Clusterina Fucosilada : una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad

Merlotti Ippólito, Antonela

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	quimica
Título:	Clusterina Fucosilada : una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad
Título alternativo:	Fucosylated Clusterin: a novel clusterin glycoform able to interact with dendritic cells and modulate their functions
Autor:	Merlotti Ippólito, Antonela
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida (INBIRS)
Publicación en la Web:	2017-07-25
Fecha de defensa:	2017-03-16
Fecha en portada:	2016
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Director:	Sabatté, Juan A.
Consejero:	Vázquez, Elba
Jurado:	Zwirner, Norberto W.; Toscano, Marta A.; Barrionuevo, Paula
Idioma:	Español
Tema:	química/química biológica
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6201_MerlottiIppolito
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n6201_MerlottiIppolito.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n6201_MerlottiIppolito
Ubicación:	Dep.QUI 006201
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Merlotti Ippólito, Antonela. (2016). Clusterina Fucosilada : una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6201_MerlottiIppolito

Resumen:

Clusterina es una glicoproteína de 70 kDa, secretada por diferentes tiposcelulares y presente en casi todos los tejidos y fluidos corporales. Nuestro grupo deinvestigación demostró anteriormente que la clusterina presente en el semen se une ala molécula DC-SIGN, un receptor expresado por las células dendríticas (CDs),inhibiendo su interacción con el HIV. Esta propiedad no es compartida por la clusterinasérica debido a que clusterina del plasma seminal expresa un patrón inusual deglicosilación, caracterizado por la presencia de abundantes motivos fucosilados que leconfieren la habilidad de unirse a DC-SIGN. De esta forma, la clusterina fucosiladapresente en el semen representa una nueva glicoforma con propiedades biológicasdiferentes a la clusterina sérica, la cual se encuentra glicosilada principalmente conmotivos sialidados. Clusterina fue la primera chaperona extracelular descripta. La principalpropiedad de las chaperonas extracelulares es su capacidad de interactuar conproteínas estresadas previniendo su agregación e inhibiendo el desarrollo de lasenfermedades por depósito de proteínas. Posteriormente, los complejos chaperona-proteína son endocitados por diferentes tipos celulares y degradados. En la presente tesis demostramos que clusterina fucosilada aislada del plasmaseminal, de igual forma que su contraparte sérica, actúa como chaperona extracelularinteractuando con proteínas estresadas y previniendo su agregación. Demostramos lacapacidad de clusterina fucosilada de dirigir proteínas estresadas hacia DC-SIGNpresente en CDs, promoviendo la endocitosis de las mismas y su posterior degradación. Este proceso podría modular la función de las CDs y favorecer la presentación de lospéptidos derivados de estas proteínas estresadas a los linfocitos T. En este sentido,demostramos que la unión de clusterina fucosilada a las CDs a través de DC-SIGNejerce un importante efecto modulatorio ya que es capaz de estimular la expansióncélulas T CD4+FOXP3+CD25+ promoviendo la tolerancia inmunológica. Estoshallazgos sugieren que clusterina fucosilada presente en el semen podría promover latolerancia hacia antígenos paternos y de esta forma, la tolerancia materno-fetal. Numerosos trabajos demuestran que la producción de clusterina se encuentraincrementada en diferentes tumores malignos. Más aún, la producción exagerada declusterina suele asociarse a una mayor agresividad tumoral y a un peor pronóstico. Sinembargo, la naturaleza de esta asociación no ha sido aún definida. En una segundaparte de la tesis, nos preguntamos si la clusterina producida por tumores podríaexpresar, tal como lo hace la clusterina seminal, un patrón de glicosilación que lepermitiese interactuar con DC-SIGN y, de este modo, modular la funcionalidad de las CDs promoviendo la tolerancia hacia antígenos tumorales. Para contestar estapregunta, realizamos una serie de ensayos utilizando muestras de tumores de mama detipo Luminal. Los principales hallazgos luego de realizar estos ensayos fueron lossiguientes: a) Clusterina presente en los tumores mamarios presenta motivosfucosilados; b) es capaz de unirse a DC-SIGN; c) DC-SIGN es expresado por célulasmieloides intratumorales. Estos resultados sugieren que clusterina fucosilada podríaactuar como un mecanismo de escape tumoral a la respuesta inmune.

Abstract:

Clusterin is a secreted glycoprotein of 80 kDa present in almost all tissues andbody fluids. Our group previously showed that semen clusterin binds to DC-SIGN, a C-typelectin receptor present on dendritic cells (DCs), inhibiting the interaction of HIV. Thisactivity was dependent on fucosylated Lewis X and Lewis Y type glycans that conferclusterin the ability to bind with high affinity to DC-SIGN. Interestingly, in contrast withseminal plasma clusterin, serum clusterin does not interact with DC-SIGN. Clusterin was the first extracellular chaperone described. Extracellularchaperones bind to stress-damaged proteins, preventing the formation and deposition ofinsoluble aggregates and promoting the clearance of extracellular stressed proteins byreceptor-mediated endocytosis followed by lysosomal degradation. Failure of thesemechanisms contributes to the development of the so-called protein deposition diseases. In this thesis, we showed that fucosylated clusterin from seminal plasma, as itsserum counterpart, acts as an extracellular chaperone interacting with stressed proteinsand preventing their aggregation. We proved that fucosylated clusterin targets stressedproteins to DC-SIGN present on DCs, promoting their endocytosis and degradation. Thisprocess could modulate DC function favoring the presentation of stressed protein derivedpeptides to T lymphocytes. We demonstrated that fucosylated clusterin binding to DCSIGNon DCs promotes the expansion of CD4+FOXP3+CD25+ T-cells. These findingssuggest that fucosylated clusterin present in semen could promote tolerance to paternalantigens favoring fetomaternal tolerance. Several works have shown that clusterin production is increased in malignanttumors. Moreover, the over-expression of clusterin is associated with more aggressivetumors and bad prognosis. Nevertheless, the nature of this association has not beendefined. In the second part of this thesis, we analyzed the properties of clusterinexpressed on Luminal breast cancer samples. The main results were the following: a)clusterin produced by breast tumors bears fucosylated motifs; b) it is able to bind to DCSIGN; c) DC-SIGN is expressed by intra-tumoral macrophages. We propose thatfucosylated clusterin could be a novel mechanism of tumor escape from the immuneresponse.

Citación:

---------- APA ----------

Merlotti Ippólito, Antonela. (2016). Clusterina Fucosilada : una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6201_MerlottiIppolito

---------- CHICAGO ----------

Merlotti Ippólito, Antonela. "Clusterina Fucosilada : una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2016.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6201_MerlottiIppolito

Estadísticas:

Descargas totales desde :

Navegar

Colección

Tesis Doctoral