Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Aspectos bioquímicos y moleculares de la interacción sclerotinia sclerotiorum-Daucus Carota |
| Autor: | Bertinetti, Cristina M. |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundación Campomar"
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1996 |
| Fecha en portada: | 1996 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Ugalde, Rodolfo A. |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2894_Bertinetti |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2894_Bertinetti.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2894_Bertinetti |
| Ubicación: | Dep.BIO 002894 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Bertinetti, Cristina M.. (1996). Aspectos bioquímicos y moleculares de la interacción sclerotinia sclerotiorum-Daucus Carota. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2894_Bertinetti |
Resumen:
Las plantas están expuestas a microorganismos en todos los estadios de su ciclo de vida. Si biencada especie vegetal solo es susceptible a un número reducido de ellos, en condicionesfisiológicas adecuadas, las infecciones pueden ejercer sobre los sistemas graves daños ypérdidas desvastadoras de las cosechas. Para prevenir y controlar las infecciones, las plantas han desarrollado mecanismos de resistenciabasados en la capacidad para mantener o crear un ambiente desfavorable para el crecimiento y laacción de microorganismos fitopatógenos. Los mecanismos básicos de la resistencia involucranla existencia de barreras físicas y químicas preformadas que impiden el ingreso del agenteinfeccioso al interior del huésped, así como también mecanismos que implican respuestasinducibles, que llevan a la inhibición de la invasión y a la eliminación de los patógenos dentro dela planta. Los eventos que llevan ala inducción de las respuestas de defensa incluyen la percepción de unaseñal por parte de la planta, la transducción intracelular de la señal recibida y la síntesis demoléculas de defensa, como fitoalexinas, quitinasas, glucanasas, proteínas relacionadas a lapatogénesis y moléculas que intervienen en la modificación estructural de las paredes celulares (Chasan, 1994; Mahé et al, 1993; Scheel et al, 1991). Los compuestos provenientes de las paredes de los microorganismos que tienen la propiedad deinducir alguna de estas respuestas en las plantas reciben el nombre de elicitor (Dixon et al., 1994). El aislamiento y la caracterización de esta clase de moléculas y la búsqueda sistemática degenes que se induzcan o repriman en respuesta a ellas, permitirá en el futuro comprender losmecanismos moleculares que gobiernan la compleja interacción entre las plantas y losmicroorganismos. Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary es el agente causal de diversas enfermedades en plantasde interés agronómico. Hasta el presente no se dispone de tratamientos químicos efectivos quelas prevengan, así como tampoco se han encontrado variedades que sean totalmente resistentes ala infección entre las numerosas especies vegetales que forman parte del rango de huéspedes deeste hongo extremadamente virulento. Con respecto a los mecanismos de defensa de los distintos huéspedes frente a S. sclerotiorum,es muy escasa la información disponible (Sutton y Deverall, 1984; Bazzalo et al, 1985; Moulyet al., 1992). La mayor parte de los estudios llevados a cabo en relación a la interacción entre S.sclerotiorum y plantas susceptibles se han orientado al análisis de los mecanismos de virulenciadel hongo. Se ha propuesto que las numerosas enzimas hidrolíticas que produce tendrían un rolimportante en el proceso de invasión de los tejidos vegetales y que la toxina que libera —ácidooxálico- se acumularía en el follaje, siendo la responsable de la marchitez foliar (Hancock, 1966; Hancock 1967; Bauer, 1977; Noyes y Hancock, 1980; Marciano et al, 1982; Riou et al, 1991; Favaron et al, 1992). En el presente trabajo se emplearon cultivos en suspensión de zanahoria como modeloexperimental para analizar los mecanismos moleculares de la interacción entre las plantas y S.sclerotiorum. Cuando los cultivos fueron incubados con extractos de pared fúngica se observó lainducción de la síntesis de compuestos fenólicos y cambios en el patrón de proteínas solubles,indicando que el extracto de pared inducía importantes alteraciones en el metabolismo de lascélulas de zanahoria. La inducción de la actividad de la fenilalanil amonio-liasa (PAL),considerada como marcador de respuestas de defensa de las plantas frente a losmicroorganismos fitopatógenos, fue utilizada como test biológico para seguir el aislamiento defracciones de pared de S. sclerotiorum con actividad elicitor para las células de zanahoria. Para la obtención de moléculas presentes en la superficie de la pared fúngica se utilizó un métodooriginalmente empleado para aislar antígenos de superficie de levaduras (Raschke y Ballou, 1972). Este extracto de pared fue fraccionado en base a su tamaño (Bio-Gel A 0.5 M) y suafinidad por una columna de intercambio aniónico (DEAE-Sephadex) y por una columna de Concanavalina A-Sepharosa. Como resultado de estos pasos de purificación se obtuvieron doselicitors, un glucano y un manano, encontrándose cantidades equivalentes de ambos en lapreparación de pared fúngica. Por otra parte, con el propósito de identificar genes de zanahoria cuya expresión se induce enrespuesta al elicitor fúngico se utilizó el método de «differential display» (Liang y Pardee, 1992). El análisis de la expresión diferencial de genes entre cultivos inducidos con el elicitor ycultivos controles no inducidos condujo al aislamiento y clonado de tres fragmentos querepresentarían probables mRNAs cuya síntesis es inducida por el elicitor de S. sclerotiorum. A partir de uno de los fragmentos se obtuvo la secuencia completa del cDNA. La proteínadeducida mostró una identidad de casi el 100% con una glicoproteína denominada EP4a, aisladaa partir de sobrenadantes de cultivos de zanahoria por Van Engelen y colaboradores (1995) y un 55% de identidad con el producto deducido del gen ENOD 8 de alfalfa (Dickstein et al, 1993). Otro de los fragmentos clonados (pCB 19) mostró un 73% de identidad y un 82% de homologíacon el fragmento carboxi terminal de la β-D-glucanoexohidrolasa de Hordeum vulgare (Hrmovaet al, 1996). Dado el grado de identidad encontrado, es altamente probable que el fragmentocontenido en el pCB 19 corresponda a una β-glucanasa de zanahoria. Considerando además quelas células de zanahoria mostraron degradar activamente los polisacáridos presentes en elextracto de pared de S. sclerotiorum, así como también a un β-glucano de característicassimilares al glucano descripto por Jones en 1970 como componente de la pared de S.sclerotiorum, se podría especular que, a semejanza de lo descripto en otros sistemas, las célulasde zanahoria degradarían estos polisacáridos de gran tamaño a moléculas mas pequeñas, quienesserían en última instancia reconocidas por las células, desencadenando la cascada de eventosrelacionados a la defensa ante las infecciones.
Citación:
---------- APA ----------
Bertinetti, Cristina M.. (1996). Aspectos bioquímicos y moleculares de la interacción sclerotinia sclerotiorum-Daucus Carota. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2894_Bertinetti
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Bertinetti, Cristina M.. "Aspectos bioquímicos y moleculares de la interacción sclerotinia sclerotiorum-Daucus Carota". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1996.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2894_Bertinetti
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