Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Análisis de la interacción planta-virus mediante la caracterización molecular de plantas transgénicas que expresan proteínas de movilización de PVX |
| Autor: | Kobayashi, Ken |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (INGEBI)
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 2002 |
| Fecha en portada: | 2002 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Mentaberry, Alejandro N. |
| Idioma: | Español |
| Tema: | biología/fitopatología
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3437_Kobayashi |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3437_Kobayashi.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3437_Kobayashi |
| Ubicación: | Dep.BIO 003437 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Kobayashi, Ken. (2002). Análisis de la interacción planta-virus mediante la caracterización molecular de plantas transgénicas que expresan proteínas de movilización de PVX. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3437_Kobayashi |
Resumen:
Durante la primera etapa del presente trabajo, se transformaron Nicotiana tabacumcon el gen ORF3 que codifica la proteina p12 de PVX,con el fin de estudiar los efectosque provoca la expresión de esta proteina viral en la interacción planta-virus. A pesarde que las plantas transgénicas mostraron un aspecto normal, observaciones hechascon el microscopio revelaron la presencia de alteraciones en sus hojas. Al infectarestas plantas con PVX,se observó en sus hojas la aparición de sintomas atípicos y eldesarrollo de resistencia al virus. Los sintomas consistlan en la formación de anillosamarillos concéntricos rodeados de tejido necrosado. Además, los mismos eranacompañados de cambios bioquímicos asociados a la respuesta hipersensible (HR), yno se formaban en plantas transgénicas sanas ni en plantas no transgénicasinfectadas con PVX.No se observó una resistencia similar cuando las plantas p12 seinocularon con TMV o PVY. lo que sugirió la existencia de un mecanismo deresistencia específica contra PVX.A pesar de la aparición de sintomas de tipo HR, nose observó la inducción de una respuesta SAR en plantas p12 infectadas con PVX. Tampoco, se encontraron evidencias que indiquen la presencia de resistencia mediadapor RNA. Durante la segunda etapa del trabajo, se analizaron plantas transgénicas previamentetransformadas con el gen ORF2 que codifica la protelna p24 de PVX. con el fin deestudiar las alteraciones fisiológicas provocadas por la expresión de la misma. Estasplantas mostraron una apariencia clorótica y un marcado enanismo. A pesar de poseerhojas más pequeñas. distancias intemodales más cortas y reducción del tamaño entodos sus órganos, las plantas p24 poseían una relación de los tamaños tallo/raíznormal. Además, el tamaño de meristema radicular resultó más pequeño que el de lasplantas control. Otros análisis revelaron que la tasa fotosíntética estaba disminuida enlas plantas p24 y que los niveles de almidón, tanto en las hojas como en las raices, seencontraban reducidos. Además, las hojas mostraron un alto contenido de nitrato yuna considerable acumulación de transcriptos de proteinas PR. Varias lineas deevidencia sugieren que el fenotipo enano de las plantas p24 serla una consecuenciadirecta de la actividad de la proteina p24, y no un efecto indirecto de la disminución dela fotosíntesis o de los cambios metabólicos.
Abstract:
In the first part of the present work, Nicotiana tabacum were transformed with the PVX ORF3 gene coding for the p12 protein, with the aim of studying the effects provoked byits overexpression. Although the transgenic plants exhibited a normal morphologicalaspect, microscopic examination revealed extensive alterations in leaf tissue structure. After challenging with PVX, the transgenic plants showed resistance to PVX infectionand formation of leaf symptoms consisting of concentric rings encircled by necroticborders. These novel symptoms were accompanied by biochemical changes normallyassociated with the Hypersensitive Response (HR) and were absent in non-infectedtransgenic plants or in PVX-infected non-transgenic plants. No equivalent virusresistance was observed after inoculation with TMV or PVY, suggesting the presenceof a specific resistance mechanism in p12 plants. Despite the development of HR-likesymptoms, SAR was not induced in PVX-infected p12 transgenic plants. No evidenceof an RNA-mediated resistance mechanism was found. During the second part of this work, transgenic N. tabacum plants previouslytransformed with the PVX ORF2 gene coding the p24 movement protein were furtheranalyzed with the aim of studying the physiological alterations provoked by viral MP. These plants exhibit a slightly chlorotic appearance and a pronounced stuntedphenotype. Although p24 plants have smaller leaves, shorter internodes and reducedorgans, their shoot to root ratio remained similar to that of control plants. Moreover,root meristems were smaller in p24 plants than in control plants. Further analyses oftransgenic plants showed considerable reductions in photosynthetic rates and lowerstarch levels in both leaves and roots. In addition, p24 leaves showed higher nitratelevels and a significant accumulation of PRs transcripts. Different lines of evidencesuggest that the stunted phenotype observed in p24 plants is a direct consequence ofp24 activity and not an indirect effect derived from diminished photosynthesis or othermetabolic changes.
Citación:
---------- APA ----------
Kobayashi, Ken. (2002). Análisis de la interacción planta-virus mediante la caracterización molecular de plantas transgénicas que expresan proteínas de movilización de PVX. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3437_Kobayashi
---------- CHICAGO ----------
Kobayashi, Ken. "Análisis de la interacción planta-virus mediante la caracterización molecular de plantas transgénicas que expresan proteínas de movilización de PVX". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2002.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3437_Kobayashi
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