Registro:
Documento: | Tesis Doctoral |
Disciplina: | biologia |
Título: | Contribución de los estudios cromosómicos a la comprensión de los mecanismos de la carcinogénesis hormonal : estudio citogenético de carcinomas mamarios murinos inducidos por progestágenos |
Título alternativo: | Contribution of the study of chromosomes to the understanding of the mechanisms governing hormonal carcinogenesis: cytogenetic study of murine mammary carcinomas induced by progestins |
Autor: | Fabris, Victoria T. |
Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
Filiación: | Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME). Laboratorio de Carcinogénesis Hormonal
|
Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
Fecha de defensa: | 2003 |
Fecha en portada: | 2003 |
Grado Obtenido: | Doctorado |
Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
Director: | Lanari, Claudia |
Director Asistente: | Merani, María Susana |
Idioma: | Español |
Tema: | biología/endocrinología biología/genética
|
Formato: | PDF |
Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3658_Fabris |
PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3658_Fabris.pdf |
Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3658_Fabris |
Ubicación: | Dep.BIO 003658 |
Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Fabris, Victoria T.. (2003). Contribución de los estudios cromosómicos a la comprensión de los mecanismos de la carcinogénesis hormonal : estudio citogenético de carcinomas mamarios murinos inducidos por progestágenos. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3658_Fabris |
Resumen:
El tratamiento prolongado con acetato de medroxiprogesterona (MPA) en ratones de lacepa BALB/c induce carcinomas mamarios de histología ductal, que expresan receptores deestrógenos y progesterona, y son metastásicos en pulmón y ganglio linfático. Estos tumores semantienen in vivo por pasajes singeneicos, siendo hormono-dependientes (HD) ya querequieren del agregado exógeno del MPA para crecer, y no crecen en animales sin tratar con MPA. Se seleccionaron variantes hormono-independientes (HI) a partir de los tumores HDque comenzaron a crecer en los animales sin MPA. Estos tumores HI son capaces de crecer enanimales sin tratar con MPA, pero mantienen los receptores hormonales. Los tumores HIpresentan una respuesta diferencial a1 tratamiento con l7-ᵝ-estradiol (E2) y losantiprogestágenos mifepristona y onapristona. Se los clasifica en respondedores, aquellostumores HI que inhiben su crecimiento in vivo por el tratamiento hormonal, y norespondedores a aquellos que no regresionan por el tratamiento. En la primera parte de este trabajo se estudió el cariotipo de los tumores HD (n=5) ysus variantes HI (n=ll) con técnicas de citogenética clásica (bandeo G) y molecular (hibridación in situ fluorescente, FISH), con el objetivo de relacionar el número decromosomas y las alteraciones del cariotipo presentes con las características biológicas de lostumores. Tres de los 5 tumores HD (60%) presentaron un número de cromosomas en el rangodiploide (ratón normal, 2n=40), mientras que los tumores HD que presentaron númerosmodales en el rango triploide a tetraploide fueron estudiados en pasajes muy avanzados. Lostumores HI en pasajes tempranos presentaron números modales diploides. En pasajes tardíosla mayoría de los tumores HI (8 de los ll estudiados) presentaron cariotipos en el rangotriploide a tetraploide. Todos los tumores presentaron alteraciones numéricas y estructuralesde sus cromosomas. No se observó una alteración común a todos los tumores, o que estuvieraasociada con la dependencia hormonal. Sin embargo, podemos inferir que los tumores connúmeros modales diploides responderán al tratamiento con E2 y antiprogestágenos. Lasalteraciones más frecuentes fueron ganancia de los cromosomas 3, 4 y 6 (entre el 50% y 60%de los tumores) y pérdida de los cromosomas 16 y X (en el 70% y 100% de los tumores,respectivamente). En un análisis global, la pérdida del cromosoma X resultó significativa. Seobservaron numerosas translocaciones, que involucraron a los cromosomas 4 y 7 con mayorfrecuencia (presentes en tres de las cuatro familias tumorales con alteraciones evaluables),observándose el mismo punto de ruptura para el cromosoma 7. Por otra parte, las alteracionespresentes en los tumores HD se conservan en los pasajes tempranos del crecimientoautónomo. En base a estos resultados podemos concluir que los tumores inducidos por el MPA serían diploides, y que con el continuo pasaje in vivo puede aumentar el número decromosomas. La adquisición de la hormono-indepedencia no es causada por el aumento de laploidía, y los tumores HI conservarían el cariotipo diploide de los tumores HD en los pasajestempranos. El aumento del número de cromosomas y la adquisición de nuevas alteracionessería posterior a la adquisición de la hormono-independencia y ocurriría como consecuenciadel aumento de los pasajes. La ocurrencia en pasajes más tempranos de variaciones en elcariotipo observada en los tumores HI con p53 mutado, respecto de los tumores HI con p53normal, podría estar asociada a las mutaciones en p53. Sin embargo, en el tumor HD lapresencia de p53 mutado no está acompañada de inestabilidad cromosómica, sugiriendo queserían necesarios otros factores además de dichas mutaciones. En la segunda parte del trabajo se estudiaron los cambios del cariotipo durante elestablecimiento de líneas celulares a partir de carcinomas mamarios murinos HD y HI. Seanalizaron las variaciones en ploidía y de las alteraciones cromosómicas a lo largo de losrepiques de las 8 líneas celulares obtenidas. Las líneas celulares conservaron el número decromosomas diploide de los tumores parentales en los primeros repiques, este número decromosomas aumentó con los posteriores pasajes in vitro, y se estabilizó en el rango triploideen 5 de las 8 líneas celulares, sugiriendo que éste les daría cierta ventaja para el crecimientoen cultivo. Sin embargo, una de las líneas celulares mantiene su cariotipo diploide hastarepiques avanzados. Todas las líneas celulares conservan los cromosomas marcadores de lostumores parentales a través de los repiques, pero 7 de las 8 líneas adquieren alteracionesnuevas desde repiques muy tempranos. Podemos concluir que el aumento de la ploidía severía favorecido por el avance de los repiques. Por otra parte, los cromosomas marcadores deltumor no se pierden por el continuo cultivo in vitro, pero se favorece la formación de nuevasalteraciones. El conocimiento del cariotipo permitió, además de caracterizar las líneascelulares, discernir sobre el origen de una de las líneas establecidas. En resumen, en este trabajo de tesis se investigó la evolución cariotípica de diferentestumores mamarios murinos en su evolución desde la hormono-dependencia hacia laindependencia, y de las líneas celulares derivadas. En nuestro conocimiento, este es el primerinforme del estudio citogenético en relación con la independencia hormonal en tumoresmamarios murinos. Los genes ubicados en los sitios de ruptura de las translocacionesobservadas, como por ejemplo Aurora C, merecen ser estudiados en investigaciones futuras.
Abstract:
Medroxyprogesterone acetate treatment in BALB/c female mice leads to the developmentof ductal mammary carcinomas which express estrogen and progesterone receptors and aremetastatic in axilar lymph nodes and lungs. They are maintained by syngeneic transplantation inprogestin treated female mice disclosing a hormone dependent (HD) pattern of tumor growth. Occasionally hormone independent (HI) variants have been selected. These HI tumors are able togrow without exogenous hormone supply. Some of them are able to regress completely afier l7-ᵝ-estradiolor antiprogestin administration and are so called responsive HI tumors while others areunresponsive to both treatments. In the first part of this study we have investigated the karyotype of 5 HD tumors and of ll HI variants using classic cytogenetic techniques as G banding and molecular approaches asfluorescence in situ hybridization (FISH). The aim of this study was to evaluate possiblerelationships between ploidy, chromosome markers and acquisition of hormone independence. A near diploid karyotype (2n=40) was found in 3/5 HD while a triploid to tetraploidkaryotype was observed in the other two HD tumors which were studied in late passages. In earlypassages from HI tumors we obtained diploid karyotypes while in advanced passages they weremainly poliploid (8/11 tumors). All tumors showed number and structural chromosomal rearrangements. The tumorsstudied did not share chromosomal abnormalities neither chromosome markers could be related to HD or HI tumors. However, it seems that in this experimental model it can be inferred that adiploid tumor will be responsive to hormones whereas a poliploid tumor may be HD, responsive HI or unresponsive to hormone treatments. The most frequent chromosomal rearrangements found in individual tumors were gains inchromosomes 3, 4 and 6 (in 50 and 60% of the tumors) and loses in chromosomes 16 and X (70%and 100% respectively). In a global analysis of frequencies only loses of chromosome X werestatistically significant. Nearly all tumors disclosed several translocations (22 in 9 tumors studied). Chromosomes 4 and 7 were involved independently in 3 of the 4 tumor families which could bestudied. Twice they were together, and in the case of chromosome 7, in the same breakpoint. Abnormalties present in HD tumors were maintained in early passages of HI tumors although lateron new rearrangements were observed. It can be concluded that MPA dependent tumors are probably diploid and polyploidy arisesby continuous in vivo transplantation. The acquisition of hormone independence is not caused byan increase in ploidy. Conversely, HI tumors may maintain the same diploid karyotype in earlypassages while progressively losing and acquiring new markets in later passages. SSCP revealed a point mutation in p53 in 4/5 tumors of the same family. The parental HDtumor showed a diploid stable karyotype while the HI variants were poliploid and did not sharecommon markers suggesting that mutated p53 is not uniquely involved in chromosome instability. HI variants may have acquired other alterations that together with mutated p53 may confer thisphenotype. In the second part of this study the karyotype of 8 cell lines derived from 2 of these diploidtumors was investigated. Cell lines maintained the diploid karyotype during the early passages andnearly all of them after passage 35 changed to a stable triploid karyotype. Only one cell line, the MC4-L5 remained diploid for more than 45 passages. All cell lines maintained the samechromosome markers than the parental tumors and 7/8 acquired new markers which were differentfor each cell line and were characterized in this study. It can be concluded that the onset of the celllines are not defined by increases in ploidy but that in vitro culturing favors their evolution towardsa triploid state. The fact that the onset of the cell lines were associated with new differentrearrangements suggests that these may favor this event. Thus cytogenetic analysis is extremelyimportant to identify cell lines. In addition, cytogenetic studies helped to determine if one of thecell lines could have been originated as a consequence of an epithelial mesenchymal transitionfrom the same cells or if it could have been originated from a different cell. Summing up, in this thesis we have investigated the evolution of karyotypes of differentmammary tumors from a hormone dependent to a hormone independent state and in their derivedcell lines. To our knowledge this is the first report on the field studying cytogenetics in relation tohormone independence in mouse mammary tumors. Genes located in breakpoints, such as Aurora C in chromosome 7, deserve further investigations.
Citación:
---------- APA ----------
Fabris, Victoria T.. (2003). Contribución de los estudios cromosómicos a la comprensión de los mecanismos de la carcinogénesis hormonal : estudio citogenético de carcinomas mamarios murinos inducidos por progestágenos. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3658_Fabris
---------- CHICAGO ----------
Fabris, Victoria T.. "Contribución de los estudios cromosómicos a la comprensión de los mecanismos de la carcinogénesis hormonal : estudio citogenético de carcinomas mamarios murinos inducidos por progestágenos". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2003.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3658_Fabris
Estadísticas:
Descargas totales desde :
Descargas mensuales
https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3658_Fabris.pdf