafíos actuales de la nanotecnología es el desarrollo de un método para controlar su ensamblado con precisión nanométrica, lo que permitiría la aplicación de la enorme librería de partículas coloidales en nano y micro-dispositivos. La impresión óptica de MNPs es un método puramente óptico que puede cumplir este objetivo. El mismo emplea láseres fuertemente enfocados para atrapar MNPs desde una suspensión coloidal y llevarlas individualmente hasta posiciones específicas de un sustrato con gran precisión y versatilidad de diseño. Debido a que esta basada en fuerzas ópticas y que la interacción de la luz depende fuertemente de la forma y el material de la MNP, la técnica tiene un gran potencial para la deposición selectiva de diferentes tipos de MNPs y su combinación en patrones organizados. Esta tesis presenta un estudio sistemático de la precisión y la resolución de la técnica de impresión óptica de nanoparticulas metálicas. Su potencial, sus limitaciones y perspectivas son analizadas en base a experimentos y consideraciones teóricas. En primer lugar, la precisión para inmovilizar MNPs únicas fue estudiada en función de la potencia del láser de impresión, para MNPs esféricas de oro y plata. Se identificaron dos regímenes diferentes, dependiendo de si el láser utilizado estaba o no sintonizado con la LSPR de la partícula. Sorprendentemente y a pesar de ser una técnica óptica de campo lejano, es posible imprimir MNPs con una precisión cercana a los 50nm, muy por debajo del límite de difracción. Luego se estudió la resolución de la impresión óptica, entendida como la capacidad de imprimir dos o más partículas a distancia controlada. Antes de este trabajo hubo varios reportes en donde se mostró que era imposible imprimir dos partículas a distancias menores que 200 - 300 nm, debido a una repulsión de naturaleza incierta. Este hecho constituyó una importante limitación en la técnica, que impidió su implementación para fabricar circuitos de MNPs conectadas o estructuras con partículas acopladas plasmonicamente. En esta tesis se estudiaron los orígenes de esa repulsión y se encontró que estaba relacionada al calentamiento óptico de las partículas ya impresas sobre el sustrato. Se propusieron y pusieron a prueba experimentalmente varias estrategias para lograr la impresión de partículas conectadas, lográndose por primera vez la impresión óptica de partículas conectadas y con orientación bien definida. Finalmente, la impresión óptica fue utilizada como una herramienta para el estudio sistemático de reacciones químicas el nivel de partícula única. NPs de oro impresas ópticamente fueron usadas como semillas a partir de las cuales se obtuvieron NPs más grandes mediante la reducción asistida por plasmónica de HAuCl4acuoso. De esta manera la geometría final de cada partícula se controló independientemente.

Abstract:
Metal nanoparticles (MNPs) present unique size and shape dependent optoelectronic properties that are not present in larger particles or the bulk material, which arise from their localized surface plasmon resonances (LSPRs). LSPRs produce dramatic enhancements of the electromagnetic field close to the surface of the particle as well as large scattering and absorption cross-sections. These particular properties have motivated the use of MNPs in many applications in the field of nanotechnology, including ultra-sensitive sensing, light harvesting, imaging, photonics, catalysis, and medical and pharmaceutical therapies. The fabrication of MNPs can be achieved by top-down or bottom-up approaches. In thefirst, lithographic or etching processes add morphology to a thin metallic film previously deposited on a substrate. In this way, two-dimensional nanostructures can be fabricated with high precision and resolution, but the material quality is usually poor leading to polycrystalline nanoparticles with rough surfaces. Also, combining two or more materials is challenging. On the other hand, bottom-up produced colloidal MNPs can be obtained by chemical synthesis with a vast variety of shapes and compositions not available by top-down approaches. These nanoparticles are usually monocrystalline and can hold specific biological or chemical functions at their surfaces. However, colloidal nanoparticles are obtained in liquid suspensions and controlling their assembly onto precise positions of a substrate is not straightforward. Developing a method to control their assembly onto substrates with nanometric precision is one of the open challenges of nanotechnology. Such a method would enable the application of the enormous library of colloidal nanoparticles on nano- and micro-devices. Optical printing is a powerful all-optical method that can accomplish this goal. It employs highly focused laser beams to trap colloidal nanoparticles from suspension and deliver them individually into specific locations on a surface with high accuracy and flexibility of pattern design. Since it is based on optical forces and the interaction of light with MNPs is size and composition dependent, the technique has a strong potential for selective deposition of different kinds of MNPs and their combination in organized patterns. This thesis presents a systematic study of the precision and resolution of optical printing applied to MNPs. Its potential, limitations and perspectives are analysed based on measurements and theoretical considerations. First, the precision of optical printing to immobilize single MNPs was studied as a function of the laser power, for MNPs made of gold and silver. Two different regimes were identified depending on whether the laser used is tuned to the LSPR or not. Remarkably, in spite of being a far-field optical technique, MNPs can be printed with a precision of about 50 nm, well beyond the diffraction limit. Next, the resolution of optical printing, i.e. the capacity to print two or more MNP at controlled distances, was addressed. Before this work, several reports had shown that it was impossible to print two MNPs closer together than 200 - 300 nm, due to a repulsion of unclear nature. This constituted an important limitation that has obstructed the use of optical printing for the fabrication of plasmonically coupled structures and circuits of connected NP. In this thesis, the origin of this repulsion was investigated and found to be related to optical heating of the already printed MNP. Furthermore, several strategies to fectively print connected MNPs were proposed and tested, accomplishing for the first time optical printing of connected nanoparticles with well-defined orientation. Finally, optical printing was applied as a tool for studying systematically chemical reactions at the single MNP level. As an example, optically printed gold NPs were used as seeds to obtain larger NPs by plasmon-assisted reduction of aqueous HAuCl4. In this way, supported MNPs were reshaped in situ to controlled final morphologies.

"Inactivación de la tita-Hemolisina del clostridium welchii tipo A, por mecanismos biológicos" (1944). De Simone, Corina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Incidencias teórico-prácticas del balance hídrico y propuesta de una mejor aproximación a la región húmeda argentina" (1977). Vargas, Walter Mario. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El trabajo realizado tiene como propósito fundamental el analizar las series del balance hídrico de Thornthwaite poniendo especial énfasis en los aspectos teóricos y metodológicos importantes para la aplicación. Primeramente, dada la inexistencia de las formas matemáticas del balance, en los trabajos originales, se plantean las mismas con el objeto de ser tratadas por computadora. Se demuestra que el balance medio normal produce errores sistemáticos en la estimación de las variables causadas por la no linealidad del almacenaje en los procesos de secado. Tendientes a solucionar ese problema y el de la exclusividad de una condición por mes (exceso o déficit) se propone una representación del balance que tiene como elementos los promedios reales de las variables y su probabilidad. Se desarrolla una metodología para obtener la evapotranspiración potencial en un balance seriado cuando no se conocen las temperaturas normales. La misma está basada en obtener los índices calóricos anuales y mediante el uso de series climáticas argentinas se estima el error en las circunstancias extremas. Con el objeto de obtener las variables hídricas para cualquier capacidad de retención conociendo las mínimas condiciones para una capacidad de retención dada se desarrollan expresiones matemáticas basadas en los procesos de secado. El mismo análisis permite obtener las condiciones de dependencia de las variables hídricas respecto a la capacidad de retención. Se ensaya un ajuste de distribuciones tipo J a déficit, exceso y variación estacional y se verifica que los coeficientes de ajuste son excelentes. Se prueba que regionalmente la distribución es similar en todos los puntos y que es posible obtener una relación simple de las constantes de la distribución en función de la latitud y la longitud. Se analiza la clasificación climática dada por Thornthwaite y en función de que los índices promedios pueden no ser los más frecuentes, se propone una variante que toma como elementos el intervalo más probable y la probabilidad de los extremos. Se verifica que la clasificación es prácticamente invariante con respecto al tipo de suelo, aunque en términos estadísticos las series de los índices para dos capacidades de retención diferentes están corridas en el promedio. Finalmente se ensayan un modelo de cadena de Markov y otro aleatorio para la estimación de la probabilidad de ocurrencia de las variables hídricas en períodos de n meses. Por otra parte se aproxi ma una ley exponencial dependiente del período n para estimar la probabilidad de n meses consecutivos de ocurrencia de una variable hídrica. El ajuste como en todos los casos arrojó un coeficiente cuadrático superior o igual a 0.90.

"Incorporación de L-Leucina en Saccharomyces Cerevisiae : Sistemas transportadores en células enteras y protoplastos" (1986). Kotliar, Natalio. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El estudio de la incorporación de L-leucina en levaduras S.cerevisiae, cepas silvestre JB65 y mutante deficiente en el translocador ATP/ADP mitocondrial JB64, permitió establecer que la metabolización de sustratos generadores de energía son capaces de estimular el proceso de incorporación del aminoácido. Asimismo, en células energizadas por preincubación con D-glucosa o etanol, la incorporación de L-leucina es significativamente mayor que en células ayunadas, y resulta inhibida por el protonóforo 2,4-dinitrofenol. En la medida de la entrada del aminoácido a la célula se distinguen dos etapas, una de ligado y otra de translocación a través de la barrera de permeabilidad. El estudio cinético de la translocación señala la existencia de dos sistemas definidos como sistemas S1, de alta afinidad y baja velocidad máxima, y sistema S2, de baja afinidad y alta velocidad máxima. Como respuesta a la energización se produce un incremento en las velocidades máximas, sin verificarse variaciones en las constantes de afinidad. En la etapa de ligado se determinó la existencia de dos poblaciones de sitios de unión que operan en el rango de concentraciones de los sistemas de translocación y se definieron, por extensión, S1 y S2. La energización por preincubación con D-glucosa produce un incremento del número de sitios de unión en el sistema S1 (N1). Por digestión enzimática de la pared celular: se obtuvieron protoplastos de levadura de las dos cepas en estudio, verificándose su capacidad para llevar a cabo la incorporación de L-leueina. En protoplastos se estableció la existencia de los dos sistemas de translocación y de ligado definidos en células enteras. La comparación de los parámetros cinéticos calculados en protoplastos, con los calculados en células enteras, sugieren que los componentes esenciales para el ligado y la translocación que determinan los valores de dichos parámetros, se hallan íntimamente asociados a la membrana citoplasmática; no se pierden al llevar a cabo la digestión de la pared celular. Por otro lado, el estudio de los efectos de reactivos de grupos tioles sobre la entrada de L-leucina en células enteras y protoplastos, permitió establecer la participación de distintos grupos sensibles a estos compuestos, distinguiéndose, por su respuesta diferencial, las etapas de ligado y translocación de los dos sistemas. No se detectaron sitios sensibles orientados hacia el medio externo y mediante el empleo de reactivos capaces de penetrar a través de la barrera de permeabilidad se observaron estimulaciones e inhibiciones de la incorporación de L-leucina. En algunos casos, los efectos inhibitorios se relacionaron con un déficit en el aporte energético ya que se verificaron inhibiciones de la respiración celular, concomitantes con la inhibición de la entrada del aminoácido. Finalmente, se evaluó el gradiente de pH de membrana citoplasmática mediante el estudio de distribución intraextracelular de ácido benzoico. Se puso en evidencia que por consumo de sustratos generadores de energía se produce un incremento del ΔpH, que como parte del ΔμH+, constituye la fuerza impulsora del transporte. Esto permite interpretar, en términos de la hipótesis quimiosmótica, la estimulación observada sobre la entrada de L-leucina por el etanol y la D-glucosa y el efecto inhibitorio del 2,4-dinitrofenol, reactivo que produjo un colapso de dicho gradiente.

"Incorporación de información suprasegmental en el proceso de reconocimiento automático del habla" (2011). Evin, Diego Alexis. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Desarrollar sistemas informáticos capaces de interactuar con sus usuarios de la forma más natural y eficiente posible es uno de los requisitos esenciales para lograr la integración del mundo tecnológico en la so- ciedad. En ese marco el habla se presenta como una de las formas de comu- nicación más eficientes y naturales que posee el ser humano. Es por ello que desde el origen mismo de la investigación en ciencias de la computación, el desarrollo de interfaces hombre-máquina a través de la voz ha despertado un gran interés. Uno de los elementos que componen dicha interfaz oral es el Re- conocimiento Automático del Habla (RAH), área de la Inteligencia Artificial que busca desarrollar sistemas computacionales capaces de transformar un fragmento de habla en su trascripción textual. El RAH es un problema de gran complejidad, lo que se puede atri- buir principalmente a dos factores: en primer lugar a la variabilidad de la señal de habla, que responde a múltiples factores como caracte- rísticas particulares del locutor y medio acústico donde se registra, la velocidad y estilos de elocución; y en segundo lugar a la necesidad de encontrar palabras individuales en un continuo acústico, es decir realizar al mismo tiempo las tareas de segmentación y clasificación. Si bien se pueden encontrar en los últimos años avances significa- tivos en el desempeño de los sistemas de RAH, aún hay mucho por mejorar en relación a la capacidad de reconocimiento que presentan los oyentes humanos para las mismas tareas y bajo las mismas con- diciones. Varias hipótesis intentan explicar esta diferencia de desem- peño: información insuficiente o representada de manera inadecuada en los sistemas automáticos, problemas en el modelado del sistema de reconocimiento, insuficientes cantidades de ejemplos empleados para lograr tasas de reconocimiento similares, etc. Con respecto al primero de estos puntos, los sistemas de RAH no utilizan toda la información acústica disponible en la señal de habla. Dichos sistemas interpretan el habla como secuencias de unidades cu- yas duraciones se encuentran a nivel segmental (fonético). Por lo tanto procesan la información acústica en la escala segmental para obtener las hipótesis de secuencias de unidades emitidas. Sin embargo estudios tanto psicoacústicos como psicolingüísticos resaltan el rol crucial que posee la información de una escala temporal mayor: la información su- prasegmental, en la percepción humana. Se entiende por información suprasegmental toda aquella que está dada en segmentos de duración superior al fonético, y cuyas propiedades están determinadas princi- palmente por la prosodia de una frase. Además se argumenta que en la tarea de reconocimiento e interpre- tación del habla los seres humanos emplean e integran varios niveles de conocimiento lingüístico, muchos de los cuales aún no han sido incorporados o aprovechados eficientemente en el RAH. A partir de esas evidencias resulta interesante investigar cuál es el aporte que puede brindar la información suprasegmental o prosódica para mejorar el desempeño de los sistemas de RAH estándar. En esta Tesis se investiga el empleo de información suprasegmental como factor de mejora en el desempeño, así como alternativas para su integración en sistemas de RAH estándar. En el Capítulo 1 se exponen argumentos que muestran la necesidad de mejorar los sistemas de RAH actuales a la luz del desempeño mos- trado en esta tarea por los seres humanos. Se presentan las bases de los mecanismos de producción, percepción y reconocimiento humano, así como un resumen de las principales aproximaciones al reconocimiento automático. Posteriormente se introducen los aspectos generales de la información suprasegmental y su rol en el mecanismo de comunica- ción oral. Seguidamente se hace una revisión de los antecedentes en el empleo de información suprasegmental dentro del proceso de RAH. Finalmente se delinean los objetivos de esta tesis. Debido a que en esta tesis se analiza la utilización de información suprasegmental en distintos módulos de los sistemas de RAH conven- cionales, en el Capítulo 2 se presenta la arquitectura y componentes principales de los reconocedores del habla actuales. Se detalla la arqui- tectura y forma de funcionamiento de estos sistemas, los fundamentos teóricos de los modelos de Markov, así como la forma de medir sus desempeños. El Capítulo 3 profundiza los aspectos de la información supraseg- mental introducidos en el Capítulo 1. Hace principal hincapié en las características prosódicas del español de Argentina, y presenta las téc- nicas computacionales empleadas en la tesis para la extracción auto- mática de sus atributos a partir de la señal de habla. El Capítulo 4 contiene una serie de estudios en que se busca vincular patrones de los atributos suprasegmentales con información lingüística útil para el proceso de RAH. En el primero de estos estudios se ana- liza la posibilidad de establecer agrupamientos de frases entonativas a partir de semejanzas en sus atributos suprasegmentales. El segundo experimento indaga la posibilidad de obtener información del número de palabras de contenido presentes en una frase, a partir de la mor- fología de sus curvas de F0. Finalmente el tercer estudio explora la viabilidad de establecer la tipología acentual de las palabras finales de frase utilizando rasgos suprasegmentales. En el Capítulo 5 se presenta una metodología para utilizar informa- ción suprasegmental a nivel de los modelos acústicos de un sistema de RAH. Específicamente se realiza una distinción entre modelos acústi- cos correspondientes a sonidos vocálicos acentuados y no acentuados. La metodología propuesta se evalúa y contrasta con distintas versiones de sistemas de RAH convencionales, empleando un corpus de habla continua. En el Capítulo 6 se expone una alternativa para emplear informa- ción suprasegmental durante la selección de hipótesis de reconoci- miento. Esta alternativa contempla la definición de un índice de se- mejanza entonativa entre la curva de F0 correspondiente a la frase a reconocer, y las posibles curvas de F0 correspondientes a las hipótesis de reconocimiento y obtenidas mediante un proceso de predicción. Se propone y desarrolla un modelo para su implementación y se realizan comparaciones de desempeño con respecto a un sistema de RAH de referencia. Finalmente en el Capítulo 7 se presentan las conclusiones y aportes de la tesis, juntamente con posibles líneas de investigación futura.

Abstract:
The development of computational systems capable of interacting with users in the most natural and efficient way is one of the essential re- quirements for the integration of the technological world in society. In this context speech is presented as one of the most efficient form of communication mechanisms available for human beings. That is why from the very beginning of research in computer science, the de- velopment of human-machine interfaces through voice have gain great interest. One of the elements that compose such interfaces is the Automatic Speech Recognition (ASR). ASR is a field of Artificial Intelligence which searches for the development of computational systems that transform speech segments into text transcriptions. ASR is a very complex problem, which can be attributed mainly to two factors: first, to the huge variability of the speech signal, depend- ing on multiple factors such as the speaker, the acoustic environment, linguistic context, speech rate, emotional states, locution styles, and many others; and secondly to the need of finding isolated words in an acoustic continuum, that is to say solving segmentation and classifica- tion problems simultaneously. Even thought we can find significant advances in the performance of ASR systems in recent years, there is still much space for improvement to match human recognition ability for the same tasks under the same conditions. Several hypotheses attempt to explain these differences on perfor- mance: insufficient information, inadequate way to represent it, prob- lems in modelling, insufficient quantities of used examples to achieve similar recognition rates, etc. Regarding the first point, ASR systems do not use all available acous- tic information in speech signal. These systems interpret the speech as sequences of units whose durations spans in a segmental (phonetic) level. Therefore they process the acoustic information at a segmental scale to obtain the hypotheses of sequences of uttered units. Nevertheless psychoacoustic and psycholinguistic research empha- size the essential role of information at a higher temporal level for the human speech perception: the suprasegmental information. Any information whose duration spans over several phonetic units can be thought as suprasegmental, and its properties are determined princi- pally by the prosody of an utterance. Furthermore, it is argued that during the task of speech recognition and interpretation, various linguistic knowledge are integrated and used. It has been also argued that no much of linguistic knowledge have yet been incorporated or utilized efficiently in the ASR From these evidences it seems relevant to investigate whether the suprasegmental or prosodic information could contribute to improve the performance of standard ASR systems. In this thesis the use of the suprasegmental information is investi- gated as a factor for improving performance, as well as an alternative for the integration of this information into the architecture of standard ASR systems. Chapter 1 arguments are presented that show the need to improve current ASR systems in the light of the performance showed by human speech recognition. The basis and mechanisms of production, perception and human speech recognition, as well as main approaches for ASR are revised. Subsequently the general aspects of the suprasegmental information and its roll in the mechanism of oral communication are introduced. After that, a review of the employment of information into the process of ASR is devised. Finally, we discuss the objectives of this thesis. Because this thesis examines the use of suprasegmental informa- tion in different modules of the conventional ASR systems, Chapter 2 presents the architecture and main components of current speech recognizers. The functionality, theoric foundations of hidden Markov models, and the performance evaluation methodology are detailed. Chapter 3 discusses in more detail the aspects of the suprasegmental information introduced in Chapter 1. Special emphasis is given to the prosodic characteristics of Argentinian Spanish. The computational techniques employed in this dissertation for the automatic extraction of these attributes from the speech signal are presented. Chapter 4 contains a series of studies that seeks to link attributes of suprasegmental patterns with linguistic information, useful in the ASR process. In the first experiment, the possibility of establishing groupings of intonative phrases based on similarities between their suprasegmental attributes is analyzed The second experiment explores the possibility of obtaining infor- mation about the number of content words contained in a phrase by analyzing the shape the of F0 curves. Finally the third study explores the feasibility of establishing the accentual typology of final words in sentences using suprasegmental features. Chapter 5 introduces a methodology for using suprasegmental in- formation at the level of acoustic models in a conventional ASR sys- tem. Specifically a distinction is made between acoustic models for accented and unaccented vowel sounds. The proposed methodology is evaluated and compared with different versions of conventional of ASR systems, using a corpus of continuous speech. Chapter 6 exposes an alternative for using suprasegmental informa- tion in the posprocessing of ASR. This alternative defines an index of intonative similarity, measured between the F0 contour estimated from the utterance to recognize, and the one corresponding to the alternative recognition hypotheses. This idea is implemented and compared to a reference standard ASR system. Finallly Chapter 7 concludes the Thesis. An overview of the main findings and contributions of this thesis is presented together with future works in this line of research.

"Incremento del crecimiento y la sobrevida de juveniles tempranos de la langosta de agua dulce "pinzas rojas" Cherax quadricarinatus (Parastacidae) mediante el mejoramiento de las prácticas de cultivo" (2013). Calvo, Natalia Soledad. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La Dirección Nacional de Acuicultura propone la investigación de las especies exóticas ya introducidas y el mejoramiento de las tecnologías de cultivo actualmente utilizadas. Por esto, la presente tesis abordó dos temas principales para contribuir con información relevante al cultivo de Cherax quadricarinatus: el estudio de la vulnerabilidad nutricional de los juveniles en la fase de hatchery y la optimización del uso de refugios durante la fase de pre‐engorde para disminuir el canibalismo. Se observó que los juveniles III (primer estadio de alimentación exógena) y 1 de gramo necesitan sólo 2 y 9 días de alimentación inicial, respectivamente, para acumular las reservas necesarias para mudar al estadio siguiente. El tiempo sin alimento que lleva a la muerte a los juveniles III y de 1 gramo sin poder mudar al estadio siguiente es de 9 y 51 días respectivamente, y son los valores más altos reportados para especies de decápodos. Durante largos periodos de inanición los juveniles consumen las reservas de proteínas y lípidos almacenadas en hepatopáncreas y músculo abdominal. Sin embargo, al suministrarles alimento los juveniles muestran gran capacidad de recuperación, reanudando su crecimiento rápidamente, completando sus reservas y generando nuevas reservas de glucógeno en el músculo abdominal. No se observó actividad enzimática asociada a la movilización de reservas y solo la actividad lipasa (digestiva) se mostró afectada por la inanición. Respecto del uso de refugios, por cada m2 de tanque en la fase de pre‐engorde, 2,55 m2 de red cebollera colocada en forma aleatoria es suficiente para disminuir la mortalidad. Esta información constituye un avance en el conocimiento teórico y un aporte directo al mejoramiento de la producción de una especie con importancia para la acuicultura de nuestro país.

Abstract:
The Dirección Nacional de Acuicultura stimulates the research on introduced species and improvement of the aquaculture practices currently in use. In order to contribute with relevant information on Cherax quadricarinatus culture, the present thesis addressed two important topics: the study of the nutritional vulnerability in juveniles during the hatchery phase, and the optimization of shelter use to reduce cannibalism among juveniles during the nursery phase. Results showed that stage III (developmental stage from which juveniles feed exogenously) and 1 gram juveniles need to feed for a period not longer than 2 and 9 days, respectively, to accumulate enough reserves for successful molting to the following stage. A 9 and 51‐day period of starvation leads to the death without molting of stage III and 1 gram juveniles, respectively, with these values being the highest ones reported for decapod species. Protein and lipid reserves are depleted in the hepatopancreas and abdominal muscle after a long starvation period. However, starved juveniles show a great ability to recover following a feeding period, quickly resuming their growth, replenishing their reserves and forming new glycogen reserves in the abdominal muscle. The enzymatic activity related to reserve mobilization was not observed and only lipase activity (digestive) was affected by starvation. On the other hand, 2.55 m2 of randomly distributed onion mesh is recommended per meter of tank to decrease juvenile mortality during the nursery phase. This information provides theoretical knowledge that may directly contribute to improve the culture of a species commercially important for our country.

"Indice de halógeno en el análisis de aceites y grasas : datos correspondientes a aceites comestibles argentinos" (1936). Oneto, Miguel Máximo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Inducción de inmunidad humoral y celular contra Staphylococcus aureus por inmunización local con una cepa viva atenuada y su rol en la prevención de las infecciones intramamarias" (2001). Gómez, Marisa Inés. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Staphylococcus aureus es el agente causal de infecciones de importancia médica y veterinaria. Las infecciones por S. aureus suelen ser recurrentes o persistentes a pesar de la presencia de anticuerpos específicos circulantes y asociados a mucosas, y del uso de antibióticos a los cuales la bacteria es susceptible. Entre las infecciones persistentes que S. aureus puede ocasionar, la infección intramamaria (lma) crónica constituye la patología infecciosa más prevalente de los bovinos destinados a la lechería. Hasta el presente, no se cuenta con una vacuna efectiva de uso práctico que permita prevenir las infecciones lma estafilocóccicas. La hipótesis de este trabajo de investigación postula que la administración de una vacuna viva atenuada por la ruta local lma sería un método idóneo para inducir una respuesta inmune adaptativa efectiva en la glándula mamaria contra S. aureus. En el marco de esta hipótesis, el objetivo general de este trabajo de investigación es proveer conocimiento acerca de las respuestas inmunes, tanto humorales como celulares, que es necesario inducir en la glándula mamaria para prevenir las infecciones por S. aureus. Se obtuvo una cepa viva atenuada de S. aureus (CVA A523) por termosensibilidad, la cual se utilizó como cepa prototípica en los estudios de inmunidad de la glándula mamaria. Para demostrar la hipótesis propuesta se desarrolló un modelo de infección lma por la cepa 8325-4 ɸ11 de S. aureus. Las lesiones histológicas observadas concordaron con las descriptas durante la mastitis bovina. La inmunización con la CVA A523, por la ruta local lma durante la etapa final de la preñez, confirió protección en la glándula mamaria frente a la infección experimental. La protección se evidenció a través de una significativa reducción en el número de UFC remanentes en la glándula mamaria de los ratones inmunizados luego del desafio experimental con la cepa virulenta parental de S. aureus. La inmunización por la ruta sistémica intraperitoneal indujo la presencia de elevados niveles de IgG circulantes pero no otorgó protección frente al desafío lma. La protección inducida mediante la inmunización lma se correlacionó con la presencia de elevados niveles de IgA e IgG en leche así como también con la presencia de poblaciones de linfocitos T capaces de producir IFN-γ frente al estímulo in vitro o durante la infección in vivo por S. aureus. La presencia en forma conjunta de anticuerpos específicos y de linfocitos capaces de producir citoquinas de tipo Th1 inducidos por la inmunización local constituye una estrategia promisoria para prevenir el establecimiento de la infección lma crónica por S. aureus en un huésped vacunado. Se requerirán futuros ensayos controlados de inmunización en bovinos con CVA para extender la validez de nuestros hallazgos a rumiantes destinados a la lechería.

Abstract:
Staphylococcus aureus can cause a variety of infections relevant to humans and domestic animals of economic importance. S. aureus infections are usually persistent in spite of the presence of high levels of antibodies in blood and at mucosal surfaces and the use of antibiotics to which this pathogen is susceptible. Among the persistent infections that S. aureus can cause, the chronic intramammary (lma) infection constitutes the most prevalent infectious disease of dairy ruminants. To the present, there is no useful vaccine available that provides significant protection from lma S. aureus infection. The hypothesis of this investigation is that local lma administration of a live-attenuated (la) vaccine may be used to induce an effective adaptive immune response in the mammary gland against S. aureus. The final goal of this study is to provide information for the better understanding of the appropriate immune responses, humoral and cell mediated, that it is necessary to induce in the mammary gland to prevent S. aureus infections. A la-S. aureus strain (la-A523) with temperature-sensitive phenotype was obtained. This prototype strain was used as the immunogen in mammary gland immunity studies. To demonstrate the hypothesis, a mouse model of lma infection by the S. aureus wild type (wt) strain was developed. The histopathological lesions observed were in agreement with those described in bovine mastitis. Local lma immunization with la-A523 in the last week of pregnancy protected the mammary gland from experimental infection. Protection was determined as a significant decrease in the CFU numbers remaining in the mammary glands of immunized mice after challenge with the wt-S. aureus strain. Systemic intraperitoneal immunization induced the presence of high IgG levels in blood but did not confer protection against lma challenge. The protection induced by lma immunization was related to increased IgA and IgG levels in milk as well as lymphocyte populations able to produce IFN-γ during in vitro stimulation or in vivo S. aureus infection. The presence of both, specific antibodies and lymphocytes able to produce type 1 cytokines, induced by local immunization may constitute an effective strategy to prevent the establishment of chronic lma S. aureus infection in a vaccinated host. Further controlled immunization trials in bovines with la-S. aureus will be required to extend the validity of these findings to dairy ruminants.

"Inducción de preferencias a partir del contexto de elección del usuario en sistemas de recomendación" (2014-02-28). Abalde, Roberto. Tesis de maestría. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La mayoría de los sistemas de recomendación actuales que usan técnicas de filtrado colaborativo basado en memoria predicen las preferencias de un usuario usando solamente la información de los ítems sobre los que el usuario expresó su preferencia. Sin embargo no utilizan el contexto de elección del usuario, esto es, el conjunto de ítems que fueron recomendados al usuario pero que fueron ignorados. En este trabajo de tesis presentamos las modificaciones hechas a los algoritmos clásicos de filtrado colaborativo basado en memoria para que utilicen el contexto de elección del usuario al momento de predecir sus preferencias por nuevos ítems. Como no se conocen conjuntos de datos públicos que tengan el contexto de elección del usuario y que nos permitan probar los algoritmos modificados, implementamos dichas modificaciones en un sistema de recomendación real para poder recolectar los datos necesarios para la etapa de experimentación. Finalmente, realizamos una serie de experimentos sobre tres conjuntos de datos, que nos permitieron verificar que nuestra propuesta tiene un mejor desempeño que los sistemas de recomendación clásicos.

Abstract:
Most of existing recommendation systems use memory-based collaborative filtering techniques to predict the preferences of a user using only the information of the items for which the user expressed a preference. However, existent systems do not use the context of user choice, that is, the set of items that were recommended to the user but were ignored by her. In this thesis we present the modifications made to the classic memory-based collaborative filtering algorithms to use the context of user choice in the prediction of the user preferences. Since there are no known public datasets including the context of user choice that could allow us to test the modified algorithms, we implemented these changes in a real recommender system that allowed us to build a dataset with the information required. Finally, we conducted a series of experiments on three datasets, which allowed us to verify that our proposal has better performance than the traditional recommendation systems.

"Inducción del crecimiento ovárico en la langosta de agua dulce Cherax Quadricarinatus, mediante la administración de antagonistas dopaminergicos y encefalinergicos" (2010). Cahansky, Alejandra Valeria. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se evaluaron los efectos de los antagonistas spiperona (dopaminérgico) y Cheraxnaloxone (encefalinérgico) sobre el crecimiento ovárico de quadricarinatus (Decapoda, Parastacidae), en diferentes períodos del ciclo reproductivo, tanto mediante ensayos in vitro como vivo. La incubación in vitro de piezas de ovario junto con ganglio torácico (sitio de producción de la hormona estimuladora gonadal, GSH), mas el agregado de cada antagonista mencionado, consiguió potenciar la síntesis proteica en ovario durante el período posreproductivo, sugiriendo una fuerte inhibición de las encefalinas endógenas sobre la secreción de GSH. Este resultados fue corroborado mediante ensayos in vivo, administrando los antagonistas incorporados al alimento; durante el periodo posreproductivo, el naloxone, mostró ser el inductor mas efectivo, al producir un aumento significativo tanto del índice gonadosomático como del diámetro oocitario. Por otra parte, se verificó la producción efectiva de hembras ovígeras, así como la viabilidad normal de los juveniles eclosionados de hembras tratadas con los antagonistas. Estos resultados constituyen una potencial herramienta en acuicultura, al permitir modificar el calendario reproductivo natural de una especie de alto valor comercial.

Abstract:
The effects of the antagonist spiperona (dopaminergic) as well as naloxone (enkephalinergic) on the ovarian growth of Cherax quadricarinatus (Decapoda, Parastacidae) were evaluated in different periods of the reproductive cycle, by means of both in vitro and in vivo assays. In vitro incubation of ovarian pieces, together with thoracic ganglion (production site of the gonad stimulating hormone, GSH) and the addition of each of the mentioned antagonist, yielded an augmented protein synthesis by ovary during the postreproductive period, suggesting a strong inhibition of endogenous enkepahlins on GSH secretion. This result was corroborated in vivo, by administering the antagonists incorporated to food; during the postreproductive period, naloxone showed to be the most efficient inductor, producing a significant increment of both gonadosomatic index and oocyte diameter. On the other hand, the effective production of ovigerous females, as well as the normal viability of juveniles hatched from females treated with the antagonists was verified. These results represent a potential tool for aquaculture, allowing the modification of the natural reproductive schedule of a high commercial value species.

"Inducción y activación de Nurr77 y Nurr1 por CRH e IL-1 en corticotrofos : rol sobre la regulación del gen de POMC y vías de transducción de señales involucradas" (2002). Kovalovsky, Damián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo de tesis abordamos el estudio de la función corticotrofa normal y tumoral focalizándonos en tres temas fundamentales: a) los eventos moleculares involucrados en la regulación de los factores de transcripción Nur y sus consecuencias en la activación del gen de proopiomelanocortina (POMC) por la hormona liberadora de corticotrofina (CRH) y AMP cíclico (cAMP), b) la implicancia de los factores Nur en la regulación corticotrofa por interleuquina-1 (IL-1) y c) la de interacción entre IL-1,CRH y glucocorticoides. Demostramos en células corticotrofas AtT20 que la entrada por canales de calcio tipo L es esencial para la inducción de los mRNAs de Nur77 y Nurr1 y la estimulación de la actividad Nur por CRH a través de la actividad de CAMKII. La entrada de calcio es suficiente para producir la estimulación. El tratamiento con cAMP estimula Nur77 también independientemente del calcio entrante. Existe una vía de MAPK (Rap1/B-Raf/MEK1,2/ERK1,2) funcional en corticotrofos que estimula la fosforilación y actividad transcripcional de Nur77 y que es activada por CRH y cAMP en forma calcio-dependiente y calcio-independiente. La regulación por estas vías de señalización sobre la actividad Nur correlaciona con la regulación sobre el promotor de POMC. Demostramos también que Nur77 media la acción estimulatoria de IL-1 sobre el promotor de POMC: IL-1 estimula la actividad Nur sobre el sitio NurRE; produce la inducción del mRNA de Nur77 y no de Nurr1, un efecto transcripcional a nivel del promotor de Nur77; estos efectos dependen de la actividad de la protein quinasa p38; una línea que sobreexpresa una mutante dominante negativa de Nur77 es insensible a la estimulación por lL-1 de la secreción de ACTH, la actividad Nur y la inducción de POMC. La activación del factor de transcripción NFkB ejerce un efecto negativo en la estimulación de la actividad Nur y la inducción de POMC por IL-1. Demostramos que la potenciación entre IL-1 y CRH sobre la secreción de ACTH se observa también sobre la actividad Nur. El tratamiento con IL-1 aumenta la sensibilidad a la inhibición de la secreción de ACTH por glucocorticoides, tanto en la línea celular AtT20 como en cultivos primarios de adenomas corticotrofos humanos. Este efecto no es consecuencia de la inhibición del mRNA de POMC sino un efecto a nivel de la secreción y no es consecuencia de una diferencia en la afinidad de GR por los glucocorticoides ni una diferencia en el número de GR. En conclusión, en este trabajo de tesis caracterizamos por primera vez las vías de señalización involucradas en la regulación de la actividad Nur y la función corticotrofa por IL-1, CRH, glucocorticoides y sus interacciones, demostrando que la regulación de la expresión de POMC y ACTH en corticotrofos involucra: la existencia de una vía de MAPK funcional, la actividad fundamental de Nur tanto para CRH como para IL-1 y la interacción funcional de IL-1 con CRH (sinergismo) y con glucocorticoides (aumento de la sensibilidad a la inhibición).

Abstract:
In this thesis work we studied the normal and tumoral corticotrophic function focusing on three fundamental points: a) the molecular events involved in Nur regulation and its consequences on proopiomelanocortin (POMC) gene regulation by corticotrophic releasing hormone (CRH), cyclic AMP (cAMP), b) the implicance of Nur factors in corticotrophic regulation by interleukin-1 (IL-1) and c) the interaction among IL-1, CRH and glucocorticoids. We demonstrate that calcium entry through L type channels is crucial for Nur77 and Nurr1 mRNA induction and increased activity by CRH treatment involving CAMKII function. Calcium entry is sufficient to produce this stimulation. Treatment with cAMP stimulates Nur77 also independently of calcium. There is a functional MAPK (Rap1/B-Raf/MEK1,2/ERK1,2) pathway in corticotrophs that stimulates Nur77 phosphorylation and transcriptional activity and it is activated by CRH and cAMP treatments involving calcium-dependent and —independent signals. POMC regulation by this pathways correlates with Nur activity. We also demonstrate that Nur77 is involved in the stimulation of POMC by IL-1: IL-1 stimulates Nur activity on the NurRE site; induces Nur77 and not Nurr1 mRNAs, a transcriptional effect on the Nur77 promoter; these effects depend on p38 protein kinase activity; a cell line that overexpresses a dominant negative mutant of Nur77 is insensitive to IL-1 stimulation of ACTH secretion, Nur activity and POMC induction. NFkB activity exerts a negative effect on Nur activity and POMC mRNA induction by IL-1. We demonstrate that the synergism between CRH and IL-1 on ACTH secretion is also observed on Nur activity. IL-1 treatment increases the inhibitory effect of glucocorticoids on ACTH secretion, in the corticotrophic AtT20 cell line and in corticotroph human adenomas primary cultures. This effect is not a consequence of inhibition of POMC mRNA but an effect at the level of secretion and it is not due to different affinity of glucocorticoid receptor (GR) for glucocorticoids nor to different GR number. In conclusion, in this thesis work we characterized for the first time the signaling pathways involved in the regulation of Nur activity and the corticotrophic function by IL-1,CRH, glucocorticoids and its interactions, demostrating that the regulation of POMC mRNA expression and ACTH in corticotrophs involves: the existence of a functional MAPK pathway, the instrumental activity of Nur for CRH and IL-1 actions and the functional interaction of IL-1 with CRH (synergism) and with glucocorticoids (increased sensitivity to inhibition).

"Inducción, producción y mantenimiento de la respuesta inmune sistémica por inmunización oral" (2003). Benedetti, Rubén Mariano. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Tradicionalmente se pensaba que las mucosas poseían un sistema inmune propio y común con pocos puntos de contacto con el resto del sistema inmune. Esto se fundamentaba en que las mucosas se caracterizan por (l) el predominio de la IgA, (2) la dificultad de obtener respuesta inmune en las mucosas con una inmunización sistémica y (3) que con una inmunización por una mucosa es posible dar protección en otras mucosas distantes. Con posterioridad, se encontraron varias interacciones entre los tejidos linfoides de las mucosas y los sistémicos que llevan a pensar que en realidad no hay una clara separación en dos sistemas inmunes, sino que constituyen una unidad. El fenómeno de la tolerancia oral, la posibilidad (en algunos casos) de inducir la respuesta inmune sistémica por inmunización por la vía de las mucosas y el transporte hepatobiliar de IgA polimérica desde el suero al intestino son ejemplos de esa comunicación. Otra conexión posible es que la médula ósea reciba células productoras de anticuerpos luego de una inmunización sistémica. Es bien conocido que en la médula ósea aparecen células plasmáticas luego de una inmunización sistémica. La médula ósea es el principal productor de anticuerpos en la respuesta secundaria. Pese a esto, no era claro si una inmunización por las mucosas podía llevar a que la médula ósea se convierta en productora de anticuerpos especificos. En este trabajo efectuarnos inmunizaciones orales (intragástricas e intra-placas de Peyer) utilizando toxina colérica, uno de los más potentes antígenos y adyuvante por las mucosas, para observar la cinética de aparición de las células plasmáticas antitoxina en el intestino, el bazo y la médula ósea. También observamos la respuesta de memoria. En estas condiciones encontramos que: - Tanto durante el primado como en la memoria, en la médula ósea aparecen células plasmáticas y este es el principal órgano productor de anticuerpos destinados a la circulación sanguínea. - La médula ósea es, además, el único órgano que mantiene células secretoras de anticuerpos muchos meses después de la inmunización oral, cuando consideramos que ya no queda antígeno en el organismo. - Existe una muy temprana presentación antigénica en el bazo, paralela a la que ocurre en el intestino. - La médula ósea posee linfocitos T y B de memoria, aunque el ganglio mesentérico y el bazo tienen mayor concentración de células de memoria. Todas estas observaciones contribuyen al mejor conocimiento de la amplia comunicación entre el llamado sistema inmune de las mucosas y el central y sostienen la idea de la unidad del sistema inmune.

Abstract:
Traditionally it was thought that the mucosae had a common immune system with few meeting points with the rest of the immune system. This was based on that the mucosae are characterized by (l) the predominance of the IgA, (2) the difficulty to obtain immune response in the mucosae with a systemic immunization and (3) that with a mucosal immunization is possible to give protection in other distant mucosae. Later, several interactions between the mucosal and systemic lymphoid tissues were found wich led to think that in fact there is no clear separation between the two immune systems, but that they constitute a unit. The phenomenon of oral tolerance, the possibility (in some cases) of inducing a systemic immune response by immunization by the route of the mucosae and hepatobiliar transport of polimeric IgA from serum to intestine are examples of that communication. Another possible connection is that the bone marrow receives antibody producing cells after a systemic immunization. It is well known that in the bone marrow plasma cells appear after a systemic immunization. The bone marrow is the main antibody producing site in the secondary response. In spite of this, it was not clear whether an immunization by the mucosae could make the bone marrow become a producer of specific antibodies. In this work we carried out oral immunizations (intragastric and intra-Peyer patches) using cholera toxin, one of the most powerful antigens and adjuvant by the mucosae, to observe the kinetics of appearance of the antitoxin plasma cells in the intestine, spleen and bone marrow. We also observed the memory response. In these conditions we found that: - During the priming as well as during the memory, plasma cells appear in the bone marrow and this is the main organ producing antibodies destined to blood circulation. - The bone marrow is, in addition, the only organ that maintains antibody secreting cells many months after oral immunization, when we consider there is no more antigen left in the organism. - A very early antigenic presentation in spleen exists, parallel but independent from what happens in the intestine. - The bone marrow does have memory T and B cells, although the mesenteric lymph node and spleen have greater concentrations of memory cells. All these observations contribute to the best knowledge of the extensive communication between the so called mucosal immune system and the central immune system and support the idea of the unit of the immune system.

"Inestabilidad de láminas de corriente con flujos de plasma y aplicaciones a la magnetopausa diurna" (1999). Contin, Julia E.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudia la influencia de flujos de plasma sobre la estabilidad de láminas de corriente en el marco de la teoría magnetohidrodinámica. Se obtienen ecuaciones perturbativas generales para un modelo plano que incluye efectos de resistividad, viscosidad y densidad estratificadas en la configuración de orden cero, cizallas de la velocidad y del campo magnético, y la presencia de un campo gravitatorio. En las aplicaciones específicas de la teoría, se enfoca la atención sobre las inestabilidades de la magnetopausa terrestre diurna, y la propagación de las perturbaciones hacia los flancos, en condiciones de campo magnético inter-planetario orientado norte. Se analiza el desarrollo de inestabilidades Kelvin-Helmholtz, sin excluir la consideración de otros mecanismos de interacción, como por ejemplo cambios bruscos en la presión dinámica del viento solar. Se estudia la estabilidad de una estructura que representa la magnetopausa en condiciones estacionarias normales, sin compresión. También se analiza una configuración excepcional de flujo de plasma, con movimientos en contracorriente de capas de la magnetovaina y de la magnetosfera adyacentes a la magnetopausa, utilizando datos de observación de un cruce del ISEE 2 el 11/XI/79. Finalmente se presenta un estudio combinado de teoría, observaciones, e interpretación de las inestabilidades y ondas excitadas sobre una región del flanco ecuatorial cercano de la magnetopausa, durante el pasaje del final de la nube magnética del 11/1/97 a partir de datos satelitales de alta resolución (WIND e INTERBALL Tail) y de registros de magnetómetros terrestres.

Abstract:
The effect of plasma flows on the stability of current sheaths with the magnetohydrodinamíc theory is considered. General perturbation equations are derived for a plane model that includes effects of resistivity, viscosity and density stratification in the zero order configuration, velocity and magnetic shear and the presence of a gravitational field. Specific applications of the theory are focussed on the Earth dayside magnetopause instabilities and the propagation of perturbations towards the flanks, for northward interplanetary magnetic field. The development of Kelvin-Helmholtz instabilities are analyzed, without excluding other perturbative effects, such as sudden changes in the dynamical pressure of the solar wind. The stability of structure representing the magnetopause under normal Steady state conditions is studied. An unusual configuration of plasma flow, with a counter streaming flow in the magnetosheath and magnetosphere adjacent to the magnetopause is also analyzed using observational data of a crossing of ISEE 2 of XI/11/79. Finally a study combining theory, observational data, and interpretation of the instabilities and excited waves in a near equatorial flank of the magnetopause during the trailing edge of the 1/11/97 magnetic cloud, based on high resolution spacecraft data (WIND and INTERBALL Tail) and ground magnetograms, is presented.

"Inestabilidades entre fluídos miscibles en medios porosos" (1999). Obernauer, Silvia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se presenta un estudio experimental de desplazamientos de fluidos miscibles dentro de medios porosos y celdas de Hele-Shaw empleando fluidos Newtonianos y no-Newtonianos con técnicas de visualización. La primera parte está dedicada al estudio de la inestabilidad que aparece en la interfase entre dos soluciones de una única especie difusíva cuando la solución más concentrada se ubica sobre la menos concentrada (inestabilidad de Rayleigh-Taylor). Esta inestabilidad se estudia en forma preliminar para una interfase sin condiciones de flujo y se complementa el estudio en desplazamientos dentro de una celda de Hele-Shaw colocada en forma horizontal. Se inyecta colorante que empuja agua pura y se observan con el tiempo la aparición de estrías paralelas a la dirección del flujo detrás del frente de avance. Los resultados experimentales son interpretados en términos de una inestabilidad gravitatoria debido a gradientes verticales de concentración del colorante inyectado inducidos por el perfil de velocidades del flujo. Dicho perfil, en el espesor de la celda, crea un gradiente de concentración que puede ser modelado como una estructura de tres capas. Si bien los experimentos muestran que la longitud de onda caracteristica de la estructura es del orden del espesor de la celda, se encuentra además una dependencia con el aumento de contraste de densidades entre ambos fluidos en acuerdo con modelos teóricos. Se encuentra experimentalmente que la periodicidad media es independiente del caudal es decir que es independiente de la velocidad de la interfase. Se estudia también el tiempo de aparición de estas inestabilidades en función del caudal de inyección, de la concentración del colorante y de la inclinación de la celda. En la segunda parte de esta Tesis se presenta el estudio de desplazamientos de fluidos donde uno de los mismos es una solución polimérica (soluciones de Xanthano) con un comportamiento tipo reofluidizante. Los desplazamientos son siempre horizontales y la inestabilidad aparece cuando el fluido menos viscoso empuja al más viscoso (inestabilidad de Saffman-Taylor). En primer término se analizan experiencias en donde el agua coloreada empuja soluciones poliméricas dentro de un medio poroso rectangular cuasi bidimensional consistente en empaquetamientos de microesferas de vidrio. Se encuentra una rica variedad de estmcturas al variar el caudal, la concentración del polímero y el tamaño de microesferas. Para altas concentraciones de polímero las mismas son del tipo fractal. A partir de la medición de la dimensión fractal en bandas a lo largo de la estructura se logra evidenciar propiedades de multiscaling. De la observación del crecimiento de los dedos individuales que aparecen encontramos dos tipos de comportamientos dinámicos. En segundo término se estudian desplazamiento con la misma solución polimérica pero en celdas de Hele-Shaw con inyección radial. En este caso la viscosidad del segundo fluido, de comportamiento Newtoniano, se elige de un valor intermedio entre las viscosidades del polímero a altas y bajas velocidades de corte. Se observa en cada experiencia una transición de un desplazamiento estable a inestable cuando la velocidad media del frente se vuelve menor que un valor crítico. Se investiga la dependencia de la velocidad critica con la viscosidad del fluido Newtoniano y con el caudal. La velocidad crítica es comparada con la velocidad donde la viscosidad de ambos fluidos es la misma si se desplazaran en forma independiente.

Abstract:
An experimental study of miscible fluid displacement inside porous media and Hele-Shaw cell employing Newtonian and non-Newtonian fluids is reported in this work. This miscible displacement process was studied by means of visualization techniques. The first part is concerned with the study of the instability that appears at the interface between two miscible solutions of a single diffusing species when the higher concentration solution is placed over the lower one (Rayleigh-Taylor instability). We have studied this instability in a preliminary way in a no flowing front. We completed the study with investigations of displacements where dye pushes pure water inside an horizontal Hele-Shaw cell. After a certain time striations parallel to the flow are observed near the displacement front. Experimental results suggest an interpretation in terms of the gravitational instability due to the vertical dye concentration gradients induced by the flow profile between the cell plates. The velocity profile in the cell thickness creates a gradient of concentration that can be modeled as a three-layer structure. Experiments show that the mean wavelength is of the order of magnitude of the cell thickness. This characteristic length is found to depend on the density contrast between both fluids in agreement with theoretical expectations. We found experimentally that the mean periodicity is independent of the flow rate and therefore independent of the interface velocity. We have also studied the onset time of these instabilities as a function of the flow rate, the dye concentration and the cell inclination. In the second part we present the experimental study of miscible displacements where one of the fluid is a polymeric solution (Xanthan solutions) with a shear-thinning behavior. The displacements are always horizontal and the instability appears when the less viscous fluid pushes the more viscous one (Saffman-Taylor instability). We analyze experiments where water pushes polymeric solution inside a rectangular pseudo-bidimensional porous media consisting of glass spheres packing. Experiments were performed with porous media with two different grain size and varying the polymer concentration and the flow rate. A rich variety of patterns were found. At high polymer concentration a fractal behavior was observed. The fractal dimension was measured on bands along the structure in order to verify experimentally the multiscaling properties. From the observation of the finger evolution in time we have found two different dynamic behaviors. We also studied displacements with the same polymeric solution in a radial Hele-Shaw cell. In this case, the viscosity of the second fluid, which has Newtonian behavior, is tuned to lie between high and low shear rate asymptotic apparent viscosities of the polymeric solutions. A crossover from a stable displacement to an unstable situation displaying viscous fingering patterns is observed, as the mean front velocity becomes lower than a critical value. The dependence of this critical velocity on Newtonian fluid viscosity and the injection rate is investigated. The experimental critical velocity is compared with the velocity at which the viscosity of both fluids is the same.

"Infección experimental del Calomys masculinus con virus Junín : Modelo de infección crónica" (1984). Lampuri, Jorge Salvador. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Infección persistente del virus Junín in vitro: perturbación del equilibrio virus-célula como estrategia de estudio del mecanismo involucrado en este tipo de infecciones" (2014-10-31). Fernández Bell Fano, Pablo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, pertenece a la familia Arenaviridae. Los virus pertenecientes a esta familia son capaces de causar infecciones persistentes en roedores, los cuales actúan como reservorios naturales, asegurándose así su evolución y perpetuación en la naturaleza. Asimismo, son capaces de multiplicar en una amplia variedad de cultivos celulares pudiendo desarrollar el estadio de persistencia en la mayoría de ellos. El objetivo de este trabajo fue determinar las diferencias existentes entre infecciones agudas y persistentes en cultivos de células Vero frente a tratamientos que tienden a desestabilizar el equilibrio virus célula. A tal fin, mediante la infección experimental de células Vero con la cepa XJCl3, se obtuvo una línea celular persistentemente infectada con dicho virus, denominada V3, que se utilizó como modelo de estudio. En los ensayos realizados con el agente mutagénico 5-fluoruracilo (5-FU) se observó que la susceptibilidad a la inhibición ejercida por esta droga sobre JUNV dependió del lapso transcurrido entre el momento de la infección y el tratamiento, y de la m.o.i. utilizada sugiriendo que la proporción de células infectadas al momento de tratar definía la resistencia a la droga. En este sentido, las células V3 resultaron menos afectadas por el 5-FU en comparación con las células infectadas y tratadas durante la etapa aguda. Por otro lado, el análisis del ciclo celular de células Vero mostró que la infección con JUNV generó alteraciones en la respuesta del cultivo frente a estímulos como la confluencia de las células de la monocapa y el tratamiento con agentes inductores de arresto del ciclo. Durante ensayos de transfección con proteínas virales dicha alteración del ciclo fue asociada a la nucleoproteína viral N. Sin embargo, a pesar de la aparente manipulación del ciclo celular por parte del virus no se pudo asociar alteraciones inducidas del ciclo, a una disminución en el rendimiento viral. Teniendo en cuenta que los cultivos persistentemente infectados no presentan el efecto citopático (EC) típico de las infecciones agudas de este virus en células Vero, se evaluó en primer lugar la naturaleza de dicho fenómeno. El estudio de distintos indicadores de apoptosis mostró que dicho evento seguía una cinética similar a la desarrollada por el EC viral, observándose además un incremento en la expresión de p53 y en el clivaje de la caspasa 3. Cuando estos indicadores se analizaron en células V3, los valores encontrados presentaron valores similares a los de células Vero sin infectar. Por otro lado, al analizar la respuesta de los distintos cultivos frente a la inducción de apoptosis con staurosporina (STS) o luz ultravioleta (UV) los cultivos persistentemente infectados resultaron más resistentes que los cultivos infectados de forma aguda y las células sin infectar frente a la apoptosis inducida por luz UV y todos se comportaron de manera similar frente a la STS. Este comportamiento sugiere que JUNV podría estar modulando negativamente la apoptosis durante la persistencia de manera específica frente a ciertos estímulos aunque no frente a un inductor fuerte como la STS. La resistencia al estrés térmico también fue evaluada como un parámetro diferencial entre los distintos tipos de cultivos. En forma similar a lo que sucedió con el 5-FU el virus resultó más resistente al tratamiento con calor cuando éste se aplicó a tiempos de tratamiento p.i. tardíos y a mayores m.o.i.. La síntesis de HSP-70, principal efector de la respuesta celular al shock térmico, no se asoció temporalmente con la reducción de los títulos virales. De manera similar a lo observado con la respuesta al shock térmico, el tratamiento con arsenito de sodio (Ars), inductor de estrés oxidativo, resultó menos efectivo cuanto mayor era la proporción de células infectadas en los cultivos. El conjunto de resultados permite concluir que las características diferenciales presentadas por los cultivos infectados en forma persistente serían adquiridas durante el transcurso de la infección, al menos en el caso de la resistencia a los inductores de: extinción viral (5-FU), estrés térmico y oxidativo (HS y Ars) y alteraciones del ciclo. Esta estrategia estaría basada en la acumulación de suficiente cantidad de proteínas, en particular, la nucleoproteína N, a fin de controlar las respuestas a estrés, ya sea por intervención directa de dichas proteínas o a través de la modulación en la formación de gránulos de estrés citoplasmáticos y/o de cuerpos nucleares asociados a la proteína de leucemia promielocítica.

Abstract:
Junín virus (JUNV), the etiological agent of the Argentine Hemorrhagic Fever, belongs to the family Arenaviridae. Viruses belonging to this family are able to cause persistent infections in rodents, which act as natural reservoirs, thus ensuring their evolution and perpetuation in nature. They are also able to multiply in a wide variety of cell cultures having the capacity to develop persistence stage in most of them. The aim of this study was to determine the differences in the response of acute and persistent infection of JUNV in Vero cells to treatments that tend to disrupt the virus-cell equilibrium typical of the latter. To this end, we obtained a cell line persistently infected with the virus, called V3, through experimental infection of Vero cells with JUNV XJCl3 strain, which was used as a study model. Studies performed with the mutagenic agent 5-fluorouracil (5-FU) showed that susceptibility to inhibition exerted by this drug on JUNV depended on the time elapsed between the time of infection and treatment, and the m.o.i. used suggesting that the proportion of infected cells when treatment was applied defined the degree of drug resistance. In this sense, the V3 cells were less affected by the 5-FU compared with treated acutely infected cells. On the other hand, cell cycle profile of Vero cells infected with JUNV was different from acutely and non infected cultures when subjected to conditions of cell cycle arrest. During transfection assays with plasmids expressing viral proteins, alterations of cell cycle, similar to those observed by infection, were associated with the expression of the viral nucleocapsid N. However, despite the apparent alteration of cell cycle by the virus, no effect on viral replication could be associated with experimentally induced cell cycle alterations. Given that persistently infected cultures do not exhibit the typical cytopathic effect (CE) characteristic of acutely infected Vero cells, the nature of this phenomenon was evaluated in first place. The study of various indicators of apoptosis showed that this event followed similar kinetics as the CE that took place in infected cells, with a concomitant increase in expression of p53 and cleavage of caspase-3. By contrast, the level of these apoptotic markers was similar for V3 and non-infected Vero cells. On the other hand, the response to two apoptosis inducers, staurosporine (STS) and UV radiation revealed that persistently infected cultures showed resistance to the latter whereas acutely, persistently and non-infected cells were equally susceptible to STS. This is probably due to the fact that induction of apoptosis by UV treatment is carried out by a specific cellular pathway that might be modulated by the virus during persistence, while STS exerts its effect as a multitarget agent. The tests performed to determine the effect of HSP-70 induction on JUNV replication of the virus showed that this protein was not involved in the reduction of viral titer. Similar to the results obtained with 5-FU, the virus was more resistant at late p.i. treatment times and high m.o.i.. Both heat-shock and treatment with the oxidative stress-inducing drug sodium arsenite (Ars) were effective in reducing viral titers. Further analysis of the activity of heat shock showed that its range of action embraced 2 steps of the viral cycle: the processes leading to the budding of virions and protein translation. Heat-shock response was also evaluated as a differential parameter among the different types of infected and non-infected cell cultures. Similarly to the conclusions withdrawn with 5-FU, JUNV infections were more resistant to heat-shock when treatment was applied late during infection or when high m.o.i. were employed. Synthesis of HSP-70, main effector of heat-shock response, could not be associated to the decrease in virus titer observed in heat-shocked cultures. Also, arsenite, an oxidative stress inducer, diminished viral replication. The degree of arsenite inhibition was dependent of the proportion of infected cells in the monolayer. Altogether, the results allow to conclude that the differential characteristics between JUNV acutely and persistently infected Vero cells would be acquired during the course of infection, at least for the resistance to 5-FU, heat shock, oxidative stress and altered cell cycle. This strategy would be based on the premise of accumulation of viral proteins, particularly the nucleoprotein, in order to control cellular response to stress, either directly or by modulating stress granules formation and/or nuclear bodies associated to the promielocytic leukemia protein.

"Inferencia en modelos aditivos" (2014-03-11). Martínez, Alejandra Mercedes. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La inferencia estadística comúnmente utiliza modelos paramétricos y el supuesto es que las observaciones de la muestra pertenecen a una familia paramétrica conocida. En este caso, el problema consiste en estimar o hacer inferencia sobre los parámetros desconocidos, permitiendo llegar a conclusiones precisas cuando el modelo supuesto es cierto pero llevando posiblemente a conclusiones equivocadas cuando se aplica a un modelo ligeramente perturbado. Por esta razón, se han desarrollado modelos noparamétricos y semiparamétricos para analizar los datos. Recientemente, los modelos noparamétricos han ganado una importante atención en el estudio de fenómenos naturales con comportamiento de complejidad no lineal. Si bien estos modelos tienen menor precisión, están asociados con una alta estabilidad. En esta tesis nos enfocaremos en los modelos de regresión noparamétricos. Para los modelos de regresión noparamétricos multivariados, los estimadores de la función de regresión multivariada, tales como el estimador de Nadaraya–Watson, sufren de la bien conocida maldición de la dimensión, debido a que en entornos de radio fijo la cantidad de observaciones disminuye exponencialmente. Para evitar este problema, se introdujeron los modelos aditivos, que generalizan los modelos lineales, son de fácil interpretación y además resuelven la maldición de la dimensión. La mayoría de los procedimientos para estimar las componentes de un modelo aditivo se basan en promedios o polinomios locales usando ajustes por mínimos cuadrados. Por esta raz´on, tienen la desventaja de ser muy sensibles a la presencia de datos atípicos. Por otro lado, en muchas situaciones, sobre todo en estudios biomédicos, puede haber un conjunto de puntos del dise˜no con respuestas faltantes. En esta tesis, introducimos estimadores robustos basados en polinomios locales para resolver tanto la maldición de la dimensión, como la presencia de datos atípicos y así como también la existencia de respuestas faltantes. Estos estimadores están basados en un procedimiento de integración marginal adaptado a la situación de datos faltantes. Dichas propuestas resultaron ser consistentes y asintóticamente normalmente distribuidas bajo condiciones de regularidad. Además, se consideró una familia de estimadores robustos basados en el procedimiento de backfitting cuando no hay observaciones faltantes. Finalmente, se realizó un estudio de simulación para comparar el procedimiento de las propuestas bajo diferentes escenarios.

Abstract:
Most commonly used models in statistical inference are parametric and the assumption is that the observations in the sample belong to a known parametric family. In this case, the problem consists in estimating or making inference on the unkown parameters, leading to accurate conclusions when the model is correct, but they can lead to wrong conclusions when they are applied to a slightly disturbed models. For this reason, nonparametric and semiparametric models have been developed for data analysis. Recently, nonparametric regression models have gain importance when studying natural phenomenons with non lineal complexity behaviour. Even though these models are less accurate, they are associated with high stability. In this thesis, we will focus on nonparametric regression models. For the nonparamatric multivariate regression models, estimators of the multivariate regression function, such as the Nadaraya–Watson estimator, suffer from the well–known curse of dimensionality, due to in fixed-radius neiborhoods the amount of observations decreases exponentially. To overcome this drawback, additive regression models have been introduced. They generalize linear models, are easily interpretable, and they also solve the problem of the curse of the dimensionality. Most methods to estimate the components under an additive model are based on local averages or local polynomials, being sensitive to outliers. On the other hand, in many applied statistical analysis, for example in many biological experiments, it can be part of the design points on which the responses are missing. In this thesis, we introduce robust estimators based on local polynomials to solve either the curse of dimensionality, the sensitivity to atypical observations and also the existence of missing responses. The estimators are based on marginal integration adapted to the missing situation. The proposed estimators turn out to be consistent and asymptotically normally distributed under mild assumptions. Besides, a family of robust estimators based on backfitting is also considered for the situation where no missing responses arise. A simulation study allows to compare the behaviour of our procedures, under different scenarios.

"Inferencia robusta en modelos no lineales con respuestas faltantes" (2016-03-28). Spano, Paula Mercedes. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El modelo lineal es uno de los más populares en Estadística. Sin embargo, en muchas situaciones la naturaleza del fenómeno en estudio es intrínsicamente no lineal y por lo tanto, no se pueden utilizar aproximaciones lineales teniéndose que ajustar a los datos un modelo no lineal. Es bien sabido que, en este contexto, el estimador clásico del parámetro de regresión basado en mínimos cuadrados es muy sensible a los datos atípicos y por esta razón, se necesitan métodos robustos de inferencia. Asimismo, en algunas ocasiones, los datos están incompletos por haberse perdido algunas respuestas al azar. En esta tesis, proponemos una familia de estimadores robustos para estimar al parámetro de regresión en un modelo no lineal con posibles respuestas faltantes al azar. Bajo condiciones de regularidad, estudiamos la consistencia y la distribución asintótica de los estimadores propuestos, dando un tratamiento unificado a muestras completas y a muestras con respuestas faltantes. Para estudiar la robustez local, deducimos su función de influencia y para comparar su comportamiento con el del estimador clásico y con otras alternativas robustas, consideramos dos ejemplos numéricos. Llevamos a cabo simulaciones de Monte Carlo para estudiar el comportamiento en muestras finitas de los estimadores propuestos bajo distintos esquemas de pérdida de respuestas y en diferentes escenarios de contaminación. Por otro lado, introducimos una familia de tests robustos utilizando un estadístico de tipo Wald basado en el estimador propuesto con el objetivo de testear hipótesis que involucren al parámetro de regresión. Deducimos su distribución asintótica bajo la hipótesis nula, como también bajo alternativas contiguas. Asimismo, deducimos su función de influencia. Realizamos un estudio de simulación para evaluar el comportamiento de los tests propuestos. Finalmente, el procedimiento propuesto también se ilustra a través del análisis de un conjunto de datos reales.

Abstract:
The linear model is one of the most popular models in Statistics. However, in many situations the nature of the phenomenon is intrinsically nonlinear and so, linear approximations are not valid and the data must be fitted using a nonlinear model. It is well known that, in this setting, the classical estimator of the regression parameter, based on least squares, is very sensitive to outliers and for this reason, robust methods are needed. Besides, in some occasions the data are incomplete since some responses are missing at random. In this thesis, we propose a family of robust estimators to estimate the regression parameter in a nonlinear model with responses missing at random. Under mild conditions, we study the consistency and asymptotic distribution of the proposal, giving a unified treatment to incomplete and complete samples. To study local robustness, we derive their influence function and, to compare its behaviour with that of the classical estimator and other robust alternatives, we consider two numerical examples. We perform Monte Carlo simulations to study the finite sample behavior of the proposed estimators under different schemes of missing responses and different scenarios of contaminations. On the other hand, we introduce a family of robust tests using a Wald–type statistic based on the proposed estimators in order to check hypotheses that involve the regression parameter. We derive their asymptotic distribution under the null hypothesis as well as under contiguous alternatives. Besides, we derive their influence function. We perform a simulation study to evaluate the behaviour of the proposed test. Finally, the proposed procedure is also illustrated analysing a real data set.

"Infiltración y recarga a través del suelo y zona no saturada en áreas de llanura. Caracterización en base a la aplicación de tomografía eléctrica y trazadores" (2013). Dietrich, Sebastián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los sistemas hidrológicos de llanuras son extremadamente complejos y variables en el tiempo y el espacio. Las escasas pendientes superficiales promueven la acumulación de agua en depresiones, lo que favorece los movimientos verticales de agua, es decir, evapotranspiración e infiltración. La cuenca del arroyo del Azul, sitio de estudio de la presente investigación, constituye un caso típico de una cuenca de llanura. A su vez, la presencia de horizontes petrocálcicos someros, comúnmente conocidos como "tosca", adiciona una dificultad extra al estudio de la infiltración a través de la zona no saturada. Estos horizontes tienen cierta continuidad regional pero son heterogéneos en su constitución interna. Dicha heterogeneidad está dada por el mayor o menor contenido de carbonato de calcio que constituye el cemento de estos sedimentos. A raíz de esto se pueden originar sectores con mayor conductividad hidráulica que se conviertan en vías preferenciales de flujo hacia el acuífero. La dificultad radica en poder localizar estas estructuras y evaluar en forma conjunta su comportamiento hidrodinámico. En este contexto, la técnica de la tomografía eléctrica emerge como una herramienta con un alto potencial para poder estudiar simultáneamente las variaciones espaciales en la composición del medio y su funcionamiento como sistema hidrológico. Esto se debe a que ofrece una visualización en 2D sin producir una disturbación en el medio. A través de su aplicación sobre una transecta de estudio, ha sido posible realizar el seguimiento de las variaciones en el contenido de humedad del suelo y la zona no saturada, detectando la presencia de vías preferenciales de flujo y logrando su cuantificación. Los resultados obtenidos han sido respaldados por una cuantiosa instrumentación de campo, aplicación de trazadores y modelación numérica.

Abstract:
Flatland hydrological systems are extremely complex and variable in space and time. These environments are characterized by very flat terrains, with negligible surface slopes, that cause water accumulates in shallow depressions. In this way vertical water movements, i.e., evapotranspiration and infiltration, are favored. The Azul creek basin, where the present research was developed, is a typical example of these kind of systems. In addition, the presence of petrocalcic horizons, locally known as “tosca”, adds supplementary challenges to the study of infiltration through unsaturated zone. Despite their known regional continuity, their internal constitution is not homogeneous, having conspicuous variations in degree of induration. Variation in hardness are mainly due to different amount in calcium carbonate content, which acts as particles cement. Thus, less consolidated zones may turn into preferential pathways of water to the aquifer because carbonate induration influences horizon permeability. In this context, the electrical resistivity tomography arises as a modern tool with a high potential to the assessment of lateral variation in the composition of the system along with its hydrological behavior. This technology offers 2D images of subsurface without causing perturbations of the medium. By means of its application to a study transect it was possible to monitor soil water content changes. This led to the detection of preferential pathway and the estimation of flux velocities. The results were supported by a proper field instrumentation, tracers experiments and mathematical modeling.

"Inflamación en la progresión del cancer de prostata. Hemo oxigenasa 1: regulación y significado funcional" (2009). Gueron, Geraldine. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El cáncer de próstata es la segunda causa de muerte por cáncer en los hombres. La inflamación es un factor de riesgo para esta enfermedad. La Hemo oxigenasa 1 (HO-1), es la isoforma inducible de la enzima limitante en la degradación del hemo y actúa contrarrestando el estrés oxidativo e inflamatorio. En este trabajo investigamos la expresión de HO-1 y sus consecuencias funcionales en líneas tumorales de próstata sensibles (MDA PCa 2b y LNCaP) e insensibles (PC3) a andrógenos. Comprobamos que los niveles basales de HO-1 son menores en PC3 respecto a MDA PCa 2b y LNCaP. El tratamiento con hemina aumentó la expresión de HO-1 tanto a nivel proteico como del mRNA en todas las líneas tumorales y disminuyó significativamente la proliferación e invasión en PC3 y MDA PCa 2b. Por fotografía time-lapse' comprobamos que el tratamiento de PC3 con hemina disminuyó marcadamente la motilidad celular. Se generó la línea estable PC3HO-1, en la cual la sobre-expresión de HO-1 redujo significativamente la proliferación y migración celular respecto a la línea transfectada con el vector vacío. El silenciamiento de HO-1 mediado por siRNA en la línea con altos niveles endógenos de esta proteína (MDA PCa 2b) incrementó significativamente la proliferación y la invasión respecto a las células tratadas con un siRNA control. Mediante array de genes involucrados en inflamación y angiogénesis, identificamos a MMP9 como un nuevo blanco, cuya actividad y expresión fue modulada por manipulación genética y farmacológica de HO-1 en las líneas de PCa. Más aún, células de la línea PC3HO-1 y su respectivo control fueron injectadas s.c. en ratones atímicos nu/nu para el análisis in vivo de tumores creciendo como xenógrafos. El crecimiento tumoral y la expresión de MMP9 se redujeron significativamente en los tumores PC3HO-1 comparado con los xenógrafos controles. Estos resultados implican por primera vez a HO-1 en la proliferación, migración e invasión celular de cáncer de próstata sugiriendo su rol potencial como blanco terapéutico en ensayos clínicos.

Abstract:
Prostate cancer is the second leading cause of cancer-associated death in men. Inflammation has been recognized as a risk factor for this disease. Heme Oxygenase 1 (HO-1), the inducible isoform of the rate-limiting enzyme in heme degradation, counteracts oxidative and inflammatory damage. Here we investigated the regulated expression of HO-1 and its functional consequences in PCa. We studied the impact of genetic and pharmacological disruption of HO-1 in the growth, invasion and migration in androgen sensitive (MDA PCa 2b and LNCaP) and insensitive (PC3) PCa cell lines. Our results show that HO-1 levels are markedly decreased in PC3 compared to MDA PCa 2b and LNCaP). Hemin treatment increased HO-1 at both protein and mRNA levels in all cell lines and decreased cell proliferation and invasion. Furthermore, overexpression of HO-1 in PC3 resulted in markedly reduced cell proliferation and migration. Accordingly, siRNA-mediated silencing of HO-1 expression in MDA PCa 2b cells resulted in increased proliferation and invasion. Using RT-qPCR-generated gene array, a set of inflammatory and angiogenic genes were upor down-regulated in response to HO-1 overexpression identifying MMP9 as a novel downstream target of HO-1. MMP9 production and activity was down-regulated by HO-1 over3expression. Furthermore, PC3 cells stable transfected with HO-1 (PC3HO-1) and controls were injected into nu/nu mice for analysis of in vivo tumor xenograft phenotype. Tumor growth and MMP9 expression was significantly reduced in PC3HO-1 tumors compared to control xenografts. Taken together, these results implicate HO-1 in PCa cell migration and proliferation suggesting its potential role as a therapeutic target in clinical settings.

"Influencia de la elongación transcripcional sobre el splicing alternativo" (2004). Nogués, Guadalupe. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El splicing alternativo de los pre-mRNAs es un mecanismo fundamental de las células eucariotas, que permite generar una gran diversidad proteica a partir de un número relativamente pequeño de genes. Desde hace unos años se sabe que las reacciones de procesamiento de los pre-mRNAs tales como la adición de una caperuza o cap en el extremo 5', el splicing de intrones, y el corte y poliadenilación en el extremo 3', no sólo ocurren cotranscripcionalmente, sino que todos estos procesos estin acoplados funcionalmente entre si. Esto llevó a proponer una posible influencia de la transcripción sobre todos ellos. En particular, nuestro grupo demostró en 1997 que si se cambian los promotores que dirigen la transcripción de un minigén de fibronectina humana, se modifica el patrón de splicing del exón alternativo EDI. En esta tesis continuamos con esta línea de investigación, y nos preguntamos si la modulación de la capacidad de la RNA polimerasa II (Pol II) de elongar a través de pausas del molde, también llamada procesividad, puede modificar el splicing alternativo de EDI. Para responder esto, estudiamos el efecto, sobre el splicing alternativo, de distintos activadores transcripcionales capaces de estimular la iniciación y/o la elongación transcriptional. Además, investigamos indirectamente la influencia del factor de elongación P-TEFb, que posee una actividad kinasa capaz de convertir la Pol II a su isoforma procesiva. Por último, examinamos la influencia de la procesividad de la Pol II en el control del splicing alternativo en relación a la fuerza de los sitios de splicing. Las evidencias obtenidas apoyan un modelo cinético de control del splicing alternativo, según el cual la transcripción mediada por una Pol II altamente procesiva favorecería la exclusión de un exón alternativo, debido probablemente a un menor reconocimiento del sitio subóptimo de splicing.

Abstract:
In eukaryotic cells, pre-mRNA alternative splicing is an essential mechanism that generates a large protein diversity fiom a small number of genes. For the last few years, it has been known that pre-mRNAs processing reactions such as capping, splicing, and 3'-end processing not only occur cotranscriptionally, but they are functionally coupled to each other. This suggested the possibility of transcription affecting all these processes. In particular, our group demonstrated in 1997 that swapping of the promoters that drive transcription of a human fibronectin minigene alters splicing of the ED1 alternative exon. In this thesis we continued with this subject, and we asked ourselves if changes in RNA polymerase I1 (Pol 11) ability to elongate trough pauses in the template, quality also known as processivity, can modify ED1 alternative splicing. To answer this, we studied the effect on alternative splicing of different transcriptional activators that stimulate transcriptional initiation andlor elongation. Besides, we examined indirectly the influence of the elongation factor P-TEFb, that exhibits a kinase activity that makes Pol I1 to become more processive. We also investigated the importance of Pol I1 processivity on the control of alternative splicing in relation to splice sites strength. The evidences obtained support an alternative splicing kinetic model in which transcription driven by a processive Pol I1 would favor alternative exon skipping, probably because of a poor recognition of the suboptimal splice site.

"Influencia de agentes vasoactivos en el proceso implantatorio embrionario : Alteraciones en la diabetes mellitus" (1998). Novaro, Virginia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En el presente trabajo abordamos la implantación embrionaria en ratas controles y diabéticas desde el punto de vista del fenómeno vasoactivo que conlleva. Las prostaglandinas son necesarias para permitir la implantación de los embriones en el lumen, ya sea incrementando el flujo sanguíneo y la vasodilatación del útero durante la decidualización endometrial, como regulando Ia actividad contráctil del tejido miometrial. El óxido nítrico ha sido reconocido como agente vasodilatador y miorrelajante, y parte de su efecto es mediado a través de la regulación de la síntesis de prostaglandinas en diversos procesos fisiológicos. Se ha determinado variaciones en la síntesis uterina de prostaglandinas y de óxido nítrico en la preñez temprana en la rata, y se ha establecido una relación causal entre ambos mecanismos fisiológicos durante la implantación embrionaria. En el útero dichos agentes vasoactivos aumentan durante los días peri-implantatorios de la preñez, como resultado de la combinación de la acción de los esteroides ováricos y de agentes locales derivados del embrión o de la madre. Las isoformas Cab-dependiente y Cap-independiente de la enzima sintetizadora de óxido nítrico son las responsables del incremento en la actividad enzimática en el día de la implantación. La inhibición de la síntesis intraluminal de óxido nítrico reduce el número de embriones implantados en un 50%, probablemente alterando la adecuada irrigación sanguínea al sitio de implantación. También se determinó que la producción uterina de prostaglandina E y qu depende tanto de la producción de óxido nítrico como de señales embrionarias tempranas. Nuestros resultados indican además, que la acción vasoactiva del óxido nítrico y de las prostaglandinas puede modularse de manera tal de compensar alteraciones metabólicas en la rata diabética de tipo no-insulino-dependiente, y permitir que el proceso implantatorio ocurra eficientemente en esta patología.

Abstract:
This thesis addresses the process of embryo implantation in control and diabetic rats focusing in the vasoactive changes it involves. We have established the role of prostaglandins and nitric oxide. The first group of molecules is required to allow embryo implantation in the uterine lumen, by increasing uterine blood flow and vasodilatation during endometrial decidualization and by regulating the contractile activity of the miometrial tissue. On the other hand, nitric oxide, a recognized vasodilating and muscular relaxing agent, exerts part of its effects in several physiological processes by modulating prostaglandin synthesis. In the present work we have determined the existence of significant changes in the uterine synthesis of prostaglandins and nitric oxide during the early pregnancy in the rat and we have established a causal relationship between both mechanisms during the embryonic implantation. The observed increase in the concentration of these vasoactive agents in the uterus takes places in the peri-implantation days, as a result of the combined action of ovarian steroids and local factors derived either from the embryo or the maternal tissue. Both the Cap-dependent and independent isoforms of the nitric oxide synthetase are responsible for the increase in enzymatic activity in the implantation day. The relevant role played by nitric oxide is revealed by the fact that inhibition of uterine nitric oxide synthesis reduces the number of implanted embryos by 50%, probably because it alters the appropriate blood supply to the implantation site. In addition, it was determined that the production of prostaglandin E and an depends both on the production of nitric oxide and on early embryonic signals. Our studies also indicate that the vasoactive effect of nitric oxide and prostaglandins is modified in the non-insulin dependent diabetic rat in such a way as to compensate the metabolic alterations that this pathology involves, thus allowing an efficient embryo implantation.

"Influencia de algunas variables en la síntesis benceno por electrólisis del ácido dihidro (O) ftálico delta 3-5 trans" (1946). Griot, Aldo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de diversos factores biológicos y experimentales sobre la memoria en la rata: el "valor de la experiencia previa"; rol de los receptores muscarinicos y NMDA del hipocampo" (2011). Colettis, Natalia Claudia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Resumen PARTE I - En la primera parte de esta Tesis se investigaron los efectos de ciertos factores biológicos y experimentales sobre la formación de memorias en la rata, analizando su desempeño en la evitación inhibitoria (IA) y en un campo abierto (OF). La tarea de IA de un choque eléctrico en un paso, involucra aprendizaje asociativo y es uno de los paradigmas con componentes aversivos más utilizados en estudios sobre memoria y aprendizaje, especialmente en roedores; es dependiente de hipocampo y otras estructuras. Se investigaron los efectos de la intensidad del estímulo, de la manipulación sistemática desde el destete, del ciclo luz/oscuridad, posibles diferencias entre machos y hembras, así como la influencia de una experiencia previa de exposición y habituación a otro ambiente, sobre el desempeño de ratas en IA. - No hubo diferencias significativas en el desempeño entre hembras y machos. Los animales con manipulación sistemática, entrenados en IA con estimulación “fuerte”, tuvieron mejor desempeño que aquellos sin manipulación; hubo correlación entre la intensidad del estímulo durante el entrenamiento en IA y la expresión de la memoria de larga duración (LTM), mientras que no la hubo en los grupos sin manipulación sistemática. El estímulo para evidenciar aprendizaje fue menor para hembras que para machos de la misma edad, y permitió la expresión tanto de LTM como de una memoria de corta duración (STM) de IA. - Una exposición al OF de 3 o 5 min, no modificó el desempeño en IA cuando el entrenamiento fue suave. Los animales expuestos 2 veces al OF en días consecutivos, mostraron habituación. La exposición a 1 o 2 OF – es decir, con o sin habituación - no produjo cambios en la LTM de la IA con entrenamiento suave. En cambio, 2 OF facilitaron la memoria de IA con entrenamiento fuerte. - El efecto del OF sobre la IA parece depender del nivel de entrenamiento, lo que sugiere que la relevancia comportamental del estímulo podría ser determinante. Se puede especular que un choque más intenso - más doloroso y, en consecuencia, más aversivo -, sería muy relevante para el comportamiento ya que produciría una estimulación sensorial mayor, con la posibilidad de establecer más asociaciones y más fuertes; se reclutarían más circuitos neurales de la misma región en el substrato previamente “sembrado” por el OF, y tal vez de otras áreas cerebrales, induciendo cambios plásticos en más sinapsis, dando lugar a un registro robusto de esa memoria. Desde un enfoque evolutivo, podría representar menos costo el que una experiencia poco o nada aversiva (OF) se asociara fuertemente con una aversiva (IA/choque), sólo cuando esta última fuera comportamentalmente relevante (por ej., produciendo fuerte dolor o daño). Resumen PARTE II - La transmisión muscarínica es requerida tanto durante la adquisición como durante la consolidación temprana para la formación de una LTM de IA, ya que el bloqueo de los receptores muscarínicos (RAChM) extendido o restringido al hipocampo dorsal produce amnesia. El bloqueo de los receptores de glutamato NMDA (RNMDA) del hipocampo durante la consolidación también produce amnesia. - Se analizó el efecto del bloqueo de receptores RNMDA y RAChM en la memoria de la IA luego de: 1) exposición única al OF - novedad - y 2) exploración de un ambiente familiar - 2 OF - ; ambas condiciones posibilitaron la formación de una LTM a pesar del bloqueo extendido de RAChM o de RAChM del hipocampo. La doble exposición al OF también permitió prevenir o superar la amnesia por bloqueo de los RNMDA del hipocampo así como por la inhibición de la síntesis proteica. Durante y luego de la exploración y reexposición al OF se produce un incremento sostenido en la liberación de acetilcolina en hipocampo y corteza, lo que podría contribuir a “preparar el substrato” (aumento de excitabilidad?) para la necesaria plasticidad sináptica que daría lugar a la LTM. Por este y otros mecanismos podría haber disminución del umbral para la inducción de cambios plásticos subyacentes a la formación de la traza, su codificación y consolidación en una LTM. En el marco de la hipótesis de “Etiquetado sináptico y captura de proteínas de plasticidad”, se puede interpretar que dichas proteínas sintetizadas durante el OF previo a la IA facilitarían la plasticidad sináptica en la misma estructura; sin embargo, la inhibición de la síntesis proteica por administración de anisomicina en hipocampo, antes o después del OF previo, que produjo amnesia anterógrada en IA aún cuando se administró 2 horas antes del entrenamiento, también fue superada por la previa exposición al OF, lo que sugiere fuertemente que otra región o estructura debería estar involucrada en este efecto. - También se analizó el rol de subtipos de RNMDA del hipocampo en la consolidación temprana de la memoria de IA. Se ha propuesto que los RNMDA que contienen la subunidad NR2B tiene un papel crítico en determinar el umbral de la plasticidad en el establecimiento de una memoria. El bloqueo selectivo de estos receptores ejerció un efecto promotor en la consolidación de LTM de la IA con entrenamiento subumbral, y facilitador cuando el entrenamiento fue suave. Los resultados corroboran que los RNMDA del hipocampo dorsal son requeridos durante la consolidación de IA, aunque aquellos conteniendo NR2B se comportan como inhibidores durante la consolidación, al menos en etapas tempranas.

Abstract:
Abstract PART I In the first part of this Thesis the effects of diverse biological and experimental factors over memory formation in the rat were investigated, by analyzing the performance in inhibitory avoidance (IA) and in an open field (OF). The IA of an electric foot shock in one step involves associative learning and is one of the most commonly used behavioral paradigms with aversive content in learning and memory studies, particularly in rodents; it depends on the hippocampus and other central structures. The effects of the stimulus intensity, of systematic handling, of the light/dark cycle, the possible males and females differences, as well as the influence of previous exposure and habituation to another environment (OF) on IA performance of rats were investigated. There were no significant differences in performance between males and females. The rats with handling that were trained in IA with a strong stimulus showed a better performance than those without handling. Statistical correlation was found between footshock intensity and long term memory (LTM) expression, while no correlation was found in rats without this handling. The shock level that allowed to evidence learning was lower for females than for males of same age and that led to LTM expression as well as short term memory (STM) of IA. Neither 3 or 5 minutes exposure to the OF showed any significant effect over rats´ performance in IA when trained with a mild shock. Two OF sessions, in two consecutive days, led to habituation. The previous exposure to one or two OF sessions – i.e. with or without habituation – did not modify IA LTM with a mild training but 2 OF sessions facilitated IA memory with a strong stimulus instead. The OF effects on the IA seemed to depend on the training level, suggesting that the behavioral relevance of the stimulus could be determinant. It could be speculated that a more intense shock – more painful and consequently, more aversive – would be very relevant for behavior since it would entail a higher sensorial stimulation, giving the possibility for setting more and/or stronger associations; more neural circuits would be recruited in the same region, in the OF previously “seeded substrate”, and maybe, of other brain areas, producing plastic changes induction in more synapses, leading to a robust recording of that memory. From an evolutionary point of view it could represent a lower cost if a little or none aversive experience (OF) would be strongly associated with an aversive one (IA/strong shock) only when the latest were behaviorally relevant - i.e., causing pain or damage - . Abstract PART II The cholinergic muscarinic transmission is required for acquisition as well as for early consolidation of an IA LTM, since the blockade of muscarinic receptors (MAChR) either extended or restricted to dorsal hippocampus causes amnesia. The blockade of hippocampal glutamate NMDA receptors (NMDAR) during consolidation produces amnesia also. The participation of MAChR and NMDAR in memory of IA was analized following: 1) only one exposure to the OF – novelty -, and 2) the exploration of a familiar environment – 2 OF -; both conditions led to LTM formation in spite of either the extensive or restricted to the hippocampus, MAChR blockade. The double exposure to the OF also allowed to prevent or overcome the amnesia caused by hippocampal NMDAR blockade or protein synthesis inhibition. During and after OF exposure and reexposure there is a continuous increase in ACh release from both hippocampus and cortex which could contribute to “prime the substrate” (increase in excitability?) for the necessary synaptic plasticity that would lead to LTM. By this and other mechanisms, the threshold for induction of plastic changes underlying the trace formation, its codification and consolidation into an LTM, could be lowered. In the frame of the “Synaptic tagging and capture of plasticity-related proteins” hypothesis, these proteins synthesized during the previous OF would facilitate synaptic plasticity for the next task, in the same structure. However, the hippocampal protein synthesis inhibition by anysomicin, administrated either before or after de OF, which induced anterograde amnesia in the IA, even 2 hours before training, was also prevented or overcame by previous exposure to the OF, strongly suggesting that other region or structure should be involved in this effect. Then we studied the differential role of this NMDAR of the dorsal hippocampus in memory consolidation. It has been suggested that NMDAR containing NR2B play a critical role in determining the plasticity threshold in memory formation. The selective blockade of this receptors 1) promoted memory consolidation enabling the LTM formation of the IA with an underthreshold training, 2) had a facilitatory effect over LTM formation of the IA with a mild training. The results corroborated that the NMDAR in dorsal hippocampus are required during IA consolidation, whereas those subtypes containing NR2B behave as inhibitors during memory consolidation, at least in early stages.

"Influencia de factores ambientales sobre el otolito de Australoheros facetus (Pisces, Cichlidae) y algunas comparaciones con otras especies Neotropicales" (2011). González Naya, María Jimena Aída. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La familia Cichlidae es una de las más numerosas del Orden Perciformes, está constituida por alrededor de 1300 especies. En Sudamérica existen unas 400 especies que representan cerca del diez por ciento de la ictiofauna de agua dulce. En la Argentina existen unas 45 especies de cíclidos formalmente descriptas. La distribución de los peces está determinada por factores históricos y por los mecanismos adaptativos en las tres dimensiones elementales del nicho ecológico (la espacial, la trófica y la reproductiva), y está fuertemente influenciada por factores ambientales. Estos factores influyen de diferente manera y con diferente intensidad sobre los organismos, los cuales presentan distintos rangos de eficiencia biológica, en respuesta a factores como temperatura, salinidad, pH, velocidad de la corriente y sustrato, entre otros. Dicha eficiencia depende de las condiciones ecofisiológicas del pez. Algunos valores de los parámetros ambientales son letales o limitantes y determinan el desarrollo de estrategias adaptativas, las cuales pueden reflejarse tanto en estructuras anatómicas, como en la fisiología y el comportamiento de los peces. En esta tesis se planteó como objetivo determinar la influencia de distintos factores ambientales (salinidad, dureza) sobre la morfología, morfometría y química del otolito, utilizando como referencia a Australoheros facetus y comparándolo con otras especies dulceacuícolas Neotropicales. En este trabajo se describe por primera vez el patrón morfológico de las sagittae de diferentes especies Neotropicales de la familia Cichlidae: Cichlasoma dimerus, Gymnogeophagus meridionalis, Crenicichla lepidotta y C. Scotti. En el caso de A. facetus se describió el patrón morfológico y se determinaron las modificaciones morfológicas y morfométricas de las mismas durante las etapas del desarrollo, estableciéndose y caracterizándose dos grupos de sagittae, que corresponderían a juveniles y adultos. Estas variaciones morfológicas y morfométricas observadas durante el desarrollo de A. facetus podrían estar asociadas principalmente a factores biológicos (madurez sexual, crecimiento) y ecológicos (tipo biológico, uso de la columna de agua). Se elaboró una clave dicotómica de las especies estudiadas utilizando caracteres de la topografía de la cara interna y externa de la sagitta. En cuanto a la relación entre los peces y el ambiente, se cuantificó la resistencia y/o tolerancia a niveles máximos de salinidad, en condiciones controladas de laboratorio y se determinó el nivel letal incipiente mediante las técnicas de tiempo de resistencia y de dosificación de mortalidad en dos especies de cíclidos Neotropicales (A. facetus y Cichlasoma biocellatum). Los resultados hallados indican que los cíclidos presentan una alta tolerancia a la salinidad en condiciones experimentales, la cual supera ampliamente los límites de variación ambiental, y esto puede ser considerado como un relicto fisiológico de sus ancestros marinos. Otro de los aspectos novedosos estudiados en el contexto de la relación pez-ambiente, fue la composición química del otolito, la cual ha sido analizada por primera vez en peces dulceacuícolas sudamericanos en este trabajo. Se determinó experimentalmente que factores ambientales como altos niveles de salinidad y dureza influyen en la composición química de los otolitos sagitta de A. facetus. Además se propone a las sagittae como bioindicadores del ambiente que frecuente el pez, teniendo en cuenta diferentes aspectos de la biología y la ecología de los peces y la influencia de las condiciones ambientales. En este trabajo se estableció la existencia de una estrecha relación entre la morfología del otolito, la silueta del pez, forma de la aleta caudal y la capacidad de natación en las especies estudiadas. Los peces de cuerpo comprimido y aleta caudal ahorquillada, son buenos nadadores y presentan una sagitta alargada pequeña con un eje antero-posterior mayor. Los peces de cuerpo elongado y caudal redondeada tendiendo a sublanceolada, son buenos nadadores y aceleradores y poseen el otolito sagitta alargado y los peces de cuerpo orbicular y caudal redondeada son especialistas en maniobra y tienen el otolito sagitta subcircular a circular y bien desarrollado. Por otro lado se concluye que un estudio detallado de la morfología, morfometría y de la química del otolito permitiría reconstruir gran parte de la historia de vida del pez y su asociación con el ambiente.

Abstract:
The family Cichlidae is one of the largest in the Order Perciformes, comprising over 1300 species. In South America there are about 400 species, which represent about ten percent of its freshwater fish fauna. In Argentina there are about 45 cichlid species formally described. Fish distribution is determined by historical factors and by adaptive mechanisms in all three dimensions of the elementary ecological niche (spatial, trophic and reproductive). Also it is strongly influenced by environmental factors. These factors affect in different ways and with different intensity the organisms, which have different ranges of biological efficiency in response to factors such as temperature, salinity, pH, current velocity and substrate, among others. Such efficiency depends on the ecophysiological conditions of the fish. Some environmental parameter values are lethal or limiting and they determine the development of adaptive strategies, which may be reflected both in anatomical structures and in the physiology and behavior of fishes. The aim of this thesis work was to address the influence of environmental factors (salinity, hardness) on the morphology, morphometry and chemistry of the otolith, using Australoheros facetus as a reference of a Neotropical freshwater fish and comparing it with other Neotropical freshwater species. The present work describes for first time the morphological pattern of the sagittae in different Neotropical species of the family Cichlidae: Cichlasoma dimerus. Gymnogeophagus meridionalis, Crenicichla lepidotta and C. Scotti. In the specific case of the sagitta of A. facetus, the morphological pattern was described and the morphological and morphometric modifications of the sagittae during developmental stages were determined, establishing and charactering two groups of sagittae corresponding to juveniles and adults. These morphological and morphometric changes observed during the development of A. facetus may be primarily associated with biological factors such as sexual maturity, growth and with ecological factors such as biological type and use of the water column. A Dichotomous key was developed for the studied species for specific identification of otoliths using characters from of the inner and outer face topography of the sagitta. Regarding the relationship between the fish and the environment, resistance and/or tolerance to maximum levels of salinity were measured in controlled laboratory conditions and incipient lethal level was determined by means of the techniques of resistance time and mortality dosage in two species of Neotropical cichlids (A. facetus and Cichlasoma biocellatum). The results suggest that cichlids have high tolerance to salinity under experimental conditions, which exceeds the limits of environmental variation, and this might be considered a physiological relic from marine ancestors. Another novel aspect studied in the context of fish-environment relationship, was the chemical composition of the otolith, which is discussed for first time for South American freshwater fish in the present work. It was experimentally determined that environmental factors, such as high salinity and hardness, influence the chemical composition of sagitta otoliths of A. facetus. The present work also proposes sagittae as bioindicators of the environment where the fish occurs, taking into account different aspects of the biology and ecology of fishes and the influence of environmental conditions. This work also establishes the existence of a close relationship between the otolith morphology, the shape of the fish, the morphology of its caudal fin and the swimming capacity for the studied species. Fishes with compressed body and forked tail are good swimmers and present a small elongated sagitta with a major anterior-posterior axis. Fishes with elongated body and rounded caudal fin tending to sub-lanceolate are good swimmers and good accelerators exhibit an elongated otolith. Finally, fishes with orbicular body and rounded caudal fin are specialists in maneuver and present a circular to sub-circular well developed otolith. On the other hand, it is concluded that a detailed study of the morphology, morphometry and chemistry of the otolith, would allow rebuilding much of the fish's life history and its association with the environment.

"Influencia de hormonas sexuales sobre la síntesis y liberación de prostaglandinas en el útero de rata" (1985). Franchi, Ana María. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de la Cordillera de los Andes sobre las perturbaciones baroclínicas invernales" (2005). Campetella, Claudia M.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La cordillera de los Andes produce importantes modificaciones en la estructura y evolución de las ondas baroclínicas que afectan el sur de Sudamérica que hasta el momento no han sido totalmente explicados. En consecuencia, este trabajo de Tesis reproduce mediante simulaciones numéricas tal evolución de las ondas baroclínicas y se identifica cuáles son las características morfológicas de los Andes que las dominan. Para alcanzar este objetivo general se realizaron simulaciones con un modelo numérico tridimensional en ecuaciones primitivas, hidrostático y seco basado en el sistema anelástico Boussinesq, con geometría esférica y la altura (z) como coordenada vertical. A este modelo se le incluyó una representación realista de los Andes, que retuvo todas las características salientes de los mismos: altura, pendientes y cambio en la orientación. Las condiciones iniciales fueron determinadas de forma de simular las perturbaciones sinópticas que alcanzan latitudes subtropicales de Sudamérica durante el invierno y que crecen embebidas en la Corriente en Chorro subtropical. Las simulaciones muestran que al atravesar los Andes una perturbación ciclón durante el invierno: i) sufre un debilitamiento en niveles bajos mientras se desplaza sobre la orografía alrededor de los 40ºS, ii) luego comienza a reorganizarse a sotavento, en una latitud más al norte respecto de la inicial a barlovento, iii) en niveles altos, el tren de ondas sigue una trayectoria casi zonal mientras se desplaza desde el este, iv) Este diferente comportamiento entre los niveles bajos y altos, produce un desacople de 180° entre la fase de la perturbación en niveles altos y aquella en niveles bajos, debilitando en consecuencia los procesos que favorecen el desarrollo baroclínico, y vi) alrededor de 1000 km hacia el este de los Andes, la perturbación reestablece su estructura baroclínica y el ciclón en niveles bajos se intensifica. Los estudios de sensibilidad muestran que con Andes de altura reducida a la mitad de la observada, la perturbación tiene una velocidad de fase mayor, no se desplaza hacia el Norte y es menos intensa. Por lo tanto se concluye que la altura de los Andes es el factor determinante en la extensión de la vaguada hacia el NO y en la disminución de la velocidad de fase de las ondas. Asimismo, cuando se duplica la extensión lateral, las advecciones de temperatura exhiben una menor extensión meridional. Los resultados de las simulaciones tanto para el invierno como para el verano muestran que la interacción de las ondas baroclínicas y los Andes, producen la intensificación del flujo del norte en niveles bajos al este de los Andes hacia el sur de su posición climatológica sin necesidad de incluir fuentes de calor diabático ni procesos húmedos.

Abstract:
The Andes cordillera produces strong modifications in the structure and evolution of the baroclinic waves moving along the southern portion of South America, that have not been explained so far. Therefore, performing numerical simulations this work reproduce such modifications and identify the morphologic features of the Andes have strongest influence. A primitive equation model, hydrostatic, dry and based on the Boussinesq system was used. It includes spherical geometry and the vertical height (z) as vertical coordinate. A realistic representation of the Andes was included that includes the most relevant features of this orography like its steep slopes, its height and its geographical orientation. Initial conditions are based on the features of the observed mean flow in the vicinity of South America that during winter, they are associated with the Subtropical Jet. Simulations show that a cyclonic perturbation evolving across the Andes during winter: i) weakens at low levels while it moves over the orography along the 40°S; ii) it reorganizes on the lee side at a latitude equatorward from the initial one upwind; iii) at upper levels, the perturbation follows a more zonal trajectory while it moves eastward, iv) the different behavior between upper and lower levels, results in a 180° out-of-phase in the vertical structure of the perturbation, reducing the associated baroclinicity; v) once the low-level perturbation is located at around 1000 km eastward from the Andes, intesifies due to and increased baroclinicity. Sensitivy experiments show that in cases with Andes with a half of the observed, the perturbation exhibits a larger phase speed, a more zonal propagation, and lower rates of intensification. It can be then concluded that the Andes height is responsible of the northwestern extension of the trough on the lee and its reduced phase speed. Moreover, experiments with lateral extension of the Andes doubled, show temperature advections less extended meridionally. Finally, simulations not only for winter but also for summer show that the interaction between baroclinic waves and the Andes produce a intensification of the northerly low-level flow on the lee, southward from its climatological maximum, in absence of diabatic heating and moisture processes.

"Influencia de la actividad acuosa sobre la producción de citrinina y deoxinivalenol en Trigo" (1998). Comerio, Ricardo M.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudió la influencia de la actividad de agua (aw) sobre la producción de dos micotoxinas importantes en relación a la contaminación potencial del trigo: el deoxinivalenol producido por Gibberella zeae (Schweinitz) Petch (anamorfo: Fusarium graminearum Schwabe), tipico hongo de campo, y la citrinina producida por el hongo xerófilo Penicillium citrinum Thom, mejor adaptado a las condiciones del almacenamiento. Ensayos preliminares realizados a fin de establecer el tratamiento más efectivo para reducir la micota de los cariopses de trigo con la menor alteración posible de sus caracteristicas naturales, determinaron que la desinfección del sustrato se realizara a una dosis de 6 kGy (600 krad). Este tratamiento arrojó el menor recuento fúngico manteniendo una elevada viabilidad de los granos. El trigo desinfectado y acondicionado a diferentes niveles de aw (0,985; 0,945; 0,925 y 0,900), se inoculó con una cepa de Gibberella zeae (Schweinitz) Petch BAFC 210 productora de deoxinivalenol e incubó a 30°C por períodos de aproximadamente dos meses. La influencia de la aw se estudió a través de parámetros cinéticos obtenidos a partir de las curvas de acumulación de la toxina a los diferentes niveles de aw. La mayor acumulación de deoxinivalenol (1000 μg/kg) se detectó a aw 0,980. Respecto de las aw menores (0,945 y 0,925) el máximo nivel de deoxinivalenol detectado fue 80 μg/kg. No fue detectado deoxinivalenol a aw 0,900. Se estudió la influencia de la aw sobre el crecimiento de Penicillium citrinum Thom en trigo. El trigo acondicionado a distintos niveles de aw fue inoculado con la cepa de P. citrimlm Thom BAFC 729 productora de citrinina e incubado a 30°C. El desarrollo de P. citrinum Thom en trigo fue examinado durante 17 días en el caso de las actividades acuosas mayores (0,885; 0,825; 0,810 y 0,800), y durante diez meses en el caso de las actividades acuosas menores (0,775; 0,760). El crecimiento fungico fue medido semicuantitativamente a través de la observación microscópica de los granos. P. citrimlm Thom fue capaz de desarrollarse a aw 0,775 inclusive. La influencia de la awsobre la producción de citrinina en trigo se estudió en el rango de aw 0,800 - 0,885. El trigo acondicionado a distintos niveles de awe inoculado con la cepa BAFC 729 fue incubado a 30°C durante dos meses aproximadamente. A partir de las curvas de acumulación de citrinina se obtuvieron parámetros cinéticos. A medida que decreció la aw, la citrinina fue detectada más tardíamente y los máximos de acumulación decrecieron notablemente (20,2 mg/kg a aw 0,885; 606 μg/kg a aw 0,825 y 57 μg/kg a aw 0,810). No fue detectada citrinina en el sustrato de aw 0,800. Se presenta un método para la determinación de citrinina en trigo con adecuados atributos de desempeño analítico (recuperación 79%; RSDr variable entre 5,1% y 18,1%, según el nivel de contaminación en el rango 10 μg/kg - 200 μg/kg; límite de detección 10 μg/kg).

Abstract:
The objective of present work was to study the influence of water activity (aw) on kinetics of deoxynivalenol and citrinin production in wheat. The substrate was desinfected by gamma irradiation at 6 kGy (600 krad). Preliminary studies shown that this treatment yields grains with the lowest level of contaminant mycota and high viability. The influence of aw on deoxynivalenol accumulation was studied by inoculating wheat conditioned at different aw levels with a toxigenic Gibberella zeae (Schweinitz) Petch BAFC 210 strain, and incubating at 30°C for about two months. Deoxynivalenol accumulation curves were analyzed to obtain kinetic parameters. At aw 0.980 was detected the highest accumulation of deoxynivalenol (1000 μg/kg). At the lower levels of aw 0.945 and 0.925 the maximum quantity of toxin accumulated was 80 μg/kg. Deoxynivalenol was not detected in the sustrate at aw 0.900. The influence of aw on Penicillium citrinum Thom growth in wheat was studied. Wheat conditioned at different levels of aw was inoculated with a citrinin producer strain of P. citrinum Thom BAFC 729, and incubated at 30°C. The experiments were carried out for l7 days at higher aw levels (0.885, 0.825, 0.810 and 0.800) and for ten months at lower ones (0.775, 0.760). Fungal growth was assesed by microscopic examination. P. citrimlm Thom grew down to aw 0.775. The influence of aw on the citrinin accumulation in wheat was studied. Wheat conditioned at different levels of aw and inoculated with the strain of P. citrinum Thom mentioned above, was incubated at 30°C for about two months. Citrinin accumulation curves were analyzed to obtain kinetic parameters. As awdecresed the citrinin was detected later and the maximum accumulation decresed markedly (20.2 mg/kg at aw0.885, 606 pg/kg at aw 0.825 and 57 pg/kg at aw0.810). Citrinin was not detected in the substrate at aw 0.800. An improved method for the detection of citrinin in wheat was studied. Analytical features of the proposed method were suitable for detection of this toxin in wheat (recovery 79%; RSDr between 5,1% and 18,1%, in the range 10 μg/kg - 200 μg/kg; detection limit lO μg/kg).

"Influencia de la actividad neuronal sobre el desarrollo y trofismo de las células granulares del cerebelo en cultivo" (1999). Borodinsky, Laura Noemí. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo de tesis se presenta un estudio sobre los mecanismos por los cuales la actividad neuronal modularía el desarrollo y el trofismo del Sistema Nervioso Central. Se evaluó la influencia de concentraciones despolarizantes de KCI y de GABA sobre la proliferación de células granulares del cerebelo inmaduras y sobre la morfología y la supervivencia de neuronas diferenciadas in Vitro. Se disecaron cerebelos de ratas de 6 a 8 días de edad, y se obtuvieron suspensiones celulares que fueron sembradas en medio de cultivo libre de suero o bien en medio suplementado con un 10% de suero fetal bovino. Apartir de los estudios de incorporación de timidina ³H se observó que las células una vez sembradas poseen un pico proliferativo en las primeras 24 horas de cultivo, que desciende significativamente a las 48 horas y alcanza valores blanco luego de las 72 horas. El agregado de KCl 25 mM en el momento de la siembra conduce a un aumento de la síntesis de ADN del 34 ± 4% (n: 14), y este efecto es completamente bloqueado por MgCl2 10 mM y por nifedipina 10 μM (bloqueante de canales de Ca²+ tipo L). El GABA(0.1-100μM) también induce un incremento de la proliferación de las células granulares inmaduras (23 ± 1%, n: 10) y dicho efecto también es bloqueado por MgCl2 10 mM y por nifedipina 10 μM así como por bicuculina (antagonista de receptores GABAa) y picrotoxina (bloqueante del canal de Clˉ). La preincubación con un inhibidor de la quinasa -MEK1- de la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK), PD98059, bloquea en forma efectiva la proliferación celular inducida por KCl 25 mM y GABA. El efecto proliferativo del KCl parece ser debido a una directa activación de los canales de Ca²+ que se produce como consecuencia de la despolarización y no requiere de sustancias tróficas presentes en el suero o de glutamato que se podría liberar como consecuencia de Ia despolarización. Por el contrario, el mecanismo por el cual el GABA aumenta la proliferación es más complejo pues requiere de una membrana despolarizada y de la interacción de sustancias tróficas presentes en el suero. Al evaluar la influencia del GABA y de concentraciones despolarizantes de KCl sobre la neuritogénesis, se observó que ambos agentes producen un aumento de la complejidad de la red neurítica, cuantificada a través de la medición de la dimensión fractal de neuronas aisladas sembradas por 48 horas en cultivos de baja densidad. Este efecto es bloqueado por el agregado de nifedipina 10 μM. El tratamiento de los cultivos con KCl 25 mM promueve la supervivencia neuronal a los 7 días de la siembra, produciendo un incremento de la misma del 100 ± 20% (n: 6) cuando se la compara con la supervivencia celular en cultivos crecidos en KCl 5 mM (condiciones de reposo). Este aumento fue bloqueado por MgCl2 y nifedipina, pero no fue bloqueado por PD98059. Por el contrario, el tratamiento con GABA no afecta la supervivencia neuronal. Se concluye que altas concentraciones de KCl y el agregado de GABA inducen un aumento de la proliferación y de la complejidad neuronal debido al influjo de calcio a través de canales voltaje dependientes de tipo L y la consecuente activación de la cascada de la MAPK. El hecho de que el GABA no afecte la supervivencia neuronal parece estar relacionado con la pérdida de la capacidad del GABA para activar un influjo de calcio ya que el KCl sí aumenta la supervivencia. A diferencia de lo que sucede en el caso de la proliferación, el aumento de la supervivencia neuronal debido a concentraciones despolarizantes de KCl no parece ser mediado por la cascada de la MAPK.

"Influencia de la calidad del hospedador y de la competencia por recursos energéticos durante la ontogenia sobre el estado fisiológico y el éxito reproductivo del parasitoide Mallophora ruficauda (Diptera: Asilidae)" (2015-03-30). Barrantes, María Eugenia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Mallophora ruficauda es un ectoparasitoide solitario de larvas de coleópteros Scarabaeidae, con una alta preferencia por Cyclocephala signaticollis. La hembra ovipone fuera del hospedador y la larva busca, encuentra y parasita al hospedador actuando como el equivalente ecológico de la hembra adulta de los parasitoides tradicionales. En un contexto de forrajeo, las larvas pueden reconocer y orientarse a C. signaticollis frente a otras especies potenciales, y poseen la capacidad de discriminar a los hospedadores parasitados, sin embargo en la naturaleza el superparasitismo es frecuente. Al tener una única oportunidad de parasitismo, el fitness del parasitoide dependerá completamente de este evento, por lo que el costo de elegir un hospedador de baja calidad (pequeño, parasitado o estresado) es alto. Se desconoce si las larvas pueden evaluar parámetros del hospedador indicadores de su condición corporal, así como la influencia que tiene la toma de decisiones de las larvas sobre la condición o desempeño del adulto que emerge. En esta Tesis se estudió la influencia de la calidad del hospedador seleccionado y de la competencia intraespecífica de las larvas sobre el éxito reproductivo del parasitoide adulto. Se encontró que la probabilidad de ganar la competencia en larvas que están superparasitando a un hospedador son independientes del orden de llegada en que las larvas atacaron al hospedador y del tiempo transcurrido entre el aferramiento de la primera larva y la siguiente, lo que explica en parte la ocurrencia natural del superparasitismo. Al evaluar la orientación de las larvas en parches de hospedadores sanos o parasitados que diferían en tamaño y número se observó que la distribución de larvas entre hospedadores no presentó un patrón definido, a pesar que las larvas detectaron a sus coespecíficos en el parche, sugiriendo que elegir un hospedador de alta calidad en recursos energéticos carecería de importancia en interacciones prolongadas en el tiempo. Por otro lado, se encontró que las larvas pueden discriminar y seleccionar a los hospedadores en función del grado de estrés, utilizando una clave de naturaleza química, y que eligen parasitar al menos perturbado o de mejor calidad. Finalmente, el peso del hospedador y el superparasitismo serían factores importantes que tienen influencia sobre la condición corporal de los parasitoides adultos de la nueva generación.

Abstract:
Mallophora ruficauda is a solitary ectoparasitoid of Scarabaeidae beetle larvae, with a high preference for Cyclocephala signaticollis. The female oviposits outside of the host and the larva seeks, finds and parasitizes the host acting as the ecological equivalent of the adult female in traditional parasitoids. In a foraging context the larvae can recognize and orient towards C. signaticollis against other potential species, and possess the ability to discriminate parasitized hosts, but in nature super-parasitism is common for this species. By having a single opportunity to parasitize, parasitoid fitness depends entirely on this event, therefore the cost of choosing a host of low quality (small, parasitized, or stressed) is high. It is unknown whether larvae can evaluate parameters of the host indicative of its bodily condition, as well the influence these decisions can have on the condition when the adult emerges. In this thesis we studied the influence of the quality of the selected host and larval intraspecific competition on the reproductive success of the adult parasitoid. We found that the probability of winning the competition in larvae that are superparasitizing a host is independent of the order of arrival, where on its body the larvae attacks the host and the time between the attachment of the first larva and the next, which explains in part the natural occurrence of super-parasitism. In assessing the orientation of larvae in patches of healthy or parasitized hosts that differed in size and number we observed no clear pattern in the distribution of larvae between hosts, even though larvae detected conspecifics in the patch, which suggests that choosing a host with high quality energy resources would be irrelevant in prolonged interactions. Furthermore, it was found that the larvae can discriminate and select the host according to its degree of stress, using a chemical cue, and choose to parasitize the least disturbed or of better quality. Finally, the weight of the host and super-parasitism would be important factors influencing the body condition of adult parasitoids of the new generation.

"Influencia de la cantidad y calidad de la luz en el desarrollo de los vegetales" (1931). Guzzetti, Antonia María. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de la catepsina L en la población de células T regulatorias CD4+: rol del estroma" (2011). Camicia, Gabriela Lorena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las células T regulatorias CD4+CD25+Foxp3+ (Treg) son esenciales para el mantenimiento de la tolerancia inmunológica hacia lo propio y la homeostasis del sistema inmune. Utilizando ratones CTSLnkt/nkt, portadores de una mutación en el gen que codifica para la proteasa catepsina L (CTSL), demostramos que la falta de actividad de esta enzima está asociada con una severa disminución en el número de células Treg en el timo, aunque no altera la frecuencia de los timocitos CD25+Foxp3+ en la población CD4 simple positiva. Contrariamente, en los órganos linfoides periféricos la falta de actividad de CTSL correlaciona con un aumento en la proporción de células CD25+Foxp3+ dentro de la población CD4+ y con un incremento en el número de células Treg en los ganglios linfáticos (GL). Determinamos que en los GL de los ratones CTSLnkt/nkt las tasas de proliferación y apoptosis de las células CD4+ Treg y T convencionales (CD4+CD25-Foxp3-) están aumentadas. Estos aumentos afectarían el número de células Treg pero no determinarían el aumento en su frecuencia dentro de la población CD4+. La ausencia de actividad de CTSL en las células linfoides influencia la proliferación de las células T convencionales, mientras que la falta de actividad de CTSL en el entorno de los GL aumenta tanto la proliferación de las células T convencionales como la de las Treg. Ensayos in vitro sugieren que la inhibición de CTSL induce la expresión de Foxp3 en algunas células CD4+CD25-Foxp3-. Interesantemente, las células estromales derivadas de GL de ratones CTSLnkt/nkt producen más TGF-b1 que las de ratones normales. En conjunto estos resultados indican que la CTSL interviene en la regulación del número y la frecuencia de las células Treg en los órganos linfoides, y sugieren que dicha enzima jugaría un rol en la adquisición del fenotipo iTreg en la periferia. Demostramos además que las células estromales de los GL son capaces de aumentar la proliferación y la sobrevida in vitro de las células Treg. Estos resultados aportan nuevos conocimientos acerca de la biología de las células Treg y de los mecanismos que regulan el balance entre las células CD4+ Treg y T convencionales, pudiendo así contribuír al desarrollo de nuevas terapias inmunológicas.

Abstract:
CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Treg) are essential for the maintenance of immunological self-tolerance and immune homeostasis. Using CTSLnkt/nkt mice, carrying a mutation in the gene encoding the cathepsin L protease (CTSL), we demonstrated that the lack of CTSL activity is associated with a severe decrease in the number of Treg thymocytes, although it does not alter the frequency of CD25+Foxp3+ cells within the CD4 simple positive pool. On the other hand, the lack of CTSL activity in the secondary lymphoid organs correlates with an increase in the frequency of CD4+CD25+ cells within the CD4+ T cell subset, along with an increase in the lymph nodes (LN) Treg cell number. We determined that the apoptosis and proliferation rates of both Treg cells and T conventional cells (CD4+CD25-Foxp3-) are increased in the LN of CTSLnkt/nkt mice. These increases would affect the number of Treg cells but they would not determine a higher frequency of Treg cells within the CD4+ T cell subset. The absence of CTSL activity in lymphoid cells increases the proliferation levels of T conventional cells, whereas the lack of CTSL activity in the LN microenvironment influenced both, the T conventional and Treg cells proliferation rates. Our results suggest that CTSL inhibition would induce Foxp3 expression within few CD4+CD25-Foxp3- T cells in vitro. Interestingly, CTSL mutant mice LN derived stromal cells produce more TGF-b1 than LN stromal cells from wt mice. Taken together, these results indicate that CTSL influences the number and frequency of lymphoid organs Treg cells and they suggest that this protease would play a role in the peripheral conversion of T conventional cells to Treg phenotype. We also demonstrated that LN stromal cells are capable to increase both Treg proliferation and survival levels in vitro. Our results provide novel insights into biology of Treg cells and into the mechanisms that regulate the Treg and T conventional cells balance. These findings would contribute to the development of new immunological therapies.

"Influencia de la concentración del ión hidrógeno en el curtido con vegetales comunes y sintéticos" (1940). Sieburger, Roberto G.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de la estructura de la vegetación y del alimento sobre el uso del espacio por las aves granívoras del desierto del Monte Central" (2016-03-22). Zarco, Agustín. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Dependiendo de las diferentes restricciones dietarias y de los recursos que utilizan las aves para sus actividades sus comportamientos pueden verse afectados de diferente manera ante cambios en la abundancia del alimento o en la estructura del hábitat. En este trabajo se analizó cómo estos dos factores modifican en el desierto del Monte central el uso del espacio por parte de tres aves granívoras: Zonotrichia capensis, un granívoro generalista, Saltatricula multicolor, un graminívoro, y Poospiza torquata, graminívoro en la temporada no reproductiva. Durante la etapa reproductiva, a escala de hábitat, se encontró que S. multicolor ante la disminución de la abundancia de alimento y de la cobertura arbórea aumentó la superficie defendida, mientras que Z. capensis no modificó su territorio. A escala de microhábitat, la selección de perchas para cantar no difirió para ninguna de las especies en ambientes con diferente estructura de la vegetación. Durante la temporada no reproductiva se observó que los patrones de movimiento de individuos juveniles y la dispersión natal difiere entre las aves granívoras: mientras S. multicolor posee dispersión natal retrasada, Z. capensis y P. torquata abandonan la zona de cría al finalizar el período de dependencia alimenticia. La abundancia de alimento afectó también la estructura de las bandadas invernales, ya que una disminución del alimento provocó un decrecimiento en el tamaño de las bandadas y en la proporción de aves granívoras que las forman. Las evidencias sugieren que en la porción central del desierto del Monte el efecto que ejercen el alimento y la estructura del hábitat en el uso del espacio por las aves granívoras es especie-específico y depende de las características de éstas.

Abstract:
Birds behaviour could be differently influenced by changes in food abundance and habitat structure, depending on dietary restrictions and resources use. In these study was analyzed how those factors modified the use of space of three seed-eating birds in the central Monte desert during the breeding and non- breeding seasons: Zonotrichia capensis, a granivorous generalist, Saltatricula multicolor, a grass specialist, and Poospiza torquata, a grass specialist in the non-breeding season. During the breeding season and considering at an habitat scale, S. multicolor increased their territorial area due to the lack of food abundance and tree cover, while Z. capensis did not. At a microhabitat scale, there was no difference in song perch selection for any species besides the vegetation structure differences between environments. On the other hand, during the non-breeding season the movement patterns of young individuals and natal dispersal differed among species: S. multicolor shows a delayed natal dispersal and Z. capensis and P. torquata leaved their natal area after the nutritional dependence period. The structure of wintering flocks was affected by food abundance: size and seed-eating birds proportion in the flocks dimished with food decrease. This study results suggest that in the central Monte desert, food and habitat structure affect the space use, being species-specific and depending on bird characteristics.

"Influencia de la fosforilación dependiente de PKA sobre la conformación y función de la GTPasa Rap 1b" (2009-10-09). Edreira, Martín Miguel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La activación de Rap1b por la proteína de intercambio activada por AMPc (Epac) y su fosforilación mediada por la proteína quinasa dependiente de AMPc (PKA), son requeridas para la mitogénesis dependiente de AMPc. Sin embargo, el rol de la fosforilación permanece incierto. Evaluamos potenciales cambios conformacionales inducidos por la fosforilación de Rap1b, utilizando el intercambio hidrogeno/deuterio acoplado a espectroscopia de masa (DXMS) y cristalografía. Velocidades de intercambio hidrogeno/deuterio para Rap1b fosforilada (Rap1-P) y fosfomimética (Rap1-D) mostraron un perfil de intercambio idéntico, con velocidades incrementadas en regiones discretas a lo largo de la proteína, incluyendo un dominio alrededor del sitio de fosforilación y la región efectora. La estructura cristalina de Rap1b-G12V-S179D mostró que la presencia del S179D induce cambios en la interfase con los switch I y II. Nuestro segundo objetivo fue la búsqueda de efectores de Rap1b modulados por fosforilación. Entre los clones aislados por doble hibrido, se encontró la proteína asociada a la adenilil ciclasa 1 (CAP1). Rap y CAP presentaron una asociación independiente del nucleótido, pero dependiente de la isoprenilación de Rap1b. Aunque la fosforilación demostró modular negativamente esta interacción, su efecto sobre la señal mitogénica mediada por Rap1 fue positivo. CAP1, actuando como proteína andamio de Rap, resultó necesaria para la acción de Rap1, siendo requerida además para su activación y fosforilación, efecto que estaría mediado por la estimulación del aumento de los niveles de AMPc.

Abstract:
Activation of Rap1b by the exchange protein activated by cAMP (Epac) and its cAMPdependent protein kinase (PKA)-mediated phosphorylation are required for cAMP dependent mitogenesis. However, the role of phosphorylation remains unknown. We assessed potential conformational changes induced by phosphorylation of Rap1b using the amide hydrogen/deuterium exchange mass spectroscopy (DXMS) and Crystallography. Exchange rates PKA-phosphorylated (Rap1-P) and phosphomimetic (Rap1-D) Rap1b proteins showed the same pattern of exchange, revealing an increased exchange rate in discrete regions along the protein, including a domain around the phosphorylation site and the effector domain. Crystal structure for the full length Rap1b-G12V-S179D showed that the presence of the S179D induce changes at the interface with switch I and II. Our second objective was finding Rap1b effectors modulated in a phospho-dependent fashion.. Within the clones isolated by Two Hybrid, we found the adenylate cyclase-associated protein 1 (CAP1). Rap/CAP association showed to be nucleotide independent, but dependent on Raps’ isoprenylation. Although, phosphorylation showed to negatively modulate this interaction, it had positive effect on the mitogenic signal mediated by Rap1. CAP, acting as a scaffolding protein for Rap1b, was necessary for Rap1 mediated action, and required for Rap1b activation and phosphorylation, effect mediated by stimulating the increase of the levels of cAMP.

"Influencia de la heterogeneidad ambiental de los lechos de macrófitas en los organismos acompañantes en un arroyo pampeano" (2012). Ferreiro, Nicolás Andrés. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En los arroyos pampeanos, las abundantes y diversas plantas acuáticas constituyen la principal fuente de heterogeneidad ambiental. La hipótesis de trabajo fue que la heterogeneidad de diferentes especies de macrófitas, cuantificada por la dimensión fractal (DF), tiene un efecto positivo sobre la abundancia y diversidad de macroinvertebrados que viven sobre ellas, debido a la influencia positiva de la complejidad sobre el espacio habitable por organismos pequeños y la heterogeneidad del hábitat. Se realizaron tres muestreos estacionales de seis parches mixtos con distintas macrófitas sumergidas (Ceratophyllum demersum, Egeria densa, Elodea ernstae, Stuckenia striata) en un tramo del arroyo Las Flores (NE de pcia. Buenos Aires). En cada ocasión, se estimaron las DF de las macrófitas, la biomasa de algas epífitas, así como la abundancia, biomasa, diversidad y tamaño de los invertebrados asociados. La DF de las macrófitas se encontró relacionada positivamente con la densidad de macroinvertebrados pero no con su biomasa, riqueza o diversidad. La relación entre la DF y la abundancia relativa de invertebrados por clase de tamaño, fue positiva para los organismos pequeños y negativa para los organismos grandes. Se realizaron varios experimentos de campo y laboratorio con E. densa, E. ernstae y análogos plásticos, encontrándose una correlación significativa y positiva entre la DF y la densidad de macroinvertebrados, independientemente del tamaño de los organismos. En los arroyos pampeanos, la complejidad de la arquitectura de las macrófitas afecta positivamente a la abundancia de invertebrados pero no a su biomasa ni diversidad.

Abstract:
Dense and diverse communities of macrophytes are the main source of environmental heterogeneity in Pampean streams. The hypothesis was that heterogeneity caused by different macrophyte species, measured as fractal dimension (FD), has a positive effect on associated macroinvertebrate density and diversity due to a positive effect of complexity on available space for small organisms and habitat heterogeneity. Field work consisted in three sampling dates when six macrophyte patches with several submerged species (Ceratophyllum demersum, Egeria densa, Elodea ernstae, Stuckenia striata) were sampled in a reach of Las Flores stream (NE of Buenos Aires province). Macrophyte FD, epiphytic algae biomass, and macroinvertebrate density, biomasss, richness, diversity and size were estimated each time. Macrophyte FD was positively associated to macroinvertebrate density but not to macroinvertebrate biomass, richness or diversity. FD and macroinvertebrate relative abundance were positively related for small organisms and negatively related for big invertebrates. Several field and laboratory experiments were conducted with E. densa, E. ernstae and plastic analogs. Macroinvertebrate density was positively affected by FD but no effect of invertebrate size on this relationship was detected. According to this, in Pampean streams macrophyte architecture complexity has a positive effect on associated macroinvertebrate abundance but not on its biomass or diversity.

"Influencia de la histamina en la regulación del desarrollo y el mantenimiento de las funciones de los tejidos esteroidogénicos testicular y córticoadrenal" (2012). Pagotto, Romina María del Luján. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La histamina (HA) es una amina biógena asociada a diversas funciones llevadas a cabo a través de cuatro subtipos de receptores pertenecientes a la familia de los GPCR. En este trabajo de Tesis se evaluó el efecto de HA sobre la esteroidogénesis y proliferación de tumores córticoadrenales utilizando dos líneas celulares, las Y1 murinas y las H295R humanas y se profundizaron estudios previos del laboratorio en células de Leydig (CL), analizando la participación de esta amina en su desarrollo. En las células córticoadrenales la esteroidogénisis no se vió modificada por HA, lo que supone que el efecto modulador reportado previamente en CL no sería extrapolable a todos los sistemas esteroidogénicos. En cambio, HA inhibió la proliferación de las células H295R a 24h, provocando un arresto de las células en la fase G2/M en un mecanismo mediado por el subtipo de receptor H1 e IP3 y DAG como segundos mensajeros. Estos resultados permitieron identificar un nuevo rol de HA sobre la proliferación de células córticoadrenales humanas que podría contribuir a una mejor comprensión de la patología tumoral y al desarrollo de nuevos agentes terapéuticos. En lo que respecta a las CL, HA fue capaz de inhibir la proliferación de CL inmaduras (CLI) en ensayos in vitro a través de la activación del subtipo de receptor H4, mientras que en estudios in vivo el tratamiento con esta amina produjo un incremento en el número de CL con morfología adulta. Estos datos sugieren que esta amina modularía la proliferación en un paso previo a la diferenciación y pone en evidencia la necesidad de continuar los estudios sobre su función en la transición de los distintos estadíos de desarrollo de CL así como en la génesis de patologías tumorales.

Abstract:
Histamine (HA) is a biogenic amine associated with heterogeneous functions carried out through the activation of four receptor subtypes, all of them members of the GPCR family. In this doctoral thesis the effects of HA on steroidogenesis and proliferation of adrenocortical tumors were evaluated using two experimental models, the murine Y1 and the human H295R cell lines. Also previous studies in Leydig cells (LC) were continued, evaluating the participation of the cited amine in their development. Steroidogenesis was not modified by HA in adrenocortical cells, which suggests that the modulatory effect previously reported in LC can not be extrapolated to all steroidogenic systems. Nevertheless, HA inhibited the proliferation of H295R cells after a 24 h-treatment through activation of the H1 receptor subtype and an increase in the production of IP3 and DAG second messengers, causing a cell cycle arrest in the G2/M phase. These results indicate a new role of HA on human adrenocortical cells proliferation that could contribute to a better understanding of tumor pathology, and to the development of new therapeutic agents. With respect to LC, HA was able to inhibit the proliferation of immature and progenitor LC in in vitro assays via the activation of the H4 receptor subtype, whereas in in vivo studies HA caused an increase in LC number. These data suggest that the amine would modulate the proliferation of LC before differentiation takes place and highlights the need for further studies on its role on the transition of different LC development stages as well as on its influence on tumor pathogenesis.

"Influencia de la microestructura en las propiedades mecánicas dinámicas de caucho natural y estireno butadieno vulcanizados" (2000). Cerveny, Silvina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se realiza un estudio experimental del comportamiento mecánico dinámico de compuestos elastoméricos vulcanizados mediante el sistema acelerante/azufre. El conocimiento de las variaciones que se provocan en los parámetros microestructurales de los elastómeros con el grado de vulcanización, es una herramienta imprescindible para la predicción de su comportamiento mecánico. Los materiales estudiados en este trabajo, caucho natural y estireno-butadieno, han sido seleccionados dada su importancia tecnológica actual. En los estudios realizados en caucho natural, se analizó el comportamiento del material con distinto grado de cura mediante ensayos de tracción axial y torsión. Los resultados de tracción, analizados dentro del modelo de reptación adaptado a redes poliméricas de alto peso molecular, permitió separar las componentes del módulo elástico proveniente de los entrecruzamientos fisicos de la red y de los entrecruzamientos químicos (crosslinks). Se establecieron el peso molecular entre crosslinks y la densidad de crosslinks elásticamente activos en función del tiempo de cura y se interpretó este resultado de acuerdo a las reacciones predominantes durante la vulcanización. En el caso de los ensayos dinámicos los resultados se analizaron mediante el modelo KMF que considera la estructura polimérica como una red de cadenas gaussianas ramificadas tipo árbol. A partir del modelo se obtuvo el espectro de relajación estableciendo el tiempo de relajación medio y se calculó la variación del coeficiente de fricción monomérico con el grado y temperatura de cura. Con la finalidad de discernir si los cambios observados en el coeficiente de fricción se atribuyen totalmente a la presencia de crosslinks elásticamente activos, se realizaron ensayos de hinchamiento por solvente (swelling) y resonancia magnética nuclear (RMN) para caracterizar la estructura formada durante la cura. Se observaron, además de los tipos de crosslinks antes mencionados, la presencia de grupos laterales y estructuras que no contribuyen a la elasticidad. Por otro lado, se realizaron ensayos en estireno-butadieno variando su microestructura (contenido cis, trans, vinil y estirenos) y su tiempo de vulcanización. En este caso se efectuaron ensayos dinámicos y dieléctricos, en un amplio rango de temperaturas y frecuencias, con la finalidad de analizar la influencia de la microestructura y el avance de la cura sobre las propiedades mecánicas. Utilizando ensayos mecánico-dinámicos se analizó la influencia del contenido de vinilo sobre muestras de estireno-butadieno en la zona de la transición vítrea. Los datos experimentales se analizaron dentro del marco de la función de Havriliak-Negami que permite modelar materiales que exhiben una distribución de tiempos de relajación muy extensa. A partir del análisis se encontró que la presencia de crosslinks, en redes altamente entrecruzadas, afecta la dinámica local del polímero. Se estableció la variación del coeficiente de fricción monomérico con el grado de cura y con el contenido de vinilo. Los resultados dieléctricos permitieron localizar una transición secundaria (relajación β) en copolímeros de estireno-butadieno. Los resultados muestran que, para polímeros sin vulcanizar, esta relajación es un proceso local que está influenciado por el entorno local de cada unidad monomérica sin fiierte interacción entre grupos vecinos. Además se analizaron la influencia del grado de cura y microestructura sobre esta relajación. Los resultados indican que el nivel de cura afecta la dinámica local del polímero, cuando las redes se encuentran altamente entrecruzadas. Finalmente, hemos podido cuantificar la variación del volumen libre con el grado de cura mediante la introducción de la técnica de aniquilación de positrones. Los resultados confirman las estimaciones indirectas sobre la fracción de volumen libre que hasta el presente se realizan por medio de técnicas mecánico-dinámicas.

Abstract:
An experimental study of the dynamic mechanical behavior of elastomeric compounds vulcanized with a sulfur/accelerator system was carried out. The knowledge of the variations of the microstructural parameters of elastomeric compounds with the cure degree, is an indispensable tool for the prediction of its mechanical behavior. The materials studied in this work, natural rubber and styrene-butadiene rubber, have been selected by their current technological interest. In the case of natural rubber, the network structure during vulcanization was analyzed by means of measurements of torsion and axial traction. The traction results, analyzed using the tube model adapted to polymeric networks of high molecular weight, allow the separation of constraint and crosslinks contributions. The molecular weight of network chain and crosslink density was calculated as a function of the cure degree. These results were interpreted according to the predominant reactions during the vulcanization. The dynamic mechanical results were analyzed in the frame of KMF model that considers the polymer as a symmetrically tree-like network. From this model the mean relaxation time and the monomeric friction coefficient was obtained for each cure condition. By means of swelling and solid state NMR techniques the network structure was also analyzed in order to distinguish the kinds of sulfur bridges formed during vulcanization. The results showed the presence of lateral groups and structures that do not contribute to the elasticity. On the other hand, we analyzed styrene-butadiene rubber (SBR) with different composition of 1,2 cis, 1,4 trans, 1,2 vinyl and styrene units. Also we analyzed different cure conditions for different compounds of this family. The influence of vinyl content was characterized by means of mechanical dynamical measurements. The experimental data were analyzed in the frame of Havriliak-Negami equation. From the fitting parameters, it was observed that the crosslinks, in highly crosslink networks, affects the local dynamic of the polymer. Also, the variation of the monomeric friction coefficient with the cure degree and vinyl content was calculated. From dielectric measurements of vulcanized SBR, a relaxation process appears at high frequency. This process, the β relaxation, shows an Arrhenius behavior. From our results, it can be assumed that the β relaxation is a local process influenced by the local environment of each monomeric unit without strong interaction between neighboring groups. The influence of the degree cure and microstructure was also analyzed on this relaxation. The results indicate that cure level affects the local dynamics of the polymer, when the networks are highly crosslinked. Finally, an experimental investigation was performed using positron annihilation spectroscopy in order to study the effect of the crosslinking reaction in the polymer free volume. The results confirm the increase free volume size when the crosslinking takes place.

"Influencia de la microestructura en las propiedades mecánicas y térmicas de mezclas de caucho natural y caucho estireno butadieno" (2012). Mansilla, Marcela Angela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El trabajo de Tesis aquí expuesto representa la investigación de un tema de gran interés tanto científico como tecnológico como es el estudio de mezclas elastoméricas vulcanizadas compuestas por caucho natural NR y caucho estireno butadieno SBR. Se tratan de dos de los elastómeros más utilizados a escala global para distintas aplicaciones industriales, en particular como compuestos en diferentes tipos de neumáticos. Se ha desarrollado una técnica para preparar mezclas a escala de laboratorio utilizando la técnica de disolución en un solvente adecuado de ambos elastómeros, incorporación de curativos, mezclado y posterior evaporación. De esta forma se fabricaron 11 compuestos con diferentes proporciones de NR/SBR. También se utilizaron mezclas similares preparadas en un molino de laboratorio. Justamente la diferencia en el método de mezclado de estas muestras llevó a diferentes comportamientos mecánicos y térmicos, producto de las subestructuras obtenidas. Los compuestos fueron preparados con un sistema de cura basado en azufre y acelerante, y vulcanizados a 160 °C que es una temperatura de interés tecnológico. De esta forma, en función de las distintas composiciones estudiadas se lograron diferentes subestructuras, debido a la distribución de las fases obtenidas y a la diferencia en la densidad de entrecruzamiento (crosslinks). Se efectuaron ensayos de hinchamiento (swelling) a temperatura ambiente con la finalidad de cuantificar la densidad de puentes azufre (crosslinks) formados durante la reacción de vulcanización. Luego las muestras fueron caracterizadas por ensayos mecánico-dinámicos, calorimetría diferencial de barrido (DSC), dispersión de rayos X a bajos ángulos (SAXS), Espectroscopía de tiempo de aniquilación de positrones (PALS), Espectroscopía Infrarroja (FT-IR) y Microscopía electrónica de Barrido (SEM). Los resultados obtenidos mediante estas técnicas en las muestras vulcanizadas son analizados considerando la composición de la muestra y la influencia de los puentes formados. Muchos de los resultados obtenidos de las mezclas fabricadas a partir de soluciones de los cauchos fueron comparados con otras mezclas similares fabricadas mecánicamente en un molino de laboratorio. Las micrografías SEM revelaron importantes diferencias morfológicas que indican una mayor miscibilidad en las mezclas fabricadas por solución. Las mediciones reométricas y viscosimétricas revelaron resultados que evidencian una fuerte influencia de los nudos topológicos (entanglements) en las propiedades físicas y mecánicas de las muestras. Se observó que dicha influencia es reducida si las mezclas son fabricadas a partir de soluciones de los cauchos, y el efecto de reducción es más acentuado en mezclas compuestas mayormente por NR. Mediante los resultados de mediciones de DSC efectuados en las mezclas preparadas por solución se pudo evaluar las temperaturas de transición vítrea de cada fase en las mezclas. También fue posible evidenciar la presencia de una interfase cuando ésta técnica se aplico a un estudio en la mezcla de composición 50NR/50SBR. Las mediciones mecánica-dinámicas efectuadas en un péndulo de torsión de oscilaciones forzadas permitieron caracterizar la transición del estado vítreo al elástico de las mezclas vulcanizadas por ambos métodos de fabricación. Los resultados evidenciaron una mayor miscibilidad en las mezclas preparadas por solución. Los resultados obtenidos permitieron caracterizar la estructura de cada una de las mezclas vulcanizadas estudiadas y establecer un vínculo con las propiedades mecánicas y térmicas, en particular como varía con la composición del compuesto y la estructura de fases formada.

Abstract:
The thesis work here exposed represents the investigation on a subject of great interest both scientific as technologically, as is the study of vulcanized elastomer blends composed by natural rubber NR and styrene butadiene rubber SBR. They are about of the most used elastomer globally for various industrial applications, particularly as compounds in different types of tires. It has been developed a technique for preparing elastomer blends at laboratory scale by dissolving in a suitable solvent both elastomer, incorporation of curatives, mixing and subsequent evaporation. In this way 11 compounds were made with different proportions of NR/SBR. Also similar mixtures were used, prepared in a laboratory mill. Precisely the difference in the method of mixing of these samples led to different mechanical and thermal behavior, as a product of the obtained substructures. The compounds were prepared using a cure system based on sulphur and accelerator, and vulcanized at 160°C which is a temperature value of technological interest. Thus, according to the variation in the composition, different substructures were achieved, due to the phase distribution obtained with the crosslink density. Swelling tests were carried out at room temperature in order to quantify the sulphur crosslink density formed during the vulcanization reaction. Then the samples were characterized by dynamic mechanical analysis (DMA), differential scanning calorimetry (DSC), small angle X-ray scattering (SAXS), positron annihilation lifetime spectroscopy (PALS), infrared spectroscopy (FT-IR) and scanning electron microscopy (SEM). The obtained results using these techniques in the cure samples were analyzed by considering the composition of the sample and the influence of the crosslinks. Many of the results obtained from the blends made from rubbers solutions were compared with other similar compounds fabricated mechanically in a laboratory roll mill. SEM micrographs showed significant morphological differences that indicate a higher miscibility in the blends made by solution. Viscometric and rheometric measurements revealed results that evidence a strong influence of topological knots (entanglements) in the physical and mechanical properties of the samples. It was observed that such influence is reduced if the mixtures are made from solutions of the rubbers, and the effect is more pronounced in mixtures composed mostly of NR. Through the results of DSC measurements made in the blends prepared by solution it was possible to evaluate the glass transition temperatures of each phase in the blends. Also, it was possible to detect the presence of an interface when this technique is applied to a study on the compound of composition 50NR/50SBR. Dynamic mechanical measurements made in a torsion forced pendulum allowed to characterize the transition from the glassy to the rubbery state in the vulcanized blends prepared by both methods of manufacture. The results demonstrated a higher miscibility in the blends prepared by solution. The obtained results allowed to characterize the structure of each of the vulcanized blends studied and establish a link with the mechanical and thermal properties, in particular, how it varies with the composition of the compound and the formed phase structure.

"Influencia de la simbiosis con micorrizas arbusculares y rizobios sobre el crecimiento y la tolerancia a estrès salino en especies forestales de Prosopis" (2013-05-02). Scambato, Agustina Azul. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Prosopis es un género de plantas pertenecientes a la familia Fabaceae, adaptada a ambientes de escasa fertilidad. Como otras especies de leguminosas, las especies de este género pueden establecer simbiosis con bacterias fijadoras de nitrógeno y hongos formadores de micorrizas arbusculares. En esta tesis se estudiaron las variaciones entre diversas especies de interés forestal del género Prosopis respecto de su respuesta a condiciones salinas extremas y de los mecanismos que intervienen en dicho proceso. Por otro lado se pone a prueba la hipótesis de que las plántulas de P. alba y P. hassleri mejoran su tolerancia a la salinidad cuando se encuentran asociadas simbióticamente a un hongo MA. Más aún, que dicha respuesta difiere dependiendo de la especie de MA a la que estén asociadas. También se aislaron bacterias capaces de formar nódulos en las seis especies de Prosopis, las cuales fueron caracterizadas genéticamente y evaluadas respecto de su tolerancia a concentraciones de 200 mM de NaCl. Como un objetivo secundario de este trabajo se describieron las variaciones morfológicas entre las diferentes especies de Prosopis estudiadas, respecto del nódulo que desarrollan. Finalmente, se evaluó si la asociación simbiótica con micorrizas arbusculares incrementa la fijación de nitrógeno en especies de Prosopis bajo condiciones control y de estrés salino. Palabras claves: Prosopis spp., estrés salino, hongos micorrícicos arbusculares, bacterias fijadoras de nitrógeno.

Abstract:
Prosopis is a genus of woody legume species (family Fabaceae) adapted to soils with low fertility. Like most legumes, these species establish symbiosis with nitrogen-fixing bacteria and arbuscular mycorrhizal fungi. In this thesis, variations between different tree species of the genus Prosopis were studied regarding their response to extreme saline conditions and mechanisms involved in this process. On the other hand, the hypothesis that seedlings of P. alba and P. hassleri improve their salt tolerance when they are symbiotically associated AM fungi has been tested. Furthermore, it has been shown that such a response differs depending on the inoculated AM fungal isolate. Also, bacteria capable of forming nodules in the six species of Prosopis, were genetically characterized and evaluated for their tolerance to concentrations of 200 mM NaCl. As a secondary objective of this paper, the morphological variations of nodules between different species of Prosopis was described. Finally, we assessed whether the symbiotic association with arbuscular mycorrhizae increases nitrogen fixation in Prosopis species under control and salt stress. Key words: Prosopis spp., salt stress, tolerance, arbuscular mycorrhizal fungi, nitrogen fixing bacteria.

"Influencia de la temperatura sobre la estabilidad de mezclas asfálticas para pavimentos (Sheet asphalt) : definición del coeficiente térmico de estabilidad Hubbard-Field" (1941). Petroni, Eberto. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de la temperatura y del sorbato de potasio en la resistencia térmica de mohos en dulce de leche" (2003). Simión Siu, Christian Israel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de la variedad y del avance de la época de siembra sobre la composición de semilla de lino oleaginoso y sobre rendimiento : Características físico-químicas y composiciones acídicas de los aceites de extracción" (1970). Forchieri, Horacio Alberto. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de las condiciones de elaboración de dulce de leche en la pérdida de lisina reactiva. Estudio cinético" (1995). Llosa, Ricardo Arnaldo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de las macrófitas flotantes en la comunidad fitoplanctónica en un humedal del bajo Paraná (Reserva natural de Otamendi, Argentina" (2008). de Tezanos Pinto, Paula. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se analizaron los efectos de las plantas flotantes libres (PFL) sobre la ecología del fitoplancton a través de experimentos en microcosmos en laboratorio y en mesocosmos en el campo, además de un relevamiento en un ecosistema frecuentemente vegetado con PFL. La cubierta de PFL determinó una columna de agua cuasi oscura y anóxica, que generó liberación de nutrientes desde los sedimentos. La fuerte limitación por luz ejerció un intenso control sobre la biomasa fitoplanctónica, generando ensambles con baja riqueza, pero elevada diversidad y de similar composición específica. Si bien la disponibilidad de nutrientes jugó un rol menor en modelar la respuesta ecológica fitoplanctónica, ésta generó respuestas fisiológicas diferentes. Por el contrario, en ausencia de PFL (mejor clima lumínico) la biomasa fitoplanctónica fue elevada, el oxígeno alcanzó valores de sobresaturación y los nutrientes fueron activamente consumidos. En estos escenarios bien iluminados, los niveles y la relación de nutrientes jugaron un rol fundamental en la estructuración de la composición y la abundancia algal. Así, en altas relaciones de nitrógeno: fósforo (N:P) dominaron especies de la clase Chlorophyceae, mientras que en bajas relaciones de N:P prevalecieron las cianobacterias fijadoras de nitrógeno. La fluctuación periódica en la cobertura de PFL generó una rápida respuesta del ambiente fisicoquímico, pero pobres mecanismos de control sobre el fitoplancton.

Abstract:
The effects of free floating plants (FFP) on the ecology of phytoplankton were analyzed performing indoor experiments in laboratory and outdoor experiments in the field, plus a field survey in a ecosystem frequently vegetated with FFP. The FFP cover determined an almost dark and anoxic water column that triggered the release of nutrients from the sediments. The strong light limitation exerted a strong control on phytoplankton biomass, resulting in assemblages with low richness, but high evenness and similar specific composition. Even if the availability of nutrient played a minor role in shaping the phytoplankton ecological response, yet it triggered different physiological responses. On the other hand, the absence of FFP (better light climate) the phytoplankton biomass was high, oxygen reached super saturation concentrations and nutrients were up taken. In this well illuminated scenario, the levels and ratios of nutrients played a major role in structuring the phytoplankton composition and abundance. Hence, in high nitrogen to phosphorus (N:P) ratios green algae dominated, whereas in low N:P ratios nitrogen fixing cyanobacteria prevailed. The periodic fluctuation in the FFP cover resulted in a quick environmental response, yet a poor control on phytoplankton biomass.

"Influencia de las proteínas de la matriz extracelular sobre la morfología y funcionalidad de las células de Leydig de rata adulta" (2003). Díaz, Emilce Silvina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Está ampliamente aceptado que las proteínas de la matriz extracelular (MEC) intervienen en la regulación de la diferenciación, morfogénesis, proliferación y migración celular. La mayor parte de las interacciones célula-MEC están mediadas por las integrinas, las cuales regulan a su vez, la reorganización del citoesqueleto, el transporte intracelular de iones, el metabolismo de los lípidos, la activación de quinasas y la expresión génica. Asimismo, en la última década se ha demostrado que las integrinas ejercen un papel importante en los procesos reproductivos, incluyendo la fertilización, implantación y embriogénesís. En el testículo, la regulación de distintos procesos como el desarrollo, la diferenciación y la esteroidogénesis de las células de Leydig, depende de la acción concertada de las hormonas gonadotróficas y de una gran variedad de factores locales producidos de manera autocrina o paracrina. A pesar de lo mencionado en el párrafo anterior, son pocos los estudios realizados que intentan dilucidar el papel que ejercen las proteínas de la MEC sobre la funcionalidad de las células de Leydig. Estas células están rodeadas por proteínas de la MEC organizadas como una membrana basal continua o discontinua. El objetivo de esta tesis fue estudiar la influencia de las proteínas de la MEC sobre la morfología, la adhesión celular, la expresión de integrinas y la esteroidogénesis de las células de Leydig . Como modelo experimental, se utilizó el cultivo de células de Leydig de rata adulta, utilizando como sustrato, la laminina-l, el colágeno tipo IV y la fibronectina. Nosotros observamos que las células de Leydig cultivadas sobre laminina-l, colágeno tipo IV y fibronectina, presentan un mayor número de prolongaciones cítoplasmáticas que las cultivadas sobre vidrio. Asimismo, demostramos que la adhesión de las células al sustrato es un fenómeno que ocurre rápidamente y que el grado de adhesión a las mismas varía según el sustrato al cual se adhieren. Además, observamos que si bien las integrinas se expresan de manera constitutiva en las células de Leydig, su expresión aumenta en respuesta a la adhesión de las células a las proteínas de la MEC. Con respecto al efecto de las proteínas de la MEC sobre la capacidad esteroidogénica de las células de Leydig, demostramos que el colágeno tipo IV y la fibronectina inhiben la producción de testosterona de las células de Leydig de rata adulta, tanto en condiciones basales como estimuladas con hCG y que este fenómeno no se debe a un efecto citotóxíco. En cambio, la laminina-l utilizada como sustrato, no ejerció un efecto modulador sobre la producción de testosterona. En relación al mecanismo de la esteroidogénesis, demostramos que el efecto inhibitorio del colágeno tipo IV y la fibronectina ocurre en un paso posterior a la producción de AMPc y anterior a la entrada del colesterol a la membrana mitocondrial interna. Por otra parte, demostramos que el colágeno tipo IV es capaz de modular la expresión de la proteína StAR, involucrada en el transporte del colesterol a la membrana mitocondrial interna. Teniendo en cuenta estos resultados, se decidió analizar alguna de las vías de señalización intracelular activadas por el colágeno IV, capaces de regular negativamente la esteroidogénesis de las células de Leydig. Demostramos que la modulación negativa del colágeno tipo IV sobre la esteroidogénesis de las células de Leydig de rata está mediada por la activación de tirosina quinasas. En particular, detectamos que la interacción del colágeno tipo IV con las integrinas de la subfamilia β1, activa la cascada de Ras/MEK/ERK, siendo estas las responsables de la modulación negativa del colágeno tipo IV sobre la esteroidogénesis. Asimismo demostramos que las proteínas ERK 1-2 están involucradas en las adhesiones focales inducidas por la interacción de las integrinas de las células de Leydig con las proteínas de la MEC. Las integrinas tienen la capacidad de activar la vía de señalización de las MAPK a través de distintos mecanismos. Uno de ellos, ocurre a través de la activación de las proteínas Ras, pudiendo ser dependiente o no de la proteína FAK. Nosotros demostramos que en las células de Leydig de rata, la activación de la cascada de las MEK, inducida por el colágeno tipo IV, se desencadena fundamentalmente, a través de un mecanismo FAK independiente. La activación de las proteínas ERK l-2 independiente de FAK, podría estar mediada por una proteína denominada caveolina-1. Nosotros identificamos la proteína caveolina-1 en las células de Leydig y detectamos que su fosforilación es modulada por la interacción del colágeno tipo IV con las integrinas de la subfamilia β1. Por otro lado, observamos que la expresión de la proteína StAR (“steroidogenic acute regulatory”) no solo es modulada por la vía de señalización del receptor de LH/hCG, sino que en su regulación participan las MAPK, en particular las MEK 1-2. Asimismo, demostramos que si bien el colágeno tipo IV, a través de las integrinas, es el principal responsable de la activación de las proteínas ERK 1-2, PKA también interviene en la fosforilación de las mismas, siendo capaz de modular la cascada de señalización de las MAPK en las células de Leydig de rata estimuladas con hCG. En conclusión, los resultados obtenidos en este trabajo, nos demuestran que las proteínas de la MEC, son capaces de modular la adhesión, la diferenciación celular y la expresión de integrinas. El colágeno tipo IV, a través de la interacción con las integrinas de la subfamilia β1 y mediante un mecanismo FAK independiente, activa a las proteínas ERK 1-2, las cuales regulan negativamente la expresión de la proteína StAR, inhibiendo la producción de testosterona. Además, observamos que el estímulo de LH/hCG al aumentar la producción de AMPc, activa a la PKA, la cual interacciona con la cascada de señalización de las MAPK, ejerciendo una regulación dual sobre la esteroidogénesis en las células de Leydig de rata adulta Los resultados presentados en esta tesis contribuyen a ampliar los conocimientos sobre la influencia que las proteínas de la matriz extracelular ejercen sobre la morfología y diferenciación de las células de Leydig. Demuestran además, que el colágeno tipo IV, es capaz de modular, in vitro, la esteroidogénesis de las células de Leydig de la rata adulta.

Abstract:
It is well known that extracellular matrix (ECM) proteins are involved in the regulation of the differentiation, morphogenesis, proliferation and migration of cells. Most cell-ECM interactions are mediated by integrins, which in turn regulate the reorganization of the cytoskeleton, intracellular transport of ions, lipid metabolism, activation of kinases and genic expression. In the last decade, integrins have also been shown to have an important role in reproductive processes including fertilization, implantation and embryogenesis. In the testis, the regulation of different processes as the development, differentiation and steroidogenesis of Leydig cells depends on the concerted action of gonadotrophic hormones and a large variety of local factors produced in an autocrine or paracrine way. In spite of the information in the paragraph above, few studies have attempted to elucidate the role of ECM proteins in the functioning of Leydig cells. These cells are surrounded by ECM proteins organized as a continuous or discontinuous basement membrane. The objective of this thesis was to study the influence of ECM proteins on the morphology, cell adhesion, integrin expression and steroidogenesis of Leydig cells. The experimental model used was the culture of adult rat Leydig cells, using laminin-1 , type IV collagen and fibronectin as substrates. We observed that the Leydig cells cultured on laminin-1, type IV collagen and fibronectin present a larger number of cytoplasmic processes than those cultured on glass. We also demonstrated that the cells adhesion to the substrate occurs rapidly and that their degree of adhesion varies depending on the substrate to which they adhere. We also observed that, although integrins are constitutively expressed in Leydig cells, their expression increases in response to the adhesion of the cells to ECM proteins. In relation to the effect of ECM proteins on steroidogenesis, we demonstrated that type IV collagen and fibronectin inhibit the production of testosterone of the Leydig cells of adult rat, both in basal conditions and when stimulated with hCG, and that this phenomenon does not result from a cytotoxic effect. On the other hand, laminin-1 used as substrate had no modulatory effect on testosterone production. With respect to the mechanism of steroidogenesis, we demonstrated that the inhibitory effect of type IV collagen and fibronectin occurs after AMPc production step and before the entry of cholesterol into the internal mitochondrial membrane. We also demonstrated that type IV collagen is able to modulate the expression of the StAR (steroidogenic acute regulatory) protein, involved in the transport of cholesterol to the internal mitochondrial membrane. In view of these results, we decided to analyze some of the intracellular signal pathways, activated by collagen IV and able to negatively regulate the steroidogenesis of Leydig cells. We demonstrated that the negative modulation of type IV collagen on the steroidogenesis of rat Leydig cells is mediated by the activation of tirosine kinases. In particular, we found that the interaction of type IV collagen with β1 subfamily integrins activates the Ras/MEK/ERK cascade, these being responsible for the negative modulation of type IV collagen in steroidogenesis. We also demonstrated that ERK 1-2 proteins are involved in the focal adhesions induced by interaction between Leydig cell integrins and ECM proteins. Integrins have the capacity to activate the MAPK signal pathway through different mechanisms. One of these occurs through the activation of Ras proteins, and may or may not depend on the FAK protein. We demonstrated that in rat Leydig cells, the activation of the MEK cascade induced by type IV collagen is triggered basically through an independent FAK mechanism. The activation of the ERK 1-2 proteins independent of FAK could be mediated by a protein: caveolin-l. We identified the caveolin-l protein in the Leydig cells and found that its phosphorilation is modulated by the interaction of type IV collagen with β1 subfamily integrins. We also observed that the expression of the StAR protein is not only modulated by the signal pathway of the LH/hCG receptor, but that the MAPK participate in its regulation, particularly MEK 1-2. We also demonstrated that although type IV collagen, through the integrins, is the main factor in the activation of ERK 1-2 proteins, PKA also intervenes in their fosforilation and is able to modulate the MAPK signal cascade in rat Leydig cells stimulated with hCG. In conclusion, the results of this work demonstrate that ECM proteins are able to modulate adhesion, cell differentiation and integrin expression. Type IV collagen, through interaction with β1 subfamily integrins and by an independent FAK mechanism, activates the ERK 1-2 proteins that negatively regulate expression of the StAR protein, inhibiting testerosterone production. We also observed that LH/hCG stimulation, by increasing AMPc production, activates PKA; interacting with the MPAK signal cascade, exerting dual regulation on the steroidogenesis of adult rat Leydig cells. The results presented in this thesis contribute knowledge of the influence of extracellular matrix proteins on the morphology and differentiation of Leydig cells. They also show that type IV collagen is capable of modulating, in vitro, the steroidogenesis of adult rat Leydig cells.

"Influencia de las radiaciones gamma y de microondas en las características químicas, bioquímicas y mecánicas de tejidos vegetales con especial referencia a Beta vulgaris L.var.conditiva" (2011). Latorre, María Emilia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Es reconocida la importancia del estudio de nuevas tecnologías de procesamiento con el objetivo de colaborar en la mejora de la calidad de los alimentos y en la eficiencia de los procedimientos, abordando las necesidades e intereses de los consumidores, la mejora de sus dietas y el aumento del consumo de productos saludables. Es sabido que durante los distintos procesos de pretratamiento y preservación, el tejido vegetal sufre cambios a nivel estructural y de composición, que podrían afectar las características deseadas y esperadas de los productos basados en frutihortícolas, siendo importantes las investigaciones que tengan la finalidad de contribuir a minimizarlos. En esta investigación se realizaron estudios sobre la aplicación de radiaciones ionizantes (radiación gamma) y no ionizantes (radiación de microondas) sobre el tejido de raíz de remolacha roja (Beta vulgaris L. var. conditiva) y se analizaron los cambios químicos, bioquímicos y mecánicos a fin de conocer la influencia de dichas tecnologías en la calidad de los productos basados en dicho tejido. Todo ello con el objetivo de contribuir al desarrollo de alimentos sanos y aceptados por el consumidor.

Abstract:
It is recognized the importance of studying new processing techniques with the objective of deepening knowledge concerning the improvement of food quality and the increase of processes efficiency. In this way, the needs and interests of the consumers will be addressed tending to the improvement of their diets and the increase of healthy food consumption. It is known that during the pretreatment and the preservation processes, the vegetal tissue suffers changes at the structural and chemical composition level; these changes might affect desired and expected characteristics of products based on fruits and vegetables being, as a consequence, important to perform research that help to minimize these effects. In this research, there were performed studies about the use of ionizing radiations (gamma radiation) and non-ionizing radiation (microwaves) for treating redbeet root tissue (Beta vulgaris L. var. conditiva) and it were analyzed the chemical, biochemical and mechanical changes with the goal of understanding the infuence of these technologies on the quality of the products developed with this tissue. All this with the objective of contributing to the development of healthy food that will be accepted by consumers.

"Influencia de las raíces sobre las poblaciones fúngidas del suelo : efecto rizoplano-rizósfera" (2000). Chiocchio, Viviana Mónica. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia de los aditivos utilizados en el cincado en medio ácido" (2010-03-11). Mahmud, Zulema Angela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En principio y a la luz de todo lo que se conoce sobre la deposición metálica (capítulo 1), de la teoría en general sobre el cincado y sobre los aditivos (capítulo 2) se estudian en la tesis los problemas que a nuestro entender resultaron ser relevantes. Uno de los problemas es la reproducibilidad en las mediciones. De ahí, la importancia de tratar el problema del “El Estado inicial” que consiste en la elección del potencial de inicio de las experiencias, para lograr reproducibilidad en la voltametría. Ese potencial, está relacionado con el potencial a circuito abierto, ECA, ambos característicos del sistema en estudio. Se investiga la posible formación de óxidos en el potencial inicial durante el acondicionamiento del electrodo en Ei, para entender su incidencia en el proceso de electrodeposición. Se analiza el mecanismo por el cual actúan los aniones cloruro, sulfato y el aditivo tiourea, en el estado inicial como en la electrodeposición. Para una mejor comprensión de cada uno de los problemas, se emplean las técnicas transientes como la cronoamperometría, la voltametría catódica, la voltametría de redisolución, la voltametría de onda cuadrada y por último y aparte se estudian las galvanostáticas (en distintas zonas de corrientes). Ésta es una técnica que es necesario considerarla especialmente, porque se usa en la industria. Se analiza la deposición voltamétrica de mezclas 1:1 de cloruros y sulfatos. Así como también, con el objetivo de comparar las eficiencias de deposición de cinc en medio de cloruros y de sulfatos, se recurre a la disolución voltamétrica del depósito. Asimismo, se han utilizado otras técnicas de análisis superficiales, la Microscopía Electrónica de barrido, la técnica de análisis superficial denominada XPS y la Difracción de rayos X para el análisis de texturas de cincados obtenidos en presencia y ausencia de tiourea. Finalmente, teniendo en cuenta las experiencias de la tesis y de lo que se sabe de la bibliografía, se consideran los problemas que aún quedan por resolver en el área.

Abstract:
Initially, and in the light of everything what is known on metallic deposition (chapter 1), on the general theory about zinc plating and about additives in electrodeposition (chapter 2), we consider in this thesis the relevant problems on this matter. One of the problems is the reproducibility in measurements. Thus, the importance of dealing with the problem of “the initial Stage” that consists on the choice of the initial potential of the experiences in order to obtain reproducibility in voltammetry. That potential is related to the open circuit potential, ECA -both of them characteristic of the system under study. The possible oxide formation in the initial potential during the preparation of the electrode in Ei is researched in order to understand its incidence on the electroplating process. The mechanism by which the anions like chloride, sulphate and the thiourea additive act, both in the initial state and in the electroplating, is analyzed. For a better understanding of each problem, transient techniques like chronoamperometry, cathodic voltammetry, redisolution voltammetry, square wave voltammetry are studied and, finally and separately, the electrodeposition in galvanostatic condition (in different current zones). The last one is a technique that is necessary to be specially considered since it is used in the industry. The voltammetric deposition of mixtures of chlorides and sulphates 1:1 is analyzed. We also use the voltammetric dissolution of the deposit with the aim of comparing the efficiencies of zinc deposition in the chlorides and sulphates media. Besides, other techniques of superficial analysis have been used: the Electronic Microscopy EDX, the XPS technique of superficial analysis, and the x-ray diffraction for the analysis of textures of zinc deposits obtained in presence and absence of thiourea. Finally, we consider the problems that still are to solve in the area, taking into account the existing bibliography and our experience with the thesis.

"Influencia de los defectos microestructurales sobre el fenómeno de fragilización por hidrógeno en aceros" (1997). Luppo, María Inés. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Con el nombre de fragilización por hidrógeno (FPH) se describen los efectos nocivos del hidrógeno sobre las propiedades físicas y mecánicas de los materiales. A pesar de las intensas investigaciones, la fragilización por hidrogeno no esta aun completamente entendida. Sin embargo, se ha establecido que el efecto de atrapamiento por los defectos de la red, contribuye directamente a todos los mecanismos de fragilización. En este trabajo estudiamos los efectos de la variación de la microestructura sobre la FPH en un acero de bajo carbono (ASTM A516 G60) y un acero inoxidable austenitico (AISI 304), ambos de gran uso en medios hidrogenados. En el caso del acero al carbono, cambiamos la microestructura presente en las uniones soldadas de este material (estructura martensitica) por medio de un revenido a baja temperatura, 453 K, y a alta temperatura, 753 K. Evaluamos la modificación de las trampas para el hidrogeno (los defectos del material) mediante la técnica de la microimpresión de hidrogeno, la técnica de la permeación de hidrogeno y ensayos de fisuración. Los resultados mostraron que en el acero de bajo carbono, las interfases entre listones de martensita son los principales sitios de atrapamiento para el hidrogeno en la martensita sin revenir. Estos sitios van perdiendo su poder de atrapamiento a medida que aumenta la temperatura de revenido. Este hecho, visualizado mediante la técnica de la microimpresión de hidrogeno, coincide con el aumento de la difusividad de hidrogeno y la disminución de la FPH. En el revenido a baja temperatura, la disminución del poder de atrapamiento de las interfases entre listones fue atribuida al relevado de tensiones por reordenamiento de dislocaciones producido por el crecimiento de los carburos. Este hecho, puesto en evidencia a través de la técnica de la permeación de hidrogeno, permitió además obtener la cinética de precipitación de carburos. En cambio, para el revenido a alta temperatura, la reducción del atrapamiento fue atribuida a la disminución de la densidad de dislocaciones. En lo que respecta al acero inoxidable, la microestructura estudiada fueron uniones soldadas formadas por austenita y distintos contenidos de ferrita delta. Estudiamos la influencia de esta ultima fase sobre la distribución de hidrogeno en la microestructura por medio de la técnica de la microimpresión de hidrogeno. Evaluamos el danio causado por el hidrogeno a través de ensayos de fisuración y de tracción. La técnica de la microimpresión de hidrogeno puso en evidencia que las interfaces ferrita-austenita actúan como trampas para el hidrogeno. La presencia de ferrita hace que el material sea más susceptible frente al hidrogeno, a mayor cantidad de ferrita es mayor la FPH, pero fundamentalmente modifica la forma en que el hidrogeno dania al material: la austenita ya no se fractura fragilmente sino que lo hace de manera dúctil, acompañando la fractura frágil de la ferrita. Las técnicas empleadas en el presente trabajo demostraron, de manera clara y precisa, el rol fundamental que juegan las trampas en la FPH de los materiales.

Abstract:
Hydrogen embrittlement (HE) is the deleterious effects of hydrogen on the physical and mechanical properties of materials. Despite intense investigation, hydrogen embrittlement is not completely understood yet. However, it has been established that the trapping effect by lattice defects, contributes directly to all embrittlement mechanisms. In this work the effects on the HE due to variation of the microstructure were studied on a low carbon steel (ASTM A516 G60) and an austenitic stainless steel (AISI 304), both of great use in hydrogenated environments. In the case of the low carbon steel, the microstructure presents in welded unions of this material (martensitic structure) was changed by means of tempering at low temperature, 453 K, and at high temperature, 723 K. The hydrogen traps modifications was evaluated by means the hydrogen microprint technique, hydrogen permeation test and hydrogen embrittlement tests. The results showed that in the low carbon steel, the laths interfaces of martensite are the main hydrogen trapping sites in the fresh-martensite. The trapping power of these sites decrease as the tempering temperature increases. This fact, visualised by means of the hydrogen microprint technique, is in coincidence with the increase of the hydrogen diffusivity and the decrease of the HE. In the low temperature tempering, the decrease in trapping power of the laths interfaces was attributed to stress relaxation by dislocation rearrangements produced by carbides precipitation. This fact, put in evidence through the hydrogen permeation tests, allowed also to obtain carbides precipitation kinetics. On the other hand, in the high temperature tempering, the reduction of the trapping was attributed to the decrease in the dislocations density. For the stainless steel, the microstructure tested were welded unions consisting of austenite with different contents of delta ferrite. The influence of this last phase on the hydrogen distribution in the microstructure was studied by means the hydrogen microprint technique. The damage caused by the hydrogen was evaluated through bending tests and tensile tests. The interfaces ferrite-austenite result as hydrogen traps, put in evidence by means the hydrogen microprint technique. The presence of ferrite increases the susceptibility to hydrogen, the more quantity of ferrite the more HE, but basically it modify the form in which the hydrogen damages the material: the austenite changes from its normal fragile fracture to ductile fracture, accompanying the ferrite fragile fracture. The techniques employed in this work demonstrated, in a clear and precise way, the role of traps in HE.

"Influencia de los procesos de elaboración en el contenido de micotoxinas de alimentos de consumo masivo" (2000). Neira, María Susana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se llevó a cabo en la población de la Universidad Nacional de Luján una encuesta dietética de recordatorio de 24 horas con el objeto de evaluar los patrones de consumo de alimentos y el aporte de energía por parte de los alimentos derivados de cereales. La muestra (16% de la población total) estuvo compuesta por 901 personas. Los resultados evidenciaron que los productos derivados del trigo constituyen más del 90% de los cereales consumidos. El predominio de alimentos manufacturados con trigo, entre el consumo de cereales, secundado por la ingesta promedio de maiz, determinó la necesidad de evaluar la ocurrencia natural de micotoxinas en ambos cereales. Para ello se realizó un relevamiento de la ocurrencia de micotoxinas en muestras de maíz y trigo obtenidas durante los periodos de cosecha 1992/ 93 y 1993/94 en las principales zonas de producción. El 2.72 % de las 294 muestras de maiz analizadas en 1993 y el 31.8% de las 280 muestras correspondientes a la cosecha 1994 resultaron contaminadas por zearalenona, con valores promedios sobre muestras positivas de 151.5 μg/kg y 292.9 μg/kg, respectivamente. Es importante destacar que no se detectaron muestras positivas para aflatoxinas. El 37,4% de las 222 muestras de trigo de la cosecha 1992 resultó estar contaminado por deoxinivalenol (DON), con una valor promedio sobre muestras positivas de 201.3 μg/kg. En una etapa posterior, se procedió a estudiar la ocurrencia de DON en muestras de trigo (cosecha 1994), harina de trigo y subproductos. En los productos de panificación, previamente identificados entre los de mayor consumo por la población estudiada, se observó una elevada frecuencia de contaminación, un 83% en pan francés y el 100% en medialunas de manteca. Los niveles de contaminación por DON fueron significativamente menores en los productos finales con respecto al trigo y a la harina. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos se estudió el proceso de panificación en establecimientos de elaboración artesanal, en donde se determinó que la reducción promedio de DON en los productos elaborados con harina naturalmente contaminada era de 44.3 %. En la etapa final que consistió en la elaboración a escala piloto de diferentes productos se comprobó que la fermentación (levado) de las masas produjo una disminución de la contaminación inicial de DON y se establecieron parámetros que permiten optimizar el proceso logrando mayor reducción de esta toxina durante la etapa de fermentación a 50°C, 41% en pan francés y 56% en pan de Viena.

Abstract:
A dietary intake survey employing a 24-hours recall was carried out at the National University of Luján, Argentina with the objective to evaluate the food consumption patterns and the energy and protein contribution through cereals intake. A representative sample of 901 persons (16% of the population) was assessed. Among cereal products, people consumed mainly wheat subproducts (90%) followed by maize products, considering the main daily intake. Due to the identification of a high intake of cereal products made of wheat and maize, it was considered valuable to assess the natural occurrence of mycotoxins in those cereals. The survey of the natural occurrence of mycotoxins in maize and wheat samples from the main production area in Argentina, was carried out during 1993 and 1994 harvests. The 2.72 % of 294 maize samples analyzed in 1993, and the 31.8% of 280 belonging to 1994 harvest, were contaminated by zearalenone with a mean contamination level over positive samples of 151.5 μg/kg and 292.9 μg/kg, respectively. None of the analyzed samples contained detectable aflatoxins. Among the 222 wheat samples of 1992 harvest, 37.4% were contaminated with deoxynivalenol (DON) with a mean contamination over positive samples of 201.3 μg/kg. In a next step, the natural occurrence of DON in wheat (1994 harvest), wheat flour and bakery products was studied. French bread and butter croissant identified among the mainly consumed products, showed 83 % and 100% of contaminated samples, respectively. DON contamination levels in bakery products were lower than those detected in wheat and flour. Based on these results, the effect of breadmaking process on DON contamination was evaluated in a low-technology bakery. A mean percent of reduction of 44.3% in DON initial contamination was observed as a consequence of the bread making process. Finally, using a pilot scale, the stability of DON during the fermentation stage of the breadmaking process was studied. Two different products, French bread and Vienna bread, were prepared with naturally contaminated wheat flour under controlled experimental conditions. Dough was fermented in a cabinet at 30°C, 40°C and 50°C according to standard procedures employed in Argentinean low technology bakeries. The maximum reduction during fermentation was obtained at 50°C, achieving a 41% and 56% of decrease in French bread and Vienna bread, respectively.

"Influencia de los rasgos de historia de vida y del uso de información en la adquisición de recursos y dispersión en el parasitoide Ibalia leucospoides Hochenwarth (Hymenoptera: Ibaliidae)" (2011). Fischbein, Deborah. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo central de esta tesis es estudiar como la selección natural moldea los rasgos de historia de vida y el comportamiento de los animales de acuerdo al entorno ecológico en el que viven. Este marco teórico nos conduce a las hipótesis especificas respecto a los procesos de reproducción, dispersión y forrajeo de recursos en el parasitoide Ibalia leucospoides. Los resultados principales de la tesis son (1) que la proporción de huevos maduros que posee la hembra al momento de la emergencia respecto de la fecundidad potencial es alta; es decir que I. leucospoides tiende a la pro-ovigenia como estrategia de maduración de huevos; (2) las hembras adultas no dependen de la alimentación para sostener la maduración de huevos, ni tampoco para el mantenimiento somático y la capacidad de vuelo; (3) bajo nuestras condiciones experimentales la capacidad de vuelo obedece a las características morfológicas del parasitoide (tamaño y carga alar) y finalmente; (4) respecto a la búsqueda de hospedadores, las hembras son capaces de discriminar diferencias en la calidad de los parches de hospedadores a la distancia, sin la necesidad de llevar a cabo un proceso de muestreo de los mismos. Además, para la explotación de los parches utilizan información de los parches de hospedadores vecinos. El éxito reproductivo de I. leucospoides, parasitoide pro-ovigenico, no está limitado por la ausencia de alimento durante la vida adulto. Ambas estrategias, la de asignación de recursos hacia diferentes funciones biológicas y la comportamental de forrajeo, adoptadas por esta especie, probablemente sean en respuesta a características del ambiente tales como la distribución fuertemente agregada de Sirex noctilio, el hospedador, y la disponibilidad de recurso (i.e. hospedador y/o alimento).

Abstract:
The central aim of this thesis is to explore how natural selection shapes life history traits and behaviuors according to the ecological environment in which an animal exists. This overall framework leads to specific hypotheses concerning the reproductive, dispersal and foraging processes in the parasitoid Ibalia leucospoides. The experiments in behavioural ecology and eco-physiology in female parasitoids of Ibalia leucospoides show as main results, that (1) the proportion of the potential lifetime eggs complement that is mature at female emergence is high; (2) low dependency on adult female feeding, not only for egg maturation but also for survival and flight; (3) under our experimental conditions flight capacity depends on the morphological characteristics of the parasitoid (size and wing loading); and (4) regarding host foraging, females accurately assess differences in host patch quality from a distance without the need of displaying a sampling process; in addition that patch exploitation times depend on the information obtained from the surrounding patches. The reproductive success of I. leucospoides, a proovigenic parasitoid, is not constrained by adult food deprivation. Both the resource allocation strategy toward the different biological functions and the foraging behaviour adopted by this parasitoid species may well be in respond to habitat characteristics, such as a strongly aggregated distribution of Sirex noctilio, the host, as well as to the resources availability (i.e. host and food).

"Influencia del balance TH1/TH2 en las alteraciones neuroinmunes y conductuales inducidas por estrés crónico moderado. Reversión con copaxone" (2011). Palumbo, María Laura. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de este trabajo fue interrelacionar las alteraciones conductuales, neuroquímicas e inmunológicas inducidas por estrés crónico en dos cepas endocriadas de ratones, BALB/c y C57BL/6. Se utilizó un modelo de estrés crónico moderado (CMS) que consiste en la aplicación de varios estresores de moderada intensidad, de manera crónica, alternada e impredecible durante varias semanas. Se observó que los ratones BALB/c expuestos a CMS presentaron una menor capacidad de aprendizaje y memoria compatible con alteraciones estructurales y neuroquímicas observadas en el hipocampo, como disminución de la neurogenésis, disminución de la actividad y del nivel proteico de nNOS, perfil proteico diferencial de isoformas de PKC, entre otras. Estas alteraciones no fueron encontradas en los ratones C57BL/6 expuestos a CMS. En lo que respecta a la respuesta inmune, los BALB/c CMS presentaron una disminución en la proliferación de linfocitos T y un aumento en la proliferación de linfocitos B estimulada por mitógenos. Así como un desbalance de citoquinas hacia Th2. Por el contrario, los animales C57BL/6 CMS mostraron un aumento en la reactividad en los linfocitos T sin presentar cambios en la correspondiente a los linfocitos B y un desbalance de citoquinas hacia Th1. Respecto a la participación de las hormonas clásicamente relacionadas al estrés (catecolaminas y corticosterona), los resultados indicaron que no existe una coincidencia temporal entre el aumento de dichas hormonas y la aparición de las alteraciones mencionadas. Además, los cambios observados en los ratones BALB/c CMS pudieron ser revertidos por la administración de Copaxone®, que estimula débilmente la respuesta autoinmune induciendo un aumento de las citoquinas Th1. Estos hallazgos señalan que las terapias basadas en la modulación del sistema inmune podrían ser útiles para el tratamiento de déficit cognitivos inducidos por estrés. Palabras claves: psiconeuroinmunología, ratones BALB/c y C57BL/6, estrés crónico, aprendizaje y memoria, neurogénesis, óxido nítrico sintasa, proteína quinasa C, balance Th1/Th2, Copaxone®.

Abstract:
The aim of this work was to investigate the relationship between the behavioral, neurochemical and immunological alterations induced by chronic stress in two inbred mouse strains, BALB/c y C57BL/6. A chronic mild stress (CMS) model, consisting of the chronic application of several stressors of moderate intensity applied in an unpredictable manner for several weeks, was utilized. CMS BALB/c mice showed an impaired learning and memory which are related to structural and neurochemical changes observed in the hippocampus, such us a decrease of neurogenesis, a decrease of NOS activity and protein levels, differential protein levels of PKC isoform, among others. These alterations were not found in C57BL/6 mice subjected to CMS. Respect to immune response, CMS BALB/c mice showed a decrease in the T- lymphocyte and an increase of B-lymphocyte mitogen- stimulated proliferation, and an imbalance towards Th2 cytokines. On the contrary, CMS C57BL/6 animals showed an increase in the reactivity of T-lymphocytes without changes in the B- lymphocytes reactivity, and an imbalance towards Th1 cytokines. Concerning to the participation of the classically stress-associated hormones (catecholamines and corticosterone) in the above mentioned findings, the results indicate that there was not a temporal coincidence between corticosterone and catecholamines increase and behavioral and immune alterations. The changes observed in CMS BALB/c mice were reverted by the administration of Copaxone®, which weakly stimulates the autoimmune response increasing Th1 cytokines. These findings indicate that immune-based therapies could be useful for the treatment of cognitive deficits induced by stress.

"Influencia del condicionamiento genético y del estrés en la desregulación de la respuesta inmune en el estado diabético. Participación del estrés oxidativo" (2011). Rubinstein Guichon, Mara Roxana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Aunque está clínicamente aceptado que la diabetes predispone a sufrir infecciones severas y los estudios sugieren una asociación entre esta patología y las infecciones, no se conocen los mecanismos que median entre la diabetes y la inmunosupresión. A su vez, el estrés tiene un significativo reconocimiento en el desarrollo y la evolución de la diabetes. Es así que el objetivo del presente trabajo fue estudiar la respuesta inmune en la diabetes mellitus tipo 1, ampliando el conocimiento acerca de los factores genéticos y no genéticos que participan en la evolución del estado diabético y en la alteración de la respuesta inmune. Para esto, se utilizó un modelo experimental murino de diabetes mellitus tipo 1 en dos cepas de ratones: BALB/cByJ y C57Bl/6J y se analizó la respuesta inmune encontrándose que, en los ratones diabéticos de la cepa BALB/cByJ, la repuesta inmune determinada in vivo e in vitro se encontraba afectada, mientras que en los ratones de la cepa C57Bl/6J no lo estaba. A continuación se investigó el efecto del estrés sobre la respuesta inmune en la diabetes. Para esto se utilizó el modelo de estrés crónico moderado (CMS) aplicado luego de la instauración de la diabetes. Los resultados mostraron que en los ratones diabéticos de la cepa BALB/cByJ el CMS provocó alteraciones más tempranas sobre la proliferación linfocitaria probablemente mediadas por el aumento en la glucemia. En estos ratones se observó una correlación positiva entre la glucemia y catecolaminas. En cuanto al efecto sobre la cepa C57Bl/6J, sólo se encontró un aumento en las glucemias sin estar presente la alteración inmune. Dado que la hiperglucemia es el principal factor involucrado en el desarrollo de las complicaciones de la diabetes, se evaluó su participación en los efectos observados. Para esto, se analizó el efecto de la alta glucosa sobre la actividad linfocitaria normal. Las altas concentraciones de glucosa sobre linfocitos provenientes de la cepa BALB/cByJ afectaron directamente la proliferación y condujeron a la muerte de las células, alteración que no se observó en los linfocitos provenientes de la cepa C57Bl/6J. Entre los mecanismos que estarían implicados en los efectos deletéreos de la alta glucosa se destacó el aumento en el estrés oxidativo. Estos resultados señalan la influencia del condicionamiento genético y del estrés en el deterioro de la respuesta inmune en el estado diabético. Si bien la extrapolación de estos resultados a pacientes con diabetes debe ser tomada con precaución, puntualizan la importancia de un temprano y adecuado control de la glucemia como así también de los factores ambientales que puedan alterarla.

Abstract:
Diabetes is widely believed to predispose to serious infections. Experimental clinical literature supports an association between diabetes and infection. However, the mechanisms linking diabetes and immunosuppression are not well defined. In particular, stress has a significant recognition in the development and progression of diabetes. Therefore, the aim of the present project was to study the immune response in type 1 diabetes and genetic and nongenetic factors involved in the evolution of the diabetic state and in immune response alteration. For this purpose, an experimental animal model of diabetes was used in two mice strains: BALB/cByJ and C57Bl/6J and the immune response was analyzed. The immune response in BALB/cByJ diabetic mice was affected while in C57Bl/6J it was not. Then, the effect of stress on immune response in the diabetic state was investigated. The animals were exposed to a chronic mild stress model after diabetes induction. Stress exposure in BALB/cByJ mice caused earlier alterations on immune response mediated by the glycaemia increase. Also, a positive correlation between glycaemia and catecholamines was found. In C57Bl/6J mice, stress exposure only caused glycaemia increase without the immune alteration. Hyperglyacemia is the main factor involved in the development of diabetes complication, thus its participation in the observed effects was evaluated. The effect of high glucose incubation on lymphocyte reactivity was studied. In BALB/cByJ lymphocytes, high glucose decreased the proliferation and increased the apoptosis whereas in C57Bl/6J lymphocytes these alterations were not observed. Among the mechanisms involved in the deleterious effects of high glucose, the increase in oxidative stress was the most important. These results show the influence of genetic background and stress in the immune alteration in the diabetic state. Although extrapolation of these results to patients with diabetes should be taken with caution, it is important to emphasize the early and adequate glycaemia control as well as environmental factors too.

"Influencia del estrés sobre la regulación de la actividad 11ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa renal" (2003). Zallocchi, Marisa Laura. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Este trabajo pretende dilucidar algunos de los mecanismos mediados por el estrés y por los glucocorticoides, sobre la actividad de la llβ-hidroxiesteroide deshidrogenasa 2 (11βHSD2). Con este fin se obtuvieron los siguientes aportes: La presencia de la glándula adrenal intacta permite que el animal responda, ante una situación de estrés, con un aumento en la actividad y abundancia de la 11βHSD2 renal; produciéndose un aumento en el catabolismo de los glucocorticoides circulantes. En ausencia de la glándula adrenal, la respuesta del organismo difiere dependiendo de la situación de estrés ensayada. Para el caso de las ratas sometidas a una sobrecarga simulada, existe un incremento de la actividad y abundancia de la 11βHSD2 renal, mientras que, los animales sometidos a una acidosis metabólica, sólo evidencian un incremento en la actividad enzimática con la administración de glucocorticoides. Este incremento se produce sin un aumento en la expresión de la enzima. La administración aguda de corticosterona a ratas adrenalectomizadas, produjo un aumento progresivo de la actividad y abundancia enzimática, hasta la dosis fisiológica de 68 μg de corticosterona/ 100 g de peso corporal. La administración crónica de glucocorticoides, sólo produjo un incremento en la actividad y abundancia de la 11βHSD2, con la dosis suprafisiológica de 308 μg de corticosterona/100 g peso corporal. Existe un incremento progresivo de la actividad enzimática a medida que aumentan los niveles de glucocorticoides circulantes, hasta una cierta concentración (concentración umbral) a partir de la cual la actividad enzimática se vuelve independiente de los niveles de corticosterona. Esta falta de correlación entre los niveles de corticosterona y la actividad enzimática, junto con el aumento de actividad observado en animales adrenalectomizados estresados llevó a plantear la posibilidad de la existencia de algún factor extra-adrenal involucrado en la regulación de la actividad de la 11βHSD2. La linea celular MDCK, derivada de riñón distal de perro posee actividad 11β-deshidrogenasa. La serotonina, posible factor involucrado en la respuesta de la 11βHSD2 frente al estrés, estimula la actividad 11βHSD2 en esta línea celular. Esta estimulación depende de la concentración de serotonina utilizada y de la forma de administración. Además, serotonina muestra un efecto multifásico sobre la estimulación de la actividad enzimática. La acción de serotonina sobre las células MDCK, estaría mediada por receptores 5HT1Dα.

Abstract:
This work is focused on elucidation of some of the regulatory mechanisms of stress- and glucocorticoid-mediated renal 11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2 (11βHSD2) activity. To this purpose the following contributions were obtained. The presence of an intact adrenal gland allows the animal to increase renal 11βHSD2 activity and abundance in response to stress, thereby stimulating glucocorticoid catabolism. In the absence of the adrenal gland the organism’s response differs depending the stress situation applied: rats submitted to simulated gavage, increase renal 11βHSD2 activity and abundance, while rats submitted to metabolic acidosis only show an increase in enzyme activity upon glucocorticoid administration. This increment occurs without an increase in enzyme abundance. The acute administration of corticosterone to adrenalectomized rats produces a progressive increment in enzyme activity and abundance, up to the physiological dose of 68 μg corticosterone/ 100 g body weight. The chronic administration of corticosterone, only produces an increment in enzyme activity and abundance with the supraphysiological dose of 308 μg corticosterone/ 100 g body weight. The cell line MDCK (Madin-Darby Canine Kidney), derived from distal nephron, shows 11βHSD activity. Serotonin, believed to be the extra-adrenal factor involved in 11βHSD2 regulation in adrenalectomized rats, stimulates its activity. Besides, serotonin shows a multiphasic effect on dehydrogenase activity stimulation. Serotonin action in MDCK cells, is probably due to 5HT1Dα receptor activation.

"Influencia del ión cromato en el pH de soluciones de dicromato de sodio : su estudio experimental mediante el electrodo de vidrio" (1943). Gutierrez, Francisco Elías. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Influencia del nivel hídrico y de la macrofitia en los patrones espaciales y temporales del zooplancton de una laguna de inundación" (2013). Chaparro, Griselda Noemí. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este estudio se analizaron los efectos combinados de las variaciones hidrométricas y de la macrofitia en la dinámica temporal y espacial del zooplancton de una laguna de inundación (Laguna Grande, Reserva Natural Otamendi, Buenos Aires). Las variaciones marcadas de nivel hídrico determinaron condiciones ambientales contrastantes en la laguna que afectaron los atributos del zooplancton. El período extraordinario de aguas bajas comprendido en este estudio se caracterizó por una columna de agua muy corta, salinidades elevadas, floraciones de cianobacterias potencialmente tóxicas y una mínima heterogeneidad ambiental. Estas condiciones conformaron un ambiente estresante para el zooplancton reflejado en el hacinamiento de los organismos, la prevalencia de la reproducción sexual, la baja diversidad y la composición del ensamble, que estuvo restringido a las especies eurihalinas tolerantes. Los pulsos hídricos registrados posteriormente provocaron cambios hacia condiciones más favorables y un mayor desarrollo de los ensambles de macrófitas con distintas formas de vida que promovió la diversidad del zooplancton. Los efectos de los pulsos sobre la abundancia de las comunidades biológicas (plancton y macrófitas) dependieron del momento del año en que éstos ocurrieron, resaltando así la importancia del rol de la estacionalidad de la temperatura en estas latitudes. Los rotíferos fueron dominantes durante la mayor parte del estudio, mientras que los cladóceros y copépodos fueron escasos y presentaron incrementos estacionales en los meses fríos asociados a la disminución de la presión de predación y a la ausencia de disturbios hídricos. La composición específica del zooplancton presentó una dinámica temporal y espacial estrechamente asociada a las macrófitas flotantes. En presencia de plantas flotantes prevalecieron numerosas especies zooplanctónicas litorales, mientras que en los períodos o ambientes sin plantas flotantes, dominó un menor número de especies planctónicas. Así, destacamos el rol de las macrófitas flotantes como “estructuras clave” de la heterogeneidad ambiental de esta laguna, ya que determinan un salto cuantitativo en el número de especies zooplanctónicas.

Abstract:
In this study, we examined the combined effects of the variations of water level and macrophytes in the spatial and temporal dynamics of zooplankton in a floodplain lake (Laguna Grande, Otamendi Natural Reserve, Buenos Aires). The marked water level fluctuations established contrasting environmental conditions in the lake, which affected zooplankton attributes. The extraordinary low-water period comprised in this research was characterized by a very short water column, elevated salinities, blooms of potentially toxic cyanobacteria and minimal environmental heterogeneity. These conditions produced a stressful environment for zooplankton as reflected in the crowding of organisms, prevalence of sexual reproduction, low diversity and composition of the assemblage, which was restricted to euryhaline tolerant species. The water pulses subsequently recorded led to more favorable conditions and further development of macrophyte assemblages with different life forms that promoted zooplankton diversity. The effect of these pulses on the abundance of biological communities (plankton and macrophytes) depended on when they occurred, highlighting the important role of temperature seasonality in these latitudes. Rotifers were dominant through most of the study period, whereas cladocerans and copepods were scarce and showed seasonal increases in the cold months associated with decreased predation pressure and the absence of hydrological disturbances, namely increasing waters. The species composition of zooplankton presented a temporal and spatial dynamics closely associated with floating macrophytes. Numerous littoral zooplankton species prevailed in the presence of floating plants, while in periods or environments lacking these vegetation life form, fewer planktonic species dominated. Thus, we emphasize the role of floating macrophytes as "key structures" for the maintenance of environmental heterogeneity of the lake as they constitute a quality leap in the number of zooplankton species.

"Influencia del regulador global Anr en la fisiología de Pseudomonas extremaustralis, una bacteria productora de polihidroxibutirato" (2011). Tribelli, Paula María. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Pseudomonas extremaustralis es un organismo Antártico, que presenta alta resistencia al estrés y produce polihidroxibutirato (PHB). En este trabajo, se estudió su metabolismo microaeróbico, que está regulado en Pseudomonas por Anr. Se observó que es capaz de utilizar nitrato, reduciéndolo solo a nitrito. El genoma posee todos los genes involucrados en la desnitrificación, con excepción de los genes nir. Los genes de la fermentación de L-arginina son funcionales en esta especie. Anr afectó positivamente la síntesis de PHB. Asimismo, influenció el estado redox celular, el consumo de oxígeno, el nivel de especies reactivas de oxígeno, la producción de exopolisacáridos (EPS) y proteínas extracelulares, la biosíntesis de aminoácidos y la utilización de distintas fuentes de carbono. Los biofilms presentan gradientes de O2. El PHB contribuyó a la supervivencia en forma planctónica en biofilms en frío y su ausencia resultó en una mayor formación de biofilms y EPS y menor movilidad. Anr también afectó el desarrollo de biofilms, dado que mutantes anr mostraron defectos en su formación, así como menor adhesión, agregación y mayor movilidad. En el genoma de esta especie se detectaron 167 probables blancos de regulación (Regulon Anr). Los resultados en conjunto muestran la importancia de Anr sobre la fisiología de P.extremaustralis.

Abstract:
Pseudomonas extremaustralis is an Antarctic organism that shows high stress resistance and polyhydroxybutyrate (PHB) production. We studied the microaerobic metabolism, which is controlled by Anr in Pseudomonas species. This strain was capable to reduce nitrate, used as an electron acceptor, to nitrite. P.extremaustralis genome presented the genes involved in denitrification, excepting the nir genes. The genes involved in L-arginine fermentation were also functional in this species. Anr positively affected PHB synthesis. In addition, this regulator influenced the cellular redox state, oxygen consumption, the presence of oxygen reactive species, the exopolysaccharides (EPS) and extracellular proteins production, the aminoacid biosynthesis and carbon source utilization. Biofilms show oxygen gradients. PHB contributed to the survival of planktonic cells in the biofilm at cold conditions and its absence resulted in higher biofilm formation and EPS production and also lower motility. Additionally, Anr affected biofilm development; since an anr mutant strain showed defects in biofilm formation and cellular adhesion and aggregation and motility alterations. We detected 167 putative regulated target genes at the P.extremaustralis genome. These results show the important role of Anr in the P.extremaustralis physiology.

"Influencia hormonal en el desarrollo del melanoma maligno humano" (1999). Morvillo, Verónica. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El melanoma es una neoplasia que surge como consecuencia de la proliferación descontrolada de los melanocitos. El comportamiento de este tipo tumoral es impredecible dado que puede variar desde la regresión espontánea hasta una rápida progresión y muerte del portador del tumor. El aumento de la incidencia de esta enfermedad se halla entre las más altas, y hasta el momento no se han desarrollado terapias que sean realmente efectivas. Varios estudios, han demostrado que el desarrollo del melanoma de piel es más desfavorable en pacientes hombres que en mujeres, y que la supervivencia de las mujeres es considerablemente mayor. Ha sido teóricamente propuesto que los andrógenos tienen un papel clave en el peor pronóstico masculino, y que una terapia con antiandrógenos podría tenerse en consideración en pacientes hombres con melanoma. En este trabajo de Tesis se investigó, en primer lugar, la presencia de receptores androgénicos (RA) en el melanoma humano, se procedió luego a la caracterización bioquímica y biológica de los mismos y por último se analizó la influencia de la acción antiandrogénica en el curso clinico de esta enfermedad. En los estudios realizados se utilizaron tres lineas derivadas de melanoma humano obtenidas en el laboratorio: IIB-MEL-J, IIB-MEL-LES e IIB-MEL-LAN. Los análisis de Scatchard de las tres lineas estudiadas, utilizando la unión del andrógeno sintético marcado R1881, revelaron la presencia de un solo tipo de receptor con una constante de disociación aparente (Kd) de 11 nM a 37 °C y una capacidad de binding de 326 fmol/mg de proteina, 58,4 fmol/10 6 células o de 35.000 sitios por célula para IIB-MEL-J, una Kd de 15 nM a 37 °C y una capacidad de binding de 280,6 fmol/mg de proteína, 30,8 fmol/10 (6)células o de 18.500 sitios por célula en el caso de IIB-MEL-LES y Kd de 14 nM a 37 °C, capacidad de binding de 206,4 fmol/mg de proteína, 25,59 fmol/10 (6) células o de 15.400 sitios por célula en el caso de IIB-MEL-IAN. Los estudios sobre la especificidad de la unión del ligando radiactivo a estos receptores, revelaron un comportamiento atípico de los mismos en las tres líneas analizadas. No sólo los andrógenos testosterona (T), dihidrotestosterona (DHT), R1881 y el antiandrógeno hidroxi-flutamida (OH-Flu) compitieron con R188l, sino que estradiol (E2), progesterona (Pg) y cortisol (F), a 500 X de exceso, también fueron capaces de desplazar la unión del esteroide sintético al RA. A nivel inmunocitoquímico, no existieron evidencias de la presencia de receptores estrogénicos o de progesterona en las tres líneas de melanoma, mientras la inmuno- reactividad para RA fue positiva en las tres líneas estudiadas. La tinción nuclear fue vigorosa, y la intensidad marcada, por encima del 70% de las células analizadas. La presencia del RA fue analizada, además, en biopsias correspondientes a metástasis de melanomas provenientes de distintos pacientes. En todos los casos la reactividad obtenida con el anticuerpo monoclonal (AMC) ANI-IS fue positiva y la intensidad marcada. Estudios in vitro sobre la acción de distintas hormonas y antihormonas revelaron que DHT, T, E2, o Pg estimularon la proliferación celular de IIB-MEL-J, IIB-MEL- LES e IIB-MEL-IAN mientras OH-Flu, casodex (Cas) o Tamoxifeno (Tam) la inhibieron significativamente. La acción inhibitoria del crecimiento celular ejercida por los antiandrógenos también se manifestó in vivo cuando se utilizó flutamida (Flu) en ratones atímicos portadores de tumores. Estos animales mostraron una disminución significativa del crecimiento tumoral y un marcado aumento de la sobrevida respecto de animales controles o sometidos a distintas terapias. Los resultados indican la existencia de RA en melanoma humano y un claro efecto protector por parte del antiandrógeno Flu.

Abstract:
Cutaneous malignant melanoma is becoming increasingly important in western countries due to its rising incidence, especially on the white population. A significant difference in survival between male and female patients has been reported, and the proportion of females cured was much greater than that of males. It has been theoretically proposed that an androgen dependency of melanoma could explain the longer survival time in women patients irrespective of the hormonal status of the female host. To evaluate the presence of androgen receptors in human melanoma cell lines, Scatchard analysis was performed in whole cells with -Rl881. IIB-MEL-J cells in culture revealed a single binding component with an apparent dissociation constant (KD) at 37°C of 11 nM and a binding capacity of 326 fmol/mg protein, 58,4 fmol/10(6) cells or 35.000 binding sites/cell. For IIB-MELLES cell, the KDobtained was 15 nM at 37°C, with a binding capacity of 280,6 fmol/mg total cell protein, 30,8 fmol/10(6) cells, or 18.500 binding sites/cell. IIB-MEL- IAN cells showed a KD of 14 nM at 37°C with a binding capacity of 206,4 fmol/mg total cell protein, 25,59 fmol/10(6) cells, or 15.400 binding sites/cell. Competition analysis revealed an atypical relaxation of specificity, since not only androgen testosterone (T), dihydrotestosterone (DHT), R188] and antiandrogcn hydroxy-flutamide (OH-Flu) competed for -R1881 binding, but also estradiol (E2), progesterone (Pg), and cortiso] (F) at 500-fold excess concentration. Immunocytochemistry of human melanoma cell lines IIB-MEL-J, IIB-MEL-LES and IIB-MEL-IAN was performed with monoclonal antibody anti-AR ANI-IS. Cells lines were deeply stained,'the intensity of the staining being high in the majority of specimen. When the same cells were tested with monoclonal antibodies raised against estrogen and progesterone receptors, no staining was found. All of the specimens of melanoma metastases that were tested for the presence of AR were deeply stained, the intensity of the staining being high in the majority of the specimens. Several hormones and antihormones were tested for their ability to stimulate cell proliferation on both cell lines with similar results. DHT, T, E2 or Pg stimulate significantly cell proliferation, this increase being reversed by OH-Flu, casodex (Cas) or tamoxifen (Tam). In addition, male and nude mice transplanted with IIB-MEL-J tumors were treated with flutamide (Flu) when tumors were palpable. Flu was effective in diminishing tumor growth and increasing survival rate of animals. As a conclusion, the presence of functional androgen receptors in these cells has been demonstrated by growth inhibition in vitro and in vivo with antiandrogens. In this study, we demonstrate a clear stimulation of cell proliferation by an androgen in human melanoma cell lines. The pure antiandrogen Flu showed an inhibitory effect on the cell growth in nude mice and a remarkable increase in survival rates of nude mice. Binding studies by Scatchard plot and competition studies showed the presence of androgen receptor with atypical sensitivity to different steroids. An interesting consequence of the present results is the possibility of clinical application of antiandrogen treatment to melanoma patients with androgen receptor.

"Influencias parentales en la respuesta inmune" (1992). Torello, Sandra Marcela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
A lo largo de este trabajo se investigó la existencia de influencias parentales sobre el sistema inmune del hijo. Como modelo experimental se utilizaron híbridos Fl recíprocos. Estos pares de híbridos derivan del cruzamiento de las mismas cepas parentales pero difieren entre sí en cual de las dos cepas es la materna. Este modelo permite evidenciar las consecuencias que tiene sobre el sistema inmune la derivación materna o paterna de un mismo pool génico. Se evaluó asimismo, el efecto de la lactancia, amamantando a dichos híbridos con nodrizas de la cepa paterna. Hemos podido demostrar la existencia de influencias parentales que afectan A) la regulación del reconocimiento T alorreactivo parental de antígenos de histocompatibilidad propios y B) el reconocimiento restringido de antígenos convencionales A) En lo que respecta a la regulación del reconocimiento T alorreactivo parental hemos determinado: l) la existencia de efectos parentales que influencian la capacidad de las células esplénicas de los individuos adultos de estimular la proliferación de células T parentales en reacciones de CMLA; la proliferación de células T es significativamente menor cuando media el reconocimiento de antígenos de histocompatibilidad de origen paterno 2) las diferencias en la capacidad estimulatoria son eliminadas cuando las poblaciones estimuladoras son pretratadas con anticuerpo monoclonal anti-CD8 más complemento, sugiriendo que estarían involucradas diferencias a nivel de las células T CD8+ con actividad supresora 3) las influencias parentales registradas en individuos adultos podrían derivarse de aquéllas detectadas al nacimiento. En efecto, hemos demostrado que: a) los timocitos provenientes de los ratones Fl recién nacidos difieren en su capacidad de regular las reacciones de GvH parentales dirigidas hacia antígenos de histocompatibilidad propios. Al nacimiento, los timocitos provenientes de híbridos F1 de 24 hs son capaces de suprimir las reacciones de GvH maternas anti-paternas pero no las paternas anti-maternas b) esta capacidad diferencial de regular las reacciones de GvH parentales no se registra en los timocitos fetales: los timocitos provenientes de híbridos F1 de 18 días de gestación, suprímían tanto las reacciones de GvH maternas anti-paternas cuanto las paternas antimaternas c) el amamantamiento no intervendría en la pérdida de la capacidad supresora de la reactividad paterna anti-materna d) la ausencia de actividad supresora actuante sobre reacciones de GvH paternas antimaternas correlaciona con la presencia en el timo de células con actividad contrasupresora, actividad que se retrasa hasta el día 4 cuando regula la alorreactividad materna anti-paterna e) las células con actividad contrasupresora actuante sobre el reconocimiento alorreactivo parental muestran el fenotipo característico de las células efectoras del circuito contrasupresor. Son Lyt-1+, CD4+, CD8- y adherentes a Vicia villosa. B) Los efectos parentales que alteran la reactividad T frente a antígenos convencionales extraños se detectan utilizando distintos antígenos y distintas técnicas: ensayos in vivo de sensibilidad de contacto frente a DNBF y de HvG frente al antígeno H-Y de macho y ensayos in vitro, utilizando la técnica de proliferación T frente a OVA y Citocromo-C. l) Estas influencias parentales: a) se registraron en combinaciones de cepas que difieren a nivel de antígenos mayores y menores de histocompatibilidad y en una combinación de cepas parentales que sólo difiere a nivel de antígenos menores de histocompatibilidad b) no pudieron detectarse en combinaciones de cepas que comparten antígenos Mls-l c) se eliminan cuando las poblaciones respondedoras al antígeno convencional se pretratan con anticuerpo monoclonal anti-CD8 más complemento 2) cuando se estudió la eventual participación de los superantígenos Mls, se observó una correlación entre la presencia de antígenos MIs-1a en la cepa materna y una disminución de la reactividad T en la descendencia de dichas madres 3) las influencias parentales que afectan la reactividad T restringida de antígenos convencionales no pudieron detectarse al nacimiento 4) el amamantamiento estaría centralmente involucrado en la generación de las influencias descriptas. Se ha demostrado que desde el nacimiento pueden detectarse influencias parentales que afectan la regulación del reconocimiento de alta afinidad de antígenos de histocompatibilidad propios, mientras que aquellas que influencian la capacidad de regular el reconocimiento restringido de antígenos convencionales extraños se adquiere en etapas posteriores y estarían mediadas por la lactancia: estos hechos parecerían indicar que los mecanismos involucrados son múltiples. Los efectos parentales aqui descriptos agregan un nivel de variabilidad mayor a la reactividad T que la conferida por los genes de respuesta inmune, variabilidad necesaria para la sobrevida de las poblaciones de cría libre

"Inhibición alimentaria y alteraciones poblacionales producidos por el bloqueo de la recepción sensorial en Triatoma infestans" (1996). Vassena, Claudia Viviana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La tendencia actual en el control químico y racional de plagas es el uso de compuestos de acción específica. Los inhibidores alimentarios preingestivos producen en insectos bloqueo de receptores sensoriales responsables de la selección de la fuente de alimento. Teniendo en cuenta que dicho bloqueo puede ser producido por compuestos que reaccionan con grupos -SH de estructuras sensoriales de insectos. se evaluó la inhibición alimentaria producida por compuestos reactivos de sulfhidrilo (N-alquil maleamatos de metilo) sobre Triatoma infestans (vinchuca), principal vector de la enfermedad de Chagas en nuestro país. El tratamiento de ninfas V de T. infestans con los compuestos sintetizados produjo bloqueo total de la percepción de la fuente de alimento. La efectividad fue mayor para los isómeros cis puros respecto a los correspondientes cis-trans. Cuando predomina la via de ingreso cuticular, la mayor efectividad fue para los compuestos de cadena sustituyente más larga (DL50=1.9μg/i para cis octilo vs 16.3μg/i para cis etilo por aplicación tópica) (DL50=3.2μg/cm² para cis octilo vs 136.5μg/cm² para cis etilo por interposición de tela tratada). La exposición continua de poblaciones experimentales de T. infestans produjo disminución poblacional significativa durante 250 días (para cis butilo) hasta más de 400 días (para cis etilo). El estudio de la respuesta de vinchucas tratadas a fuentes de estímulo químico y térmico demostró correlación de efecto antialimentario con bloqueo de termoreceptores. El uso de inhibidores alimentarios en el control de poblaciones de Triatoma infestans, representan una alternativa promisoria en el control de insectos plaga con compuestos selectivos de bajo riesgo ambiental.

Abstract:
There is an increased interest in managing pest populations with reduced amounts of specific compounds. Preingestive feeding inhibitors act through sensorial receptors involved in host selection. As Sulfhydryl reagents produce receptor blockage, the feeding inhibition caused by some of them, the N-alkyl methyl maleamates, was determined against Triatoma infestans a principal vector of Chagas’ Disease in Argentina. Nymph V exposure to these compounds blocked food selection. Feeding inhibition of cis isomers was greater than cis-trans isomers. When cuticular via was predominant, the best effectivity was observed for the longest alkyl chain (LD50=1.9μg/i for cis octyl vs 16.3μg/i for cis ethyl by topical application) (LD50=3.2μg/cm² for cis octyl vs 136.5μg/cm² for cis ethyl by impregnated gauze interposition). The continuous exposure of T. infestans experimental populations produced significant decrease from 250 days (for cis buthyl) to 400 days (for cis ethyl). Treated nymph response to thermo and chemical stimulus showed correlation between antifeeding inhibition and receptor blockage. These results suggest a specific alternative method to pest insect control.

"Inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina : Su efecto sobre el metabolismo de las especies activas del oxígeno" (1999). Martínez Vivot de Cavanagh, Elena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se ha demostrado que los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (IECA) atenúan ciertas modificaciones tisulares asociadas al envejecimiento. Numerosas evidencias indican que las especies activas del oxígeno (EAO) están involucradas en el proceso de envejecimiento. El objetivo de esta tesis fue investigar si los IECA poseían algún efecto sobre el metabolismo de las EAO. Con este fin se condujeron experimentos, in vitro e in vivo, para estudiar la posibilidad que los IECA pudieran a) atrapar radicales libres per se, y/o b) inducir las defensas antioxidantes endógenas. Los IECA utilizados fueron enalapril, lisinopril y captopril. Los estudios existentes en la literatura acerca de los efectos protectores de los IECA durante el envejecimiento utilizaron dosis hipotensoras de estos compuestos. Por ende, los resultados no pueden separarse de la acción de los mismos sobre la presión arterial. En el presente trabajo, a fin de poder independizar el efecto beneficioso de los IECA de su acción hipotensora, se estudió en primer lugar el efecto del tratamiento crónico (24 meses) con dosis de enalapril que no afectaran la presión arterial sobre cambios histológicos asociados al envejecimiento normal en ratones. Los resultados indican que, aún en las dosis utilizadas, el tratamiento crónico con enalapril atenúa i) las modificaciones en el peso del riñón y el corazón, ii) las fibrosis renal intersticial y cardíaca, y iii) la disminución del número de mitocondrias en los miocardiocitos asociadas al proceso normal de envejecimiento. En base a estos resultados, se emplearon tratamientos prolongados (11 semanas) con dosis no hipotensoras de enalapril o captopril para estudiar su efecto sobre parámetros de estrés oxidativo en el cerebro, corazón, riñón, hígado, pulmón, eritrocitos y plasma de ratón. Se evaluaron las actividades de las enzimas superóxido dismutasa, selenio-glutatión peroxidasa, catalasa, glutatión reductasa, el contenido de glutatión, a-tocoferol, Bcaroteno, ubiquinol, y los niveles de marcadores de daño oxidativo a los lípidos y las proteínas. Ambos tratamientos incrementaron los niveles de las defensas antioxidantes enzimáticas y no enzimáticas con respecto a los controles no tratados, aunque los resultados no fueron uniformes en cuanto a su magnitud, ni a la variedad de los tejidos involucrados. Esto podría explicarse por la diferente metabolización y/o penetración tisular del enalapril y el captopril. En los eritrocitos, utilizados como un sistema modelo ín vitro, el aumento de las defensas antioxidantes estuvo acompañado por protección contra el daño oxidativo. En ensayos in vitro se evaluó la capacidad antioxidante directa del enalapril, lisinopril y captopril. El captopril es un IECA que posee un grupo sulfhidrilo al que se le han atribuido propiedades antioxidantes, mientras que el enalapril y el lisinopril están desprovistos del mismo. Los resultados indicaron que el captopril posee capacidad atrapadora de radicales libres, aún en las bajas concentraciones plasmáticas que se alcanzan en los usos terapéuticos. Por el contrario, no se pudo detectar una acción antioxidante directa del enalapril y el lisinopril. Por último, se investigó el efecto de la administración prolongada de enalapril sobre las defensas antioxidantes enzimáticas y no enzimáticas en pacientes sometidos a tratamiento hemodialítico crónico. En este modelo se utilizaron dosis hipotensoras de enalapril. Los datos demuestran que los pacientes en hemodiálisis (HD) crónica se encuentran en condiciones de estrés oxidativo cuando se los compara con controles sanos. Además, la administración de enalapril durante por lo menos 6 meses incrementa varias de las defensas antioxidantes en los eritrocitos y el plasma, en relación a los pacientes en HD crónica no tratados con enalapril. La incubación de superóxido dismutasa o de selenio-glutatión peroxidasa en presencia de enalapril o captopril no tuvo efecto sobre las actividades enzimáticas. Esto sugiere que los IECA aumentarían la actividad de las defensas antioxidantes enzimáticas por un mecanismo indirecto. Los niveles plasmáticos de óxido nítrico estaban elevados en los ratones tratados con enalapril o captopril durante 11 semanas. Debido a que se ha demostrado que la sobreproducción de óxido nítrico conduce a un moderado estrés oxidativo, y que éste último es capaz de actuar como un estímulo para la síntesis de las defensas antioxidantes en diferentes sistemas, se postuló que el aumento de las defensas antioxidantes de síntesis endógena inducido por los tratamientos prolongados con enalapril o captopril estaría mediado por la producción de oxído nítrico derivada de la acumulación de bradiquinina. Se concluye que el aumento de las defensas antioxidantes enzimáticas y no enzimáticas sería uno de los mecanismos mediadores de los efectos protectores demostrados por los IECA en el envejecimiento, así como en diversas situaciones experimentales y clínicas. Este efecto de los IECA abriría nuevas perspectivas con respecto a los mecanismos que subyacen las acciones terapéuticas de estas drogas.

"Inmunobiología de MICA en linfocitos T: estímulos fisiológicos, rutas de señalización y consecuencias funcionales de su expresión" (2004). Molinero, Luciana Lorena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
INTRODUCCIÓN: La interacción de MICA con el receptor activador de citotoxicidad NKG2D (expresado en células NK y linfocitos T Ɣδ y αβ CD8+), desencadena una respuesta citotóxica contra células que expresan MICA. MICA se induce por estímulos de estrés, infecciones, neotransformación o linfocitos T activados con fitohemaglutinina. OBJETIVOS: a) estudiar la expresión de MICA en linfocitos T activados con estímulos fisiológicos; b) investigar los mecanismos moleculares involucrados y; c) investigar las consecuencias funcionales de dicha expresión. RESULTADOS: Por Western Blot, RT-PCR y citometría de flujo se observó que MICA se induce en linfocitos T presentes en células mononucleares de sangre periférica (CMSPs) por estimulación con células alogeneicas, por microagregación del complejo TCR/CD3 o por coestimulación con la molécula CD28 y PMA. Los niveles de expresión de MICA alcanzaron una meseta a los 4-7 días post-estímulo. Empleando inhibidores farmacológicos, observamos que la expresión de MICA inducida por la microagregación del complejo TCR/CD3, o la coestimulación a través de CD28 y PMA involucran a Lck/Fyn, ERK1/2, calcineurina, p38 MAPK, p70 56 y Jak. Asimismo, la inhibición farmacológica de NF-kB bloqueó la expresión de MICA en linfocitos T activados de la misma manera. Detectamos un sitio de unión KB localizado en el primer intrón del gen de MICA, y por ensayos de supershift observamos que esta secuencia une a los dímeros p65(RelA)/p50 y p50/p50 presentes en extractos nucleares de linfocitos T activados. Asimismo, la sobreexpresión de RelA en células HeLa por transfección transitoria incrementó los niveles de MICA, confirmando que la expresión de dicho gen es regulada por NF-kB. Además, por Western Blot observamos que CMSPs estimuladas con las citoquinas mitogénicas IL-2 e IL-4, lo mismo que linfocitos T polarizados hacia un perfil Th1 o Th2 inducen la expresión de MICA. Linfocitos T CD4+ purificados y activados con PMA e Ionomicina, pero no linfocitos T CD4+ presentes en CMSPs, expresan MICA en su superficie. Por ensayos de transwell, observamos que este fenómeno se debe a un factor soluble liberado por CMSPs activadas. Además, linfocitos T CD4+ activados con PMA e Ionomicina son blancos de citotoxicidad por células NK autólogas activadas con IL-2 (LAK). El bloqueo de la interacción MICA-NKG2D con AcMo anti-MICA mostró que MICA juega un rol menor en dicha respuesta. CONCLUSIONES: MICA se induce en linfocitos T activados por estímulos fisiológicos e involucra a la señalización de Lck/Fyn, ERK1/2, calcineurina, p38 MAPK, p70 56k, Jak y al factor de transcripción NF-kB. La expresión de MICA en superficie de linfocitos T tiene un rol menor en la lisis por células NK activadas. En esta tesis se describen por primera vez algunas de las vías de transducción de señales y un factor de transcripción involucrados en la expresión de MICA. Los resultados presentados sugieren además que la interacción MICA-NKG2D podría constituir un nuevo mecanismo de regulación de la respuesta inmune adaptativa.

Abstract:
INTRODUCTION: The interaction between MICA and the cytotoxicity activating receptor NKG2D (expressed in NK cells and CD8+ αβ and Ɣδ T cells) triggers a cytotoxic response against MICA expressing cells. MICA is induced by stress stimuli, infections, neotransformation or phytohemagglutinin in T cells. OBJECTIVES: a) to study MICA expression in T cells activated with physiological stimuli, b) to investigate the molecular mechanisms involved, and c) to explore the functional consequences of that expression. RESULTS: We activated T cells present in peripheral blood monononuclear cells (PBMCs)by allogeneic stimulation, microaggregation of TCR/ CD3 complex or the costimulatory molecule CD28 with anti-CD3 mAb or anti-CD28 mAb in the presence of PMA. All of these stimuli induced MICA expression, as assessed by Western blot, RT-PCR and flow cytometry, reaching a maximum at 4 to 7 days after stimulation, depending on the stimulus. Using pharmacological inhibitors we next investigated the signal transduction pathways involved in MICA induction triggered by TCR/CD3 crosslinking or costimulation through CD28 in the presence of PMA. We found that several signaling pathways like Lck/ Fyn, ERK1/2, p38 MAPK, calcineurin, Jak and p70 56 are involved in MICA induction: By pharmacological inhibition of NF-kB, we found that MICA expression was dependent on NF-kB, most probably through a kB binding sequence located in the first intron of the MICA gene. By EMSA and supershift assays we found that this sequence bound RelA/p50 and p50/p50 NF-kB dimers present in nuclear extracts of activated T cells. Pharmacological blockade of NF-kB also inhibited MICA expression in HeLa cells and overexpression of RelA in these cells increased MICA expression, suggesting that NF-kB regulates MICA expression. Mitogenic cytokines, like IL-2 and IL-4, were able to induce MICA expression in T cells. This molecule was also induced in Th1 or Th2 polarized cells. We observed that PMA/ lonomycin stimulation induced surface MICA expression on purified CD4+ T cells, but not on CD4+ T cells present in PBMCs, more likely due to a soluble factor secreted by activated PBMCs. PMA/lonomycin activated CD4+ T cells became targets of cytotoxicity by syngeneic IL-2 activated NK cells (LAK), but not of resting NK cells. Blocking MICA-NKG2D interaction with an anti-MICA mAb, developed in our laboratory, showed that MICA plays a marginal role in this cell death. CONCLUSIONS: MICA is induced in T cells by physiological stimuli through the activation of Lck/Fyn, ERK1/2, p38 MAPK, calcineurin, Jak and p70 56 signal transduction pathways, as well as the transcription factor NF-kB. MICA expression on the surface of CD4+ T cells play a marginal role as target of cytotoxicity by activated NK cells. In this Thesis some of the signal transduction pathways and a transcription factor involved in MICA expression are described for the first time. Also, the results suggest that MICA NKG2D interaction may be a novel mechanism of regulation of the adaptive immune response.

"Inmunomodulación de la respuesta inmune inducida por vacunas inactivadas contra herpesvirus bovino-1" (2001). Romera, Sonia Alejandra. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se evaluó en bovinos la respuesta inmune humoral y celular inducida después de la vacunación con vacunas contra HVB-l y el subsecuente desafío con la cepa LA de HVB-l. Los animales fueron vacunados intramuscularmente (IM) con vacunas inactivadas contra HVB-I conteniendo aceite mineral , aceite mineral con Avridine (emulsiones agua en aceite), o aceite no mineral (squalane) con un sulfolipocliclodextrin (SL-CD/S/W, emulsión aceite en agua). No se registraron diferencias significativas en los niveles de anticuerpos inducidos por las 3 vacunas evaluadas. Sin embargo la respuesta celular fue más elevada y temprana cuando estaba incluido en la formulación vacunal el SL-CD/S/W. Se evaluó la eficacia de las vacunas después del desafpio intranasal con la cepa virulenta LA de HVB-I. Los animales vacunados con SL-CD/S/W tuvieron menor excreción viral y menores síntomas clínicos que los animales controles sin vacunar. Cuando se relacionaron los niveles de IgG2 e IgG1 con la reducción de excreción viral se observó que, independientemente del adyuvante utilizado, el grupo que presentó al momento del desafío, niveles de la relación IgG2/IgG1 mayores a l fue el grupo que presentó menor número de animales con excreción viral. Además los animales inoculados con SL-CD/S/W no presentaron reacciones adversas. Todos estos factores combinados con la gran eficacia y la fácil manipulación del aceite biodegradable hace de la vacuna formulada con este nuevo adyuvante una importante contribución para la industria de vacunas veterinarias.

Abstract:
The antibody and cell mediated immune responses induced by BHV-l were analysed in cattle after vaccination and challenge exposure to the virulent strain LA of BHV-l. Animals were vaccinated intramuscularly (IM) with inactivated virus vaccines against BHV-I containing either a water in mineral oil adjuvant (W/O), a water in mineral oil adjuvant plus Avridine (W/0+Avridine) or sulfolipo-cyclodextrin in squalane in-water emulsion (SL-CD/ S/W). No significatives difierences were registered in the antibody response induced by the three evaluated vaccines. However, the BHV-l specific cell-mediated immunite response was stronger and appeared earlier when SL-CD/S/W was included in the formulation. The efficacy of the vaccines was also evaluated after intranasal challenge of the calves with a virulent BHV-1 LA strain. Animals vaccinated with SL-CD/S/W had reduced virus excretion and clinical symptoms compared with the mock-vaccinated animals. Comparison of levels of BHV-1 specific IgG2 and IgG1 with virus shedding revealed that, regardless of the adjuvant administered, animals showing BHV-l specific IgG2/IgG1 ratios higher than 1 were those with a significant lower number of individuals shedding virus. Additionally, animals vaccinated with SL-CD/S/W presented no postvaccinal reactions. These factors, combined with the higher efficacy and the ease of manipulation of the biodegradable oil, makes the vaccine formulated with this new adjuvant an important contribution for the veterinary vaccines industry.

"Inmunoregulación en ratones F1 híbridos recíprocos" (1985). Nepomnaschy, Irene. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Innovaciones metodológicas en métodos geofísicos con aplicación a diversas problemáticas ambientales" (2014-08-01). Robledo, Fabiana Elizabeth. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los sistemas de inducción electromagnética portátiles espira-espira (EMI o SLEM) constituyen un método geofísico ampliamente utilizado para estudiar la conductividad eléctrica del subsuelo hasta unas decenas de metros de profundidad. En ocasiones, también permiten estudiar sus propiedades magnéticas. El principal objetivo de este Trabajo de Tesis ha sido desarrollar innovaciones metodológicas en las técnicas de adquisición, procesamiento e interpretación de los datos EMI, para mejorar la información que puede obtenerse mediante este método. Los desarrollos se orientaron a aplicaciones relacionadas con diversas problemáticas medioambientales, las cuales incluyeron la detección y/o caracterización de tuberías y otros objetos enterrados, y el mapeo de plumas de contaminación por hidrocarburos en el subsuelo y las napas de agua. Se puso especial atención al caso de prospecciones realizadas en zonas urbanas y suburbanas, donde la aplicación del método suele ser dificultosa, debido a que el nivel de ruido electromagnético generalmente es elevado y a que la presencia de estructuras u objetos metálicos cercanos a las zonas estudiadas puede introducir distorsiones en los datos. En particular, se desarrollaron metodologías de adquisición alternativas a las usuales, que permiten obtener estimaciones confiables de los errores de los datos (los cuales no son informados por los instrumentos), reducir las distorsiones e incrementar la relación señal-ruido. Las metodologías presentadas tienen una excelente relación costo-beneficio, ya que son relativamente sencillas de implementar en los trabajos de campo y brindan mejoras significativas tanto respecto de la sensibilidad de los datos a las anomalías de interés, como respecto de la precisión y la resolución de los modelos obtenidos al aplicar métodos de inversión. Asimismo, se desarrolló un método para determinar el grado de confiabilidad de los modelos inversos en función de la posición y la profundidad, y se investigó qué orientaciones del instrumento resultan óptimas para prospectar blancos de pequeñas dimensiones localizados a profundidades someras. La validez de las metodologías propuestas se comprobó mediante simulaciones numéricas, trabajos de campo y experimentos controlados. En las aplicaciones correspondientes a contaminación de suelos y acuíferos, además, se investigaron las ventajas ofrecidas por la utilización conjunta de los métodos EMI y Geoeléctrico.

Abstract:
Small-loop electromagnetic induction systems (EMI or SLEM) are a geophysical method widely used for studying the electrical conductivity of the subsoil up to a few tens of meters deep. Sometimes, they also allow studying its magnetic properties. The main objective of this PhD Thesis has been to develop methodological advances in the techniques of acquisition, processing and interpretation of EMI data, for improving the information that can be obtained using this method. The developments were oriented to applications related to various environmental problems, which included the detection and/or characterization of pipes and other underground objects, and the mapping of hydrocarbon contamination plumes in the subsoil and groundwater layers. Special attention was paid to the case of surveys carried out in urban and suburban areas, where the application of this method can be difficult, because the electromagnetic noise level is usually high, and the presence of metal objects or structures near the studied areas near can introduce distortions in the data. In particular, acquisition methodologies were developed, alternative to the usual, which allow obtaining reliable estimates of the errors of the data (which are not reported by the instruments), reducing the distortions and increasing the signal to noise ratio. The proposed methodologies have an excellent cost-benefit ratio, since they are relatively simple to implement in field work, and provide significant improvements regarding both the sensitivity of the data to the target anomalies, and the accuracy and resolution of the models obtained when applying inversion methods. In addition, a method was developed for determining the degree of reliability of the inverse models as a function of the position and depth. Also, the optimal instrument orientations for prospecting objects of small size located at shallow depths were investigated. The validity of the proposed methodologies was ascertained by numerical simulations, field work and controlled experiments. In the applications corresponding to contamination of soils and aquifers, the advantages offered by the joint use of the EMI and Geoelectrical methods were also investigated.

"Inositolfoslípidos libres y como anclas de glicoproteínas en Trypanosoma cruzi : estructura y biosíntesis" (2000). Bertello, Laura Elena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se presenta un análisis detallado de los inositolfosfolípidos (IPLs) de células epimastigotes de T. cruzi y de la variación de lípidos libres durante el proceso de diferenciación celular de trypomastigotes a amastigotes y a epimastigotes. Los IPLs están formados por dos componentes que se caracterizaron como fosfatidilinositol (PI) e inositolfosfoceramida (IPC). El PI está constituido por diacilglicerol y 1-0-alquil-2-acilglicerol y la IPC por N-palmitoildihidroesfingosina, N-palmitoilesfingosina, N-estearoildihidroesfingosina y N-estearoilesfingosina. Testigos de alquilacilgliceroles, no disponibles comercialmente, fueron sintetizados por dos métodos, uno enzimático y otro químico. Durante la diferenciación de trypomastigotes a amastigotes hay un aumento de la ceramida libre, principalmente palmitoildihidroesfingosina, que coincide con la liberación progresiva de la glicoproteína Ssp-4, antígeno de superficie específico de células amastigotes, que se encuentra anclado por GPI. La porción lipídica del ancla de esta glicoproteína se identificó como la palmitoildihidroesfingosina; lo que abre la posibilidad de que la ceramida juegue algún rol en la diferenciación celular. Se determinó la presencia en membranas de T. cruzi de fosfolipasas A1, A2, C y de aciltransferasas. También se estudió el primer paso de la biosíntesis de las anclas GPI, es decir, la incorporación de GlcNH2 a partir de UDP-GlcNAc y se descartó a la IPC como aceptora de GlcNH2 para la formación de anclas con ceramida. Este resultado indicaría que las fosfolipasas identificadas estarían involucradas en procesos de remodelación de los lípidos de los GIPLs que son utilizados para la construcción de anclas GPI. Este trabajo contribuye al conocimiento de las estructuras y del camino biosíntético de los GPI de T. cruzi que anclan, a la membrana, glicoproteínas involucradas en procesos de diferenciación, reconocimiento y penetración celular. La inhibición del anclaje de estas glicoproteínas a la membrana constituye una alternativa atractiva como quimioterapia contra la enfermedad de Chagas.

Abstract:
A detailed analysis of inositolphospholipids (IPLs) from epimastigote cells of T. cruzi, and the regulated expression of free lipids during the cellular differentiation process from trypomastigotes to amastigotes and epimastiogtes is presented. The IPLs are formed by two components that were characterized as phosphatidylinositol (PI) and inositolphosphoceramide (IPC). The PI has a diacylglycerol and an l-O-alkyl-2-acylglycerol, and the IPC is constituted by N-palmitoyldihydrosphingosine, Npalmitoylsphingosine, N-stearoyldihydrosphingosine and N-stearoylsphingosine as the lipid moiety. The alkylacylglycerols needed as standards were synthesized by two different chemical and enzymatic methods. During the differentiation of trypomastigotes to amastigotes, there is an increase of free ceramides, mainly palmitoyldihydrosphingosine. This is coincident with the progressive shedding of the Ssp-4 glycoprotein, a surface antigen specific of amastigote cells, that is anchored through GPI. The lipid moiety of this glycoprotein anchor was identified as palmitoyldihydrosphingosine, which suggests that ceramide plays a role in cellular differentiation. The presence of phospholipases Al, A2,C and acyltransferases in T. cruzi membranes was ascertained. The two latter activities were also proved on IPC. The incorporation of GlcNH2 from UDP--GlcNAc, the first step of the GPI anchor biosynthesis, was also studied. The possibility of IPC acting as acceptor of GlcNH2 to form anchors with ceramides was disproved suggesting that the identified phospholipases may be involved in the process of remodelling GIPLs used in the formation of GPI anchors. This thesis contributes to the knowledge of structures and biosynthetic pathways of T. cruzi GPIs that anchor membrane glycoproteins involved in cellular differentiation, recognition and penetration processes. Inhibition of the anchoring to membranes, is an atractive alternative in Chagas disease chemoterapy.

"Instalación de una planta piloto : estudio y experimentación previos" (1951). Vispo, Adolfo J.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Instrumentación, calibración y simulación de detectores de superficie del observatorio Pierre Auger" (2004). Bonifazi, Carla Brenda. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El entendimiento de la física de los rayos cósmicos es aún una de las metas más importantes de la comunidad científica para construir su conocimiento acerca del Universo. Su estudio a lo largo de los años ha permitido avances importantes tanto en las ramas de la física de partículas como de la astrofísica. Para su estudio se han desarrollado muchas técnicas experimentales desde las primeras cámaras de niebla utilizadas en los ascensos en globo hasta el desarrollo de observatorios gigantes dedicados al estudio de las partículas de más alta energía. El espectro de energías de los rayos cósmicos va desde los ~ 100keV hasta ~ 10^20 eV. Estos inciden sobre la tierra en todas las direcciones y con un flujo constante en el tiempo. Los rayos cósmicos de energía superior a los PeV que inciden en la atmósfera producen una cascada de partículas secundarias. Estas partículas inducen la emisión de luz de fluorescencia por parte del nitrógeno atmosférico, que puede ser registrada para la detección del chubasco producido. A su vez, las partículas secundarias que alcancen la Tierra pueden ser registradas por detectores ubicados al nivel del suelo. El observatorio Pierre Auger, que actualmente se encuentra en construcción y funcionamiento parcial, tiene por objetivo el estudio de los rayos cósmicos de energía ultra elevada, mayor a 10^19 eV. Para ello utiliza un sistema híbrido de detección de las partículas secundarias formado por un detector de superficie (detectores de efecto Čerenkov en agua) y telescopios de fluorescencia. En este trabajo se realiza una descripción completa de ambos detectores. Para el detector de fluorescencia se presentan estudios de la luz de fondo de noche que sirvieron para el diseño de la electrónica de los mismos. Para el detector de superficie se presentan trabajos realizados con el objetivo de contribuir con su montaje, instalación y puesta en funcionamiento. Durante la primera etapa de construcción del Observatorio se desarrollaron las técnicas y procedimientos para garantizar el correcto funcionamiento del mismo. Previamente al comienzo de la construcción del Observatorio se realizaron estudios sobre un detector prototipo de efecto Čerenkov en agua emplazado en el Laboratório TANDAR, tales como la caracterización de respuesta frente a distintas direcciones de ingreso de las partículas y el desarrollo de un método de calibración del detector. A continuación se montó un conjunto de cuatro detectores para la medición de rayos cósmicos con energías del orden de ~10^15 eV. En este trabajo se describen el diseño, la construcción y la operación de este arreglo de detectores. También se incluye el desarrollo del sistema de toma de datos y los análisis de estabilidad de su funcionamiento. Finalmente se muestran algunos eventos típicos registrados. Se presenta además el desarrollo del actual método de calibración de los detectores de superficie del Observatorio Pierre Auger. Junto a éste, las diferencias técnicas y estudios realizados para garantizar el correcto funcionamiento de los detectores y para validar el sistema de adquisición de los datos. Finalmente, toda la experiencia adquirida se volcó en un programa de simulaciones del detector de efecto Čerenkov en agua, que esta disponible para ser utilizado pela Coloaboración Pierre Auger.

Abstract:
Understanding the physics of cosmic rays is still a major goal of science in order to build our knowledge of the Universe. Research on Cosmic Rays over the last years has provided important improvements in particle physics and astrophysics by making use of different experimental techniques from the early cloud chambers carried in airborne ballon experiments to gigantic observatories specifically designed to study cosmic rays of the highest energies. The cosmic ray energy spectrum ranges from ~ 100 keV to ~10^20 eV, impinging on the top of the Earth atmosphere from all directions with a constant flux. Those with energy in excess to ~1 PeV produce, when traversing the atmosphere, a cosmic air-shower of secondary particles. These particles induce fluorescence light emission from the atmosphere nitrogen, which may be detected. They may as well be directly detected on reaching the Earth surface by the so-called surface detectors. The Pierre Auger Observatory, which is presently under construction and data taking, has as prime objective to detect cosmic rays with energy in excess to 10^19 eV. In order to achieve this aim it makes use a hybrid detection technique: a surface detector array (water Čerenkov detectors) and fluorescence telescopes. A complete description of both detector systems is performed in this thesis work. For the fluorescence detector, background light measurements were done in order to help designing the telescope electronic system. A further and exhaustive work has been performed for the surface detectors, geared towards their deployment, installation and commissioning. Related to this latter point and during the initial phases of the Project construction, techniques and procedures were developed in order to guarantee the correct functioning of the detector system. In the years prior to commencing the Observatory construction, efforts were committed in experiments with a prototype water Čerenkov detector emplaced at the TANDAR Laboratory, such as the characterization of the detector response to different entry points of impinging particles and the development of an innovative calibration method. At a later stage, an array of four water Čerenkov detectors, was instrumented with a view on the detection of cosmic rays of energy ~10^15 eV. The design, construction and commissioning of this array is described in this thesis. Reference is made to the development of its data acquisition system and to its operation stability analyses. Some typical detected events are shown. Also shown in this thesis are the different surface detector calibration approaches, with special emphasis on the one currently adopted at the Observatory. In adition to contributing towards the development of this calibration procedure, different techniques and studies were performed in an effort to assure the correct detector functioning and to validate the data acquisition system. Finally, all the acquired expertise provided a solid basis on which a water Čerenkov detector simulation computer code was written, which is available to the Auger Collaboration.

"Integración de información en tareas secuenciales" (2011). Kamienkowski, Juan Esteban. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En la actualidad se posee un conocimiento profundo de la neurofisiología y las variables comportamentales asociadas a muchas operaciones simples dentro de la percepción (por ejemplo en visión: detección de colores, intensidades, movimientos, formas, etc) así como también de tareas cognitivas simples (comparación de números, reconocimiento de una palabras, etc). Sin embargo, se sabe muy poco de cómo estos procesos se concatenan en el tiempo para dar lugar a una tarea tan cotidiana como reconocer a una persona en la multitud. El objetivo general de esta tesis es entender la sintaxis y arquitectura de procesos que componen una tarea compleja. Con esta premisa estudiamos situaciones de creciente complejidad, desde la interferencia de dos tareas independientes hasta el análisis de una escena visual –entendida como una sucesión de estados enmarcados en movimientos oculares rápidos–. Estos protocolos fueron combinados con modelos simples, y técnicas de seguimiento ocular y electroencefalografía. Los resultados presentados en esta tesis muestran que la arquitectura serial es una propiedad estructural del pensamiento consciente, independiente de la adquisición de información a través de movimientos oculares, y que los potenciales evocados asociados a la detección de un objeto en experimentos con la mirada fija pueden ser compatibilizados con los tiempos característicos de estos movimientos oculares rápidos. A su vez proponemos dos esquemas experimentales novedosos: El primero, comportamental, traslada los experimentos clásicos de interferencia entre tareas a una situación de movimientos oculares, posibilitando el estudio de la arquitectura de procesos en estas situaciones de visión más natural; y el segundo radica en combinar registros de electroencefalografía y movimientos oculares para poder estudiar correlatos neurofisiológicas de la resolución de tareas naturales, como la lectura.

Abstract:
Despite the deep understanding regarding the neurophysiology and behavior behind a huge range of operations in perception –i.e. in the visual system, color detection, color intensities, movement, shapes, etc- or simple cognitive tasks –i.e. number comparisons, word recognition, etc-; little is known about how these processes are combined in time to give place to such a simple task as recognizing somebody in a crowded place. The main objetive of this thesis is to understand the sintaxis and arquitecture of processes that compose a complex task. Inside this framework we studied some aspects of this sintaxis in situations of an increasing complexity, from the interference of two independent tasks to the visual analysis of a complex scene –which involves a secuence of states framed in the times of fast eye movements–. These protocols were combined with simple models, eye tracking and electroencephalography. In his thesis we show that the serial arquiteture is a structural invariant of the conciouss thought, independent of the acquisition of information through eye movements, and that the evoked potentials associated with target detection in fixed-gaze experiments could be compatibilized with the timming of these rapid eye movements. Finally, we proposed two new experimental schemes: The first one translates the classic dual-task interference experiments to a situation with eye movements, in order to study of the arquitecture of processes in natual vision; and the second, combining electroencephalography and eye movements to open the possibility of study the neural correlates of the resolution of more naturalistic tasks, as reading.

"Integración dinámica de señales ambientales en Arabidopsis thaliana" (2009). Sellaro, Romina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las plantas han desarrollado complejos sistemas que les permiten percibir el ambiente lumínico. Los resultados expuestos en este trabajo proponen mecanismos por los cuales la compleja red de señalización regula el crecimiento de las plántulas integrando señales lumínicas. El primero se refiere a la acción sinérgica de la luz azul y la luz roja. En plántulas de Arabidopsis cultivadas en luz roja (condición que activa a phyB), un corto suplemento de luz azul activa a cry1 generado así una respuesta sinérgica. En esta tesis encontré que el mecanismo de integración implica la activación de reguladores positivos como HY5, HYH, SPA1 y SPA4 por medio de los criptocromos al percibir una señal transitoria de luz azul. Luego de esta señal, los genes HY5, HYH, SPA1 y SPA refuerzan la señalización mediada por phyB. Como phyB se mantiene activo en oscuridad, el sinergismo permite la persistencia de los procesos que llevan a la autotrofía durante la noche. En la segunda parte, investigué la integración de señales fluctuantes de sombreado vegetal. Cuando una plántula crece en sombra, distintos genes de respuesta a hormonas y genes involucrados en la señalización de la luz como PIF4, PIF5 (que promueven el alargamiento del hipocotilo) aumentan su expresión. Cuando una plántula que estaba creciendo en sombra percibe luz no filtrada por plantas vecinas, aumentan los niveles de expresión de HY5. HY5 podría regular negativamente la señalización de auxinas e inhibir la expresión de reguladores positivos del crecimiento como son PIF4, PIF5, HAT2, PKS4, LHY y CCA1 evitando que se genere la respuesta máxima a la sombra. En ambos casos se observa como las plantas integran señales ambientales mediante la conexión de distintas vías de señalización.

Abstract:
Plants have developed complex systems that allow them to perceive the light environment. The results presented in this work proposes mechanisms by which the complex signaling network regulates the seedlings growth integrating light signals. The first relates to the synergistic action of blue light and red light. In Arabidopsis seedlings grown under red light (condition that activate phyB), a short supplement of blue light activate cry1 and generated a synergistic response. In this thesis I found that the mechanism of integration involves the activation of positive regulators such as HY5, HYH, SPA1 and SPA4 through the perception of transient signal of blue light by cryptochrome. After this signal, genes HY5, HYH, SPA1 and SPA reinforce the phyB-mediated signaling. Because phyB is active in darkness, synergism allows the persistence of the processes that lead to autotrophy during night. In the second part, I researched the integration of shade fluctuating signals. When a seedling grows in shade, several hormone-response genes and genes involved in signaling of light as PIF4, PIF5 (that promote hypocotyl elongation) increase their expression. When a seedling that was growing in shade perceived unfiltered light by neighboring plants, increase the expression levels of HY5. HY5 could negatively regulate auxin signaling and inhibit the expression of positive regulators of growth such as PIF4, PIF5, HAT2, PKS4, LHY and CCA1 preventing shade maximal response. Both cases shows how plants integrate environmental signals by connecting different signaling pathways.

"Integración fraccionaria iterada : Un problema de Ross en conexión con espacios funcionales" (1995). Peña, Carlos Cesar. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Integrales singulares sobre superficies rectificables" (1985). Urciuolo, Marta Susana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Interacciones agua-sólido en frutas liofilizadas y sus consecuencias sobre aspectos estructurales, atributos cromáticos y distribución espacial de la luz" (2012-03-30). Agudelo Laverde, Lina Marcela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los aspectos físicos, químicos y microbiológicos que definen la calidad de los alimentos están relacionados con la cantidad, la ubicación y el estado del agua en los mismos. El objetivo de este trabajo fue estudiar el impacto de las interacciones agua-sólido sobre las propiedades estructurales, atributos cromáticos y la distribución espacial de la luz en frutas liofilizadas, y su relación con su estado físico y la ocurrencia de reacciones químicas. Se analizaron las características de sorción de agua, las temperaturas de transición vítrea y la movilidad molecular. Se estudió el efecto del secado, la humidificación y el tratamiento térmico sobre los cambios estructurales y de color por degradación de pigmentos naturales y/o la generación de productos pardos. La técnica de análisis de imágenes permitió el estudio de las características estructurales y ópticas de materiales con distribución homogénea o heterogénea de color de forma sencilla. El estudio integral de las propiedades de sorción de agua, temperaturas de transición vítrea en función de la fracción de agua y de la movilidad molecular permitió explicar el efecto del agua sobre el colapso estructural, la cinética de reacción de pardeamiento, la perdida de pigmento y el desarrollo de transparencia en frutas liofilizadas.

Abstract:
Physical, chemical and microbiological aspects that define food quality are related to the amount, location and state of water. The objective of the present work was to study the impact of the water-solids interactions on structural aspects, chromatic attributes and spatial distribution of light in freeze-dried fruits, and the relation with the physical state and the occurrence of chemical reactions. Water sorption properties, glass transition temperatures and molecular mobility were analyzed. The effect of drying, humidification and thermal treatment were studied in relation to structural changes and color changes due to natural pigments degradation and/or generation of brown products. The images analysis technique allowed analyzing structural and optical characteristics of materials bearing homogeneous or heterogeneous color distribution in a simple way. The integral study of water sorption properties, glass transition temperatures as a function of water fraction, and of the molecular mobility explained the effect of water on structural collapse, the kinetics of browning reactions, the loss of pigments and the development of transparency in dehydrated fruits.

"Interacciones de Brucella abortus con la inmunidad innata del sistema nervioso central como determinante de patogénesis de la neurobrucelosis" (2010). García Samartino, Clara. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La invasión al sistema nervioso central (SNC) por bacterias del genero Brucella resulta en un desorden inflamatorio llamado neurobrucelosis. En este trabajo nosotros presentamos evidencia in vivo e in vitro mostrando que B. abortus y sus lipoproteínas activan la inmunidad innata del SNC, originando una respuesta inflamatoria que lleva a la astrogliosis, una característica típica de neurobrucelosis. Inyecciones intracraneales de B. abortus muerta por calor (HKBA) o de la proteína de la membrana externa 19 (Omp19), una lipoproteína de B. abortus utilizada como modelo, indujeron astrogliosis concomitantemente con un infiltrado neutrofilico en el cuerpo estriado de los ratones. La infección de astrocitos y microglia con B. abortus incitó la secreción de IL-6, IL-1beta, TNF-alfa, MCP-1 y KC (CXCL1). HKBA también estimuló la liberación de estos mediadores inflamatorios, sugiriendo la independencia de la viabilidad bacteriana en este fenómeno e implicando a un componente estructural de la bacteria. De acuerdo con esto, Omp19 indujo el mismo patrón de secreción de citoquinas y quimiocinas. La respuesta inflamatoria desencadenada por Omp19 estuvo mediada por TLR2, ya que cultivos de células gliales provenientes de ratones TLR2 KO no promovieron la secreción de mediadores proinflamatorios. Sin embargo este receptor no media la infección ni la replicación de la bacteria en astrocitos o en microglía. La infección con B. abortus promovio apoptosis de astrocitos pero no de microglia. HKBA y Omp19 indujeron, no solo la apoptosis de los astrocitos sino también su proliferación, dos de las caracteristicas que se observan durante la astrogliosis. La proliferación inducida por HKBA y Omp19 disminuyó en presencia de Ac anti-IL-6. Por otro lado, la apoptosis promovida por los 2 estímulos fue completamente suprimida en células provenientes de ratones deficientes del receptor p55 de TNF-alfa o cuando se agregó a los cultivos el inhibidor general de caspasas Z-VAD-FMK. Por lo tanto, IL-6 contribuye a la proliferación de astrocitos, y la senalización de TNF-alfa vía TNFR1 a través de caspasas determina la apoptosis, cuando son estimulados con B. abortus y sus lipopoproteínas. Los resultados de esta tesis son prueba de principio de que las lipoproteínas de Brucella podrían ser determinantes de patogenia claves en neurobrucelosis, y que la astrogliosis podria contribuir a la patogénesis de la misma.

Abstract:
Central nervous system (CNS) invasion by bacteria of the genus Brucella results in an inflammatory disorder called neurobrucellosis. In this study we present in vivo and in vitro evidence showing that B. abortus and its lipoproteins activate the innate immunity of the CNS, eliciting an inflammatory response that leads to astrogliosis, a characteristic feature of neurobrucellosis. Intracranial injection of heat killed B. abortus (HKBA) or outer membrane protein 19 (Omp19), a B. abortus lipoprotein used as a model, induced astrogliosis with concomitant neutrophil's infiltrate in mouse striatum. Infection of astrocyte and microglia with B. abortus induced the secretion of IL-6, IL-1beta, TNF-alpha, MCP-1 and KC (CXCL1). HKBA also induced these inflammatory mediators, suggesting independency of bacterial viability and involvement of a structural component of the bacterium. Accordingly, Omp19 induced the same cytokine and chemokine secretion pattern. TLR2 mediated the inflammatory response induced by Omp19 since cultures from TLR2 KO mice did not induced the secretion of proinflammatory mediators. However, this receptor is not envolved in the infection or replication of the bacteria inside astrocytes or microglia. B. abortus infection induced astrocyte, but not microglia, apoptosis. HKBA and Omp19 elicited not only astrocyte apoptosis but also proliferation, two features observed during astrogliosis. Proliferation induced by HKBA and Omp19 was diminished in the presence of anti-IL-6 antibody, and apoptosis induced by both stimuli was completely suppressed in cells of TNF-alpha receptor p55-/- mice or when the general caspase inhibitor Z-VAD-FMK was added to cultures. Hence, IL-6 contributes to astrocyte proliferation, and TNF-alpha signaling via TNFR1 through the coupling of caspases determines apoptosis, as elicited by B. abortus and its lipoproteins. Our results provide proof of the principle that Brucella lipoproteins could be key virulence factors in neurobrucellosis, and that astrogliosis might contribute to neurobrucellosis pathogenesis.

"Interacciones de la luz con una unión túnel (en un Microscopio de Efecto Túnel)" (1999). Bragas, Andrea Verónica. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Interacciones de los Arenavirus Tacaribe y Junín con sus células hospedadoras en las etapas tempranas de la infección" (2015-05-26). Suyay Roldán, Julieta. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Los arenavirus son virus envueltos con genoma ARN segmentado cuyo ciclo de replicación tiene polaridad bisentido. La entrada a las células blanco se realiza vía endocitosis mediada por receptor y posterior fusión dependiente de pH. Una vez que la nucleocápside se encuentra en el citoplasma se expresan 5 proteínas estructurales. La proteína mayoritaria asociada a la nucleocápside se denomina NP. A partir de un único precursor glicoproteico (GPC), se obtienen dos glicoproteínas virales denominadas GP1 y GP2 y el péptido señal (SP), los cuales conforman las estructuras claviformes encontradas en la envoltura viral. En este trabajo se estudiaron aspectos de la interacción virus-célula huésped, caracterizando el rol de distintas proteínas celulares en los eventos tempranos del ciclo de multiplicación de los arenavirus Tacaribe (TCRV) y Junín (JUNV). Debido a que TCRV no utiliza el receptor de transferrina humano (hTfR) para entrar en las células, se utilizo un modelo de células que expresan diferencialmente el TfR y se analizaron las vías de entrada utilizadas por el virus. Para ello, se utilizaron inhibidores farmacológicos de las diferentes vías endocíticas (dependiente de clatrina, colesterol, dinamina, acidificación endosomal y macropinocitosis) y se confirmaron los resultados obtenidos utilizando construcciones dominantes negativas unidas a GFP de proteínas involucradas en cada una de ellas. Estos experimentos permitieron caracterizar que en aquellas líneas que no expresan el hTfR, la vía endocítica principal de entrada es la dependiente de clatrina, dinamina y acidificación endosomal mientras que en las células que si expresan dicho receptor, la vía principal es la macropinocitosis. La endocitosis del virus mediada por la unión a un receptor celular puede desencadenar diferentes señales intracelulares para beneficiarse de procesos celulares. En este trabajo estudiamos la participación de la autofagia durante la infección con JUNV en un modelo de células humanas. Se analizó la distribución de la proteína LC3 sobreexpresada (marcador de la vía de la autofagia), se utilizaron inhibidores farmacológicos y células con el gen Atg 5 mutado (esencial para la activación de la vía convencional de la autofagia). Los resultados obtenidos permitieron determinar que esta vía se activa desde el inicio de la infección y permanece activa hasta 24 hs post-infección. Los hallazgos presentados en este trabajo no sólo aportan conocimientos básicos sobre los pasos iniciales del ciclo de replicación de estos arenavirus, sino que además permite desarrollar nuevos blancos antivirales contra JUNV.

Abstract:
Arenavirus are enveloped viruses with a segmented RNA genome which replication cycle has a bisense polarity. The entry into the target cell depends on a receptor mediated endocitosis and a subsequent fusion pH dependant. Once the nucleocapsid is in the cytoplasm, 5 structural proteins are expressed. The majority nucleocapsid associated protein it is called NP. From one glycoprotein precursor (GPC), two glycoproteins are obtained called GP1 and GP2 and the signal peptide (SP) which they shape the claviforme structures found in the viral envelope. In this work, interactions virus-host cells were studied, characterizing the roll of different cellular proteins in the early stage of the Tacaribe (TCRV) and Junin (JUNV) Areniavirus multiplication cycle. Since TCRV does not use the human transferrine receptor (hTfR) to enter the cells, a model with a differential expression of the TfR was used and the pathways used by the virus were analyzed. In order to do that, pharmacological inhibitors of the different endocytic pathways (dependent on clathrin, cholesterol, dinamin, endosomal acidification and macropinocytosis) were used and the results obtained were confirmed using dominant negative tagged GFP constructions involved in each one of them. These experiments allowed us to characterize that in those cells that do not express the hTfR, the main endocytic pathway used by TCRV is the one dependent on clathrin, dinamin and endosomal acidification, while in those cells expressing this receptor, the main pathway is de macropinocytosis. Receptor mediated endocytosis used by the virus can unleash different intracellular signals in order to exploit different cellular processes. In this work we studied the autophagy involvement during the infection in a human cell line model. The distribution of the protein LC3 overexpressed (an autophagic marker) was analyzed. Pharmacological inhibitors of this pathway and Atg 5 gen mutated cells (essential for the conventional autophagy activation) were also used. Results obtained allow us to determine that this pathway is activated from the early steps of infection and remains active up to 24 hs post-infection. The findings presented in this work not only provides basic knowledge about the initial steps of these arenavirus replication cycles, but also allows to develop new antiviral targets against JUNV.

"Interacciones entre el parásito de cria Molothrus bonariensis y uno de sus hospedadores, Turdus amaurochalinus" (2004). Astié, Andrea A.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El parasitismo de cría es una estrategia reproductiva en la que el ave parásita deposita sus huevos en los nidos de otras especies, las que realizan el cuidado parental de huevos y pichones. El tordo renegrido es un parásito de cría obligado y generalista que parasita a más de 200 hospedadores, entre ellos al zorzal chalchalero. En este trabajo se estudiaron las interacciones hospedador-parásito entre el tordo renegrido y el zorzal chalchalero. Se registró una tasa de parasitismo del 60% con una intensidad de 1,5 huevos de tordo por nido parasitado. El mayor costo del parasitismo sobre el éxito reproductivo del zorzal fue debido a las picaduras de huevos de zorzal inflijidas por los tordos cuando visitan el nido. Además, en los nidos parasitados el éxito de eclosión de los huevos de zorzal fue menor. La presencia de pichones de tordo en el nido no afectó la supervivencia de los pichones zorzal. El zorzal chalchalero no ha desarrollado defensas efectivas frente al parasitismo, aunque es capaz de reconocer a los tordos como una amenaza. En nidos exitosos (nidos que no fueron predados ni abandonados) sólo el 20% de los huevos de tordo alcanzó el estadío de volantón. Se plantean posibles explicaciones para estos resultados.

Abstract:
Brood parasitism ia a breeding strategy in which the parasitic bird lay eggs in nests of other species (host), which incubate the eggs and provide parental care to the chicks. The shiny cowbird (Molothrus bonariensis) is an obligate brood parasite that lay eggs in nests of more than 200 hosts, included the Creamy-bellied Thrush (Turdus amaurochalinus). In this work, I studied the interactions between shiny cowbirds and creamy-bellied thrushes. I found 60% of nest parasitized with an intensity of 1,5 eggs per nest. The main cost inflicted by the parasite was the puncture of host eggs. Parasitized nests had a lower hatching success, but parasite chicks did not affect the survival of host chicks. On the other hand, creamy-bellied thrushes did not develop effective defences against parasitism, although they recognize shiny cowbird as a threat. In successful nests (those that were not depredated or deserted) only 20% of shiny cowbird eggs produced fledglings. I discuss why creamy-bellied thrushes did not develop better antiparasitic defences, and why shiny cowbirds use so frequently this low-quality host.

"Interacciones entre el sistema neuroendócrino y el sistema inmune en un modelo animal con el eje hipotalámico-pituitario-adrenal hiperactivo" (1995). Labeur, Marta Susana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Interacciones entre el tordo renegrido Molothrus bonariensis y el pecho amarillo Pseudoleistes virescens : Estrategias del parásito de cría y mecanismos de defensa del hospedador" (1996). Mermoz, Myriam E.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudió la interacción entre un parásito de cría generalista, el tordo renegrido Molothus bonariensis y uno de sus hospedadores, el pecho amarillo Pseudoleistes virescens. El 66 % de los nidos fue parasitado (50 % con parasitismo simple y 50 % con parasitismo múltiple, 2-8 huevos). A1 menos en un 60 % de los casos, los eventos de parasitismo múltiple fueron debidos la puesta de más de una hembra en el mismo nido. El 78 % de los eventos de parasitismo ocurrieron durante la puesta del hospedador. Los períodos de incubación fueron de 12 días para el parásito y de 14 días para el hospedador. En consecuencia, los pichones parásitos fueron los primeros en nacer y la competencia con los pichones del hospedador que son más grandes. Los mayores costos del parasitismo se asociaron con la ruptura de huevos por parte de la hembra parásita. Cuando permanecieron en el nido más de 3 huevos parásitos, disminuyó la probabilidad de que los huevos del hospedador no removidos produjeran volantones. Aunque en el área de estudio aproximadamente el 24 % de los huevos de tordo renegrido son blanco-inmaculados, sólo el 4 % de los huevos parásitos observados en nidos activos de pecho amarillo fueron de ese morfo. Experimentos de parasitismo artificial mostraron que el pecho amarillo rechaza los huevos parásitos blancos. Las hembras de tordo renegrido que ponen huevos blancos no evitaron parasitar a esta especie. Mediante la presentación cerca del nido de ejemplares embalsamados de tordo renegrido y de una especie neutra, se demostró que los pecho amarillo reconocen y atacan a los parásitos. La defensa del nido resuló ineficiente porque los pecho amarillo permanecieron cerca del nido sólo el 35 % del tiempo durante la puesta. Se discute cómo la restricción energética durante la puesta de huevos en la hembra y el comportamiento de asegurar la paternidad de esos huevos en el macho, podrían ser la causa de que el pecho amarillo no cuidara su nido más eficientemente durante la puesta.

Abstract:
I studied the interaction between a generalized brood parasite, the Shiny Cow bird Molothrus bonariensis and one of its hosts the Brown-and-yellow Marshbird Pseudoleistes virescens. Sixty-six percent of the nests were parasitized 50 % single and 50 % with multiple parasitism, range 2-8 eggs). At least in 60 % of the cases, multiple-parasitism occurred as a result of more than one female cowbird laying eggs in the same nest. Seventy-eight percent of the parasitic events took place during the egg-laying period of the host. The average incubations periods for the parasite and host eggs were 12 and 14 days, respectively. As a consequence, parasite nestlings hatched first and were not outcompeted for food by their bigger nestmates. The main cost of parasitism was produced by the egg-pecking behaviour of the parasitic female. When they were more than 3 parasitic eggs, host eggs that remained in the nest had a lower probability of reaching the fledgling stage. Although in the study area approximately 24 % of the Shiny cowbird eggs were white-immaculate, only 4 % of the cowbird eggs found in Brown-and-Yellow Marshbird active nests were white-immaculate. Artificial parasitism experiments showed that the host rejects white eggs. The parasite females that laid white eggs did not avoid parasitizing Brown-and-yellow Marshbird nests. Using stuffed models of Shiny Cowbirds and a neutral species, I found that Brown-and-yellow Marshbird recognised and attacked the parasites when they were near the nest. Nest defence was unsuccessful because Brown-and-yellow Marshbirds were near their nest only 35 % of the time during egg-laying. I discuss that female energy constraints during egg-laying and male mate-guarding are responsible for Brown-and-yellow Marshbirds not attending the nest more efficiently during the egg-laying period

"Interacciones entre ß-lactoglobulina y polisacáridos en coloides alimentarios" (2003). Baeza, Rosa Isabel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudió el efecto de diferentes polisacáridos en las propiedades de gelificación y espumado de la β-lg en condiciones de limitada compatibilidad termodinámica (pH > pI). En presencia de polisacáridos no gelificantes (λ-C, XAN y PGA) se observó una disminución en la concentración mínima de proteína necesaria para gelificar y una modificación en la dinámica de gelificación (tiempo de gelificación y velocidad de desarrollo del gel). La presencia de polisacáridos afectó principalmente la etapa de agregación de la proteína, limitante del proceso de gelificación, obteniéndose en presencia de los PS grandes agregados que permitieron la formación de un gel. Se observó en general un aumento en la estabilidad térmica de los sistemas mixtos β-lgPS (6%/0,5%) en relación a la β-lg sola. Esto se manifestó en un aumento de las temperaturas de inicio de desnaturalización y del cambio de entalpía total. Las propiedades de los geles mixtos fueron muy diferentes de acuerdo al polisacárido utilizado. En los geles mixtos β-lg/PGA se observó la mayor variación en las propiedades micro y macroestructurales con el pH, T, concentración de sólidos totales y relación PS/proteína. Las propiedades de las interfases y espumas en sistemas mixtos estarían controladas por la proteína, debido a su mayor actividad interfacial. El efecto de los polisacáridos en las propiedades interfaciales de una proteína es complejo debido a la existencia de por lo menos tres fenómenos: (a) Incompatibilidad entre los biopolímeros (b) fenómenos competitivos o cooperativos (c) interacciones específicas de complejamiento a través de ciertas regiones de la molécula del PS y de la proteína. Al estudiar el efecto de los polisacáridos en monocapas esparcidas de β-lg se observó en general un aumento de la presión superficial y una disminución de la elasticidad y módulo dilatacional elástico. El Manucol ester mostró una mayor actividad superficial que los otros PGA (K-0 y K-LVF) dado que produjo el mayor aumento de la presión superficial. En los estudios de adsorción dinámica (tensiómetro de gota) se observó que el Manucol ester debido a su mayor adsorción entre los PGA es el que produce películas con menor estructuración. Esto se observó en los ensayos dinámicos (G’max más bajo), como en los estudios de monocapas esparcidas donde el Manucol dió los menores valores de módulo dilatacional elástico y de elasticidad. En presencia de la goma xántica los resultados muestran que aún sin penetrar en la interfase, este polisacárido tiene una enorme influencia en la misma, derivada principalmente de un posible complejamiento sobre la proteína en la monocapa y de fenómenos de limitada incompatibilidad tanto en el seno de la solución como en la interfase. Las características reológicas de la película interfacial tienen una profunda influencia en la estabilidad de las espumas

Abstract:
In the present work, the effect of polysaccharides on the properties of β-lg gels and foams was studied in conditions of limited thermodynamic compatibility (pH > pI). In the presence of non-gelling polysaccharides (λ-C, XAN and PGA) it was observed a decrease in the critical concentrations for β-lg gelation and a modification in the dynamic of protein gelation (gel time, rate of development of the gel structure). The presence of polysaccharides greatly affected the aggregation of β-lg, that constituted the limiting step in the rate of gelation process. In the presence of PS large aggregates were formed during heat treatment, that allowed gel formation at low β-lg concentration. In general, the presence of PS increased the thermal stability of B-Ig, as we observed an increase in the onset temperature and enthalpy change of the denaturation process in the mixed systems. The properties of mixed gels were totally different according to the polysaccharide present in the mixed gel. In the presence of PGA it were observed the greatest variations in macro and microstructural properties of gels with pH, T, solids content and PS/β-lg ratio. The properties of β-lg interfaces and foams would be controlled by protein, due to its highest surface activity. The effect of polysaccharide on β-lg interfacial properties is complex due to the existence of the following phenomena: (a) incompatibility between biopolymers, (b) cooperative or competitive adsorption (c) complexation through specific interactions between polar regions on the protein and polysaccharide molecules. In the study of spread monolayers, it was observed an increase in surface pressure and a decrease in elastic dilatational modulus and elasticity. MAN showed the highest increase in surface elasticity, as a consequence of its high surface activity. In the dynamic adsorption experiments (drop tensiometer) MAN was the polysaccharide that produced the less structurated films in the presence of β-lg due to its higher adsorption at the interface in comparison with K-0 and K-LVF. This was manifested by low G’max and the lowest G’ and elasticity obtained in spread monolayers. The presence of XAN produced a large effect in the film properties, even without presenting surface activity by itself. This effect would be due to complexation with protein adsorbed at the interface and limited incompatibility in the bulk solution and in the interface. Rheological characteristics of the film have a large influence on foam stability.

"Interacciones magnéticas en nanoestructuras de metales de transición depositadas sobre sustratos no metálicos" (2014-03-27). Urdaníz, María Corina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo de tesis, a partir de cálculos de primeros principios, realizamos un estudio sistemático de la interacción magnética entre átomos de metales de transición 3d (Cr,Mn, Fe, y Co) al depositar cadenas de losmismos sobre unamonocapamolecular de nitruro de cobre (Cu2N) crecida sobre Cu(001). Nos propusimos reconocer el tipo de interacción magnética que subyace al magnetismo de estas cadenas y analizar, a su vez, como las propiedades magnéticas dependen del sitio de depósito de las mismas. Se comprobó que el efecto del sustrato, que es fuertemente covalente, es muy importante, obteniéndose que distintas geometrías de adsorción dan distinto estado fundamental magnético para una misma cadena y una misma distancia interatómica. Nuestros cálculos indican que en una de las geometrías, la interacción magnética más importante entre los átomos 3d es la de superintercambio. En esta configuración, el estado fundamental como función del llenado de la banda d, pasa de ser no magnético a ser ferromagnético, para finalmente ser antiferromagnético al final de la serie 3d. Posteriormente, y debido a la importancia de la interacción sp-d en la determinación de las interacciones magnéticas en estos sistemas, realizamos los cálculos reemplazando la monocapa de Cu2N por dióxido de cobre (Cu2O ). Estudiamos la dependencia de ls interacción magnética de tipo superintercambio entre los átomos de metal de transición (MT) de las cadenas, con el átomo mediador: nitrógeno (N) u oxígeno (O), según corresponda. Analizamos estos sistemas estudiando primero cadenas libres diatómicas del tipo MT-N y MT-O. Obtuvimos que el comportamiento de estas cadenas es muy similar a lo que se obtiene cuando las cadenas son depositadas sobre una monocapa de Cu2O. Con el objetivo de comprender la naturaleza de esta interacción, introdujimos un Hamiltoniano modelo de tipo superintercambio. Estimamos los parámetros necesarios que determinan la energía de intercambio utilizando la información procedente de las bandas obtenidas de los cálculos ab initio para las cadenas diatómicas MT-N y MT-O. Demostramos que un simple conjunto de parámetros y el uso de supuestos físicamente razonables podrían explicar las tendencias magnéticas observadas. Debido a su importancia para la espintrónica, se obtuvo además , la energía de anisotropía magnética de impurezas y cadenas de átomos de Cr, Mn y Fe depositadas sobre Cu2N/Cu(001). Determinamos los ejes fáciles de magnetización para todas las geometrías de adsorción. Finalmente, se presenta una discusión sobre cómo se modificarían las características de las interacciones mencionadas en función del ancho de capa de nitruro de cobre, considerando cadenas atómicas depositadas sobre bicapas y tricapas del nitruro.

Abstract:
In this thesis, we performed ab initio calculations, to do a systematic study of the magnetic interactions among 3d transition metal (TM) atoms (Cr, Mn, Fe and Co) building chains deposited on a molecular Cu2N monolayer, grown on Cu(001). The goal behind this study has been to recognize the type of magnetic interactions that underlie the magnetism of these chains, and also to analyze how the magnetic properties depend on the site of adsorption of the TM atoms. We find that the effect of the substrate, which is strongly covalent, is extremely important, obtaining that different adsorption geometries give rise to differentmagnetic ground states for the same chain and the same interatomic distances. Our calculations indicate that in one of the studied adsorption geometries, the more importantmagnetic interaction among the 3d atoms is superexchange-like. For this configuration, we find that the magnetic ground state as a function of increasing ’d’ filling, goes from non magnetic to ferromagnetic and finally to antiferromagnetic, at the end of the 3d series. Due to the importance of the sp-d interaction in determining the magnetic behavior of these systems, we performed calculations replacing the Cu2N monolayer by a copper oxide (Cu2O) monolayer and studied the dependence of the superexchange like magnetic interaction with the mediating atom: nitrogen (N) or oxygen (O). We started by studying unsupported diatomic chains of the TM-N and TM-O type, and obtained that the behavior of these chains is very similar to the one they show when deposited on the Cu2O monolayer. In order to understand the nature of this interaction, we introduced a superexchange model Hamiltonian and estimated the necessary parameters that determine the exchange energy using the information coming from the ab initio obtained bands for the unsupported diatomic chains. We demonstrated that a simple set of parameters and the application of physically reasonable assumptions are able to explain the observed magnetic trends. Due to its importance for spintronics, we also obtained themagnetic anisotropy energy of impurities and chains of Cr, Mn and Fe deposited on Cu2N/Cu(001).We determined the easy axis of magnetization for all adsorption geometries. Finally, a discussion is presented on how the characteristics of the interactions can be modified when the width of the underlying covalent substrate is increased.

"Interacciones moleculares y procesos de transferencia de carga en fluidos supercríticos" (1998). Destaillats, Hugo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se estudiaron propiedades termodinámicas de soluciones diluidas en la cercanía del punto crítico del solvente. La construcción de una celda espectrofotométrica de alta presión permitió determinar la solubilidad de I2 (s) en Xe y SF6 supercríticos. Se estudiaron dos isotermas con Xe, de 300.79 K y de 318.80 K en el ámbito de presiones de 5 a 10 MPa, y tres con SF6, de 323.95 K, 330.00 K y 340.55 K, en el rango de 2 a 10 MPa. En ambos solventes, las isotermas estudiadas corresponden a un intervalo de hasta 25 K por encima de las temperaturas críticas de los solventes puros. En esas condiciones se obtuvieron grandes variaciones de la densidad del sistema a través de pequeños cambios de la presión. Se observó en todos los casos un fuerte incremento de la solubilidad de I2 en la zona crítica. A partir de la variación de la solubilidad con la densidad del sistema, se calcularon el volumen parcial molar a dilución infinita del soluto, V2∞, y la derivada (∂p/∂x)t.v∞. Estas cantidades, lo mismo que el factor de incremento de la solubilidad E, permitieron comparar cualitativamente la magnitud de la interacción soluto-solvente en los sistemas estudiados. La incorporación de un cosolvente aromático (benceno o mesitileno) produjo un incremento moderado de la solubilidad de I2, que pudo ser explicado utilizando una ecuación de estado sencilla y potenciales intermoleculares de Lennard-Jones, sin necesidad de postular la formación de un complejo entre I2 y el areno. No obstante ello, la existencia de una banda de transferencia de carga en la región ultravioleta del espectro permitió cuantificar los pares donor-aceptor formados, y observar la disminución del cociente de equilibrio Kc a medida que se incrementó la densidad del sistema. El mismo comportamiento se observó al calcular Kc por un método alternativo, sin recurrir a la banda de transferencia de carga. No se observó evidencia de la existencia de clustering crítico en estos sistemas.

Abstract:
The thermodynamical properties of dilute solutions near the critical point of the solvent have been the subject of this study. The solubility of I2 (s) in supercritical Xe and SF6 has been measured using a high pressure spectrophotometric cell. Two isotherms have been measured xith Xe, at 300.79 K and 318.70 K over the pressure range from 5 to 10 MPa, and three with SF6, at 323.95 K, 330.00 K y 340.55 K over the pressure range from 2 to 10 MPa. In both solvents, the isotherms were within 25 K over the critical temperatures of the pure solvents. In those conditions, important variations of fluid density were obtained with small changes in pressure. A large increment of the solubility of I2 in the critical region was observed in every case. The partial molar volume of the solute at infinite dilution, V2∞, and the derivative (∂p/∂x)t.v∞ have been calculated from the variation of the solubility with the solvent density. The solute-solvent interaction forces present in the systems have been qualitatively compared from their values, and also from the solubility enhancement factor E. The addition of an aromatic cosolvent (benzene or mesitylene) produced a moderate enhancement of the solubility of I2. This fact was explained simply using an equation of state for mixtures and Lennard-Jones potentials, without any assumption of complex formation. Nevertheless, the concentration of donor-acceptor pairs has been calculated using the charge-transfer band in the ultraviolet region of the spectrum. A decrease in the equilibrium concentrations quotient Kc was observed with increasing solvent density. The same behaviour was observed when Kc was calculated with an alternative method. No evidence of the existence of critical clustering have been observed.

"Interacciones neuro-inmuno-endócrinas en el testículo: rol de la melatonina" (2014). Rossi, Soledad Paola. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La melatonina, hormona secretada por la glándula pineal, modula los ritmos biológicos diarios y los ciclos de sueño/vigilia. A través de su acción regulatoria sobre la producción y secreción de hormonas hipotalámicas e hipofisarias, participa también en la modulación de la actividad sexual en especies con ciclos reproductivos anuales controlados por el fotoperíodo. En este Trabajo de Tesis Doctoral se investigaron dos mecanismos de acción diferenciales de la melatonina en el testículo: su rol como hormona y su rol como agente anti/pro oxidante. Los estudios realizados permitieron establecer: a) las señales intracelulares asociadas al rol inhibitorio ejercido por el sistema melatonina/CRH sobre la regulación de la esteroidogénesis en células de Leydig del hámster Dorado, b) la concentración testicular de melatonina y la expresión de los principales componentes de la cascada de señalización del sistema melatonina/CRH en el testículo de pacientes que padecen infertilidad idiopática, y c) la acción regulatoria ejercida por melatonina sobre la proliferación, estado oxidativo y capacidad secretoria en macrófagos y mastocitos testiculares. La melatonina desempeñaría un rol clave en la modulación de la esteroidogénesis testicular en el hámster. En el testículo humano patológico, ejercería además acciones regulatorias sobre la población local de macrófagos y mastocitos.

Abstract:
Melatonin is a hormone secreted by the pineal gland that mediates the physiological regulation of both daily rhythms and sleeping/waking cycles. In seasonal breeders, this hormone also participates in the modulation of annual reproductive activity through its action on the hypothalamic-pituitary axis. In this Doctoral Thesis two differential mechanisms of action of melatonin in the testis were studied: its role as a hormone and its role as an anti/pro-oxidant agent. Studies performed in this Thesis allowed us to establish: a) the intracellular events triggered by melatonin/CRH that lead to a down-regulation of the steroidogenic process in Syrian hamster Leydig cells, b) the testicular melatonin concentration and the expression of the main components of the signaling cascade linked to the melatonin/CRH system in testicular biopsies of men suffering from idiopathic infertility, c) the effects of melatonin on proliferation, oxidative state and secretory capability in testicular macrophages and mast cells. Thus, melatonin would play a key role in the regulation of testicular steroidogenesis in the hamster. In the pathological human testis, melatonin would also participate in the modulation of the local macrophage and mast cell populations.

"Interacciones planta-polinizador desde la perspectiva de los polinizadores: diversidad floral, reproducción de abejas solitarias y su especialización" (2011). Dorado, Jimena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La mayoría de los estudios planta-polinizador se centran en las plantas; en esta tesis fueron estudiadas desde la perspectiva de los polinizadores. Primero se evaluó la relación diversidadestabilidad para la producción floral como recurso para los polinizadores a lo largo de una temporada de floración. Los resultados mostraron una relación positiva que permite evaluar la generalidad de esta relación. Además, se evaluó el efecto de medidas ecológicas simples y comúnmente utilizadas, como la diversidad y abundancia floral, sobre el éxito reproductivo de los polinizadores, obteniéndose una respuesta especie específica. Existen dos mecanismos que explican la ampliación del nicho poblacional, pero solo uno de ellos ha sido evaluado proponiendose como el mecanismo general. Aquí, se evaluaron ambos mecanismos sobre varias especies de abeja con resultados diferentes a los reportados previamente, ya que ambos mecanismos operan. Por último, se evaluó cuán confiables son las inferencias sobre las especies raras en las redes planta-polinizador ya que podrían estar sesgadas por el tipo de muestreo utilizado para construirlas. Este estudio demostró que el sesgo existe y que aumenta con la rareza de las especies. Esta tesis permitió avanzar en el conocimiento de las interacciones planta-polinizador, haciendo desarrollos conceptuales en diferentes áreas de la ecología general.

Abstract:
Most of plant-pollinator interaction studies are centered in plants; in this thesis they were studied from the pollinator's perspective. First, the diversity-stability relationship is evaluated for floral resources throughout a floral season. The results showed a positive relationship that allows to evaluate the generality of this relationship. Also, the effect of some simple and commonly used ecological parameters, like floral diversity and abundance, were evaluated over the pollinator's fitness with species specific results. There are two mechanisms that explain the population niche width, but only one of them had been evaluated before and proposed as the general one between different taxa. Here both mechanisms were tested in multiple bee species with results that differ from previous studies, because both mechanisms operate. Finally, the specialization estimates of rare species were evaluated for plant-pollinator visitation networks, because they could be influenced by a sampling bias. The study showed that the bias exists and that its importance increases with the rarity of the species. The present thesis generated new knowledge about plantpollinator interactions, and it also made conceptual developments in different areas of general ecology.

"Interacciones tróficas entre dos especies simpátricas de hormigas cortadoras y el ensamble de plantas en el Monte central" (2014). Nobua Behrmann, Beatriz E.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Aunque la disponibilidad de agua es considerada el principal factor que regula a las comunidades de plantas en los ecosistemas áridos, las interacciones con los herbívoros también pueden jugar un rol importante. En ecosistemas neotropicales, el gremio de los herbívoros se caracteriza por la ausencia de grandes ungulados y la presencia destacada de las hormigas cortadoras. Estas hormigas pueden interactuar de diversas maneras con la comunidad de plantas, generando cambios en su dinámica y composición. El objetivo de este trabajo fue analizar los efectos recíprocos entre las plantas y las hormigas cortadoras en el Monte central, y en particular las posibles consecuencias de la acción de las hormigas sobre la estructura y la dinámica de las comunidades de plantas. Para ello se estudiaron diferentes aspectos de la ecología trófica de Acromyrmex lobicornis y Acromyrmex striatus. Ambas especies forrajean activamente desde la primavera hasta el otoño, pero A. lobicornis es mayoritariamente nocturna y A. striatus es exclusivamente diurna. En general, A. lobicornis forrajea a temperaturas menores que A. striatus sin superponerse en sus temperaturas de forrajeo óptimo, lo cual podría deberse a que las especies tienen distintos rangos de tolerancia a la temperatura o a que presentan cierto grado de evitación. Ambas muestran una dieta generalista y oportunista, cosechando un alto porcentaje de las especies de plantas disponibles en su entorno. La composición de su dieta y su grado de selectividad depende principalmente de las variaciones estacionales e interanuales en la disponibilidad de los recursos. A nivel de colonia, A. lobicornis cosecha mucho más material vegetal que A. striatus, aunque esta diferencia no se observa a nivel poblacional ya que las colonias de A. striatus son mucho más abundantes. Cada especie llega a cosechar 70–72 Kg/ha·año, o, entre ambas, el ~20% de la productividad primaria en el área de estudio. Estas hormigas también cosechan una gran cantidad de frutos y pueden actuar como dispersoras de semillas. En el caso del arbusto Condalia microphylla, no solo depositan las semillas lejos de la planta madre y en micrositios favorables sino que, además, estas semillas dispersadas tienen mayor capacidad de germinación que las que no fueron manipuladas por las hormigas. Este estudio muestra que en estos ecosistemas desérticos las interacciones entre las hormigas cortadoras y las plantas son frecuentes e intensas, y pueden jugar un rol importante en la dinámica de las comunidades de plantas.

Abstract:
Though water availability is considered the main factor regulating desert plant communities, interactions with herbivores may also play an important role in arid ecosystems. Herbivore’s guild in the Neotropics is characterized by the absence of big ungulates, and the presence of leafcutter ants. These ants interact in diverse ways with the plant community, generating changes in its dynamics and composition. The goal of this work was to analyze the reciprocal effects among plants and leaf-cutter ants in the central portion of the Monte desert, and particularly the possible consequences of ants’ activity on the structure and dynamics of desert plant communities. To do so, I studied different aspects of Acromyrmex lobicornis and Acromyrmex striatus’ trophic ecology. Both ant species actively forage from spring to autumn, but A. lobicornis is mostly noctunal, while A. striatus is exclusively diurnal. In general, A. lobicornis forages at lower temperatures than A. striatus, and doesn’t overlap in its optimal foraging temperatures, which might relate to differences in their thermal tolerance ranges or certain degree of avoidance to each other. Both species show a generalist and opportunist diet and harvest a high percentage of the available plants. Diet composition and degree of selectivity mostly depends on seasonal and inter-annual variations of resource availability. At the colony level, A. lobicornis harvests much more vegetation than A. striatus, though this difference can’t be found at the population level because A. striatus colonies are more abundant. Each species can harvest 70–72 Kg/ha·year, or, among both of them, ~20% of primary productivity in the study area. These ants also harvest a large amount of fruits and can act as seed dispersers. In the case of the shrub Condalia microphylla, they not only move the seeds far away from the parental plant and towards favourable microsites, but also they cause the dispersed seeds to germinate more often and faster than the seeds that weren’t manipulated by the ants. This study shows that in desert ecosystem interactions between leaf-cutter ants and plants are frequent and intense, and can play an important role in the dynamics of desert plant communities.

"Interacción Río-Valle aluvial: intercambio de nutrientes y contaminantes" (1997). Villar, Carlos Alberto. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se estudió la relación río-valle aluvial en los últimos 500 km del río Paraná y en la margen derecha del Río de la Plata y se evaluaron los cambios observados en los parámetros fisicos y químicos del agua y en el contenido de metales en agua, sólidos suspendidos, sedimentos de fondo, bivalvos y macrófitas. Se evaluó en ambos sistemas la toxicidad aguda del Zn, un metal con elevados registros en el área, en Cnesterodon decemmaculatus, un pez de amplia distribución geográfica. Se relacionaron los cambios observados en el agua del Bajo Paraná con las principales características fisicas y químicas del valle aluvial con la variación del agua de marea al ingresar y egresar en un juncal costero y con los resultados de ensayos en los cuales clausuras en la planicie aluvial fueron llenadas con agua del río y los cambios en el contenido de nutrientes registrados en función del tiempo. La variación estacional de la biomasa aérea de macrófitas fue evaluada en cuatro períodos de crecimiento en el Delta del Paraná, y en dos períodos en un juncal del Río de la Plata. Se estimó la tasa de acreción del valle aluvial mediante la datación de un “core” de sedimentos con la técnica de 137Cs. Los sólidos suspendidos disminuyeron a lo largo del Bajo Paraná, consistentes con la tasa de acreción estimada en el valle aluvial (1 cm añoˉ¹). El aumento de PRS a lo largo del río resultaría del intercambio con el valle aluvial de agua enriquecida en este elemento, consistente con el incremento de PRS en el agua de salida del juncal costero en cada ciclo de marea. La elevada concentración de PRS en el valle aluvial se debe a la liberación desde los sólidos suspendidos del P asociado al Ca y al Fe luego de su sedimentación, en respuesta a la acidez y anoxia del ambiente. A pesar del evidente impacto antrópico, el contenido de NO3ˉ no aumentó aguas abajo, consistente con las bajas concentraciones de NO3ˉ observadas en el valle aluvial, su rápida desaparición en los experimentos de clausura y su disminución en el agua de salida del juncal en cada ciclo de marea, sugiriendo importantes pérdidas por denitrificación. La baja relación N/P del tejido vegetal sugiere que su crecimiento estaría limitado por la disponibilidad de N. Los humedales funcionan como sumideros de C, N y P. Los resultados sugieren que la tasa de acreción actual contrarrestaría el aumento en el nivel hidrométrico registrado en las últimas décadas, y que la combinación de la retención de sólidos suspendidos y de la elevada producción primaria en el valle aluvial mantendrían las condiciones presentes si el nivel de agua continúa aumentando como en el pasado reciente. El contenido de metales en el agua en el área registró importantes variaciones temporales y espaciales, siendo mayores los valores en el Río de la Plata que en el Paraná. En el Bajo Paraná parte de la variación temporal se relacionaría con el ingreso de contaminantes desde aguas arriba del sector estudiado. En el estuario los registros más elevados ocurrieron cerca de las fuentes de descarga. Una proporción importante de los metales sería transportada en la fijacción particulada. El contenido de metales en los sedimentos de fondo se relacionó tanto con la distancia a las fuentes contaminantes como con su textura. El contenido de metales en S. californicus no se correlacionó con el contenido en sedimentos ni en agua. Los metales se acumularon en los tallos senescentes y en las inflorescencias, aun luego de liberadas las semillas, resultando en un mecanismo de detoxificación. En el estuario, debido a que los mayores valores de nutrientes coincidieron con los de metales, la vegetación presentó un mayor crecimiento en estos sitios. El valle aluvial funcionaría como un sumidero de metales al retener los sólidos suspendidos con su carga de metales adsorbidos, y mantener los metales en los sedimentos (ácidos y reductores) como compuestos asociados a sulfuros. La bioacumulación de Cd, Cu, Zn y Fe en bivalvos fue significativamente superior en el río Paraná que en el Río de la Plata, en forma inversa a la concentración de los mismos en el ambiente, relacionado con la biodisponibilidad de los metales en cada uno de los sistemas. Los valores fueron mayores en los sitios cercanos a las fuentes contaminantes. El río Paraná se presenta más vulnerable al efecto tóxico de los metales que la zona costera del estuario. En forma complementaria a estas observaciones se evaluó la toxicidad del Zn en el Bajo Paraná y en el Río de la Plata mediante la realización de bioensayos de toxicidad aguda en C. decemmaculatus. Se realizaron ensayos con agua reconstituida de composición iónica similar a los valores observados en la cuenca. Se discutió el efecto de la alcalinidad sobre la toxicidad del Zn. La concentración letal 50 a 24 horas (24-h CL50) se correlacionó positivamente con la conductividad y con las concentraciones de Ca²+, Mg²+ y HCO3ˉ, siendo mayor en el estuario (61.2 mg Lˉ¹) que en el río (35.3 mg Lˉ¹). Un ensayo con agua sintética de alcalinidad similar a la del estuario mostró una disminución simultánea de HC03ˉ y de Zn disuelto, mientras que la especiación del Zn, estudiada mediante un programa de computación, sugirió que gran parte del mismo precipitaría como carbonatos de Zn. La toxicidad del Zn fue superior en el estuario que en el agua sintética de igual composición iónica, sugiriendo el efecto sinérgico de otros contaminantes presentes en el agua natural y ausentes en la reconstituida.

Abstract:
The river-floodlplain interactions were studied in the last 500 km of the Paraná river and in the right margin of the Río de la Plata estuary, and observed changes of the main physico chemical parameters of water, and of the heavy metal content of water, suspended matter, bottom sediments, bivalves and macrophytes were evaluated. In order to compare metal toxicity between both environments, toxicity assays were performed to evaluate the acute toxicity of Zn, a common contaminant in both sites, on Cnesterodon decemmaculatus, a widely distributed fish. Observed chemical changes in the Lower Paraná were related with the main characteristics of the floodplain, with variations in incoming and outcoming tidal water of a coastal marsh and with results of experiments in which marsh enclosures were filled with river water and changes in nutrient concentrations followed as a function of time. Seasonal variation of macrophyte biomass was assessed in 4 growing periods at the Paraná Delta, and in 2 periods at a Río de la Plata tidal marsh. Accretion rate was estimated in the floodplain marsh by means of 137Cs datation of a sediment core. A downstream decrease in suspended matter along the Lower Paraná stretch was observed, consistent with the estimated marsh accretion rate (l cm yˉ¹). A downstream increase in SRP could be due to water exchange with the floodplain valley, with higher concentrations, consistent with the increment in SRP in the outcoming water at the tidal marsh. High marsh SRP concentrations were derived from river suspended matter release of Ca and Fe bound P upon sedimentation, in response to the acidic and reductive marsh environment. Lack of significant downstream increase in N03ˉ concentration in spite of large cultural inputs was consistent with low N03ˉ concentrations observed in the marsh waters year round, the fast N03ˉ disappearance in the enclosures experiments, and the NO; impoverishment in the outcoming water of the tidal marsh, suggesting large denitrification losses. Low N/P ratio in plant tissue suggests N limitation of macrophyte growth. It is suggested that wetlands represent sinks of C, N and P. Present results suggest that actual accretion rates counterbalance the water level increments recorded in the last decades, and that the combination of riverine sediment support and marsh primary production could sustain present condition if water level continue to rise at present speed. Metal content in water in the study area showed large temporal and spatial variations, with higher figures at the Río de la Plata than at the Paraná River. The Lower Paraná showed temporal variations possibly related with sources located in the upper basin. At the estuary, higher figures were observed near discharge points. An important fraction of the metal load is transported in the particulate fraction. Metal content in bottom sediments was related with distance to contaminant sources and with sediment texture. S. californicus metal content was not correlated with sediment or water content. Metals accumulated in dying stems and inflorescences, even after seeds were completely released, resulting in a detoxifying mechanism. At the estuary coast, as higher nutrient concentrations were coincident with higher metal figures, macrophytes showed higher growth at this sites. Floodplain marshes would function as a sink of metals due to their high suspended matter retention capacity, and to their acid and reductive environment that would maintain metals in sediments as sulfur compounds. Bioaccumulation of Cd, Cu, Zn and Fe in bivalves was higher at the Paraná than at the Río de la Plata right margin, in contrast with metal concentration in the environment, related with the availability of metals in each area. Higher figures were observed close to contaminant sources. The Paraná river appears more vulnerable to metal toxicity than the Río de la Plata coastal areas. As a complement to this observations, Zn toxicity at both places was assessed by means of acute toxicity tests with C. decemmaculatus. Assays with reconstituted water of similar characteristics of the two environments were also performed. The effect of alkalinity upon Zn toxicity was discussed. The lethal concentration 50 at 24 hours (24-hs LC50) was correlated with the concentration of Ca²+, Mg²+ and HCO3ˉ, being higher at the estuary (61.2 mg Lˉ¹) than at the river (35.3 mg Lˉ¹). An assay with synthetic water similar to the estuary water showed a simultaneous decrease of HCO3ˉ and dissolved Zn, while Zn speciation, assessed with a computer program, suggested that Zn would precipitate as Zn carbonates. Zn toxicity was higher with estuary water than with synthetic water of similar ionic composition, suggesting the synergistic effect of other pollutants present in the natural water but not in the reconstituted one.

"Interacción Schistosoma mansoni y sus hospederos : mecanismos de resistencia en poblaciones argentinas de biomphalarias frente a S. mansoni y dinámica de la transmisión de ésta parasitosis por el hospedero mamífero" (2003). Grassi, Lubiana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La esquistosomosis es una enfermedad causada por parásitos del género Schistosoma, transmitidos por caracoles de agua dulce del género Biomphalaria (hospedero intermediario) y que infectan al mamífero entre ellos al hombre (hospedero definitivo). En el presente trabajo de Tesis se ha estudiado la interacción parásito-huésped, especialmente con el hospedero intermediario y, en relación al hospedero mamífero, la calidad del huevo/miracidio en función de su capacidad para infectar al caracol. Se estudió el sistema de defensa de poblaciones argentinas de biomphalarias descriptas como resistentes a S. mansoni (B. straminea y B.orbignyi) en comparación con B. glabrata (susceptible). Se abarcaron aspectos histológicos e inmunológicos para estudiar la respuesta celular y humoral del hospedero tendientes a determinar posibles mecanismos involucrados en la resistencia a S. mansoni. Por otro lado, se evaluó la dinámica en la tasa de eclosión de huevos recuperados de distintos tejidos del hospedero mamífero, así como la capacidad infectiva de los miracidíos obtenidos de estos huevos durante 12 meses de infección murina por S. mansoni. Los resultados de esta investigación evidenciaron que B. straminea posee un sistema de defensa muy potente que en menos de 24 hs es capaz de reconocer y destruir a los distintos estadios larvales de S. mansoni. No se logró romper esta resistencia, aún cuando se usaron elevadas dosis de miracidíos o exposiciones sucesivas al parásito. B. orbignyi fue descartado como especie refractaria a la infección al igual que como especie resistente. El parásito penetró y evolucionó hasta esporoquiste. Este hecho no pudo asociarse a un sistema defensivo potente, dado que aún pasados 30-60 días de la exposición al parásito se encontraron esporoquistes viables en distintos grados de desarrollo en sus tejidos, sin respuesta celular asociada a ellos pero sin otros progresos a partir de este estadio. En periodos más prolongados que 60 días de infección no se pudo evaluar la evolución de S. mansoni puesto que a estos tiempos el caracol infectado presentó un importante deterioro de la arquitectura tisular, que lo llevó a la muerte. Cuando se coinfectó B. orbignyi con otro trematode, S. mansoni evolucionó hasta la emisión de cercarias. Sin embargo, estas cercarias fueron menos exitosas para infectar al hospedero mamífero. La falta de respuesta celular aún en la especie resistente B. straminea podría estar compensada con una adecuada defensa humoral mediada por proteinas tipo citoquinas. En este sentido B. straminea presentó niveles basales altos de TNF-α e IL-6 con respecto a la especie susceptible B. glabrata y, a pesar que la exposición al parásito modificó estos niveles, los mismos se mantuvieron siempre por encima de los presentados por B. glabrata. Se podría especular que se requiere un umbral de estas citoquinas para mantener la resistencia frente a la infección, y que, los caracoles susceptibles no tendrían capacidad para producir o mantener esos niveles de citoquinas. Por el contrario en B. orbignyi los valores de estas citoquinas estuvieron siempre por debajo de las otras especies independientemente de la exposición al parásito. La falta de respuesta celular antes mencionada y el bajo nivel de citoquinas registrado en B. orbignyi, así como la mala calidad de las cercarias de S. mansoni emitidas al coinfectarlo con otros trematodes nos inducen a proponer a esta especie como un hospedero inadecuado. El patrón de proteinas de hemolinfa y tejido se evaluó con el propósito de determinar aquellas que pudieran estar expresadas diferencialmente pre y post exposición al parásito. En el caso de hemolinfa se registraron modificaciones en la expresión de 2 proteínas (76 y 79 kD). Las mismas se expresaron en B. orbignyi y desaparecieron en B. straminea luego de la exposición al parásito. En tejidos de B. orbignyi expuestos a S. mansoni también se expresaron 2 proteínas de 66 y 72 kD, mientras que en B. straminea una banda de 224 kD desapareció post-exposición. Ninguna de estas proteinas fue detectada en B. glabrata. Si bien estos son resultados preliminares seria interesante caracterizarlas y estudiar si están asociadas a infección y/o resistencia en estas especies. Dado que la efectividad de la transmisión de esta parasitosis está ligada a la calidad de los estadios parasitados que se liberan al medio para infectar al molusco, se estudió la potencialidad de transmisión de S. mansoni a lo largo de 12 meses de infección del hospedero definitivo. Se observó que tanto el éxito de eclosión de los huevos como la infectividad de los miracidios para B. glabrata, especie susceptible, disminuyeron con el tiempo de infección del mamífero. El conjunto de estos resultados indican que ante la eventual introducción en una región libre de esquistosomosis como es la Argentina, de mamíferos parasitados provenientes de áreas endémicas, la probabilidad de establecimiento de un foco sería dependiente, por lo menos, del tiempo de infección del hospedero vertebrado así como de la susceptibilidad de los caracoles y las modificaciones que los mismos puedan sufrir por coinfecciones con otros trematodes.

Abstract:
Schistosomosis is a disease caused by parasites of the gender Schistosoma, transmitted by freshwater snails of the gender Biomphalaria (Intermediate host) and capable to infect the human (Definitive host). Herein we studied the parasite-hosts interactions with special reference to the intermediate host and, when referred to the mammalian host, with the quality of egg/miracidia to infect the snail. We have studied the defense system to S. mansoni in Argentinean populations of biomphalarias (B. straminea and B.orbignyi) in comparison with B. glabrata (susceptible control). Histological and immunological aspects were considered to study the host cellular and humoral responses in order to determine possible mechanisms involved in resistance to S. mansoni. On the other hand, during 12 months of the murine infection the dynamics of the hatching rate of S. mansoni eggs obtained from different host tissues were evaluated, as well as the miracidia capacity to infect their intermediate hosts. The results of this investigation showed that B. straminea possess an efficient defense system which in less than 24 hs recognized and destroyed the S. mansoni larval stages. Resistance was equally efficient even when high doses of miracidia were used or successive exposition to the parasite were performed. B. orbignyi, was discarded as a refractory especie as well as a resistant one, because infection progresses up to sporocyst stage. This fact could not be associated to a potent defense system, since past 30-60 days post-exposition viable esporocyts in different development stages, without cellular response were observed. Thereafter, further progress of S. mansoni was impossible to evaluate because the huge deterioration of the snail’s architecture tissue after 60 days post-exposition. On the other hand, coinfection with another trematode allowed S. mansoni to progress up to cercarial emission. However, these cercaria were less effective to infect the definitive host. The lack of cellular response could be compensated by humoral defense mediated by hemolymph proteins. In this sense, B. straminea presented high basal levels of TNF-α-like and IL-6-like cytokines compared with the susceptible species. Despite that parasite increased or decreased cytokine levels, values always remained over those of B. glabrata. It might be speculated that a certain cytokines threshold level would be required to excert resistance. Therefore, it is possible that as a result of parasite-mediated interference, snails produce cytokine levels under the threshold and become susceptible to the infection. In the B. orbignyi cases, cytokines levels were always below the values registered for the other species, independently of the parasite exposuse. However, S. mansoni failed to progress in these snails. The lack of cellular reponse together with the extremely low level of cytokines as well the poor quality of the cercaria emited by coinfected snails, allowed us to classify B. orbignyi as an inadequate host. The protein patterns of hemolymph and tissues were evaluated in order to determine those that could be differentially expressed before and after parasite exposition. Modifications in the expression of two proteins of 76 and 79 kD were registered in hemolymph. Both were expressed in B. orbignyi and vanished in B. straminea, after-parasite exposition. In tissues of B. orbignyi other two proteins of 66 and 72 kD were expressed while other of 224 kD vanished in B. straminea afterexposition. Neither of these proteins were detected in B. glabrata. Even when these are preliminary results it will be interesting to characterize these proteins and to study whether they are or not associated to infection and/or resistance in these snail species. Since the effectiveness of the transmission of this parasitosis is bound to the quality of egg/miracidia that are liberated to infect the molluscs, the potentiality of S. mansoni transmission by the definitive host was studied along 12 months of infection. It was observed through this period that the capacity of the eggs to hatch and the miracidia to infect B. glabrata diminished with the time of infection of the definitive host. Summing up, the results of this Thesis indicate that the probability of establishment of a focus of schistosomiasis in a region free of this parasitosis like is Argentina will be dependent, at least, on the susceptibility of the snails, the modifications that coinfections can introduce in the intermediate host and the time evolved since the infection of the vertebrate host .

"Interacción a nivel de comunidad entre la heterogeneidad de la vegetación y el pastoreo ovino en la estepa magallánica" (1997). Posse Beaulieu, Gabriela. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se analizaron las relaciones entre la heterogeneidad del pastizal de Festuca gracillima y el pastoreo ovino. En un stand del coironal con mata negra se distinguieron en el campo tres fisonomías: matriz de coirón, manchones de pastos cortos y manchones de mata negra (Chiliotrichum diffusum). Se aplicaron tres tipos de aproximaciones, analizándose: a) la estructura y composición florística, en relación al suelo, al microclima y al uso ovino; b) el flujo de energía, a través de la producción de biomasa y c) la composición química del forraje. Para el análisis descriptivo de la vegetación y el ambiente se realizaron censos florísticos de abundancia-cobertura, tomado al mismo tiempo muestras de suelo. Se realizaron otros muestreos adicionales del ambiente, que permitieron caracterizar las fisonomías. Con métodos multivariados se detectó que las fisonomías se encontraban fuertemente correlacionadas con la impedancia del suelo, variable atribuible al pisoteo animal. Los manchones de pastos cortos fueron los que tuvieron valores más altos y los de mata negra, los valores más bajos. La densidad de heces de ovinos en el suelo también fue mayor en los manchones de pastos cortos. La composición florística de cada fisonomía resultó distinta. Los manchones de pastos cortos se caracterizaron por poseer especies con hábito de crecimiento postrado, especies rizomatosas y algunas especies exóticas, todas características que son compatibles con la tolerancia o escape al pastoreo. En especial la presencia y abundancia de Poa pratensis en estos manchones, denota cierta eutrofización del medio. La estructura también es diferente entre fisonomías, ya que la vegetación en los manchones de pastos cortos se concentró dentro de los primeros 5 cm. y la altura media de la matriz de coirón fue de 30 cm. La productividad de la matriz de coirón fue entre seis y siete veces mayor en la matriz de coirón que en los manchones de pastos cortos. La concentración de nitrógeno y fósforo en las fracciones verdes de las monocotiledóneas fue mayor en los manchones de pastos cortos. En estos manchones, los ovinos pastorearon en todas las estaciones mientras que en la matriz de coirón concentraron el consumo entre el otoño y el invierno. La tasa de crecimiento relativo de la vegetación fue mayor en los manchones de pastos cortos que en la matriz de coirón en los periodos de inviemo-primavera y primavera-verano. En el resto del año no hubo diferencias. En los manchones de pastos cortos los ovinos consumieron el 90% de la producción anual y en la matriz de coirón lo consumido fue el 60%. La materia seca de la matriz de coirón tuvo menores concentraciones de fósforo y nitrógeno que la de los manchones de pastos cortos. Esto unido a las menores temperaturas en el suelo durante la mayor parte del año y a la mayor relación C/N en el suelo, sugiere una menor tasa de mineralización en el suelo de la matriz de coirón. Otras diferencias encontradas en el suelo fueron: mayor concentración de calcio y sodio, mayor capacidad de intercambio catiónico y menor pH en los manchones de pastos cortos, respecto del suelo de la matriz de coirón. Los resultados sugieren fuertemente que la heterogeneidad fisonómica y florística encontrada en las comunidades de coirón condiciona el comportamiento ovino y a su vez los ovinos contribuyen a mantener esa heterogeneidad. La mayor utilización de los manchones de pastos cortos tiene como consecuencias una mayor calidad nutritiva, una relación verde/seco más favorable, una tasa de crecimiento relativo más alta en esos manchones y un ciclado de nutrientes en el suelo más activo, lo cuál beneficia a los ovinos.

Abstract:
Structural and floristic heterogeneity of a Festuca gracillima grassland was analyzed in relation to sheep grazing. Three physiognomies were apparent in the field: a coirón (tussock) matrix, short grass patches and mata negra (Chiliotrichum diffusum) patches. This pattern was related with soil impedance, variable highly affected by animal trampling. The short grass patches had the highest values and the mata negra patches the lowest. I analyzed: a) structure and floristic composition related with soil, microclimate and sheep habits; b) the energy flow by the biomass production and c) forage nutrient concentration. Floristic composition of the three physiognomies was very different. The short grass patches were characterized by prostrate and rhizome habits and some exotic species. These attributes indicate grazing tolerance or escape. Specially, abundance of Poa pratensis in those patches indicated a eutrophic soil. Among physiognomies structural differences were great. Productivity of coirón matrix was between six and seven times larger than that of short grass patches. Nitrogen and phosphorous concentration in monocot green fractions were larger for the short grass vegetation. Sheep grazed that physiognomy all year round, but only between autumn and winter grazed in the coirón matrix. The relative growth rate was greater in the short grasses patches than in the coirón matrix between winter-spring and spring-summer. Consumption relative to productivity was 90% in the short grasses patches and 60% in the coirón matrix. Lower nutrient concentration in its litter, together with lower soil temperature throughout most part of the year and higher C/N relation in soil, suggest that the coirón matrix have a lower mineralization rate compared with patches of short grass. Other differences in the soil were: higher Ca++ y Na+ concentration, higher CIC and lower pH in the short grasses patches. Results strongly suggest that the physiognomic and floristic heterogeneity in the coirón grasslands condition sheep grazing and their grazing habits contribute to maintain that heterogeneity. The heavier utilization of the short grass patches resulted in a greater nutritional quality, a more favorable green/dry matter relation, a higher relative growth rate and a faster nutrient cycling, all of these are favorable conditions for sheep, although the low productivity of these patches restricts their importance in animal nutrition

"Interacción de TiO2 con Carboxilatos Acuosos" (2001). Weisz, Ariel Dan. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se reportan los resultados del estudio espectroscópico (ATR-FTIR) de la formación de complejos superficiales por químisorción de una serie de ligandos orgánicos (ácidos alifáticos dícarboxílicos, ácido salicílico y carboxipiridinas) sobre TiOz. Los espectros obtenidos a diferentes concentraciones de complejante y diferentes valores de pH se utilizaron para derivar el número mínimo de especies superficiales independientes requeridas para interpretar los datos, sus espectros FTIR, y sus constantes de estabilidad de tipo Langmuir. La información espectroscópica permitió la caracterización estructural de los complejos superficiales, y las constantes de estabilidad de una serie de complejos relacionados se usó para analizar las tendencias de estabilidad. Se muestra que la complejación superficial puede describirse como la quimisorción disociativa electroneutra del ácido neutro, involucrando frecuentemente la formación de quelatos mononucleares con sitios superficiales. Se encuentra una relación lineal de energía libre (LGER) entre la estabilidad de los complejos superficiales y la primer constante de acidez de los ligandos con una pendiente de 1.7. El tipo de estudio presentado en esta tesis será útil en la comprensión del comportamiento de mezclas de contaminantes en el curso de su tratamiento mediante catálisis heterogénea usando dióxido de titanio.

Abstract:
In this work we report the results of a spectroscopic (FTIR-ATR) study of the formation of surface complexes by chemisorption of a series of organic ligands (dicarboxylic aliphatic acids, salicylic acid and carboxypyridines) onto TiO2. The spectra obtained at different complexant concentrations and pH values were used to derive the minimum number of independent surface complexes required to interpret the data, their FTIR spectra, and their Langmuir-type stability constants. The spectroscopic information allows the structural characterization of the surface complexes, and the stability constants give a data set on a series of related complexes that was used to analyze the stability trends. It is shown that surface complexation can be described as the dissociative electroneutral chemisorption of the neutral acid, frequently involving the formation of mononuclear surface chelates. A linear Gibbs energy relationship (LGER) between the stability of the surface complexes and the first acidity constant of the ligand is found with slope 1.7. The type of study presented here should be useful in understanding the behavior of pollutant mixtures in the course of their treatment by heterogeneous photocatalysis using titanium dioxide.

"Interacción de la inmunoglobulinas G de pacientes con Esclerosis Lateral Amiotrófica con la placa neuromuscular y su relación con los canales de calcio de tipo P/Q" (2012-03-27). González, Laura Elisabeth. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa de motoneuronas. Se encuentra mayormente asociada a una forma esporádica de etiología desconocida. Numerosas evidencias favorecen a la auto-inmunidad como uno de los potenciales contribuyentes a esta patología. Para estudiar los posibles antígenos que interactúan con las IgGs de pacientes con ELA esporádica (IgGs-ELA), evaluamos su inmuno-reactividad hacia la placa neuromuscular (PNM), comparando animales normales con aquellos carentes de la subunidad formadora del poro del canal de calcio (Ca2+) de tipo P/Q (CaV2.1). Las IgGs-ELA mostraron una importante reactividad hacia la PNM de ratones CaV2.1+/+ e incrementaron la frecuencia de potenciales de placa miniatura (MEPPs). Ambos parámetros disminuyeron significativamente al evaluar tejido de animales CaV2.1-/-. Ensayos de inmuno-precipitación y western blot indican que el blanco de los anticuerpos no sería el canal mismo sino una proteína asociada. Estudios de proteómica sugieren a la proteína BASP-1 (proteína ácida soluble de cerebro-1) como un candidato a evaluar en forma más detallada en fututos ensayos. Nuestros resultados adicionan evidencias a favor de la auto-inmunidad como uno de los posibles mecanismos contribuyentes a la patología de ELA. También sugieren que los auto-anticuerpos en el suero de una serie de pacientes interactúan con proteínas cuya presencia en la PNM disminuye cuando los canales de Ca2+ de tipo P/Q se encuentran ausentes.

Abstract:
Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) is a motoneuron neurodegenerative disease. It is primarily associated with a sporadic form of unknown etiology. Several pieces of evidence favor auto-immunity as a potential contributor to this pathology. To gain understanding concerning possible antigens interacting with IgGs from sporadic ALS patients (ALS-IgGs), we studied immuno-reactivity against the neuromuscular junction (NMJ) of mice with and without the pore-forming subunit of the P/Q-type calcium (Ca2+) channel (CaV2.1). ALS-IgGs showed a strong reactivity against NMJs of WT diaphragms and increased the miniature end-plate potential (MEPP) frequency. Both parameters were significantly diminished when evaluating tissue from CaV2.1-/- animals. Immuno-precipitation and western blot assays indicate that antibody target would not be the channel itself but an associated protein. Proteomic studies suggest BASP-1 (brain acid soluble protein-1) as a candidate to evaluate in more detail in future assays. Our findings add further evidence supporting auto-immunity as one of the possible mechanisms contributing to ALS pathology. They also suggest that serum auto-antibodies in a subset of ALS patients would interact with NMJ proteins downregulated when P/Q-type Ca2+ channels are absent.

"Interacción de la melatonina con radicales libres" (2003). Turjanski, Adrián G.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo de este trabajo de tesis fue el estudio a nivel molecular de la interacción de la melatonina (N-acetil-S-metoxitriptamina) con dos radicales libres de relevancia biológica, el radical oxhidrilo (OH·) y el óxido nítrico (NO). Para el desarrollo del presente trabajo se analizaron estas interacciones químicas desde un enfoque teórico, mediante técnicas de simulación computacional, desde un enfoque experimental, a través del estudio de las mismas en condiciones aisladas y controladas, y a través de la evaluación de los alcances fisiológicos de las reacciones propuestas. Para evaluar las interacciones con los diferentes blancos se analizó, en primer término, la superficie de energía potencial de la melatonina mediante técnicas de dinámica molécular basadas en campos de fuerzas clásicos y métodos semiempíricos. Se prestó especial atención a los aspectos relacionados con su libertad conformacional en vacío y en solución acuosa. Asimismo, se analizó la dependencia de las propiedades moleculares con la conformación. La reacción con el radical oxhidrilo se estudió mediante técnicas de estructura electrónica, evaluando los posibles mecanismos de reacción y realizando una exhaustiva caracterización de los intermediarios. El estudio de la interacción con NO se puede dividir en dos partes: i) la identificación y caracterización de los productos de reacción y la elucidación de los mecanismos operantes en diversos medios; y ii) el estudio del efecto de la melatonina sobre la biosíntesis de NO en la retina de hámster. Finalmente, mediante el uso de técnicas de resonancia magnética nuclear y de dinámica molecular, se realizó un estudio detallado de la interacción entre la melatonina y la calmodulina, una proteína con probado efecto estimulatorio en la biosíntesis del NO.

Abstract:
The goal of this thesis was the study at a molecular level of the interactions of melatonin (N-Acetyl-5-metoxytriptamine) with two free radicals of biological relevance, hydroxyl (OH·) radical and nitric oxide (NO). The evaluation of the different interactions has been performed by a theoretical approach using molecular modeling tools; through the study of these reactions in isolated and controlled conditions, and finally by the evaluation of their physiological relevance. In order to evaluate the interactions with these different targets, the potential energy surface of melatonin has been analyzed by classical molecular dynamics and semiempirical electronic structure methodologies. Special attention has been paid to the conformational behavior in vacuum and aqueous solution. Moreover, the influence of conformation on several properties has been studied. The reaction with OH· has been analyzed with electronic structure methods. Feasible reaction mechanisms have been evaluated along with a thorough characterization of the intermediates. The research on the interaction with NO consisted of: i) the identification and characterization of the products, and the elucidation of the mechanisms operative in different environments ii) by the analysis of the effect of melatonin on NO biosynthesis in the hamster retina. Finally, by means of nuclear magnetic resonance and molecular dynamics techniques, a detailed study of the interaction of melatonin with calmodulin, a stimulatory protein of NO biosynthesis has been carried out.

"Interacción de la proteína quinasa dependiente de cAMP con sus genes blanco en Saccharomyces cerevisiae" (2014-03-20). Baccarini, Leticia Cecilia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La regulación de la expresión génica mediada por proteínas quinasas es esencial para la correcta adaptación celular frente a un estímulo extracelular. En S. cerevisiae, la PKA está formada por tres subunidades catalíticas: Tpk1, Tpk2 y Tpk3 y una subunidad regulatoria: Bcy1. Existen antecedentes que indican la asociación de Tpk1 y Tpk2 a la cromatina durante el crecimiento en glucosa, glicerol y estrés oxidativo (Pokholok et al, 2006). El rol de la vía cAMP/PKA sobre la expresión génica en glucosa ha sido ampliamente estudiado (Livas et al, 2011). Por otro lado, se ha descripto, que la activación de la PKA limita la expresión de genes de respuesta a estrés (Leadsham et al, 2010; Ferretti et al, 2012). Durante el desarrollo de esta tesis analizamos la unión de Bcy1, Tpk1 y Tpk2 a diferentes regiones génicas en respuesta a estrés osmótico y oxidativo. Describimos que tanto las subunidades catalíticas como la subunidad regulatoria de la PKA se encuentran asociadas tanto a regiones transcriptas como a promotores de los genes blancos de manera estrés-dependiente. Además analizamos el requerimiento de la actividad quinasa y el papel de Bcy1 en la asociación de las Tpks a la cromatina. Versiones inactivas de Tpk1 y Tpk2 no se asociaron a la cromatina. La deleción de Bcy1 promueve una mayor asociación de Tpk1, mientras que anuló la asociación de Tpk2. Luego analizamos el posible rol de las Tpk en el remodelado de la cromatina en respuesta a estrés a través del análisis de la cinética de unión de factores remodeladores de la cromatina a las regiones donde encontramos asociadas a Tpk1 y Tpk2. Observamos unión transitoria a la cromatina de Arp8, Rsc1 y Snf2 seguido temporalmente por la asociación de las Tpk. Observamos también, la ocupación concomitante de Tpk2 y el factor de transcripción de unión al DNA Rap1. En conjunto los datos existentes y los resultados obtenidos en esta tesis sugieren que la PKA podría participar en la expresión génica mediante fosforilación in situ de los reguladores transcripcionales o de la cromatina. La distribución núcleo-citoplasmática permite regular la actividad diferencial de muchas proteínas quinasas. Hemos analizado la localización subcelular de las subunidades de PKA y su mecanismo de transporte durante estrés. Hemos observado que Tpk1-GFP y Tpk3-GFP acumulan en el núcleo post-estrés oxidativo y osmótico, sin embargo Tpk2- GFP y Bcy1-GFP no cambian su acumulación nuclear. El análisis cinético de la acumulación nuclear de Tpk1 mostró mayor velocidad en respuesta a estrés osmótico versus oxidativo. Hemos determinado que la acumulación nuclear de Tpk1, Tpk2, Tpk3 y Bcy1 es un mecanismo de transporte activo. Sorprendentemente, cada una de las subunidades de PKA es importada al núcleo por diferentes carioferinas. Por otra parte, las cepas defectivas en carioferinas las cuales impiden la acumulación nuclear específicamente de Tpk1 o Tpk2 no mostraron asociación a la cromatina las Tpks, lo que sugiere el requerimiento de acumulación nuclear de las subunidades catalíticas para la asociación a sus genes blancos.

Abstract:
Regulation of gene expression by intracellular stimulus-activated protein kinases is essential for cell adaptation to environmental changes. There are three PKA catalytic subunits in S. cerevisiae: Tpk1, Tpk2 and Tpk3 and one regulatory subunit: Bcy1. Previous data indicates that Tpk1 and Tpk2 were found associated to the chromatin during growth on glucose, glycerol and oxidative stress (Pokholok et al, 2006). Using ChIP-real time assay we analyzed the Bcy1, Tpk1 and Tpk2 association to 5 genes regions in response to osmotic and oxidative stresses. We had demonstrated that both catalytic and regulatory subunits of PKA were associated to transcribed regions and promoters of target genes in a stress dependent manner. Furthermore we analyze the requirement of kinase activity and the role of Bcy1 protein on Tpk chromatin association. Inactive versions of Tpk1 and Tpk2 do not associate to chromatin. Deletion of BCY1 promotes higher Tpk1 association, whereas it abolished Tpk2 association. We then analyze the possible role of Tpk on chromatin remodeling in response to stress conditions. We analyze the kinetics of binding chromatin remodelers in the regions bound by Tpk1 and Tpk2 in response to stress. During stress stimulus there is a transient binding to chromatin of Arp8, Rsc1 and Snf2 - chromatin remodelers followed temporarily by Tpk association. We also observe cooccupancy of Tpk2 and DNA-binding transcription factor Rap1. The role of cAMP / PKA on gene expression in glucose has been extensively studied (Livas et al, 2011). However PKA activation limits the expression of stress responsive genes (Leadsham et al, 2010; Ferretti et al, 2012). These results suggest that PKA could participate in gene expression by in situ phosphorylation of transcriptional or chromatin regulators. Actually it is known that a single protein kinase distributed dynamically between cytoplasm and nucleus, can regulate target genes expression by both nuclear and cytoplasmic signaling mechanisms. Thus, the nucleus-cytoplasmic kinases transport would be important to regulate differential activity in both compartments. Here we analyze stress subcellular localization of PKA subunits and their transport mechanism, using fluorescence microscopy. We observed that Tpk1 and Tpk3 accumulate in the nucleus post-oxidative and osmotic stress however Tpk2 and Bcy1 not change their nucleus-cytoplasmic distribution, staying preferentially nuclear. Our results over Tpk1 stress re-localization kinetics suggest that under osmotic stress is necessary its faster nuclear accumulation. We determined that Tpk1, Tpk2, Tpk3 and Bcy1 nuclear accumulation is ATP dependent suggesting an active transport mechanism. Surprisingly, we found that each PKA subunits is transported into the nucleus by different karyopherins. Moreover, karyopherin mutant strains which prevent nuclear accumulation of Tpk1 or Tpk2 prevented its association with chromatin, suggesting that nuclear accumulation of catalytic subunits to association to their targets genes is required.

"Interacción de metales pesados con diferentes matrices orgánicas" (2015-05-15). Grassi, Diego Alejandro. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo general de este trabajo es estudiar la forma de interacción entre tres matrices orgánicas diferentes y los metales pesados. Con este propósito, se diseñaron, sintetizaron y evaluaron tres nuevas matrices para ser utilizadas como agentes secuestrantes de metales pesados. Estos nuevos materiales son de naturaleza química diversa: polímeros, tensioactivos derivados de hidratos de carbono y biomasa muerta. Los tensioactivos presentados son derivados de alquil glucósidos, diseñados para obtener sustituyentes con capacidades quelantes en sus cabezas hidrofílicas. La obtención de estos compuestos se llevó a cabo mediante una síntesis en tres etapas. En una primer paso se produce la O-glicosidación de una unidad de glucosa con un alcohol graso. En una segunda etapa se realiza la conversión del grupo alcohol en C6 de la unidad de glucosa a ácido carboxílico. Finalmente en la última etapa se produce el acoplamiento de diferentes grupos funcionales en el carboxilo del ácido glucurónico buscando obtener la función quelante. Los ensayos para la remoción de metales pesados se llevaron a cabo empleando el método conocido como flotación. Las propiedades interfaciales de todos productos obtenidos son caracterizadas, así como también los equilibrios de formación de complejos para los productos más eficaces. La eficiencia de remoción es discutida en detalle en función de las propiedades estudiadas. El material polimérico utilizado es un polímero con sustituyentes tetrazólicos. Este producto es obtenido mediante una sencilla modificación química efectuada sobre fibras de un copolímero de acrilonitrilo que es un descarte industrial. La transformación consiste en una cilcoadición dipolar 1,3. El material así sintetizado demostró ser aplicable en la precipitación de metales pesados divalentes, presentando además la ventaja de ser reutilizable. Todos los materiales obtenidos, son caracterizados física, térmica y espectroscópicamente, con el objetivo de comprender la forma de interacción. La biomasa fue obtenida a partir del hongo macroscópico polyporus tenuiculus sin mayores tratamientos y fue utilizada como sorbente para metales pesados divalentes, en soluciones mono- y multi-sorbato. Se caracteriza la cinética, las isotermas de sorción y la dependencia de la eficiencia de remoción con los factores experimentales. El sorbente demuestra ser eficiente para remoción de metales pesados, presentando la ventaja se ser reutilizable. Se comparan las ventajas y desventajas en la utilización de las tras matrices estudiadas.

Abstract:
The overall objective of this work is to study the interaction between three different organic matrixes with heavy metals. For this purpose, three new matrixes for use as heavy metal sequestering agents were designed, synthesized and evaluated. These new materials are of different chemical nature: polymers, surfactants derived from carbohydrates, and dead biomass. The studied surfactants are derived from alkyl glucosides, designed with substituents having chelating capabilities in their hydrophilic heads. The preparation of these compounds is carried out by a three-step synthesis. In a first stage occurs the O-glycosylation of a glucose unit with a fatty alcohol. In a second stage the alcohol group in the C6 of the glucose unit is converted in carboxylic acid. Finally, in the last stage, different functional groups are coupled to the carboxyl group of the glucuronic acid, and so, the desired chelating function is obtained. The tests for removing the heavy metals were carried out using the method known as flotation. Interfacial properties of all the products obtained are characterized as well as the complexation equilibria for the most effective products. Removal efficiency is discussed in detail in terms of the properties studied. The polymeric material used is a polymer with tetrazolic pendan group. This product was obtained by a simple chemical modification conducted on the fibers of a copolymer which is an industrial waste. The transformation consists in a dipolar cyclo addition 1,3. The material thus synthesized proved to be applicable in the precipitation of divalent heavy metals, also having the advantage of being reusable. All materials obtained were characterized physical, thermal and spectroscopically, with the aim of understand the mechanism of interaction. Biomass was obtained from the macroscopic fungus polyporus tenuiculus without further treatment and was used as a sorbent for divalent heavy metals, in mono- and multi- sorbate solutions. Kinetics, sorption isotherms and dependence of removal efficiency are characterized with the experimental factors. The sorbent proved be efficient for the removal of heavy metals, and showed the advantage of being reusable. The advantages and disadvantages in the use of the three studied matrixes are compared.

"Interacción de remanentes de Supernova con el medio interestelar circundante" (1999). Velázquez, Pablo Fabián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El presente trabajo estudia la interacción de remanentes de supernova (RSN) con el medio interestelar circundante como así también la generación y el desarrollo de inestabilidades hidrodinámicas que pueden darse en tales escenarios. Esta tarea se llevó a cabo tanto desde el punto de vista teórico como observacional. Una supernova es un evento que se produce y desenvuelve en escalas de tiempo sumamente cortas (la explosión en sí se da en cuestión de segundos y la supernova pueden ser visible hasta unos años después de la explosión). Sin embargo sus restos pueden mantenerse durante aproximadamente cientos de miles de años, modificando drásticamente su entorno y emitiendo energía en todo el espectro electromagnético, aunque la característica que identifica unívocamente los restos de supernova es que son fuentes extendidas (no puntuales) de radiación en radiofrecuencias de origen no térmico (emisión sincrotrónica). A los remanentes se los puede calificar como “laboratorios naturales” donde es posible estudiar diversos fenómenos, entre ellos física de ondas de choque y la evolución de inestabilidades en condiciones imposibles de reproducir en laboratorios terrestres. Estos objetos astrofísicos evolucionan pero la forma en que lo hacen depende de factores tanto endógenos como exógenos. Hasta el momento se supone que la dinámica de un remanente “joven” se encuentra gobernada por las características propias de la explosión mientras que en un remanente más desarrollado en el tiempo, son las características del medio las que priman. Para investigar la influencia de los factores internos y externos en la evolución de los RSN, en la presente tesis doctoral se abordó el estudio de cinco remanentes de supernova: Tycho, W28, W30, W50 y CTB80, los cuáles se encuentran en diferentes estados evolutivos y poseen distintas morfologías y características internas. Se realizaron observaciones en continuo de radio de W28, W30 y CTB80 utilizando el interferómetro del Very Large Array (Socorro, New Mexico, EUA) y se utilizaron imágenes de radio existentes de Tycho y W50. Debido a la extensión angular de las fuentes observadas fue necesario aplicar técnicas de mosaico en radio, para obtener imágenes de muy buena resolución angular en la frecuencia de 1465 MHz. Además se complementaron con observaciones en 328 MHz para W28 y W30. Estas observaciones permitieron obtener las mejores imágenes conocidas hasta el presente de estos remanentes en la banda espectral de radio, con una resolución angular nunca alcanzada previamente y con excelente sensibilidad. En base a estos datos en dos frecuencias se pudo investigar los índices espectrales a (Sυ α υ-α, donde Sυ es el flujo) para W28 y W30. En los casos de los RSNs de Tycho y W28 se llevó a cabo un examen de la distribución y Cinemática del gas en su entorno explorándolo a través de la línea de λ 21 cm del hidrógeno neutro. Los datos fueron adquiridos con el VLA y el radiotelescopio de Parkes (Australia), respectivamente. Para el caso de Tycho se encontró una nubecita o grumo muy denso, parcialmente embebida/o en el frente de choque, posicionalmente coincidente con la región donde la expansión de este remanente está más desacelerada. En el estudio del entorno de W28, se han hallado aglomeraciones de gas que pueden dar cuenta de la compleja morfología de esta fuente en la frecuencia de 328 y 1465 MHz. También se realizó un estudio de inestabilidades fluidodinámieas (del tipo de Rayleigh-Taylor y Kelvin Helmholtz entre otros) que se pueden desarrollar en la expansión de los remanentes de supernova, con el fin de encontrar una explicación a ciertas estructuras que son visibles en las imágenes en radio de estos remanentes. Los resultados de los modelos analíticos y numéricos implementados fueron comparados con las observaciones. De esta manera fueron analizados los RSN de Tycho y W50. Hacia el NE del RSN de Tycho se observa una estructura periódica la que fue interpretada como evidencia del desarrollo de la inestabilidad de Rayleigh-Taylor considerando efectos viscosos y magnéticos. Por otro lado, el sistema W50-SS433 muestra en su lóbulo oriental una formación helicoidal. La misma puede ser explicada como resultado de la inestabilidad de Kelvin Helmholtz en simetría cilíndrica y contemplando jets o chorros con velocidades iniciales relativistas.

Abstract:
This research deals with the interaction between supernova remnants (SNR) and the surrounding interstellar medium, as well as with the developement of hydrodynamical instabilities that may arise in such processes. This work involves both a theoretical and an observational approach. A supernova is an event that occurs in extremely short timescales (the explosion itself takes just a few seconds, and the supernova can be visible even years after the explosion). However, their remnants can hold on for hundreds of thousand years, drastically modifying their environs and emitting energy in the whole electromagnetic spectrum, although the characteristic feature of SNR is that they are strong sources of radio emission of non-thermal origin (synchrotronic radiation). SNR can be regarded as “natural laboratories” in which it is possible to study a variety of phenomena, as for instance shock-wave physics and plasma instabilities under conditions that would be impossible to reproduce in terrestrial laboratories. The way in which these astrophysical objects evolve, depends both on endogenous and exogenous factors. So far, it is accepted that the dynamics of a “young” remnant is governed by the intrinsic characteristics of the explosion, while in a more evolved remnant, the characteristics of the ambient medium are dominant. In order to disclose the influence of intrinsic and extrinsic factors in the evolution of SNRs, in this PhD Thesis, I have carried out the study of five SNR: Tycho, W28, W30, W50 and CTB80, which are in different evolutive phases and possess different morphologies and internal features. Radio emission was analyzed through high resolution radiocontinuum images obtained with the Very Large Array (VLA; Socorro, New Mexico, USA). For the present research I have conducted multifrequency radioobservations of W28, W30 and CTB80. Due to the large angular extension of the same, it was necessary to make use of radio mosaicing techniques in order to achieve high resolution images at 1465 MHz. In addition, observations at 328 MHz were performed for W28 and W30. These observations allowed to obtain the best images ever produced for these rcmnants in the radio band, with unprecedented angular resolution and with excellent sensitivity. Based on these data in two frequencies, it was possible to investigate the spectral index distribution (α, defined as Sυ α υ-α,where S, is the frequency-dependant flux density) for W28 and W30. Moreover, for W28 and Tycho’s SNR, the distribution and kinematics of the surrounding gas was explored using the λ 21 cm line of neutral hydrogen. The data were acquired with the Parkes (Australia) radiotelescope and the VLA, respectively. In the case of Tycho’s SNR, a dense clump was found in positional coincidence with the region where this remnant shows the lowest expansion velocity. The clump appears as partially embedded inside the shock front. The study of the environs of W28, has allowed to detect gas concentrations that may account for the complex morphology this remnant exhibits at the frequencies of 328 and 1465 MHz. Besides, I have investigated the fluid-dynamic instabilities likely to develop during the expansion of SNR (such as Rayleigh-Taylor and Kelvin Helmholtz instabilities, for instance), with the aim of explaining certain structures that appear in the radio images of these remnants. Analytical and numerical models were compared with observations of W50 and Tycho’s SNR. Toward the NE of Tycho’s SNR, a quite periodic structure is observed that is interpreted as the developement of Rayleigh-Taylor instabilities including viscous and magnetic effects. The W50-SS 433 system shows a helicoidal formation in its eastern lobe, which can be explained as arising in the Kelvin Helmholtz instability in cylindrical symmetry, taking relativistic jets into account.

"Interacción del viento estelar de estrellas masivas con el medio interestelar" (1996). Giménez de Castro, Carlos Guillermo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En esta tesis se estudian las condiciones físicas en las nebulosas de anillo originados por el material circumestelar barrido por los fuertes vientos de las estrellas WR. El estudio se basa en observaciones realizadas en los observatorios de CTIO, Córdoba y CASLEO. Se analizan las primeras imágenes digitales de la nebulosa de anillo alrededor de la estrella theta Mus de tipo espectral WC. Las imágenes directas obtenidas a través de filtros interferenciales, muestran que la nebulosa de anillo alrededor de theta Mus tiene una morfología filamentosa, particularmente en O^++. Esta morfología es común en los remanentes de Supernova. Las imágenes también muestran que ciertas zonas de la nebulosa en O^++ y en H^+ aparecen espacialmente separados. El análisis de las condiciones físicas se realizó mediante el estudio de los flujos de las líneas espectrales observadas considerando procesos de ionización radiactiva y excitación colisional. Las imágenes espectrales muestran que la nebulosa es de baja densidad y excitación intermedia. Se derivan valores de temperatura y densidad electrónicas, así como también de las abundancias de los elementos químicos nebulares en distintos lugares dentro de la nebulosa. Los valores de las abundancias son comparados con las abundancias galácticas a la distancia del Centro Galáctico a la que se encuentra theta Mus observándose que son comparables dentro de los límites de los errores.% Mediante el cociente de los flujos de líneas de recombinación y colisionales se determina que el principal mecanismo de excitación es la fotoionización. Por ultimo se encuentra que las líneas espectrales no parecen estar ensanchadas como producto de una agitación no-térmica. También se analizan las observaciones digitales con cámara directa y con espectrógrafo de la nebulosa de anillo NGC2359 alrededor de la estrella HD56925 de tipo espectral WN. En base a los flujos de las líneas de las imágenes espectrales, se derivan parámetros físicos dentro de la nebulosa los que se encuentran en excelente acuerdo con valores previamente publicados. En ultimo lugar estudiamos el viento de las estrellas masivas en el marco de la teoría magnetohidrodinámica (MHD). Resolvemos las ecuaciones MHD combinándolas con el formalismo de eyección radiactivo establecido por Castor, Abbott y Klein (1975).

Abstract:
This thesis comprises a study of the physical conditions inside ring nebulae blown by the strong stellar winds of WR stars. The study is based on observations made at CTIO, Cordoba and CASLEO, with direct camera and spectrographs with CCD detectors. We analyze the first digital images of the ring nebula around the star theta Mus of spectral type WC obtained through narrow band filters centered at O^++ and H_alpha. These images show that the nebula has a filamentary structure, mainly in O^++, as also seen in supernova remnants. A spatial detachment between O++ and H_alpha is observed. An analysis of physical conditions was preformed by means of spectral lines fluxes considering radiative ionization and collissional excitation. The results of the analysis of the spectral images show that the nebula is of low density and medium excitation. We have determined the electronic temperature and density, and chemical abundances at differente sites within the nebula. Nebular chemical abundances are found to be similar with the Galactic abundances at the distance from the Galactic Center where the nebula is located. By means of quotients of recombination and collisional spectral line fluxes we determine that the principal excitation mechanism is photoionization. Finally, we did not find a non-thermal line widths enhancement. Also digital images with direct camera and with spectrograph of the ring nebula NGC2359 around the star HD56925 of spectral type WN are studied. Based on the spectral line fluxes, we determine physcal parameters inside the nebula. The results are in excelent agreement with previous published values. Finally we study the winds of massive stars within the framework of the magnetohydrodynamic (MHD) theory. We solve the (MHD) equations combined with the radiatively driven outflow formalism as stated by Castor, Abbott and Klein (1975).

"Interacción del virus Junín con el citoesqueleto y la membrana de la célula huésped" (2004). Cordo, Sandra M.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
EI virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, es un miembro de la familia Arenaviridae. Es un virus envuelto de genoma ARN segmentado cuyo ciclo de replicación ha sido caracterizado en varios aspectos. La entrada a las células blanco se realiza vía endocitosis mediada por receptor y posterior fusión dependiente de PH. Una vez que la nucleocápside se encuentra dentro del citoplasma se expresan 5 proteínas estructurales, mediante una estrategia de codificación ambisense. La proteína mayoritaria asociada a la nucleocápside es denominada NP. A partir de un único precursor glicoproteico (GPC), sintetizado en el retículo y exportado a la membrana plasmática de la célula, se obtienen dos glicoproteínas virales denominadas GP1 y GP2. Ambas conforman las estructuras claviformes encontradas en la envoltura viral. Se desconocen hasta el momento los mecanismos detallados y las estructuras celulares involucradas en el transporte de las distintas proteínas virales hacia el sitio de brotación. El ensamblado de las partículas virales se lleva a cabo en la membrana plasmática de las células infectadas. En este trabajo se estudiaron algunos aspectos de la interacción virus-célula huésped, caracterizando la asociación de NP, GPC y GP1 a distintas estructuras celulares. En primer lugar se estudió la interacción del virus con la red de filamentos intermedios (FI) del citoesqueleto. Se utilizó el compuesto acrilamida capaz de desorganizar específicamente los FI. La producción de virus infeccioso disminuyó de manera dosis-dependiente en presencia del mismo. Los resultados, observados en celulas Vero, cultivos de fibroblastos humanos y astrocitos murinos, fueron comparables. Se analizó luego el efecto del compuesto sobre diferentes pasos del ciclo de multiplicación. De esta manera se determinó que la integridad de los FI es crucial al menos durante los pasos previos a la síntesis de proteínas virales y posteriores a la internalización. Mediante extracciones específicas realizadas con detergentes no iónicos se encontró que NP se asocia a la fracción celular correspondiente al citoesqueleto, aunque no se determinó a que componente correspondería esta interacción. Las glicoproteínas no mostraron asociación específica a estas fracciones celulares en iguales condiciones. Por otro lado, modificaciones en el contenido de colesterol de las células infectadas y tratadas con inhibidores de la enzima HMG-CoA reductasa, disminuyeron la infectividad y localización de las glicoproteinas en la membrana de las mismas. Estos resultados llevaron al análisis de la asociación de GPC y GP1 a estructuras de membrana ricas en colesterol denominadas rafts. Los ensayos de fraccionamiento celular específicos para estos microdominios de membrana mostraron la localización de las glicoproteínas en rafts. Esta interacción fue dependiente de la temperatura y de la presencia de colesterol en los cultivos infectados. Además, la asociación de las glicoproteínas a las fracciones rafts fue estabilizada a 37°C por la adición de anticuerpos específicos. Estos resultados sugieren la utilización de esta vía como mecanismo de transporte para GPC y GP1 a la membrana celular de las células infectadas. Asimismo la localización de las glicoproteínas en los microdominios rafts podría representar una estrategia para el reclutamiento de los componentes virales previo al paso de liberación de la progenie en las células infectadas.

Abstract:
Junin virus (JUNV), the etiological agent of argentine hemorrhagic fever, is a member of the Arenaviridae family. The viral cycle multiplication of this RNA virus has been characterized in different aspects. The entrance in the target cells is performed by receptor-mediated endocytosis following pH dependant fusion step. Once the nucleocapsids are within the cytoplasm the ambisense strategy allows expression of five structural proteins. The major nucleocapsid associated protein is named NP. As a result of the glycoprotein precursor synthesis and after its maturation and exocytic transport to plasma membrane of infected cells, two glycoproteins are obtained. Both proteins, named GP1 and GP2, form the claviform structures found in the viral envelope. At this moment, the detailed mechanisms and cellular structures involved in the transport of different viral proteins towards the budding site are not known although the fact that viral assembly is carried out in plasma membrane of infected cells is currently accepted. In this work we have studied some aspects of virus-cell interaction characterizing the association of NP, GPC y GP1 to cellular structures. First, we have studied the interaction between virus and cytoskeletal intermediate filaments (IF). In the presence of acrylamide, compound that selectively disrupt IF, viral yield was diminished. The results were similar in Vero cells, human fibroblast cultures and murine astrocytes. Then, we analyzed the effect of acrylamide on different steps of the multiplication cycle. It was determined that IF integrity is essential at least between the step of internalization and viral protein synthesis. Detergent extractions of infected cultures demonstrated that NP associates to cellular cytoskeletal fraction although it was not possible to identify the specific cytoskeletal framework involved in that association. Glycoproteins did not show specific association to these cytoskeletal fractions under similar conditions assayed. On the other hand, modifications in the cholesterol contents of infected cells induced by HMG-CoA reductase inhibitors, diminished infectivity and glycoproteins membrane localization. This result leded us to analyse the association of GPC and GP1 to membrane cholesterol enriched structures named rafts. Specific cellular fractionation assays showed glycoproteins associated to raft microdomains. This interaction was temperature and cholesterol dependant. Moreover, glycoprotein association to membrane rafts was stabilized at 37°C by specific antibody addition. These results suggest that GPC and GP1 may utilize the exocytic raft pathway to reach the plasma membrane of infected cells. Finally, glycoproteins raft association may represent the strategy to recruit viral proteins before releasing progeny from the cells.

"Interacción dinámica del entorno con la convección en nubes cúmulus" (1986). Nicolini, Matilde. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se desarrolla un modelo numérico dependiente del tiempo que simula la convección húmeda no profunda en nubes cumulus dispuestas en rollos transversales . Se extiende el análisis de escala realizado por Lipps y Hemler para convección profunda en ausencia de efectos turbulentos, a convección no profunda incorporando un tratamiento simplificado de los términos turbulentos . Se obtienen dos sistemas aproximados inelástico Boussinesq de ecuaciones para convección bidimensional no profunda que difieren en las variables de pronóstico. En el primero, las variables de pronóstico son la vorticidad (normal al plano vertical de movimiento) , una variable adimensional proporcional a la entropía y la relación de mezcla del agua total y no se incluye la precipitación. En el segundo están representadas por la vorticidad, la temperatura potencial y las relaciones de mezcla de las categorías de agua en la fase vapor, agua de nube y agua de lluvia. En esta última versión el sistema de ecuaciones incluye una parametrización de la microfísica de las nubes de "lluvia caliente", de acuerdo al tratamiento propuesto por Kessler. Se inicia la convección con una burbuja pequeña y menos densa que el entorno. Este último se supone saturado y condicionalmente inestable en la mayoría de los experimentos realizados. El dominio de integración tiene una extensión vertical de 3 Km. y horizontal variable según los experimentos , entre 4 y 6 Km. El paso de malla utilizado es de 100 m y el paso de tiernpo es de 4 segundos. Se derivan las ecuaciones que vinculan las tasas de incremento de las integrales de las distintas formas de energía con la generación, conversión y disipación de las mismas. Estas relaciones se utilizan para estudiar la dinámica de la convección y para verificar la consistencia del modelo. Se encuentra que los esquemas numéricos utilizados permiten resolver el sistema de ecuaciones con una exactitud del 5 al 10%. Se realizan tres series de experimentos. En la primera se simula la convección húmeda en una atmósfera inicialmente en reposo. La segunda tiene como objetivo la evaluación del modelo con datos reales, y la tercera sc realiza con el fin de estudiar la influencia del factor cortante vertical del viento en la convección. Se encuentran coincidencias y comportamientos similares de la convección resultante, a los encontrados por otros autores, cuando se suponen condiciones de calma en la atmósfera de referencia. En esta serie de experimentos se analiza en detalle la evolución de los campos de movimiento, termodinámicos y de la sustancia agua líquida. Se analiza asimismo la velocidad de crecimiento de los valores máximos de algunas variables, con el fin de caracterizar la convección húmeda en condiciones ambientales variables en los distintos experimentos. También se varía en forma controlada algunas suposiciones y características del modelo. Se evalúa el modelo utilizando los datos observacionales relativos a convección no profunda obtenidos durante el día 261 del Experimento del Atlántico Tropical GATE. Se adaptan las características del modelo y se ajusta la forma e intensidad del impulso inicial a fin de reproducir convenientemente la convección no profunda en nubes Cu en una atmósfera tropical. Se comparan los resultados del presente modelo, tanto con los encontrados por un modelo tridimensional como con los datos reales. Se encuentra que los resultados son adecuados en la etapa de desarrollo y que el modelo bidimensional puede ser utilizado para el pronóstico de la convección no profunda en nubes Cu de "lluvia calientente", durante dicha etapa, en situaciones reales. Se plantean los problemas encontrados y la forma de resolverlos con el fin de mejorar el comportamiento del modelo y poder simular con mayor fidelidad todas las etapas de la convección. Se aplica el modelo al estudio del efecto de la cortante vertical del viento en la convección bidimensional en nubes Cu no precipitantes en un entorno saturado. Se analiza la evolución de los campos de las distintas variables físicas y la energética del modelo. Se encuentra que cuando el perfil del viento predominante es lineal, se confirman los resultados encontrados por otros autores en el sentido de un efecto inhibitorio de la cortante. Este efecto que aumenta al aumentar la magnitud de la cortante acompafia a un transporte contragradiente de la cantidad de movimiento horizontal. Cuando el perfil es curvo se comparan los resultados con los hallados por Asai en un análisis lineal de la convección seca. Se confirma un efecto inhibitorio más débil en este caso, resultado que no es por lo tanto característico sólo de perturbaciones infinitesimales en convección seca. Las resultados difieren sin embargo en cuanto persiste , aunque débil, un transporte vertical de la cantidad de movimiento horizontal, que resulta contragradiente durante la etapa de desarrollo. Esto indica que en la convección húmeda bidimensional existe una disminución de la energía cinética perturbada a expensas de la energía cinética media hasta que culmina la convección. En la primera parte de este trabajo se sintetizan los antecedentes relacionados con el estudio teórico y observacional de la dinámica de la convección atmosférica profunda y no profunda con un énfasis mayor en los avances realizados en l a última década, en el estudio de los procesos asociados al factor cortante vertical del viento.

"Interacción dinámica rápida de partículas y campos electromagnéticos con superficies metálicas" (2015-03-13). Ríos Rubiano, Carlos Alberto. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En esta tesis se expone la investigación desarrollada durante la realización del doctorado, la cual abarca el estudio de las superficies metálicas a través de su interacción tanto con fotones - campos electromagnéticos - como con partículas - átomos neutros. En lo referente a la interacción con campos electromagnéticos, la labor se centró en el estudio de las transiciones electrónicas desde la banda de valencia del metal producidas por la incidencia rasante de pulsos láser ultra-cortos, con duraciones del orden de los femto- o atto-segundos. Mientras que en el caso de la interacción con partículas, la investigación estuvo focalizada en la difracción de átomos rápidos, con energías del orden de los keV , por incidencia rasante sobre la superficie cristalina (GIFAD, por sus siglas en inglés). En ambos casos la finalidad del trabajo es estudiar la in uencia del potencial superficial, cuya precisa y detallada representación resulta crucial para la correcta descripción de recientes resultados experimentales en ambas líneas . En los primeros capítulos de la tesis se estudia la fotoemisión electrónica desde la banda de valencia de una superficie metálica debido a la incidencia rasante de pulsos láser ultra-cortos, poniendo especial énfasis en los efectos debidos a la estructura de bandas electrónica. Para ello se propone un método aproximado, dentro del marco de la formulación de onda distorsionada dependiente del tiempo, llamado aproximación Band-Structure-Based-Volkov (BSB-V). Dicho método incluye una representación realista del potencial superficial, dada por un modelo de pseudo-potencial unidimensional que tiene en cuenta efectos de la estructura de bandas del metal. La aproximación BSB-V propuesta se aplicó al cálculo de probabilidades doble diferenciales de fotoemisión -resueltas en energía y ángulo del electrón emitido- desde la banda de valencia de superficies de aluminio y berilio. Como resultado de esta investigación se encontró que en el caso del berilio la estructura de bandas electrónica ejerce una notable in uencia sobre las distribuciones de electrones emitidos, mientras que para el aluminio tales efectos juegan un papel menor. El método BSB-V nos permitió además analizar la contribución de los estados electrónicos superficiales (SESs, por sus siglas en inglés) parcialmente ocupados, hallándose que para la superficie de berilio estos estados producen modificaciones que podrían ser experimentalmente observables en los espectros de emisión electrónica. Por otra parte, con la motivación de determinar los efectos debidos a la orientación cristalográfica del material se evaluaron las distribuciones electrónicas para dos diferentes caras del aluminio - Al(111) y Al(100) - observándose que las diferencias entre los espectros correspondientes dependen fuertemente de los parámetros del pulso. Los resultados de la aproximación BSB-V fueron también contrastados con valores derivados a través de la resolución numérica de la ecuación de Schrëodinger dependiente del tiempo (TDSE), encontrándose una excelente concordancia, lo que brinda confiabilidad al modelo propuesto. También se analizó el rol desempeñado por el potencial inducido dentro del modelo BSB-V. Dicho potencial describe la respuesta electrónica dinámica del material al campo eléctrico externo, la cual, dependiendo de las características del pulso, puede alterar marcadamente los espectros de emisión electrónica. En particular, sus efectos se tornan visiblemente evidentes para pulsos con frecuencia portadora cercana a la del plasmón superficial, donde aparecen contribuciones resonantes, y para pulsos con baja frecuencia, en el rango infrarrojo, en donde el comportamiento del material se asemeja al correspondiente caso estático. Por otra parte, dado que recientemente se publicaron resultados experimentales de emisión fotoelectrónica desde una superficie de magnesio , obtenidos con la técnica de espectroscopía de atto-segundos, se calcularon distribuciones fotoelectrónicas para esta superficie considerando pulsos con diferentes duraciones y frecuencias, trazando así un camino para avanzar con el desarrollo de la descripción teórica del problema. En la segunda parte de la tesis se investiga la difracción de átomos rápidos de helio que inciden en forma rasante sobre una superficie de Ag(110). En este caso los resultados fueron comparados con datos experimentales del grupo de P. Roncin (Universitè Paris-Sud, Francia), con el que se trabajó en colaboración, siendo los patrones de difracción experimentales una herramienta extremadamente sensible para probar el modelo de potencial superficial. En este caso la interacción proyectil-superficie fue representada con un modelo ab-initio derivado en el marco de la teoría de funcional densidad (DFT), mientas que el proceso de colisión elástica, característico de la difracción, fue descripto por medio de la aproximación Superficial Eikonal (SE). La aproximación SE es un método de onda distorsionada que tiene en cuenta la interferencia cuántica entre las contribuciones procedentes de diferentes trayectorias del proyectil, las cuales son evaluadas a partir de la dinámica clásica considerando la completa corrugación del potencial superficial. A partir del buen acuerdo observado entre las distribuciones de momento teóricas y experimentales correspondientes a incidencia a lo largo de diferentes direcciones cristalográficas se concluyó que el modelo de potencial propuesto brinda una adecuada descripción de la interacción superficial en el rango de energías perpendiculares a la superficie del orden de los cientos de meV . Dado que en los procesos de GIFAD desde superficies metálicas las transiciones inelásticas son consideradas una fuente importante de decoherencia, se estudió también la energía perdida por los átomos de helio axialmente dispersados desde la superficie de Ag(110) con el fin de investigar la influencia de los procesos disipativos en los patrones de difracción. Las distribuciones finales de momento del proyectil fueron evaluadas dentro de un formalismo semi-clásico que incluye efectos disipativos debido a excitaciones electrón-hueco por medio de una fuerza de fricción dependiente de la densidad electrónica local. Para incidencia a lo largo de una dirección de bajo índice cristalográfico, con una dada energía de impacto, el modelo predice la presencia de marcadas estructuras en el espectro de pérdida de energía, las cuales proporcionan información detallada acerca de la dependencia de la pérdida de energía con la trayectoria del proyectil. Sin embargo, estas estructuras desaparecen completamente cuando se toma en cuenta la dispersión experimental del haz incidente, dando lugar a una distribución de pérdida de energía suave, en buen acuerdo con los datos experimentales disponibles . Además, nuestros resultados sugieren que los procesos inelásticos producen un fondo casi constante en la distribución de momento transversal de los proyectiles dispersados, excepto en los extremos del espectro, donde aparecen máximos asociados al denominado rainbow clásico. Finalmente concluimos que los patrones de difracción experimentales son bien reproducidos a partir de la adición de las contribuciones elásticas e inelásticas.

Abstract:
In this thesis we expose the research developed during the doctoral studies, which involves the investigation of metal surfaces through its interaction with both, photons - electromagnetic fields - and particles - neutral atoms. With regard to the interaction with electromagnetic fields, the work focuses on the study of electronic transitions from the valence band of the metal produced by grazing incidence of ultra-short laser pulses, with durations of the order of femto- or atto-seconds. Concerning the interaction with particles, the investigation is centered on the diffraction of fast atoms, with energies of the order of keV s, by grazing incidence on crystal surfaces (GIFAD). In both cases the purpose is to study the in uence of the surface potential, whose precise and detailed representation is crucial for the proper description of recent experimental results on both lines . In the first chapters of the thesis we study the photoelectron emission from the valence band of a metal surface due to grazing incidence of ultra-short laser pulses, with special emphasis on the in uence of the electronic band structure. With such an aim we developed an approximate method within the framework of the time-dependent distorted wave formalism, named Band-Structure-Based-Volkov (BSB-V). The proposed approach includes a realistic representation of the surface potential, given by a one-dimensional pseudo-potential model , which takes into account effects of the band structure of the metal. The BSB-V approach was applied to calculate double differential photoemission probabilities -resolved in energy and angle of the emitted electron- from the valence band of aluminum and beryllium surfaces. As a result of this investigation it was found that in the case of beryllium, the electronic band structure has a remarkable in uence on the distribution of the emitted electrons, whereas for aluminum such effects play a minor role. The BSB-V method allowed us to analyze the contribution of partially occupied surface electronic states (SESs), observing that for the beryllium surface, these states produce modifications that might be experimentally observable in the electron emission spectra. On the other hand, in order to determine the in uence of the crystallographic orientation of the material, electronic distributions for two different faces of the aluminum -Al(111) and Al(100)- were evaluated, concluding that the differences between the corresponding spectra depend strongly on the pulse parameters. BSB-V results were also contrasted with values derived by means of the numerical solution of the time dependent Schrëodinger equation (TDSE), finding an excellent agreement, which confirms the reliability of the proposed model. We also investigate the role played by the induced potential within the BSB-V approach. This potential describes the dynamic response of the material to the external electric field. Depending on the characteristics of the pulse, the induced potential can markedly modify the electron emission spectra. These effects become more evident for pulses with carrier frequencies close to the surface plasmon one, where resonant contributions appear, and for low-frequency pulses, in the infrared range, where the induced field tends to the static limit. Furthermore, since experimental data of photoelectron emission from a magnesium surface, obtained with the attoseconds spectroscopy technique, were recently reported , we present electron distributions for this surface, derived within the BSB-V approximation by considering pulses with different durations and frequencies. Such a research represents a step forward to the complete understanding of the problem. In the second part of the thesis, diffraction patterns of fast helium atoms grazing scattered off a Ag(110) surface are investigated. Our theoretical results were compared with experimental data of the group of P. Roncin (Universitè Paris-Sud, Francia), with whom we worked in collaboration. Since GIFAD patterns are extremely sensitive to the surface interaction, we use experimental momentum distributions of GIFAD to evaluate the performance of a surface potential model derived from ab-initio calculations obtained from Density Functional Theory (DFT). To deal with the elastic collision process involved in the diffraction phenomenon we use a semi-classical method, named Surface Eikonal (SE) approximation. The SE approach is a distorted wave theory that takes into account the quantum interference among transition amplitudes corresponding to different projectile trajectories, which are evaluated from classical dynamics including the complete corrugation of the surface potential. The good agreement between experimental and theoretical projectile distributions allows us to conclude that the proposed potential model provides an adequate description of the surface interaction in the range of energies associated with the initial motion perpendicular to the surface of the order of the hundreds of meV s. In addition, in order to analyze the in uence of dissipative processes in diffraction patterns we study the energy lost by helium atoms axially scattered from a Ag(110) surface. Final projectile distributions were evaluated within a semi-classical formalism that includes dissipative effects due to electron-hole excitations by means of a friction force that depends on the local electron density. For incidence along a low index crystallographic direction with a given impact energy, the model predicts the presence of structures in the energy loss spectrum, which provide detailed information about the dependence on the projectile trajectory. However, these structures disappear completely when the experimental dispersion of the incident beam is taken into account, resulting in a smooth energy loss distribution, in good agreement with available experimental data . Moreover, our results suggest that inelastic processes produce a nearly constant background in the transverse momentum distribution of scattered projectiles, except around classical rainbow angles, where rainbow maxima are present. Finally, we conclude that experimental diffraction patterns are well reproduced from the addition of the elastic and inelastic contributions.

"Interacción entre el metabolismo del calcio y el metabolismo energético en ratas normales y en animales espontáneamente obesos" (2012). Marotte, Clarisa. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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El objetivo fue comparar absorción y retención de Ca, y cambios en la composición corporal y en diferentes parámetros del metabolismo energético durante el crecimiento. Ratas espontáneamente obesas (IIMb/β) (O) y ratas Wistar (W), fueron apareadas; las madres se alimentaron con una dieta isocalórica con diferentes concentraciones de Ca: Alto (ACa: 0.9%), Normal (NCa: 0.5%) y Bajo (BCa: 0.2%). Las crías macho continuaron recibiendo la misma dieta materna hasta los 60 días de edad (ACa, NCa y BCa). En O, el PC fue inverso al contenido dietario de Ca sin diferencias en % de agua; OBCa presentó el menor % corporal de proteínas (p<0.01). El %ACa fue inverso al contenido de Ca de la dieta y el %A grasas no se modificó. OBCa presentó los mayores niveles de TGL, glucosa, insulina en ayunas, y HOMA-IR (p<0.01) y el menor valor de Ca y P corporal, CMO del esqueleto total y DMO de tibia y columna (p<0.01). OACa presento similar %Ca corporal pero CMO del esqueleto total y DMO de tibia proximal y columna fueron menores que ONCa (p<0.01). En W, AWCa presentó mayor % de grasa que los otros dos grupos (p<0.01). WBCa y WACa presentaron % de proteínas y cenizas menores a WNCa (p<0.01). WACa presentó los mayores niveles de TGL, glucosa, insulina y HOMA-IR (p<0.01) y WBCa mayores que WNCa (p<0.01). Al comparar O con W se observó en O mayor depósito graso y menor % de proteínas para una misma dieta experimental, menor niveles de marcadores bioquímicos y mayores niveles de glucosa, insulina, TGL y HOMA-IR. La BGP guardó una relación inversa con dichos parámetros y directa con CTX. Conclusiones: Durante el período de crecimiento, la baja ICa o relación Ca/P dietaria modularía el PC, induciendo cambios en la composición corporal. La masa grasa no sería beneficiosa para la salud ósea. La BGP se asocia negativamente a la glucosa en ayunas y resistencia a la insulina; la deficiente ingesta de Ca induce cambios más negativos.

Abstract:
The aim of the present study was to compare absorption and retention of Ca, changes in body composition and in different parameters of energetic metabolism during growth. Spontaneously obese (IIMb/β) (O) and Wistar (W) rats were mated; the dams fed an isocaloric diet with different Ca concentrations: High (ACa: 0.9%), Normal (NCa: 0.5%) and Low (BCa: 0.2%). Male pups continued receiving mother´s diet until 60 years of age (ACa, NCa and BCa). Body weight of O groups was inversely related to dietary Ca content, with no differences in water %; body protein % was lower in OBCa (p<0.01). The ACa% was inversely related to dietary Ca content, while fat % did not changed. OBCa presented the highest triglycerides and fasting glucose and insulin levels, and HOMA-IR (p<0.01), the lowest body Ca and P content, total body BMC and, tibial and spinal BMD (p<0.01). OACa showed similar body Ca% but lower total body BMC and, tibial and spinal BMD than ONCa (p<0.01). AWCa showed the highest fat% (p<0.01). WBCa and WACa presented lower protein and ashes % than WNCa (p<0.01). WACa showed the highest levels of triglycerides, glucose, insulin and HOMA-IR (p<0.01). Comparing O and W, the O groups showed a higher fat store and a lower protein %, a lower bone turnover and higher glucose, insulin and HOMA-IR levels for a same experimental diet. BGP levels presented an inverse relationship with these biochemical parameters, and a direct relationship with CTX. Conclusions: During the growth period, the low Ca intake or dietary Ca/P relationship could modulate the body weight, inducing changes in body composition. The fat mass would not be beneficial for bone health. BGP levels are negatively associated to glucose and insulin resistance levels and the low Ca intake increase this negative effect.

"Interacción entre fitocromos y criptocromos en el control del crecimiento y desarrollo de Arabidopsis thaliana" (2001). Mazzella, María Agustina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La luz provee a las plantas la energía necesaria para la fotosíntesis e información sobre el ambiente. Las señales lumínicas son percibidas por fotorreceptores específicos. En Arabidopsix thaliana se identificaron y clonaron tres grupos de fotorreceptores: los fitocromos que son fotorreceptores de de luz roja (R) y roja lejana (RL), que son codificados por cinco genes (PHYA,PHYB,PHYC,PHYD,PHYE); los criptocromos que son fotorreceptores de luz azul, codificados por dos genes (CRY1 y CRY2) y las fototropinas. Los fitocromos y criptocromos tienen funciones independientes y coordinadas que regulan el desarrollo de las plantas durante todo el ciclo de vida. El objetivo de esta tesis es estudiar la interacción entre fitocromos (específicamente phyA y phyB ) y criptocromos (cryl y cry2) en distintas respuestas durante el desarrollo de Arabidopsis thalíana. Para cumplir este objetivo hemos obtenido los dobles, triples y cuádruple mutantes a partir de los simples mutantes de phyA, phyB, cry1 y cry2 para analizar el efecto de un fotorreceptor en ausencia/presencia de los demás fotorreceptores. El uso de los simples, dobles, triples, y cuadruple mutantes permitió revelar nuevas interacciones entre los fotorreceptores e identificar funciones no conocidas de los mismos. En plántulas etioladas expuestas a luz R, el phyA mostró un efecto dual. Cuando el phyA fue activado con bajos flujos de luz R produjo por un lado la inhibición del alargamiento del hipocotílo, y por otro lado, redujo la inhibición del alargamiento del hipocotílo mediado por el phyB, es decir que el phyA interactuó antogonísticamente con el phyB. En nuestras condiciones, el phyA retrasó la transición del estado vegetativo al reproductivo, sólo en determinados contextos genéticos: cry1, cry2 y cry1 cry2, poniendo en evidencia un nuevo rol del phyA en el control de la floración. El phyB y el cry1 fueron redundantes en la represión del alargamiento del entrenudo, y la ausencia de ambos permitió demostrar que el alargamiento del tallo no está obligadamente acoplado al desarrollo reproductivo. La redundancia entre phyB y cry1, sin embargo, fue condicional a la temperatura. En la inhibición del alargamiento del hipocotílo, el phyB y el cry1 interactuaron sinergísticamente. La interacción del phyB y el cry1 en ésta respuesta fue condicional al ambiente lumínico. En la mayoría de las respuestas el cry2 fue redundante con el cry1. La interacción del cry2 con phyA y phyB en las distintas respuestas durante el desarrollo puede dividirse en dos patrones, en el primero la actividad del cry2 requirió la presencia de phyA y phyB (efecto sinérgico), y en el segundo requirió la ausencia de phyA y phyB (efecto redundante). El análisis del comportamiento del cuádruple mutante phyA phyB cry1 cry2 mostró que la deficiencia en la percepción de luz durante el desarrollo no está restringida sólo a la des-etiolación sino que continúa incluso hasta al estadío adulto. Basados en los datos de esta tesis y de la literatura presentamos un modelo de los patrones de interacción para dos procesos: des-etiolación y floración. Las interacciones observadas en condiciones de radiación natural entre los fotorreceptores reflejan aquellas observadas en condiciones controladas. La compleja red de interacciones entre fitocromos y criptocromos en condiciones de radiación natural generó homeostasis en la des-etiolación contra los cambios en irradiancia y fotoperíodo que no forman parte de la señales relacionadas con la posición del vástago por debajo o por encima de la superficie del suelo. El phyA, phyB, cry1 y cry2, se acoplan con diferentes jerarquías durante el desarrollo de Arabidopsis. La dependencia o redundancia entre las vías es afectada por las condiciones ambientales, el estado ontogénico y el contexto genético. La redundancia entre los fotorreceptores en el control de los procesos del desarrollo genera estabilidad del fenotipo que evita caer en patrones aberrantes, mientras que las jerarquías entre los fotorreceptores permite un patrón específico de crecimiento y desarrollo bajo señales lumínicas particulares.

Abstract:
Light provides plants not only the energy necessary for photosynthesis but also information about the environment. Light signals are perceived by specific photoreceptors. In Arabidopsis thalíana three groups of photoreceptors have been identified and cloned: phytochromes,that are red - far-red light photoreceptors encoded by five genes (PHYA, PHYB,PHYC,PHYD and PHYE);cryptochromes, that are blue light photoreceptors encoded by two genes (CRY1 and CRY2);and phototropin. Phytochromes and cryptochromes have independent and coordinated functions that control plant development throughout all the life cycle. The aim of this thesis is to study the interactions between phytochromes (specifically phyA and phyB) and cryptochromes (cry1 and cry2) in the control of Arabidopsis thaliana development. For this propose we have obtained all the double, triple and quadruple mutant combinations of the phyA, phyB, cry1 and cry2 mutants to analyze the effect of one photoreceptor in the presence/ absence of other(s). The use of single, double, triple and quadruple mutants revealed novel interactions among photoreceptors and identified unknown photoreceptor functions. In etiolated seedlings exposed to continuous red light, phyA showed a dual effect. On one hand phyA inhibited hypocotyl growth, and on the other, it reduced hypocotyl growth inhibition mediated by phyB. Thus, phyA interacted antagonistically with phyB. Also under white light photoperiods, phyA delayed the transition from the vegetative to the reproductive stage only in specific genetic backgrounds: cry1, cry2 and cry1 cry2, evidencing a novel roll of phyA in the control of flowering. phyB and cry1 were redundant on intemode growth repression, and the absence of both photoreceptors demonstrated that stem growth is not inevitably linked to the reproductive developmental program. In hypocotyl growth inhibition responses, phyB and cry1 interacted synergistically, and this interaction was light conditional. In most of the responses studied here, cry2 was redundant with cry1. The interaction of cry2 with phyA and phyB in different developmental responses followed two patterns, one in which cry2 activity required the presence of phyA and phyB (synergistic effect), and the other in which cry2 required the absence of phyA and phyB (redundant effects). The behavior of the phyA phyB cry1 cry2 quadruple mutant indicates that deficiencies in light perception are not restricted to de-etiolation , and continue during the adult stage. Based on our results and complementary literature we propose a genetic model of photoreceptor interactions for two processes: de-etiolation and flowering. The interactions observed under natural radiation were compatible with those observed under laboratory conditions. The complex network of interaction between phytochromes and cryptochromes under natural radiation generated de-etiolation homeostasis against the changes in irradiance and photoperiod not associated to the position of the shoot above or below soil level. phyA, phyB, cry1 and cry2 are coupled to Arabidopxis development with different hierarchies. Dependency or redundancy between pathways is affected by environmental conditions, ontogeny, and genetic context. Redundancy among photoreceptors in the control of developmental processes generates stability of phenotype that prevents aberrant patterns, while different hierarchies among photoreceptors allow a specific pattern of growth and development under specific light conditions.

"Interacción entre geometría y dinámica en la modulación de señales intracelulares de calcio" (2016-03-30). Piegari, Estefanía. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Las señales de Ca²⁺ son ubicuas y juegan un rol importante en numerosos procesos fisiológicos como la fertilización o la muerte celular. Su versatilidad se basa en la variedad de comportamientos espacio-temporales que puede mostrar la concentración de calcio intracelular y en que distintos comportamientos pueden inducir respuestas diferentes. La liberación de Ca²⁺ desde el retículo endoplasmático (RE) hacia el citosol a través de receptores de inositol 1,4,5-trifosfato (RIP3s) es una componente clave dentro de los mecanismos de señalización por Ca²⁺. Los RIP3s necesitan unir IP3 y Ca²⁺ para abrirse por lo que la liberación de Ca²⁺ a través de un único RIP3 puede inducir la apertura de otros canales vecinos, mecanismo que se conoce como liberación de calcio inducida por calcio o CICR por las siglas en inglés. Los RIP3s aparentemente se organizan en cúmulos sobre la membrana del RE (clusters). Si el CICR se encuentra limitado a un cluster, las señales pueden permanecer localizadas (puffs). En caso contrario, pueden convertirse en ondas que se propagan entre clusters. Los puffs son los ladrillos de construcción de esas señales más globales que se propagan por toda la célula. Por este motivo, existe un gran interés en la determinación de las propiedades de los puffs, especialmente en vista de la actual controversia sobre la distribución espacial de los RIP3s activables. Las señales de calcio, por otro lado, pueden remodelarse a través de varios mecanismos, entre ellos, el atrapado del Ca²⁺ por parte de buffers. Éstos no sólo disminuyen la concentración de Ca²⁺ libre sino que modifican su distribución espacio-temporal de distintos modos dependiendo de su cinética. Los puffs de Ca²⁺ se han observado en células intactas con técnicas ópticas mostrando que son intrínsecamente estocásticos. La obtención de una imagen correcta de la dinámica de los eventos entonces implica ser capaz de detectar todo el rango de tama~ nos de puffs. Éstos se observan usando indicadores de Ca²⁺ de una longitud de onda visible y buffers exógenos lentos (por ej; EGTA) para disrumpir el CICR entre clusters. Los indicadores de única longitud de onda aumentan su uorescencia al ligar calcio. De esta manera, generan imágenes que dependen fuertemente de su cinética, transporte y propiedades fotofísicas. Por este motivo, es de particular importancia determinar los artefactos que generan las condiciones del experimento. La propia existencia de los puffs depende de que los RIP3s están organizados en cúmulos. Una distribución uniforme de receptores debería dar lugar típicamente a señales propagantes tipo ondas. Los ovocitos de Xenopus laevis son un sistema experimental ventajoso para estudiar estas señales. Durante la fertilización se evoca una onda de Ca²⁺ que se propaga por toda la célula. La fertilización ocurre en el huevo maduro. Se ha observado que, al madurar el ovocito, su RE se configura y la distribución de los RIP3s parece ser más uniforme. Esto tiene un correlato en las características de las señales evocadas en los ovocitos maduros. En esta Tesis se combinaron experimentos, un análisis teórico y simulaciones numéricas para evaluar de qué modo la geometría de la distribución de canales se combina con alguno de los otros aspectos que in uyen sobre la distribución de calcio libre para determinar las características de las señales. El primer aporte fue introducir un método que permite establecer clases equivalentes de experimentos de obtención de imágenes realizados en condiciones diferentes, donde la clase está determinada por la relación señal-ruido que predice el método. Éste también puede utilizarse para estimar el tamaño de las señales más pequeñas que pueden observarse de manera confiable con cada arreglo y para generar imágenes de uorescencia numéricamente con ruido realista. Esta Tesis también contribuyó a estudiar si la presencia del indicador o del EGTA en distintas condiciones experimentales altera la dinámica intracelular de Ca²⁺, en particular, analizar si son capaces de detectar puffs de Ca²⁺ con similar precisión y de qué modo las distintas configuraciones experimentales afectan las propiedades de los puffs observados y la dinámica del Ca²⁺ subyacente. Se pudo determinar que aunque el indicador o el EGTA no alteran la dinámica intracluster del Ca²⁺, el conjunto de eventos observables del experimento es diferente dependiendo del grado de acoplamiento entre clusters. El estudio, por otro lado, permitió inferir que los puffs con mayor liberación de Ca²⁺ provienen de cúmulos donde los RIP3s están muy cerca unos de otros. Para estudiar en más detalle la disrupción del CICR entre clusters vecinos que inducen los buffers lentos, se realizaron experimentos utilizando simultáneamente dos indicadores de calcio de distinta cinética. Utilizando el método introducido pudimos confirmar nuestra conclusión previa sobre cómo se modifica el conjunto de eventos que se evoca en presencia de buffers lentos. Por otro lado, determinamos que la presencia de buffers rápidos da lugar a liberaciones de Ca²⁺ más prolongadas tal vez debido a que reducen el efecto inhibidor del Ca²⁺ sobre los RIP3s. En relación a la razón por la que los buffers lentos disrumpen el acoplamiento entre clusters pudimos concluir que su presencia disminuye el Ca²⁺ basal, aunque no tanto como para explicar la disrupción. El análisis de la diferente distribución espacio-temporal de los buffers lentos y rápidos parecería indicar la presencia de RIP3s en el espacio entre clusters que podrían ser "silenciados" por los buffers lentos evitando así la propagación de las señales entre cúmulos. Finalmente, en la Tesis se han mostrado también resultados preliminares de señales de calcio que se observan en células maduradas, cuyos cambios pueden explicarse en términos de una distribución espacial distinta de RIP3s.

Abstract:
Ca²⁺ signals are ubiquitous and play a relevant role in numerous physiological processes as fertilization or cell death. Their versatility relies on the variety of spatiotemporal behaviors that the intracellular calcium concentration can display and that different behaviors can induce different end responses. Ca²⁺ release from the endoplasmic reticulum (ER) into the cytosol through inositol 1,4,5-trisphosphate receptors (IP3Rs) is a key component of the Ca²⁺ signaling toolkit. IP3Rs need to bind IP3 and Ca²⁺ to become open an therefore. Therefore, Ca²⁺ released through one open IP3R can induce the opening of neighboring ones, a mechanism that is knwon as Calcium Induced Calcium Release (CICR). IP3Rs are apparently organized in clusters. The signals can remain localized (i.e., Ca²⁺ puffs) if CICR is limited to one cluster or become waves that propagate between clusters. Puffs are the building blocks of global signals that propagate throughout the cell. Thus, there is great interest in determining puff properties, especially in view of the current controversy on the spatial distribution of activatable IP3Rs. Moreover, calcium signals can be remodeled through various mechanisms, such as Ca²⁺ buffers. Buffers not only decrease the concentration of free Ca²⁺ but also modify its spatial and temporal distribution in different ways depending on their kinetics. Ca²⁺ puffs have been observed in intact cells using optical techniques showing that they are intrinsically stochastic. Obtaining a correct picture of their dynamics then entails being able to detect the whole range of puff sizes. Puffs are usually observed using visible single-wavelength dyes and slow exogenous buffers (e.g., EGTA) to disrupt intercluster CICR. Single-wavelength dyes increase their uorescence upon calcium binding producing images that are strongly dependent on their kinetic, transport and photophysical properties. Thus, determining the artifacts that the imaging setting introduces is particularly relevant. The very existence of puffs depends on the fact that IP3Rs are organized in clusters. A uniform distribution of receptors should typically lead to waves-like (propagating) signals. Xenopus laevis oocytes are an advantageous biological system to study these signals since Ca²⁺ release from the ER only occurs through IP3Rs. During fertilization a Ca²⁺ wave that propagates throughout the cell is evoked. Fertilization occurs in the mature egg. It has been observed that maturation of the oocyte induces a reorganization of the ER whereas IP3Rs seem to be distributed more uniformly on its membrane. This has its counterpart on the properties of the Ca²⁺ signals that are evoked in mature oocytes. In this Thesis we have combined experiments, theoretical analyses and numerical simulations to evaluate in which ways the geometry of the channel distributions interacts with the other aspects that affect the intracellular Ca²⁺ dynamics to determine the characteristics of the signals. The first contribution of this Thesis was to introduce a method that establishes equivalence classes of Ca²⁺ imaging experimental conditions, where the class is determined by the signal-to-noise ratio that is predicted by the method. The method can also be used to estimate the smallest signals that can reliably be observed with each experimental setting and to produce numerically generated Ca²⁺ images with realistic noise. The Thesis also contributed to study to what extent experiments performed with different dyes and/or alter the intracellular Ca²⁺ dynamics, in particular, if they are able to detect Ca²⁺ puffs with similar accuracy and in which ways the different experimental conditions affect the observed puff properties or the underlying dynamics of Ca²⁺ itself. We could determine that, although the dye or EGTA does not alter the intra-cluster dynamics, the set of observable events is different depending on the degree of inter-cluster coupling/uncoupling that is induced by the experimental conditions. An analysis of the observations allowed us to show that the events with the largest amounts of released Ca²⁺ came from clusters with densely packed active IP3Rs. To study in more detail the way in which slow buffers disrupt the inter-cluster CICR experiments were performed using two calcium dyes of different kinetics simultaneously. Applying the method introduced previously in the Thesis we could confirm our previous conclusion on how the set of events that is evoked is modified in the presence of slow buffers. We determined that the presence of fast buffers, on the other hand, results in longer periods of Ca²⁺ release perhaps because they reduce the inhibitory effect of Ca²⁺ on IP3Rs. With respect to the way in which the slow buffers disrupt the inter-cluster coupling we could conclude that their presence decreases basal Ca²⁺, although not enough to explain the disruption. The analysis of the different spatial and temporal distribution of Ca²⁺ bound to slow and fast buffers that is observed in the experiments seems to indicate that there are IP3Rs in the space between clusters that could be silenced by the slow buffers thus preventing the propagation of signals between clusters. Finally, in the Thesis we have also shown preliminary results on calcium signals observed in mature cells, whose changes can be explained in terms of a different spatial distribution of IP3Rs with respect to the case of immature oocytes.

"Interacción entre la respuesta trombótica y la respuesta inflamatoria en el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH)" (2016-03-29). Abrey Recalde, María Jimena. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El Síndrome Urémico Hemolítico (SUH), enfermedad caracterizada por anemia hemolítica, trombocitopenia y falla renal aguda, está asociado a infecciones enterohemorrágicas con Escherichia coli productores de toxina Shiga (Stx) (STEC). Si bien el daño endotelial, generado por Stx, ha sido reconocido como el principal evento que conduce al estado protrombótico en el SUH, existen otros mecanismos que todavía no han sido completamente identificados. La interacción entre la respuesta trombótica e inflamatoria ha sido recientemente reportada en diversas patologías y dada la importancia de ambas en el SUH, hipotetizamos que podría tener un rol destacable en su desarrollo. En efecto, nuestro objetivo fue evaluar los mecanismos de activación de la respuesta trombótica y su interacción con la respuesta inflamatoria en el SUH. Utilizando un modelo murino de SUH, detectamos que Stx2 indujo directa o indirectamente una marcada activación plaquetaria que contribuyó con la respuesta inflamatoria a través de la activación del sistema de complemento y la formación de complejos entre Plaquetas y leucocitos polimorfonucleares (PMN). Por otro lado, en un sistema in vitro, se vió que Stx2 indujo un daño endotelial que derivó en la activación y adhesión plaquetaria. Por último, en ambos modelos, se observó la capacidad del antioxidante N-acetil-L-Cisteína (NAC) de prevenir los efectos protrombóticos de Stx2. En conclusión, en esta tesis hemos descripto como Stx2, mediante el daño endotelial, activa la respuesta trombótica y como el estrés oxidativo contribuye a este proceso. Asimismo hemos probado la participación de las plaquetas en la activación de la respuesta inflamatoria. Finalmente, dados los efectos preventivos de la NAC proponemos su uso en la etapa prodrómica de la diarrea.

Abstract:
Hemolytic uremic syndrome (HUS) is a disease caracterized by hemolytic anemia, thrombocytopenia and acute kidney failure. HUS is associated with Shiga toxin (Stx) producing Escherichia coli (STEC) infections. While endothelial damage induced by Stx , has been recognized as the main event leading to the prothrombotic state in HUS, there are other mechanisms that have not yet been fully identified. The interaction between thrombotic and inflammatory response has been recently reported in various diseases, since both are important in HUS, we hypothesize that could have a prominent role in its development. In fact, our objective was to evaluate the activation mechanisms of thrombotic response and its interaction with the inflammatory response in HUS. Using a mouse model of HUS, we found that Stx2 directly or indirectly induced a marked platelet activation wich contribute to the inflammatory response through activation of the complement system and the formation of complexes between platelets and polymorphonuclear leukocytes (PMN). Moreover, in an in vitro system, it was found that Stx2 induced endothelial damage that led to the activation and platelet adhesion. Finally, we observed in both models, the ability of antioxidant drug N-acetyl-L-Cysteine (NAC) to prevent Stx2 prothrombotic effects. In conclusion, in this thesis we have described that Stx2 through endothelial damage, enhances the thrombotic response and the oxidative stress contributes to this process. We have also tested the involvement of platelets in activation of inflammatory response. Finally, given the preventive effects of NAC we propose its use in the prodromal stage of diarrhea.

"Interacción entre las vías de transducción de señales activadas por el receptor de progesterona y las activadas por receptores con actividad de tirosina quinasa tipo I y II en cáncer de mama" (2002). Labriola, Leticia. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Existe numerosa evidencia que indica que los progestágenos están involucrados en el control de la tumorigénesis mamaria. A pesar de ello, los mecanismos por los cuales las hormonas esteroideas estimulan el crecimiento de células de cáncer de mama no han sido todavía descifrados completamente. Uno de los mecanismos propuestos ha sido la regulación de la expresión de factores de crecimiento que actuarían como mitógenos de las células tumorales. En particular, se ha demostrado previamente en el laboratorio que Heregulina (HRG), ligando de receptores con actividad de tirosina quinasa (RTK) tipo I, estimula el crecimiento de células epiteliales provenientes de cultivos primarios del tumor mamario progestágeno-dependiente C4HD y potencia los efectos mitogénicos del acetato de medroxiprogesterona (MPA) (Balañá et al., 1999; 2001). La primera parte del presente trabajo se centró en el estudio de interacciones entre los caminos de señalización activados por progestágenos y por RTKS tipo I y II en el modelo de carcinogénesis mamaria inducida por acetato de medroxiprogesterona en ratones Balb/c (Molinolo et al., 1987; Lanari et al., 1989). El tratamiento de las células C4HD con MPA indujo tanto el aumento de los niveles proteicos de ErbB-2 como el aumento de su fosforilación. Habíamos demostrado anteriormente que el receptor tipo I del factor de crecimiento similar a la insulina (IGF-IR) y el ErbB-2 están involucrados en la proliferación de estas células mediada por MPA. Al estudiar el bloqueo simultáneo de ErbB-2 y IGF-IR sobre la proliferación inducida por MPA, no se observaron efectos aditivos ni sinérgicos. Efectos aditivos hubieran sido esperados si IGF-IR y ErbB-2 activaran vías de señalización independientes. Una interacción sinérgica hubiera existido si el camino de transducción de señales activado por uno de los receptores potenciara el del otro receptor. Por lo tanto tan sólo un mecanismo que involucrara una interacción jerárquica entre IGF-IR y ErbB-2, en el cual uno de ellos es esencial para la activación de del otro, podía explicar nuestros resultados. En efecto, al suprimir la expresión del IGF-IR, la fosforilación del ErbB-2 inducida por MPA se vio totalmente inhibida. Sin embargo, el bloqueo de la síntesis de ErbB-2 no afectó la fosforilación del IGF-IR. Estos resultados muestran la existencia de una interacción jerárquica entre IGF-IR y ErbB-2; por medio de la cual IGF—IR dirige la activación de ErbB-2. Se demostró, por primera vez, que esta interacción involucra la asociación física de ambos receptores en un complejo heteromérico. Es más, experimentos de microscopía confocal laser mostraron que el MPA fue capaz de inducir la co-localización de ErbB-2 y IGF-IR. El propósito de la segunda parte del trabajo fue el de investigar la capacidad de HRG de activar al receptor de progesterona (RP) utilizando el mismo modelo experimental que en la primera parte. Es así que pudimos observar que HRG fue capaz de regular las características bioquímicas del RP en forma similar a la efectuada por la activación del receptor luego de la unión a un progestágeno. Se encontró que HRG fue capaz de inducir una disminución de los niveles proteicos de ambas isoformas, A y B, del RP y de disminuir la cantidad de sitios específicos de unión a progestágenos. Además, el tratamiento con HRG produjo un aumento de la proporción de RP con localización nuclear. Estudios posteriores nos permitieron saber que el tratamiento con HRG podía también inducir la unión del RP a su elemento respondedor en el ADN(PRE) y aumentar la transcripción de un gen reportero que contenía dos PRE en su promotor. Un antiprogestágeno como el RU486 provocó la inhibición de la activación transcripcional del RP mediada por HRG. Al profundizar en los mecanismos moleculares que estaban involucrados en los efectos de la HRG sobre el RP, pudimos observar que era necesaria la presencia de ErbB-2 funcional así como de proteínas quinasas activadas por mítógenos (MAPK) en su estado activo. Es más, MAPKs activadas por HRG tuvieron la capacidad de fosforilar al RP en ensayos de fosforilación in vitro. Los mismos estudios se realizaron en la línea de carcinoma mamario humano T47D obteniéndose resultados similares. Nuestros resultados mostraron que, en ausencia de progestágenos, HRG activa al RP tanto murino como humano mediante un mecanismo que requiere la presencia de ErbB-2 funcional así como la activación de MAPKs.

Abstract:
Accumulated evidence has indicated that progestins are involved in controlling mammary tumorigenesis. Although the mechanisms by which steroid hormones stimulate growth of breast cancer cells have not been completely deciphered, regulation of the expression of growth factors which in turn act as mitogens for tumor cells, has already been proposed. Particularly, we have previously demonstrated that Heregulin (HRG) stimulates gowth of primary cultures of the progestin-dependent C4HD mammary tumor epithelial cells and potentiates medroxyprogesterone acetate (MPA) mitogenic effects (Balañá et al., 1999; 2001). The first part of the present study focused on interactions between signaling pathways activated by progestins and by type I and II receptor tyrosine kinases (RTKs) in mammary tumors. An experimental model in which the synthetic progestin medroxyprogesterone acetate (MPA) induced mammary adenocarcinomas in Balb/c mice was used (Molinolo et a|., 1987; Lanari et al., 1989). MPA-stimulated proliferation of epithelial cells from primary cultures of progestin-dependent tumors induced up-regulation of ErbB-2 protein levels and tyrosine phosphorylation of this receptor. Recent findings in our laboratory indicate that type I insulin-like growth factor receptor (IGF-IR) and ErbB-2 are involved in proliferative signaling pathways in C4HD cells. Thus, we investigated the potential antiproliferative effect of the simultaneous downregulation of ErbB-2 and IGF-IR. The simultaneous blockage of ErbB-2 and IGF-IR showed neither synergistic nor additive effects on the inhibition of MPA induced proliferation of C4HD cells. Additive effects could have been expected if IGF-IR and ErbB-2 targeted different independent signaling pathways. Synergistic interaction could have been existed if one receptor pathway potentiated the other receptor biochemical pathway. Thus, only a mechamism involving a hierarchical interaction between IGF-IR and ErbB-2, wherein one of the receptors is essential for the activation of signal transduction pathways elicited by the other, could fit our results. In fact, suppression of IGF-IR by antisense oligodeoxinucleotides (ASODN) resulted in complete abrogation of MPA-induced phosphorylation of ErbB-2 in C4HD cells, whereas blockage of ErbB-2 did not affect IGF-IR phosphorylation. These results show the existence of hierarchical interactions between IGF-IR and ErbB-2, by means of which IGF-IR directs ErbB-2 phosphorylation. We demonstrated, for the first time, that this hierarchical interaction involves physical association of both receptors, resulting in the formation of a heteromeric complex. Furthermore, confocal laser microscopy experiments demonstrated that MPA was able to induce colocalization of ErbB-2 and IGF-IR. The aim of the second part of this study was to investigate the capacity of HRG to activate progesterone receptor (PR) by using the same model of hormonal mammary carcinogenesis. We first found that HRG was able to induce a decrease on PR A and B isoforms at protein level and to promote a significant increase in the nuclear localization of PR. Further studies allowed us to know that HRG was also able to induce PR binding to a progesterone response element (PRE) and significantly increased the transcription of a reporter gene with two PREs in its promoter. When we investigated molecular mechanisms involved in HRG action, we found that both the presence of functional ErbB-2 and activation of mitogen-activated protein kinases (MAPK)were needed. Additionally, HRG activated-MAPKs were able to phosphorylate PR in vitro. This PR activation by HRG was also seen in T47D human breast cancer cells. Our findings demonstrated that in the absence of progestins, HRG activates PR in both human and mouse breast cancer cells by a mechanism that requires both a functional ErbB-2 and MAPK activation. In addition, herein we provide the first evidence that MAPK activated by HRG are able to phosphorylate human and mouse PR in vitro.

"Interacción entre lectinas y glicanos en procesos de neovascularización tumoral: implicancias en estrategias de inmunoterapia en cáncer" (2011). Croci Russo, Diego Omar. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Uno de los desafíos de la biología tumoral consiste en la búsqueda de mecanismos que vinculen fenómenos de hipoxia y angiogénesis. En función del papel crítico de galectina- 1 (Gal1) en la progresión tumoral investigamos su relevancia en fenómenos de neovascularización. El análisis funcional del perfil de glicosilación de células endoteliales reveló una amplificación preferencial del repertorio de glicanos críticos para la unión de Gal1 en células endoteliales expuestas a estímulos tolerogénicos, proliferatívos e hipóxicos típicos de microambientes tumorales. De acuerdo a estos hallazgos, observamos que Gal1 interacciona con células endoteliales principalmente en N-glicanos promoviendo proliferación, migración/invasión y tubulogénesis a través de mecanismos dependientes de las vías de señalización de VEGFR2, PI3K-Akt y Erk1/2, mimetizando de este modo el efecto biológico del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF). Por otro lado, verificamos que Gal1 se encuentra asociada a Nglicanos presentes en VEGFR2 e induce su activación y segregación en estructuras tipo "lattices". En tal sentido, los fenómenos de migración y tubulogénesis inducidos por Gal1 fueron bloqueados al utilizar anticuerpos anti-VEGFR2 o al inhibir la disponibilidad de N-glicanos complejos en células endoteliales. A los fines de evaluar la regulación de la expresión de Gal1 en células tumorales se incubaron células de Sarcoma de Kaposi (KS) en condiciones de hipoxia (1% O2), observándose un incremento marcado en la expresión de esta lectina a través de mecanismos dependientes de la activación del factor de transcripción NF-κB y especies reactivas del oxígeno (ROS) e independientes del factor inducible por hipoxia (HIF)-1α. Dicha expresión fue crítica para el crecimiento y la neovascularización de tumores humanos KS y murinos B16 in vivo. La relevancia fisiopatológica de estos hallazgos fue determinada a través de la inhibición de la expresión de Gal1 utilizando estrategias de silenciamiento (shRNA). El bloqueo de la expresión génica de Gal1 logró inhibir la capacidad pro-angiogénica de tumores KS in vivo e in vitro. El análisis por inmunohistoquímica de diversas patologías vasculares humanas reveló que Gal1 se expresa selectivamente en patologías malignas, confirmando el impacto clínico de nuestros hallazgos. Finalmente, y con el objetivo de validar una estrategia terapéutica basada en el bloqueo de Gal1 en el microambiente tumoral, desarrollamos un panel de anticuerpos monoclonales anti-Gal1 bloqueantes los cuales lograron neutralizar los efectos pro-angiogénicos e inmunosupresores de esta lectina in vitro e in vivo. En forma notable, el bloqueo de Gal1 en tumores B16 logró remodelar la vasculatura tumoral e inducir un marcado incremento en el infiltrado inflamatorio, el cual fue capaz de montar respuestas antitumorales dependientes de células Th1 y Th17. Este efecto fue asociado no sólo al bloqueo de la capacidad inmunosupresora de Gal1 sino también a un efecto ‘normalizador’ sobre el endotelio permitiendo la maduración de pericitos y el influjo de células T al parénquima tumoral. En conjunto, los resultados del presente trabajo de tesis demuestran que Gal1 participaría activamente en la generación de un microambiente tumoral pro-angiogénico e inmunosupresor, en el cual la hipoxia, a través de la expresión de esta lectina y sus glicanos, modularía compartimientos inmunológicos y vasculares, favoreciendo fenómenos de angiogénesis y crecimiento tumoral. De este modo, el presente estudio permite vincular, a partir del reconocimiento de lectinas y sus ligandos específicos fenómenos de hipoxia con programas inmunológicos y de neovascularización. A su vez sugiere nuevos enfoques en el diagnóstico y tratamiento de tumores, dando luz a la primera herramienta terapéutica capaz de modular en forma específica la interacción entre Gal1 y sus glicanos interrumpiendo simultáneamente fenómenos de angiogénesis y escape tumoral.

Abstract:
Novel strategies are needed to circumvent resistance to anti-angiogenic therapies. Here we identify a glycosylation-regulated mechanism, based on arrangements of lectin-glycan lattices, which links tumor hypoxia to VEGFR2-mediated angiogenesis through HIF-1α- and VEGF-independent pathways. Concomitant with selective remodeling of endothelial cell surface glycans, hypoxia promoted ROS/NF-κBdependent up-regulation of tumor-derived galectin-1 (Gal1), which signaled angiogenesis through binding to complex N-glycans on VEGFR2. Targeted disruption of Gal1-glycan lattices, using shRNA strategies, mAb-mediated blockade or interruption of N-glycan elongation, attenuated hypoxia-driven angiogenesis, while promoting pericyte maturation and vascular remodeling, thereby favoring influx and expansion of immune cells and suppression of tumor growth. Thus, hypoxia-regulated interactions between endogenous lectins and complex N-glycans on cognate receptors can create functional signaling clusters that substitute for canonical ligands to modulate endothelial cell biology and preserve angiogenesis. These findings highlight the versatility of endogenous lectins and the dynamics of the ‘glycome’ during cancer progression and provide the first evidence of a multitargeted agent capable of promoting vascular remodeling and overcoming tumor immunosuppression through specific interruption of lectin-glycan lattice formation.

"Interacción hiperfina en sistemas poliatómicos" (1966). Passeggi, Mario César. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Interacción plantas-aves dispersoras de semillas en un bosque chaqueño semiariado" (1996). Caziani, Sandra Mónica. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El objetivo fue analizar la respuesta de las aves dispersoras de semillas a variaciones temporales y espaciales de la oferta de frutos nutritivos. Los frutos carnosos se concentraron en el sotobosque y maduraron en la estación húmeda (octubre-marzo). Tres especies de aves fueron las responsables de la mayor parte de la dispersión de frutos: la charata (Ortalis canicollis) residente permanente, y el zorzal blanco (Turdus amaurochalinus) y el fío pico corto (Elaenia parvirostris) . Las poblaciones de las dos últimas especies residieron en el bosque solo en la estación húmeda coincidiendo con el pico de oferta de frutos carnosos. La charata, en la estación seca consumió menor cantidad de frutos que en la húmeda. Aves de mayor tamaño en relación a la longitud alar, con picos comprimidos, se alimentaron percheando y en grupos (charatas, y zorzales en menor grado) y aves más livianas y solitarias, con picos deprimidos, tomaron los frutos en vuelo (fíos). Los zorzales consumieron significativamente más frutos de especies con grandes cosechas que los fíos y esta tendencia fue similar entre bosques primarios y secundarios, y entre años de muestreo. El sotobosque fue pobre en frutos y frugívoros en comparación con pequeños claros dentro del bosque y ecotonos bosque-pastizal.

Abstract:
The objective was analized the responses of frugivorous birds to temporal and spatial changes of fruit availability. Fleshy fruits were concentrated in the understory ripening in the wet season (october to march). Three bird species dispersed great part of the fruits: the Chaco Chachalaca (Ortalis canicollis) permanent resident, and the Creamy-bellied Thrush (Turdus amaurochalinus) and the Small-billed Elania (Elaenia parvirostris). The two laters were spring-summer residents, stayed in the woodland during the fruiting peak. The Chaco Chachalaca ate more fruit in the wet season than in the dry season. Great body size to the wing's long, and narrow bill were asociated with gregarious birds that taken fruits from perches (chachalacas and thrushes). Thrushes mainly consumed bunched fruits in comparison with Elaenias and this pattern was similar between forest and years. Elaenias (small body size, flat bills) flew for fruits. Intact forest undestory was consistently poor in both fruit availability and avian disperser captures than gaps, and ecotones between forest and natural grassland.

"Interacción química del herbicida glifosato y compuestos relacionados con Fe (III)" (1999). Barja, Beatriz Carmen. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En este trabajo se realizó el estudio de las reacciones químicas en solución acuosa y en estado sólido del herbicida glifosato (N-fosfonometilglicina, (PMG)) y compuestos relacionados (ácidos metilfosfónico (MPA), aminometilfosfónico (AMPA), sarcosina (N-metilglicina (MG)) con Fe(III) así como el de las reacciones de adsorción sobre la superficie de óxidos en suspensión acuosa. Se evaluaron los espectros ATR-FTIR en solución acuosa de los cuatro ligandos y se determinaron las constantes ácido-base del MPA y del PMG. Se estudiaron las interacciones químicas del PMG,el MPA y el AMPA con Fe (III) en solución acuosa obteniéndose un complejo de relación 1:1 metal:ligando. Para la Sarcosina no se observo formación del complejo en las condiciones del presente trabajo. Se sintetizaron los complejos en estado sólido del MPA,AMPA, y PMG con Fe(III), Al(III) y Co(III). Se obtuvieron compuestos de relación 2:3, 1:2 y 1:1 para Fe(III):MPA, Fe(III):AMPA y Fe(III):PMG respectivamente; 1:2 para Co(III):PMG y 1:1 para Al(III):PMG. Se estudiaron e interpretaron los espectros interfaciales de los complejos superficiales formados por los diferentes ligandos sobre la goethita. Se propusieron tres estructuras para los complejos con MPA y AMPA a las que se agrega una cuarta para el caso del PMG. Se midieron las movilidades electroforéticas de MPA/goethita y PMG/goethita para evaluar las cargas superficiales remanentes sobre el óxido de hierro debidas a la presencia de los complejos superficiales propuestos. Se realizó un estudio detallado de las isotermas de adsorción sobre goethita en función del pH y concentraciones variables de MPA,AMPA y PMG. Se determinaron las constantes de complejación superficial utilizando el modelo de la capacitancia constante.

Abstract:
The study of the chemical reactions in aqueous solution and solid state of glyphosate (N-phosphonomethylglycine, (PMG)) and related compounds (methylphosphonic acid (MPA), aminomethylphosphonic acid (AMPA), sarcosine (N-methylglycine (MG)) with Fe(III) was performed. The adsorption processes onto iron (III) oxides are also presented. The ATR-FTIR spectra of the four ligands were evaluated and the acid-base constants for MPA and PMG were calculated. The chemical interactions in aqueous solutions of PMG, MPA and AMPA with Fe (III) were evaluated. A 1:1 metal:ligand ratio complex was obtained for each ligand. The sarcosine complex formation was not observed for our experimental conditions. The complexes of MPA, AMPA, and PMG with Fe(III) in solid state were synthesized. A metal:ligand ratio of 2:3, 1:2 and 1:1 for Fe(III):MPA, Fe(III):AMPA and Fe(III):PMG respectiver are reported. The complexes of PMG with Co(III) and Al(III) were also obtained with a metal:ligand ratio of 1:2 and 1:1 respectively. The interfacial spectra of the surface complexes onto goethite were studied. Three surfaces complexes were postulated for MPA and AMPA, while a fourth one was necessary to explain the PMG/goethite adsorption behaviour. Electrophoretic mobilities were measured for MPA/goethite and PMG/goethite systems. The surface charge on iron oxide due to the presence of the surface complex was evaluated. The adsorption isotherms were studied for MPA,AMPA and PMG. The pH and concentration dependence was measured and the surface complexes formation constants were calculated using the constant capacitance model.

"Interferencia del aluminio con el metabolismo del hierro" (2003). Pérez, Gladys Mabel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El aluminio (Al) es un elemento ampliamente distribuido en la Naturaleza, de hecho, el tercero en abundancia. A pesar de su ubicuidad, no posee una función biológica conocida, por lo tanto, su incorporación a los seres vivos puede provocar signos de toxicidad. La sobrecarga con Al ha sido asociada con la aparición de diferentes desórdenes, tales como: defectos óseos, encefalopatía y alteraciones hematológicas. Estos signos de toxicidad, aunque fueron inicialmente detectados en pacientes con insuficiencia renal crónica, pueden presentarse también en individuos con función renal intacta. El extenso uso de este elemento en la vida cotidiana lo convierte en un riesgo potencial para la población en general. Una vez ingresado al organismo, el Al es conducido a través del torrente sanguíneo por la misma proteína que transporta hierro (Fe), la transferrina (Ti) y acumulado en distintos órganos y tejidos. Diversos antecedentes permitieron relacionar la acumulación de Al con el desarrollo de anemia. Por lo tanto, el objetivo planteado para desarrollar este trabajo de investigación fue estudiar la interferencia del Al con el metabolismo normal de Fe. Para ello, se emplearon células de la línea eritroleucémica K562, las cuales expresan receptores específicos para Tf (RTf y RTf2) en su membrana y experimentan maduración eritroide por la acción de inductores, tales como hemina y butirato de sodio. Los resultados demostraron que el Al interfiere con el proceso de diferenciación celular, ya que provoca disminución del número de células hemoglobinizadas. El cálculo de las Kd correspondientes mostró que el RTf posee afinidad similar por los complejos Tf-Fe y Tf-Al, lo cual conlleva al establecimiento de una relación competitiva cuando ambos están presentes simultáneamente en el entorno celular. Esta situación trae como consecuencia la disminución de la incorporación total de Fe y, por lo tanto, de su utilización en la síntesis de hemo. Sin embargo, cuando el Al es removido, dependiendo de la duración de la exposición a este metal y de las condiciones de inducción, la captación de Fe excede a la de las células que no fueron expuestas previamente a Al. Esta observación sugiere la activación de algún mecanismo destinado a compensar la menor incorporación del metal esencial por efecto del Al. La posibilidad de que la expresión del RTf o RTf2 fuera regulada positivamente fue descartada, ya que los niveles de ARNm y de proteína no fueron modificados como consecuencia de la exposición a Al. Además de las vías que median la incorporación de Fe unido a Tf, existen mecanismos alternativos para la captación del metal esencial cuando está presente en la forma de compuestos de bajo peso molecular. La remoción de Al, después de un tratamiento previo, indujo una regulación positiva de estos sistemas de transporte de Fe independientes de Tf. Puede concluirse que la presencia de Al en el entorno celular interfiere la normal incorporación y utilización de Fe. Ello induce una adaptación celular tendiente a alcanzar los niveles del metal esencial requeridos para el metabolismo. La regulación positiva de las vías alternativas de captación de Fe, las cuales no participan en la incorporación de Al, da cuenta de parte de esta respuesta, aunque no puede ser descartada la posibilidad de que la afinidad de los receptores para Tf pueda ser modificada. Sin embargo, a pesar de estas adaptaciones, la presencia continua de Al en el medio impide a las células lograr la utilización adecuada de Fe en la síntesis de hemoglobina.

Abstract:
Aluminum (Al) is widely distributed in Nature and, in fact, it is the third element more abundant. In spite of this, its biological function is not known, and its incorporation to living beings proved to have toxic effects. The exposure to Al has been associated to different disorders, such as: bone defects, encephalopathy, and hematologic alterations. Even though these toxicity signs were first detected in patients with chronic renal deficiency, they may be also observed in people with intact renal functions. The wide use of this metal in everyday life turns it into a potential hazard to the population in general. Once it enters the organism, Al is transported through the bloodstream by transferrin (Tf), the same protein that transports iron (Fe), and it is accumulated in different organs and tissues. Several facts related Al accumulation to the development of anemia. Therefore, the aim of this work was to study Al interference with normal Fe metabolism. Assays were carried out using cells from the erythroleukemic line K562, which express specific receptors for Tf (TfR and TfR2) in their membranes and experienced erythroid maturity due to the action of inducers such as hemin and sodium butyrate. Results showed that Al interferes with the cellular differentiation process causing a decrease in the number of hemoglobinized cells. The determination of the corresponding Kd showed that TfR has similar affinity for complexes Tf-Fe and Tf-Al, thus establishing a competitive relation between them when they are simultaneously present in the cellular environment. This situation triggers a reduction in the total incorporation of Fe and, thus, in its utilization in the synthesis of heme. However, when Al is removed, depending on the length of the exposure and on the induction conditions, Fe incorporation is higher than in cells not previously exposed to Al. This suggests the existence of a certain mechanism developed to compensate the lower essential metal incorporation caused by Al. Positive regulation of TfR or TfR2 expression was discarded since RNAm and protein levels were not modified by Al exposure. Apart from the pathways that mediate Tf-Fe incorporation, there are alternative mechanisms for essential metal uptake when it is in the form of low molecular weight compounds. The removal of Al after a previous treatment induced the positive regulation of these transport systems of Tf-independent Fe. We may conclude that the presence of Al in the cellular environment interferes with normal Fe incorporation and utilization. This induces a cellular adaptation intended to reach the essential metal levels necessary for metabolism. The positive regulation of the alternative Fe uptake pathways, which do not participate in Al incorporation, partly explains this response, but the possibility that the affinity of Tf receptors may be modified should not be discarded. However, in spite of these adaptations, the continuous presence of Al in cellular environment prevents the adequate utilization of Fe in hemoglobin synthesis.

"Interferencia del cadmio sobre el proceso de muda del cangrejo de estuario Chasmagnathus granulata, DANA 1851 (Decapoda, Brachyura)" (2002). Rodríguez Moreno, Paula Abigail. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Este trabajo comprendió el estudio experimental de la posible interferencia del cadmio sobre el proceso de muda del cangrejo Chasmagnathus granulata. Se realizó en primer término la descripción de los distintos estadios y subestadíos del ciclo normal de muda, principalmente a través del estudio setogénico. Esta información permitió desarrollar una herramienta esencial para el seguimiento del ciclo de muda de los animales que se utilizaron en los experimentos posteriores. Estos consistieron tanto en una exposición crónica ai cadmio, in vivo, así como en una exposición aguda al mismo metal, in vitro. Se determinaron numerosas variables en estos experimentos, tales como actividad ATPásica en branquias e hipodermis, contenido de calcio en el caparazón y niveles de ecdiesteroides. Durante la postmuda, la exposición in vitro a cadmio causó una inhibición irreversible sobre la actividad máxima de la Na,K-ATPasa, pero a concentraciones que in vivo resultaron ser letales. Concentraciones subletales ensayadas in vivo, en cambio, no produjeron una inhibición significativa ni sobre la actividad máxima de la Na,K-ATPasa, ni sobre la actividad fisiológica de la enzima (estimada mediante el consumo de oxígeno sensible a ouabaína). En correspondencia con estos resultados, se observó que el proceso de calcificación del exoesqueleto no se veía afectado, en términos del contenido de calcio que presentaban los caparazones en postmuda tardía. De igual modo, se verificó durante la premuda que el proceso de descalcificación del exoesqueleto no se veia significativamente inhibido por la exposición in vivo al metal. Si se encontró durante la premuda un arresto significativo de la muda, a una concentración de cadmio de 0,5 mg/I. Los animales arrestados fueron incapaces de avanzar en el desarrollo setal, quedando detenidos en premuda temprana, correspondiente al comienzo del aumento exponencial de la ecdisona en hemolinfa. Exposiciones que comenzaron en subestadíos posteriores de la premuda, cuando se verifica el pico de ecdisona, no inhibieron la muda, sugiriendo que el cadmio inhibiria la muda mediante la inhibición de la secreción pico de ecdisona esencial para que ésta ocurra.

Abstract:
This study was aimed at evaluating the possible interference of cadmium on the molting process of the estuarine crab Chasmagnathus granulata. Firstly. a description of the different stages and sub-stages of the normal molting cycle was made, by means of the setogenic study. This information allowed us to develop an essential tool for monitoring the molting cycle in the animals used later for all kind of bioassays. These assays comprised a chronic exposure to cadmium, in vivo, as well as an acute exposure to the same heavy metal, in vitro. Several variables were determined during those experiments, such as ATPase activity in gills and hypodermis, calcium content in carapace and ecdysteroids hemolymphatic levels. During postmolt, the in vitro exposure to cadmium caused an irreversible inhibition on the maximum activity of Na,K-ATPase, but at concentrations that were lethal in vivo. Instead, sublethal concentrations assayed in vivo did not produce a significant inhibition neither on maximum Na,K-ATPase activity nor on physiological activity of that enzyme (estimated by means of the oxygen consumption sensitive to oubain). In accordance with these results, no effect of cadmium on the calcification of carapace was noted, in terms of the calcium content of carapaces at the end of postmolt. Correspondingly, no effect of cadmium was observed in the decalcification process that carapace has during premolt. However. during premolt, an exposure to 0.5 mg/I of cadmium caused an arrest of molting. Arrested crabs were unable to progress in the molting cycle, stopped their cycle in early premolt, just before the ecdysteroid level peaked in hemolymph. When the exposure to cadmium begun after that peaking, no inhibition of molting was seen, suggesting that cadmium would inhibit molting by inhibiting the peak secretion of ecdysteroid needed for molting to ocurr.

"Interferometría de banda ancha para la medición de espesores" (2003). Costantino, Santiago. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En esta tesis se presenta el desarrollo de la técnica interferometría de banda ancha en oposición a la interferometría de luz blanca como un método para medir espesores de líquidos y láminas delgadas. Es posible ganar precisión en la medición reduciendo el ancho de banda de la fuente para evitar las distorsiones causadas por la dispersión del material. A partir del análisis de este efecto se refiita el dogma establecido de que el mayor ancho de banda posible es el óptimo. Se demuestra que el conocimiento preciso de la dependencia del índice de refracción con la longitud de onda es imprescindible para una medición adecuada del espesor de un medio dispersivo. El dispositivo experimental presentado es, además, adecuado para obtener esta dependencia con suficiente resolución. En el marco del desarrollo de una técnica capaz de medir con eficiencia espesores de lubricantes, pinturas y barnices, se ilustran los alcances del sistema con la medición del espesor de aceite de siliconas sobre una superficie plana en tiempo real. Finalmente se propone una modificación al esquema experimental con el objetivo de reducir el espesor mínimo mensurable. Se presenta el desarrollo de la Interferometría de tres ondas como la solución para ampliar el rango dinámico de la interferometría de banda ancha.

Abstract:
In this thesis a new technique called Wide Band interferometry is presented as opposed to White-light interferometry to introduce a thickness measurement method for thin films and liquids. It is possible to gain precision by reducing the bandwidth of the light source in order to avoid distortions arising from the material dispersion. The established dogma that the widest possible bandwidth is the optimum falls after the analysis of this effect. It is shown that the precise knowledge of the frequency dependence of the refractive index is essential for an adequate thickness retrieval in optical experiments. The experimental device that is presented is also useful to obtain this information with enough resolution. Regarding the development of a method that allows to efficiently measure the thickness of lubricants, paints and varnishes, an experiment that shows the spreading of a silicone oil on a plane surface in real time is shown. Finally, a modification to the experimental setup is proposed in order to reduce the minimum measurable thickness. Three Wave interferometry is presented as a solution to increase the dynamic range of Wide Band interferometry.

"Interpolación en espacios de Jacobi-Sobolev con pesos y su aplicación a estimaciones de error a posteriori para la versión p del método de elementos finitos" (2015-06-26). Moreno, Verónica. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
En esta tesis analizamos estimaciones de error a posteriori para la versión p del método de elementos finitos (FEM). En primer lugar, mostramos las diferencias que surgen entre el caso unidimensional y bidimensional, al considerar indicadores de error de tipo residual para el problema de Poisson con datos de borde de tipo Dirichlet homogéneos. Mientras que en el caso unidimensional, usando indicadores de error con pesos, se obtienen estimaciones a posteriori para la versión hp de FEM con constantes de equivalencia con la norma energía del error independientes de h y de p [DH], aún no se tienen resultados análogos en más dimensiones. En efecto, las técnicas utilizadas en [DH] no pueden simplemente generalizarse al caso bidimensional y, hasta el momento, para estimadores de tipo residual no se ha podido demostrar que los estimadores propuestos sean equivalentes a la norma energía del error con constantes de equivalencia independientes de p, i.e., del grado del polinomio involucrado. Sin embargo, en esta tesis mostramos que estimaciones de error a posteriori casi-óptimas se pueden obtener si trabajamos en espacios de Jacobi-Sobolev con pesos. Usualmente para hacer un análisis a posteriori del método de elementos finitos se necesitan estimaciones de interpolación para funciones en espacios de Sobolev, así como estimaciones inversas para funciones polinomiales. Por lo tanto, para construir un interpolador en espacios de Jacobi-Sobolev con pesos, introducimos primeramente los polinomios de Jacobi y mostramos sus propiedades para luego llevar a cabo un análisis pormenorizado de la dependencia, tanto del grado del polinomio como del peso, de las constantes involucradas en nuestras estimaciones. Presentamos también un análisis de las estimaciones inversas presentes en la bibliografía, con especial cuidado en estudiar como dependen las constantes del peso que se este considerando. Posteriormente, para el problema modelo de Poisson en dos dimensiones, proponemos un estimador con pesos para la versión p de FEM, y utilizando nuestros resultados de interpolación y las estimaciones inversas, mostramos que estos estimadores son equivalentes al error en alguna norma adecuada, con constantes óptimas en p. Finalmente, mostramos como nuestros resultados se pueden generalizar a la versi´on hp de FEM.

Abstract:
In this thesis we analyse a posteriori error estimations for the p version of the finite element methods (FEM). First, we show the differences that arise between the onedimensional and bidimensional cases when we consider error indicators of the residual type for the Poisson problem with Dirichlet homogeneous boundary data. While in the onedimensional case, using weighted error indicators, we can obtain a posteriori estimations for the hp version of FEM with equivalence constant with the energy norm independents of h and p [DH], no analogous results have been obtained hitherto in more dimensions. In effect, the techniques used in [DH] can not simply be generalized to the bidimensional case, and for the error estimators of the residual type it can not be demonstrated as yet that the proposed estimators are equivalent to the energy norm of the error with equivalence constants independents of p, i.e., of the polynomial degree involved. However, in this thesis we show that quasi optimal a posteriori error estimations can be obtained if we work in Jacobi-weighted Sobolev spaces. Usually, for an a posteriori error analysis of the finite element methods we need interpolation estimates for functions in Sobolev spaces, and inverse estimates for polynomial functions. Therefore, in order to construct an interpolator in Jacobi-weighted Sobolev spaces, first we introduce the Jacobi polynomials and show their properties so as to carry out a detailed analysis of the dependence, of the polynomial degree and the weight, in the constants that are involved in our estimates. We also present an analysis of the inverse estimates that are present in the bibliography, studying with special care how the constants depend on the weight that we are considering. Later, for the two dimensional Poisson model problem, we propose a weighted estimator for the p version of FEM, and using our interpolation results and inverse estimates we show that these estimators are equivalents to the error in some appropriate norm, with optimal constants in p. Finally, we show how that our results can be generalized to the hp version of FEM.

"Interpretación Modal Hamiltoniana en términos de la teoría de grupos y su extensión a la mecánica cuántica relativista" (2011). Ardenghi, Juan Sebastián. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La interpretación modal Hamiltoniana de la mecánica cuántica sostiene que los sistemas, en el ámbito de la realidad cuántica, son haces de propiedades posibles, sin sustancia subyacente. Las propiedades que se hacen actuales, es decir aquéllas que adquieren valor definido instante a instante, no pueden ser todas, ya que esto llevaría a inconsistencias, como lo muestra el Teorema de Kochen-Specker. Esto implica que debemos elegir un contexto de actualización, esto es, un subconjunto de todo el conjunto de propiedades posibles, cuyas propiedades adquieren valores definidos. En este sentido, la interpretación modal-Hamiltoniana elige como contexto de actualización la descomposición átomica del espacio de Hilbert en autosubespacios del Hamiltoniano y todas las composiciones de éstos. Esto permite explicar satifactoriamente varios problemas interpretativos de la mecánica cuántica: el problema de la medición, el problema de la contex- tualidad, el problema de la indistinguibilidad y el problema de la no-localidad, como también permite describir adecuadamente un conjunto de ejemplos físicos típicos de la práctica de la física. Durante el trabajo de esta tesis doctoral, se desarrolló una reformulación de la interpretación modal-Hamiltoniana de la mecánica cuántica. Para ello se aplicaron ideas de la teoría de grupos, con el fin de asegurar la invariancia del contexto de actualización ante el cambio de sistema de referencia. De modo natural, entonces, se definió el contexto de actualización como aquel identificado por los operadores de Casimir del grupo de simetría de la mecánica cuántica: el grupo de Galileo extendido centralmente. Posteriormente se estudió la posibilidad de extender estas ideas al ámbito de la teoría cuántica relativista, donde el grupo de simetría es el de Poincaré y algún otro grupo de simetría interna compacto. Finalmente, con el fin de asegurar que los observables con valores actuales en las teorías relativistas y no relativistas estuviesen correctamente relacionados a través de un límite adecuado, se empleó una contracción de Inönü-Wigner del grupo de Poincaré extendido trivialmente al grupo de Galileo extendido centralmente. De este modo, los operadores de Casimir de ambos grupos quedaron correctamente relacionados y se pudo definir la regla de actualización correspondiente al ámbito relativista

"Invariantes en álgebras de Banach" (1985). Suárez, Fernando Daniel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Invasión de Hieracium pilosella L. en pastizales de Tierra del Fuego" (2011). Rauber, Ruth Bibiana. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El principal objetivo de este trabajo es estudiar los patrones a distintas escalas de la invasión reciente de la especie vegetal Hieracium pilosella, una maleza exótica común en pastizales templado-fríos. A partir de un relevamiento de 172 sitios distribuidos en toda la región de estepa de la provincia de Tierra del Fuego, Argentina, se estimó la distribución y abundancia de la especie en el área con técnicas geoestadísticas y se evaluó la relación de la cobertura de H. pilosella con la composición florística, la abundancia de formas de vida, la riqueza y la diversidad de cada sitio relevado. Hieracium pilosella se encuentra diseminada en toda la región con baja abundancia media, asociada principalmente a matorrales de Chiliotrichum diffusum, correlacionada positivamente con la riqueza y diversidad de los sitios invadidos a escala regional y presenta focos de invasión asociados a sitios disturbados. En matorrales está correlacionada positivamente con las demás dicotiledóneas herbáceas. A escala de pocos metros, mediante un experimento de campo se observó una gran colonización y un importante aumento de cobertura, independientemente del tratamiento de disturbio y del pastoreo. Por último, utilizando modelos lineales generalizados y herramientas de Sistemas de Información Geográfica se encontró que los disturbios y el tipo de comunidad vegetal están significativamente asociados al éxito de H. pilosella a escala regional y se utilizaron, junto con datos de abundancia de la especie, para proponer un mapa de riesgo regional a la invasión.

Abstract:
The aim of this research is to study pattern at different scales of the recent invasion of the plant Hieracium pilosella, a common weed of template-cold grasslands. Data were taken in 172 sites distributed in whole steppe region of the Tierra del Fuego province, Argentina. With this data, the distribution and abundance of the species in this area were estimated with geostatistics. Also, the relationships among Hieracium pilosella cover and floristic composition, growth forms abundance, richness, and diversity of visited sites were evaluated. Hieracium pilosella is spread in whole region with low mean abundance, mainly associated to Chiliotrichum diffusum scrubs. It is positively correlated to richness, and to diversity of invaded sites at regional scale and it displays invasion focus associated to disturbed sites. In scrubs it is positively correlated to other forbs. A few meters scale, great colonization and cover increase were observed in a field experiment, independently of disturbance and grazing treatment. In last time, disturbance and vegetal community type were found to be related to success H. pilosella at regional scales and, with species abundance data, a risk invasion map was proposed using generalized linear models and Geographic Information Systems.

"Inversión parental en el Pingüino de Magallanes (Spheniscus magellanicus): asincronía de eclosión, causas próximas y últimas" (2015-06-25). Barrionuevo, Melina. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Durante los años 2010 a 2013 se estudió la biología reproductiva del Pingüino de Magallanes (Spheniscus magellanicus) que se reproduce en la Isla Quiroga, Santa Cruz, Argentina (47°45´S, 65°53´W). Investigando la inversión parental que realizan los padres en los huevos de una misma nidada, y las consecuencias que esa inversión y otras variables provocan en el crecimiento y mortalidad de los pichones. Además, se investigó la asincronía de eclosión mediante tres aproximaciones diferentes: a) cómo se establece; b) las consecuencias que genera en el crecimiento y la mortalidad de los pichones; y c) el valor adaptativo de la asincronía, poniendo a prueba la “Hipótesis de Reducción de Nidada” a través de manipulaciones de las asincronía de eclosión. Se encontró que las hembras en mejor condición física pusieron segundos huevos más grandes que primeros, y que en el año “bueno” el tamaño de la yema de los segundos huevos fue más grande que la de los primeros. La condición física de los machos determinó la cantidad de pichones criados y el crecimiento del pichón en nidadas con un pichón independizado. Además, el crecimiento también se relacionó con el volumen del huevo y en nidadas tardías los pichones crecieron más rápido cuando los padres fueron de mejor condición. La yema y el año influyeron en la supervivencia, en el año “malo” los segundos pichones murieron más. El grado de asincronía de eclosión dependió de la temperatura del primer huevo durante la puesta, de la diferencia de temperatura entre los segundos y primeros huevos a lo largo de la incubación y del tamaño inicial del parche de incubación. A pesar de no tener un rol en los nidos controles, la asincronía de eclosión en los nidos manipulados afectó el peso y la supervivencia de los pichones en función de su orden de eclosión y el año de estudio. En las nidadas asincrónicas durante el año “malo”, los segundos pichones murieron en mayor proporción que los primeros. En este año, los pichones de las nidadas asincrónicas murieron antes y pesaron más a la independencia que los pichones de las nidadas sincrónicas. Si bien estos son indicios a favor de la “Hipótesis de Reducción de Nidada” en esta especie, no se puede aseverar que así sea debido a que los segundos pichones de nidadas asincrónicas no murieron más en proporción que los segundos de nidadas sincrónicas. La asincronía de eclosión pareciera ser el resultado de una limitación fisiológica a nivel del parche de incubación que provoca un retraso en el comienzo de la incubación y que su efecto sobre los pichones tendría importancia durante años “malos”. PALABRAS CLAVES—Asincronía de eclosión, crecimiento de pichones, incubación, inversión parental, Pingüino de Magallanes, reproducción, Spheniscus magellanicus, temperatura de los huevos.

Abstract:
During the years 2010-2013, we studied the breeding biology of Magellanic Penguin (Spheniscus magellanicus) at Quiroga Island, Santa Cruz, Argentina (47 ° 45'S, 65 ° 53'W). We investigated parental investment between and within clutches of eggs, and the consequences of that investment and other variables in nestling growth and survival. In addition, we explore hatching asynchrony through three different approaches: a) the mechanisms through which it is established; b) the consequences it has on the growth and mortality of chicks; c) the adaptive significance of asynchrony, by testing the "Brood Reduction Hypothesis" through a manipulation of the hatching asynchrony. We found that females in better body condition laid larger second eggs than females in bad body condition and in the "good" year second laid eggs had larger yolk areas than first eggs. The body condition of males determinates the number of nestlings that fledge per nest, and, in those nests where only one chick fledge, the growth of nestlings. Moreover, nestling growth was also associated with egg volume and late-breeders had nestlings that grew faster when parents were in better condition. Yolk and year influenced nestling survival, in the "poor" year second nestlings died more often than first. Hatching asynchrony depended on the egg temperature during the laying period, on the temperature difference between the second and first eggs along the incubation period, and on brood patch area. Although hatching asynchrony did not influence nestling performance in control nests, it do affected the weight and survival of chicks in manipulated nests, according to their hatching order and the study year. In those nests, hatching asynchrony was manipulated and forced. In asynchronous clutches during the "poor" year, the second chick died more often than the first. This year, the chicks died before in asynchronous clutches and nestlings weight at fledging was heavier than in synchronous clutches. While these are evidence in favor of the "Brood Reduction Hypothesis", it is not totally fulfill because the second nestling of asynchronous clutches did not die more often or weight less at fledging than the second nestling of synchronous clutches. Hatching asynchrony seems to be the result of a physiological constraint of the brood patch that causes a delay in the onset of incubation and would affect the nestlings mostly in "bad" years. KEY WORDS— breeding biology, egg temperature, hatching asynchrony, incubation, Magellanic Penguin, nestling growth, parental investment, Spheniscus magellanicus.

"Investigaciones geológicas en la vertiente oriental de la Sierra de Famatina (Provincia de La Rioja)" (1946). Russo, Aniello. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Investigaciones sobre el impacto de la Cava San Nicolás (Florencio Varela) : una intervención epidemiológica" (1998). Rubel, Diana Nora. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Se evaluó el impacto ambiental de un basural extenso de 25 metros de profundidad ubicado en Florencio Varela, Buenos Aires, en un marco de investigación participativa. El basural se investigó desde dos ángulos, evaluándose: - su influencia sobre la calidad del agua subterránea de los acuíferos de consumo en la zona; y - su rol como posible amplificador de la transmisión de la leptospirosis a la población canina. El impacto del basural sobre las aguas subterráneas se refleja en un aumento de los niveles medios de ciertos parámetros en los sitios de muestreo situados lateralmente o aguas abajo del basural, tales como dureza, cloruro, hierro y manganeso. Se detectaron contaminantes tóxicos, cianuro y mercurio, aunque el últimose originaria también en otras fuentes de contaminación. El basural sería un factor de riesgo adicional para la transmisión de leptospirosis a la población canina, si bien otros factores de riesgo pueden mantener seroprevalencias relativamente elevadas en la población del área. Esto representa un riesgo para la población humana residente, ya que los perros actúan corno un reservorio de la infección y contaminan el medio. La información producida se comunicó a los actores sociales involucrados, lo que contribuyó a la eliminación del basural.

Abstract:
The study was aimed to evaluate the environmental impact of an extensive dump 25 meters deep located in Florencio Varela, Buenos Aires, Argentina. The dump was investigated from two points of view: - their influence on the ground water quality of the acuifers exploited in the area; and - their role as an amplifying factor of leptospiroses tranmission to local dog population. With regards to the impact on ground water quality, the results indicated a increase in the mean levels of some parameters in the sample sites located downstream or Laterally from the dump, such as hardness, chloride, iron and manganese. Toxic contaminants, specially cyanide and mercury, were detected, although other contamination sources would be present. Contact with the dump involves an additional risk to leptospiroses transmission to the dog population, although others risk factors could maintain high seroprevalences in the dogs. This constitutes a risk for local people, since the dog population acts as a reservoir and can contaminate the environment. The produced information was communicated to the involved social actors.

"Investigaciones sobre la existencia normal del arsénico en el organismo humano" (1904). Schaefer, Guillermo F.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Investigaciones sobre sedimentos de las regiones petrolíferas del Norte argentino" (1944). Fumaroni de Carnovali, Ada. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Investigación de bacterias coliformes en el agua : modificaciones al medio de Mac Conkey" (1942). Leiguarda, Ramón Héctor. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Investigación de clorofila natural y clorofila comercial en aceites comestibles" (1935). Türk, Ernesto F.H.. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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"Investigación de emisión de radiación gamma en el rango de 1 TeV de la variable cataclísmica AE AQUARII" (1995). Colombo, Eduardo Hector. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
El estudio de la radiación γ en el rango de energías alrededor de los 10¹² eV (1 TeV) se ha convertido en un campo de la Física de gran actividad con la instalación y puesta en funcionamiento de nuevos y más sensibles instrumentos y se encuentra en posición de responder algunas de las más importantes preguntas acerca del origen del flujo observado de radiación cósmica, la naturaleza de los procesos que permiten acelerar las partículas hasta veolcidades relativísticas y de las fuentes generadoras de fotones energéticos y las interacciones que ellos sufren, así como muchas otras. Conocer y entender esta nuva banda del espectro electromagnético nos proveerá nuevas ideas de la forma en que el universo funciona y cómo estos objetos son capaces de producir tales energías dentro del marco de las teorías fisicas actuales y los límites que ellas imponen. Es en este marco que la detección de cualquier fuente emisora de radiación γ en el rango de los TeV adquiere singular importancia y la validación por grupos independientes, altamente prioritaria. Existen numerosos reportes de fuentes que no han sido confirmados posteriormente, aunque muchas de ellas fueron intensivamente observadas por otros instrumentos; sin embargo, existen unas pocas fuentes que tienen confirmación independiente de más de un grupo, como la Nebulosa del Cangrejo y AE Aquarii. Este último sistema, una variable cataclísmica, ha sido detectado por dos grupos, Durham y Potchesftroom, ambos ubicados en el hemisferio sur; pero también es visible desde el hemisferio norte, lo que motivo que sea observada por el Observatorio Whipple en un intento de determinar la validez de los resultados anteriores y poder comparar el comportamiento de los tres detectores. En el Capítulo 1 se encontrará una revisión de la astronomía de radiación γ en Alta y Muy Alta Energía, así como las técnicas de detección y producción y absorción de fotones γ. También se desarrollan los principios físicos de la radiación Cerenkov, así como su detección. En el Capítulo 2 se encontrará la Técnica Atmosférica Cerenkov, el Observatorio Whipple, donde las observaciones que componen esta tesis fueron obtenidas, la Técnica de Imágenes y Métodos de Análisis utilizados en este trabajo. En el Capítulo 3 se introduce un nuevo método para evaluar el espectro de energías de una fuente, la Relación de Dureza. En el Capítulo 4 se desarrolla todo lo concerniente a AE Aquarii, previas detecciones y los resultados obtenidos en esta tesis. El Capítulo 5 desarrolla las conclusiones generales y se hace una breve revisión del futuro de la Astronomía de Radiacion γ y de MAE. Se desarrollan una serie de Apéndices: El Apéndice I define los parámetros utilizados para analizar los datos; el Apéndice II resume las observaciones obtenidas sobre AE Aquarii; el Apéndice III es un estudio preliminar sobre un nuevo púlsar, PSR1951 +32 y el Apéndice IV muestra los gráficos resultantes de los extensos análisis realizados sobre AE Aquarii.

"Investigación de la acción neuroprotectora de la eritropoyetina en modelos in vitro" (2012). Wenker, Shirley Denise. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La supervivencia de las células neuronales depende de un estricto balance entre diversos factores pro y antiapoptóticos. La pérdida de este delicado equilibrio puede conducir a la muerte celular por apoptosis como se manifiesta en accidentes cerebro-vasculares y en enfermedades neurodegenerativas. La muerte neuronal puede ocurrir en forma directa, donde el daño per sé induce la disminución del número de células viables o bien indirectamente, involucrando la activación de células de la glía, las cuales liberan citoquinas proinflamatorias, nitritos y especies reactivas del oxigeno, agentes causantes de la degeneración neuronal. La deficiencia de oxígeno (hipoxia) en el sistema nervioso central es un factor de estrés que induce múltiples respuestas. A nivel celular, la exposición a hipoxia puede inducir una desregulación metabólica con pérdida de la homeostasis y muerte celular. Además, durante dicho proceso se desarrolla un microambiente proinflamatorio generado por la activación de la glía, lo cual afecta indirectamente a las células neuronales. Dado el impacto de las secuelas que pueden originarse, se desarrollaron diferentes líneas de investigación con el fin de prevenir el daño neuronal y sus consecuencias. La eritropoyetina (Epo) es una citoquina pleiotrópica, originalmente definida por su rol en la eritropoyesis. Sin embargo, el hallazgo de receptores específicos en tejidos no hematopoyéticos, expandió su acción biológica y farmacológica. La utilización potencial de los efectos no hematopoyéticos de la eritropoyetina recombinante es uno de los aspectos más promisorios en la investigación de la acción farmacológica de esta hormona. De hecho, la Epo ha sido asociada a la prevención de apoptosis de células neuronales sometidas a agresiones tales como privación de nutrientes o factores de crecimiento. Si bien se propone a la Epo como factor de protección celular frente a estímulos apoptóticos, poco se sabe acerca de la modulación de su acción en diferentes estadios de diferenciación neuronal. Por otro lado, resultados de investigaciones utilizando diversos modelos experimentales le han adjudicado a la Epo una acción antiinflamatoria, aunque aún se desconoce el rol que puede presentar este factor sobre la microglía ante un daño tisular. En este trabajo se planteó, como objetivo general, el estudio del efecto modulador y/o neuroprotector de la Epo frente a daños inducidos por hipoxia y por otros estímulos. Para el estudio de la acción antiapoptótica de Epo frente al daño por hipoxia se utilizó un modelo in vitro de cultivos de la línea de origen neuronal SH-SY5Y. Además de disminución de la viabilidad celular y aumento significativo de la apoptosis, la exposición a hipoxia indujo alteraciones morfológicas tales como disminución del área celular y pérdida de la adhesión celular en cultivos indiferenciados. Como resultado del pretratamiento de estos cultivos con Epo, fueron prevenidos los efectos de la posterior exposición a hipoxia. En esta acción antiapoptótica de la Epo se encontraron involucrados la vía mediada por PI3K y el incremento de los niveles de los factores antiapoptóticos Bcl- 2 y Bcl-xL. Actualmente, se reconoce que los mecanismos de muerte celular son marcadamente diferentes en el cerebro inmaduro y en desarrollo por lo que, en el siguiente paso de este trabajo se realizó una comparación de la acción de Epo entre estadios inmaduro y maduro de células de origen neuronal. Los resultados obtenidos sugieren que la diferenciación celular, mediada por el agente diferenciador ácido retinoico (atRA), aumenta el umbral de resistencia celular ante diferentes agentes proapoptóticos, como staurosporina (STP), TNF-α o hipoxia. Este hallazgo se encontró asociado a la activación de la vía de supervivencia celular PI3K y a una regulación positiva del factor antiapoptótico Bcl-2, lo que explicaría, al menos parcialmente, la disminución de la susceptibilidad celular. En los cultivos de células neuronales diferenciadas con atRA no se pudo detectar un efecto protector de la Epo frente a la exposición a STP. Esta observación coincidió, a su vez, con la ausencia de modulación de los factores Bcl-2 y Bcl-xL por Epo. Además, la acción de Epo fue afectada por la modulación negativa de la expresión de su receptor observada en los cultivos diferenciados por atRA. Como se mencionó anteriormente, la inflamación se encuentra involucrada de manera crónica en enfermedades neurodegenerativas como también en procesos de isquemia cerebral y es una de las principales causas de muerte neuronal. En base a trabajos previos en los que se reportó un efecto antiinflamatorio de la Epo en distintos tejidos, se investigó si la Epo podía presentar un efecto modulador en cultivos de células de microglía murina EOC-2 activados por hipoxia química y se estudió el comportamiento de la hormona frente a estímulos proinflamatorios. No se observó un efecto antiinflamatorio clásico de Epo frente al estímulo de hipoxia química. Sin embargo, los resultados mostraron una acción directa de la Epo sobre la microglía incrementando los niveles de iNOS, enzima responsable de la síntesis de óxido nítrico. Además, la Epo mostró acción antioxidante previniendo la formación de especies reactivas de oxígeno e impidió la proliferación de las células de microglía inducida por hipoxia química en ausencia de Epo. Estos hallazgos sugieren que si bien la Epo no impide la activación de la microglía, podría reducir el daño potencial implicado, contrarrestando la inflamación a largo plazo mediante una acción antioxidante y antiproliferativa. En base a los resultados obtenidos, resultó interesante investigar la acción de la Epo en modelos de interacción microglía-neurona. Se observó el efecto neuroprotector de Epo ante la exposición de cultivos de células neuronales SH-SY5Y a medios condicionados obtenidos en cultivos de microglia estimulados por hipoxia. Esta acción citoprotectora de Epo también fue observada en cultivos de las células neuronales expuestas a medios condicionados de cultivos de macrófagos (células RAW) estimulados con LPS-IFNγ. Los resultados obtenidos en este trabajo aportan nuevos conocimientos sobre la acción de la Epo sobre células neuronales y de microglia. Por un lado, la Epo presenta acción neuroprotectora ante el daño directo inducido en células indiferenciadas por diversos agentes proapoptóticos como también ante un ambiente proinflamatorio inducido por la activación, tanto de células de microglía como de macrófagos. Si bien la Epo no presentó una acción antiinflamatoria clásica sobre la microglia, sí mostró un efecto antioxidante y antiproliferativo. De esta manera, se podría sugerir que la acción de la Epo atenuaría la activación de la microglía y, de esta forma, contribuiría a prevenir el desarrollo de un cuadro proinflamatorio mayor, disminuyendo el riesgo de la aparición de efectos perjudiciales para el sistema nervioso. Dada la búsqueda constante de nuevos fármacos para el tratamiento de enfermedades neurodegerativas y la existencia de la eritropoyetina recombinante humana, el conocimiento de la acción antiapoptótica y moduladora de dicha hormona sobre células del sistema nervioso puede constituir un aporte importante a sus características terapéuticas ya conocidas.

Abstract:
Among the factors that support cell survival, erythropoietin (Epo) is well known as a growth factor that maintains the number of circulating erythrocytes primarily by preventing apoptosis of erythroid progenitors. However, its biological role has been expanded by the finding of specific receptors in non-hematopoietic tissues, such as endothelial and neuronal tissues. Evidence has shown that Epo exhibits neuroprotective effects in vitro against proapoptotic agents. In addition, in vivo studies in adult and neonatal animal models have revealed a neuroprotective action of exogenous Epo administration. In this work, we compared the protective action of Epo between immature and mature cultures of neuroblastoma cells. We found a neuroprotective action of Epo upon undifferentiated neuronal SH-SY5Y cells against cytotoxicity induced by staurosporine (STP), TNF-alpha or hypoxia. Our results suggest that Epo might repress neuronal apoptosis by activation of PI3K and JAK-2 signaling pathways upregulating the expression of the antiapoptotic factors Bcl-2 and Bcl-xL. On the other hand, SH-SY5Y cell differentiation by retinoic acid (atRA) caused cell resistance to the Epo action. Together, the results describing modulation of the signaling pathways activated by Epo and those observed in cultures with atRA suggest that differentiated cell resistance to Epo protection can be coupled to an altered response at the EpoR level. During cerebral ischemia, hypoxia may not only cause neuronal cell injury in a direct way, since neuron-microglia interactions are important for neuronal viability. In vitro and in vivo studies have shown that hypoxia can activate microglia cells, leading to proinflammatory reactions that contribute to create a stressing environment upon neighboring neurons. Because of the role of hypoxia in proinflammatory mechanisms in the nervous system, and the protective effect of Epo against a proinflammatory condition resembled by TNF-α, we investigated the role of the hormone in the dialogue between neuron and microglial cells. As the first line of defense, microglia play a critical role in the innate immune response of the central nervous system (CNS) but an excessive response to CNS injury induces microglial activation. Thus, it is likely that toxic inflammatory mediators produced by activated microglial cells under hypoxic conditions may exacerbate neuronal injury following cerebral ischemia. The next step in the current research was the characterization of microglia activation. The murine EOC-2 cell line activated by chemical hypoxia induced by CoCl2 showed increased proinflammatory mediators (nitrites and TNF-α), reactive oxygen species (ROS), iNOS and Cox-2 modulation while cell proliferation data and PCNA stain demonstrated the mitogenic effect of chemical hypoxia. Pretreatment with Epo prevented the CoCl2 effect on cell proliferation and oxidative stress without changing nitrite production, iNOS protein expression or TNF-α secretion. Finally and taking into consideration the results obtained, it was interesting to investigate the effect of hypoxia upon the dialogue microglia-neuron. Conditioned media from activated microglial cells induced apoptosis of SH-SY5Y neuronal cells, effect that was abolished by Epo. Neuroprotection by this cytokine was also demonstrated against the cytotoxic effect of conditioned media obtained from activated macrophages (RAW 264.7 cell line). These results show that even though Epo did not exert a direct antiinflammatory effect upon microglial activation it did increase the resistance of neurons to subsequent damage derived from a proinflammatory environment. In conclusion, our results suggest that Epo protects neuronal cells from direct injuries as well as from the indirect damage caused by cytotoxic agents produced from microglia activation. The demonstrated antioxidant and antiapoptotic ability of Epo could contribute to consider this agent as a neuroprotective factor.

"Investigación del rol de los ácidos disiálicos en el sistema nervioso central" (2013). Rinflerch, Adriana Raquel. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
La neuroglicobiología es la disciplina que se ocupa de elucidar el rol de los glicanos en el sistema nervioso central (SNC). El ácido siálico o ácido Nacetilneuramínico es un monosacárido cargado negativamente con funciones importantes en el SNC. Fundamentalmente han sido estudiados los ácidos polisiálicos, a los que se ha atribuido un rol importante en la señalización y migración celular durante el desarrollo del SNC. Poco se ha investigado acerca de la ubicación y rol de los ácidos disiálicos (DiSia) en el SNC. Por este motivo, elegimos como objetivo de esta Tesis por un lado identificar la localización de los DiSia en el SNC en diferentes etapas del desarrollo postnatal de ratones y, por otra parte, elucidar la potencial función de estas moléculas en relación a la conducta. Inicialmente se determinaron la intensidad de expresión del epitope DiSia y la expresión de los genes de las sialiltrasferasas en distintas estructuras cerebrales de ratones C57BL/6, durante los estadios del desarrollo (neonato, adulto y senil). Si bien, los niveles del epitope DiSia y de ARNm de ST8SiaIII se mantienen constantes en el hipocampo, bulbo olfatorio y corteza, es interesante destacar que disminuyen en cerebelo gradualmente desde los estadios neonatales hasta los seniles. En una segunda etapa, con el fin de elucidar preliminarmente el potencial rol de la enzima ST8SiaIII en el cerebelo (donde se comporta diferencialmente), se inhibieron sus niveles postranscripcionalmente, mediante inyección estereotáxica de ARN de interferencia (ARNi). Se evaluó la conducta en la prueba de laberinto en T, relacionada con la correcta actividad cerebelosa. Los ratones en los que efectivamente se inhibió la transcripción de ST8Sia III durante los primeros días después del tratamiento mostraron bajo rendimiento en el laberinto en T (disminución de la alternancia entre brazos), sobre todo en edades más avanzadas. Estos resultados se corresponden con los cambios morfológicos observados histológicamente (degeneración del neuropilo), en el cerebelo de los animales transfectados. En esta tesis se presentan varios resultados originales: Si bien los DiSia se hallan distribuidos en forma equivalente en las diferentes estructuras estudiadas y en diferentes etapas de la vida, el cerebelo presenta una expresión diferencial tanto de ST8SiaIII como del epitope disialilado, siendo dicha expresión menor en los animales seniles. En el cerebelo la inhibición transitoria de ST8SiaIII y del epitope DiSia, en etapas tempranas del desarrollo, parecen corresponder con alteraciones morfológicas y conductuales. Estos resultados abren el camino a futuras líneas de investigación tanto de interés en ciencias básicas como en neurología clínica.

Abstract:
Neuroglycobiology is the field that aims to elucidate the role of the glycans in the central nervous system (CNS). The sialic acid or N-acetylneuraminic acid is a negatively charged monosaccharide with important functions in the CNS. Mainly, polysialic acids have been studied and an important role in cellular signaling and migration during the development of the CNS has been found. But, little is known about the location and function of disialic acids (DiSia) in the CNS. Taking this in consideration, the goals of this dissertation are, in one hand, to identify the location of the DiSia in the CNS during different stages of the postnatal development in mice, and on the other hand, elucidate the potential function of these molecules in relation to behavior. In the first place, the intensity of DiSia epitope expression and sialiltransferases gene expression in different brain regions of C57BL/6 mice, during different developmental stages (newborn, adult and senile) were determined. Even though, DiSia epitope and ST8SiaIII levels remain constant in the hippocampus, olfactory bulb and cortex, it is interesting to note that these levels gradually decrease in the cerebellum, from newborn to senile mice. In the second place, the aim was to elucidate the potential role of the ST8SiaIII enzyme in the cerebellum (where a differential expression was found). In this direction, ST8SiaIII levels were post-transcriptionally inhibited through a stereotaxic injection of interference RNA (RNAi). Behavior related to the cerebellum activity was evaluated in the T-maze. Mice, in which the transcription of ST8SiaIII was effectively inhibited, showed a reduced performance in the T-maze (decreased arms alternation) during the first days after treatment, but especially in advanced age. These results correlate with the morphological changes (neurophil degeneration) observed by histological techniques, in the cerebellum of transfected animals. The present dissertation has several new results: Even though DiSia have a constant distribution in the different brain regions and developmental stages, a differential expression of ST8SiaIII and of the disialidated epitope is present in the cerebellum, being that expression lower in senile animals. Temporal inhibition of ST8SiaIII and DiSia epitope in the cerebellum, in early developmental stages, seems to correlate with morphological and behavioral alterations. These results open the way to future lines of research in basic science as well as in clinical neurobiology.

"Isomerización de carbocianinas simétricas en solventes polares" (2002). Rusjan, Pablo. Tesis doctoral. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires

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Resumen:
Este trabajo de tesis describe aspectos de equilibrio y dinámicos relativos a la reacción de retro-isomeración de un catión carbocianina (3,3’-Dietiloxacarbocianina, DOCI) en distintos entornos: acetonitrilo, alcoholes alifáticos de diferente longitud de cadena y mezclas metanol (MeOH) - acetonitrilo (ACN). El amplio espectro de longitudes características relevantes en el problema, que van desde uniones intramoleculares del orden de 1-2 Å hasta distancias del orden del tamaño molecular, aproximadamente de 20 Å; juntamente con una significativa redistribución de la densidad electrónica que genera estados intermedios de elevada polaridad, hacen de este proceso un problema particularmente interesante, cuya descripción microscópica es compleja. El método de estudio es la dinámica molecular. Las simulaciones presentan un modelo, propio de esta tesis, cuyas principales características son: (i) un alto grado de detalle en la descripción del soluto, incorporando explícitamente todos los grados de libertad, (ii) la capacidad de cambios en la distribución electrónica conformes al valor de la coordenada de reacción, (iii) un solvente modelado como una colección de cargas parciales mantenidas a distancia fijas; (iv) para los solventes de mayor tamaño un modelo simplificado que reproduce las propiedades más relevantes que influyen el proceso reactivo tales como polaridad, características de empaquetamiento, autodifusión. El estudio del proceso reactivo fue abordado, como es usual en estos casos, mediante el cálculo de la constante de velocidad k iso. Su estimación es la resultante de dos contribuciones: la primera proveniente de la aplicación de la teoría del estado de transición; la segunda está relacionada con los efectos dinámicos involucrados en el proceso. Complementariamente, el estudio del equilibrio nos permitió obtener información referente a las estructuras de solvatación propias de los distintos estadios de la reacción (de productos y de transición). Por otro lado se realizaron simulaciones de no equilibrio desde las que se obtuvo información de la relajación simultánea de los grados de libertad y observables del soluto y del solvente. Las conclusiones del trabajo son: (i) la presencia de solvente polar siempre disminuye la energía libre de activación respecto de la intrínseca en vacío, la magnitud de esta reducción resulta de una competencia entre las interacciones soluto-solvente y solvente-solvente, la energía libre de activación de los alcoholes obtenida de los experimentos de simulación, reproduce la tendencia, anómala según el modelo de Kramer, observada en trabajos experimentales para la constante de velocidad, en las experiencias con mezclas ACN/MeOH se observó solvatación preferencial del solvente aprótico. Finalmente resulta importante establecer, a partir de los resultados aquí obtenidos, la importancia de la ponderación de los procesos microscópicos que acompañan el desarrollo de la reacción para lograr una interpretación del fenómeno global; estos aspectos son generalmente soslayados o reinterpretados en términos de propiedades macroscópicas al encarar el estudio de reacciones de este tipo.

Abstract:
This work deals with equilibrium and dynamical aspects of the back-isomerization reaction of a carbocyanine cation (3,3’-Diethyloxacarbocyanine, DOCI) taking place in different solvents: acetonitrile, n-primary alcohols and mixtures of methanol (MeOH) and acetonitrile (ACN). The global description of the system is very complex due to the broad spectrum of relevant lengthscales in the problem, ranging from intramolecular bonds (with lengths in the order of 1 or 2 Å), to distances in the order of solute size (≈ 20 Å). In addition, an important redistribution of the electronic density that produces intermediate states of high polarity takes place as well. The methodolgy of study resorted on Molecular Dynamics techniques. The main characteristics of the model are: (i) a detailed model of the solute in which all degrees of freedom are explicitly included; (ii) the electronic distribution is allowed to change along the reaction coordinate; (iii) the solvents were considered as collection of partial charges kept at fix distances; (iv) for the largest solvent molecules, a simplified model was considered reproducing the most important properties that influence the reactive process, such as polarity, packing effects and self diffusion. Our approach to the study of the reaction included the computation of the rate constants. These rate constants are the result of two contributions: the first is the transition state theory estimate and, secondly corrections due to dynamical effects. Moreover, the equilibrium study provided information about solvation structures in the transition and product states. We have also performed non-equilibrium relaxations in which we monitored the simulataneous relaxation of the solute and the solvent degress of freedom. The mainly conclusions of this work are: (i) the presence of a solvent always produces a decrease of the free energy activation barrier with respect to the intrinsic barrier in vacuo. (ii) the value of this reduction is the result of a competition between the solute-solvent and solvent-solvent interactions, (iii) the computed activation free energies reproduces the observed trend of experimental rate constants, (iv) in the ACN/MeOH mixtures, we observed preferential solvation of the aprotic solvent.

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